Автореферат и диссертация по медицине (14.00.52) на тему:Возрастные изменения дренажной функции лимфатической системы при экзогенной интоксикации и пути их коррекции (экспериментальное исследование)

На правах рукописи

Попова Светлана Анатольевна

ВОЗРАСТНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ДРЕНАЖНОЙ ФУНКЦИИ ЛИМФАТИЧЕСКОЙ СИСТЕМЫ ПРИ ЭКЗОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ И ПУТИ ИХ КОРРЕКЦИИ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

14.00.53 - Геронтология и гериатрия

□□3 1Т147Э

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

О 5 июн 2008

Москва - 2008

003171479

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Российский ге-ронтологический научно-клинический центр Росздрава»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук

Официальные оппоненты:

доктор биотогических наук доктор медицинских наук, профессор

Свиридкина Людмила Петровна

Каверина Ксения Григорьевна Козлов Иван Генрихович

Ведущая организация:

ГУ НИИ общей патологии и патофизиологии РАМН

Защита состоится 2008 г в //

часов на заседании диссертационного совета Д 208 104 01 при ФГУ Российском геронтологаческом научно-клиническом ценгре Росздрава по адресу 129226, г Москва, ул 1-я Леонова, 16

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ Российского геронтологиче-ского научно-клинического центра Росздрава

Автореферат разослан ьЛШ-сХ' 2008 г

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук Соколова Н М

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы

Известно, что экологическая ситуация в России остается крайне тревожной и сопровождается ухудшением показателей здоровья населения (Г С Агмазов, 2000) При этом размеры физического и химического загрязнения внутренней среды уже достигли таких величин, которые могут представлять реальную угрозу нарушению фундаментальных биологических и биохимических основ жизнедеятельности современного чечовека Ионизирующая радиация, ультрафиолетовое излучение, табачный дым, смог, пищевые консерванты, пестициды и ряд других химических веществ проникают в организм человека и животных через легкие, кожные покровы или желудочно-кишечный тракт Подавляющее большинство ксеиобиотиков подвергается целому ряду биохимических превращений, в процессе которых происходит образование побочных высокореактивных продуктов радикальной природы, способных инициировать процессы перекисного окисления биомолекул (ВАБаринов с соавт, 1996, Г А Софронов с соавт, 2001, JIА Тиунов, 1995) Свободные радикалы генерируются и при биотрансформации многих лекарственных препаратов. Таким образом, как экзогенная, так и эндогенная интоксикация, реализуется через процессы перекисного окисления липидов, продукты которого являются ее основным субстратом (В В Ба-нин, 1994, В В Новочадов, В Б Писарев, 2005, САСимбирцев, НА Беляков, 1994) Можно предположить, что экзогенным токсическим воздействиям наиболее подвержены лица пожилого и старческого возраста, число которых в структуре населения России возрастает (JIД Серова с соавт, 2005, В Н Шабалин, 1999)

В настоящее время одной из плодотворно развивающихся фундаментальных теорий в геронтологии является свободнорадикальная теория старения (В Н Анисимов, М В Соловьев, 1999, В Л Воейков, 2003, В А Гусев, 2000, Н К Зенков с соавг, 2001, В К Кольтовер, 1998, А П Ястребов, В Н Мещанинов, 2005, К В Beekman, В N Ames, 1998, D Harman, 1994) Основные аргументы, которые приводят сторонники этой теории, сводятся к следующему С возрастом в организме нарастает продукция активных форм кислорода при одновременном уменьшении способности аптиоксидантной защиты и снижении эффективности процессов репарации окислительных повреждений (В Н Анисимов с соавт, 1999) Накапливаясь в органах и тканях, они ускоряют процессы естественного старения, способствуют преждевременному старению и раннему формированию болезней пожилого возраста, включая рак, атеросклероз, сердечнососудистые заболевания, возрастную иммунодепрессию, иейродегенеративные заболевания и дисфункции мозга (ВН Анисимов, MB Соловьев, 1999, АПЯстребов, В Н Мещанинов, 2005, R G Cutler, 1995, D Harman, 1994)

Согласно другой теории старения, названной гуморальной, главной его причиной является интоксикация организма вследствие затруднения выведения из интерстиция накопившихся продуктов метаболизма (В И Донцов, ААКрутько, 1997, КМ Доро-хин, В В Спас, 1994) Учитывая, что с возрастом показатели эндогенной интоксикации нарастают, существует мнение, что сгарение и есть интоксикация (А Н Афанасьева, 2002)

Как возраст, так и интоксикация, вызывают однонаправленные нарушения в различных звеньях микроциркуляторного русла в кровеносном (Г С Агмазов, 2000, В Г Васильков, 2001, М Л Дi ебуадзе, 2001, М В Лазько, 2000, Yukihito Н et al, 1997), интерстициальном (НПБгатова, 1999, ММ Горн с соавт, 1999, БН Нурму-хамбетова, А Т Дюсембаева, 2005) и лимфагическом (Ю И Бородин с соавт, 1995,

И АИбатуллин, 1998, А И Федорова, 2006, JIЕ Этинген, 2003) В системе околоклеточного гуморального транспорта происходят изменения, ограничивающие как доставку в межклеточный матрикс, а затем в клетку, необходимых питательных веществ, лекарств и кислорода, так и выведение продуктов метаболизма (С А Симбирцсв, Н А Беляков, 1994) Накапливаясь в околоклеточном пространстве, метаболиты и ксенобиотики могут запускать комплекс реакций, таких как стимуляция фагоцитоза, продукция цитокинов и активация перекисного окисления липидов, систем калликре-ин-кинина, комплемента, свертывания крови и лимфы (В В Банин, 1994, В М Буянов, А А Алексеев, 1990, К М Дорохин, В В Спас, 1994, S A Pnce, L М Wilson, 1996) Нарастающая интоксикация ведет к снижению активности окислительных ферментов, падению способности к адаптации при уменьшении напряжения кислорода в крови, результатом чего является развитие гипоксической, циркуляторной и тканевой гипоксии (АПДунтау с соавт, 2000, R Burreil, 1994) Эти изменения становятся предпосылкой к преждевременному старению и предопределяют возрастную специфику течения заболеваний - полиморбидность, склонность к хронизации, наличие осложнений, потребность в назначении большого количества лекарственных препаратов Следовательно, лица пожилого и старческого возраста, так же как и пациенты с эндогенной и экзогенной интоксикацией, независимо от имеющейся у них патологии, нуждаются в антиоксидантной защите, в усилении гуморального транспорта в межклеточном матриксе и лимфооттока

