Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Эффективность различных способов повышения иммуногенности вакцины БЦЖ при туберкулезе животных

ЗССИЙСЖАЯ АКАДЕМИЯ СЖ<ЖОХОШЙСТВЕт<С НАУК

сибирское отделен:®

ЗТОТУТ ЭКСПЕРИМШТАЯЫЮЯ ВЕТЕРИНАРИЯ СИЕИРИ И ДАЛЬНЕГО В0СТ01СА

На правах рукописи

Протодьяконовэ Галина Петровка

УД1С 619:616,98:579.873.215:вЗЗ.22/26

екшбностъ различных способов'' гювш35ния 1шун0гш0сж вакцины бш при туберкулезе шю'гных

16.00.03 - ввтврйнарноя микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и имчунолошя

А в т о р е ф э р а т : диссертации нз соиоканио учоноК степони

кандидата ветеринар:мх неук

Новосибирск 1У91

Работе выполвека в Институте экспериментальной ветеря рки С/бирк и Дальнего Востока СО Российской академии сельс» хозяЯо^влнгах наук (г. Новосибирск).

Научные руководители - доктор ветеринарных наук,

профессор A.C. Донченко,

кандидат биологических наук, старший научный сотрудник - В.Н. Донченко

Официальные оппоненты -доктор ветеринарных наук

Б.И. Пионтковский, -

доктор ветеринарных наук, профессор П.Н. Смирнов

Ведущая организация - Казанский ордена Ленина

ветеринарный институт . ' им. Н.Э. Баумана , , ■

Завдты состоится "1ЭЭ1 г. в /'-{ часов на заседании специализированного совета рря Институте экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальне Востока (633128, Новосибирская область, р.п. Краснообск,

со рлсхн, ¡твоидв).

С диссертацией можно ознакомиться в ЩГСХБ СО РАСХН.

Авторзферат разослан "/Зп(<~L°ßl г.

Учошй секретарь специализированного совета кандидат тш-ори:гарних наук,

старший научный сструтоик С.К. Димов

ок'ля характеристика работы

Актуальность теш,!. Решение проблемы увеличения преиавод-а продуктов животноводства зависит от благополучия шпотнс-ческих хозяйств по лнг|шохяондал? болезням, в тог.' чясл? и по оркулозу крупного рогатого скота.

В длительно неблагополучит: по туберкулезу пунктах с шп~ ям распространением заболевания наиболее розуяьтагкген метод яой одношнонтной замени скотром^етровакпото зо туберкуле-поголовья здоровыми гввотишди (С.И. Дзуплиа. Л.О.Довченко,

1983, 1987; Я.А. Шкюгъ, 1987).

Однако в ряце случаев по различным хокяйетвестмм и эконо- • ;еским причинам такой матод оздоровлении но под салу ибогпм ¡яйствам. При этом следует иметь в виду, что сом ко евбо ука-гный способ не всегда гарантирует от сомсрнкк вешжек [ ввиду того, что в дллюльно неблагополучна;: пунктах объекты гвшей среды обильно обсемензны возбудителем туберкулеза С. Шалимов с еоавт., 1971, 1973; Н.М.Колычев, Б.ЯДайдзк, '8; Г.Н. Спиридонов, 1388).

Одним из важных мероприятий в профилактике повторных ьега;-с тубзркулеза при оздоровления иеблагопопучнш: пунктов являет-организация изолированного варащаванил молодняка ч падешкзя щта его от заражения возбудителей туберкулеза (Д.С.лонченко, )6; М.А.Сафин, 1985; В.И.Паонтковокий, 1ЭП9). В ото» плане щяфяческой защитой молодняка крупного рогатого скота от затд-¡ия возбудителем туберкулеза является вгкцнкаэдч БЦН1.

высокую противоэшзоотячеокую 2ф&эктйшость этой мкцйны молодняке крупного рогатого скота отмечала А.С.Легкий, &Л'. юмарзв, (1956), М.К.Юсковоц (1963), Х.Г.Гизатуллиь с соаэт. 373, 1979, 1980), М.А.Сафин с соавт. (1977, 1978 , 23&2, 193(0, Оионгковекий с соазт. (1982, 1539), Б.Я. Хайкин с соавт. 384,1988, 1989, 1990), А.С.Дончснк'э (1985, 1959) ид?. .

Однако применение ео с долью предохранения г/олошгяпса ксуп-го рогатого скота от 'заражения возбудителен туберкулеза ь ос~ ином ограничено недостаточно высокой испряяеняостш агд^ти, бедствие чего н иаблхдаяшяи прорывами иммунитет? у япготт:" .Е.Шуревский, 1983; И.Л.бвдаойяо с ооепт. 1984; Г.Н. Саярадо-1988). . '

А

Поэтому проблема повышения ишуногенных свойств вакцины EIK «а -сегодняшний день остается весьма актуальной,

, С этой долью с первых лет применония вакцины BIß делают« похштки усиления протективных свойств с помощью изменения до: и способов ее введения (О.М. Бурькова, IS55; А.И. Тогунова, IS62; Б.Н.Туякбазвз, 1985).

К другим способам мокно отнести стимуляцию иммуногенеза у привитых клвоишх с помощью ииыуномодуляторов различной npnj .гу (Г.О. Корошслов с ооовт., 1985; С.М. Лихолетов, .1983;

, 1983).

1Ьдь и загачи исследований. Цель исследований - провеет; сравнительное изучение различных способов, доз и схем (в т.ч. с ршузооодулятором) применения вакцины БЦЕ .животным с целью получения наиболее высокого иммунного ответа.

Для решения этой цела поставлены следующие задачи:

1. Оттитровать зарадаадую дозу возбудителя туберкулеза бычьего вида .(шташм 14х ВОИНБТК) на морских свинках.

