Автореферат и диссертация по медицине (14.00.23) на тему:Закономерности нейродистрофического процесса в тонкой кишке при ваготомии

?Г8 ОД

На правах рукописи

1 ч СЕН 1939

УДК 616.3-009:612.43/45 ЦИБУЛЕВСКИЙ Александр Юрьевич

ЗАКОНОМЕРНОСТИ НЕЙРОДИСТРОФИЧЕСКОГО ПРОЦЕССА В ТОННОЙ КИШКЕ ПРИ ВАГОТОМИИ

14.00.23 - Гистология, цитология, эмбриология 14.00.16 - Патологическая физиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

МОСКВА, 1999 г.

Работа выполнена в Российском государственном медицинском университете.

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор

Т.КДубовая АЛ.Эттингер

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор, член-корр.РАМН доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор

ВАЛИахламов С.Г.Мамонтов А.Б.Демуров

Ведущая организация - НИИ биологии развития РАН

Защита диссертации состоятся «............».....................................1999 г. в........... час на заседании диссертационного совета при Российском государственном медицинском университете (117437, Москва, ул. Островитянова, 1, РГМУ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Российского государственного медицинского университета.

Автореферат разослан «.....................»_________________________________ 1999 г.

Ученый секретарь л. / л г

И Ь У I Й

диссертационного совета | ■ '

доктор медицинских наук, профессор А-ШЦеголсв

У о

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Проблема нервнотрофического контроля внутренних органов и нервной регуляции вегетативных функций была и остается одной из актуальных проблем теоретической и практической медицины (Т.А.Григорьева, 1959, Э.Гутман, 1962, А.Ф.Никифоров, 1973, Н.Н.Зайко, 1974, О.В.Волкова, 1978, И.П.Терещенко, 1980, К.ПБалицкий и соавт., 1983, Ю.К.Елецкий, 1984, Г.Н.Крыжановекий, 1989, 11.УессЫот, А.Тайапш, 1960, кОиШ, 1968, ХОНуег, 1974). Интерес к этой проблеме за последнее время существенно возрос в связи с появлением новых данных о роли нервной системы в регуляции трофшш органов и тканей, их физиологической и репа-ративной регенерации, а также обеспечении адекватной реакции на различные экзогенные воздействия (Я.ИАяоша, 1990, Т.К.Дубовая, 1991,1994, Н.ШНеренешева и соавт., 1993, И.Г.Акмаев, 1997, Н.Шоу, 1996, МГ-КШап, 1997,.Шооке, 1998). Усилению внимания к рассматриваемой проблеме также способствует факт достаточно широкого распространения органосохраняющих операций, сопряженных с перерезкой нервных проводников, которые применяются для хирургического лечения язвенной болезни двенадцатиперстной кишки, тромбоза брыжеечных артерий, послеоперационного пареза кишечника, а также успехи в пересадке внутренних органов (В.С.Маят и соавт., 1975, В.С.Савельев, И.В.Спиридопов, 1979, Ю.М.Панцырев, А.А.Гринберг, 1979, И.Д.Кирпатовский, А.И.Лысенко, 1988, В.В.Иванов, 1992, ААКурыгин и соавт., 1997, М.Уаи е! аЦ 1994, НИоея, А.А1езяапс1го, 1995, Т.ИеЬа, 1997, ТЛеск, 1997). В этом контексте заслуживают внимание результаты лечения дуоденальных язв с помощью операций, включающих пересечение блуждающих нервов или их ветвей. Несмотря на то, что в связи со значительными достижениями в области фармакотерапии язвенной болезни двенадцатиперстной кишки количество плановых операций заметно уменьшилось, не отмечается сколько-нибудь существенного снижения числа осложненных форм данного заболевания, требующих неотложных хирургических вмешательств. Это прежде всего относится к дуоденальным язвам, отягощенных перфорацией и кровотечением. Именно для оперативного лечения данных патологических состояний в ряде случаев наиболее эффективными оказались операции, сопряженные с вагото-

3

мией, в том числе, стволовой (см. материалы У111 Всероссийского съезда хирургов, 1995). За последние годы они находят все более широкое применение в связи с прогрессом лапароскопической техники (А.С.Балалыкин и соавт., 1995, Н.Н.Милица, 1996, В.Д.Федоров и соавт., 1997, J.Chen et aL, 1996, PPalma et al, 1997, LAvtan et al., 1997, L.Lepre et al., 1998, J.Ng, 1998). Вместе с тем представляется очевидным, что при такого рода хирургических вмешательствах неизбежно страдает иннервация обширного региона, включающего желудок, тонкую и часть толстой кишки, печень и поджелудочную железу. С их дисфункцией связывают развитие ряда хронических послеоперационных осложнений, в первую очередь, демпинг-синдрома, диареи, гипогликеми-ческого синдрома и хронического панкреатита (В.С.Помелов, 1984, А.А.Курыгин, В.В.Румянцев, 1992, В.М.Трофимов, А.А. Курыгин, 1995, EStorer, 1976, S.Whip, 1978, L.Turberg, 1979, Y.Yamashita et al., 1997). Есть основания полагать, что в патогенезе этих осложнений важную роль кгракгг нарушения морфофункционального состояния тонкой кишки, поскольку последняя, как известно, занимает ключевое положение в системе пищеварения и поддержания гоыеостаза (АД.Синещеков, 1962, А.АФишер и соавт., 1988, АЛГорбашко, 1992, В.К.Зуев, 1993, P.Kiely, 1968, KRowland, 1978, M.Piauth, 1998). Однако патогенетические механизмы нарушения структуры и функций тонкой кишки в этих условиях изучены недостаточно. Имеющиеся в литературе сведения по этому поводу фрагментарны и противоречивы. Это, в первую очередь, касается двигательной функции, от которой в той или иной степени зависят все основные функции органа (ВЖУспенский и соавт., 1980, Е.М.Матросова и соавт., 1981, А.В.Фролькинс, 1981, А.А.Курыгин, 1990, D.Thomson, 1982, B.Gustaffson et al., 1994, T.Gottwald et aL, 1997, W.Snape, 1998). К числу недостаточно изученных вопросов следует также отнести и некоторые аспекты состояния слизистой оболочки тонкой кишки после нарушения ее адекватной иннервации. Следствием этого является относительно ограниченный набор эффективных методов коррекции двигательных нарушений тонкой кишки в клинике.

Учитывая вышеизложенное, в настоящей работе предпринято комплексное мор-фо-физиологическое исследование состояния тонкой кишки в условиях нарушенной

4

вагусной иннервации. При этом особое внимание было уделено изучению патогенетических механизмов структурно-метаболических и функциональных перестроек органа в этих условиях, в частности, уточнению роли гипоксии, и способов их коррекции.

Цель исследования:

Изучить основные закономерности структурно-функциональной перестройки тонкой кишки после ваготомии и определить роль гипоксии в патогенезе постденер-вационпых преобразований органа.

Задачи исследования:

1) Исследовать особенности структурной организации и секреторной функции слизистой оболочки тонкой кишки в ходе развития постденервационных изменений.

2) Изучить особенности структуры, метаболизма и биоэнергетики сократительного аппарата тонкой кишки, оценить состояние моторно-эвакуаторной функции и реактивности гладких мышц в различные периоды постваготомического синдрома.

3) Исследовать особенности структуры микроциркуляторного русла, состояние терминальной гемодинамики и уровень снабжения кислородом мышечной оболочки тонкой кишки на различных этапах нейродистрофического процесса.

4) Изучить специфику ответной реакции сократительного аппарата и компонентов слизистой оболочки тощей кишки на нарушение вагусной иннервации в условиях хронической экспериментальной язвы двенадцатиперстной кишки.

5) Исследовать эффект антигипоксических препаратов на фоне ваготомии в аспекте определения роли гипоксии в патогенезе структурно-функциональных изменений тонкой кишки.

Научная новизпа работы. Благодаря проведенному исследованию удалось впервые:

- осуществить комплексный морфофункциональный и патофизиологический анализ состояния гонкой кишки в процессе развития нейродистрофического процесса, вызванного нарушением вагусной иннервации.

- установить, что преобразования структурной и функциональной организации слизистой оболочки в условиях нарушенной вагусной иннервации в целом харак-

5

теризуются волнообразной динамикой с наиболее выраженными изменениями через 7 и 30 сут; в эти периоды отмечаются нарушения ыикроциркуляции, дистрофические изменения тканей, активация местной иммунной системы, нарушение функционирования слизепродуцирузощего аппарата, проявляющееся в изменении химического профиля синтезируемой бокаловидными клетками слизи (7 сут) и явлениях гиперсекреции (30 сут).

- установить, что морфофункциональная перестройка сократительного аппарата кишки в этих условиях характеризуется сходной по сравнению со слизистой оболочкой динамикой; при этом структурные преобразования проявляются в увеличении толщины мышечной оболочки (главным образом, за счет увеличения объема межклеточного пространства) и развитии в ней дистрофических процессов, функциональные - нарушении функционирования водителя ритма кишечной пе-

■ ристальтики, снижении тонуса гладкой мускулатуры, ослаблении сократительной активности, явлениях дискинезии.

- продемонстрировать, что в определенные фазы постваготомического синдрома расстройства двигательной функции тонкой кишки коррелируют с нарушениями структуры, метаболизма и функции (в частности, слизеобразования) слизистой оболочки; в основе этого, предположительно, лежит ухудшение кровоснабжения слизистой оболочки вследствие нарушения кровотока по прямым артериям и их ветвям, проходящим через мышечную оболочку.

- показать, что при ваготомии изменяются реактивные свойства мышечного аппарата кишки, в частности, искажается характер ответной реакции мышечной ткани на фармакологическую стимуляцию синтетическим аналогом ацетилхолина -ацеклидином.

- провести комплексное морфо-физиологическое исследование состояния кровообращения в тонкой кишке и кислородного снабжения ее тканей при ваготомии, установить циркуляторную природу развивающейся в этих условиях гипоксии, а также показать, что наиболее выраженные нарушения кислородного баланса наблюдаются через 7 и 30 сут после операции.

6

- показать, что выключение вагуской иннервации тонкой кишки сопровождается активацией перекисного окисления липидов (ПОЛ) в ее мышечной оболочке и выраженными расстройствами биоэнергетики и метаболизма гладких миоцитов, что является важным звеном в механизмах нарушения моторно-эвакуаторной деятельности.

- усовершенствовать экспериментальную модель для изучения последствий ваго-томии у крыс с хронической дуоденальной язвой таким образом, что она максимально соответствует клинической ситуации; в частности, в предложенном нами варианте модели ваготомия оказывает положительный эффект на течение язвенного процесса, а в основе этого эффекта лежит подавление желудочной кислото-продукции и нормализация моторики тонкой кишки.

- с помощью данной экспериментальной модели исследовать особенности ответной реакции сократительного аппарата и слизистой оболочки тощей кишки на вагото-мию в условиях хронической дуоденальной язвы.

- разработать эффективный способ оценки противогипоксической активности препаратов, моделирующий одно из основных патогенетических звеньев поствагото-мического синдрома - циркулягорную гипоксию; метод основан на регистрации параметра электрической активности гладкой мускулатуры кишки, прямо зависящего от напряжения кислорода (амплитуда медленных электрических волн -МЭВ).

~ продемонстрировать, что отобранные с помощью данного метода антигипоксант томерзол и антиоксидант дибунол оказывают благоприятное действие на морфо-функциональное состояние сократительного аппарата и слизистой оболочки тонкой кишки, улучшая их кровоснабжение и метаболизм. - разработать ряд новых методических подходов к количественному анализу экспериментального материала, в частности, электромиограмм и кинетических кривых поглощения-выделения водорода, позволяющих получать более подробную и точную информацию о состоянии сократительной деятельности тонкой кишки и ее микрогемодкнамики.

7

Практическая ценность работы. Показано, что одним из основных звеньев патогенеза постваготомических нарушений структурной организации и функциональной деятельности сократительного аппарата тонкой кишки является тканевая гипоксия ¡мышечной оболочки. Есть основания считать, что гипоксия вызывает расстройства биоэнергетики и метаболизма (в первую очередь, в системе ПОЛ, водно-минерального обмена и биосинтеза белка) гладких миоцитов, которые лежат в основе ыорфофунк-ционалыхых нарушений сократительного аппарата кишки. Эти данные подлежат клиническому осмыслению в плане поиска адекватных средств для фармакокоррекции тонкокишечных осложнений у больных дуоденальной язвой, перенесших операции, сопряженные с перерезкой блуждающих нервов или их ветвей.