Идея возможности медикаментозного управления интерстициальным гуморальным транспортом и лимфатическим дренажом тканей, выдвинутая Ю М Левиным (1982), в последние годы находит все большее подтверждение (Р П Борисова с соавт, 1995, ЮМ Левин, 2003, PC Орлов с соавт, 1994, Л П Свиридкина, 2007, С Г Топорова, 2000, В К Хугаева, 2000) и открывает новые пути решения этой проблемы В настоящее время в профилактике и лечении широкого круга заболеваний большая роль отводится антиоксидантам (И А Ведяшкина, 1999, НАВинтин, 1999, В А Гусев, 2000, С Б Имамвердиев, РНМамедов, 2003, НПКатунина, 2003, Г И Клебанов с соавт, 2001, А Л Коваленко, 2000) Однако, несмотря на расширение знаний о влиянии лекарственных средств на лимфатический дренаж тканей, сведения

0 действии препаратов с антиоксидантной активностью на лимфоотгок остаются единичными (М Э Бекирзаде, 1992, Д А Мухутдинов, 2007; М Г Рябков, 2002)

Цель исследования: сопоставить возрастные изменения дренажной функции лимфатической системы с активностью перекисного окисления липидов в норме и при экзогенной интоксикации и определить пути их медикаментозной коррекции

Задачи исследования

1 Выявить возрастные особенности скорости интерстициального гуморального транспорта и лимфатического дренажа тканей, уровня малонового диальдегида в сыворотке крови и показателей общего анализа крови

2 Исследовать влияние экзогенной интоксикации, вызванной четыреххлористым углеродом, на перечисленные показатели у мышей разного возраста

3 Провести сравнительное изучение действия препаратов с известной аншокси-дантной активностью на концентрацию малонового диальдегида в сыворотке крови зрелых мышей

4. Оценить действие препаратов с антиоксидантной активностью на скорость интерстициального гуморального транспорта и лимфатического дренажа тканей у зрелых мышей

5 Изучить динамику показателей общего анализа крови у зрелых мышей при воздействии препаратов с антиоксидантной активностью

6 Определить эффективность совместного применения препаратов «мексидол» и «хофитол» в коррекции экзогенной интоксикации у мышей разного возраста

Научная новизна

• Установлена прямая корреляция между угнетением интерстициального гуморального транспорта, повышением концентрации малонового диальдегида в сыворотке крови и гематологического показателя интоксикации у мышей разного возраста

• Обнаружено, что наиболее выраженные изменения лимфатического дренажа тканей, уровня малонового диальдегида и гематологического показателя интоксикации происходят в период достижения мышами зрелого возраста

• Выявлено, что нарушение микроциркуляции в межклеточном и лимфатическом ее звеньях, изменение активности перекисного окисления липидов и показателей интоксикации крови, развивающиеся при старении и под влияиием экзогенной интоксикации, имеют однонаправленный характер

• Впервые установлено, что препараты с антиоксидантнои активностью обладают способностью стимулировать интерстициальный гуморальный транспорт и лимфатический дренаж тканей, однако степень их антиоксидантного и лимфостиму тирующего действия различна

• Доказана эффективность медикаментозной коррекции угнетения лимфообразования и лимфооттока, возникающих, как по мере старения, так и в результате воздействия экотоксикантов

• Показано, что при экзогенной интоксикации эффективность препаратов с антиоксидантной активностью в восстановлении лимфооттока и снижении активности перекисного окисления липидов выше у зрелых мышей, а в нормализации гематологического показателя интоксикации - у старых животных

Теоретическая значимость работы

Анализ результатов проведенной работы позволяет прояснить некоторые механизмы старения, выявить возрастные особенности реакции на экзогенные токсины и раскрыть новые аспекты действия препаратов, известных своими антиоксидантными свойствами

Практическая значимость работы

Показано, что сочетанное применение препаратов мексидол и хофитол корректирует нарушения процессов перекисного окисления липидов и лимфатического дренажа тканей, возникающие с возрастом и при экзогенной интоксикации Это ставит задачу дальнейших клинических исследований для определения показаний к комплексному применению препаратов с антиоксидантной активностью с целью протекции от воздействия экотоксикантов, предотвращения преждевременного старения и лечения заболеваний, обусловленных возрастом

Основные положения, выноспмые на защиту

1. По мере старения наблюдается прогрессирующее угнетение интерстициального гуморального гранспорта и лимфатического дренажа тканей, активация перекисного окисления липидов и повышение гематологического показателя интоксикации Действие экзогенного токсина усиливает эти процессы

2 Все изученные препараты обладают способностью снижать концентрацию малонового диальдегида в сыворотке крови и усиливать интерстициальный гуморальный

транспорт и лимфатический дренаж тканей, однако выраженность их лимфостимули-рующей активности в большинстве случаев не соответствует их антиоксидантной силе Наличие антиоксидантных свойств у лекарственного препарата не гарантирует его положительного влияния на гематологический показатель интоксикации 3. Сочетанное применение препаратов мексидол, проявляющего наибольшую анти-оксидантую и лимфостимулирующую активность, и хофитол, обладающего способностью значительно снижать гематологический показатель интоксикации, уменьшает проявления экзогенной интоксикации, как у зрелых, так и у старых животных

Апробация работы

По результатам исследований опубликовано 17 работ, в том числе 1 глава в монографии и 1 статья в журнале, рекомендованном ВАК

