Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Закономерности изменений процессов липопероксидации в тканях пародонта и десневой жидкости при воздействии стоматологического фотополимеризатора

1 о о д

1 8 !::01! 2032

На правах рукописи

Андреев Сергей Владиславович

ЗАКОНОМЕРНОСТИ ИЗМЕНЕНИЙ ПРОЦЕССОВ ЛИПОПЕРОКСИДАЦИИ В ТКАНЯХ ПАРОДОНТА И

ДЕСНЕВОЙ ЖИДКОСТИ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ СТОМАТОЛОГИЧЕСКОГО ФОТОПОЛИМЕРИЗАТОРА

14.00.16 - патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Чита - 2002

Работа выполнена в ГОУ Читинская государственная медицинская академия (ректор - заслуженный врач РФ, д.м.н., профессор A.B. Гово-рин)

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор кандидат биологических наук

Б.С. Хышиктуев

В.В. Альфонсов М.В. Максименя

Ведущая организация:

Государственное учреждение Научный Центр медицинской экологии Восточно-Сибирского Научного Центра СО РАМН, г. Иркутск

Защита состоится "_" ____ 2002 года в _ часов

на заседании диссертационного совета Д 208.118.01 при ГОУ Читинская государственная медицинская академия (672090, г. Чита, ул. Горького, 39а)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Читинской государственной медицинской академии (672090, г. Чита, ул. Горького, 39а).

Автореферат разослан ''_" _ 2002 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук А/" У! РЮ.Р. Агапова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Эволюция качества стоматологического обслуживания в России привела к широкому внедрению в клиническую стоматологию новых технологии и оборудования (Боровский Е.В. и соавт., 1996; Клементьева И. и соавт., 1998; Perez R.S. et al.. 2001). Важную роль при этом играют адгезивные технологии и восстановительные материалы. Существенным достижением является развитие светоактивирус-мых реставрационных материалов, для полимеризации которых используется фотонная энергия активирующей лампы.

В клинической практике более чем в 90% случаев используются галогеновые лампы высокой мощности (75 Вт), что обуславливает появление в выходном световом потоке паразитных ультрафиолетовых и инфракрасных составляющих (Макеева И.Ш., 1997). Наличие последних в световом потоке представляет собой потенциальный риск здоровью врача и пациента (Gaborian F et al., 1993; Hemmer W. et al., 1996). Ряд авторов отмечают развитие конъюнктивита (Medina G.E.,1997), атрофии сетчатки глаза (Davis L.G. et al., 1995), помутнение хрусталика (Katsugama S. et al., 1996), ожоги роговицы (Рощупкин Д.И. и соавт., 1993) врача и его помощника. Световой поток с наличием ультрафиолетовой и инфракрасной составляющих может приводить к повреждению кожи рук врача, придерживающего и направляющего световод (Hemmer W. et al., 1996). Длительное воздействие активирующей лампы приводит к ощущению сухости в полости рта больного, что связывают с повреждающим влиянием света на малые слюнные железы (Bednarska К. et al., 1999).

Показано, что ультрафиолетовая составляющая светового потока способствует патологическим изменениям в различных тканях (Майсурадзе В.Н., 1989; Thomas Р., 1991). Результаты исследований последних лет свидетельствуют о том, что при экзогенных повреждениях тканей паро-допта ведущая роль принадлежит микроциркуляторным расстройствам, приводящим к выраженной гипоксии (Афанасьев И.Б., 1998; Бабина O.A. и соавт., 1999; Сухова Т.В. и соавт., 2001; Tupet A. et al, 1999). В этих условиях нарушается баланс в системе «ПОЛ — антиоксиданты», что усугубляет течение патологического процесса (Ossola J.О. et al., 1998).

Вместе с тем, существующие диагностические подходы не в полной мере выявляют начальные изменения в тканях пародонта и не всегда могут быть использованы в клинике в связи с травматичностыо методов (биопсия), субъективностью полученпых данных (индексы зоспаления и гигиены). В настоящее время для ранней диагностики патологии пародонта внимание специалистов направлено на изучение содержимого деснево-го желобка - ясеневой жидкости (Боровский Е.В. и соавт., 1994; Петрович Ю.А. и соавт., 2001). Изменения параметров десневой жидкости мо-

гут использоваться как с диагностической целью (Вавилова Т.П., 1997), так и для контроля за эффективностью лечебных и профилактических мероприятии (Воскресенский О.Н. и еоавт., 1998).

Наряду с этим, сведения по оценке состояния системы «ПОЛ - анти-оксидапты» р, десневой жидкости при патологии пародокта, обусловленной повреждающим воздействием светового потока галогенового источника, отсутствуют, также не изучена роль латексной завесы - коффердама в профилактике осложнений со стороны пародонта.

Таким образом, изучение данной проблемы является актуальной с точки зрения установления новых звеньев механизма возникновения начальных патологических изменении в тканях пародонта при воздействии светового потока галогенового источника и разработки мер профилактики этих нарушений. Цель работы:

Установить закономерности сдвигов в системе «перекисное окисление липидов - антиоксиданты» в тканях пародонта и десневой жидкости при воздействии стоматологического фотополимеризатора, на основании полученных результатов обосновать эффективность применения латекс-нон завесы - коффердам в клинике. Задачи исследования:

1. Изучить состояние системы «перекисное окисление липидов ~ анти-окенданты» и тканях пародонта у экспериментальных животных при длительном воздействии света галогенового источника активирующей лампы.

