Значение иммунологических факторов в прогнозе эффективности циклов ЭКО у женщин репродуктивного возраста

Мотовилова, Наталия Олеговна

Диссертации по медицине → Акушерство и гинекология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.01) на тему:Значение иммунологических факторов в прогнозе эффективности циклов ЭКО у женщин репродуктивного возраста

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Мотовилова, Наталия Олеговна Санкт-Петербург 2012 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.01

Автореферат диссертации по медицине на тему Значение иммунологических факторов в прогнозе эффективности циклов ЭКО у женщин репродуктивного возраста

На правах рукописи »1 / /

г/1

0050453и/

№

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

-7 мЮН 2012

Санкт-Петербург - 2012

МОТОВИЛОВА Наталия Олеговна

Значение иммунологических факторов в прогнозе эффективности циклов ЭКО у женщин репродуктивного возраста

14.01.01 — акушерство и гинекология 14.03.09 - клиническая иммунология, аллергология

005045307

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии им. Д.О. Отга» Северо-Западного отделения Российской академии медицинских наук

Научные консультанты:

доктор медицинских наук

член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор ФГБУ «Научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии им.Д.О.Отта» СЗО РАМН, руководитель гинекологического отделения с операционным блоком

доктор медицинских наук, профессор ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов» ФМБА России, директор

Коган Игорь Юрьевич

Тотолян Арег Артёмович

Беженарь Виталий Фёдорович

Симбирцев Андрей Семенович

Ведущая организация: Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова

Защита диссертации состоится « 15 » июня 2012 г. в [5 часов на заседании диссертационного совета Д 001.021.01 при ФГБУ "НИИАГ им. Д.О. Отга" СЗО РАМН (199034, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ "НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отга" СЗО РАМН.

Автореферат разослан " Pi" J1^ 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук Кузьминых Татьяна Ульяновна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Разработка эффективных способов преодоления бесплодия является в настоящее время важнейшей государственной медико-социальной задачей. Это обусловлено высокой частотой бесплодия, его неблагоприятным влиянием на демографическую ситуацию в стране, психологический климат в семье и социальную адаптацию супружеской пары (Кулаков В.И., 2003). Одним из направлений лечения бесплодия является применение вспомогательных репродуктивных технологий, в том числе экстракорпорального оплодотворения (ЭКО), частота наступления беременности и родов после которого составляют соответственно 29,1% и 21,5% (данные Европейского общества репродукции человека, 2007 г.). Повышение эффективности ЭКО связано с исследованиями, направленными на изучение регуляторных механизмов репродуктивных процессов, прогнозирование их нарушений и определение подходов к коррекции. В этом плане одно из центральных мест занимает проблема иммунологической регуляции репродуктивной функции женщины. Известно, что иммунокомпетентные клетки (макрофаги, лимфоциты) и продуцируемые ими цитокины (интерлейкины, ростовые факторы, хемокины) принимают участие в механизмах фолликулогенеза, овуляции, формирования и функционирования жёлтого тела, циклических морфофункциональных изменений эндометрия, оплодотворении и имплантации (Gleicher N., 1988; Buculmez О., Arici А. , 2000; Bellver J., 2008). К настоящему времени получены данные об особенностях системной и локальной цитокиновой регуляции плацентации, родовой деятельности, осложнений беременности (гестоза, плацентарной недостаточности, невынашивания) (Соколов Д.И., Сельков С.А., 2012, Szekeres-BarthoJ., 2002). Короткодистантный (ауто- и паракринный) характер действия цитокинов определяет особую актуальность изучения локальных механизмов их влияния на физиологические и патофизиологические процессы, связанные с репродукцией женщины.

Однако исследования, посвященные роли цитокинов в фолликулогенезе при стимуляции яичников гонадотропинами в циклах ЭКО и его эффективности, единичны, а их результаты часто противоречат друг другу. Это обусловлено как особенностями дизайна разных исследований, так и свойствами самих цитокинов: их многообразием, избыточностью и полифункциональностью (Aggarwal В.В., Poesie Е., 1992). В единичных работах показано, что содержание цитокинов в яичниках, эндометрии может быть информативным предиктором эффективности экстракорпорального оплодотворения (Bonetti T.C.S. и соавт., 2010) и его осложнений (Artini P.G., 2002).

Цель исследования: изучить значение цитокинов в эффективности гонадогропной стимуляции яичников в цикле ЭКО и его исходах у женщин репродуктивного возраста с сочетанными формами бесплодия.

Задачи исследования

1. Сравнить показатели гонадотропной стимуляции яичников и содержание гонадотропных, овариальных стероидных гормонов у больных с разными исходами циклов ЭКО.

2. Изучить взаимосвязь гонадотропной стимуляции яичников с содержанием в них цитокинов, экспрессией хемокинов и их рецепторов в эндометрии у больных репродуктивного возраста.

3. Выявить взаимосвязь эффективности цикла ЭКО с содержанием в фолликулярной жидкости яичников цитокинов, экспрессией хемокинов и их рецепторов в эндометрии.

4. Разработать прогностические критерии эффективности цикла ЭКО у больных репродуктивного возраста с сочетанными формами бесплодия.

хемокинов и их рецепторов в эндометрии. Доказано, что большая эффективность стимуляции яичников у больных с наступившей после цикла ЭКО беременностью (количество фолликулов, ооцитов), по сравнению с таковой при неэффективном ЭКО, достигается меньшей курсовой дозой гонадотропинов. Установлено участие цитокинов в фолликулогенезе при гонадотропной стимуляции яичников. Так, выявлено, что количество растущих фолликулов, число полученных при пункции яичников ооцитов, в том числе зрелых, зависит от содержания в фолликулярной жидкости цитокинов 1Ь-10 (интерлейкина 10), ШР-1Р (макрофагального воспалительного протеина 1р), ЯАГЧТЕЗ (регулируемого активацией фактора, экспрессируемого и секретируемого нормальными Т-клетками), ТОТа (фактора некроза опухоли а), (интерферона у) и СМ-С8Р

(гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора). Определено, что у больных с неэффективным циклом ЭКО исходное содержание 1Ь-13 (интерлейкина 13) в фолликулярной жидкости яичников достоверно выше, чем у больных с эффективным циклом. Доказано, что с увеличением возраста больных закономерно снижается эффективность стимуляции яичников, что сопровождается усилением в них секреции провоспалительных цитокинов в-СвР (гранулоцитарного колониестимулирующего фактора), 1Ь-1га (рецепторного антагониста интерлейкина 1), 1Ь-7 (интерлейкина 7), 1Ь-9 (интерлейкина 9) и РБСГ ВВ (фактора роста тромбоцитов). Определено, что с увеличением возраста больных происходит снижение биометрических показателей развития эндометрия во время переноса эмбрионов в полость матки и меняется чувствительность эндометрия к хемокинам, что проявляется увеличением экспрессии в нём рецептора хемокинов ССШ (рецептор 1 хемокинов) и снижением - ССШ (рецептор 3 хемокинов). Обнаружено, что усиление секреции в яичнике провоспалительных цитокинов (ОМ-СЭР, №N7, ИАМТЕБ) может являться одним из механизмов неблагоприятного влияния

стимуляции яичников гонадотропинами на процесс оплодотворения и показатели раннего развития эмбриона.

Практическая значимость работы. В исследовании определены клинические, гормональные и иммунологические факторы, позволяющие прогнозировать исход цикла ЭКО у больных репродуктивного возраста с сочетанными формами бесплодия. Установлено, что учёт возраста больной, наличия трубно-перитонеального фактора бесплодия, содержания в крови свободного тестостерона может быть использован для прогноза наступления беременности после цикла ЭКО. Доказано, что в прогнозе эффективности цикла ЭКО имеет значение содержание в фолликулярной жидкости стимулированных яичников цитокинов 1Ь-2,1Ь-4,1Ь-9,1Ь-13,1Ь-1га, ЮТа и вМ-ОБР.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Показатели гонадотропной стимуляции яичников в цикле ЭКО у больных с сочетанными формами бесплодия зависят от содержания в фолликулярной жидкости цитокинов: 1Ь-4, 1Ь-10, 1Ь-15, эотаксина, МПМР, КАЫТЕБ, ТОРа, ШИу и ОМ-СБР.

2. Увеличение возраста больных сопровождается снижением эффективности гонадотропной стимуляции яичников, усилением секреции в яичниках провоспалительных цитокинов, уменьшением толщины эндометрия во время переноса эмбрионов в полость матки и изменением его чувствительности к хемокинам.

3. Эффективность цикла ЭКО зависит от продуктивности стимуляции яичников, толщины эндометрия во время переноса эмбрионов и содержания в фолликулярной жидкости яичников цитокина 1Ь-13.

практическом семинаре «Актуальные вопросы гинекологической эндокринологии», Санкт-Петербург, ноябрь 2011 года. Основные положения диссертации внедрены в работу Центра планирования семьи и репродукции Пушкинского района при СПб ГБУЗ «Женская консультация № 44» и отделения ВРТ ГБУЗ «Мариинская больница», в учебный процесс кафедры акушерства и гинекологии СПб ГМУ им. акад. И.П. Павлова.

По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ, в том числе 4 — в рецензируемых научных журналах и изданиях.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, описания и обсуждения результатов собственных исследований, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 39 отечественных и 218 зарубежных источников. Материалы диссертации изложены на 161 странице машинописного текста, иллюстрированы 30 таблицами и 36 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Обследовано 79 женщин репродуктивного возраста, которые составили следующие группы: основную (п=36), сравнения (п=36) и контрольную (п=7). Исследование проводилось на базе Центра планирования и репродукции при СПб ГБУЗ «Женская консультация № 44» Пушкинского района. Критериями включения в основную группу являлись: возраст 25-38 лет; бесплодие (эндокринное, трубно-перитонеальное, сочетанное); программа ЭКО; стимуляция яичников препаратами гонадотропинов; наступление беременности после настоящей программы ЭКО (визуализация плодного яйца при ультразвуковом исследовании через 3 недели после переноса эмбрионов). Критерии включения в группу сравнения: возраст 2538 лет; бесплодие (эндокринное, трубно-перитонеальное, сочетанное);

программа ЭКО; отсутствие беременности после настоящей программы ЭКО. Критерии включения в контрольную группу: возраст 25-32 года; наличие беременности, закончившейся родами, в анамнезе. Контрольную группу составили пациентки, принимающие участие в программе «Донорство ооцитов». Критерии исключения для основной группы и группы сравнения были общими: гипер- и гипогонадотропная овариальная недостаточность; удаление одного или обоих яичников в анамнезе; тяжелые степени астенотератозооспермии, азооспермия; единственная причина бесплодия -мужской фактор; ожирение П-Ш степени.

Всем женщинам проводили клиническое обследование, которое включало: сбор анамнеза, первичный осмотр, гинекологическое обследование. При гормональном исследовании радиоиммунным и иммуноферментным методами с использованием стандартных наборов производилось определение содержания в крови на 2-3 день менструального цикла гонадотропных гормонов (ФСГ, ЛГ), эстрадиола, пролактина, свободного тестостерона; на 19-23 день цикла - прогестерона; независимо от дня цикла - антимюллерова гормона. Ультразвуковое исследование (УЗИ) органов малого таза проводили на аппарате Х8 (ОЫМРШ, Япония) с использованием трансвагинального датчика с частотой 7,5 МГц. УЗИ проводили перед началом стимуляции яичников, в процессе мониторинга роста фолликулов при гонадотропной стимуляции яичников, пункции яичников и переноса эмбрионов в полость матки, а также через 3 недели после переноса эмбрионов с целью диагностики беременности. При УЗИ определяли биометрические параметры матки, состояние миометрия, толщину эндометрия, размеры яичников, количество и средний диаметр фолликулов. Всем больным в цикле, который предшествовал процедуре ЭКО, проводили биопсию эндометрия в лютеиновую фазу с последующим гистологическим исследованием полученного материала и определением в нём экспрессии хемокинов и их рецепторов. При микроскопическом исследовании оценивали показатели спермограммы, морфологические

особенности ооцитов, качество оплодотворения и развитие эмбрионов (частоту дробления). Качественным оплодотворением считали визуализацию двух пронуклеусов в течение первых суток от его начала. За частоту дробления принимали долю зигот на 2 сутки развития. При оценке морфологии сперматозоидов придерживались критериев Крюгера (1986 г.). С помощью пункции фолликулов получали ооциты и фолликулярную жидкость для последующего определения в ней содержания цитокинов, хемокинов и факторов роста. При этом исключалась контаминация фолликулярной жидкости кровью. Перенос эмбрионов осуществлялся на 3-й или 5-й день развития эмбрионов.