Материалы диссертации доложены на 13-ти российских и международных конференциях, съездах и симпозиумах, в том числе на П-й конференции (Москва, 2005), Ш-й (Москва, 2006), 1У-Й (Москва, 2007) Всероссийских научно-практических конференциях «Общество, государство и медицина - для пожилых и инвалидов», на 1 Сибирском съезде лимфологов с международным участием «Проблемы экспериментальной, клинической и профилактической лимфологии (Новосибирск, 2006), на международной научно-практической конференции «Актуальные методы клинической лимфологии и эндоэкологической реабилитации в фтизиопульмонологии, физиологии и общей терапии» (Кишинев, 2006); на конференции «Перспективы фундаментальной геронтологии» (С -Петербург, 2006), на международной научной конференции «Свободные радикалы, антиоксиданты и старение» (Астрахань, 2006), на ХГУ-ом (Москва, 2006), ХУ-ом (Москва, 2007), ХУ1-ом (Москва, 2008) Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство», на Всероссийской научно-практической конференции «Санаторно-курортное лечение фундаментальные, прикладные и организационные аспекты (Новосибирск, 2007), на XII международной научно-практической конференции «Пожилой больной Качество жизни» (Москва, 2007), на III Международном конгрессе «Эндоэкологическая медицина» (Кипр, 2007)

Внедрение в учебный процесс

Результаты исследований используются в учебном процессе на кафедрах фармакологии Российского медицинского университета и медицинского факультета Мордовского государственного университета, клинической лимфологии и эндоэкологии Факультета повышения квалификации медицинских работников РУДН

Объем и структура диссертационной работы

Диссертация изложена на 142 страницах, состоит из введения, обзора литературы, главы «Объекты и методы исследования», 3-х глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы, включающею 264 отечественных и 88 зарубежных источников, иллюстрирована 47 таблицами и 51 рисунком

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В исследование включено 599 белых беспородных лабораторных мышей массой от 20 до 40 г, находящихся в идентичных условиях содержания и получавших одинаковый, стандартный для мышей, рацион питания

Эксперименты проведены на молодых (3 месячных) мышах массой 18-22 г, зрелых (6-ти месячных) мышах массой 30-34 г и старых (20-ти месячных) мышах массой 36-41 г в острых опытах с соблюдением правил работы на животных согласно базисным нормативным документам Минздрава России и ВОЗ (И В Березовская, 1993, L F Zutphen et al, 1993) Во время эксперимента мыши находились под нембуталовым наркозом (5 мг/100 i массы внутримышечно), после его окончания животные забивались введением летальных доз нембутала Изучали скорость интерстициального гуморального транспорта (ИГТ) и лимфатического дренажа (ЛД) тканей, активность перекисного окисления липидов и параметры общего анализа крови с расчетом гематологического показателя интоксикации

Для определения состояния ИГТ и ЛД тканей использовали общепринятую методику изучения микроциркуляции в брыжейке тонкой кишки методом витальной микроскопии в проходящем свете (С Г Топорова, 1992) Определяли время (мин) полного выведения лимфотропного маркера (краситель Evans blau «Merck»), предварительно введенною в толщу корневого участка брыжейки в области илеоцекального угла с помощью прецизионного шприца (Microliter™ Syringes фирмы Hamilton Bona-duz AG) в дозе 0,002 мл 2% раствора На протяжении всего эксперимента температура мышей поддерживалась на уровне 37°С постоянно подогревался столик, на котором располагалось животное, а брыжейка кишки капельным способом орошалась подогретым изотоническим раствором хлористого натрия О состоянии животного судили по окраске видимых слизистых покровов, частоте дыхания и перистальтических сокращений кишки

О состоянии перекисного окисления липидов судили по уровню малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови, определяемому по тесту с тиобарбитуровой кислотой (В Б Гаврилов, 1987) Концентрацию МДА рассчитывали по уравнению регрессии С=0,81+106 х ДД (С - концентрация тиобарбитуровой кислоты, ДД - разница показателей оптической плотности) и выражали в наномолях МДА на 1 мл биологической жидкости (нмоль/мл) Исследования проведены в лаборатории липидного обмена ФГУ РНИИ геронтологии Росздрава

Общий анализ крови проводили на гематологическом анализаторе АВХ Micros 60 Известно, что процентное выражение клеток ке отражает их истинного содержания в единице объема крови, что может привести к ошибочным выводам Поэтому при анализе полученных результатов мы использовали абсотютные значения клеток периферической крови По показателям общего анализа крови рассчитывали индексы интоксикации Лейкоцитарный индекс интоксикации Кальф-Калифа предложенный автором еще в 1941 году, раскрывает соотношение гранулоцитарного и агранулоци-тарного роегков белой крови При расчете гематологического показателя интоксикации (ГПИ), в показатель Кальф-Калифа вносятся поправки с учетом количества лейкоцитов и уровня СОЭ (Васильевым с соавт, 1985)

Исследования проведены в четырех блоках (47 серий) экспериментов В первом блоке экспериментов (9 серий) оценивали скорость ИГТ и ЛД тканей, уровень МДА и показатели общего анализа крови у молодых (3-х месячных), зрелых (6-ти месячных) и старых (20-ти месячных) мышей

Во втором блоке экспериментов (6 серий) изучаемые показатели определяли у зрелых и старых животных в условиях острой экзогенной интоксикации Для ее моделирования использовали общепризнанную методику угнетения детоксикационной функции печени четыреххлористым углеродом (CCL4), который вводили в дозе 0,3 мл/кг массы внутримышечно, меняя лапки, ежедневно, в течение 5 дней, в равном

объеме подсолнечного масла (Е А Батаков, 2001) В качестве контроля были взяты результаты исследований, полученные в первом блоке экспериментов у интактных зрелых и старых мышей

В третьем блоке экспериментов (26 серий) исследовали влияние антиоксидантов на скорость ИГТ и ЛД тканей, уровень МДА в сыворотке крови и показатели общего анализа крови с расчетом индексов интоксикации у зрелых животных При выборе препаратов учитывали доказанность их антиоксидантной активности, принадлежность к разным группам антиоксидантов (синтетические, природные), различные механизмы актиоксидантного действия (антирадикальное и антиперекмсное), широкое применение в клинике, особенно в гериатрической практике В исследование включены мексидол - 2,5 мг/кг (Эллара МЦ ООО, Россия), эмоксипин - 2,5 мг/кг (Белмед-препараты, Беларусь), цитохром С - 0,28 мл/кг (Самсон-Мед, Россия), хофитол - 0,2 мл/кг (ROSA - PHYTOPHARMA, Франция), янтарная кислота - 0,85 мкг/кг (ООО "НФК", Россия) и селен-актив - 4,3 мкг/кг (Диод ОАО, Россия) Мексидол, эмоксипин и цитохром С вводили внутримышечно 1 раз в день в течение 5-ти дней перед проведением острого опыта Животным контрольных групп в том же объеме вводили физиологический раствор Препарат хофитол, янтарную кислоту и селен-актив в течение 14-ти дней добавляли в питьевую воду Животные контрольных групп получали в качестве питья водопроводную воду