Выявлены закономерности преобразования ыоторно-эвакуаторной деятельности тонкой кишки в различные периоды постваготомического синдрома (от 3 до 220 су г). Показано, что в условиях ваготомии изменяется не только структурно-метаболическая и функциональная организация сократительного аппарата, но и его реактивные свойства, в частности, характер ответной реакции на фармакологическую стимуляцию синтетическим аналогом ацегилхолина - ацеклидином. Это обстоятельство необходимо учитывать в клинической практике при назначении холиномимети-ческих и других вегетотропных препаратов соотвествуклцей категории больных.

Установлено, что в определенные периоды после ваготомии структурно-функциональные изменения слизистой оболочки кишки отчетливо коррелируют с преобразованиями ее моторной деятельности. Это позволяет высказать предположение о существовании патогенетической связи между состоянием слизистой оболочки и двигательными расстройствами органа, реализующейся, по всей вероятности, посредством сосудистого механизма, поскольку известно, что через мышечную оболочку кишки проходят прямые артерии, кровоснабжающие слизистую оболочку. Полученные данные могут оказаться полезными при разработке схем медикаментозного лечения и диетотерапии для больных, перенесших ваготомгао.

Показано, что ваготомия, произведенная у крыс с хронической экспериментальной язвой двенадцатиперстной кишки, оказывает на состояние сократительного аппа -

8

рата тощей кишки релаксирующее действие - эффект, аналогичный таковому у исходно интактных животных. Данное обстоятельство дает основание считать эти две экспериментальные модели аналогичными в плане изучения влияния ваготомии на двигательную функцию тонкой кишки.

Установлен благоприятный эффект антигипоксанта томерзола и антиоксиданта дибунола на морфофункционалыгае состояние тонкой кишки в условиях нарушенной вагусной иннервации, что позволяет рекомендовать их к использованию для коррекции морфофункциональных нарушений кишечника у соответствующей категории больных

Простой и эффективный метод оценки и отбора фармакологических препаратов, обладающих противошлоксической активностью, может быть рекомендован в практику лабораторий, ведущих поиск и скрининг ангишпоксантов.

Основные положения, выносимые на защиту:

1) В ответ на ваготомию в слизистой и мышечной оболочках тонкой кишки развивается комплекс структурно-метаболических и функциональных изменений, характеризующийся волнообразным течением: через 7 и 30 сут имеет место нарушение структуры и функций, через 14 сут отмечается временная и относительная нормализация состояния органа; к концу изученного периода (220 сут) все исследованные параметры приближаются к контрольному уровню. Нормализация структурно-функционального состояния органа достигается благодаря развитию в нем компенсаторно-приспособительных процессов.

2) Нарушения со стороны слизистой оболочки сводятся к преобразованиям ее структурной организации, носящим преимущественно дистрофически!! характер, расстройству секреторной функции (слизеобразования); в течение 1 мес после ваготомии отмечается активации местного иммунного аппарата.

3) Нарушения структурной организации мышечной оболочки проявляются в ее гидратации, нарушении мио-миоцитаршлх контактов, дискомплексации фибриллярных структур, набухании митохондрий, редукции органелл на фоне уплотнения или просветления цитоплазмы гладких миоцитов. Расстройства моторно-эвакуа-

9

торной функции сократительного аппарата кишки сводятся к нарушению функционирования водителя ритма кишечной перистальтики, снижению тонуса гладкой мускулатуры, ослаблению и нарушению моторики и эвакуаторной деятельности.

4) Ваготомия приводит к существенным преобразованиям архитектоники микро-циркуляторного русла и структуры микрососудов, дилатации капилляров и ве-нул, нарушению проницаемости сосудистой стенки, сопровождающимся расстройствами гемодинамики и кислородного снабжения. Циркуляторная гипоксия и сопряженные с ней активация ПОЛ и нарушения водно-минерального и белково-нуклеинового обмена являются важными звеньями патогенеза нейродистрофиче-ского процесса в тонкой кишке.

5) Антигипоксанг томерзол и ангиокслдант дибунол оказывают положительный фармакологический эффект в плане коррекции постваготомических изменений морфофункционального состояния и метаболизма слизистой оболочки и сократительного аппарата тонкой кишки, что подтверждает существенную роль гипоксии и активации ПОЛ в патогенезе нейродистрофического процесса.

Апробация работы. Основные положения диссертации отражены в докладах на IX Всесоюзном съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Минск, 1981), I Вссесоюз-ном биофизическом съезде (Москва, 1981), XI Всесоюзной конференции по физиологии и патологии кортико-висцеральных взаимоотношений (Ленинград, 1982), научной конференции «Математические и вычислительные методы в биологии» (Пущино, 1985), XIV Всесоюзной конференции по физиологии пищеварения и всасывания (Тер-нополъ-Львов, 1986), X Всесоюзном съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Полтава, 1986), научной конференции «Физиология вегетативной нервной системы» (Ди-лижан, 1986), И Всероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Москва-Лениниград, 1988), П1 Всесоюзной конференции «Биоантиоксидант» (Москва, 1989), Всесоюзном симпозиуме (с международным участием) «Микроэлементозы человека» (Москва, 1989), XI Всесоюзной конференции «Физиология пищеварения и всасывания» (Краснодар, 1990), научной конференции «Экологическая патология и ее фарма-

10

кокоррекция» (Чита, 1991), научной конференции «Методы исследования и лечения, аппаратные системы и ЭВМ в гастроэнтерологии» (Железноводск-Еесентуки, 1991), X съезде хирургов Белоруссии (Минск, 1991), V морфологической конференции республик Средней Азии и Казахстана (Чолпон-Ата, 1991), VII Всероссийском симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации» (Москва, 1994), научной конференции Всероссийского научного общества анатомов, гистологов и эмбриологов, посвященной 75-летию проф. С.С.Михайлова (Москва, 1994), III международной конференции по нейроморфологии (Санкт-Петербург, 1997), П1 съезде физиологов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 1997), II межрегиональной конференции Кабардино-Балкарского отделения ВРЕО АГЭ (Нальчик, 1997), IV конгресса международной ассоциации морфологов (Нижний Новгород, 1998).

Публикации. По материалам диссертации опубликована 51 научная работа, имеются 1 изобретение и 2 рационализаторских предложений отраслевого значения.

Структура диссертации. Диссертация состоит из введения, 8 глав, заключения, выводов, библиографического указателя и приложения (отдельный том: расширенное изложение некоторых методов исследования, таблицы, данные корреляционного анализа). Содержание работы иллюстрировано рисунками (графиками, диаграммами, схемами, микрофотографиями). Библиографический указатель включает отечественных и иностранных источников.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Постановка экспериментов

Работа выполнена на 662 беспородных белых крысах-самцах с массой тела 180 -200 г. Основным объектом исследования служила тощая кишка; кроме того в ГО серии экспериментов исследовали желудок, печень, поджелудочная железа. Нарушение парасимпатической иннервации данных органов достигалось путем двусторонней поддиафрагмальной перерезки (точнее, иссечения фрагмента длиной 3-4 мм) левой и правой ветвей блуждающего нерва. Операцию производили под общим эфирным наркозом. Контролем служили интактные и ложнооперированные (3 сут) животные.

11

Срок исследования ложнооперированных крыс был выбран на основании подробной морфо-биохимической информации, свидетельствующей о неспецифичности изменений в этот период. Эти данные были получены ранее в нашей лаборатории (А.А.Зозу-ля, 1978, Т.К.Дубовая, 1991). Подопытные и контрольные крысы содержались в одинаковых условиях вивария, получали стандартный корм. До забоя (или постановки острых физиологических экспериментов) они голодали 16-18 час. Животных умервщля-ли путем декапитации.

2. Серии экспериментов и методы исследования

Серия Ь Эксперименты по изучению морфо-функционалыюго состояния слизистой оболочки тощей кишки в условиях ваготомии

1) Оценку состояния структурной организации слизистой оболочки кишки проводили по следующим направлениям:

а) Общегистологический анализ. Для этого на препаратах, окрашенных гематоксилином и эозином и фосфорно-вольфрамовым гематоксилином, с помощью мор-фометричеемкой техники (Г.ГАвгандилов, 1990) определяли: высоту кишечных ворсинок, глубину крипт, толгцину эпителия в верхней, средней и нижней третях ворсинок, форм-фактор ворсинок, число клеток в эпителии ворсинок и крипт. Клетки с ацидофильной зернистостью (клетки Панета) выявляли с помощью гистохимической реакции на цинк (И.А.Шевчук, Т.Ф.Мельник,1969). Подсчитывали число клеток Панета в крипте и относительную долю крипт, содержащих выявляемые данным методом клетки. Интегральной количественной характеристикой популяции клеток Панета служило произведение данных показателей. Эндокринные клетки (ЕС-клетки) выявляли методом Массона (РЛилли, 1969) и подсчитывали их число в эпителии ворсинок.

б) Радиоавтографическое исследование прогресса обновления клеточного сост.а -ва в системе «крипта-ворсинка»: на препаратах тощей кишки крыс, которым за 1 час до забоя внутрибрюшинно вводили 2 мкКи тимидина-Н3 (на физиологическом растворе), подсчитывали число клеток с мечеными ядрами в эпителии крипт и выражали в %о по отношению к общему числу эпителиоцитов крипты (индекс меченых ядер).

в) Анализ состояния местного -иммунного аппарата, основанный на определении числа межэпителиальных лимфоцитов на ворсинках, удельной площади лимфоцитов и плазмоцитов в собственной пластинке слизистой оболочки (на препаратах, окрашенных гематоксилином и эозином и по методу Браше - ЗЛилли, 1969).

г) Морфологический, анализ популяции тканевых базофилов. Для этого на препаратах, окрашенных альциановым синим (АНАвцын и соавт., 1971), подсчитывали число тканевых базофилов в строме кишечных ворсинок с малым (I тип), умеренным (II тип), высоким (III тип) и очень высоким (IV тип) содержанием секреторного материала.

2) Оценку состояния железистой функции слизистой оболочки кишки производили на примере секреции слизи и продукции минеральных ионов (НСО/ , ОН" и Н+, соотношением которых определяется рН парамукозного слоя). Для этого:

а) На срезах кишки, фиксированной в жидкости Карнуа, с помощью гистохимических методов выявляли бокаловидные экзокриноциты, секретирующие нейтральные гликопротеиды (ШИК реакция - ЗЛилли,1969), глюкозаминогликаны (кислые мукополисахариды - Э.Пирс,1962), сульфогликопротеиды (М.Г.Шубич,1961). На полученных препаратах раздельно подсчитывали число клеток, синтезирующих вышеуказанные типы углеводсодержащих биополимеров, в эпителии крипт и ворсинок. Углубленный качественный анализ химической организации секрета бокаловидных экзокриноцитов заключался в постановке гистохимических реакций на -З-Э-группы и сиаловую кислоту (МГ.Шубнч, 1966).

б) В условиях острога опьгга у анестезированных крыс производили измерение рН парамукозного слоя в проксимальном отделе тощей кишки (пристеночная рН-ме-трия по Е.Ю.Линару, 1968).

Серия II. Эксперименты по изучению структурной организации, биоэнергетики, метаболизма, функциональной активности и реактивности сократительного аппарата тонкой кишки в условиях ваготошш

1) Исследование структурной организации сократительного аппарата то -щей кишки, заключалось в измерении (с помощью окуляр-микрометра, на препара-

13

тах, окрашенных фосфорно-молибденовым гематоксилином) толщины мышечной оболочки и ее слоев и двух взаимно перпендикулярных диаметров гладких миоцитов (на поперечных срезах); кроме того, на препаратах, окрашенных на общий белок, определяли удельную площадь гладких миоцитов и межклеточного пространства (на стереометрическом анализаторе «Спектр»).

2) Исследование биоэнергетики гладких миоцитов производили путем гистохимического анализа ключевых ферментов цикла трикарбоновых кислот сукцинатдеги-дрогеназы (Нахлас - M.Nachlas, 1958), малатдегидрогеназы (Р.Лилли, 1969), дыхательной цепи - НАД.Н-дегидрогеказы (М.Берстон,1965) и гликолиза - лактатдегид-рогеназы (Р.Лилли, 1969) с последующей микрофотоыетрией препаратов на сканирующем микроскопе-фотометре МЦФУ-2МП при длинах волн 546, 560, 580, 580 нм соответственно.