2. Изучить на морских свайках и крупном рогатом скоте протектавные свойства вакцины БЦЕ при различных способах и дозах ее введения.

3. На морских свинках д крупном рогатом скоте изучить во: (.юкюс^ь повышения протективных свойств вакцины БЦЖ с помощью темуномодудягорз. .

4. Изучить пжупный ответ крупного рогатого скота на введение. вакцины, БПЖ в сочетаний с иалуномодулятором.

5. Разработать и апробировать оптимальную схему профилактики туберкулеза у молодняка крупного рогатого скота с помощью сочотакного введения вакцины БЦй и ишлуномодулятора.

Научная ио.чиака. Выявлена возмоаность применения лолари« пата - шеокоподгаорной РНК из дрожкей Saechax-oiuyces corovieia в качество ишучошдудятора в сочетании с вакциной ЕЦЗи. /стеноз леяо, что гфя атом пошшаатся ишлуногенше свойства вакцины ЕЦ! в результате чего усиливается противотуберкулезный иммунитет.

Кг осте акспериментальнш. данных предложена схема прим« нения вагина К№' в сочетании с солирибортом для профилактики туберкулеза у молодняка крупного рогатого скота.

Практическая ценность. Разработана к апробирована в неблагополучии по туберкулезу крупного рогатого окота пунктах H«

«Зйрексй области'с положитедшам результатом наболев р^цио--шая схема дримонения аакщпи БЦК с яшуисдацулятором отечоо-ШОГО. КрОИСВОДСТВС ~ ПОЛИрибОКОТОМ В 0СЩ9М КОШИОКСО MGpO-ТТМ по дрофялзкчикв' туборкулэзО ТЧЛАТ.

Апроббд;^„.рабо'г)ц. Материал» диссертации долохнт* на ра-чаяьяой научной хсонференциа ''Лроблеш янфадсциоюгоА патологии •»охохозгйствэгаш; животных" (КоЕосиоирск, 1588), I йодау,-зксй ваучно-цректачоокой хкиферотда "Коша фармпкологлчоо-сродотва в вбтвранарии" (Ленинград, 1939), на заседаниях того совета ИЙБСИДВ (1У87-19УО); иежлабораторном .совещсиви пгык сотрудников ИЙЛ'иЖ (IS9I).

исследований. Систека оздоровятеяь-хрофалаитичвоких' мероприятий по. туберкулезу крупного рогато-' зкота,-вклвчаадоя применение.ващинн бце о иымуномодулятором смотрена и одобрена ученым советом ИЗВСиДВ (1990), Н'ГС Пово-чрского АПК (1990) я внедрена в неблагополучных по тубйрхулв-срупного poreiroro окота пунктах Новосибирской облаем.

Публикация. По теме диссертации опубликованы 3 нагане гьи.

Структура и объем работа.. Диссертация изложена на 153 зницах машинописного текста и состоит-из введения, обзора зрзтурн, .собственных исследований, обсуждения полученных ро- ' иегов, заводов, практических предложений, списка литерату-[243 отечественных и 41 иностранных авторов) и приложения, зертащя йллаотрярсвана 19 таблицами.

улгериш и шша ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена согласно nporpa.vf.ie OCX 61.02.02.C3.il зриод 1Ш-Х500 г:\ в отделе но разработка мер борьбы с ту-сулэзом животных в эхепэршеяталыой базе.ШСдЦВ СО СИ, о также с хозяйствах Новосибирской области - в совхозах пл'ое ский" Краоиозерского я "Сущнский" Чулым оного районов.

Для изучения объективности.различных способов, повышения ifitoreimooTH• вавдшы ЬЦЕ опыта проводились на морских еввн-и молодняке крупного рогатого окота. Молодняк отбир&чи принципу аналогов в длительно благополучно» по туберкулез у 1ного рогатого скота хозяйстве. Во - время эксперимента гш~ wx со.цурдала б типовых помещениях, кормила по норматива!/:

вш.

Для заражении животных использовали вирулентный штамм I4;: Ш:ИБТл£ возбудителя туберкулеза бычьех'о вида, который bhj; давали на. среда ФяшГ^.

Животшх тонизировали подкожно, внутримышечно и внуц кожно ваздшюй БЦ1, приготовленной Ставропольским НИИ вакцин сь'вороаок.

В качестве иммунсмодулятора применяли высокополимерную РНК на дрожжей Srjcohsrcmiicea cerevia.iae - ПОЛИрИбОНаТ.,

Препарат представлен научно-исследовательским конструкторско-технологическим институтом биологически активных веществ (г, Еердск Новосибирской области). Применяли его в виде растворов в различных дозировках и по разним схемам.

В опытах использовали 490 морских свинок с живой массой 300-350 г. Парад началом опыта их исследовали внутрикожно ПЩ туберкул;шом для млекопитающих. В период проведения опытов учитывали сроки гибели животных, показатели внутрикожных алла гических реакций на туберкулин, индексы пораженности органов Ю.К. ВеЯсфоллеру (1940) и по В.Войтеку (1963).

Для оттитрошси оптимальной заражающей дозы возбудителя туберкулеза использовали метод последовательных разведений на веск.4 микобактерик согласно ,'методической рекомендации "Соврем нче мэтоды микробиологической диагностики туберкулеза" (МЗ РСФСР, Ï975). Морских сзинок заражала подкожно, в область г.ах

Полирибонат морским свинкам вводили внутрибрюшинно и вн рпмыомчно по различным схемам и в разных дозах (3,5,10,15,30, 50 мг на голову).

Для изучения влияния полирибоната на иммуногенные свокс ва вакцина БЩ; использовали 15 телят.