В четвертом блоке экспериментов (6 серий) изучали возможность медикаментозной коррекции нарушений ИГТ и ЛД тканей, активации перекисного окисления липидов и сдвигов индексов интоксикации крови у зрелых и старых мышей с экзогенной интоксикацией С этой целью на фоне инъекций четыреххлористого углерода в течение 5-ти дней внутримышечно вводили мексидол в дозе 2,5 мг на кг массы и добавляли в питьевую воду хофитол в дозе 0,2 мл на кг массы В качестве контроля были взяты результаты исследований, полученные во втором блоке экспериментов у зрелых и старых мышей с экзогенной интоксикацией

Результаты исследований обработаны статистически с использованием критерия Стьюдента для малых выборок и коэффициента корреляции

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Скорость ИГТ и ЛД тканей, уровень МДА в сыворотке крови и показатели общего анализа крови у мышей разного возраста

А Ш Сененко (2002) в экспериментах на мышах получила предварительные данные о возрастном изменении скорости ИГТ и ЛД тканей, однако автор не прослеживала состояние лимфооттока с молодого до старого возраста животных В то же время Ю Н Шариков (2002) не нашел разницы в скорости удаления лимфотропного красителя из брыжейки молодых и зрелых мышей

Наши исследования показали (таблица 1), что с возрастом наблюдается прогрессирующее угнетение ИГТ и ЛД тканей Так, время удаления лимфотропного красителя из брыжейки зрелых мышей по сравнению с показателем у молодых животных увеличивается в 1,4 раза Однако у старых мышей по сравнению со зрелыми животными оно нарастает менее значительно - в 1,2 раза Следовательно, основные нарушения микроциркуляции в ее интерстициалыюм и лимфатическом звеньях формируются уже к зрелому возрасту, а в дальнейшем только незначительно усугубляются

У зрелых мышей по сравнению с молодыми животными уровень МДА в сыворотке крови повышается в 7,1 раза По мере дальнейшего старения интенсивность нарастания процессов перекисного окисления липидов снижается концентрация МДА у

старых мышей по сравнению с животными зрелого возраста увеличивается тотько в 1,2 раза

Таблица 1

Время удаления лимфотропного красителя из брыжейки и уровень МДА в сыворотке крови у мышей разного возраста

Возраст Показатели (М±т)

п Время удаления метки (мин) п МДА (нм оль/л)

3 месяца 15 42,4±2,3 14 2,1 ±0,4

6 месяцев 15 61,0±1,5,рзб<0,005 14 15,0±1,3,р3-б<0,001

20 месяцев 15 74,0±1,8,рз.20<0,001, рб.2о<0,01 14 17,9±1,3, рз-20<0,001, рь-го<0,1

Здесь и далее в таблицах представлены показатели достоверности разницы параметров Рз-6 - у мышей 3-месячного и 6-месячиого возраста, Рз 20 - у мышей 3-месячного и 20-месячного возраста, Р(,-2о - у мышей 6-месячного и 20-месячного возраста

Полученные результаты совпадают с литературными данными об усилении с возрастом активности процессов свободнорадикального окисления (В Н Анисимое, 2000, МВКинах, 1990, О С Полунина, 2000) Наши данные подтверждают, что повреждающее действие свободных радикалов и вклад активации липиднои пероксидации в реализации процессов старения достигают максимума уже к зрелому возрасту По мнению М Е Климова с соавторами (1997) и В Н Мещанинова (1997) в пожилом возрасте патогенная роль метаболитов свободнорадикального окисления уменьшается наряду со снижением скорости старения В старости, как правило, происходит лишь прогрессирование заболеваний, дебютировавших в более ранние возрастные периоды, и развитие их осложнений (А Е Щербинов и соавт, 1998)

Таблица 2

Показатели общего анализа крови (М±т) у мышей разно! о возраста

Показатели Возраст Показатель достоверности

3 мес (п=14) 6 мес(п=14) 20 мес (п=14) Рз-6 РЗ 20 Рб-20

Эритроциты (10|2/л) 9,17±0,35 10,65±0,27 10,2б±0,32 <0,01 <0,05 >0,2

Гемоглобин (г/л) 152,б±2,2 169,4±3,44 171,3±5,27 <0,005 <0,01 >0,2

Гематокрит (л'л) 41,98±0,49 45,54±0,94 47,81±1,53 <0,01 <0,01 >0,2

Тромбоциты (10У/л) 378,9±19,68 585,7±43,04 508,4±32,76 <0,005 <0,01 <0,2

Лейкоциты (10а/л) 4470±338 9030±913 10850±928 <0,005 <0 001 <0,2

Сегментоядерные нейтрофилы (10%) 691,8±149 3405,6±616 4774,1±512 <0,005 <0,001 <0,2

Палочкоядерные нейтрофилы (109/л) 59±9,18 164,8±49,бб 207,4±28,54 <0,1 <0,001 >0,2

Эозинофилы (10*/л) 39±7,9б 90±22,30 35,2±18,60 <0,1 >0,2 0,1

Базофилы (10ч/л) 4,4±4,4 55±32,15 0±0 <0,2 >0,2 <0,2

Лимфоциты (10у/л) 3272,4±244 5098,1±499 4898,8±370 <0,01 <0,01 >0,2

Моноциты (10у/л) 397,2±28,14 160,3±49,57 944,5±103 <0,005 <0,001 <0,001

Л/СН 6,23±0 98 1,9710,37 1 09±0,08 <0,005 <0,001 <0,05

СОЭ (мм/час) 1,3±0,15 1,2±0,13 1,7±0,21 >0,2 <0,2 <0,1

ГПИ 0,08±0,0б 0,40±0,07 0,91±0,13 <0,005 <0,001 <0,05

Работы, в которых приводятся показатели общего анализа крови у мышей, немногочисленны и не учитывают возраст животных (Н А Горбунова, 1992, И М Грахтен-берг с соавт, 1978) Более всего к литературным данным приближаются параметры крови, зарегистрированные нами у 6-ти месячных мышей Отсюда следует вывод, что, скорее всего, авторы использовали в своих экспериментах животных зрелого возраста Некоторые несовпадения результатов могут быть объяснены особенностями проведения эксперимента, заключающимися в различии условий содержания, методик забора крови, ее анализа и других