2. Исследовать динамику параметров липопероксидации и аитиоксидакт-ной защиты десневой жидкости у пациентов при реставрационных работах с использованием фотополнмеризатора.

3. Изучить сдвиги перекисного статуса в условиях защиты коффердамом тканей полости рта при действии галогенового источника активирующей лампы в эксперименте к клинике.

4. Оценить эффективность применения латексной завесы «коффердам» у лиц с высоким и низким локальным перекисным статусом.

Научна» новизна. Впервые установлено, что в тканях пародонта у экспериментальных животных при облучении галогеновой лампой активируются процессы свободнорадикального окисления липидов с параллельным снижением антцокислительной активности.

Новыми являются данные о том, что в десневой жидкости, получаемой неинвазивным путем, у пациентов при длительном воздействии фотополимеризатора развивается дисбаланс в системе «перекисное окисление липидов - антиоксидантная защита», который может привести к усилению мсмбранодеструктивных процессов.

Усовершенствован подход к методике забора десневой жидкости для определения липофильных и водорастворимых продуктов свободпоради-кального окисления.

Впервые доказано, что применение латскснои завесы «коффердам» при выполнении реставрационных работ с помощью с-ветоотверждаемых материалов нивелирует дисбаланс в процессах липопероксидации и антп-окиелнтельной защиты в дсспевон жидкости, предохраняя ткани, окружающие зуб, от альтерирующего воздействия ультрафиолетовой составляющей светового потока.

Приоритетными являются результаты о высокой эффективности ла-тексной завесь; «коффердам» при выполнении сложных реставрационных работ у пациентов с исходным высоким локальным перекиспым статусом.

Теоретическая и практическая значимость. Теоретическая и практическая значимость работы заключается в том, что выявленные у экспериментальных животных и пациентов сдвиги в системе «нерекисное окисление лииидов - аптиоксидантная защита» являются важными звеньями патогенеза пострсставрациоииых осложнений со стороны пародонта. На этой основе доказана целесообразность применения латскснои завесы «коффердам» при выполнении реставрационных работ с помощью свето-отверждаемых композитных материалов. Это позволит значительно уменьшить частоту возникновения патологических состоянии пародонта и улучшить качество эстетических реставрационных работ.

На основании клинических наблюдений опубликовано информационное письмо «Применение коффердама при реставрационных работах» (Чита, 2001).

Полученные экспериментальные и клинические результаты используются при чтении лекций на кафедрах биохимии, гистологии, нормальной физиологии, патологической физиологии медицинской академии (г.Чита); при проведении практических занятий на кафедрах терапевтической стоматологии, стоматологии детского возраста, ортопедической стоматологии ЧГМА: в работе частных клиник «Дента люкс» и «ДентМастер» (г. Чита).

Апробация основных положений работы. Материалы исследования представлены на научно-практической конференции, посвященной 5-лстию образования НИИ педиатрии (Чита, 2000); на ]Х Международном Российско-Японском фонда медицинского обмена симпозиуме (Канадзава, 2001); совместном заседании кафедр биохимии, нормальной физиологии, гистологии, анатомии, патологической физиологии, стоматологии детского возраста, терапевтической стоматологии, хирургической стоматологии, ортопедической стоматологии Читинской медицинской академии и сотрудников НИИ педиатрии ВСНЦ СО РАМН (Чита, 2002).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 105 страницах машинописного текста, иллюстрирована 11 рисунками и 20 таблицами и состоит из введения, обзора литературы, описания экспериментального и клинического материала и методов исследования, двух глав собственных исследовании, заключения, выводов и списка литературы, включающего 80 отечественных и 83 зарубежных источников.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Длительное воздействие галогенового источника активирующей лампы приводит к дисбалансу системы «ПОЛ - антиоксиданты» в тканях пародонта, который характеризуется накоплением начальных и промежуточных продуктов липопероксидацпи и угнетением активности ан-тиоксидантных факторов.

2. Применение латсксной завесы «коффердам» нивелирует нарушения локального псрекисного статуса, которые могут служить патогенетическими звеньями парондояггатов и, следовательно, является высокоэффективным методом их профилактики.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальная часть. На первом этапе исследования нами были проведены опыты па 50 белых нелинейных крысах массой 250-300 г. В течение всего эксперимента животные содержались на стандартном рационе питания в условиях вивария.

В ходе эксперимента крысы были поделены на три группы. В первую и вторую опытные группы входило 20 и 18 животных соответственно; в контрольную - 12. Первая и вторая в течение 5 минут подвергались облучению полости рта галогеновон лампой марки «Megalux» CS (Германия) с мощностью светового потока 75 Вт. Время облучения ротовой полости у животных выбиралось в соответствии с теоретическим обоснованием продолжительности воздействия фотополимеризатора в клинике при сложных реставрационных работах и составляло в среднем 270с.

Первая группа крыс подвергалась облучению без использования ла-тексной завесы; крысам второй опытной группы производили защиту тканей, окружающих зуб, коффердамом.

Опыты проводили на иммобилизованных животных под гексенало-вым наркозом. Для исключения действия стрессорного фактора, группу контрольных крыс также фиксировали под гексеналовым наркозом на соответствующий период времени.

Объектом исследования служила ткань пародонта животных. Ткань

со стороны небной поверхности резцов забирали дважды: через 60 минут (первая подгруппа в каждой группе) и через 24 часа (вторая подгруппа в каждой группе) после облучения галогеповой лампой. У контрольных животных ткань забирали однократно.