Иммунологическое обследование пациенток включало определение уровня цитокинов в фолликулярной жидкости методом мультиплексного анализа белков (МСР-1 (моноцитарного хемотаксического протеина 1), MIP-la, MIP-lp, RANTES, эотаксина, IP-10 (интерферон-индуцируемого протеина 10), IL-8, фракталкина, TNFa, IL-lp, IL-2, IL-5, IL-6, IL-7, IL-9, IL-12, IL-13, IL-15, IL-10, IL-lra) и определение методом PCR в биоптатах эндометрия экспрессии мРНК хемокинов (МСР-1, MIP-la, MIP-ip, RANTES, эотаксина, IP-10, IL-8, фракталкина) и их рецепторов (CXCR1, 2, 3, 4; CX3CR1; CCR1, 3, 4, 5, 7).

Статистическая обработка данных выполнена на персональном компьютере с использованием программной системы STATISTICA for Windows 10.0. Использованы методы анализа средних тенденций и линейного корреляционного анализа; рассчитывались коэффициенты корреляции Спирмена как мера линейной зависимости признаков, проведен факторный анализ, сравнение групп с использованием критерия Манна-Уитни, метод Краскела-Уоллиса, а также дискриминантный анализ для выделения группы переменных, оказывающих максимальное влияние на результат лечения. Для исследования зависимости между качественными переменными были использованы таблицы сопряженности и точный

критерий Фишера (в случае таблиц 2x2), Х"кваДРат- Во всех случаях статистически значимыми считались различия при р<0,05.

Результаты исследования Клиническая характеристика больных

Средний возраст женщин в основной группе составил 32±4,3 года, длительность бесплодия - 6,2±3,7 года. 47,2% больных данной группы имели в прошлом беременности (13,9% - роды, 30,5% - искусственные аборты, 2,8% - самопроизвольные аборты, 2,8% - неразвивающиеся беременности). В структуре сопутствующей гинекологической заболеваемости у пациенток основной группы выявлены: хронический сальпингоофорит (36,1%), миома матки (11,1%), наружный генитальный эндометриоз 1-П степени тяжести (22,2%), аденомиоз (5,5%). 36,1% пациенток основной группы перенесли в анамнезе диагностическую и/или операционную лапароскопию, 27,8% -диагностическую и/или операционную гистероскопию.

Средний возраст женщин в группе сравнения составил 33,7±4,2 лет, длительность бесплодия - 5,7±3,2 года. 61,1% больных данной группы в прошлом имели беременности (27,8% - срочные роды, 16,7% - эктопическую беременность, 44,4% - искусственный аборт, 8,3% - самопроизвольный аборт, 16,7% - неразвивающуюся беременность). В структуре сопутствующей гинекологической заболеваемости у пациенток группы сравнения выявлены: хронический сальпингоофорит (58,3%), миома матки (16,4%), наружный генитальный эндометриоз 1-П степени тяжести (25,0%), аденомиоз (13,9%). 47,2% пациенток группы сравнения перенесли в анамнезе диагностическую и/или операционную лапароскопию, 55,5% -диагностическую и/или операционную гистероскопию.

Контрольную группу составили здоровые женщины, принявшие участие в программе «Донорство ооцитов». Все они состояли в браке, в анамнезе имели роды, закончившиеся рождением здорового ребёнка. Средний возраст пациенток составил 29,7±3,9 лет.

Эффективность стимуляции яичников у больных основной группы и группы сравнения

У пациенток основной группы (положительный результат ЭКО) общая курсовая доза гонадотропинов была в 1,2 раза меньше таковой у больных группы сравнения (отрицательный результат ЭКО): 1903±613МЕ и 2204±634 МЕ соответственно (р<0,05). Стимуляция яичников гонадотропинами у больных основной группы была более эффективной -количество растущих фолликулов, ооцитов, полученных при пункции яичников, в том числе зрелых, достоверно превышало таковые у больных группы сравнения: 14,3±5,8 и 10,1±7,1 (р<0,01); 13,6±5,6 и 9,1±6,9 (р<0,01); 11,6±4,6 и 7,9±5,7 (р<0,01) соответственно. Толщина эндометрия во время переноса эмбрионов у больных основной группы была выше таковой у больных группы сравнения: 11,3±1,2мм и 8,8±3,7мм соответственно (р<0,01). Полученные нами результаты свидетельствуют о прогностическом значении показателей эффективности стимуляции яичников, а также развития эндометрия на эффективность цикла ЭКО.

Содержание гипофизарных и яичниковых гормонов в крови у больных обследованных групп

У больных основной группы (эффективный цикл ЭКО) концентрация в крови гонадотропных гормонов, пролактина и эстрадиола не отличалась от таковой у больных группы сравнения (неэффективный цикл): ФСГ -6,36±1,64 мМЕ/л и 7,3±2,73 мМЕ/л соответственно, ЛГ - 5,01±2,72 мМЕ/л и 5,86±2,79 мМЕ/л соответственно, пролактин - 284,2 мМЕ/л и 203,8 мМЕ/л соответственно, эстрадиол - 90,8±66,2 и 82,4±78,9 пмоль/л соответственно.

Содержание свободного тестостерона в крови у больных с бесплодием и эффективным циклом ЭКО (2,3±1,7 нмоль/л) было в 1,4 раза выше такового при неэффективном цикле ЭКО (1,61±1,5 нмоль/л), р<0,05. Уровень свободного тестостерона в крови больных положительно коррелирует с

количеством зрелых ооцитов, полученных при пункции яичников (Rc=0,30; р<0,05).

Полученные результаты обусловлены важным значением андрогенов в стероидо- и фолликулогенезе. Андрогены, продуцируемые тека-клетками и клетками стромы яичника, являются субстратом для синтеза эстрогенов, вовлечены в процесс роста преантральных и малых антральных фолликулов, способствуя увеличению ФСГ-чувствительности их клеток (Hiller S., 1999). Низкий уровень тестостерона в крови у больных ассоциируется в программах ЭКО с увеличением курсовой дозы гонадотропинов, с продолжительностью стимуляции, с уменьшением числа ооцитов, полученных при пункции яичников, с нарушением оплодотворения и снижением частоты наступления беременности (Massin N.. 2004; Kim С.Н., 2007). По данным некоторых исследований (Краснопольская К.В., 2010), включение андроген-содержащих препаратов в протоколы стимуляции яичников в циклах ЭКО у больных со сниженным содержанием тестостерона в крови, приводит к увеличению её эффективности.

Содержание свободного тестостерона коррелирует положительно - с экспрессией в эндометрии CXCR2 (одного из специфических рецепторов для IL-8) (Rc=0,39, р<0,05) и отрицательно - с содержанием в фолликулярной жидкости IL-4 (Rc=-0,29, р<0,05). Обнаруженные взаимосвязи обусловлены влиянием стероидных гормонов на функцию иммунокомпетентных клеток (ИКК), в частности макрофагов, и продукцию ими провоспалительных цитокинов. Считается, что гормональный контроль может осуществляться как при непосредственном связывании гормона с соответствующим рецептором, так и бьггь опосредованным аутокринной и паракринной продукцией цитокинов и ростовых факторов (Hunt и соавт., 1998; Zhang и соавт., 2003; Das и соавт., 2007). Полученные нами данные подтвердили представления о гормональной регуляции синтеза аутокринных и паракринных иммунологических факторов.

Зависимость эффективности стимуляции яичников гонадотропинами от уровня цитокинов в фолликулярной жидкости

С помощью корреляционного анализа определено, что количество растущих при гонадотропной стимуляции фолликулов имеет достоверную прямую корреляционную зависимость от содержания в фолликулярной жидкости цитокинов: 1Ь-10 (11с=0,31; р<0,05), №N7 (Яс=0,32; р<0,05), М1Р-10 (Яс=0,32; р<0,05), ЯАМТЕБ (11с=0,38; р<0,01) и ТЖа (11с=0,27; р<0,05). Выявлено, что имеется прямая корреляционная зависимость между количеством ооцитов, полученных при пункции яичников, и содержанием в них цитокинов 1Ь-10, 1ЕЫу, вМ-СЗР, М1Р-1|3, RANTES и ТОТа (табл. 1). У больных с отрицательным результатом цикла ЭКО уровень 1Ь-13 в фолликулярной жидкости яичников во время стимуляции в 2 раза выше такового у больных с наступившей после ЭКО беременностью (рис. 1).

Таблица 1

Корреляционная зависимость между количеством ооцитов, полученных при пункции яичников, и содержанием в фолликулярной жидкости цитокинов

Количество ооцитов Цитокин Яс Р

1Ь-10 0,27 <0,05

0,28 <0,05

СМ-СБР 0,28 <0,05

М1Р-1Р 0,29 <0,05

КАОТЕБ 0,35 <0,01

ТИБа 0,28 <0,05

С помощью корреляционного анализа была выявлена достоверная взаимосвязь между уровнями цитокинов в фолликулярной жидкости. Так, содержание 1Ь-10 коррелировало с концентрацией 1Ь-6 (Яс=0,76; р<0,0001), эотаксина (Б1с=0,62, р<0,0001), МСР-1 (Яс=0,62, р<0,0001) и О-СБР (110=0,56;

р<0,0001), а содержание 1Ь-2 - с вМ-СЭР (Яс=0,59; р<0,0001) и 1Ь-15 (11с=0,78; р<0,0001), что может свидетельствовать о сходных клеточных источниках синтеза указанных факторов в тканях яичника.

Boxplot by Group Variable: IL-13

4 т

□ т

..........................-............... □ □

сравнения основная контрольная

□ Меап I I MeanlSE ~Т Mean±1,96'SE

Рис. ¡.Содержание IL-13 в фолликулярной жидкости яичников у обследованных лиц

* _ р<0,05 по сравнению с содержанием в основной группе

Полифункциональные цитокины IL-10, IL-4, IL-13 относят к цитокинам, характерным для так называемого Th-2 иммунного ответа, доминирующего при нормальном течении беременности. IL-10 и IL-4 обладают выраженным противовоспалительным эффектом, регуляторными свойствами в отношении цитотоксических и хелперных Т-лимфоцитов, NK-клеток, B-лимфоцитов и дендритных клеток. IL-10 способен также ингибировать апоптоз клеток, индуцированный TNFa или IFNy (Moore и соавт., 2001). IL-13 продуцируется преимущественно активированными Т-клетками и является мощным модулятором активности моноцитов и В-клеток, не оказывая, в отличие от IL-4, прямого биологического влияния на Т-клетки. Кроме этого существуют данные о способности IL-13 оказывать

ингибирующий эффект на продукцию других цитокинов, стимулирующих начало воспалительного процесса (Yamauchi А., Bloom Е.Т., 1995).

Возрастание продукции цитокинов, хемокинов и ростовых факторов в яичниках при их стимуляции, вероятно, обеспечивается высоким содержанием и активацией в них ИКК. Кроме этого, секреция цитокинов обеспечивается гранулезными клетками растущих фолликулов. TNFa, IFNy, GM-CSF вовлечены в развитие и рост фолликула, сигнальное взаимодействие между ооцитом и окружающими его соматическими (гранулезными) клетками, баланс процессов пролиферации и апоптоза клеток фолликула, регулируют ангиогенез и синтез стероидных гормонов в яичнике (Kaipiaand, Hsuen, 1997; Bornstein и соавт., 2004; Knightand, Glister, 2006; Wu и соавт., 2004). TNFa и IFNy через активацию проапоптотических Вах-белков, протеинкиназы С или каспаз могут индуцировать апоптоз клеток фолликула. Синтезируемые в яичниках хемокины (RANTES, эотаксин, MIP-lß), обладая хемоатграктивным эффектом, привлекают в ткани яичника и активируют ИКК, которые, в свою очередь, секретируют цитокины, хемокины и факторы роста, обеспечивая избыточность цитокиновой регуляции фолликулогенеза.

Изученные в исследовании цитокины могут регулировать процесс ангиогенеза в яичнике. Так, TNFa и GM-CSF, непосредственно или посредством индукции VEGF (сосудисто-эндотелиальный фактор роста), принимают участие в миграции, пролиферации эндотелиальных клеток, формировании капиллярных трубок и базальной мембраны. При этом TNFa, IL-10 могут оказывать и антиангиогенный эффект (Соколов Д.И., Сельков С.А., 2012 г., Choi и соавт., 2002).

Таким образом, стимуляция яичников гонадотропинами сопровождается ростом фолликулов, рекрутированием и активацией иммунокомпетентных клеток с индукцией противовоспалительных (IL-4, ILIO, IL-13), провоспалительных цитокинов (IFNy; GM-CSF; TNFa) и хемокинов (MIP-lß; RANTES), что, вероятно, необходимо для поддержания

баланса апоптоза и пролиферации клеток гранулезы, регуляции ангиогенеза и стероидогенеза в яичниках.