Установлено, что показатели общего анализа крови по мере старения мышей изменяются (таблица 2) У зрелых мышей по сравнению с молодыми живогными уве-личиваегся количество эритроцитов, тромбоцитов, лейкоцитов, сегментоядерных нейтрофилов, лимфоцитов, возрастает концентрация гемоглобина и показатель гема-токрита Число палочкоядерных нейтрофилов, базофилов и эозинофилов имеет тенденцию к повышению, а количество моноцитов снижается Соотношение Л/СН (индекс Гаркави) уменьшается, чго говорит о преимущественной активации с возрастом гранулоцитарного ростка белой крови, СОЭ не изменяется При дальнейшем старении мышей показатели периферической крови изменяются незначительно Количество лейкоцитов, сегментоядерных нейтрофилов и СОЭ имеют тенденцию к повышению, а число тромбоцитов, эозинофилов и базофилов проявляет тенденцию к снижению У старых животных по сравнению со зрелыми мышами уменьшается индекс Гаркави и увеличивается количество нейтрофилов

ГПИ с возрастом прогрессивно увеличивается У зрелых мышей по сравнению с молодыми животными показатель возрастает в 5 раз В возрастной период от 6-ти до 20-ти месяцев индекс интоксикации увеличивается только в 2,3 раза

Полученные результаты свидетельствуют о том, чго при старении нарастает эндогенная интоксикация, прогрессирующая по мере увеличения возраста и разворачивающаяся наиболее интенсивно в период достижения зрелости Максимальная степень увеличения всех анализируемых параметров приходится на возрастной период мышей с 3-х до 6-ти месяцев Эти данные диктуют необходимость ранней профилактики старения, начиная с юных лет, или хотя бы со зрелого возрасга

2. Скорость ИГТ и ЛД тканей, уровень МДА в сыворотке крови и показатели общего анализа крови у мышей разного возраста с экзогенной интоксикацией

Таблица 3

Время удаления лимфотропного красителя из брыжейки и уровень МДА в сыворотке крови у мышей разного возраста с экзогенной интоксикацией (ЭИ)

Возраст мышей Показатели (М±ш)

Время удаления метки, мин МДА, нмоль/л

Копт (п-15) ЭИ(п=15) Р Корт (п=14) ЭИ (п=14) Р

6 месяцев 61,0±1,5 77,8±1,7 <0,005 15,0±1,3 22,2±1,3 <0,001

20 месяцев 74,0±1,8*** 103,0±1,3**** <0,001 17,9±1,3* 26,1±0,6** <0,001

Здесь и далее в таблицах звездочкой отмечены достоверные различия между показателями у животных 6-ти и 20-ти месяцев

* - р<0,2 (тенденция), ** - р<0,05 *** - р<0,01, **** - р<0,005, ***** - р<0,001

Экзогенная интоксикация приводит к торможению ИГТ и ЛД как у зрелых, так и у старых мышей (таблица 3), однако старые животные реагируют на воздействие чечы-

реххлористым углеродом более значительным удлинением времени эвакуации лим-фотропного красителя (в 1,4 раза, по сравнению 1,3 раза у зрелых мышей)

В литературе отсугствуют сведения о влиянии экзогенной интоксикации на показатели ИГТ и ЛД тканей Встречаются единичные работы, посвященные изучению скорости центрального лимфотока у больных с синдромом интоксикации при отравлении уксусной кислотой (М Э Бекирзаде, 1992) и остром перитоните (М Г Рябков, 2002) Известно, что до 80% лимфы грудного протока поставляет печень (7 М УоПеу, Б С СоиПюе, 1970), в связи с чем, скорость центрального лимфотока зависит в основном от ее лимфообразующей функции и может лишь косвенно отражать состояние ЛД тканей

Экзогенная интоксикация с одинаковой степенью, как у зрелых, так и у старых животных, усиливает процессы перекисного окисления липидов Гак, под влиянием четыреххлористого углерода концентрация МДА в сыворотке крови у зречых и старых мышей увеличивается в 1,5 раза (таблица 3) Наши данные противоречат мнению о более выраженной активации перекисного окисления липидов при развитии интоксикации в пожилом и старческом возрасте (М В Кинах, 1990)

Таблица 4

Показатели общего анализа крови (М±т) у мышей разного возраста с экзогенной интоксикацией (ЭИ)

Показатели Возраст мышей

6 месяцев 20 месяцев

Контроль (п-14) ЭИ 1 (п=14) Р Контроль (п=14) ЭИ (п=14) р

Эритроциты (10|2/л) 10,6±0,27 9,1±0,20 <0,005 10,3±0,32 8,4±0,32 * <0,005

Гемоглобин (г/л) 169,4±3,44 148±1,97 <0,001 171,3±5,27 145,6+2,45 <0,005

Гематокрит (л/л) 45,5±0,94 48,2±0,91 <0,1 47,8±1,53 52,6±0,64 **** <0,05

Тромбоциты (10%) 585,7±43,04 448,7±21,87 <0,05 508,4±32,76 418,4±18,87 <0,05

Лейкоциты (109/ч) 9030±913 9640±468 >0,2 10850±928 * 13560±547 ***** <0,05

С/я нейтрофилы (109/л) 3405±616 6009+363 <0,01 4774±512 9362±337 ***** <0,001

П/я нейтрофичы (109/л) 164,8±49,66 355,2±32,27 <0,05 207,4±28,54 * 431,8±42,04 * <0,005

Лимфоциты (109/л) 5098±499 2721±206 <0,005 4899±370 2991±270 <0,005

Базофилы (109/л) 55,0±32,15 100,9±24,59 >0,2 0±0 * 0±0 **** >0,2

Эозинофилы (109/л) 90,0±22,30 76,9± 13,64 >0,2 35,2±18,60 * 0±0 ***** <0,1

Моноциты (109/л) 160,3±49,57 375,5±37,83 <0,01 944,5~tl03,0 ***** 775,0±83,0 **** >0,2