3) Оценку состояния метаболизма сократительного аппарата кишки проводили по двум направлениям:

а) Исследование ПОЛ. Для этого в гомогенатах демукотизированных отрезков тощей кишки определяли: 1. Интенсивность индуцированной Н202 хемилюминесцен-ции; 2. Концентрацию малонового диальдегида (S.Chatteejee, 1988) непосредственно после приготовления гомогената и в процессе его «самоокисления» (через 6,12 и 24 час после начала инкубации при температуре 37'С в режиме постоянного перемешивания); 3. Концентрацию диеновых конъюгатов - гидроперекисей - (В.Б.Гаврилов, МЛМышкорудная, 1983); 4. Восстановительный потенциал (способность гомогената восстанавливать Fe+3 до Fe +2); 5. Активность каталазы и ее устойчивость к субстратной инактивации (каталитическую емкость) (В.Ю.Титов и соавт., 1988).

б) Анализ некоторых ключевых показателей метаболизма гладких миоцитов. Для этого: 1. Определяли содержание РНК и общего белка в цитоплазме гладких миоцитов с помощью гистохимических методов (РНК ~ галлоцианин-хромовые квасцы -по Б.Ромейсу (1953), контроль с рибонуклеазой), белок - бромфеноловый синий - по Мэзиа (ЗЛилли, 1969) с последующей микрофотометрией препаратов на сканирующем микроскопе-фотометре МЦФУ-2МП при длинах волн 620 нм (РНК) и 600 нм (бе-

14

лок);. 2. Измеряли содержание общей воды в образцах демукотизированной тощей кишки весовым методом и оценивали состояние воды (степень структурированности) в демукотизированных образцах тощей кишки с помощью метода протонного магнитного резонанса; 3. Определяли содержание Са, Р, Na, К, Fe, Си в образцах демукоти-зированной тощей кишки методом дуговой атомно-эмиссионной спектрографии (В.М.Колосова, 1949).

4) Исследование сократительной активности кишки осуществляли двумя взаимодополняющими методами:

а) Электромиаграфья. На проксимальный отдел тощей кишки анестезированных крыс накладывали индикаторные электроды и осуществляли регистрацию электрической активности по биполярной схеме при помощи полиграфа «Mingograf-82» при чувствительности 0,2 нВ, постоянной времени 1 с, верхней границе частот 70 Гц, скорости движения бумажной ленты 2,5 мм/сек в течение 20-25 мин.

б) Баллонография. В полость проксимального отдела тощей кишки анестезированных крыс вводили (каудальнее электродов для регистрации электрической активности на расстоянии 2 см) микробаллончик, соединенный с помощью катетера с датчиком давления полиграфа «Mingograf-82».

5) Исследование эвакуаторной деятельности тонкой кишки осуществляли при помощи метода «пищевой метки». Для этого в условиях острого опыта в двенадцатиперстную кишку анестезированных крыс (посредством тонкого желудочного зонда, проведенного per os) вводили 1 мл взвеси окрашенных стеклянных микросфер (диаметром 0,45 мм) на физиологическом растворе. Через 120 мин кишку извлекали, погружали в охлажденный физиологический раствор (для остановки перистальтики), измеряли длину и разрезали на десятисантиметровые отрезки, в каждом из которых подсчитывали число реперных частиц.

6) Исследование реактивности сократительного аппарата осуществляли на примере его ответной реакции на синтетический аналог ацетилхолина - ацеклидин. Ацеклидин в дозе 0,5 мг/кг вводили в бедреную вену анестезированных крыс, на проксимальный отдел тощей кишки которых предварительно накладывали индикатор-

15

ные электроды, а в полость кишки (каудальнее на расстоянии 2 см) вводили микробаллончик, соединенный с помощью катетера с датчиком давления полиграфа «Mingograf-82». Регистрацию электрической и моторной активности кишки начинали одновременно сразу после введения препарата и продолжали в течение 12 мин.

Серия III Эксперименты по изучению распределения кровотока между органами гастро-дуоденального комплекса, микроциркуляции крови в тощей кишке и се структурной основы при ваготомии

1) Для исследования распределения кровотока между органами гастро-дуоде -налъного региона (желудок, проксимальный отдел тонкой кишки, печень, поджелудочная железа) у анестезированных крыс измеряли скорость местного кровотока в ткани вышеуказанных органов (паренхиме желез и мышечной оболочке пищеварительного канала) при помощи полярографического метода по клиренсу водорода (KAukland et al., 1961), используя полярограф LP-7, игольчатый платиновый (жди-ка торный) и каломельный (референтный) электроды. Непосредственно перед регистрацией животным давали вдыхать воздушно-водородную смесь (8-10 вдохов). Затем на основании результатов данных измерений рассчитывали коэффициенты Кж/„, Клжд*> К,1Ж/Ж, Кя/пж, Кп/Ж и Кл/Пс (отношения скоростей местного кровотока в желудке (ж), тощей кишке (тк), печени (п) и поджелудочной железе (пж), которые количественно описывают распределение кровотока между органами гастро-дуоденального комплекса).

2) Изучение микроциркулящ и, крови в сократительном аппарате тощей кишки осуществляли путем определения скорости местного кровотока в мышечной оболочке органа (полярографическим методом по клиренсу водорода) и математического анализа полученных при этом кривых поглощения-выделения водорода.

3) Для исследования структурной организации микрогемососудистого русла тощей кишки срезы, полученные с замороженных образцов органа, предварительно фиксированных в 12% формалине, импрегнировали азотнокислым серебром (В.В.Куприянов, 1965).

4) С целью косвенной оценки объема снутриорганного кровеносного русла определяли содержание гемоглобина в стенке кишки (спектрофотометрия).

5) Для оценки состояния снабжения сократительного аппарата кишки кисло -родом измеряли напряжение кислорода (р02) в мышечной оболочке органа при помощи полярографического метода (В.А.Березовский, 1974).

Серия IV. Эксперименты по изучению влияния ваготомии на развитие хронической экспериментальной язвы двенадцатиперстной кишки н изменению состояния тощей кишки в этих условиях

Хроническую экспериментальную (ацетатную) язву двенадцатиперстной кишки индуцировали по методу &ОкаЬе е4 а1. (1871). Через 10 сут (срок, когда появляются признаки перехода язвы в хроническое состояние Б.ОкаЬе е1 а1, 1974) производили двустороннюю подиафрагмальную стволовуюваготомию. Контролем служили неопе-рированные и ложнооперированные крысы с ацетатной язвой; часть их умервщляли декалитацией через 1, 3, 5, 7 и 10 сут после индукции язвы. И подопытных, и контрольных животных исследовали через 3,7, 14, 30, 60 и 220 сут после ваготомии. Эти сроки соответствуют таковым в сериях но изучению последствий ваготомии у исходно интактных крыс. Гистологическому исследованию подвергали фрагмент двенадцатиперстной кишки, включающий язвенный дефект и примыкающие к нему неизмененные участки органа. Материал фиксировали в 10% нейтральном формалине. На фиксированных препаратах определяли два взаимно перпендикулярных поперечника язвы, их произведение принимали за язвенный индекс. Парафиновые срезы, проходящие через центр язвы, окрашивали гематоксилином и эозином, а также по Ван-Гизон; ретикулярные волокна выявляли по Футу, эластические - по Вейгерту, рибо-нуклеопротеиды - по Браше и по Эйиарсону, нейтральные гликопротеиды - с помощью ШИК-реакции. С помощью специально разработанной морфометрической методики определяли значение ряда параметров, позволяющих дать комплексную морфологическую оценку состояния язвы на различных этапах ее развития (С.М.Зимаг-кин и соавт., 1982). Физиологическая часть исследования включала в себя регистра-

17

цию и количественный анализ параметров электрической активности тощей кишки и измерение величины рН паранукозного слоя слизи в том же отделе органа.

Серия V. Эксперименты по разработке экспериментальной модели для определения противопшоксической активности веществ, отбору фармакологических препаратов для коррекции постваготомических изменений и анализу их эффектов на состояние тощей кишки

1) Для проведения этой серии исследования нами была разработана оригинальная экспериментальная модель (Авторское свидетельство на изобретение № 1648348 от 15 января 1991 г. - совм. с А.ПЭттингером, МД.Поливодой, М.В.Ануровым). Модель основана на способности антигипоксантов увеличивать время переживания гладкой мускулатуры кишки после прекращения ее кровоснабжения. В условиях острого опыта у анестезированных контрольных и подопытных крыс (последним до исследования вводили испытуемый препарат) выделяли и изолировали (с сохранением соответствующего участка брыжейки) фрагмент тощей кишки. С учетом особенностей фармакодинамнки препараты вводили в следующих режимах: дибунол - в/бр за 3 час до эксперимента, остальные - в/м за 1 час 10 мин. После регистрации фоновой электрической активности изолированного отрезка кишки затягивали предварительно наложенные на брыжейку лигатуры и определяли время, в течение которого амплитуда МЭВ (параметр, величина которого прямо зависит от напряжения кислорода в ткани - Ю.МЛанцырев и соавт., 1982) уменьшалась до 1/3 от исходного значения. Противогипоксическую активность препарата рассчитывали как разницу этих временных интервалов между опытом и контролем, выраженную в процентах.

2) Тестирование некоторых фармакологических препаратов с помощью вышеописанной экспериментальной модели и выбор эффективных препаратов для коррек -ции постваготомической гипоксии тонкой кишки и ее последствий.

С этой целью исследовали 5 препаратов: гутимин (гуанилтиомочевина, 120 мг/кг), томерзол (5-этокси-2-эталтиобензимидазол, 50 мг/кг), гамма-оксибутират натрия (300 мг/кг), гамма-оксибутират лития (1500 мг/кг), дибунол (2,6-дитретбутил-4-

18

метилфенол, 25 мг/кг). Все препараты, кроме дибунола, вводили внутримышечно, ди-бутгол (на 3% растворе твина-ЙЭ) - внутрибрюшинно.

3) Принимая во внимание то обстоятельство, что для фармакокоррекции поства-готомических изменений структурно-функциональной организации пищеварительных органов недопустимо применение препаратов, стимулирующих желудочную кислотопродукцию и таким образом нивелирующих лечебный эффект ваготомии, в настоящей серии экспериментов изучено влияние отобранных с помощью вышеописанной модели лекарственных веществ (томерзола и дибунола) на рН парамукозного слоя слизи желудка (методом пристеночной рН-метрии).

4) Для изучения эффектов томерзола и дибунола на морфо-функциональное состояние тонкой кишки препараты вводили 1 раз в сут начиная со 2-го дня после ваготомии на протяжении 30 сут (один из сроков, когда посгваготомические именеяия тонкой кишки выражены в наибольшей степени). При этом были использованы следующие дозы: томерзол - 35 мг/кг, дибунол - 25 мг/кг (на 3% растворе твина-80 в качестве солюбилизатора). Животным контрольных групп в том же режиме вводили физиологический раствор и 3% твин-80 соответственно.

5) Для оценки эффективности фармакокоррекции изменений структурно-метаболического и функционального статуса сократительного апппарата кишки использовали следующие критерии: а) функциональные (электрическая активность, скорость местного кровотока); б) метаболические (напряжение кислорода, концентрация малонового диальдегида, содержание общей воды и ее магнитно-релаксационные характеристики) в) структурные (толщина мышечной оболочки).

6) Для оценки эффективности фармакокоррекции изменений структурно-функционального состояния слизистой оболочки кишки использовали следующие критерии: а) функциональные (число бокаловидных экзокриноцитов, синтезирующих нейтральные гликопротеиды, глюкозашгаогликаны и сульфогликопротеиды); б) структурные (толщина эпителиального пласта кишечных ворсинок, удельная площадь лимфоцитов собственной пластинки, цитограмма и индекс насыщения гепарином популяции тканевых базофилов собственной пластинки.

19

3. Статистическая н математическая обработка данных

1) Статистическую достоверность различий между экспериментальными и контрольными данными предварительно оценивали при помощи таблиц Р.Б.Стрелкова (1980) и в случае положительною результата уточняли по общепринятым методам с использованием критериев Стьюдента и Вилкоксона (Н.А.Плохинский, 1970),

2) Функциональную зависимость между исследованными параметрами выявляли с помощью корреляционного анализа (В.Ю.Урбах, 1975).

3) Фуръе-анализ. Применяли для частотного анализа МЭВ на миограммах, полученных при регистрации электрической активности сократительного аппарата тощей кишки.

4) Математическое моделирование. Применяли для количественной характеристики кинетики местного кровотока в мышечной оболочке тощей кишки.