Зависимость эффективности стимуляции яичников гонадотропинами

от возраста больных

С увеличением возраста больных закономерно снижается количество растущих фолликулов (11с=-0,32; р<0,05); полученных во время пункции яичников ооцитов (1*.с=-0,33; р<0,01), в том числе зрелых (11с=-0,31; р<0,05). Это согласуется с данными других исследователей о снижении активности процессов фолликуло- и оогенеза, частоты наступления беременности с увеличением возраста женщин (Назаренко Т.А., Мишиева Н.Г., 2010). Данные процессы обусловлены морфофункциональными изменениями яичников у женщин старшего возраста, снижением их овариального резерва, увеличением частоты анеуплоидии ооцитов, что может явиться одной из причин низкой частоты имплантации (Р1ас1кЛМ. и соавт., 1988). Кроме физиологического увеличения частоты элиминации примордиальных фолликулов в старшем репродуктивном возрасте, факторами, приводящими к снижению эффективности гонадотропной стимуляции яичников у обследованных больных, могли являться сопутствующие гинекологические заболевания (хронический сальпингоофорит, наружный генитальный эндометриоз), перенесённые оперативные вмешательства на органах репродуктивной системы.

Одним из механизмов нарушения фолликуло- и оогенеза является изменение цитокиновой регуляции этих процессов. С увеличением возраста пациенток происходит увеличение содержания в фолликулярной жидкости яичников провоспалительных цитокинов: 1Ь-1 га, 1Ь-7, 1Ь-9, в-СБР и РБСР ВВ (табл. 2). Возможно, что увеличение содержания провоспалительных цитокинов оказывает негативное влияние на гранулёзные клетки, комплекс ооцит-кумулюс, качество ооцита и является одним из механизмов снижения эффективности циклов ЭКО. Действительно, согласно некоторым

исследованиям, уменьшение овариального резерва, ассоциированное с возрастом женщины, сопровождается активацией апоптоза гранулёзных клеток фолликула (8е1Гег Б.В. и соавт, 1996). Выявленное нами усиление экспрессии тромбоцитарного фактора роста в яичнике может быть обусловлено активацией синтеза провоспалительных цитокинов. \¥. Рге1(1тап и соавт. (1997) также обнаружили повышение содержания ангиогенного протеина (фактора роста эндотелия) в фолликулярной жидкости яичников у женщин со сниженным овариальным резервом.

С увеличением возраста больных наблюдалось достоверное снижение толщины эндометрия во время переноса эмбрионов (Лс—О.ЗЗ; р<0,05 ). Это может быть обусловлено как увеличением частоты переноса эмбрионов на 3-й день развития, так и возрастными морфофункциональными изменениями эндометрия. С увеличением возраста больных изменяется чувствительность эндометрия к хемокинам, что проявлялось в увеличении в нём экспрессии рецептора хемокинов ССЮ и снижении - рецептора ССЮ (табл. 2).

Таблица 2

Корреляционная зависимость содержания цитокинов в фолликулярной жидкости яичников и экспрессии рецепторов хемокинов в эндометрии от возраста больных с бесплодием

Возраст больных Цитокин (фолликулярная жидкость) Яс Р

1Ь-1га 0,31 <0,01

1Ь-7 0,33 <0,01

1Ь-9 0,28 <0,05

О-СБР 0,33 <0,01

РБСР-ВВ 0,41 <0,01

мРНК (эндометрий)

ССШ 0,41 <0,05

ССЮ -0,42 <0,05

Результаты анализа взаимосвязи между содержанием цитокинов в фолликулярной жидкости яичников, качеством ооцитов и показателями раннего развития эмбриона

Выявлена достоверная отрицательная корреляционная зависимость между качеством оплодотворения, частотой дробления эмбрионов с содержанием в фолликулярной жидкости цитокинов ОМ-СБР, №N7 и ЯАМТЕБ и положительная - между количеством перенесенных эмбрионов и содержанием в фолликулярной жидкости 1Ь-15 (табл. 3).

Таблица 3

Зависимость между качеством оплодотворения, показателями раннего развития эмбриона и содержанием в фолликулярной жидкости цитокинов

Показатель Цитокин Re Р

Качество оплодотворения, % GM-CSF -0,29 <0,05

Частота дробления, % IFNy -0,28 <0,05

RANTES -0,26 <0,05

Количество перенесенных в полость матки эмбрионов IL-15 0,26 <0,05

Полученные данные свидетельствуют о том, что усиление секреции в яичнике провоспалительных цитокинов может быть одним из механизмов неблагоприятного влияния стимуляции яичников гонадотропинами на ооцит. В настоящее время предполагается, что стимуляция яичников, её режимы влияют на «качество» ооцита, потенции его к оплодотворению и темпы раннего развития эмбриона (Mehta R.H., 2001; Canto М.В., 2006). Негативную роль могут играть высокие концентрации в крови эстрадиола, а также фармакологические препараты, использующиеся во время стимуляции яичников (гонадотропины, агонисты и антагонисты гонадотропин-рилизинг гормона) (Gordon U.D., 2001; Lisi F., 2005). Полученные результаты подтвердили имеющиеся фундаментальные представления о том, что взаимодействие между ооцитом и соматическими клетками яичника

являются критическим для нормального течения оогенеза, оплодотворения и раннего развития эмбриона.

Заключительным этапом работы была разработка с помощью дискриминантного анализа критериев прогнозирования эффективности цикла ЭКО. Были выявлены 3 группы факторов, позволяющие прогнозировать наступление беременности после цикла ЭКО. К 1-й группе факторов относятся клинические (возраст, индекс массы тела больных, наличие трубно-перитонеального фактора бесплодия), ко 2-й - гормональные (содержание в крови свободного тестостерона и прогестерона), к 3-й -иммунологические (содержание в фолликулярной жидкости яичников цитокинов 1Ь-2,1Ь-4,1Ь-9,1Ь-13,1Ь-1га, ЮТа и ОМ-СБР), причем наиболее важным прогностическим значением обладает уровень 1Ь-13.

Таким образом, в ходе настоящего исследования выявлено значение цитокинов в эффективности цикла ЭКО у больных репродуктивного возраста с сочетанными формами бесплодия и определены клинические, гормональные и иммунологические факторы, позволяющие прогнозировать его исход.

ВЫВОДЫ

1. У больных 19-38 лет с сочетанными формами бесплодия, у которых цикл ЭКО завершился наступлением беременности, при гонадотропной стимуляции яичников количество растущих фолликулов и ооцитов в 1,5 раза, а толщина эндометрия во время переноса эмбрионов в полость матки в 1,3 раза больше по сравнению с таковыми у больных с неэффективным циклом.

2. У больных с эффективным циклом ЭКО содержание в крови свободного тестостерона в 1,4 раза выше такового при неэффективном цикле ЭКО (2,3±1,7 и 1,6±1,5 нмоль/л соответственно, р<0,05); при этом уровень свободного тестостерона коррелирует положительно - с количеством зрелых ооцитов, полученных при пункции яичников; экспрессией в эндометрии

СХСЯ2 и ССЮ; отрицательно - с содержанием в фолликулярной жидкости 1Ь-4.

3. Эффективность стимуляции яичников гонадотропинами зависит от концентрации цитокинов в фолликулярной жидкости; между количеством растущих фолликулов, ооцитов и содержанием в фолликулярной жидкости 1Ь-10, 1Ь-15, эотаксина, М1Р-10, ЯАЖЕ8, ТОТа, и ОМ-С8Р имеется прямая взаимосвязь.

4. Увеличение возраста больных с бесплодием сопровождается снижением эффективности стимуляции яичников гонадотропинами; возрастанием содержания в фолликулярной жидкости цитокинов О-СБР, 1Ь-1га, 1Ь-7, 1Ь-9, тромбоцитарного фактора роста (РБСР ВВ) и изменением чувствительности эндометрия к хемокинам (повышением экспрессии рецепторов ССЮ и снижением - ССЮ).

5. У больных с отрицательным результатом цикла ЭКО уровень 1Ь-13 в фолликулярной жидкости яичников во время стимуляции в 2 раза выше такового у больных с наступившей после ЭКО беременностью.

6. Качество оплодотворения отрицательно коррелирует с уровнем ПЧЯу, ИАКТЕБ и вМ-СБР в фолликулярной жидкости яичников.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. К информативным клинико-анамнестическим и гормональным факторам, определяющим исход цикла ЭКО у больных репродуктивного возраста с сочетанными формами бесплодия, относят: а) возраст больной; б) индекс массы тела; в) наличие трубно-перитонеального фактора бесплодия; г) уровень свободного тестостерона в крови; д) содержание прогестерона в крови на 20-22 день менструального цикла, предшествующего ЭКО.

2. Для определения прогноза исхода цикла ЭКО рекомендуется определение в фолликулярной жидкости яичников цитокинов 1Ь-2,1Ь-4,1Ь-9, 1Ь-13,1Ь-1га, ТОТа и СМ-СБР.

3. С целью определения вероятности наступления беременности после цикла ЭКО рекомендуется рассчитывать следующий прогностический индекс:

Do=-0,81494xBo3pacT+0,146218х(процент flpo6neHiw)-0,24226xG-CSF+ ^Л88225><прогестерон+0,40203><IL-9+20,47004><IL-4-0,17025><IL-13+1,775071 х xIL-2-l ,70697><TNFa—4,13941 xGM-CSF+0,920219*свободный тестостерон+ 7,771985,

где G-CSF - гранулоцитарный колониестимулирующий фактор, IL -интерлейкин, TNF - фактор некроза опухолей, GM-CSF - гранулоцигарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор. При D>0 - прогнозируется наступление беременности после цикла ЭКО; при D<0 - прогнозируется отрицательный результат лечения. Чувствительность теста - 93%; специфичность - 89%.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Роль иммунных факторов в функционировании репродуктивной системы женщины / Н.О. Мотовилова, А.Н. Буйнова, A.A. Доценко, А.Ю. Грязнов // Вестник уральской медицинской академической науки. - 2010. - № 2/1. - С. 57-58.

2. Мотовилова, И.О. Роль иммунных факторов в функционировании репродуктивной системы / Н.О. Мотовилова, И.Ю. Коган, Арег А. Тотолян II Уральский медицинский журнал. - 2010. - № 4. -С. 117-121.

3. Исследование клинически значимых генетических полиморфизмов у пациенток с неудачными попытками ЭКО / A.B. Иванов, А.Н. Буйнова, Н.О. Мотовилова, A.B. Куренков // Материалы XXI Международной конференции РАРЧ « Репродуктивные технологии сегодня и завтра». -СПб, 2011.-С. 29-30.

4. Мотовилова, Н.О. Секреция колониестимулирующих факторов в яичниках у больных с бесплодием в цикле ЭКО / Н.О. Мотовилова, И.Ю. Коган, Арег А. Тотолян // Журнал акушерства и женских болезней. - 2012. - вып. 3. - С. 36-40.

5. Роль некоторых цитокинов в эффективности лечения бесплодия методом экстракорпорального оплодотворения / Н.О. Мотовилова, И.Ю. Коган, К.А. Сысоев, А.Н. Буйнова, А.Ю. Грязнов, Арег А. Тотолян // Медицинская иммунология. - 2012. - Т. 14, № 4-5. -С. 373-382.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВРТ - вспомогательные репродуктивные технологии

ИКК - иммунокомпетентные клетки

ЛГ - лютеинизирующий гормон

мРНК - митохондриальная рибонуклеиновая кислота

ФСГ - фолликулостимулирующий гормон

ЭКО - экстракорпоральное оплодотворение

СХС - а-хемокины

СХЗС - 8-хемокины

СС - р-хемокины

CXCR - рецепторы а-хемокинов

CX3CR - рецепторы 5-хемокинов

CCR - рецепторы р-хемокинов

G-CSF - гранулоцитарный колониестимулирующий фактор

GM-CSF - гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор

Ig - иммуноглобулин

IFNy -интерферон у

IL - интерлейкин

IL 1га - рецепторный антагонист интерлейкина 1 IP-10 - интерферон-индуцируемый протеин 10 МСР 1 - моноцитарный хемотаксический протеин 1 MIP ip - макрофагальный воспалительный протеин ip PDGF ВВ - фактор роста тромбоцитов

RANTES - регулируемый активацией фактор, экспрессируемый и

секретируемый нормальными Т-клетками

Rc - коэффициент Спирмена

TNFa - фактор некроза опухоли a

VEGF - сосудисто-эндотелиальный фактор роста

Подписано в печать 16.05.2012г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,3. Тираж 100 экз. Заказ № 2623.

Отпечатано в ООО «Издательство "ЛЕМА"» 199004, Россия, Санкт-Петербург, В.О., Средний пр., д. 24 тел.: 323-30-50, тел./факс: 323-67-74 e-mail: izd_lema@mail.ni http://www.lemaprint.ru

Оглавление диссертации Мотовилова, Наталия Олеговна :: 2012 :: Санкт-Петербург

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Иммунологические факторы в структуре женского бесплодия.

1.2. Цитокины: основные характеристики, классификация, биологическое действие.