Л/СН 2,0±0,37 0,5±0,04 <0,005 1,1 ±0,08 ** 0,3±0,03 ** <0,001

СОЭ (мм/час) 1,2±0,13 2,20.25 <0,01 1,7±0,2Г 3,2±0,25 *# <0,005

ГПИ 0,40±0,07 1,19±0,13 <0,001 0,91 ±0,13 *** 3,92±0Д0 ***** <0,001

Экзогенная интоксикация (таблица 4), как у зрелых, так и у старых мышей, приводит к снижению уровня гемоглобина, количества эритроцитов, тромбоцитов, лимфоцитов и индекса Гаркави, и повышению числа палочкоядерных, сегментоядерных нейтрофилов и СОЭ Число лейкоцитов и показатель гематокрита увеличиваются только у старых животных Экзогенная интоксикация приводит к повышению ГПИ у зрелых мышей - в 3 раза, а у старых животных - в 4,3 раза У старых мышей после воздействия четыреххлористого углерода число эритроцитов уменьшается, а количество сегментоядерных нейтрофилов и ГПИ повышаются более выражено, чем у зрелых животных

Полученные результаты свидетельствуют о том, что токсические воздействия на организм по мере увеличения возраста становятся более агрессивными и опасными Экзогенная интоксикация усугубляет возрастные нарушения микроциркуляции, пере-кисного окисления липидов и клеточного состава периферической крови Отрицательное влияние экотоксиканта на скорость ИГТ и ЛД тканей и ГПИ в большей степени проявляется у старых мышей Степень увеличения концентрации МДА в сыворотке крови под влиянием четыреххлористого углерода у зрелых и старых животных одинакова

Таким образом, старение и экзогенная интоксикация однонаправлено влияют на состояние ИГТ и ЛД тканей, активность перекисного окисления и показатель интоксикации, рассчитываемый по параметрам общего анализа крови Между угнетением скорости лимфооттока, повышением концентрации МДА в сыворотке крови и ГПИ имеется прямая корреляция, проявляющаяся у животных всех возрастов как без воздействия экотоксиканта, так и на его фоне (г = от +0,65 до +0,99)

3. Показатели скорости ИГТ и ЛД тканей, перекисного окисления липидов и общего анализа крови при воздействии антиоксидантов (таблица 5)

Полученные результаты поставили задачу поиска медикаментозных средств, позволяющих одновременно купировать или уменьшить проявления нарушений всех изученных нами параметров гомеостаза, развивающихся как по мере старения, так и при экзогенной интоксикации Такими свойствами, с нашей точки зрения, должны обладать препараты с антиоксидантной активностью В последние годы они находят все более широкое применение в клинической практике Логично предположить, что для предотвращения последствий активации перекисного окисления липидов необходимо не только нейтрализовать свободные радикалы, усилить устойчивость к ним клеточных мембран и увеличить антиоксидантную защиту, но и вывести продукты липидной пероксидации из межклеточного матрикса Последнее возможно только при наличии у лекарственного препарата способности усиливать ИГТ и ЛД тканей Между тем, влияние антиоксидантов на функции лимфатической системы, в том числе на ЛД тканей, практически не изучены В единичных работах показана возможность стимуляции лимфотока препаратом мексидол (Д А Мухутдинов, 2007, М Г Рябков, 2002)

Изучены наиболее известные препараты с доказанной антиоксидантной активностью Эмоксипин является антиоксидантом, обладающим антигипоксической, анги-опротекторной и антиагрегантной активностью Он снижает активность микросо-мальных реакций, играющих первостепенную роль в метаболизме полициклических ароматических углеводородов, к которым относится и четыреххлористый углерод Однако антигипоксическая активность препарата выражена слабо Янтарная кислота проявляет антиоксидантные свойства за счет снижения концентрации кислорода в цитозоле клеток в результате активации его потребления, что приводит к уменьше-

нию образования активных форм кислорода В отличие от эмоксипина, препарат обладает высокой атигипоксической и противоишемической активностью Янтарная кислота, представляющая собой экзогенный сукцинат, плохо проникает через биологические барьеры Это послужило основанием для создания нового препарата, получившего название мсксидол, представ чяющего собой комплекс янтарной кислоты с эмоксипином Эмоксипин облегчает транспорт янтарной кислоты через мембраны Учитывая, что эндотоксины являются главной причиной блока тканевого дыхания, для исследования нами выбран цитохром С Он является естественным для организма компонентом дыхательной цепи митохондрий, участвующим в переносе электронов, вследствие чего может рассматриваться как средство заместительной терапии С возрастом в органах понижаются количество цитохрома С и активность цитохромок-сидазы (В N Arnes et al, 1995, R G Cutler, 1991) Препарат растительного происхождения хофитол приготовлен из очищенного экстракта сока свежих листьев артишока (Cynara scolymus) Антиоксидантный эффект препарата объясняется его защитным действием в отношении клеточной мембраны от повреждающих экзогенных факторов за счет активации дыхательных ферментов и нормализации уровня атиоксидантной защиты клетки Преимуществом препарата является возможность использовать его без возрастных ограничений Выбор для исследования препарата селен-акгив обусловлен тем, что селен известен как важнейший элемент антиоксидантной защиты организма Являясь активным центром глютатионпероксидазы, он защищает клетки от разрушающего действия свободных радикалов Показано снижение концентрации селена в крови при старении (Ж.И Абрамова, Г И Оксенгендлер, 1985) и в печени при отравлении четыреххлористым углеродом (Е А Батаков, 2001)

Выбор для проведения исследований зрелых мышей обусловлен наличием у них изменений, свидетельствующих об угнетении ИГ Г и ЛД тканей, усилении процессов перекисного окисления липидов и нарастании интоксикации по параметрам периферической крови В таблице 5 изученные препараты расположены по мере убывания их антиоксидантной активности

Таблица 5

Влияние антиоксидантов на время удаления лимфотропного красителя из брыжейки (мин), концентрацию МДА (нмоль/л) и ШИ у зрелых мышей