Образцы ткани, после установления точной массы каждого, гомогенизировали а 0,05% трлс-НС1-буферо (рН=7,8), затем гомогенат центрифугировали 10 мин при 1000g, суперпатант вторично центрифугировали 10 мин при 14000gf, полученную надосадочную жидкость использовали для определения показателей переписного окисления и антирадикальной защиты.

Характеристика обследонанпых лиц. На втором этапе было проведено обследование 50 человек в возрасте от 18 до 35 лет, обратившихся за стоматологической помощью по поводу восстановления коронки зуба вследствие заболевания кариесом.

Структура стоматологической патологии приведена в таблице 1.

Необходимо подчеркнуть, что обследованию подвергались лица только со здоровым пародонтом (индекс ПМА во всех группах был равен 0, индекс гигиены = 1).

Все больные были разделены па две группы. Первая, включающая 23 человек, получала лечение без применения латексной завесы. Вторая группа составила 25 человек, которым перед манипуляциями накладывали коффердам. Время действия фотополимеризатора в обеих группах было одинаково и составляло от 250 до 300 сек (в среднем 277,6 ± 8,4 сек.).

У обследуемых групп объектом исследования являлась деспевая жидкость.Сбор десневой жидкости производили методом адсорбции на химически чистую хлопчатобумажную пить. Десневую жидкость забирали трижды: до свечения, через 1 час после свечения и через 24 часа после свечения. В обязательном порядке перед началом сбора жидкости зубы и прилежащую десну изолировали от слюны и высушивали с помощью воздушного пистолета. Затем с помощью пинцета помещали в промежуток между коронкой и корнем зуба со стороны вестибулярной поверхности две химически чистые хлопчатобумажные нити длиной 3 см, предварительно взвешенные на торсионных весах. После промокания на 2/3 длины нити удаляли пинцетом и снова взвешивали. Затем, установив точный вес, одну из нитей помещали в пробирку со шлифом и добавляли 500 мкл смеси Folch (хлороформ:метанол = 2:1). Липидный экстракт отмывали путем добавления 0,73% водного раствора хлорида натрия. Пробу энергично перемешивали и затем подвергали расслоению путем отстаивания. После отстаивания система разделялась на две фазы без образования промежуточного слоя. Верхнюю водно-метанольнуго фазу тщательно декантировали вакуумным отсосом. Растворитель удаляли в

Таблица 1

Структура стоматологической патологии у обследованных лиц

Патология Мужчины Женщины Всего

Абс. % Абс. % Абс. %

Caries media 1 1 11 22 7 14 18 36

Caries media 21 10 20 7 14 17 34

Caries media 22 3 6 2 4 5 10

Caries media 12 2 4 4 8 6 12

Caries media 13 1 2 1 2 2 4

Caries media 23 2 4 - 2 4

вакууме на роторном испарителе с температурой водной бани 40-45 СС. После упаривания' аликвоту липндов растворяли в 0,6 мл хлороформа. Параллельно готовили три контрольные пробы, заливая хлороформом химически чистую хлопчатобумажную нить с известным весом. В полученном таким образом экстракте нами исследовались следующие показатели: содержание общих липидов, величины веществ с изолированными двоимыми связями, диеновых конъюгатов, кетодиеноз и сопряженных три-снов.

Вторую хлопчатобумажную нить помещали в пробирку с 0,9% раствором хлорида натрия, взятого в количестве 0,5 мл, » экстрагировали в течение 35 минут при встряхивании на шейкере. Как и в первом случае, параллельно готовили три контрольные пробы. Экстракт, полученный вторым способом, использовали для определения концентраций общего белка, ТБК-актиеных продуктов, общей антиокислительной активности, активности каталазы.

Все методики выполнялись не позднее 3 часов после сбора десневой жидкости.

В десневой жидкости и гомогенате ткани пародонта были изучены следующие показатели: содержание общих липидов (La-Chema-Test) и общего белка (биуретовый метод), уровень веществ с изолированными двойными связями, диеновых конъюгатов, кетодиенов и сопряженных три-енов (И.А.Водчегорский и соавт., 1989), величины соединений, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (Л.И.Андреева и соавт., 1988), общая антиокислительная активность (М.Ш.Промыслов и соавт., 1990) и активность каталазы (М.А.Королюк и соавт., 1988).

Статистическую обработку результатов исследования проводили на персональном компьютере Intel Pentium с использованием общепринятых программ, включенных в электронные таблицы Microsoft Exell и Quatro-Pro пакета Microsoft office для операционной системы Windows-

98. Достоверность различий значений показателей в сопоставляемых группах оценили по величине 1 - критерия Стьюяепта для малых выборок (п<40). Величины 1 критерия Стыодента получали с помощью вышеупомянутых электронных таблиц.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ I. Влияние света галогенового источника фотополимеризатора на состояние системы «ПОЛ — антиоксидантная защита» в тканях пародоита у экспериментальных животных.

Воздействие галогенового источника активирующей лампы етя паро-допт в течение 5 минут приводило к значительной активации процессов свободнорадикального окисления липидов. Так, спустя час уровень диеновых конъюгатов возрастал в геггтановой фазе — более чем на порядок (р<0,001), в изоиропанольной - на треть (р<0,01); величины гептанра-створимых карбонильных соединений увеличивались в 9 раз (р<0,001), изопропанолрастворимая фракция кетодиенов и сопряженных триенов повышалась в 1,5 раза (р<0,01) относительно таковых у контрольных крыс, (рис.1).