1.3. Современные представления о влиянии цитокинов на фолликулогенез и функционирование жёлтого тела.

1.4. Роль иммунных факторов в циклических морфофункциональных изменениях эндометрия и имплантации.

1.5. Влияние иммунных факторов на оплодотворение и раннее развитие эмбриона.

1.6. Проблема клинического использования определения иммунных факторов.

Глава 2. Материалы исследования.

2.1. Клинический метод.

2.2. Гормональное исследование.'.

2.3. Ультразвуковое исследование.

2.4. Микроскопическое исследование.

2.4.1. Микроскопия спермы.

2.4.2. Микроскопия ооцитов и эмбрионов.

2.5. Инвазивные методы протокола ЭКО.

215.1. Трансвагинальная пункция яичников.

2.5.2. Перенос эмбрионов.

2.6. Криоконсервационные методики.

2.7. Иммунологические методы исследования.

2.8. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. Результаты исследований.

3.1. Содержание гипофизарных и яичниковых гормонов в крови пациенток обследованных групп.

3.2. Корреляционная зависимость между содержанием в крови гипофизарных, яичниковых гормонов и клинико-анамнестическими характеристиками пациенток.

3.3. Основные характеристики цикла ЭКО у пациенток обследованных групп.

3.4. Результаты корреляционного анализа зависимости клинико-анамнестических характеристик больных и показателей цикла ЭКО.

3.5. Результаты корреляционного анализа зависимости содержания в крови больных гипофизарных, яичниковых гормонов и показателей цикла ЭКО.

3.6. Содержание цитокинов в фолликулярной жидкости у больных обследованных групп.

3.7. Результаты корреляционного анализа зависимости клинико-анамнестических характеристик больных и содержания цитокинов в фолликулярной жидкости.

3.8. Результаты корреляционного анализа содержания, цитокинов в фолликулярной жидкости и содержания гипофизарных и овариальных гормонов в крови больных.

3.9. Результаты корреляционного анализа зависимости содержания цитокинов в фолликулярной жидкости больных обследованных групп и показателей стимуляции яичников в цикле ЭКО.

3.10: Результаты корреляционного анализа1 содержания цитокинов в фолликулярной жидкости больных обследованных групп и качества ооцитов, показателей раннего развития эмбриона.

3.11. Содержание мРНК хемокинов и их рецепторов в эндометрии больных основной группы и группы сравнения.

3.12. Зависимость между содержанием мРНК хемокинов и их рецепторов в эндометрии, возрастом и клинико-лабораторными показателями больных основной группы и группы сравнения.

3.13. Зависимость между содержанием мРНК хемокинов и их рецепторов в эндометрии и показателями цикла ЭКО.

3.14. Результаты дискриминантного анализа основных клинико-лабораторных факторов, определяющих прогноз лечения бесплодия с помощью ЭКО.

Глава 4. Обсуждение результатов.

Выводы.

Введение диссертации по теме "Акушерство и гинекология", Мотовилова, Наталия Олеговна, автореферат

Актуальность темы. Разработка эффективных способов преодоления бесплодия является в настоящее время важнейшей государственной медико-социальной задачей. Это обусловлено высокой частотой бесплодия, его неблагоприятным влиянием на демографическую ситуацию в стране, психологический климат в семье и социальную- адаптацию супружеской пары (Кулаков В.И., 2003). Одним из направлений лечения бесплодия является применение вспомогательных репродуктивных технологий, в том числе экстракорпорального оплодотворения (ЭКО), частота наступления беременности и родов после которого составляют соответственно 29,1% и 21,5% (данные Европейского общества репродукции человека, 2007 г.). Повышение эффективности ЭКО связано с исследованиями, направленными на изучение регуляторных механизмов репродуктивных процессов, прогнозирование их нарушений и определение подходов к коррекции. В этом плане одно из центральных мест занимает проблема- иммунологической регуляции репродуктивной функции женщины. Известно,' что иммунокомпетентные клетки (макрофаги, лимфоциты) и продуцируемые ими цитокины (интерлейкины, ростовые факторы, хемокины) принимают участие в механизмах фолликулогенеза, овуляции, • формирования- и функционирования жёлтого тела, циклических морфофункциональных изменений эндометрия, оплодотворении и имплантации (Gleicher N., 1988; Buculmez О., Arici А., 2000; Bellver J., 2008). К настоящему времени получены данные об • особенностях системной и локальной цитокиновой регуляции плацентации, родовой< деятельности, осложнений беременности (гестоза, плацентарной недостаточности, невынашивания) (Соколов Д.И., Сельков С.А., 2012, Szekeres-BarthoJ., 2002). Короткодистантный (ауто - и паракринный) характер действия цитокинов определяет особую актуальность изучения локальных механизмов их влияния на физиологические и патофизиологические процессы, связанные с репродукцией женщины. Однако исследования, посвященные роли цитокииов в фолликулогенезе при стимуляции яичников гонадотропинами в циклах ЭКОи его эффективности единичны, а их результаты часто противоречат друг другу. Это обусловлено как особенностями дизайна разных исследований, так и свойствами самих цитокинов: их многообразием, избыточностью и полифункциональностью (Aggarwal В.В., Poesie Е., 1992). В единичных работах показано, что содержание цитокинов в яичниках, эндометрии может быть информативным предиктором эффективности экстракорпорального оплодотворения (Bonetti T.C.S. и соавт., 2010) и его осложнений (Artini P.G., 2002).

Цель исследования: изучить значение цитокинов в эффективности гонадотропной стимуляции яичников в цикле ЭКО и его исходах у женщин репродуктивного возраста с сочетанными формами бесплодия.

Задачи исследования

3. Выявить взаимосвязь эффективности цикла ЭКО' с содержанием в фолликулярной жидкости яичников цитокинов, экспрессией хемокинов и их рецепторов в эндометрии.

Научная новизна и теоретическая значимость работы. В работе выявлена роль цитокинов в эффективности цикла ЭКО у больных репродуктивного возраста с сочетанными формами бесплодия. Впервые определено содержание широкого спектра про- и противовоспалительных цитокинов в фолликулярной жидкости яичников, а также экспрессии хемокинов и их рецепторов в эндометрии. Доказано, что большая эффективность стимуляции яичников у больных с наступившей после цикла ЭКО беременностью ^ (количество фолликулов, ооцитов), по сравнению с таковой при неэффективном' ЭКО, достигается меньшей- курсовой дозой гонадотропинов. Установлено участие цитокинов в фолликулогенезе при гонадотропной стимуляции яичников. Так, выявлено, что количество растущих фолликулов, число полученных при пункции яичников ооцитов, в том числе зрелых, зависит от содержания в фолликулярной жидкости цитокинов 1Ь-10 (интерлейкина 10), М1Р-1Р (макрофагального воспалительного протеина 10), ЯАМТЕЭ (регулируемого активацией фактора, экспрессируемого и секретируемого нормальными Т-клетками), Т№а (фактора некроза опухоли а), ШИу (интерферона у) и ОМ-СЭР (гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора). Определено, что у больных с неэффективным циклом ЭКО исходное содержание 1Ь-13'(интерлейкина 13) в. фолликулярной жидкости яичников достоверно выше, чем» у больных с эффективным циклом. Доказано; что с увеличением возраста больных закономерно снижается эффективность стимуляции яичников; что сопровождается усилением' в них секреции провоспалительных цитокинов в-СЭР (гранулоцитарного колониестимулирующего фактора), 1Ь-1га (рецепторного антагониста интерлейкина 1); 1Ь-7 (интерлейкина 7), 1Ь-9 (интерлейкина 9)' и РОСРВВ. (фактора- роста тромбоцитов). Определено, что с увеличением возраста больных происходит снижение биометрических показателей развития эндометрия- во время переноса эмбрионов* в полость матки и меняется чувствительность эндометрия к хемокинам, что проявляется увеличением экспрессии в нём рецептора хемокинов ССЮ (рецептор- 1 хемокинов) и снижении - ССЯЗ (рецептор 3 хемокинов). Обнаружено, что усиление секреции в яичнике провоспалительных цитокинов (ОМ-СЭР, ШЫу, ИАИТЕЭ) может являться одним из механизмов неблагоприятного влияния стимуляции яичников гонадотропинами на процесс оплодотворения и показатели раннего развития эмбриона.

Практическая значимость> работы. В исследовании определены клинические, гормональные и иммунологические факторы, позволяющие прогнозировать исход цикла ЭКО у больных репродуктивного возраста с сочетанными формами бесплодия. Определено- что учёт возраста больной, наличия трубно-перитонеального фактора бесплодия, содержания в крови свободного тестостерона может быть использован для прогноза наступления беременности после цикла ЭКО. Доказано, что в прогнозе эффективности цикла ЭКО имеет значение содержание в фолликулярной жидкости стимулированных яичников цитокинов 1Ь-2, 1Ь-4, 1Ь-9,,1Ь-13, 1Ь-1га,ТЫРа и ОМ-С8Б.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Показатели гонадотропной стимуляции яичников в цикле ЭКО у больных с сочетанными формами бесплодия зависят от содержания в фолликулярной жидкости цитокинов: 1Ь-4, 1Ь-10, 1Ь-15, эотаксина; М1Р-1Р, ЯДШЕв, Т№а, №N7 и вМ-СЭР.

2. Увеличение возраста больных сопровождается снижением эффективности гонадотропной стимуляции яичников,, усилением,'секреции в яичниках провоспалительных цитокинов, уменьшением толщины эндометрия1 во время' переноса эмбрионов в полость матки и изменением' его чувствительности к хемокинам.

3. Эффективность цикла ЭКО зависит от продуктивности стимуляции яичников, толщины,эндометрия во время .переноса* эмбрионов и содержания в фолликулярной жидкости яичников цитокина 1Е-13.

Апробация работы и внедрение в практику. Результаты исследования были представлены на научно-практической конференции «Репродуктивные технологии сегодня и завтра», Санкт-Петербург, сентябрь 2011, на научно-практическом семинаре «Актуальные вопросы гинекологической эндокринологии», Санкт-Петербург, ноябрь 2011 года. Основные положения диссертации внедрены в работу Центра планирования семьи и репродукции

Пушкинского района при СПб ГБУЗ «Женская консультация № 44» и отделения ВРТ ГБУЗ «Мариинская больница», в учебный процесс кафедры акушерства и гинекологии СПб ГМУ им. акад. И.П. Павлова.

По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ, в том числе 4 — в рецензируемых научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Заключение диссертационного исследования на тему "Значение иммунологических факторов в прогнозе эффективности циклов ЭКО у женщин репродуктивного возраста"

ВЫВОДЫ

3. Эффективность стимуляции яичников гонадотропинами зависит от концентрации цитокинов в фолликулярной жидкости; между количеством растущих фолликулов, ооцитов и содержанием в фолликулярной жидкости 1Ь-10, 1Ь-15, эотаксина, М1Р-1(3, КАШЕЭ, ТЬШа, 1РЫу и ОМ-СЭР имеется прямая взаимосвязь.

4. Увеличение возраста больных с бесплодием сопровождается снижением эффективности стимуляции яичников гонадотропинами; возрастанием содержания в фолликулярной жидкости цитокинов О-СЭБ, 1Ь-1га, 1Ь-7, 1Ь-9, тромбоцитарного фактора роста (РБОР ВВ) и изменением чувствительности эндометрия к хемокинам (повышением экспрессии рецепторов ССШ и снижением - ССЯЗ).

У больных с отрицательным результатом цикла ЭКО уровень 1Ь-13 в фолликулярной жидкости яичников во время стимуляции в 2 раза выше такового у больных с наступившей после ЭКО беременностью.

Качество оплодотворения отрицательно коррелирует с уровнем №N7, ЯАМТЕБ и вМ-СЗР в фолликулярной жидкости яичников.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. К информативным клинико-анамнестическим и гормональным факторам, определяющим исход цикла ЭКО у больных репродуктивного возраста с сочетанными формами бесплодия, относят: а) возраст больной; б) индекс массы тела; в) наличие трубно-перитонеального фактора бесплодия; г) уровень свободного тестостерона в крови; д) содержание прогестерона в крови на 2022 день менструального цикла, предшествующего ЭКО.

2. Для определения прогноза исхода цикла ЭКО рекомендуется определение в фолликулярной жидкости яичников цитокинов 1Ь-2, 1Ь-4, ІЬ-9, П.-13,1Ь-1га, ТЫБа и ОМ-С8Р.