5) Технические средства и программное обеспечение. Расчеты производили на микрокалькуляторе «Электроника МК-71», микрокомпьютере «Электроника МК-85 М», персональном компьютере «АТ-586» и ЭВМ «АСВТ-40-30». Фурье-анализ элект-ромиограмм проводили на анализаторе «Берг-Фурье» (США).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. СТРУКТУРНЫЕ И ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ, ВЫЗВАННЫЕ ВАГОТОМИЕЙ

1.1. Структурная организация

Нарушение вагусной иннервации кишки сопровождается развитием в ее слизистой оболочке сложного комплекса морфофункциональных перестроек. В ранний период постваготомического синдрома (3 сут) отмечаются микроциркуляторные расстройства, отек интерстация и его круглоклеточная инфильтрация. Поскольку аналогичные изменения выявлялись и у лозкнооперированных крыс, они были квалифицированы как неспецифические, являющиеся проявлением ответной реакции органа на оперативное вмешательство. Через 7 сут выявляются собственно лосгденервацион-ные преобразования преимущественно дистрофического и, в меньшей степени, дест-

20

руктивного характера. Дистрофические изменения охватывают все изученные структурные компоненты слизистой оболочки - эпителиоциты, клеточные элементы собственной пластинки (фибробласты, плазмоциты, тканевые базофилы), микрососуды и нервные волокна. При этом обнаружена общая закономерность в реакции некоторых железистых клеток слизистой оболочки (панетовских клеток, ЕС-клеток и тканевых базофилов) на ваготомию, проявляющаяся в ранние сроки (7 сут) в усиленном выбросе секрета и задержке его выделения - в более отдаленные (30 сут). Продемонстрировано, что в течение 1 мес после ваготомии отмечается активация местного иммунного аппарата, что выражается в увеличении числа межэпителиальных лимфоцитов (на 52%, р < 0,05) и лимфоидно-плазмоцитарной инфильтрации собственной пластинки. В целом динамика описанных изменений носит волнообразный характер с максимумами через 7 и 30 сут, через 14 сут отмечается частичная и временная нормализация изученных параметров. Показано, что уже начиная с 7 сут регистрируются морфологические изменения компенсаторно-приспособительного характера, которые на субклеточном уровне проявляются в появлении «гипертрофированных» митохондрий и увеличении количества свободных рибосом, на клеточном - повышении пролифера-тивной активности эпителия (на 125,3%о, р < 0,05), на тканевом - активации клеточных элементов соединительной ткани собственной пластинки.

1.2. Секреторная функция

Состояние железистой функции слизистой оболочки тощей кишки в условиях ваготомии оценивали на примере секреции слизи и продукции ионов Н+, НС03~ и ОН", соотношением которых определяется величина рН парамукозного слоя слизи.

Гистохимическое исследование слизепродуцирукмцего аппарата кишки показало (рис. 1), что в период 7 сут отмечается перестройка профиля синтетической деятельности популяции бокаловидных клеток: изменяется соотношение клеточных форм, продуцирующих различные типы углеводсодержащих биополимеров - нейтральных гликопротеидов, глюкозаминогликанов и сульфогликопротеидов. Через 14 сут имеет место частичная и временная нормализация состояния аппарата слизепро-дукции. Через 30 сут наблюдается гиперсекреция слизи на фоне относительно неиз-

21

24.0

и

I 16.0-

12.0 —'

нгп

сгп

ГАГ

П г I-Г"

03 7 14 30

14 30 60

220

т

Время после ваготошш (сут)

Рис. 1. Изменение числа бокаловидных клеток, синтезирующих нейтральные гликопротеиды (НГП), глижозаминоглпканы (ГАГ) и сульфогликопроте-иды (СГП), в эпителии ворсиной тощей кишки в различные сроки после ваготомим.

мененного качественного состава популяции бокаловидных экзокриноцитов. Можно предположить, что усиленное слизеобразование является адаптивной реакцией кишки, направленной на ликвидацию отека собственной пластинки слизистой. Комплексный гистохимический анализ секрета бокаловидных клеток выявил нарастание интенсивности его реакции на дисульфидные группы и повышение содержания в нем сульфогликопротеидов. Последние, как известно, обладают протекторными по отношению к кишечному эпителию свойствами (М.Г.Шубич и соавт., 1984), что дает основание квалифицировать данное преобразование химической организации слизи как компенсаторно-приспособительную реакцию.

Другим аспектом секреторной функции слизистой оболочки тощей юшки, исследованным в данной работе, была продукция ионов НС03~,0Н~, Н+. При этом мы исходили из того представления, что рН парамукозного слоя слизистых наложений является одним из ключевых физиологических параметров эпителия кишки, от которо-

го зависит его функциональная полноценность как защитного эшелона и звена пище-варителыю-транспоргного конвейера (ЮЖГальперин, ПИЛазарев, 1986). Показано,что у интактных крыс величина пристеночного рН в тощей кишке составляет 8,14 ± 0,15. Ваготомия ни в один из изученных сроков не сопровождается достоверными отклонениями рН парамукозного слоя слизи, что, по всей вероятности свидетельствует об относительной стабильности в этих условиях системы, обеспечивающей постоянство данного физиологического показателя.

2. СТРУКТУРНЫЕ И ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ СОКРАТИТЕЛЬНОГО АППАРАТА, ВЫЗВАННЫЕ ВАГОТОШЕЙ

2.1. Структурная организация

Нарушение вагусной иннервации тонкой кишки приводит к закономерной перестройке структуры мышечной оболочки, которая проявляется в увеличении ее толщины и развитии в ней дистрофических процессов. При этом в ранний послеоперационный период (3 сут) утолщение мышечной оболочки сопровождаются увеличением размеров гладких миоцитов и носят неспецифический характер (аналогичные изменения отмечаются у ложнооперированных крыс). В более отдаленный период (7 - 30 сут, за исключением 14 сут, когда имеет место временная и относительная нормализация изученных параметров) увеличение толщины мышечной оболочки сопрягается с нарастанием удельной площади межклеточного пространства (на 20,1%, р < 0,05). Дистрофические изменения мышечного аппарата в этих условиях проявляются в дезорганизации мио-миоцитарных комплексов, набухании митохондрий, дезинтеграции фибриллярных структур гладкомышечных клеток на фоне просветления или уплотнения их цитоплазмы. В отдельных случаях дистрофические изменения переходят в деструктивные, заканчивающиеся гибелью миоцитов. Наличие корреляции между морфологическими параметрами мышечной оболочки, с одной стороны, и показателями микроциркуляции крови (К = 0,91) и состояния водно-минерального обмена (И = 0,88), с другой, позволяют высказать предположение, что ваготомия приводит к развитию отека. К 220 сут все изученные параметры достигают контрольного уровня.

2.2. Моторно-эвакуаторная функция

Вагусная денервация приводит к расстройствам двигательной функции тонкой кишки, которые проявляются в нарушениях ее сократительной активности и звакуа-торной деятельности. Об изменениях моторной активности кишки свидетельствуют отклонения таких электромиографических параметров как амплитуда МЭВ (уменьшается на 52,9%, р < 0,05), частота групп МЭВ (увеливается на 46,7%, р < 0,05), отношение частоты групп МЭВ к частоте МЭВ (повышается на 43,4%, р < 0,05), отношение максимальной амплитуды МЭВ к минимальной в группах МЭВ (снижается на 23,0%, р <0,05), крутизна изменения амплитуды МЭВ в группах МЭВ (уменьшается на 33,3%, р < 0,05), а также такого баллонографического показателя как амплитуда волн I типа (уменьшается на 44,9%, р < 0,05) (рис. 2). В период 7 30 сут (за исключением 14 сут) отмечается исчезновение волн III и IV типов. На расстройство эвакуаторной функции тонкой кишки указывает изменение картины распределения пищевой метки (окрашенных микросфер) по ее длшшику через 120 мин после их введения в двенадцатиперстную кишку: преимущественная локализация реперных частиц в проксимальных отделах с неравномерной топографией их незначительного количества в остальных частях органа (в то время как у контрольных крыс их большая часть локализуется в дистальных отделах кишки). Таким образом, на основании вышеизложенного можно прийти к заключению, что ваготомия сопровождается расстройствами мо-торно-эвакуаторной функции тонкой кишки, которые сводятся к нарушению функционирования водителя ритма кишечной перистальтики, снижению тонуса гладкой мускулатуры, ослаблению сократительной активности, явлениям дискинезии.

2.3. Реактивность

Реактивные свойства сократительного аппарата тонкой кишки исследовали на примере его ответной реакции на стимуляцию синтетическим аналогом ацетилхоли-на - ацеклидином. Показано, что вагусная денервация приводит к искажению характера ответной реакции кишки на ацеклидин. Наиболее отчетливо это прослеживается, в частности, через 30 сут после ваготомии. В этот период зарегистрировано увеличение крутизны изменения амплитуды МЭВ в группах МЭВ, увеличение отношения

24

р02 чгм/чм

80.0—1

60.0-

40.0-

0.12"

о.ю-

0.08-

20.0—1 0.06мм рт. ст.

корреляция: р02 - ЧГМ/ЧМ - К = 0,80 (р<0,05)

ЧГМ/ЧМ

ГГТ—I-!-Г"

03 714 30 60

220

Время после ваготомии (сут)

Рис. 2. Динамика некоторых параметров электрической активности и напряжения кислорода в гладкой мускулатуре топкой кишки при ваготомии (р02 -папряжепие кислорода, ЧГМ/ЧМ - отношение частоты групп МЭВ к частоте МЭВ).

максимальной амплитуды МЭВ к минимальной в группах МЭВ, а также снижение частоты волн I типа и исчезновение воли Ш и IV типов, в то время как у интактных крыс изменения этих параметров имеют противоположную направленность

3. ОСОБЕННОСТИ ОТВЕТНОЙ РЕАКЦИИ ТОЩЕЙ КИШКИ НА ВАГУСНУ10 ДЕНЕРВАЦИЮ В УСЛОВИЯХ ДУОДЕНАЛЬНОЙ ЯЗВЫ

3.1. Экспериментальная модель для изучения экстрагастральных последствий ваготомии у больпых язвеппой болезнью двенадцатиперстной кишки

С целью приблизить исследуемую в данной работе экспериментальную ситуацию к соответствующей клинической было проведено комплексное морфологическое (гистологический анализ с морфометрией) и физиологическое (пристеночная рН-ме-трия) исследование, в результате которого удалось усовершенствовать эксперимен-

25

тальную модель типа «хроническая дуоденальная язва + ваготомия» таким образом, что перерезка блуждающих нервов оказывает положительный эффект на течение язвенного процесса. Нами установлено, что морфологически это проявляется в ускорении процессов эпителизации язвы (на 17,4%, р < 0,05) и редукции соединительнотканного сосочка (на 43,6%, р < 0,05), более интенсивной регенерации гладкой мышечной ткани в области дна язвы (на 19,4%, р < 0,05) у язвенных крыс, подвергнутых ва-готомии, по сравнению с контрольными животными (язва без ваготомии). Как показали данные пристеночной рН-метрии, ваготомия у крыс с дуоденальной язвой приводит к устойчивому снижению кислотности (существенно повышенной у язвенных животных без ваготомии) в желудке (с 4,29 до 7,19, р < 0,05) и не усугубляет изменений пристеночного рН в непораженной язвой области двенадцатиперстной кишки. Эти данные дают основание считать,что настоящая экспериментальная модель удачно имитирует соответствующую клиническую ситуацию и, таким образом, может служить адекватным методологическим инструментом для исследования последствий ваготомии у больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки.

3.2. Ответная реакция слизистой оболочки тощей кишки крыс с хронической экспериментальной дуоденальной язвой на ваготомшо

При изучении особенностей ответной реакции слизистой оболочки тощей кишки язвенных крыс на ваготомию производили сравнительный анализ изменений рН па-рамукозного слоя слизи у исходно интактных животных, подвергнутых ваготомии и крыс с дуоденальной язвой, перенесших аналогичную операцию. Измерение данного параметра позволяет получить ценную информацию об уровне секреции минеральных ионов кишечным эпителием, поскольку известно, что рН в данной системе определяется соотношением ионов Н1", НС03 и ОН (ИА.Морозов и соавт., 1987).

Показано, что процесс развития дуоденальной язвы сопровождается волнообразными изменениями пристеночного рН в тощей кишке. Через 17 и 40 сут отмечается снижение рН парамукозного слоя слизи, в то время как через 7 и 70 сут - повышение. К концу исследованного периода (230 сут) значение данного параметра не отличается от контрольного уровня. Ваготомия, произведенная на 10 сут развития язвы,

26

оказывает нормализующий эффект на пристеночный рН тощей кишки, что проявляется в повышении его уровня через 7 и 30 (тенденция) сут после перерезки блуждающих нервов.