Относительное содержание первичных и промежуточных продуктов псрскисного окисления в обеих фазах также поднималось: в гептановой Е.,,, ,.,0 увеличивалось более, чем втрое от контроля, а Е,7р/>,0 практически в 4,5 раза. Менее выраженный рост регистрировали в изопропанольной фракции: на 54,4% увеличивалось относительное содержание диеновых конъюгатов и на 73,8% - КД и СТ от контрольных параметров. Величины ТБК-нозитивного материала увеличивались на 52,6%) от исходных цифр (рис.1). В этот период вполне логичной выглядела реакция антпок-сидантной системы: величины общей антиокислительной активности возрастали на 39,8%) (р<0,001), по в то же время скорость каталазной реакции снижалась и составляла 76,4% (р<0,001) от исходной (рис.2).

Через сутки после облучения нормализации вышеописанных сдвигов не происходило. Содержание диеновых конъюгатов и карбонильных соединений в обеих фазах липшшой вытяжки незначительно уменьшалось, тем не менее оставаясь выше значений до облучения. В свою очередь, соотношения первичных и вторичных интермедиатов к субстратам пере-кисного окисления в изопропанольной фазе еще более возросли — Е.,,, на 21,6% (р<0,05); „0 на 42,5% (р<0,001) по сравнению с показателями, зарегистрированными через 60 мин после облучения (рис.1).

Весьма неблагоприятным выглядит тот факт, что спустя сутки в ткани пародоита скорость разрушения пероксида водорода уменьшилась на 44,9% (р<0,001) от контрольных параметров, а цифры общей антиокислительной активности снижались [1а 38,7% (р<0,05) относительно

Через 1 чае

ДК КДиСТ Е,;:.::1, Е . ДК КДиСГ Е Е.-„:Л1 ТБК-Гетановая фаза И-зопропанольная фаза акшвнь

I Без коффердама С коффердама

Через 24 часа

ДК КДчСТ Е™, Гептановая фаза

В Без коффердама

К: С коффердама

* - достоверные различия по сравнению с контролем.

Рис. 1. Относительное содержание продуктов ПОЛ в тканях пародонта у экспериментальных животных через 1 час и 24 часа после воздействия фотополимеризатора с коффердамом и без него (100% - контроль).

таковых у ннтакткых крыс (рис.2).

Таким образом, свст фотополимеризатора приводит к дисбалансу в системе «ггерекисное окисление липидов - аатиоксидапты», который, и свою очередь, может спровоцировать мсмбранодеструктивные процессы, лежащие в основе многих заболеваний пародопта.

В серии опытов с использованием коффердама в качестве защитного экрана у крыс получены следующие результаты. Спустя 60 мин после облучения галогеновой лампой в тканях пародопта не зарегистрировано каких-либо существенных отклонений между параметрами липоперокси-дации по сравнению с интактными животными. Исключение составили только диеновые конъюгаты нзопропанольной фазы, относительное содержание карбонильных соединений в той же фракции липидного экстракта и количество ТБК-активных продуктов, уровень которых составил 119,6%; 139,4% и 127,4%) от такового в контроле соответственно (рис.1).

Через 24 часа после воздействия фотополимеризатора с использованием латскспой завесы продукты свободнорадикального окисления в гсптановои фазе не регистрировались: уменьшалось содержание ДК изоп-ропанолыюй фракции в 1,5 раза по сравнению с контролем ив 1,7 раза относительно парамеров «через час». Такие же колебания фиксировались и со стороны ТБК-позитишюго материала: на 38,4% падало его количество по сравнению с интактными крысами и на 51,6%> от величин «через час». Сохранялся повышенный (р<0,001) но сравнению с контролем показатель в нзопропанольной фазе (рис.1).

Со стороны факторов антиоксидантной защиты ткани пародонта нами не обнаружено отличий ог контроля у экспериментальных животных в скорости разложения псроксида водорода ни через час, ни спустя сутки (рис.2).

Общая антиокнелительная активность через 60 минут не изменялась, а через 24 часа возрастала практически вдвое (р<0,001) от значений контроля и через час (рис.2).

Таким образом, защита пародонта раббердамом нивелирует сдвиги в системе «перекисное окисление липидов — антиоксидантная защита» в тканях у экспериментальных животных.

При сравнительном анализе результатов исследования у животных первой (без коффердама) и второй (с раббердамом) групп установлено, что содержание продуктов переписного окисления у первых через 60 минут было значительно выше. Во-первых, у животных без раббердама в больших количествах регистрировались интермеднаты ПОЛ в гептано-вой фазе; во-вторых, достоверно значимыми были различия в содержании ТБК- активных продуктов между первой и второй опытными группами (рис.1).

%

*

100

о

АОА Каталаза Через 1 час

и Без коффердама

АОА Каталаза Через 24 часа

0 С коффердамом

достоверные различия по сравнению с контролем.

Рис. 2. Антиокислительная активность тканей пародонга у экспериментальных животных через 1чае и 24 часа после воздействия фотополимеризатора с коффердамом и без него (100% - контроль).

Через сутки сохранялись отличия в уровне ТБК- позитивного материала у экспериментальных групп животных.

Более показательными были изменения величин антиоксидантной защиты. Между опытными группами через час и спустя сутки зафиксирована достоверная разница. Так, через 60 минут у животных без коффердама происходила мобилизация антиоксидантных ресурсов (140,1% от контроля), а через 24 часа — истощение, величина общей антиокислительной активности снижалась. Активность каталазы у этих крыс уменьшалась через час, а через сутки скорость инактивации перекиси водорода еще более падала (рис.2).