1)о=-0,81494><Возраст+0,146218^(процент дробления)-0,24226*0-С8Б+ +0,188225хПрогестерон+0,40203хІЬ-9+20,47004хІЬ-4-0,17025х хІЬ-13+1,775071 хІЬ-2-1,70697хТИРа-4,13941 хОМ-С8Р+0,920219х хсвободный тестостерон+ 7,771985, где 0-С8Р - гранулоцитарный колониестимулирующий фактор, 1Ь - интерлейкин, ТЫР - фактор некроза опухолей, ОМ-СвБ -гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор. При В>0 - прогнозируется наступление беременности после цикла ЭКО; при £><0 - прогнозируется отрицательный результат лечения. Чувствительность теста - 93%; специфичность - 89%.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Мотовилова, Наталия Олеговна

1. Алексеев, Л.П. Пересмотр представлений о роли HLA-антигенов в физиологии и патологии репродуктивного процесса / Алексеев Л.П., Болдырева М.Н. // Физиология и патология иммунной системы. 2004. - Т.8, № 1. - С.44-50.

2. Гзгзян, A.M. Стимуляция овуляции кломифена цитратом у больных нормогонадотропной формой аутоиммунного оофорита / Гзгзян A.M. // Журнал акушерства и женских болезней. 2007. - № 2. - С.61-66.

3. Дуринян, Э.Р. Гиперандрогения в клинике бесплодия / Дуринян Э.Р. // Бесплодный брак: руководство для врачей / ред. В.И. Кулаков. М: ГЭОТАР-Медиа, 2006. - С.214-230.

4. Кетлинский, С.А. Эндогенные иммуномодуляторы / Кетлинский С.А., Симбирцев A.C., Воробьев A.A. СПб.: Гиппократ, 1992.

5. Кнорринг, Г.Ю. Цитокиновая сеть как мишень системной энзимотерапии / Кнорринг Г.Ю. // Цитокины и воспаление. 2005. -№ 4. - С.6-9.

6. Козлов, В.А. Эритропоэтин как модулятор цитокин-синтезирующей активности клеток эритроидного ряда / Козлов В.А. // Цитокины и воспаление. 2002. - № 3. - С.20-24.

7. Корсак, B.C. ВРТ в России в 2009 году / Корсак B.C. // XXI международная конференция РАРЧ «Репродуктивные технологии сегодня и завтра», 8-10 сентября 2011 год, Санкт-Петербург. СПб., 2011.-С.5-7.

8. Краснопольская, К. В. Новые подходы к повышению эффективности эко у женщин старшего репродуктивного возраста / Краснопольская К.В., Кабанова Д. И. // Акушерство и гинекология. -2010. № 2. - С.48-53.

9. Кулаков, В.И. Диагностика и лечение женского бесплодия / Кулаков В.И., Корнеева И.Е. // Практическая гинекология / ред. В.И. Кулаков. М., 2002. - С.298-318.

10. Кулаков, В.И. Синдром поликистозных яичников при экстракорпоральном оплодотворении и переносе эмбриона в полость матки. Синдром гиперстимуляции и другие осложнения программы ЭКО / Кулаков В.И., Калинина Е.А. // Практическая гинекология / ред.

11. B.И.Кулаков, В.Н. Прилепская. М: МЕДпресс-информ, 2001.1. C.452-458.

12. Лечение женского и мужского бесплодия. Вспомогательные репродуктивные технологии / ред. Кулаков В.И., Леонов Б.В., Кузьмичев Л.Н. М.:МИА, 2005. - 592 с.

13. Мещерякова, A.B. Иммуноморфологические аспекты неразвивающейся беременности первого триместра: автореф. дис. . канд. мед.наук / Мещерякова A.B. М 2000. - 21 с.

14. Назаренко, Т.А. Анализ взаимосвязи между клинико-анамнестическими, клинико-лабораторными данными, особенностями индукции суперовуляции и исходами ЭКО и ЭКО/ИКСИ / Назаренко Т.А., Мишиева Н.Г. // Проблемы репродукции. 2011. -№ 1. - С.73-77.

15. Невынашивание беременности, инфекция, врожденный иммунитет / Макаров О.В. и др.. -М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. 176 с.

16. Обоснование дифференцированного подхода к индукции овуляции при лечении бесплодия у больных с синдромом поликистозных яичников / Назаренко Т.А. и др. // Проблемы репродукции. 2002. - № 3. - С.52-56.

17. Применение метода IVM (созревания ооцитов in vitro) в программе ВРТ в Италии / Dal Canto M.B. et al. // Проблемы репродукции. -2006.-№5.-С. 110.

18. Регистр центров ВРТ в России 2009 г. // Проблемы репродукции. -2010. № 6. - С.17-18,

19. Роль системы цитокинов в патогенезе привычного выкидыша и преждевременных родов / Тетруашвили Н.К. и др. // Вестник Российск. ассоц. акуш.-гин. 1999. - № 3. - С.37-45.

20. Сельков, С.А. Иммунология репродукции: старые догмы и новые представления / Сельков С.А., Павлов О.В. // Журнал акушерства и женских болезней. 2004. - № 1. - С.89-97.

21. Сидельникова, В.М. Угрожающие преждевременные роды тактика ведения / Сидельникова В.М. // Акушерство и гинекология. - 2006. -N 4.-С.66-68.

22. Сидельникова, В.М. Гемостаз и беременность / Сидельникова В.М., Кирющенков П.А. М.: Триада-Х , 2004.

23. Сидельникова, В.М. Невынашивание беременности: современный взгляд на проблему / Сидельникова В.М. // Акушерство и гинекология. 2007. - № 5. - С.24-27.

24. Сидельникова, В.М. Привычная потеря беременности / Сидельникова В.М. М.:Триада-Х, 2005. - 304 с.

25. Симбирдев, A.C. Цитокины: классификация и биологические функции / Симбирцев A.C. // Цитокины и воспаление. 2004. - Т.З, № 2. - С.16-22.

26. Симбирцев, A.C. ИЛ-2 и рецепторный комплекс ИЛ-2 в регуляции иммунитета / Симбирцев A.C. // Иммунология. 1998. - № 6. - С.3-8.

27. Симбирцев, A.C. Функциональный полиморфизм генов регуляторных молекул воспаления / Симбирцев A.C., Громова А.Ю. // Цитокины и воспаление. 2005. - № 1. - С.67-71.

28. Симбирцев, A.C. Цитокины новая система регуляции защитных реакций организма / Симбирцев A.C. // Цитокины и воспаление. -2002. - Т. 1, № 1. -С.9-16

29. Ситникова, В.А. Основы клинической цитокинотерапии: учебное пособие / Ситникова В.А.; ред. С.Н. Стяжкина. Ижевск, 1998. - 68 с.

30. Современные вопросы патогенеза и терапии невынашивания беременности / Старостина Т.А. и др. // Акушерство и гинекология. -2002. -№ 5. С.59-61.

31. Соколов, Д.И. Иммунологический контроль формирования сосудистой сети плаценты / Соколов Д.И., Сельков С.А.; ред. Айламазян Э.К. -СПб.: Изд-во Н-Л, 2012. 208 с.

32. Степаничев, М.Ю. Цитокины как нейромодуляторы в центральной нервной системе / Степаничев М.Ю. // Биохимия. 2005. - № 1. — С.5-11.

33. Сухих, Г.Т. Иммунные механизмы в физиологии и патологии беременности / Сухих Г.Т., Ванько JI.B. // Иммунология. 2005. - № 2. -С.103-108.

34. Сухих, Г.Т. Иммунология беременности / Сухих Г.Т., Ванько JI.B. -М., 2003.

35. Тетруашвили, Н.К. Диагностическая и прогностическая значимость определения цитокинов у больных с привычным невынашиванием беременности: автореф. дис. . канд. мед.наук / Тетруашвили Н.К. -М., 2000.-22 с.

36. Хаитов, P.M. Предназначение иммунной системы: выполнение физиологических функций, обеспечивающих генетическое постоянство внутренней среды организма / Хаитов P.M., Алексеев Л.П. // Физиология и патология иммунной системы. 2004. - Т.8, № 8. -С.3-14.

37. Черепанова, H.A. Клиническое значение уровней регуляторных аутоантител для оценки риска развития гестоза: дис. канд. мед.наук / Черепанова H.A. Казань, 2008. - 218 с.

38. Черний, В.И. Нарушения иммунитета при критических состояниях: особенности диагностики / Черний В.И. // Справочник специалиста. -2008.-№ 12(248).

39. Ширшев, C.B. Механизмы иммунноэндокринного контроля процессов репродукции: в 2- х. т. / Ширшев C.B. Екатеринбург: УрО РАН, 2002.

40. Ярилин, A.A. Система цитокииов и принципы ее функционирования в норме и при патологии / Ярилин A.A. // Иммунология. —1997. — № 5. -С.7-14.

41. A class I antigen, HLA-G, expressed in human trophoblasts / Kovats S. et al. //Science. 1990. - Vol.248. - P.220-223.

42. A correlation of pregnancy term, disease activity, serum female hormones, and cytokines in uveitis / Chan C. et al. // Brit. J. Ophthal. 2004. -Vol.88.-P.1506-1509.

43. A randomized prospective assessor-blind evaluation of luteinizing hormone dosage and in vitro fertilization outcome / Gordon U.D. et al. // Fertil. Steril. 2001. - Vol.75. -P.324-331.

44. A subset of CD 5 6+ large granular lymphocytes in first-trimester human decidua are proliferating cells / Kammerer U. et al. // Fertil. Steril. 1998. -Vol.71.-P.74-79.

45. Accumulation of CRTH2-positive T-helper 2 and T-cytotoxic 2 cells at implantation sites of human decidua in a prostaglandin D2-mediated manner / Michimata T. et al. // Mol. Hum. Reprod. 2002. - Vol.8, N 2. - P. 181187.

46. Achache, H. Endometrium receptivity markers, the journey to successful embryo implantation / Achache H., Revel A. // Hum. Reprod. Update. -2006. Vol. 12, N 6. - P.731-746.

47. Acosta, A.A. Endometrial dating and determination of the window of implantation in healthy fertile women / Acosta A.A. // Fertility Sterility. -2000.-Vol.73.-P.788-798.

48. Actions of the chemotactic cytokines MCP-1, MCP-2, MCP-3, RANTES, • MlP-la and MIP-lp on human monocytes / Uguccioni M. et al. //

49. European J. Immunol. —1995. Vol.25, N 1. -P.64-68.

50. Adashi, E.Y. The potential relevance of cytokines to ovarian physiology: the emerging role of resident ovarian cells of the white blood cell series / Adashi E.Y. // Endocrine Reviews August. 1990. - Vol.11, N 3. - P.454-464.

51. Aggarwal, B. Tumor necrosis factor: structure, function and mechanism of action / Aggarwal B., Vilcek J. Marcel, 1992. - 624 p.

52. Aggarwal, B.B. Cytokines: from clone to clinic / Aggarwal B.B., Pocsic E. // Arch. Biochem. Biophysics. 1992. - Vol.292, № 2. - P.335-359.

53. An increase in the absolute count of CD56CD16+CD69+ NK cells in the peripheral blood is associated with a poorer IVF treatment and pregnancy outcome / Thum M.Y. et al. // Hum. Reprod. 2004. - Vol.19, N 10. -P.2395-2400.

54. Analysis of cytokine regulators inducing interferon production by mouse uterine natural killer cells / Zhang J. et al. // Biol. Reprod. 2003. -Vol.69.-P.404-411.

55. Anticardiolipin antibodies in women with unexplained infertility / Radojcic L. et al. //Physiol. Res. -2004. Vol.53, N 1. -P.91-96.

56. Antigen-presenting cells in human endometrium during the menstrual cycle compared to early pregnancy / Rieger L. et al. // J. Immunol. 2008. -Vol.180.-P.3661-3669.

57. Arici, A. Endocrine-immune interaction in human endometrium / Arici A., Guzeloglu-Kyisli O., Kayisli U.A. / /Ann. N. Y. Acad. Sci. 2004. -Vol.1034. -P.50-63.

58. Athannassiades, A. Role of placenta growth factor (PLGF) in human extravillious trophoblast proliferation, migration and invasiveness / Athannassiades A., Lala P.K. // Placenta. 1998. - Vol.19, N 7. - P.465-473.

59. Bazan, J.F. A new class of membrane-bound chemokine with a CX3C motif / Bazan J.F., Bacon K.B. // Nature. 1997. —Vol.385. - P.640-644.

60. Becker, S. Three-dimentional structure of the Stat3b homodimer bound to DNA / Becker S., Groner B., Muller C.W. // Nature. 1998. - Vol.394. -P.145-151.

61. Beer, A.E. Reproductive medicine program / Beer A.E., Kwark J.Y. // Finch University of Health Science Chicago Medical School. Chicago, 2000

62. Benyo, D. F. Tumor necrosis factor-alpha alters bovine luteal cell synthetic capacity and viability / Benyo D. F., Pate J. L. // Endocrinology. 1992. -Vol.130, N 2. -P.854-860.

63. Bergh, P.A. Ovarian hyperstimulation syndrome in novel reproductive technologies: prevention and treatment / Bergh P.A., Navot D., LauferN. // Fertility Sterility. 1992. - Vol.58, N 2. - P.249-261.