Иммунобиологическое состояние животных изучали но показателям следующих диагностических тестов: реакции свазыве комплемента (FCK) с. КТА УБИИЭВ; реакции бласттрансформации ль фоцигов (РБТЛ) по мотодике, предложенной М.М. Авербахом с со-авт, (1974) в модификации М.А.Сафянй с соавт. (1980); рэакцш: специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) по мотодике, описаш-А.Д.Адо е соавт. (ISG3); опсоно-фагоциторной реакции; колич-: uy обшаге белю в симротко крови, которое определяли рефраш

шчеоним методом; уровню белкових фракций, уотснавлиБаемому дом элек'фофореза в геле агарозн по методика В.МЛоклшеса '7); внутрикожной туберкулиновой пробе.

Через 2,5 месяца посла тшуниаацм телят вералили врзбу->лем туберкулеза бычьего вида (штамм 14х ВНЙ*ЮТ) в дозе i мг/кг массы животного per os с болюсами путы.) дву-■ного скврмллвання с интервалом в I сутки.

Через 5 месяцов после заражения животных убили не сонбсй-[овосибирского мясокомбината с проведением вотершшрио-санч-юй экспертизы туш и внутренних органов. Биоматериал от уби-животных подвергли бактериологическому исследовании ooiviec-Настевлению по диагностике туберкулеза жквотгшх" (1906). • Апробацию комплексной схош профилактики туберкулеза ьач->Й БЗД в сочетании с полирибонатом проводили .« неблэгелолуч-по туберкулезу крупного рогатого скота пунктах, В них от-:ио значительное распространение заболевания туберкулеsum tiiux всех возрастов, в том числе и молодняка. Исследования юдили на 166 нетелях, ко торы».] иммуномодулятор в сочетании тсдиной ,БЦ& вводили однократно, и 250 головах молодняка ного рогатого скота, которым полирлбонят в сочетании с ;иной вводили двукратно. Результаты оценивали влборочнш: м иммунизнрбванных нивопшх/через I год с предварительным здованием внутрикожной туберкулиновой пробой ПЛД туберку-м для млекопитающих.

Результаты математически обрабатывали с примененном стан-1Шх методик определения среднего значения и средней квад-чоской ошибки. Достоверность различий результатов, получен-в опыте, посравнению с соответствующим;! показателями к ролытнх Группах оценивали пс критерия Ст:>юдонтя-Ф:;шор.ч •.Лаки', 1980), Различия между показателями считал:! дозто-нми при Р равном или меньше 0,05.

РЕШьтлта исследования Оттжрав'са зараиаяцей дооы возбудителя туберкулез?, бкчього гида (штамп 14х ШЗШТа) рм tюрских «впиои

Но рэзультсти опытов но mr/mirmo ошудогенчих свойств вяк-Б1Ш в ркспорр;.юнто окьзигпют влп&ше, наряду о :л/уп:м!' трамп, дозе и гетгсшюсть ¡трачадш?:; куль?ури

туберкулоза.

Б опито по оттатрпам» сахшаадей дозы йозЗудителя туб?{ едаззд бичьвго вида ииаш 14* 0ЯИЙКЕ&) 'яопольлозалк 50 шро! свигск, раздзле.чгг.« па 5 гдолп. Яивоииас зарааалн культурой возбудителя туоаркулога, которуп крэдваригелько пассеровала 1 ре а ксфсякх оаинох, '58 тем шр&адшнш иа' яячной -сдаде'.ФшшгЗ I теченпо 4 !»ед«ль. Вввош« 1-й цтутш годазшш культурой возе дитзлл туберкулезе, .е дезо 0,01; 2-И - 0,001; З-П 0,0001; 4- 0,00001; 5-й - 0,00000! уг на голову. &Г заргошаими «изо« вели кайм&деиш. Ките к летальному исходу морские' свинки стг валиоь • ьалеподвшшш, слабо реагировали на окружающие раудрг тали, лихорадила, теряли в маспэ.

й-раконкиз морские овкниа пади от реиярализовашого туе кулеаа в резличше сроки ¡1 с т«ошни степенями лоуоаекнооти ч бзркуле&оц внутренних органов. . ...

Морские свинки 1-й группа (зараашздая до&з 0,01 мг) па; течение 64,7 * 2,06 суток -от тяжелой формы генерализованного С)0!)КуЛ03е. 1ШВ0ТНЫ9 2-1:.группы ноли через 60,2 £ 0,19, 3-й ■■ чердз 62,3 * 2,85 оутск. Натрлого-апатопичоская' картака у жиг пых этих 1'руии мало отличалась от жиьомшх 1-й грушш. Жяаот» '.4-Й группы лая и в течэнке 78,0 & 2,04 суток, 54: - 92,5 * 2,5 'суток. ах вскритаи наблюдали .бугоркошэ изменения л мили» »¡уа дисозкапршш в органах,

Лая .кальней-аих опытов «о королей;: свинках била взята за] етощак доза возбудителя туб&ркулаэа бичьего вида '¡аташ 14х (ВШШБШ) ь количества 0,00001 № ла голову, которая шзишш гибель до 3 месяце«. .

Изучение т морских овднках и крупном рогатом окоте нротэктньшх свойств закцьки БЦК в зависимости от дозы и способов ьвадения

Б опыте иапельзовали 60 морских езнаок, которые раидода на 6'груив. Иавокш 1-й группы-на подвергали ьазцаиацяи (гэд на контрольного гарааения). Остальные были мшуиазаровани рв: шин спэаобами. Еиутракожио были приваты 'вакциной БЦЕ в доз?! г^г животные 2-й группы. 3-И - ззнугри^ш&чно и 4-и подкожно в ке дозе, 3-Й - ввутрмхежяо б дозе I кг. Вввомаш 6-й грулш i • одну вводили дробно с интервалом 14-15 дней аиутрикомяо в до; 0,2 .а-.