У животных с раббердамом на фоне не меняющейся с течением времени активности каталазы через 24 часа происходило увеличение практически вдвое общей антиокислительной активности. Данный факт выглядит вполне логичным при сопоставлении всех полученных результатов (рис.2).

Адекватная, сбалансированная с интенсивностью процессов свобод-норадикального окисления, антиоксидантная защита играет важную роль в регуляции всего липидного метаболизма в организме, наряду с гормонами и другими биологически активными соединениями. Поэтому низкий уровень интермедиатов перекисного окисления, который зафиксирован у животных с раббердамом, достигается, на наш взгляд, за счет согласованно-

го протективного действия латекспой завесы от ультрафиолетового облучения, последнее, несомненно, инициирует окисление липидов с участием свободных радикалов и системы антиоксидантов, разрушения которых под действием УФ в данном случае не происходит. Скорее всего существенную роль в этом процессе выполняет антиоксидантнля система ткани пародонта, и, по-видимому, учитывая колебания активности каталазы, одну из ключевых ролей играют природные литиоксиланты, входящие в состав мембран и осуществляющие ингибирование ПОЛ за счет обменных реакций в липидах и создания более компактной структуры, благодаря чему уменьшается доступность активного кислорода.

2. Изменение показателей системы «перекисное окисление липидов — антиоксидаитная защита» в десневой жидкости пациентов при воздействии фотополимеризатора.

Анализ полученных данных (таб. 2) свидетельствует о том, что длительное воздействие галогенового источника вызывает довольно значительную разбалансировку в системе свободнорадикальных реакций в десневой жидкости. Так, спустя 60 мин. после облучения увеличивались значения как гептанрастворимых, так и изопропанолрастворимых продуктов липопероксидации. В первом случае рост диеновых конъюгатов, ке-тодиенов и сопряженных триенов составил 76,5% (р<0,001) и 80,0% (р<0,001) соответственно по сравнению с контролем, а во втором - 52,5% (р<0,001) и 45,5% (р<0,05) соответственно. Однако, достоверное повышение их относительного содержания было характерно только для первичных (Е^,,„0) интермедиатов ПОЛ в изопропанольной фазе липидного экстракта (таб. 2).

Со стороны ТБК-активных продуктов наблюдалось их двукратное увеличение по сравнению с параметрами до облучения. При этом на фоне сохраняющейся адекватной общей антиокислительной активности падала скорость разрушения пероксида водорода.

Через сутки уровень практически всех исследуемых параметров оставался на прежних цифрах, достоверно превышая контроль, за исключением коэффициента Е,,., ,.,0в изопропанольной фазе, величины которого возросли в 1,2 раза (р<0,05) относительно показателя «через час». Кроме того, в этот период фиксировались минимальные значения антиокислительной активности, составляющей 46,2% (р<0.001) от таковой в предыдущей группе (таб. 2).

Следовательно, длительное воздействие стоматологического фотополимеризатора уже через час приводит к выраженной активации свободно-радикального окисления в десневой жидкости, это в дальнейшем способствует истощению антиоксидантных ресурсов. Последнее является край-

Таблица 2

Показатели системы «ПОЛ-антиоксиданты» десневой жидкости пациентов после облучения без использования коффердама (М ± т)

Параметры До воздействия фотополимеризатора (п=50) После воздействия фото по ли мери за тора1

- через 1чае (п = 23) - через 24 часа (п~25)

Ггптановая фаза: ДК (ЛЕ,,, на м г лип ядов) 0.17 ± 0,02 0.30 ± 0,03* 0,24 ± 0,02*

КД и СТ(ЛЕ на мг липидов) 0.05 ± 0,01 0,09 ± 0,01s' 0,07 ± 0,01 *,**

0,60 ± 0,06 0.6S ± 0,07 0,63 ± 0,07

0.18 ± 0,02 0,20 ± 0,02 0.18 ± 0.02

Изопропанольная фаза: ДК (ЛЕ,,, на мг липидов) 0,40 ± 0,03 0.61 ± 0.05* 0.67 ± 0.06*

КД и CT(_\E.,7i на мг липидов) 0.11 ± 0,01 0,16 ± 0.01" 0,18 ± 0.02*

0,58 ± 0.03 0.69 ± 0,03' 0.86 ± 0.04*,"*

0.16 ± 0.02 0.1S ± 0.02 0.23 ± 0.02*

ТБК-э кти вн ые п родукты (УЕна мг белка) 0,50 - 0.03 1,01 ± 0.14s 0,87 ± 0,08*

Активность каталазы: (нмоль/с*мг белка) 2.46 ± 0,14 2,01 ± 0.10* 1,94 ± 0,08*

Лнти окислительная активность (%) 28.72 ± 2.68 29,06 ± 2.26 13,43 ± l.SS\**

Примечание: п - число обследованных:

- достоверные различия между контрольной и остальными группами;

- достоверные различия между опытными группами.

не неблагоприятным прогностическим признаком, поскольку это грозит пекежтролируемым ростом мембранодеструктивных процессов, которые, в свою очередь, могут потенцировать развитие патологии пародонта.