64. Blastocyst-endometrium interaction: intertwining a cytokine network / Bueno-Sanchez J.C. et al. // Braz. J. Med. Biol. Res. 2006. - Vol.3639, N 11. - P.1373-1385.

65. Bona, C. Textbook of immunology / Bona C., Bonilla F. 2-nd ed. -Amsterdam: Harwood Acad. Publ, 1996. - 406 p.

66. Bornstein, S.R. Cytokines and steroidogenesis / Bornstein S.R., Rutkowski H., Vrezas I. // Mol. Cell. Endocrinol. 2004. - Vol.215, N 1-2. - P.135-141.

67. Bouman, A. Sex hormones and the immune response in humans / Bouman A., Heineman M.J., Faas M.M. // Hum. Reprod. 2005. - Vol.11, N 4.-P.411-442.

68. Brannstrom, M. Involvement of leukocytes and cytokines in the ovulatory process and corpus luteum function / Brannstrom M., Norman R.J. // Hum. Reprod. 1993.-Vol.8, N 10.-P.1762-1775.

69. Buculmez, O. Leukocytes in ovarian function / Buculmez O., Arici A. // Hum. Reprod. 2000. - Vol.6. - P. 1-15.

70. Bulmer, J.N. Immunohistochemical characterization of stromal leucocytes in nonpregnant human endometrium / Bulmer J.N., Lunny D.P., Hagin S.V. // Am. J. Reprod. Immunol. Microbiol. 1988. - Vol.17. - P.83-90.

71. Buhner, J.N. Leucocytes and resident blood cells in endometrium / Bulmer J.N., Longfellow M., Riston A. // Ann. N.Y. Acad. Sci. —1991. Vol.622. -P.57-68.

72. Casart, Y. Serum levels of interleukin-6, interleukin-lbeta and human chorionic gonadotropin in pre-eclamptic and normal pregnancy / Casart Y., Tarrazzi K., Camejo M. // Gynec. Endocr. 2007. - Vol.23, N 5. - P.300-320.

73. CD3-leukocytes present in the human uterus during early placentation: phenotypic and morphologic characterization of the CD5611 population / King A. etal.// Dev. Immunol. 1991. -Vol.1. -P. 169-190.

74. Cell populations in the human early pregnancy decidua: natural killer activity and response to interleukin-2 of CD56-positive large granular lymphocytes / Ferry B.L. et al. // Immunology. 1990. - Vol.70. - P.446-452.

75. Cellular localization of luteinizing hormone receptor immunoreactivity in the ovaries of immature, gonadotropin-primed and normal cycling rats / Bukovsky A. et al. // Biol. Reprod. 1993. - Vol.48. - P.1367-1382.

76. Changes in macrophage colony-stimulating factor concentration in serum and follicular fluid in in-vitro fertilization and embryo transfer cycles / Nishimura K. et al. // Fertil. Steril. 1998. - Vol.69, N. 1. - P.53-57.

77. Characterization of ovarian function in granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-deficient mice / Jasper M.J. et al. // Biol. Reprod. -2000. Vol.62, N 3. -P.704-713

78. Cytokines in the follicular fluid of stimulated and non-stimulated human ovaries; is ovulation a suppressed inflammatory reaction? / Büscher U. et al. //Hum. Reprod. 1999. - Vol.14, N 1. - P. 162-166.

79. Choudhury, S.R. Human reproductive failure I: Immunological factors / Choudhury S.R., Knapp L.A. // Hum. Reprod. Update. 2000. - Vol.7, N 2. — P.l 13-134.

80. Ciocca, D.R. Estrogen receptors in human nontarget tissues: biological and clinical implications / Ciocca D.R., Roig L.M. // Endocr. Rev. 1995. -Vol.16.-P.35-62.

81. Collins, J.A. Unexplained infertility: a review of diagnosis, prognosis, treatment and management / Collins J.A., Crosignani P.G. // Int. J. Gynaecol. Obstet. 1992. - Vol.39, N 4. - P.267-275.

82. Coulam, C. Understanding The Immunobiology of Pregnancy and applying it to treatment of recurrent pregnancy loss. Early pregnancy / Coulam C. // Biol. Med. 2000. - Vol.4, N 1. - P. 19-29.

83. Cytokine and hormonal profile in serum samples of patients undergoing controlled ovarian stimulation: interleukin-lp predicts ongoing pregnancy / Bonetti T.C.S. et al. // Hum. Reprod. 2010. - Vol.25, N 8. - P.2101-2106.

84. Cytokine production by maternal lymphocytes during normal human pregnancy and in unexplained recurrent spontaneous abortion / Raghupathy R. et al. // Hum. Reprod. 2000. - Vol.15, N 3. - P.713-718.

85. Cytokine Reference / eds. J.Oppenheim, M. Feldman. London: Academic Press, 2000.-2015 p.

86. Cytokines: coordinators of immune and inflammatory responses / Arai K. et al. // Annu. Rev. Biochem. 1990. - Vol.59. - P.783.

87. Day 3 serum inhibin-B is predictive of assisted reproductive technologies outcome / Seifer D. B. et al. // Fertil. Steril. 1997. - Vol.67, N 1. -P.110-114.

88. Decidual natural killer cells: key regulators of placental development / Croy A. et al. // J. Reprod. Immun. 2002. - Vol.57, N 1-2. - P. 151.

89. Decidual NK cells regulate key developmental processes at the human fetal-maternal interface / Hanna J. et al. // Nature Medicine. 2006. - Vol. 12. -P.1065-1074.

90. Defective production of both leukemia inhibitory factor and type 2 T-helper cytokines by decidual T cells in unexplained recurrent abortions / Piccinni M.P. et al. //Nat. Med. 1998. - Vol.4. -P.1020-1024.

91. Dendritic cells: from ontogenetic orphans to myelomonocytic descendants / Peters J. H. et al. // Immunology today. 1996. - Vol.17. - P.273-278.

92. Derynck, R. Smad-dependent and Smad-independent pathways in TGF-b family signaling / Derynck R., Zhang Y. E. // Nature. 2003. —Vol.425. -P.577-584.

93. Detection of implantation-related cytokines in cervicovaginal secretions and peripheral blood of fertile women during ovulatory menstrual cycles / Gargiulo A.R. et al. // Fertil. Steril. 2004. - Vol.82. - P. 1226-1234.

94. Differences in apoptotic susceptibility of cytotrophoblasts and syncytiotrophoblasts in normal pregnancy to those complicated withpreeclampsia and intrauterine growth restriction / Crocker I. et al. I I Am. J. Pathol. 2003. - Vol.162, N 2. - P.637-643.

95. Dinarello, C. The IL-1 family and inflammatory diseases / Dinarello C. // Clin. Exp. Rheumatol. 2002. - Vol.20, N 1. - P. 170-177.

96. Dorner, B.G. Coordinate Expression of Cytokines and Chemokines by NK Cells during Murine Cytomegalovirus Infection / Dorner B.G., Smith H.R. // J. Immunol. 2004. - Vol.172. - P.3119-3131.

97. Early human decidual cells exhibit NK cell activity against K562 cell line but not against first trimester trophoblast / King A. et al. // Cell Immunol. 1989.-Vol.118.-P.337-344.

98. Effect of macrophages on proliferation of granulosa cells in the ovary in rats / Fukumatsu et al. // J. Reprod. Fertil. 1992. - Vol.96. - P.241-249.

99. Effects of IL-1 beta on RT1-ART1-DM at the maternal-fetal interface during pregnancy in rats / Xia H. et al. // Front Biosci. 2006. - Vol.11. -P.2868-2875.

100. Elenkov, I. IL-12, TNF-a and Hormonal Changes during Late Pregnancy and Early Postpartum: Implications for Autoimmune Disease Activity during These Times / Elenkov I., Wilder R., Bakalov V. // J. Clin. Endocr. -2001.-Vol.86,N 10.-P.4933-4938.

101. Elevated level of follicular fluid vascular endothelial growth factor is a marker of diminished pregnancy potential / Fridman C.I. et al. // Fertil. Steril. 1998. - Vol.70. - P.836-839.

102. Elevated ovarian follicular fluid stem cell factor concentrations are associated with improved pregnancy rates in in-vitro fertilization cycles / Smikle C.B. et al. // Fértil. Steril. 1998. - Vol.69, N 1. - P.70-72.

103. Endothelial cell heterogeneity in venules of mouse airways induced by polarized inflammatory stimulus / Murphy T.J. et al. // Am. J. Pathol. -1999.-Vol.155.-P.93-103.

104. Erythropoietin, granulocyte-colony stimulating factor, interleukin-lß and interleukin-6 during the normal menstrual cycle / Makinoda S. et al. // Int. J. Gynaecol. Obstet. 1996. - Vol.55. - P.265-271.

105. Espey, L.L. Current status of the hypothesis that mammalian ovulation is comparable to an inflammatory reaction / Espey L.L. // Biol. Reprod. -1994. Vol.50.-P.233-238.

106. Evaluation of Iwo doses of recombinant luteinizing hormone supplementation in an unselected group of women undergoing follicular stimulation for in vitro fertilization / Lisi F. et al. // Fértil. Steril. 2005. -Vol.83.-P.309-315.

107. Evidence that granulosa cells inhibit IL-1 and IL-2 production from follicular lymphomonocytes / Maccio A. et al. // Assist. Reprod. Genet. -1993.-Vol.10.-P.517-522.

108. Expression of intracellular Thl and Th2 cytokines in women with recurrent spontaneous abortion, implantation failures after IVF/ET or normal pregnancy / Ng S.C. et al. . // Am. J. Reprod. Immunol. 2002. - Vol.48. — P.77-86.

109. Ferrara, N. Vascular endothelial growth factor and the regulation of angiogenesis / Ferrara N. // Recent Progress in Hormone Research. 2000. -Vol.55.-P.15-35.

110. Fisher, S.J. Implantation and the survival of early pregnancy / Fisher S.J., Norwittz M.D., Schust D.S. // N. Engl. J. Med. 2001. - Vol.345. - P. 14001408.

111. Follicular fluid concentrations of IL-12 and IL-8 in IVF cycles / Gazvani M.R. et al. // Fertil. Steril. 2000. - Vol.74. - P.953-958.

112. Follicular fluid markers of oocyte developmental potential / Mendoza C. et al. // Hum. Reprod. 2002. - Vol. 17, N 4. - P. 1017-1022.

113. Fried, G. Increase in transforming growth factor betal in ovarian follicular fluid following ovarian stimulation and in-vitro fertilization correlates to pregnancy / Fried G., Wramsby H. // Hum. Reprod. 1998. - Vol.13, N 3. -P.656-659.

114. Gannon, BJ. Endometrial perfusion across the normal human menstrual cycle assessed by laser Doppler fluxmetry / Gannon B J. // Hum. Reprod. -1997.-Vol.12, N1.-P.132-139.

115. Gleicher, N. The reproductive autoimmune failure syndrome / GleicherN., el-Roeijy A. // Am. J. Obstet. Gynaecol. 1988. - Vol.159, N 1. - P.223-227.

116. Gleicher, N. Unexplained infertility: does really exist? / GleicherN., Barad D. // Hum. Reprod. 2006. - Vol.21, N 8. - P.1951-1955.

117. Goldman-Wohlh, D.S. Tie-2 and angiopoetine -2 expression at the fetal-maternal interface: a receptor ligand model for vascular remodelling / Goldman-Wohlh D.S., Ariel I. // Hum. Reprod. 2000. - Vol.6, N 1. -P.81-87.

118. Granulated lymphocytes in human endometrium: histochemical and immunohistochemical studies / Bulmer J.N. et al. // Hum. Reprod. — 1991. Vol.6.-P.791-798.

119. Harrison, J.K. Chemokines and their receptors in neurobiology: perspectives in physiology and homeostasis Original Research Article / Harrison J.K., Bacon K.B. // J. Neuroimmunology. 2000. —Vol.104. - P.92-97.

120. Hedrick, J.A. Cutting Edge: The Chemokine Receptor CCR8 Is Preferentially Expressed in Th2 But Not Thl Cells / Hedrick J.A., Stoppacciaro A. //J. Immunol. 1998. - Vol.161. -P.547-551.

121. Hiller, S. Androgen and Follicle-Stimulating Hormone Interactions in Primate Ovarian Follicle Development / Hiller S. // J. Clin. Endocrinol. Metabolism. 1999. - Vol.84, N 8. -P.2951-2956.

122. Ho, P.C. Lymphocytes subsets in patients with oestrogen deficiency / Ho P.C., Tang G.W., Lawton J.W.M. // J. Reprod. Immunol. 1991. -Vol.20.-P.85-91.

123. Hogg, N. Structure and function of adhesion receptors in leukocyte trafficking / Hogg N., Berlin C. // Immunol. Today. 1995. - Vol.16, N 7. -P.327-330.