Через. 2 месяца животных исследовали впутрикожно ППД тубер-!ном для млекопитающих. Все вакцинированные морские свинки ■ 'провали на туберкулин. Величина гппорчуЕствительности замец-гого типа (ГБТ) была различной по группам и ьависола от спо-I введения и дозы вакцины. У морских свинок 2-й группы она юднем равнялась 5,5 ± 0,25 юл, в 3-Й - 8,4 ± 1,37, в 4-Й -± 0,13, в 5-й - 10,3 ± 0,40, в 6-й - 9,2 ± 0,58 мм.

После это™ морских свинок заразили оттитрованной дозой рентной культуры возбудителя туберкулеза бычьего вида мтомм , По мере их гибели производили вскрытие, учет степени пора-гости внутренних органов. Не павшие морские свинки были уби-юрез 3 месяца после заражения.

Исследования показали, что сроки гибели морских свчкок I различными. Животные из группы контрольного заражения погиб->т генерализованной формы туберкулеза в течение 76.5 ± 1,-ТЗ ж. Животные 5-й и 6-й "рупп, которые балл вакцинированы БЦЖ ?рикожно в дозе I мг л дробно в дозе 0,2 мг, были яиьн до кок->пыта.

При сравнительном анализе индексов пораяепности наутрониих шов и лимфатических узлов значительной разницы в показателях ty 2-й, 3-й и 4-й группами морских'сеянок не наблюдалось, й >шей степени были поражены эти оргага туберкулезом у животных и 6-й групп.

Таким образом, наиболее выраженным иммунитетом протяв эг-ра-гя в'озбудителем туберкулеза бычьего вица обладали морские гки, привитые вакциной БЦК внутршсс.тло однократно в до се I гтг ¡укратно в дозе по 0,1 мг.

Для изучения влияния различных доз вакцины ЕЦ1 на ауоуюо-¡ркулезннй иммунитет поставлен опыт на молодняке крупного iToro скота 18-20 месячного возрпсто. В опыте «сходились 20 ;ов,разделенных но 4 группы. Животным 1-й группы вокшгг/ БЦК ;цли внугрикожно 'в дозе 0,5 мг, 2-Й •• 1 мг и :1-й - 3 мг в 0,0 1астворитоля, 4-ю группу (контрольная) - не впгагширсмдй.

Через 2 месяца всо привитво вакциной BUü животные роагирот-:а внутрикожюе мэденио- ГШ тубвркултд для иядедюздапих. '3 3 мосяца животных аарэанли розбудлто.чем туберкулеза бычья-ч;да (ст. 14х ВШПиТЯ).

то

Черэя I месяц после заражения их исследовали внутрикожно Ш1Д туберкулином для млекопитающих. Величина ГЗТ бала неодинаковой по группам, но ее разница в показателях интенсивности аллергик между группами были недостоверной.

Ври заголого-анатомичаском исследовании установлено, что в группе животных, привитых вакциной ЕЦЖ в дозе I мг, защитный вф$екя- составил В группе привитых вакциной ЕЦЖ в дозе 0,5' мг не заразились возбудителем туберкулеза 34$, а е 3-й груопо, привитой ЩЖ в дозе 3 мг, - 40$ животных от общего поголозья.

Бактериологически!/, исследованием в дальнейшем от всех убитых животных, у которых на вскрытии туберкулез не установлен, из биогматериала изолирована заражающая культура возбудителя туберкулеза бычьего вида (шт.14х).

Экспериментальные данные показали, что вакцина БЦЖ у молодняка' крупного рогатого скота, привитого в возрасте 18-20 М90ЯЦ83, не вызывает-образования стойкого иммунитета к заражению возбудителем туберкулеза бычьего вида.

Влияние полирибоната на шмуногенкыа свойства вакцины ЕЦЖ у морских свинок

В опыте по изучению влияния лолирибоната на иммуногенныа свойства вакцины БЦЖ попользовано. 200 морских свкнок (табл.1).

Таблица I

Схема проведения опыта на морских свинках по изучению влияния полирибоната на иммуногенные свойства вакцины БЦЕ

п ^ 10

\ , ть ! пи | ! 1 Группа --г .....г 1 " ■ "" ;..... Доза ПЛР, мг на голову, < Способ ¡Сроки г | свокк введения ¡ввехтаниятажекш; ¡вместе | через 7! через 14¡^ 1с НЩ дней даай боэ ™ | | без БЦЖ| БЦЖ | |&цы

Т ' 2 3 14 | 5 1 6 17

1 йнгакткые

2 Контрольное зордкенио

! 2 ! 3 ! 4 ! 5 I 6 ' 7

ПЛР 5 В/б «

БЦЖ -

БЦЖ + ПЛР о о В/о 2

Б1Щ ПЛР 3 В/м 2

БЦЖ + ПЛР • 10 В/б 2

БЦЖ + ПЛР 10 В/м 2

БЦЖ + ПЛР 30 З/б 2

БЦЖ + ПЛР 30 В/п 2

БЦЖ + ПЛР 3 1С 17 В/б

БЦК + ПЛР 3 IÜ 17 В/м О

БЦЖ + ШГР 15 15 Е/й Й

БЦЖ + ПЛР 15 15 В/м 2

БЦЖ + ПЛР 25 25 В/б 2

БЦЖ + ПЛР 25 25 В /и 2

БЦЖ + ПЛР 5 В/б .14 дней

БЦЖ + ПЛР 5 В/О 28 дней

ПЛР 10 В/б У

БЦЖ + через 2 месяца ПЛР в дозе 5 мг З/б Через 3 дня после ПЛР

на голову

Примечание. ПЛР - иояирибонат, В/с - вкутрибрюмшно, В/м - внутримышечно.