Препараты МДА Время удаления метки (мин) ГПИ

M±m(n=12) Р М±т (п=12) Р М±т (п=12) р

Контроль 15,03±0 30 59,4± 1,44 0,40±0,07

Мексидол 2,32±0,64 <0,001 34,3±0,59 <0,001 0,31±0,08 >0,2

Селен-актив 2,62±0,28 <0,001 52,0± 1,75 <0,01 0,25±0,02 <0,05

Хофитол 8,82±0,99 <0,01 39,3±1,25 <0,001 0,06±0,02 <0,001

Янтарная кислота 10,86±0,60 <0,005 36,8±1,26 <0,001 0,20±0 04 <0,05

Эмоксипин 12,41 ±0,85 <0,05 34,6±0,73 <0,001 0,76±0,18 <0,1

Цитохром С 12,96±0,51 <0,05 44,6± 1,21 <0,005 0 36±0,06 >0,2

Самое значительное антиоксидантное и стимулирующее ИГТ и ЛД тканей действие оказывает мексидол Так, после его применения время эвакуации лимфотропного красителя из брыжейки и концентрация МДА в сыворотке крови уменьшаются до уровня показателей у молодых мышей Однако мексидол не изменяет величину ГПИ Кроме этого, в крови зрелых мышей он уменьшает количество эритроцитов, лейкоцитов, лимфоцитов, палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов эозинофилов, но не влияет на СОЭ

Выраженные антиокеидантные свойства проявляет селен-актив, уступая только мексидолу После его применения концентрация МДА в сыворотке крови зрелых мышей сравнивается с уровнем показателя у молодых животных Между тем по способности усиливать ИГТ и ЛД тканей в наших исследованиях он стоит на последнем, шестом месте Время удаления лимфотропного красителя из брыжейки и ГПИ под влиянием препарата хотя и снижаются, однако не достигают значений аналогичных параметров у молодых мышей Селен-актив уменьшает количество тромбоцитов, лейкоцитов, лимфоцитов, палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, показатель гематокрита и уровень гемоглобина Препарат не влияет на количество эритроцитов и СОЭ в крови зрелых мышей

Третье место по антиоксидантной активности занимает хофитол Концентрация МДА в сыворотке крови при его применении достоверно снижается, но остается выше, чем у молодых животных По лимфостимулирующей способности среди изученных препаратов он стоит на четвертом месте, но более других снижает ГПИ Хофитол нормализует скорость ИГТ и ЛД тканей и ГПИ, приближая их к показателям у молодых мышей Препарат уменьшает количество эритроцитов, тромбоцитов, сегментоядерных нейтрофилов, уровень гемоглобина и показатель гематокрита Он значительно повышает число эозинофилов и индекс Гаркави Хофитол не влияет на число лимфоцитов, палочкоядерных нейтрофилов, базофилов и моноцитов крови

Четвертое место по антиоксидантным свойствам принадлежит янтарной кислоте. Препарат снижает уровень МДА в сыворотке крови и ГПИ, но после его воздействия показатели остаются выше, чем у молодых животных Янтарная кислота восстанавливает нарушенную с возрастом скорость ИГТ и ЛД тканей, доводя ее до уровня, определяемого у молодых мышей Препарат повышает количество лейкоцитов, моноцитов крови, индекс Гаркави и уменьшает число тромбоцитов и уровень гемоглобина Он не влияет на количество лимфоцитов, эозинофилов и моноцитов в крови зрелых мышей

Пятое место по антиоксидантной активности в наших исследованиях занимает эмоксипин Он снижает уровень МДА в сыворотке крови, но не доводит его до показателя, регистрируемого у молодых животных При этом препарат проявляет значительные лимфостимулирующие свойства Время удаления лимфотропного красителя из брыжейки под влиянием эмоксипина уменьшается и достигает значений, характерных для молодых мышей Эмоксипин не изменяет ГПИ, поскольку его увеличение после воздействия препарата статистически недостоверно Из всех изученных препаратов эмоксипин меньше всего влияет на показатели периферической крови После его воздействия в крови зрелых мышей уменьшаются количество эритроцитов и уровень 1емоглобина, но остальные параметры общего анализа крови практически не изменяются

Влияние Цитохрома С на активность перекисного окисления липидов приближается к действию эмоксипина, однако лимфостимулирующее действие препарата менее значительно (пятое место из всех изученных препаратов) Он повышает скорость ИГТ и ЛД тканей и снижает концентрацию МДА в сыворотке крови, но не доводит их до уровня показателей у молодых мышеи Цитохром С снижает количество эритроцитов, тромбоцитов, лейкоцитов, сегментоядерных нейтрофилов, лимфоцитов, эозинофилов, уменьшает уровень гемоглобина крови и повышает число моноцитов и СОЭ, однако не влияет на индекс Гаркави и ГПИ

Таким образом, нами установлено, что все изученные препараты обладают способностью стимулировать ИГТ и ЛД тканей, и снижают концентрацию МДА в сыворотке крови, однако выраженность их лимфостимулирующей активности в большин-

стве случаев не соответствует их антиоксидантной силе. На рисунке 1 представлены данные, позволяющие сравнить активность препаратов на анализируемые параметры гомеостаза.

Рис.1. Влияние различных препаратов с антиоксидантной активностью на скорость ИГТ и ЛД тканей, концентрацию МДА в сыворотке крови и ГПИ у зрелых мышей

О Время удаления лимфотропного

красителя из брыжейки □ Концентрация МДА в сыворотке

крови ЕЗ ГПИ

Препараты:

1-мексидол

2- селен-актив

3- хофитол

4- янтарная кислота

5- змоксипин

6- цитохром С

Примечание. Разность показателей у мышей без применения лекарственных средств и у мышей после их введения рассчитана в процентах по отношению к аналогичным параметрам, регистрируемым у зрелых животных, не получавших антиоксиданты.

Мексидол, эмоксипин, янтарная кислота и хофитол обладают высокой и одинаково выраженной лимфостимулирующей активностью. Однако наиболее значительное антиоксидантное действие в этой группе лекарственных средств оказывает мексидол, а хофитол вызывает выраженное снижение Г'ПИ, в то время как мексидол и эмокси-I пин не влияют на этот показатель интоксикации. Лимфодренирующее действие цито-хрома С и селен-актива менее значительно, чем у предыдущих препаратов. При этом цитохром С мало влияет на уровень МДА в сыворотке крови и совсем не оказывает действия на ГПИ. Напротив, селен-актив проявляет сильные антиоксидантные свойства при одновременно умеренном действии на ГПИ.