124. Hormonal and embryonic regulation of chemokines IL-8, MCP-1 and RANTES in the human endometrium during the window of implantation / Caballero-Campo P. et al. // Mol. Hum. Reprod. 2002. - Vol.8. - P.375-384.

125. Human follicular fluids contain tissue makrophages / Loukides J.A. et al. //J. Clin. Endocrinol. Met. 1990. - Vol.71. -P.1363-1367.

126. Human luteal cells express leukocyte functional antigen (LFA)-3 / Hattori N. et al. // J. Clin. Endocrino.l Metab. 1995. - Vol.80. - P.78-84.

127. Human placental cytotrophoblasts produce the immunosuppressive cytokine interleukin 10 / Roth I. et al. // J. Exp. Med. 1996. - Vol.184. - P.539-548.

128. Hunt, J. Encyclopedia of reproduction / Hunt J., Johnson P. // Immunology Reprod. 1999. - Vol.2. - P.798-814.

129. Hunt, J.S. Uterine leukocytes: key players in pregnancy / Hunt J.S., Petroff M.G., Burnett T.G. // Seminars Cell Develop. Biol. 2000. - Vol.11, N 2. -P.127-137.

130. IL-10 selectively induces HLA-G expression in human trophoblasts and monocytes / Moreau P. et al. // Int. Immunol. 1999. - Vol.11. - P.803-811.

131. Imai, T. Identification and Molecular Characterization of Fractalkine Receptor CX3CR1, whichMediates Both Leukocyte Migration and Adhesion / Imai T., Hieshima K. // Cell. 1997. - Vol.91. - P.521-530.

132. Immunoglobulins and cytokine level in follicular fluid in relation to etiology of infertility and their relevance to IVF outcome / Hammadeh M.E. et al. // Am. J. Reprod. Immunol. 2002. - Vol.47. - P.82-90.

133. Immunological aspects of implantation and implantation failure / Vince G.S. // Hum. Reprod. 1999. - Vol.14. - P.26-36.

134. Implantation site in normal pregnancy. A study with monoclonal antibodies / Kabawat S.E. et al. // Am. J. Pathrol. 1985. - Vol.118. - P.76-84.

135. Insulin-like growth factor-binding proteins and ovarian folliculogenesis / Monget P. et al. // Horm. Res. 1996. - Vol.45, N 3-5. - P.211-217.

136. Integrins as markers of uterine receptivity in women with primary unexplained infertility / Lessey B.A. et al. // Fértil. Steril. 1995. -Vol.63, N3.-P.535-542.

137. Intercellular adhesion molecule-1 is expressed on human granulöse cells and mediates their binding to lymphoid cells / Vigano P. et al. // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1997. - Vol.82. - P. 101-105.

138. Interleukin-10 and the interleukin-10 receptor / Moore K. et al. // Ann. Rev. Immunol. -2001. Vol.19. -P.683-765.

139. Interleukin-10 in preovulatory follicular fluid of patients undergoing in-vitro fertilization and embryo transfer / Geva E. et al. // Am. J. Reprod. Immunol. 1997. - Vol.37. - P. 187-190.

140. Interleukin-2 and ovarian hyperstimulation syndrome: a pylot study / Orvieto R. et al. // Hum. Reprod. 1995. - Vol.10. - P.24-27.

141. Interleukin-4 and interleukin-10 increase endotoxin-stimulated human umbilical vein endothelial cell interleukin-8 release / De Beaux A. et al. // J. Interferon Cytokine Res. 1995. - Vol.15. -P.441-445.

142. JAKs and STATs branch out Trends in Cell Biology / Brisce J. et al. // Cell. 1996. - Vol.6. - P.336-340.

143. Karagouni, E.E. IL-lß and IL-la may affect the implantation rate of patients undergoing in vitro fertilization-embryo transfer / Karagouni E.E., Chryssilopoulos A., Mantzavinos T. // Fértil. Steril. 1998. - Vol.70. -P.553-559.

144. Kauma, S. Cytokines in implantation / Kauma S. // J. Reprod. Fertil. 2000. - Vol.55, N 1, suppl. - P.42-54.

145. King, A. Evaluation of oestrogen and progesterone receptor expression in uterine mucosal lymphocytes / King A., Gardner L., Loke Y.W. // Hum. Reprod. 1996. - Vol. 11.- P.HI 079-1082.

146. King, A. Uterine leukocytes and decidualization / King A. // Hum. Reprod. Update. 2000. - Vol.162, N 6. - P.28-36.

147. Klentzeris, L.D. The role of endometrium in implantation / Klentzeris L.D. // Hum. Reprod. 1997. - Vol.12. - P. 10-17.

148. Kutteh, W.H. Autoimmune factors in assisted reproduction / Kutteh W.H. // Min. Gynaecol. 2002. Vol.54, N 3. -P.217-224.

149. Lala, P.K. Growth factors, proteases and protease inhibitors in maternal-fetal dialogue / Lala P.K., Hamilton G.S. // Placenta. 1996. - Vol.17. -P.545-555.

150. Leach, R.E. Intensive hormone monitoring in women with unexplained infertility: evidence for subtle abnormalities suggestive of diminished ovarian reserve / Leach R.E., Randolph J.F., Reame N.E. // Fertil. Steril. -1997. Vol.68, N 3. - P.413-420.

151. Localization and characterization of white blood cell populations within the human ovary throughout the menstrual cycle and menopause / Best C.L. et al. // Hum. Reprod. 1996. - Vol.11. - P.790-797.

152. Localization and production of human M-CSF in human placental and decidual tissues / Saito S. et al. // Lymphokine Cytokine Res. 1993. -Vol.12.-P.101-107.

153. Localization of leukocyte subsets in the follicle wall and in the corpus luteum throughout the human menstrual cycle / Brannstrom M. et al. // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 1999. - Vol.83. -P.213-217.

154. Lockwood, C.J. The decidua regulates hemostasis in human Endometrium / Lockwood C.J., Krikun G., Schatz F. // Semin. Reprod. Endocrinol. 1999. -Vol.17,N1.-P.45-51.

155. Loke, Y.W. Human implantation: Cell Biology and Immunology / Loke Y.W., King A. Cambridge: Cambridge University Press, 1995.

156. Luteal leukocytes are modulators of the steroidogenic process of human mid-luteal cells / Castro A. et al. // Hum. Reprod. 1998. - Vol.13. -P.1584-1589.

157. Luteinzing hormone activity in menotropins optimizes folliculogenesis and treatment in controlled ovarian stimulation / Filicori M. et al. // J. Clin. Endocrinol. Metab. 2001. - Vol.86, N 1. - P.337-343.

158. Machelon, V. Production of ovarian cytokines and their role in ovulation in the mammalian ovary / Machelon V., Emilie D. // Eur. Cyt. Network. -1997.- Vol.8. -P.137-143.

159. Mackay, C. R. Chemokines: What chemokine is that? / MackayC. R. 11 Current Biology. 1997. - Vol.7. - P.R384-R386.

160. Macrophage contributions to ovarian function / Wu R. et al. // Hum. Reprod. Update. 2004. - Vol.10, N 2. - P. 119-133.

161. Macrophages and angiogenesis / Sunderkotter C. et al. // J. Leukoc. Biol. -1994.- Vol.55. -P.410-422.

162. Margni, R. During pregnancy, in the context of a Th2-type cytokine profile, serum IL-6 levels might condition the quality of the synthesized antibodies / Margni R., Zenclussen A. // Am. J. Reprod. Immunol. 2001. - Vol.46, N 3. -P.181-187.

163. Massin, N. Recombinant human LH supplementation during GnRH antagonist administration in IVF/ICSI cycles: a prospective randomized study / Massin N. // Hum. Reprod. 2004. - Vol.19, N 9. - P. 1979-1984.

164. Maternal antigen presenting cells are a source of plasmatic HLA-G during pregnancy: Longitudinal study during pregnancy / Alegre J. et al. // Hum. Immunol. 2007. - Vol.68, N 8. - P.661-667.

165. Maternal serum levels of interferon-gamma and interleukin-2 soluble receptor-alpha predict the outcome of early IVF pregnancies / Fasouliotis SJ. et al. // Hum. Reprod. 2004. - Vol.19, N 6. - P.1357-1363.

166. MCP-1 expression in human preovulatory follicles and ovarian cells / Arici A. et al. //J. Reprod. Immunol. 1997. - Vol.26. -P.201-210.

167. Medzhitov, R. Innate immunity: minireview the virtues of a nonclonal system of recognition / Medzhitov R., Janeway C.A. // Cell. 1997. -Vol.91.-P.295-298.

168. Mehta, R.H. Growth of human preimplantation embryos in vitro / MehtaR.H. //Reprod. Biomed. Online. -2001. Vol.2, N2. -P.l 13-119.

169. Merviel, P. Rôle de l'endomètre dans l'implantation embryonnaire humaine / Merviel P. // Contraception, fertilité, sexualité. —1998. Vol.26, N 11. -P.751-760.

170. Messinis, I.E. Ovulation induction: a mini review / Messinis I.E // Hum. Reprod. 2005. - Vol.20. - P.2688-2697.

171. Miyaura, H. Direct and indirect inhibition of Thl development by progesterone and glucocorticoids / Miyaura H., Iwata M. // J. Immunol. -2002.-Vol.168.-P.1087-1094.

172. Mola, L.J.R. Elevated IL-6 level in the ovarian hyperstimulation syndrome: ovarian immunohistochemical localization of IL-6 signal / Loret de Mola J.R., Flores J.P., Baumgardner G. // Obstet. Gynecol. 1996. - Vol.87. -P.581-587.

173. Molecular cues to implantation / Dey S.K. et al. // Endocrin. Rev. 2004. - Vol.25, N3.-P.341-373.

174. Monocytes are progressively activated in the circulation of pregnant women / Luppi P. et al. // J. Leukocyte Biol. 2002. - Vol.72. - P.874-884.

175. Mor, G. Role of the Fas Fas ligand system in female reproductive organs: survival and apoptosis / Mor G., Staszewski S., KamsteegM. // Biochem. Pharmacol. 2002. - Vol.64, N 9. - P. 1305-1315.

176. Mori, T. Immuno-endocrinology of cyclic ovarian function / Mori T. // Am. J. Reprod. Immunol. 1990. - Vol.23. - P.80-89.

177. Moser, B. Lymphocyte traffic control by chemokines / Moser B, Loetscher P. // Nat. Immunol. 2001. - Vol.2, N 2. - P. 123-128.

178. Motro, B. Pattern of interleukin 6 gene expression in vivo suggests a role for this cytokine in angiogenesis / Motro B. // PNAS. 1990. - Vol.87, N 8. -P.3092-3096.

179. Mouzon, J. Assisted reproductive technology in Europe, 2007: results generated from European registers by ESHRE / Mouzon J. // Hum. Reprod. 2012. - Vol.27, N 4. - P.954-966.

180. Muehlhoefer, A. Fractalkine Is an Epithelial and Endothelial Cell-Derived Chemoattractant for Intraepithelial Lymphocytes in the Small Intestinal Mucosa / Muehlhoefer A., Saubermann L.J. // J. Immunology. 2000. -Vol.164.-P.3368-3376.

181. Miiller, S. Serial triggering of many T-cell receptors by a few peptide-MHC complexes /Miiller S., CellaM. //Nature. 1995. - Vol.375. -P.148-151.

182. Myatt, L. Placental physiology / Myatt L. // The physiologic basis of gynecology and obstetrics. Philadelphia: Williams Wilkins, 2001. -P.374-394.

183. Netea, M.G. From the Thl/Th2 Paradigm towards a Toll-Like Receptor/T-Helper Bias / Netea M.G., Jos W. M., Van der Meer // Antimicrob. Agents Chemother. 2005. - Vol.49, N 10. - P.3991-3996.

184. Network of cytokines, integrins and hormones in human trophoblast cells / Das C. et al. // J. Reprod. Immunol. 2001. - Vol.53. - P.257-268.

185. Nicola, N.A. Guidebook to Cytokines and their Receptors / N.A. Nicola. -Oxford: University Press, 1994. 284 p.

186. Norman, R.J. Cytokines in the ovary: pathophysiology and potential for pharmacological intervention / Norman R.J., Brannstrom M. // Pharmacol. Ther. 1996. - Vol.69. -P.219-227.

187. Obermair, A. Vascular endothelial growth factor serum levels in pregnancy and preeclampsia / Obermair A. // Acta Obstetricia et Gynecologica Scandinavica. 2000. - Vol.79, No. 1. - P.77-78.

188. Papadopoulos, E.J. Fractalkine, a CX3G chemokine, is expressed by dendritic cells and is up-regulated upon dendritic cell maturation / Papadopoulos E.J., Sassetti C., Saeki H. // European J. Immunol. 1999. -Vol.29.-P.2551-2559.