Эти данные позволяют прийти к заключению, что становление и развитие язвы двенадцатиперстной кишки сопровождается достаточно глубокими расстройствами процесса секреции минеральных ионов эпителием тощей кишки и, как следствие, изменением рН парамукозного слоя слизи. Вагогомия, произведенная па этом фоне, приводит к увеличению сниженного у язвенных крыс пристеночного рН до контрольного уровня (через 7 и 30 сут), что свидетельствует о нормализации секреторной деятельности кишечного эпителия в плане продукции минеральных ионов.

3.3. Ответная реакция сократительного аппарата тощей шпики крыс с хронической экспериментальной дуоденальной язвой на ваготомию

Продемонстрировано, что развитие хронической дуоденальной язвы сопровождается характерным комплексом изменений электрической активности тощей кишки, свидетельствующим об усилении ее сократительной активности с явлениями спазма, на что указывает увеличение частоты МЭВ и частоты груш МЭВ, отношения частоты групп МЭВ к частоте МЭВ, средней амплитуды МЭВ и крутизны ее изменения в группах МЭВ, отношения продолжительности групп МЭВ к интервалу между ними и уменьшение отношения максимальной амплитуды МЭВ к минимальной в группах и числа МЭВ в группах МЭВ. При этом наиболее выраженные расстройства двигательной функции органа зарегистрированы через 10,17,40 и 230 сут.

Показано, что ваготомия, проведенная у крыс с дуоденальной язвой, оказывает частичное нормализующее действие на электрическую активность гладкой мускулатуры тонкой кишки. Так, через 14 и 30 сут после перерезки блуждающих нервов уменьшается до исходного уровня отношение продолжительности групп МЭВ к интервалу между ними (с 2,98 до 2,24, р < 0,05). Наряду с этим через 30 сут увеличиваются до контрольного значения частота МЭВ и число МЭВ в группах (с 26,8 до 29,3 и с 4,69 до 6,08 соответственно, р < 0,05). Через 220 сут отмечается нормализация таких показателей, как частота МЭВ (с 39,7 до 33,5, р < 0,05) и отношение продолжительно-

27

сти групп МЭВ к интервалу между ними (с 4,11 до 2,72, р < 0,05), и выраженная тенденция (на границе статистической достоверности) к нормализации таких параметров, как частота групп МЭВ, отношение частоты групп МЭВ к частоте МЭВ и крутизна изменения амплитуды МЭВ в группах. При этом нормализующий эффект вагото-мии на моторную деятельность тонкой кишки в условиях дуоденальной язвы проявляется в наибольшей степени через 30 и 220 сут.

4. ПАТОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ИЗМЕНЕНИЙ ТОНКОЙ КИШКИ В УСЛОВИЯХ ВАГОТОМИИ

4.1. Особенности кровоснабжения тонкой кишки: перераспределение кровотока между органами гастро-дуоденального комплекса, изменения микрогемодинамики и кислородного снабжения тканей Тонкая кишка, как известно, кровоснабжаегся из тех же источников, что и желудок, печень и поджелудочная железа - чревного ствола и ветвей брыжеечной артерии. Парасимпатическая иннервация этих органов также осуществляется из общего источника - кранио-бульбарного отдела вегетативной нервной системы, представленного блуждающими нервами. Эти обстоятельства, а также факт существования тесных функциональных связей между вышеуказанными органами, дали основания для выделения их в относительно автономный комплекс ~ гастро-дуоденальную систему (ПККлимов, 1976, ААГребенев, Л.П.Мягкова, 1994). В настоящей работе межорганное распределение кровотока в масштабе этого региона оценивали путем сопоставления скоростей объемного кровотока в желудке, тощей кишке, печени и поджелудочной железе и количественно выражали с помощью соответствующих коэффициентов (см. Материал и методы). Установлено, что в течение 7-60 сут выявлено перераспределение кровотока между исследованными органами в зависимости от срока после ваготомии. Так, через 7 отмечается изменение распределения кровотока между желудком и тонкой кишкой в пользу первого. Через 14 сут гемодинамическая ситуация в гастро-дуоденальной системе претерпевает сложные преобразования: перераспределяется кровоток между печенью и пищеварительным каналом в пользу последнего, печенью и поджелудочной железой в пользу последней и между желудком и то-

28

щей кишкой в пользу последней. Через 30 сут за счет уменьшения скорости объемного кровотока в желудке и тонкой кишке наблюдается изменение распределения кровотока в пользу печени и поджелудочной железы. Кроме того, отмечается тенденция к повышению объемного кровотока в поджелудочной железе за счет печеночной фракции. Через 60 сут вследствие тенденции к увеличению скорости местного кровотока в тонкой кишке и ее уменьшению в желудке и печени происходит перераспределение кровоснабжения этих органов. Через 220 сут достоверных отклонений исследованных параметров регионарной гемодинамики не выявлено. Отчетливая корреляция между изученными параметрами гемодинамики в гастро-дуоденальном регионе и скоростью местного кровотока в мышечной оболочке тощей кишки (И = 0,85) дает основание полагать, что нарушение режима кровоснабжения органов данной системы при ваготомии вносит определенный вклад в изменения микроциркуляции крови в сократительном аппарате органа.

Исследование микрогемодинамики мышечной оболочки тонкой кишки и ее структурной основы при ваготомии показало, что в ранний период (3 сут) морфологическая перестройка микрососудистой системы заключается в повышении кровенаполнения отдельных фрагментов емкостного звена и активизации кровотока в части артериоло-венулярных анастомозов. При этом содержание гемоглобина в стенке кишки повышается (на 61,4%, р < 0,05), что косвенно указывает на увеличение суммарного объема внутриорганного сосудистого русла. Поскольку р02 в тканях мышечной оболочки кишки при этом снижается (на 42,7%, р < 0,05), можно предположить, что в этих условиях происходит открытие артериоло-венулярных анастомозов и сброс значительных объемов крови, следствием чего является ухудшение кислородного снабжения тканей органа на фоне увеличения скорости местного кровотока. Так как сходные изменения регистрируются у ложнооперированных крыс, есть основания полагать, что данная перестройка микроциркуляторной системы является неспецифической реакцией на оперативную травму. В более отдаленные сроки поствагото-мического синдрома (7 и 30 сут) на первый план выходят собственно денервационные преобразования, которые морфологически проявляются в изменении конфигурации

29

артерисш и части капилляров, дилатации емкостных микрососудов, дистрофических изменениях стенки мккрососудов, агрегации эритроцитов в капиллярах и венулах, изменении проницаемости (паравазальный отек, эритропедез, лейкопедез). Поскольку при этом содержание гемоглобина в стенке кишки остается повышенным (на 33,9%, р < 0,05), а р02 - пониженным (на 44,9%, р < 0,05), в то время как скорость местного кровотока уменьшается (на 35,6%, р < 0,05), можно считать, что в этих условиях имеют место застойные явления в микроциркуляторном русле. Выявленная корреляция между р02 и скоростью местного кровотока (11=0,74) позволяет высказать предположение, что гипоксия, развивающаяся в мышечном аппарате кишки при ваготомии, имеет циркуляторную природу.

4.2. Реакция системы ПОЛ, изменения биоэнергетики и некоторых параметров метаболизма в гладкга: миоцитах Продемонстрировано, что ваготомия сопровождается активацией ПОЛ в гладких миоцитах мышечной оболочки кишки, о чем свидетельствует повышение концентрации промежуточных (гидроперекисей) и конечных (малонового диальдегида) продуктов в гомогенате демукотизированных фрагментов органа (рис.3), а также увеличение интенсивности его хемилюминесценции (индуцированной Н202) и уменьшение восстановительного потенциала (способности восстанавливать Ге+3 до Ге'2). Эти изменения носят волнообразный во времени характер и наиболее выражены через 3 (не отличаются от таковых у ложнооперированных крыс), 7 и 30 сут; через 14 сут степень их выраженности была меньшей, 60 - 220 сут - не отличалась от контрольного уровня. В период 30 - 60 сут в системе ПОЛ регистрируются изменения компенсаторно-приспособительного характера - появляется форма каталазы с повышенной устойчивостью к субстратной инактивации и увеличивается восстановительный потенциал. Выявленная коррелятивная связь между параметрами ПОЛ и р02 (Б = 0,72) в данных условиях (рис.3) подтверждает предположение о том, что недостаток кислорода в тка -ни является фактором, инициирующим этот процесс.

Исследование биоэнергетической системы гладких миоцитов сократительного аппарата в условиях ваготомии проводили на основании гистохимического анализа ее

30

СМК рО, МДА

280.0- 80.0— 45.0-

240.0- 60.0- 40.0-

200.0- 40.0- 35.0-

160.0- 20.0- 30.0-

мдл

-а

мл/мин/100г ммрт. ст. нмаль/г

гт—I-1—

03 7 14 30

—Г" 60

220

Время после ваготомии (сут)

Рис. 3. Динамика скорости местпого кровотока (СМК), напряжения кислорода (р02) и концентрации малонового диальдегида (МДА) в мышечной оболочке топкой кишки при ваготомии.

ключевых ферментов - лактатдегидрогеназы (ЛДГ; гликолитическое звено), сукци-натдегидрогензы (СДГ) и малатдегидрогеназы (МДГ; цикл трикарбоновых кислот) и НАДН-дегидрогеназы (НДГ; дыхательная цепь). Показано, что в ранний период пост-ваготомического синдрома (3 сут) отмечается тенденция к повышению активности СДГ и НДГ (неспецифическая реакция на оперативное вмешательство). Через 7 сут регистрируются признаки нарушения функционирования цикла Кребса и дискоорди-нации работы этого звена биоэнергетики и дыхательной цепи, на что указывает снижение активности СДГ, МДГ и НДГ (на 23,5%, 15,5% и 14,№ соответственно, р < 0,05) и искажение корреляционных связей между данными параметрами. Наряду с этим наблюдается тенденция к уменьшению отношения МДГ/ЛДГ, что дает основание полагать, что ваготомия сопровождается активацией гликолитического механизма извлечения и аккумулирования энергии. Через 14 сут выявлена лишь тенденция к уменьшению активности СДГ и НДГ. В более отдаленные сроки (30 сут) выявляется

31

отчетливая тенденция (на границе статистической достоверности, р = 0,05) к снижению активности СДГ, МДГ и НДГ. Отношение МДГ/ЛДГ уменьшается еще в большей степени, что, по-ввдимому, следует рассматривать как проявление компенсаторной реакции - усиления анаэробного гликолиза в условиях относительного кислородного голодания. В отдаленный период после ваготомии (60,220 сут) отмечается нормализация всех изученных параметров биоэнергетики гладких миоцитов тонкой кишки. Наличие коррелятивных связей между показателями ПОЛ, с одной стороны, и параметрами биоэнергетики - с другой (К = 0,90), дает основание предполагать существование причинно-следственных отношений между ними и таким образом прийти к суждению,что интенсификация процессов свободнорадикального окисления липидов является одной из причин расстройств биоэнергетики гладких миоцитов сократительного аппарата тонкой кишки в условиях нарушенной вагусной иннервации.

Наряду с окислительными процессами предметом настоящего исследования явились и некоторые другие функционально значимые стороны метаболизма гладких миоцитов, а именно, водно-минеральный и белково-нуклеиновый обмены. Для этого определяли содержание общей воды, магнитно-релаксационные характеристики (отражающие степень структурированности воды) и концентрацию N3, К, Са, Р, Ре, Си в демукотизированных образцах кишки, а также содержание РНК и общего белка в цитоплазме гладких миоцитов мышечной оболочки (гистохимические данные). Показано, что ваготомия сопровождается повышением содержания общей воды в мышечной оболочке тощей кишки (на 18,1%, р < 0,05). При этом изменяются и их магнитно-релаксационные характеристики - увеличиваются времена спин-решеточной и спин-спиновой релаксации, что указывает на уменьшение степени структурированности воды и повышение ее подвижности. Описанные изменения водного метаболизма наиболее выражены через 7 и 30 сут. В те же сроки после ваготомии выявляются достаточно глубокие преобразования минерального метаболизма сократительного аппарата кишки, проявляющиеся в изменении содержания ряда элементов - увеличении Ш, Ге, Си (7 сут) и К (30 сут) и уменьшении Р (30 сут).