В процессе опыта у морских свинок учитывали сроки иродоает-аностя жизни после заражения, индексы поракшагосп« туберкуле-печени, легких, селезенки при вскрытии.

Опыт показал, что животные, зараженные без предваргтвлыгой гстезадаш, пали в течение 77,0 + 3,55 сутек. Продолжительность га животных, привита ЕЦ1 без полириЗоната, составила > суток, что в среднем в 1,5 раза меньше, чем срок жнзнл ж«-шх, иммунизированиях БЦЖ п сочетаилл о иммуиомэдуяетороч. (сльшая продолжительность жизни после заражения омочена в шах животных, которое били привиты ЫШ в сочетают с я&оСты

введением г.олирибоната по следующим схемам: 15 + 15 мг; 25 + 25 мг; 3 + 10 + 17 мг.

При анализе индексов пораженности внутренних органов ус ноилоно, что наименьший селезеночный индекс был у животных Б v 14--Й хрупд, печеночный - в 4-й, а легочный в 13-й.

Таким .образом, наибольшая степень иммунной защиты от за] ления возбудителем туберкулеза отмечена у животных 13-й груш крльптих вакциной БЦЖ в сочетании с дробным введением полирш пата по 15 мг на голову через 14 дней.

По результатам опыта отмечено, что наиболее информативт тостами, определяющими иммуногенные свойства вакцины ЕЦЖ, hbj езтоя продолжительность жизни морских свинок и селезеночный ш дехс.

На морских свинках был поставлен опыт по изучению влияю пол^ркбоната на ГЗТ при иммунизации НДЖ (табл.2). '

В'группе свинок, привитых только вакциной БЦЯ, ГЗТ на в* рикокное введэние ППД туберкулина сохранялась до 7,5 месяца. У морских свинок, которым вводили вакцину БЦЯ о полирибонатов реакции выпали к 6-му месяцу после .вакцинации. При введении менычой дозы иммуномодулятора в сочетании с вакциной БЦК алле гкчеокие реакции выражены слабао. Еивотные, которым вводили только одан полирибонат, на туберкулин не реагировали.

При сравнении ГЗТ у морских свинок в зависимости от спос tía введения полирибоната достоверной разницы в показателях ин тоноивностк реакции не отмечалось.

Таблица 2

Схема проведения опыта на морских свинках по изучению •влияния вакцины БЦЖ и полирибоната на ГЗТ

s ■= 1,5

г !

№ Í roí |

1 i

Груша

Доза ПЛР, мг на

тч),|г.оэу

вместэ с i через 14 j ЕЦЖ дней без .

! ' ВД ! í

А

Способ i Зараже

введения} через

¡ месяца

i восле

¡ цинаци

5 i Г

1 ВД

2 ЕЦЖ + НДР

3 Б7Д

10

Е/б

I ! 2 ! 3 1 4 ! 5 ! 6

4 БЦЖ + плр : 30 В/б +

5 ЕЦЖ + плр 30 В/м +

6 Бца + плр .. 10 В/б +

7 БЦЖ + плр 10 В/м +

8 БЦЖ + .плр 5 В/б +

9 БЦЖ + плр 5 В/м +

0 плр 10 В/б -

Г ЕЦЯ плр 15 15 В/б +

г Интактные —

Примечание. ПЛР - полирибонат, В/б - внутрибрюшкнно, В/м -1 внутримышечно.

Изучение влияния полирибоната на противотуберкулезный иммунитет телят, привитых вакциной БЦК

Дня изучения влияния полирибоната на протективные свойства исцины БЦЖ при экспериментальном туберкулезе поставлен опыт на элодняке крупного рогатого скота. В опыте было задействовано 5 бычков, разделенных на 4 группы.

- Животных 1-й группы не вакцинировали (3 головы).

Бычков подвергли вакцинации ЕВД до 12-даевнбго возраста.

Животных 2-й группы (4 головы) привили вакциной ЩЖ в дозе мг внутрккожно, 3-й (4 головы) вакциной ЕЦ1 з сочетании с од-жратным введением полирибоната в дозе I мг/кг датой массы зт-зтного. Животным 4-й хруппы (4 головы) вводили вакцину БЦЖ в зчетании с дробным введением полирибоната: первый раз одновре-знно с вакциной БЦЖ в дозе 0,5 мг/кг, второй раз - через 14 гей в той же дозе без вакцины.

Полирибонат .животным вводили внутримышечно.

Через-2,5 месяца после иммунизации бычков заразили виру-штной культурой возбудителя туберкулеза бычьего вида штамм Iх в дезе 0,15 мг/кг массы животного.

Через 5 месяцев после заражения бычки были убиты с проведением ветеринарно-санитарной экспертиз!! внутренних органов и лимфатических узлов и бактериологического исследования взятого от них биоматериала.

По результатам опыта установлено, что лучший защитный эффект от заражения возбудителем туберкулеза бычьего вида отмечен в группе животных, которые были привиты вакциной БЦН в сочетакк: с дробным введением полирибоната в доэе 0,5 + 0,5 мг/кг о интер валом 14 дней. В этой группе молодняка крупного рогатого скота по результатам патолого-анатомического и бактериологического ИС' следований туберкулез был исключен.

В группе, где вакцина ЫД была введена в сочетании с поли-ри'бонатом однократно, туберкулезные поражения найдены у одного животного в мозйктериальннх лимфатических узлах. У 3 телят из биоматериала возбудитель туберкулеза не выделен.

В группе животных, привитых БЦН без иолкрибоната, туберкулез на вскрытии установлен у 2 телят: у 1-го в заглоточных лимфатических узлах, у 2--го - в легких, а у 3-го - по результатам бактериологического исследования биоматериала. У 4-го бычка из этой группы туберкулез бактериологическим исследованием исключен. Животные контрольной группы все заболели туберкулезом, у 2 телят отмечена генерализованная форма туберкулеза.