189. Pate, J.L. Immune cells in the corpus luteum: friends or foes? / Pate J.L., Landis Keyes P. //Reproduction. 2001. - Vol.122. -P.665-676.

190. Pelletier, A.J. Presentation of chemokine SDF-la by fibronectin mediates directed migration of T cells / Pelletier A.J., Luc J. W., van der Laan // Blood. 2000. - Vol.96, N 8. - P.2682-2690.

191. Phenotypic and functional cellular differences between human CD56 decidual and peripheral blood leukocytes / Deniz G. et al. // J. Immunol. -1994. Vol. 152. - P.4255-4261.

192. Phenotypic characterization of macrophages in human term placenta / Mues B. et al. I I Immunology. 1989. - Vol.67. - P.303-307.

193. Picker, L.J. Physiological and Molecular Mechanisms of Lymphocyte Homing / Picker L.J., Butche E.C. // Annual Review of Immunology. -1992.-Vol.10.-P.561-591.

194. Plachot, M. Chromosome methylation patterns during mammalian preimplantation development / Plachot M. // Genes Dev. 1998. - Vol.12. -P.2108-2113.

195. Poropatich, C. Polymorphonuclear leukocytes in the endometrium during the normal menstrual cycle / Poropatich C., Rojas M., Silverberg S.G. // Int. J. Gynecol. Pathol. 1987. - Vol.6. -P.230-234.

196. Porter, T.F. Evidence-based care of recurrent miscarriage / Porter T.F., Svott J.R. // Best Practice Research Clinical Obstetrics Gynaecology. -2005.-Vol.19.-P.85-101.

197. Profile of cytokine mRNA expression in peri-implantation human endometrium / Lim K.J. et al. // Mol. Hum. Reprod. 1998. - Vol.4. -P.77-81.

198. Progesterone favors the development of human T helper cells producing Th2-type cytokines and promotes both IL-4 production and membrane CD30 expression in established Thl cell clones / Piccinni M.P. et al. // J. Immunol. 1995.-Vol.155.-P.128-133.

199. Putowski, L. The immunological profile of infertility women with after repeated IVF failures (preliminary study) / Putowski L., Darmochwal-Kolarz D., Oleszczuk J. // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 2004. — Vol.112, N 2. - P.192-196.

200. Raghupathy, R. Thl-type immunity is incompatible with successful pregnancy / Raghupathy R. // Immunol. Today. 1997. - Vol.18. - P.478-482.

201. Ravindranath, N. Vascular endothelial growth factor messenger ribonucleic acid expression in the primate ovary / Ravindranath N. // Endocrinology. — 1992. Vol. 131, N 1. - P.254-260.

202. Regulation of embryonic implantation / Bielfeld P. et al. // Eur. J. Obstet. Gynaecol. Reprod. Biol. 2003. - Vol.110, suppl.l. - P.2-9.

203. Relationship between cytokine concentration in serum and preovulatory follicular fluid and in vitro fertilization/intracytoplasmic sperm injection outcome / Hammadeh M.E. et al. // Chem. Immunol. Allergy. 2005. -Vol.88.-P.80-97.

204. Relationship between TNF-a and sex steroid concentrations in the follicular fluid of women with immunological infertility / Cianci A. et al. // Hum. Reprod. 1996. - Vol. 11.- P.256-258.

205. Robertson, S.A. The role of cytokines in gestation / Robertson S.A., Seamark R.F. // Critical Reviews in Immunology. —1994. Vol.14, N 3-4. -P.23 9-292.

206. Rogers, R.A.W. Contraception: Endometrial microvascular density during the normal menstrual cycle and following exposure to long-termlevonorgestrel / Rogers R.A.W. // Hum. Reprod. 1993. - Vol.8, N 9. -P.1396-1404.

207. Role of inflammatory mediators in human endometrium during progesterone withdrawal and early pregnancy / Critchley H.O.D. et al. // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1999. - Vol.84. - P.240-248.

208. Salamonsen, L.A. Endometrial leukocytes and menstruation / Salamonsen L.A., Lathbury L.J. // Hum. Reprod. Update. 2000. - Vol.6. -P. 16-27.

209. Salmassi, A. Is granulocyte colony-stimulating factor level predictive for human IVF outcome? / Salmassi A., Schmutzler A.G. // Hum. Reprod. -2005. Vol.20, N 9. - P.2434-2440.

210. Santos, M.A. The impact of ovarian stimulation for IVF on the developing embryo / Santos M.A. // Reproduction. 2010. - Vol.139. - P.23-34.

211. Sequential expression of VEGF and its receptors in human placental villi during very early pregnancy: differences between placental vasculogenesis and angiogenesis / Demir R. et al. // Placenta. 2004. - Vol.25, N 6. -P.560-572.

212. Serta, R.T. The influence of epidermal growth factor on progesterone production by human granulosa-luteal cells in culture / Serta R.T., Seibe M.M. // Hum. Reprod. 1993. - Vol.8, N 7. - P. 1005-1010.

213. Sharma, A. Leptin, IL-10 and inflammatory markers (TNF-alpha, IL-6 and IL-8) in pre-eclamptic, normotensive pregnant and healthy non-pregnant women / Sharma A., Satyam A., Sharma J. // Am. J. Reprod. Immunol. -2007. Vol.58, N 1. - P.21-30.

214. Signaling through the hematopoietic cytokine receptors / Ihle J. et al.// Annu.Rew.Immunol. 1995. - Vol.13. -P.369-398.

215. Slaughter, R.G. Analyses of ovine corpora lutea for tumor necrosis factor mRNA and bioactivity during prostaglandin-induced luteolysis / Slaughter R.G., Ellis J.A. // Mol. Cell. Endocrinol. 1991. —Vol.81, N 1-3. -P.77-80.

216. Smith, S.K.Comparison of expression patterns for placenta growth factor, vascular endothelial growth factor (VEGF), VEGF-B and VEGF-C in the human placenta throughout gestation / Smith S.K. // J. Endocrinol. 1998. -Vol.159.-P.459-467.

217. Somigliana, E. Expression of Interleukin-10 and Its Receptor Is Up-Regulated in Early Pregnant Versus Cycling Human Endometrium / Somigliana E. // J. Clin. Endocrinol. Metabol. 2002. - Vol.87, N 12. -P.5730-5736.

218. Springer, T. A. Monocyte chemoattractant protein 1 acts as a T-lymphocyte chemoattractant / Springer T. A. // PNAS. 1994. - Vol.91, N 9. - P.3652-3656.

219. Staszewski-Chavez, S. The role of apoptosis in the regulation of trophoblast survival and differentiation during pregnancy / Staszewski-Chavez S., Abrahams V., Mor G. // Endocr. Rev. 2005. - Vol.10, N 1. -P.210-221.

220. Steroid receptor expression in uterine natural killer cells / Henderson T.A. et al. // J. Clin.Endocrinol. Metab. 2003. - Vol.88. - P.440-449.

221. Stewart, J.A. Endometrial leukocytes: expression of steroid hormone receptors / Stewart J.A., Bulmer J.N., Murdoch A.P. // J. Clin. Pathol. -1998.-Vol.51.-P.121-126.

222. Structure and functional expression of a human interleukin-8 receptor / Holmes W. et al. // Science. 1991. —Vol.253. - P.1278-1280.

223. Synthesis of T helper 2-type cytokines at the maternal-fetal interface / Lin H. et al. // J. Immunol. 1993. - Vol.151. - P.4562-4573.

224. Szekeres-Bartho, J. The suppressive effect of progesterone on lymphocyte cytotoxicity: unique progesterone sensitivity ofpregnancy lymphocytes / Szekeres-Bartho J., Hadnagy J., Pacsa A.S. // J. Reprod. Immunol. 1985. -Vol.7.-P.121-128.

225. Szekeres-Bartho, J. Immunological relationship between the mother and the fetus / Szekeres-Bartho J. // Int. Rev. Immunol. 2002. - Vol.21, N 6.1. P.471495.

226. Takaya, R. Macrophages in normal cycling human ovaries; immunohistochemical localization and characterization / Takaya R., FukayaT. //Hum. Reprod. 1997. - Vol.12, N 7. -P.1508-1512.

227. The effect of interleukin 2 and transforming growth factor32 (TGF-f32) on the proliferation and natural killer activity of decidual CD16-CD56bright natural killer cells / Saito S. [et al. // Cell Immunol. 1993. - Vol.152. -P.605-613.

228. The human blastocyst regulates endometrial epithelial apoptosis in embryonic adhesion / Galan A. et al. // Biol. Reprod. 2000. - Vol.63, N 2. -P.430-439.

229. The immunophenotype of patients with recurrent pregnancy loss / Darmochwal-Kolarz D. et al. // Eur. J. Obstet. Gynec. Reprod. Biol. -2002.-Vol.103,-P.53-57.

230. The impact of sonographic assessment of the endometrium and meticulous hormonal monitoring during natural cycles in patients with failed donor artificial insemination / Gonen Dr Y. et al. // Ultrasound Obstet. Gynecol. -1991.-Vol.1.-P.122-126.

231. The impact of the ovulatory cycle on cytokine production: evaluation of systemic, cervicovaginal and salivary compartments / Al-Harthi L. et al. // J. Interferon Cyt. Res. 2000. - Vol.20, N 8. - P.719-724.

232. The in vivo and in vitro effects of exogenous leptin on ovulation in the rat / Duggal P.S. et al. // Endocrinology. 2000. - Vol.141, N 6. - P.1971-1976.

233. The role of trombophilia and thyroid autoimmunity in unexplained infertility, implantation failure and recurrent spontaneous abortion / Bellver J. et al. // Hum. Reprod. 2008. - Vol.23, N 2. - P.278-284.

234. TNFa in the human ovary; presents in follicular fluid and effects in cell proliferation and prostaglandin production / Wang L.J. et al. // Fertil. Steril. 1992. - Vol.58. - P.934-940.

235. Tomasi, T. The discovery of secretory IgA and the mucosal immune system / Tomasi T. // Immunology Today. 1992. - Vol.13. - P.416 -421.

236. Tumor necrosis factor-alpha mediates the release of bioactive transforming growth factor-beta in murine microglial cell cultures / Chao C.C. et al.// Clin. Immunol. Immunopathol. 1995. - Vol.77, N 3. - P.358-365.

237. Two signals are necessary for cell proliferation induced by a cytokine receptor gpl30 / Fukata T. et al. // Immunity. 1996. - Vol.5. - P.449-460.

238. Unexplained sporadic and recurrent miscarrage in the new millennium: a critical analysis of immune mechanisms and treatments / Clark D.A. et al. // Hum. Reprod. Update. 2001. - Vol.7, N 5. -P.501-511.

239. Up-regulation of matrix metalloproteinase in human myometrium during labor: acytokine-mediated process in uterine smooth muscle cells / Roh C. et al. // Mol. Hum. Reprod. 2000. - Vol.6. - P.96-102.

240. Uterine spiral artery remodeling involves endothelial apoptosis induced by extravillous trophoblasts through Fas FasL interactions /.Ashton S. et al. // Arterioscler Thomb. Vase. Biol.-2005.-Vol.25, N 1.-P. 102-108.

241. Vascular endothelial growth factor, interleulin-6 and interleukin-2 in serum and follicular fluid of patients with ovarian hyperstimulation syndrome / Artini P.G. et al. // Eur. J. Obstetr. Gynecol. Rerpod. Biol. 2002. -Vol.101.-P.169-174.

242. Vuorela, P. Expression of vascular endothelial growth factor receptors 1, 2 and 3 in placentas from normal and complicated pregnancies / Vuorela P. // Mol. Hum. Reprod. -2001. Vol.7, N 2. -P.205-210.

243. Wang, N. Mechanotransduction across the cell surface and through the cytoskeleton / Wang N., Butler J.P, Ingber D.E. // Science. 1993. -Vol.260.-P.l 124-1127.

244. Yamauchi, A. The role of shared receptor motifs and common stat proteins in the generation of cytokine pleiotropy and redundancy by IL-2, IL-4, IL-7, IL-13, and IL-15 / Yamauchi A., Bloom E.T. // Immunity. 1995. - Vol.2, N4.-P.331-339.

245. Yan, Z. Tumor necrosis factor-alpha alters steroidogenesis and stimulates proliferation of human ovarian granulosal cells in vitro / Yan Z., Hunter V. // Fertil. Steril. 1993.-Vol.59, N2.-P.332-338.f

246. Yoshida, T. Molecular cloning of a novel C or 7/type chemokine, SCM-1 / Yoshida T., Imai T., Kakizaki M. // FEBS Letters. 1995. - Vol.360. -P.155-159.

247. Zenclussen, A. Questioning the Thl/Th2 paradigm in reproduction: peripheral levels of IL-12 are down-regulated in miscarriage patients / Zenclussen A., Fest S., Busse P. // Am. J. Reprod. Immunol. 2002. -Vol.4. -P.245-251.