32

Наряду с водным и минеральным метаболизмом в данных условиях страдает и белково-нуклеиновый обмен, что проявляется в повышение уровня РНК и общего белка (тенденция) в цитоплазме гладких миоцитов через 3 сут (неспецифическая реакция на оперативную травму). Через 7 сут выявляются собственно денервационные изменения в метаболизме РНК и белков, выражающиеся в прогрессивном снижении их содержания к 30 сут (в случае белка отмечается временное повышение его уровня через 14 сут) с постепенным увеличением до контрольных значений через 220 сут. При этом обнаружена корреляционная связь между показателями белково-нуклеи-нового обмена и ПОЛ (II = 0,8 8), дающая основание предполагать, что нефизиологическая активация свободнорадикалыгого окисления липидов вносит определенный вклад в расстройства обмена нуклеиновых кислот и белков в гладких миоцитах мышечной оболочки кишки в условиях ваготомии.

5. ВЛИЯНИЕ АНТИГИПОКСАНТОВ И АНТИОШ1ДАНТОВ НА ТЕЧЕНИЕ НЕЙРОДИСТРОФИЧЕСКОГО ПРОЦЕССА В ТОНКОЙ КИШКЕ

5.1. Экспериментальная модель для определения противогипоксической активности фармакологических препаратов и подбор лекарственных средств для коррекции постваготомической гипоксии В основу модели положена способность антигипоксантов увеличивать время переживания гладкой мускулатуры кишки после искусственного прекращения ее кровоснабжения путем наложения лигатуры на сосудистую ножку, питающую сегмент кишки (в условиях острого опыта). В качестве объективного критерия жизнеспособности кишки использовали амплитуду МЭВ - параметр, величина которого прямо зависит от напряжения кислорода в ткани - Ю.М.Панцырев и соавт., 1982). Были протестированы 5 препаратов: гутимин (гуанилтиомочевша, 120 мг/кг), томерзол (5-эток-си-2-этилтиобензимидазол, 50 мг/кг), гамма-оксибутират натрия (300 мг/кг), гамма-оксибутират лития (1500 мг/кг), дибунол (2,6-дитретбутил-4-метилфенол, 25 мг/кг). Наиболее эффективными в плане увеличения времени переживания кишки в условиях ишемии оказались томерзол и дибунол (повышали данный показатель на 84,1% и 71,7% соответственно, р < 0,05).

5.2. Анализ эффектов аитигипоксапта томерзола и аитиоксиданта дибунола на состояние тонкой кишки в условиях вагусной денервации

Для того, чтобы проверить сложившееся в ходе выполнения исследования предположение о важной роли гипоксического фактора и сопряженной с ним активации ПОЛ в патогенезе постваготомических перестроек структурно-метаболической и функциональной организации тонкой кишки был использован прием, позволивший целенаправленно воздействовать на эти патогенетические звенья С этой целью ваго-томированньш крысам начиная со 2-го дня после операции на протяжении 30 сут вводили антигипоксант томерзол или антиоксидант дибунол.

Для оценки эффективности коррегирующего действия данных препаратов на структурно-функциональную организацию слизистой оболочки кишки использовали следующие параметры: толщина кишечного эпителия, удельная площадь лимфоцитов собственной пластинки слизистой оболочки, цигограмма тканевых базофилов и индекс их насыщения гепарином, число бокаловидных клеток, продуцирующих различные типы углеводсодержащих биополимеров (нейтральные гликопротеиды, глюкозаминогликаны, сульфогликопротеиды) в эпителии крипт и ворсинок. Показано, что введение ваготомированньш крысам томерзола или дибунола приводит к статистически достоверному увеличению толщины эпителиального пласта, покрывающего кишечные ворсинки, до контрольного уровня: с 3,7 ыкм до 4,31 мкм (томерзол) и 4,37 мкм (дибунол) (р < 0,05), что дает основание квалифицировать эффект данных препаратов на его функциональное состояние как положительный. В пользу этого также свидетельствуют результаты гистохимического исследования слизепродуцирующей деятельности кишечного эпителия, которая обеспечивается, как известно, бокаловидными клетками. Так, у ваготомированных крыс, получавших томерзол, число бокаловидных клеток, синтезирующих нейтральные гликопротеиды и клеток, вырабатывающих глюкозаминогликаны, в составе эпителия ворсинок снижается почти до контрольного уровня: с 17,3 до 16,6 и с 15,5 до 13,0 соответственно (р < 0,05). Введение дибунола приводит к аналогичному результату - уменьшению числа бокаловидных клеток, продуцирующих глюкозаминогликаны (на границе статистической достовер-

34

ности, р = 0,05). Тот факт, что оба препарата не снижают увеличенного в условиях ва-готомии числа бокаловидных клеток, синтезирующих сулъфогликопротеиды, по всей видимости, следует расценивать как положительный момент их фармакологического действия, поскольку, как указывалось выше, этот тип углеводсодержащих биополимеров по отношению к кишечному эпителию выполняет протекторную функцию. О благоприятном действии изученных препаратов на слизистую оболочку кишки в условиях ваготомии также свидетельствует то обстоятельство, что они (в большей степени дибунол) в определенной мере нормализуют функциональное состояние ее туч-ноклеточного аппарата, частично ликвидируя застой секрета в тканевых базофилах собственной пластинки. Объективно это выражается в том, что под их влиянием снижается почти до контрольного уровня значение индекса насыщения гепарином, повышенного в группе ваготомированных крыс (гомерзол - с 157,9% до 127,4%, дибунол -с 157,9% до 124,2%). В данной серии исследования также использовали такой морфологический признак как удельная площадь лимфоцитов в собственной пластинке слизистой оболочки кишки. Показано, что на этот параметр изученные препараты существенного влияния не оказывают; выявлена лишь тенденция к его снижению у ваготомированных крыс, получавших томерзол или дибунол. Поскольку увеличение содержания лимфоцитов в слизистой оболочке кишки в этот период постваготомического синдрома, по всей вероятности, является одним из проявлений активации ее местного иммунного аппарата, мы склоняемся к суждению о том, чтобы эту сторону действия данных препаратов расценивать как положительную.

Эффективность фармакологического действия данных препаратов на морфо-функциональное состояние сократительного аппарата шпики в условиях ваготомии оценивали по следующим критериям: скорость местного кровотока, напряжение кислорода, концентрация малонового диальдетада, содержание общей воды, времена спин-решеточной и спин-спиновой релаксации, толщина мышечной оболочки, параметры электрической активности. Показано, что введение ваготомированным крысам дибунола сопровождается повышением (почти до контрольного уровня) скорости местного кровотока (с 153,3 до 219,0 мл/мин/100 г ткани, р < 0,05) и напряжения кисло-

35

рода (с 34,5 до 54,5 мм рт. ст., р < 0,05) в мышечной оболочке кшцки. Томерзол повышает напряжение кислорода в тканях сократительного аппарата кишки (с 34,5 до 58,0 ми рт. ст.). На состояние водного метаболизма мышечной оболочки тонкой кишки при ваготомии оба препарата оказывают благоприятное действие: томерзол уменьшает до контрольного уровня содержание общей воды (с 101,8% до 99,5%, р < 0,05), дибунол -время спин-решеточной релаксации (с 339,5 до 377,6 мсек, р < 0,05). Как томерзол, так и дибунол оказывают частичный нормализующий эффект на толщину мышечной оболочки кишки. Что касается влияния исследованных препаратов на функциональное состояние сократительного аппарата кишки при ваготомии, то на основании анализа картины электрической активности органа в этих условиях можно с уверенностью утверждать, что они оказывают на двигательную функцию кишки выраженное коррегируюгцее действие. Последнее проявляется в нормализации таких параметров как отношение частоты групп МЭВ к частоте МЭВ (томерзол, дибунол), отношение максимальной амплитуды МЭВ к минимальной в группах МЭВ (томерзол), крутизна изменения амплитуды в группах МЭВ (томерзол, дибунол), амплитуда МЭВ (томерзол).

В контрольных сериях эксперимента показано, что у интактных животных ни томерзол, ни дибунол (будучи использованными в тех же дозах и режиме введения) статистически достоверных изменений исследованных параметров не вызывают.

ОБСУЖДЕНИЕ

Полученные в настоящем исследовании результаты дают основание утверждать, что одним из ведущих звеньев нейродистрофического процесса, развивающегося в тонкой кишке в условиях нарушения вагусной иннервации, является циркуля-торная гипоксия я сопряженные с ней расстройства биоэнергетики, метаболизма, структурной и функциональной организации органа, в первую очередь, его слизистой и мышечной оболочек. Само по себе это утверждение не является абсолютно новым, так как рядом морфологов, наблюдавших сосудистые расстройства в органах и тканях с нарушенной иннервацией, высказывалось предположение о развитии в них кис-лорододефицитного состояния (Т.А.Григорьева, 1963, О.В.Волкова и соавт., 1972,

36

О.В.Волкова, 1978, Ю.К.Елецкий, 1984). Некоторые косвенные факты, а именно, перестройка митохондрий печени, лишенной вагусной иннервации, по гипоксическому типу (нарушение окислительного фосфорилирования, снижение Са-аккумулируклцей способности, повышение уровня солюбилизации цитохрома) также рассматривались в качестве аргумента в пользу данного предположения (Ю-К.Елецкий, А.А.Зозуля, 1977). Новизна наших данных заключается в том, что нам впервые удалось путем непосредственного определения напряжения кислорода в тканях кишки установить факт развития в ней кислорододефицитного состояния, доказать циркуляторную природу гипоксии и изучить ее последствия.

В настоящем исследовании показано, что нарушение вагусной иннервации тонкой кишки сопровождается развитием в ее слизистой оболочке комплекса морфо-фушщиональных перестроек, которые проявляются в дистрофических изменениях основных структурных компонентов последней (эпителия, собственной пластинки, микрососудов) и расстройстве секреторной функции (изменении «профиля» синтезируемых бокаловидными клетками углеводсодержащих биополимеров и явлениях гиперсекреции). В большинстве работ, посвященных изучению этого вопроса, описываются аналогичные изменения слизистой оболочки кишки (И.Х.Мийдла и соавт., 1984, ИМБайбеков, 1986, ЭТ.Исмаилов и соавт., 1987, \¥.ВаШп§ег е! а1., 1964, Л.1ла\'а£, БЛ^е, 1972, Б^пор, НЛУезоктоБЫ, 1978, Т.СоКлдгаЫ, 1995). В то же время ряд авторов не выявили сколько-нибудь существенных изменений в тонкой кишке при нарушении вагусной иннервации (Н-ЕШб, ХРгуБе-Ба\чез, 1967, ХЛия111а е! а1., 1972). Несовпадение результатов этих исследований с нашими данными, по всей видимости, объясняется различиями в сроках наблюдения (изучались, как правило, отдаленные сроки, до 32 нед).

Как показали результаты настоящего исследования, ваготомия сопровождается развитием в сократительном аппарате тонкой кишки сложного комплекса структурно-метаболических и функциональных изменений. Преобразования структурной организации мышечной оболочки сводятся к ее дистрофическим изменениям, метаболизма - к активации ПОЛ, нарушению водно-минерального и белково-нуклеинового

37

обмена, функционального состояния - к расстройству функционирования водителя ритма кишечной перистальтики, снижению тонуса гладкой мускулатуры, ослаблению и нарушению (дискенезии) моторики и эвакуаторной деятельности. Наши данные в принципе совпадают с результатами других исследователей (П.Ф.Карпов, 1971, БЛ.Сенько, 1976, Н.Г.Гравировская, 1980, С.АЛернякевич, 1981, В.АВондаренко и со-авт., 1987, Э.Г.Исмаилов, 1987, О.ТЬотряоп е1 а1., 1982). Однако, следует отметить, что они существенно дополняют имеющиеся представления об особенностях развития нейродистрофического процесса в кишечнике и позволяют глубже понять его патогенетические механизмы, так как получены в результате динамического морфофунк-ционального исследования на одной экспериментальной модели с привлечением комплекса взаимодополняющих методов. Вместе с тем, было бы ошибочным полагать, что в настоящее время сформировалось однозначное представление о закономерностях развития нейрогенных дистрофий в тонкой кишке. В литературе имеются сведения, не соответствующие нашим данным и результатам вышеперечисленных исследователей (ААКиров и соавт., 1974, Ю.МЛанцырев, ВХ.Анастасьева, 1979, ВЯШварц, В.А.Картазаева, 1986, С.Випкег еЬ а1., 1967, Шог^оп, Л.СкШ^ег, 1976). Поскольку эти данные получены на разных видах животных и в клинических наблюдениях, на различных отделах кишечника при разных видах денервации и с привлечением иных методов исследования, они с трудом могут быть сопоставлены с результатами настоящего исследования.