В ходе опыта за телятами вели наблюдения и изучали в динамике некоторые иммунобиологические показатели. Через 2 месяца-после вакцинации все животные реагировали на внутрикожное введение ППД туберкулина для млокопктавдих. Сочетанное введение поли-рибоната к вакцины НИ не оказало отрицательного действия на общее состояние организма телят.

Начиная с 3-гс месяца после заражения, показания внутрикок-иой реакции на туберкулин у животных из группы контрольного за-ражо1г«1я (1-я группа) ослабевали. Во 2-й группе (привитые БВД) достоверное снижение показателей ГЗТ отмечено через 5 месяцев после заражения. .

В грушах животных, которые были привиты БЦ1 в сочетании с полирябонатом, аллергические реакции снижались через 2 месяца после заражения. Через-5 месяцев животные не реагировали на туберкулин. . .

Дальнейшие патолиго-пнатомичэскяв и бактериологические ис-едовакия показали, что отсутствие реакций на туберкулин у кцинярованных ЕЩЕ и обработанных полирибонатсм животных не язано с показателями напряженности иммунитета.

Помшло этого у опытных телят изучена динамика накопления (племенгсвязыващихантител.в PGK с КТА УНШЭВ.

Через 2,5 месяца после вакцинации сыворотки крови телят но шгровали в РСК с КТА УШИЗВ. Ка 7-е сутки после заражения зотных в сыворотке крови таких тавотных отмечено накопление плементсвязывающих антител ( 1п3,69 _»_0). До 28-х суток титр держался на одном уровне. Через 2 месяца после заражения се-гогическиэ реакции выпали у всех животных.

Через 3 месяца после заражения серопозитивш были в основ-< сыворотки крови животных из группы контрольного заражения п 5,08+0). У всех телят других групп при исследовании сыво-?ок крови "ерез 4 и 5 месяцев после заражения получены стригальные результаты;

На протяжении всего опыта достоверной разницы в титрах щлементсвязыващюе антител между группами животных, лривк-: ЕЦЖ совместно с полирибонатом и одной вакциной, не наблюда-¡ь.

Таким образом, по показаниям РСК с КТА УНИИЗВ можно заклю-ъ, что введение полирибоната в организм животных не повышает ры комплементсвязыващих антител в сыворотке' крови у иривл-'ó вакциной БЦЖ молодняка крупного рогатого скота.

Наиболее показательным тестом напряженности поствахцкналь-'0 иммунитета является реакция бласттрансформации лимфоцитов И). В ходе опыта показатели РБТЛ были выше в группах игаот-, которые были привиты вакциной.БЦЖ в сочетании с полирибо-ом. Так, через 2,5 месяца после вакцинации максималыше пока-елк РБТЛ обнаружены в 4-й группе животных, которые были обра-аны вакциной БЦК в сочетании с дробным введением полирибоната ,73+1,23%). У невакцинированных (здоровых) телят в зто'время ичество трансформировавших в бласты лимфоцитов составите 3+0,27%.

После заражения животных возбудителем туберкулеза бнчьзго а величины РБТЛ не отличались от первоначальных. Ra протяжэ-всего опыта разница я показателях трансформировавших я Сла-

сты лимфоцитов между 3-й и 4-й группами телят-была иедостовер) но эти показатели были вше по сравнению с таковыми у телят 2-группы, привитых одной вакциной БЦЖ. ■

При культивировании лимфоцитов от животных 1-й группы на 28-е сутки после заражения количество'трансформировавших в 6т ты лимфоцитов составило 16,56 £ 0,02%. В дальнейшем, по мера развития болезни, наблюдалось снижение трансформация в бластньи клетки под действием Ш1Д туберкулина для млекопитающих, разрушение их под действием антигена в опытных флаконах и спонтани трансформация лимфоцитов в бласты в контрольных флаконах. Так к концу опыта в этой группе процент трансформировавших в блас1 лимфоцитов составил 1,44 + 0,04$, а спонтанная трансформация лимфоцитов в бласти - 8,11 + 0,73$,

Степень сенсибилизации организма телят изучали по ведичи, разрушения лейкоцитов (FCJDI).

Вакцинация телят БЦК вызывала высокую сенсибилизации орг Ш1зма телят. У всех иммунизированных животных (2, 3, 4-я труп пы) показатели РСМ были гораздо выше по сравнению с интахтны животными, у которых показатели были отрицательными (менее IQ Достоверной разницы в показателях реакции между привитыми тру ,па!ли животных не отмечено.

После заражения животных возбудителем туберкулеза 'бычьег вида у предварительно не привитых вакциной БЦЖ телят (1-я группа) показатели РСМ по мере развития болезни увеличивалис и на 28-е сутки достигли 48, 27 ± 4,89%.

У привитых вакщшой БЦ1 животных после заражения показат ли РСМ сохранялись на прежнем высоком уровне. В дальнейшем между всеми группами животных достоверной разницы и показател РСМ не отмечено. В пределах одной группы реакции широко варь: ровали. Все это говорит о том, что как иммунизация животных вакциной' БЦЙ, так и заражение их вирулентной культурой возбуд теля туберкулеза вызывают высокую сенсибилизацию организма те лят, и судить по данной реакции о степени напряженности поствакцинального 1&мунптета не всегда предотавляотся возможным.