Далее было показано, что облучение лампой через раббердам не приводило к заметной интенсификации липопероксидации и изменениям со стороны факторов антиоксидантной защиты

Так, в первые 60 минут после воздействия галогенового источника увеличения как первичных, так и вторичных интермедиатов псрекисного окисления в обеих фазах липидного экстракта десневой жидкости не наблюдалось, за исключением величии карбонильных соединений в гепта-новой фазе и их относительного содержания. Уровень ТБК-позитивпого

Таблица 3

Показатели системы «ПОЛ-аптиоксиданты» десневой жидкости пациентов после облучения с использованием коффердама (М ± т)

Параметры До воздействия фотополимеризатора 01=50) Поело воздействия фотополимеризатора:

- через 1час (п=23) - через 24 часа (п=25)

Гептановая фаза: ДК (ЛЕ.,,., на мг липидов) 0,17 ±. 0.02 0,20 ± 0,02 0,23 ± 0.04

КД и СТ на мг липидов) 0.05 ± 0,01 0,09 ± 0.01=" 0,10 ± 0.03*

р 0.60 ± 0.06 0,62 ± 0.06 0,4-1 ± 0,04*,**

Е„- 0,18 ± 0,02 0,28 ± 0,03* 0,19 ± 0,02**

Изопропанольная фаза: ДК (ЛЕ.,-,., на мг липидов) 0.-10 ± 0.05 0.43 ± 0,04 0.56 ± 0,06*

КД и СТ(ЛЕ,г8 на мг липидов) 0,11 ± 0,01 0,12 ± 0,01 0,17 ± 0.02*.**

0,58 ± 0,03 0,66 ± 0,04 0,46 ± 0.02*,**

Е „т.-; 220 0,16 ± 0,02 0,19 ± 0.02 0,31 = 0,03*,**

ТБК-активные продукты (УЕна мг белка) 0.50 ± 0,03 0,67 ± 0.07* 0,60 ± 0.05

Активность каталазы: (нмоль/с*мг белка) 2,46 ± 0,14 1,92 ± 0.16* 2,44 + 0.17

Антиоки ели тельная активность (%) 28,72 ± 2.68 30,12 ± 2.91 28,73 ± 1,32

Примечание: п - число обследованных;

- достоверные различия между контрольной и остальными группами;

- достоверные различия между опытными группами.

материала возрастал на 34,0% (р<0,05) (таб.3)

Величины общей антиокислительной активности не изменялись Вместе с тем, активность каталазьг снижалась к концу часа после действия фотополимеризатора на 22,0% (р<0,05).

Через сутки на фоне роста относительных цифр вторичных изопро-панолрастворимых продуктов липопероксидации содержание ТБК-актив-ных продуктов возвращалось к исходным значениям. Величины скорости каталазной реакции достигали контрольных показателей (таб. 3).

Сопоставление изменений величин свободнорадикального окисления в десневой жидкости пациентов с использованием коффердама и без него показало следующее.

Через 60 минут после облучения галогеновой лампой достоверно низкими были величины как первичных, так и конечных продуктов ПОЛ у лиц, которым производили защиту пародонта. В то же время каких-либо значимых отклонении между группами со стороны факторов апти-радикальной защиты нами не обнаружено (таб.2, 3).

Через 24 часа наблюдали следующую картину в сравниваемых группах: у пациентов с коффердамом значимо выше были показатели общей антиокнелительпой активности и активности каталазы, которые достигали контрольных значений (таб.2, 3). Данный факт является, несомненно, благоприятным, поскольку известно, что постоянство ПОЛ достигается за счет согласованной работы системы инициирования и регуляции окисления липидов с образованием свободных радикалов. Проявлению патогенного действия пероксидов у пациентов с раббердамом, на наш взгляд, препятствует многокомпонентная антиоксидаптная система организма, имеющая непосредственное отношение к молекулярным механизмам нсспе-цифического гомеостаза и нпгибирования этой системы в данном случае не происходит.

Учитывая вышеизложенные факты, становится очевидным, что эффективная профилактика пародонтитов, вызванных воздействием галогеновой лампы, возможна только путем применения латексной завесы при выполнении стоматологических манипуляций с использованием светоотвсржда-емых композитных материалов.

Анализируя в целом данные, изложенные в этом разделе, мохшо предположить, что у лиц с исходным высоким и низким перекисным статусом глубина альтерирующего действия фотополимеризатора будет различна. Поэтому на следующем этапе работы мы оценили роль раб-бердама в защите от облучения у таких групп пациентов.

3. Дииамика показателей системы «перекисное окисление липидов — аитиоксидантная защита» десневой жидкости пациентов с высоким и низким перекисным статусом.

Проведенные исследования показали, что у пациентов с исходным высоким перекисным статусом через 60 минут после облучения галогеновой лампой полости рта без использования раббердама в десневой жидкости увеличивается содержание гептанрастворимых продуктов перекис-ного окисления: уровень ДК возрастал в 1,6 раза (р<0,01): КД и СТ - в 1,7 раза (р<0,01), а их относительное содержание в 2,1 (р<0,001) и 2,8 (р<0,001) раза соответственно по сравнению с контролем.

Спустя 24 часа не происходило каких-либо существенных изменений указанных величин. В изопропанольной фазе липидного экстракта десневой жидкости у этих лиц также фиксировали рост величин первичных

интермедиатов свободнорадикального окисления: через 60 минут па 57,3% (р<0,01) и через сутки на 72,1% (р<0,001) от исходных цифр. Количество карбонильных соединений превышало контрольные значения на 45,5% (р<0,01) через 60 минут и на 95,5% (р<0,001) через 24 часа. Рост конечных продуктов, дающих положительную реакцию с тиобарбитуро-вой кислотой, происходил не сразу, а спустя суткп. Через 24 часа регистрировали повышение вышеуказанных соединений в 2,3 раза (р<0,001) по сравнению с контролем и в 2,3 раза (р<0,001) по сравнению с показателем «через час».