При изучении реактивности сократительного аппарата тонкой кишки в условиях ваготомии нами было показано, что последняя приводит к искажению характера ответной реакции кишки на синтетический аналог ацетилхолина - ацеклидин. В частности, через 30 сут это проявляется в увеличении крутизны изменения амплитуды МЭВ в группах МЭВ и отношения максимальной амплитуды МЭВ к минимальной в группах МЭВ, а также снижении частоты волн I типа и исчезновении волн Ш и IV типов, в то время как у интакткых крыс изменения этих параметров имеют противоположную направленность. Эти наблюдения в принципе совпадают с общими представлениями об изменении реактивности денервированных структур. По этому вопросу в

38

литературе имеется обширная библиография (В.Кенпон, АРозенблют, 1951, О.В.Волкова, 1978, Ю.К.Елецкий, 1984). Встречаются и работы, посвященные исследованию реактивных свойств органов пищеварительной системы в условиях вагусной денер-вации. Так, С.Д.Гройсманисоавт.(1970), ЬСиМеггез и соавт. (1971) продемонстрировали изменение характера ответной реакции кишки на карбохалш!, Ю.К.Елецкий и со-авт. (1984, 1989), Т.К.Дубовая (1991) - печени - на тканеспецифические ингибиторы митоза, частичную гепатэктомию, введение гепатотропнога яда (тетрахлорметана), кровопотерю и некоторые канцерогены. Одна из возможных причин изменения реактивности денервировашшх тканей, по мнению авторов, заключается в преобразовании их рецепторного аппарата

Нами разработана специальная экспериментальная модель для количественной оценки противогипоксической активности фармакологических препаратов. Модель основана на определении в условиях острого опыта разницы времен переживания частично изолированного (с сохранением сосудистой ножки) фрагмента тощей кишки после искусственного прекращения кровоснабжения путем наложения лигатуры на питающие его сосуды у контрольных крыс и крыс, которым предварительно (за 3 час - дибунол или 70 мин - остальные препараты - до исследования) вводили испытуемый препарат. В качестве объективного критерия жизнеспособности кишки использовали амплитуду МЭВ - параметр, величина которого прямо зависит от напряжения кислорода в ткани - Ю.М Пакцырев и соавт., 1982). С помощью этой модели были отобраны эффективные протмвогипоксические препараты антигипоксант (актопротек-тор) томерзол и антиоксидант дибунол. Введение одного из них ваготомированным крысам приводило к частичной нормализации морфофункционального состояния тонкой кишки, что, на наш взгляд, является убедительным аргументом в пользу предположения о важной патогенетической роли гипоксии и сопряженной с ней активации ПОЛ в развитии описанных выше постваготомических изменений в органе. В плане обсуждения этих данных определенный интерес представляют результаты исследования А.А.Зозули и КЖЕлецкого (1977), в котором была предпринята положительная попытка фармакокоррекции постваготомических изменений митохондриального

39

аппарата печени с помощью альфа-токоферола. Однако этот факт вряд ли можно считать строгим доказательством активации ПОЛ в мембранах митохондрий в данных условиях, поскольку витамин Е является полифункциональным агентом и его положительный эффект на состояние органелл может быть связан с другими сторонами (механизмами) биологической активности, в частности, стимуляцией биосинтеза ге-миновых ферментов, стабилизацией биомембран (АЛКолотшюва, Е.П.Глушанков, 1976, ДНЯхнина, 1980, П.Г.Богданов, 1986, РЛВинер, 1986, Ь-СИеп, 1989, Р.Кпек!, 1991, ВЛеший, 1993, 1ШоК, 1998).

Таким образом, на основании проведенного исследования можно прийти к заключению, что нарушение вагусной иннервации тонкой кишки приводит к развитию в ней сложного комплекса структурно-метаболических и функциональных изменений. Анализ динамики этих преобразований, а также прицельное изучение некоторых звеньев их патогенеза позволили в порядке рабочей гипотезы предложить кине -тическую схему нейродистрофического процесса. При этом мы исходили из представ -ления, что в органе на всех этапах развития нейрогенной дистрофии протекают деструктивные, приспособительные и компенсаторные процессы, однако интенсивность их выраженности в различные фазы неодинакова. В соответствии с этой схемой в по-стваготомическом синдроме можно ориентировочно выделить следующие пять фаз: I фаза (до 3 сут) - постоперационные неспецифические изменения, П фаза (до 7 сут) -максимальные морфофункциональные изменения дистрофического и деструктивного характера - фаза напряжения, Ш фаза (до 14. сут) - относительная нормализация исследованных показателей - фаза частичной адаптации, IV фаза (до 30 сут) - возобновление дистрофических, деструктивных и дисфункциональных процессов - фаза дизадаптации, V фаза (60-220 сут) - устойчивая адаптация. Показано, что в развитии нейродистрофического процесса в тонкой кишке при ваготомии важную роль играет циркуляторная гипоксия и сопряженная с ней активация свободнорадикального окисления липидов.

выводы

1) Изменение условий иннервации тонкой кишки (ваготомия) реализуется глубоким нарушением гомеостаза органа, сопряженным с перестройкой системы его кровоснабжения, преобразованиями биоэнергетики, метаболизма и структурной организации; постваготомическая реакция характеризуется волнообразным течением с наибольшей выражетюстью патологических изменений на 7 и 30 сут, относительной нормализацией структурно-функционального статуса через 14 сут и его полной реабилитацией к 220 сут наблюдения.

2) В генезе нейродистрофии существенную роль играет сосудистый фактор - ваготомия индуцирует дискоординацию системы кровоснабжения органов гастро-дуоденального региона (перераспределение кровотока, сокращение притока крови к тонкой кишке), расстройство внутриорганной гемодинамики (снижение скорости и изменение кинетики кровотока), преобразование функциональной морфологии микроциркуляторного русла кишки.

3) Нарушение микроциркуляции, сопряженное с трансформацией архитектоники терминального кровеносного русла, застойными явлениями в обменно-емкостном звене, изменением структуры и повышением проницаемости стенки микрососудов (как следствие, геморрагии, гидратация интерстиция), результируется развитием циркуляторной гипоксии и активацией процесса перекисного окисления ли-пидов. Коррегирующий эффект аитигипоксантов и антиоксидантов подтверждает важное значение этих механизмов в патогенезе денервационного синдрома.

4) Структурной основой дисфункции тонкой кишки при ваготомии является хронологически сочеганное поражение слизистой и мышечной оболочек органа деструктивно-дистрофического характера, регистрируемое на тканевом, клеточном и субклеточном уровнях:

в слизистой оболочке отмечается уплощение и очаговая десквамация эпителия, явления клеточной дистрофии (отек или гомогенизация цитоплазмы, нарушение структуры органелл, активация аугофагического процесса и др.), сочетающиеся с отеком стромы;.

- в мышечной оболочке на фоне гидратации интерстиция наблюдается нарушение мио-миоцитарных связей, изменения ультраструктуры гладких миоцитов (набухание митохондрий, дезорганизация актшгавых филаментов на фоне просветления или уплотнения цитоплазмы), гибель отдельных меток.

5) В течение нейродиетрофического процесса развивается комплекс структурных, метаболических (расстройства водно-минерального и белково-нуклеинового обменов) и биоэнергетических (разнонаправленные изменения активности ферментов системы клеточного дыхания и гликолиза) нарушений сократительного аппарата. Эти изменения в совокупности с утратой нейрогенной координации мышечных. сокращений ассоциируются с нарушением электрогенеза в гладких миоци-тах, извращением реакции на синтетический аналог ацетилхолина - ацеклидин, снижением мышечного тонуса, дисфункцией водителя ритма кишечной перистальтики и, как следствие, нарушением моторно-эвакуаторяой деятельности тонкой кишки.

6) Важным компонентом постваготомической реакции является интенсификация компенсаторно-приспособительных процессов, способствующих восстановлению статуса и адаптации органа к новым условиям функционирования: стимуляция механизмов внутриклеточной регенерации и митотического деления, активация местного иммунного аппарата, гиперпродукция слизи с повышенным содержанием сульфогликопротеидов, обладающих протекторным действием и др.

7) В условиях экспериментальной модели хронической дуоденальной язвы показано, что локальное позитивное влияние вагусной денервации (ускорение эпители-зации и реконструкции структуры слизистой и мышечной оболочек в зоне дефекта) может базироваться на эффектах ваготомии, идентичных таковым у исходно интактных животных: релаксирующем влиянии на гладкую мускулатуру (купирование спастических явлений, присущих язвенному процессу), активации про-лиферативных процессов,а также повышении протективных свойств кишечной слизи и подавлении кислотопродукции железами желудка (создание благоприятных условий для реализации репаративных процессов).

8) Постденервационные изменения в тонкой кишке имеют волнообразную динамику. Для них характерно развитие двух разнонаправленных процессов деструктивного и адаптационно-компенсаторного. В ходе нейродистрофического процесса можно условно выделить пять фаз, особенности которых определяются соотношением активности вышеуказанных явлений: Iфаза (до 3 сут) - постоперационные неспецифические изменения, II фаза (до 7 сут) - развитие деструктивно-дистрофических процессов с существенным изменением функциональных параметров - фаза напряжения, III фаза (до 14 сут) _ относительная нормализация морфофунх-циональных показателей фаза частичной адаптации, IV фаза (до 30 сут) - активизация патологических процессов - фаза дизадаптации, V фаза (60-220 сут) -устойчивая адаптация.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

Полученные данные о состоянии функциональной, метаболической, структурной организации и реактивности сократительного аппарата тонкой кишки в различные периоды постваготомического синдрома необходимо учитывать в клинической практике при совершенствовании методов профилактики и лечения послеоперационных осложнений у больных дуоденальной язвой, перенесших операции, сопряженные с перерезкой блуждающих нервов или их ветвей. В этом плане представляется перспективным клиническое осмысление данных об изменении характера ответной реакции кишки на стимуляцию холиномиметиками в условиях ваготомии, что может оказаться полезным при разработке оптимальных режимов фармакологической регуляции двигательной функции кишечника у этой категории больных Некоторые результаты представляют интерес для фармакологов, в частности, оригинальная экспериментальная модель для количественной оценки противогипоксической активности препаратов. Кроме того, результаты работы могут быть использованы в лекционном курсе и на практических занятиях по нормальной и патологической физиологии, общей патологии.

ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ

Результаты исследования внедрены в практику учебной и научно-исследовательской работы на кафедре патологической физиологии, кафедре гистологии и эмбриологии лечебного факультета, лаборатории патофизиологии пищеварения и отделе экспериментальной хирургии МЛК Российского государственного медицинского университета, кафедре пропедевтики внутренних болезней Московской медицинской академии им. И.МСече-нова, терапевтической клинике Рязанскою медицинского института им. И.ППавлова, лаборатории патологической анатомии Ташкентского научного центра хирургии. По материалам исследования разработано 1 изобретение и 2 рационализаторских предложения отраслевого значения.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Морфо-функциональный анализ состояния тонкой кишки в условиях поддиафраг-мальной ваготомии// Эксперим. хирургия и анестезиология, 1976, 5, с.34-38 (совм. с КЖЕлецким).

2. Изменения морфологии слизистой оболочки тощей кишки в условиях двусторонней поддиафрагмальной ваготомии// Бюл. эксперим.биол. и мед., 1976, 5, с. 628-632 (совм. с КЖЕлецким).

3. Фосфорно-кальциевьп1 обмен в условиях двусторонней поддиафрагмальной вагото-мии у крыс// Патол. физиол. и эксперим. терапия,1979, 5, с.528-530 (совм. с Ф.П.Га-лушкой).

4. Суточный ритм и интенсивность клеточной пролиферации эпителия тощей кишки при двусторонней стволовой ваготомии// Биол. науки, 1980, 12, с.42-48 (совм. с С.ГМамонтовьш).

5. К вопросу о роли нервного фактора в регуляции структуры и функций тонкой кишки// Журнал общ. биол., 1981,3, с.457-466.

6. К вопросу о роли вегетативной нервной системы в регуляции минерального обмена// Известия АН СССР (сер.биол.), 1981,4, с.518525.

7. Проксимо-дистальный градиент пристеночного рН в пищеварительном канале крыс в норме и в различные сроки после двусторонней стволовой ваготомии// Бюл.экспе-рим.биол. и мед, 1981, с.26-29 (совм. с АЛ.Эттингером).