Состояние обдой резистентности организма молодняка крупного рогатого скота изучали с помощью опсоно-фагоцитарноЭ реакция (OSP). Иммунизация толлт вакциной БЦЖ вызывала повыиопи

гоясйвйосгл фагоцитарной активное«! нзйтрофилов. У шзвакцпнп-1шицх 1'охят показатели ОФР «острили 20,0 + 1,87. а у прнли-с 1Дд через 2,5 месяца после вакцинация 36,75 + 2,55. Б груп-I, где нолирибоньт вводил» ямаотшм в оочеташш с ЪЦЖ, цока-голи ОФР были выше, чем у привитых одной 12ДН, - 56,75^2,91 -я группа) и 65,75 + (4-л труппа), т.е. ьтд швотные имз-новныенный фагоцитоз«■

{й протяжении опита покагатолк ОФР были выше в 4-й группе зотных, обработанных вакциной ЕЦД и дробно полиркбонатом.■

По результатам исследований содержания в сыворотке кропи . еэго бежа и белкоъых фракций отмечено, что при введении теля-д полиржюната в сочотшши с вакциной ЕЩ£ происходит некоторые зиги в протеинограше, которые зависел* от способа еводйшш . луномодулятора. Основные изменения проте\«тагргле.щ' при дробном эдении лолкрибоката наблюдались в конце опита. В этот период 'ю сплочено повышенно количества обцзго бэяка, альбуминов -збудянов и тцо,,.

• Туберкулезный прочеес у глвотпнх оказывает влияние на покатая гуморального и клеточчога лгмутттета, а такие обсело резке-¿тность организма. Так, установлено, чго у тавотных кз группы горолвдого заражения на 2<Н| сут::и г.сслэ заражения отмечалось г.тозерноо повышение показателей «неточного иммунитета (РБТ1 и И). Чврзз 3 месяца после заражения наблюдалась активация гу-зальннх факторов-задатн. Прг'этонс отметено позишеняе колаче-за и титров комилемейтсвя.зивайцих антител. Показатели' ¡точного шмукт-йта (дшшнэ внутршеозшой туберкулиновой пробы) ?бщей резистентности (данные ОФ?) уменьшались . Дальнейшие зледовапия показали, что з организме животных этой группы раз-зален нктианый туборкулеяпый процесс, сопровождающийся угнетэ-ш Т-сиашлы иммунитета я падением защитных сил организма.

В тех жэ группах, которга: вводился полирибонат в сочетании закциноА ШД, на протяжении всего опята отмечались внеоютэ сазателн ОФ? й РБТЛ, хотя показатели ГЗТ угасали раньше > ч&м труппе животных, вакцянироааяьах Щ2 б«з иммуиомодулятора.

Таким образом экспериментальные исследования показали; ч1" штанное, дробгзе в ведение в организм морских свинок и молод- • са крупного рогатого окота вакцины Щ£. и иммуяокодулятора -

полирибоната способствует повышению протективних свойств вад пины БЦК, надежно защищает организм животных от заражения возбудителем туберкулеза бычьего вида.

Апробация оптимальной схож профилактики туберкулеза с применением вакцины БЦК и полирибоната

Производственное испытание разработанной схемы профилакт! ки туберкулеза у молодняка крупного рогатого скота о помощью сочетанного применения вакцины БВД и полирибоната проведено в неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота пункта? Новосибирской области - совхозах "Овэтловский" Краснозерского и "Султанский" Чулымского районов.

В этих пунктах отмечено значительное распространение тубе кулеза среди крупного рогатого скота всех возрастов, в том час и молодняка.

В совхозе "Светлоеский" проведен опыт по изучению возмого оти повышения эффективности противотуберкулезной вакцинации о применением полирибоната на взрослом крупном рогатом скоте (не тели). Сочетанной вакцинации было подвергнуто I6G телок, на р<= агнруххцих на туберкулин, Животных привили вакциной БЦ1 внутри-кожно в дозе I мг на голову и одновременно ввели внутримышечно полирибонаг б дозе 150 № на голову. Привитые животные находились в контакте с неблагополучным по туберкулезу поголовьем Кс ров, в результате этого они постоянно подвергались инфицирования циркулирующим в стаде возбудителем туберкулеза бычьего.вил (результаты бактериологических исследований).

Послп отола животных в различные сроки, подвергли убою. У 39,1% из них на вскрытии были обнаружены туберкулезные измен кия во внутренних органах и лимфатических узлах.

Аналогичные результаты получены ранее в эксперименте и rip вакцинации'молодняка крупного рогатого скота старших возрастов одной вакциной ЮТ» . '

Исследования в экспершэнте и в услозиях неблагополучного пункта показали, что иммунизация вакциной БЦК крупного рогатог скот-', старших возрастов, даже с одновременным введением в их организм полирибоната, не позволяет достичь объективных резуль татов по эажхте животных от заражения их возбудителем туберку-

1а бычьего вида.

В этом жо совхозе 90 телят, полученных от неблагополучного туберкулезу поголовья коров, з ранний поотнаталышй, до 12-шного возраста, период, привили вакциной ЕЦЖ (I мг на голову, гтрикожно) с одиовремен1шм введением внутримышечно полирибо-•а (0,5 мг/кг массы животного) с повторным его введением через •15 суток в аналогичной дозе.

Телят вакцинировали по мере растела коров, до 7-10 дней ш рмливали молозиво, далее ЗЦМ и содержали изолированно от жи-яих старших возрастов. Через год животных исследовали внутри-яо 1ШД туберкулином .для млекопитающих. Все они но реагировали туберкулин. Из опытного поголовья животных в различные зроки : контроля убшш 10 телят. По результатам вскрытая и бактерио-. ического исследовашш туберкулез у них был исключен.

Подобный эксперимент по иммунизации молодняка крупного рс-ого скота в ранний постнаталышй период в аналогичных усло-х вакциной ЕЦЖ совместно с полирибонатом был проведен и в не-гопслучном по туберкулезу совхозе "Суминский" Новосибирской асти. По описанной выше схеме было привито 160 телочек. Через телочки не реагировали на внутрикожное введение ППД туберку-а для млекопитающих. Выборочный убой из этой партии животных актериологическое исследование биоматериала позволили сделать точение об отсутствии у них туберкулеза. В контрольной группе эчено до 5-7/1 реагирующих на туберкулин телят.