У данных пациентов весьма неблагоприятно выглядели изменения со стороны антиоксидантной системы. Скорость разрушения пероксида водорода составила через 60 минут лишь 71,7%) (р<0,05) от исходной, а общая антпокиелнтельная активность десневой жидкости уменьшалась в эти же сроки почти вполовину.

Через сутки происходило восстановление активности ката.,тазы до контрольных параметров, общая антиокислительная активность хоть и возрастала (р<0,05), но не достигала значений у здоровых людей.

Оценивая динамику исследуемых процессов у пациентов с низким перекисным статусом, нами установлено, что в гептановой фазе возрастало только количество карбонильных соединений: через 60 минут на 125,0%) (р<0,001) и спустя сутки па 75,0% (р<0,001).

В нзопропанольной фазе отмечен рост как ДК, так и КД и СТ, а также их относительного содержания. Необычным выглядит факт накопления ТБК-активных продуктов: через 60 минут - втрое от контрольных величин, спустя сутки - в 1,9 раза (р<0,001).

У этих пациентов картина сдвигов антиокпелительной системы была аналогична предыдущей: как и у лиц с высоким перекисным статусом происходило падение общей антиокислительной активности и активности каталазы через час. Вместе с тем, спустя 24 часа регистрировали восстановление активности фермента, а общая антиокислительная активность еще более снижалась - на 58,1% (р<0,001) от уровня контроля и на 44,2%) (р<0,001) от показателей «через час».

Анализируя в целом данные, изложенные выше, можно предположить, что важными, а возможно, ведущими звеньями патогенеза патологии пародонта являются нарушения в системе перскисного окисления липи-дов и снижение антиоксидантной активности десневой жидкости у пациентов как с высоким (выражено в большей степени), так и с низким (дисбаланс меньшей глубины) перекисным статусом. Эти два взаимообусловленных и взаимоотягощающих процесса являются примером порочного круга, на разрыв и/или недопущение которого и должны быть направлены лечебно-профилактические мероприятия.

%

ДК КДиСТ ТБК- АО А Каталаза

активные продукты

* - достоверные различия ни сравнению с контролем.

В Пациенты с высоким перекисным статусом

Ш Пациенты с низким перекисным статусом

Рис. 3. Оценка эффективности коффердама у пациентов с высоким и низким перекисным статусом (относительно аналогичных величин у пациентов без раббердаша).

Полученные данные позволили установить, что протективные свойства латекской завесы более выражены у пациентов с высоким перекисным статусом.

И действительно при анализе показателей свободнорадикального окисления в десневой жидкости после облучения с использованием коффердама отмечали лишь незначительное увеличение содержания КД и СТ в изопропанольной фазе в течение всего времени наблюдения.

Показатели антиоксидантной активности у этих больных не изменялись через 60 минут после действия фотополимеризатора. Вместе с тем, спустя 24 часа происходило повышение обшей антиокислительной активности и скорости обезвреживания пероксида водорода. Первой на 27,6% и 23,5%) относительно величин контроля и «через час», а второй на 85,5%) и 49,2%) от полученных значений у здоровых и уровня «через час» соответственно) (рис.3).

У лиц с низким перекисным статусом защита пародопта рабберда-мом также привносила весьма существенную польз}'. Хотя реакция со стороны компонентов системы «ПОЛ - АОЗ» была несколько иной по сравнению с предыдущей группой лиц. Отмечено, что оставались повышенными уровни изопропанолрастворнмых карбонильных соединений и их относительное содержание, как через час, так и спустя сутки. Количество ТБК-позитивпого материала увеличивалось в 2 раза (р<0,001) через 60 минут после облучения, а спустя 24 часа возвращалось к исходным значениям. Какой-либо реакции со стороны антиокислительной системы

Рис.4. Концептуальная схема последовательности включения отдельных патогенетических механизмов повреждения пародонта при воздействии сто-магологического фотополимеризатора, у данной группы выявлено не было (рис.3).

Полученные данные свидетельствуют о различной реакции со стороны показателей системы «ПОЛ — антиокенданты», характер которых определяется исходным состоянием процессов липоперокепдации в тканях пародонта.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

С учетом полученных нами данных, а также сведений литературы мы предлагаем схему патогенеза повреждения пародонта при воздействии стоматологического фотополимеризатора (рис. 4). Различные повреждающие факторы (в первую очередь — ультрафиолетовая паразитная составляющая) способствуют чрезмерной интенсификации перекисного окисления дипидов па фоне истощения антиоксидантных ресурсов (Рощуп-кин Д.И., Мурина М.А., 1993: Salmon S., Haigle J., Bazin M. el al, 1996; Bednarska К., Wachowicz В, 1999; Brenneise" C.V., Blankenau R.J, 1999; Cheeseman K.H, 1993; Coulomp B, Lebreton C, Mathieu N, 1996; Moysan A, Clrement - Lacroix P, Miche! L. et al, 1996; Pimnonen К, Púntala A, Ahotupa M, 1991), активации фосфолипаз (Comporli M, 1993), которые в свою очередь приводят к нарушению арахидонового каскада (Воскресенский О.Н, 1991; Yoshikata Т, Hiroshi S, Toshiya A. et al, 1993) и развитию дисбаланса между дезагрегантами, вазодилататорами и вазоконстриктора-ми (Воскресенский О.Н, 1991; Colgreave I.A., Schuppe I, Tu В, Moldeus P, 1992). В результате развивается вазоспазм, нарушается кровоток в тканях, окрухсающих зуб, усугубляющий мембранодеструкцию (Gonzralez S. Palhak М.А., 1996; Marton I.J, Baila G, Hegcdus С. et al, 1997).