8. Гистофизиология тонкой юшки и печени крыс в условиях ваготомии// В кн.: Тр. Все-союзн.съезда анатомов, гистологов и эмбриологов, Минск, 1981, а 415 (совм. с Г.К.Ду-бовой).

9. Биоэлектрическая активность гладких мышц желудочно-кишечшготракта крыс в условиях перераспределения тонуса симпатического и парасимпатического отделов вегетативной нервной системы//Тез. докл. Всесоюзн. конф. по физиол. и патол. кор-тико-висцер. взаимоотношений, Л, 1982, с. 71 (совм. с К.В.Смирновым, АД Эттинге-ром, А.Н.Петрусенко).

10. Электрическая активность гладких мышц тонкой кишки в условиях нарушенной иннервации// В кн.: Тр.1-го всесоюзн. биофизического съезда, М, 1982, т.Ш, с.166-177 (совм. с А.ПЭттингером).

11. Концентрация ионов Hf в параиукозном слое пищеварительного канала крыс в нормальных и патологических условиях// Там же, с.88 (совм. с АЛ. Эттингером).

12. Влияние поддиафрагмальной ваготомии на профиль пристеночного рН пищеварительного канала крыс с хронической экспериментальной язвой двенадцатиперстной кишки//Патол.физиол. и эсперии. терапия, 1982,1,с.30-33 (совм. с А.П.Эттингером).

13. Влияние ваготоми на становление и развитие хронической экспериментальной (ацетатной) язвы двенадцатиперстной кишки у крыс //Арх. патол., 1982,1,с. 54-58 (совм. с Ю.К.Елецким, ААТуревскии, С.М.Зиматкинъм).

14. Методика морфометрии дефектов стенки желудка и кишечника//Бюл. эксперим. би-ол и мед., 1982,4, с.111-112 (совм. с СЖЗиматкиным, КН.Угляница).

15. Развитие хронической экспериментальной (ацетатпой) язвы двенадцатиперстной кишки у крыс после ваготомии// Архив анат., гистол. и эмбриол., 1982,8, с.38-43 (совм. с С.М.Зиматкиным).

16. К вопросу о роли нервного фактора в регуляции пристеночного рН пищеварительного канала у крыс// Известия АН СССР (сер.биол.), 1983, 6, с.835-832 (совм. с АЛ.Эт-тингером).

17. Временная организация и уровни регуляции тканевого гомеостаза// В кн.: Цитологические механизмы гистогенезов. Ташкент, 1983, с 106-109 (совм. с С.Г.Мамонтовьш, В.Б,Захаровым, Н.М.Суворово11, Т.В.Савченко, Ю.К.Елецким).

18. Гистофизио.тогия тонкой кишки крыс в условиях поддиафрагмальной ваготомии// В кн.: Морфофункциональный анализ органов пищеварительной системы при нарушении их иннервации. М, 1984, с.80-88.

19. Возможности спектрального анализа кривой электрической активности гладких мышц тонкой кишки с помощью анализатора БЕРГФУРЬЕ// В кн.: Математические и вычислительные методы в биологии. Пущино, 1985, с223-224 (совм. с.АП.Эттинге-ромДЮ.Ерохиным ).

20. Усовершенствованная экспериментальная модель для изучения постваготомических осложнений у больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки//Вестник АМН, 1985, 7, с.61-68 (совм. с Ю.К.Елецким, А.П.Эттингером, С.М.Зиматкиным).

21. Effect of truncal vagotomy on the structural and functional organization of small intestine of the rat// Italian J. of Gastroenterology, 1985,17,4, p.189-194.

22. Изменение напряжения кислорода в органах пищеварительной системы крыс при стволовой ваготомии// В кн.: Тез. докл. 14-й Всесоюзн. конф. по физиологии пищеварения и всасывания. Тернополь-Львов, 1986, с.306-307.

23. Влияние дибунола на течение нейродистрофического процесса в органах пищеварительной системы крыс// В кн.: Тез. докл. X Всесоюзн. съезда анатомов, гистологов и эмбриологов, Полтава, 1986, с.372 (сови. с МД.Зайденберг, Г.А.Ломоносоеой, М.И.Ша-ширшюй, А.Б.Строгановой, А,В.Быковым).

24. Влияние синтетических фенольных антиоксидантов на величину пристеночного рН желудочно-кишечного тракта интактных и ваютомированных крыс// Вюл. экспе-рим.биол.имед., 1987,7, с.37 (совы, с АПЭттингером).

25. Сравнительная характеристика влиягош природных и сшггетических антиоксидантов на кислотопродукцию в желудке интакных и ваютомированных крыс// В кн.: Тез. докл. 1П Всесоюзн. конф. «Биоантиоксиданг», М, 1989, т.И, с.166-167 (совм. с Ю.К.Елецким, АПЭттингером).

26. Роль парасимпатической нервной системы в регуляции напряжения кислорода и регионарного кровотока в органах пищеварительной системы у крыс// Известия АН СССР (сер. биол.), 1989, 3, с.461-466 (совм.с АПЭттингером, М.Д.Поливодой).

27. Роль парасимпатической нервной системы в регуляции обмена некоторых микро- и макроэлементов (экспериментальное исследование)// В кн. Материалы Всесоюзн. симпозиума (с международным участием) «Микроэлеметозы человека», М, 1989, с.90-91 (совм. с КЖЕлецким).

28. Влияние природных и синтетических антиоксидантов на профиль пристеночного рН пищеварительного канала в нормальных и патологических условиях/ / Известия АН СССР (сер. биол), 1989, 6, с.843-849 (совм. с АПЭттингером).

29. Изменения объема популяции бокаловидных экзокриноцитов эпителия тонкой кишки в условиях ваготомии и введения дибунола// В кн.: Тез.докл. XV Всесоюзн. конф. «Физиология пищеварения и всасывания», Краснодар, 1990, с.99-100 (совм. с Ю.К.Елецким, А.В.Соколовым).

30. Гистохимический анализ ферментов транспорта и биоэнергетики энтероцитов тонкой кишки крыс в условиях ваготоюш и введения дибунола// Вюл.эксперим.биол. и мед., 1990,11, с.543-545 (совм.с КЖЕлецким).

31. Комбинированный метод окраски бокаловидных и тучных клеток на срезах тонкой кишки, фиксированной в жидкости Карнуа// Архив анатомии, гистологии и эмбриологии, 1991,3, с.77 (совм. с М.Г. Шубичем).

32. Обоснование применения дибунола для коррекции постваготомической гипоксии пищеварительных органов у крыс// В кв.: Тез. докл. Ш Международн. конф. «Экологическая патология и ее фармакокоррекция.» Чита, 1991, ч.И, с.226 (совм. с АПЭттингером, МДЛоливодой).

33. Changes in small intestine muscle electrical activity under the conditions of experimental duodenal ulcer//in: Constituent congress. International Society for Pathophysiology. Abstracts. Moscow, 1991, p.155 (совм. с АЛ.Эттингером, М.Д.Поливодой).

34. Применение дибунола для фармакокоррекции постваготомической гипоксии пищеварительных органов у крыс// Бюлл. эксперта, биол. и мед., 1991,6, с.633-634 (совм. с М.Д.Поливодой, А.П.Эттингером).

35. Влияние ваготомии на кровообращение в мышечной оболочке тонкой кишки (экспериментальное исследование)// В кн.: Тез. докл. X съезда хирургов Белоруссии. Минск, 1991, с. 260 (совм. с А.П.Эттшггером, МДЛоливодой, ЛЛПироговой, В.М.Ким).

36. Электромиографический метод определения противогипоксической активности препаратов// Эксперим. и клин, фармакол., 1992, 2, с.63-64 (совм. с АПЭттингером, М.ДЛоливодой, МЛАнуровым).

37. Изменение некоторых свойств каталазы тонкой кишки крыс при ваготомии// Патол. физиол. и эксперим. терапия, 1992,3, с.44-46 (совм. с БШТитовым, Ю.МЛетренко).

38. The influence of intestinal ischemia on elelctrical activity, oxygen balance and ultrastructure of small bowel//in: European Surgical Research, 1992, N 2, SuppLl, p.5 - 6 (совм. с ТКДубовой).

39. Вагусная регуляция электрической активности сократительного аппарата тонкой кишки// Известия РАН (сер.биол.), 1993, 3, с.436-446 (совм. с АЛЭгпшгером).

40. Роль парасимпатической нервной системы в регуляции регионарного кровообращения в органах пищеварительной системы// Известия РАН (сер.биол.), 1993, 6, с.866-873 (совм. с МДПоливодой, Л.Б.Пироговой, В.М.Кимом, ТКДубовой, А.П.Эттиигером).

41. Коррекция постваготомических нарушений двигательной функции тонкой кишки с помощью антигипоксантов и антиоксидантов// Бюлл. эксперим.биол.и мед.,1993, 8,с.132-134 (совм. с АПЭттингером).

41 Роль гипоксии в развитии постваготомических нарушений двигательной функции тонкой кишки и их коррекция антигипоксантами// В кн.: Тез. докл. VII Всероссийского симпозиума «Эколого-физиологические проблемы адаптации«, М, 1994, с. 299-300 (совм. с АПЭттингером).

43. Изменения содержания общей воды и магнитно-релаксационных характеристик печени и тонкой кишки в условиях ваготомии// Бюлл. эксперим. биол. и мед., 1995,10, с.42-44 (совм. с Т.КДубовой, АИ.Сергеевым).

44. Сравнительное морфо-физиологическое исследование тонкой кишки крыс в условиях нарушения симпатической и парасимпатической иннервации// Морфология, 1994,7-12, с.100-110 (совм. с Ю.К.Елецким, АЛСиротиньш).

45. Морфофункциональное исследование роли гипоксии в развитии нейродистрофичес-кого процесса в органах пищеварительной системы//Морфология, 1996, 2, с50 (совм. с ТКДубовой, АПЭттингером).

46. Применение ангигипоксантов и антиоксидантов для фармакокоррекции нарушений метаболизма воды в печени и тонкой кишке//Латол. физиол. и эксперим. терапия, 1996,4,33-36 (совм. с Т.КДубовой, АЛСергеевым).

47. Роль парасимпатической нервной системы в регуляции реактивности сократительного аппарата тонкой кишга//В кн.: Тр.Ш международной конференции по нейро-морфологии «Колосовские чтения-97», Санкт-Петербург, 1997, с.92 (совм. с А.П.Эт-тингером, Т.КДубовой, МДЛоливодой, Л.Ю.Пеньковым).

48. Морфофункциональное исследование роли парасимпатической нервной системы в регуляции микроциркуляции крови в мышечной оболочке тощей кишки крыс//В кн.: Теадокл. Ш съезда физиологов Сибири и Дальнего Востока, Новосибирск, 1997, с.87 (совм. с Т.КДубовой, М.Д.Донсковой, АЛ.Эттингером, МДЛоливодой).

49. Изменение реактивности сократительного аппарата тонкой кишки в условиях нарушенной парасимпатической иннервацил//Известия РАН (сер. биол.), 1998, 2, с.272-276 (совм. с АИ.Хрипуном, АП.Эттингером, Т.К.Дубовой, МДПоливодой, Л.Ю.Пень-ковьш).

50. Микрогемодинамика и кислородное снабжение сократительного аппарата тонкой кишки в условиях вагусной денервации (морфофункциональное исследование)//Морфология, 1998,3, с.126-127 (совм. с Т.К.Дубовой, М.Д.Донсковой, АПЭттин-гером).

51. Вагусная регуляция микрогемодинамики и кислородного снабжения сократительного аппарата тонкой ктнки//Бкшьэксперим.биол. и мед., 1998, 8, с.142-146 (совм. с АЛ.Эттингером, Т.КДубовой, МД.Допсковой).

Изобретения по теме диссертации

1. Способ определения активности противогипоксических препаратов. Авторское свидетельство на изобретение N 1648348 от 15 января 1991 г. (совм. с АПЭттингером, МДЛоливодой, М.В.Ануровым).

Рационализаторские предложения отраслевого значения

1. Способ регистрации и оценки электромиограмм гладкой мускулатуры тонкой кишки наркотизированных крыс. Удостоверение на рационализаторское предложение N 03159 от 29 апреля 1988 г.

2. Комбинированный способ окраски бокаловидных и тучных клеток на срезах тонкой кишки крыс, фиксированной в жидкости Карнуа. Удостоверение на рационализаторское предложение № 0-3076 от 18 декабря 1987 г. (совм. с М.ГЛ1убичем).