Проведенные исследования позволили сделать вывод о высокой Дидактической эффективности комплексной иммунизации о ранний снатальный период молодняка крупного рогатого скота вакциной и гадауномодулятором - полирибонатом. /

ВЫВОДЫ

1. При экспериментальном изучении протективных свойств вак-I БЦЖ наиболее адекватной лабораторной моделью могут служить жпе свинки, зараженные возбудителем туберкулеза бычьего вида мм 14ХВНЖБТЖ) в дозе 0,00001 мг.

2. Иммуногенкооть вакцины ЕЦЖ зависит от дези к способов ее 1ено1Ш.ч. Наилучший защитный эффект от заражения морских сви-воэбудателем туберкулеза бычьего вида (мтзмм 14ХЗШЮТ) яо-н при однократном (I мг на яотот.чое) или друкратяом (0,1 от)

2С

с интервалом в 14-15 суток внутрякокнсм .способе введения ваод!

3. '.'¿туптохуттрр отвчостэожого прокзводстли (полирибои паадапиаШ морскш свинкам и крупному рогатому скоту раоличпши способами к в различных дозах в сочетании с вакциной Е'ДЖ, не в Бывает побочных явлений.

4. О цегыо профилактики туберкулеза наиболее эффективной является схема применения валцияы в сочетании с. полирибона

см. Цояарибонат морским свинкам вводится вкутрябрюшинко (дбаа 15 + £5 мт\ на животное), а молодняку крупного рогатого скота внутряшиечис (доза 0,5 + 0,5 мг на I кг массы.,животного) с ¡-л тервалами 14-15 суток. Первый раз полирибояат вводится одной ре мен ко с вакциной БЦ1, а второй раз - без нее.

5. Введение в организм ивотных полирибонага в соче-хоиж вакциной ЫЩ сглаживает течение туберкулезного процесса у зара аивгаэг.ооя взрослого крупного рогатого скота и препятствует ин? цирокаиаз морских свинок и молодняка крупного рогатого скота возбудителем туберкулеза бкчьего вида (штэдм 14х' ЗНШБТЖ) в эк лершея-го л в условиях кеблагоплтуета'пунктов.

6. Оочетаиное введоихе шяодншгу крупного рогатого скота, полир» боката и вадцииы Н$ отимуйир>в!г иммунный статус органа? ма животных, при этот достоверные.лвмеколяе отмечена г. показателях оцсоко-фагоцитаркой р^закции, протошохрамш и реакции блаоггрэдефоркадии лам|оцдтив.

7. Введение полирнбоката и вакцинк БПД крупному рогатому' скоту различных возрастов не одинаково влияет на формирование и напряженность протагоотуберкулезного.иммунитета.

У телят, прцритых вакциной ЩЯ сонмеотно о поляриДонатом, до 12--дневного возраста в эксперименте и з условия:: неблагополучных хозяйств достигается полная задета организма жявстннх с заражения возбудителем туберкулеза бычьего вида.

У крупного рогатого скота старших возрастов применение дп ной схемы вакцинации не имеет высокой протектявной эффективное та. '■''.'

8. Комплексная схема .иглгдунопрофилакткки туберкулеза о црг менениегл вакцина и иммуншодулятора - пояирибоната позвол? получить здоровий 'молодняк крупного рогатого скота в неблагопс лучных по туберкулезу пунктах. .

швдошш да практики

В неблагополучных пунктах для эффективной профилактики ту-кулеза у молодняка крупного рогатого скота вакцину БЦК необдало применять совместно с хЛ1муномо.пулятором-полири0онатом, .этого в постнатальннй период до 12-дневного возраста теля-вводится внутрикожно вакцина БЦЙ (1 мг в 0,3 мл растворите-и одновременно внутримышечно полирибонат (0,5 да/кг массы отного в 2 мл физиологического раствора.), через 14-15 суток торяется введение одного полирибоната.

Ревакцинацию молодняка крупного рогатого скота необходимо водить в соответствии с "Наставлением по применению вакцины : при туберкулезе крупного рогатого скота" (1990).

"Комплексная схема профилактики туберкулеза у молодняка пного рогатого скота с применением вакцины БЦЕ и иммуномоду-ора-полирибоната" одобрена учекш советом ИЭВСиДВ СО РАСХЫ 90) и рекомендована для внедрения НТС Новосибирского облдст-о АПК (1990).

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТШЕ ДДССЕРТАЩИ

1, Эффективность различных методов иммунизации морских, сви-вакциной БЦН/А.С.Дончешо, В.Н.Донченко, Н.й.Воробьева, .Протодьяконова // Диагностика и специфическая профилактика целлеза и туберкулеза животных: Сб. науч. тр. / ВАСХПИЛ.

. отд-ото. ИЗВСиДЗ. - Новосибирск, 1988. - С. 28-32.

2, Повышение иммуногенных свойств противотуберкулезной вака ВЦЖ с помощью полирибоната / А.С.Донченко, В.Н.Донченко, .Подгорный, Г.П.Прстодьяконова, ИС.Аликин // Новые фармако-теесдио средства в ветеринарии: Тез. докл.1 Межвуз. нау^.--ST. конф. (19--21 декабря 1989 г.) Ленинград, 1988. - С.50-51.

3, Дротодъяконова Т.П., Доиченко A.C. Влияние иммуномодуля-г на противотуберкулезный иммунитет телят // Общая и частная зоотология инфекционных болезней сельскохозяйственных живот-

: Сб. науч. тр. / ВАСХГШ. Сиб.. отд-нке. ИЗВСиДЗ. - Новоси-jk, 1990, - С, 39-46.