Все вышеперсчнслснпые сдвиги нарушают структурно-функциональную организацию мембран клеток, окружающих зуб, что является важным звеном в патогенезе пародоятита.

Следует особо подчеркнуть, что в развитии повреждений пародонта принципиальное значение имеют не только прямые, по и обратные связи, усугубляющие тяжесть патологического процесса и замыкающие порочный круг. Применение такого подхода, по нашему мнению, позволяет разграничить узловые и второстепенные факторы в патогенезе, что будет способствовать направленной адекватной патогенетической терапии повреждений пародонта.

Протективные свойства раббердама в этом свете можно рассматривать как защитный фактор, направленный на ограничение и фокусирование плотади воздействия фотополимеризатора. Восполнение недостатка антиокислительных веществ с помощью витаминных препаратов может рассматриваться в данном случае как патогенетически обоснованная, своего рода заместительная терапия и мера профилактики со стороны пародонта, которая должна проводиться с учетом исходного перекисного статуса.

В заключение нужно отмстить, что в работе любого врача вообще и стоматолога в частности очевидна необходимость рассмотрения последствий вмешательства на всех уровнях сложных, единых механизмах гомео-стаза и реактивности организма. При выполнении манипуляций следует

учитывать индивидуальное состояние обменных процессов, иммунной и других систем организма, местной зашиты полости рта, взаимодействие и согласованность которых обеспечивает сохранение здоровья и качество ж изнн.

ВЫВОДЫ

1. Через час после длительного воздействия света (270 с) галогенового источника фотополимеризатора на пародонт у экспериментальных животных повышается уровень первичных и вторичных интермедиатов перекисного окисления липидов в обеих фазах липидного экстракта, увеличивается количество ТБК-активных продуктов, а также угнетается активность каталазы, что свидетельствует о мембранодеструктив-ном эффекте ультрафиолетовой составляющей галогеповой лампы. Практически все указанные изменения сохраняются и по истечении 24 часов.

2. При работе со светоотверждаемыми материалами без использования латексной завесы после облучения галогеповой лампой у пациентов в дееневой .жидкости регистрируется дисбаланс в компонентах системы «ПОЛ - аптиокекданты», проявляющийся накоплением диеновых конъюгатов, кетодиенов и сопряженных триенов, ТБК-активных про-' дуктов и падением общей аптиокислительной активности и скорости разрушения пероксида водорода в первые 60 минут после облучения. Нивелирования данных нарушений к концу первых суток не происходит.

3. Применение латексной завесы «коффердам» при длительных реставрационных работах снижает интенсивность реакций псроксидации липидов на фоне адекватного ответа со стороны антиоксидантных факторов как в тканях пародонта, так и в дееневой жидкости. Наиболее благоприятным прогностическим фактором при этом является нормализация уровня промежуточных интермедиатов ПОЛ.

4. У лиц как с низким, так .и высоким локальным перекисным статусом воздействие галогенового источника активирующей лампы вызывает однонаправленные изменения перекисного гомеостаза, характеризующиеся накоплением продуктов липопероксидации и дефицитом антиоксидантных ресурсов в дееневой жидкости, при этом более глубокий дисбаланс регистрируется у пациентов с высоким перекисным статусом.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Новые технологии в стоматологической практике: проблемы безопасности пациентов / / Проблемы Земной цивилизации: Доклады конф. «Теоретические и практические проблемы безопасности Сибири и Дальнего Востока» - Иркутск: ИрГТУ, 8 июня 1999. - Вып.], 4.2. - С. 147148. (еоавт. Писаревский Ю.Л., Хышиктусв Б.С.)

2. Влияние стоматологического фотополимеризатора на нсрскисный статус ткани пародокта у экспериментальных животных / / Материалы конференции, посвященной 5-летию образования НИИ педиатрии «Современные проблемы охраны материнства и детства». - Чита, 2000. -С. 159. (еоавт. Писаревский Ю.Л., Хышиктусв Б.С.).

3. Особенности локального перекисного статуса тканей пародонта при воздействии стоматологического фотополимеризатора / / Современные вопросы диагностики и лечения: Сб. науч.-нракт. работ, посвященный десятилетию Читинского диагностического центра. - Чита, 2001. - С. 13-14. (еоавт. Писаревский Ю.Л., Хышиктуев Б.С.).

4. Клинико-биохимическая оценка эффективности применения коффердама у пациентов с высоким и низким перекиспым статусом // Забайкальский медицинский вестник. - 2001. - №1. - С. 69-70.

5. Additional Protective Rubber Dam"s Characteristics in the Dental Practice / / The Ninth International Symposium of the Japan-Russia Medical Exchange 2001. - Kanazawa, 2001. - С. 3. (еоавт. Хышиктуев B.C.).

6. Перекисный статус десневой жидкости при воздействии фотополиме-ризатоза / / Материалы научно-практ. конф., посвященной памяти проф. Паникаровского ЦНИИС. - Москва, 2001. - С. 92-96. (еоавт. Хышиктуев Б.С.).

7. Патогенетическое обоснование использования латексной завесы для профилактики осложнений со стороны пародонта при реставрации зубов // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2002, Т.1., №1 (16).* - С. 124-126. (еоавт. Хышиктуев Б.С., Хышиктуева Н.А.).