4. Коррекция изменений дренажной функции лимфатической системы, перекис-ного окислений липидов и показателей общего анализа крови у мышей разного возраста с экзогенной интоксикацией

Полученные данные предопределили выбор наиболее оптимальной комбинации изученных препаратов для предупреждения и уменьшения нарушений ИГТ и ЛД тканей, активации перекисного окисления липидов и токсических изменений клеточного состава крови, установленных нами при экзогенной интоксикации. Мы предположили, что перспективным может быть сочетанное применение мексидола и хофитола. Из всех изученных препаратов мексидол является самым мощным антиоксидантом и стимулятором ЛД тканей, однако он совершенно не влияет на ГПИ. Этот недостаток нивелирует хофитол, который наиболее значительно снижает ГПИ, проявляя наряду с этим достаточно выраженные лимфостимулирующие и антиоксидантные свойства.

В таблице 6 представлена динамика времени удатения лимфотропного красителя из брыжейки, уровня МДА в сыворотке крови под влиянием сочетанного применения препаратов мексидол и хофитол у зрелых и старых мышей при экзогенной интоксикации, вызванной четыреххлористым углеродом.

Таблица 6

Влияние сочетанного применения препаратов мексидол и хофитол на скорость удаления лимфотропного красителя из брыжейки и уровень МДА в сыворотке крови у мышей разного возраста при экзогенной интоксикации (ЭИ)

Группы экспериментов Показатели

Время удаления метки (мин) Р эи Рк МДА (нмоль/л) Рэи Рк

Зрелые мыши

ЭИ без лечения 77,8± 1,70 <0,005 22,2± 1,30 <0,001

ЭИ на фоне лечения (п=12) 66,9± 1,60 <0,005 <0,05 18,3±0,62 <0,05 <0,05

Старые мыши

ЭИ без лечения 103+1,30**** <0 001 26,1 ±0,60** <0,001

ЭИ на фоне лечения (п=12) 95,2±1,30***** <0,005 <0,001 23,2±0,64***** <0,01 <0,005

Установлено, что предложенный комплекс антиоксидантов положительно воздействует на все изученные параметры, как у зрелых, так и у старых животных Он ускоряет ИГТ и ЛД тканей и снижает концентрацию МДА в сыворотке крови, однако не доводит их до уровня, регистрируемого у мышей данного возраста без экзогенной интоксикации

Сочетанное применение препаратов мексидол и хофитол у мышей разного возраста с экзогенной интоксикацией (таблица 7) уменьшает показатель гематокрита, количество лейкоцитов, палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов крови и повышает индекс Гаркави У зрелых животных, в отличие от старых мышей, под влиянием лечения в крови увеличивается число тромбоцитов и уменьшается количество базо-филов Старые животные, в отличие от зрелых мышей, реагируют на проведенную терапию повышением числа эритроцитов, уровня гемоглобина, количества эозинофи-лов и снижением числа моноцитов и СОЭ Введение животным на фоне моделирования экзогенной интоксикации препаратов мексидол и хофитол, ни у зрелых мышей, ни у старых животных, не предотвращает снижения в крови количества лимфоцитов

Медикаментозная коррекция экзогенной интоксикации приводит к снижению ГПИ в 3,0 раза - у зрелых мышеи, и в 2,9 раза - у старых животных У зрелых мышей показатель приближается к контрольному уровню, а у старых животных остается выше, чем в контроле Однако и после терапии ГПИ у старых мышей остается выше, чем у зрелых животных

При сравнении реакции изученных показателей на проводимую терапию у животных разного возраста установлено, что нарушения ЛД тканей и перекисное окисление липидов лучше купируются у зрелых животных, тогда как ГПИ более значительно корректируется у старых мышей Это согласуется с данными Ю Н Шарикова (2002) о том, что молодые мыши по сравнению с взрослыми животными более активно реагируют ускорением ИГТ и ЛД тканей на различные факторы физического воздействия (согревание, массаж и др ) Положительная динамика числа тромбоцитов, лимфоцитов, базофилов и индекса Гаркави под влиянием лечения у зрелых мышей более значительна, чем у старых животных Напротив, такие показатели, как количество лейкоцитов, сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов в ответ на проведенную терапию более выражено реагируют у старых животных

Таблица 7

Показатели общего анализа крови (М±тп) при медикаментозной коррекции экзогенной интоксикации (ЭИ) у мышей разного возраста

Группы экспериментов ЭИ без лечения (п=14) ЭИ на фоне лечения (п=12) Возраст мышей

6 месяцев Рэи Рк 20 месяцев Рэи Рк

Эритроциты (10и/л)

ЭИ без лечения 9,1 ±0,20 <0,005 8,4±0,32* <0,005

ЭИ на фоне лечения 9,9±0,31 <0,1 <0,2 9,6±0,24 <0,05 <0,2

Гемоглобин (г/л)

ЭИ без лечения 148±1 97 <0,001 145 6±2,45 <0,005

ЭИ на фоне лечения 155,4±3,38 <0,1 <0,01 154,9±2,77 <0,05 <0,05

Гематокрит (л/л)

ЭИ без лечения 48,2±0,91 р<0,1 52,6±0,64**** <0,05

ЭИ на фоне лечения 44,5±0,97 <0,05 >0,2 49,0±0,92*** <0,05 >0,2

Тромбоциты (10ч/л)

ЭИ без лечения 448,7±21,87 <0,05 418,4±18,87 <0,05

ЭИ на фоне лечения 539,1±17,35 <0,01 >0,2 441,7±13,08**** >0,2 <0,1

Лейкоциты (10у/л)

ЭИ без лечения 9640±468 >0,2 13560±547***** <0,05

ЭИ на фоне лечения 7470±346 <0,005 <0,2 9210±440** <0,001 <0,2

Сегмеитояде рные нейгрофилы (107/л)

ЭИ без лечения 6009±363 <0,01 9362±337***** <0,001

ЭИ на фоне лечения 3685±358 <0,005 >0,2 5619±328**** <0,001 <0,2

Палочкоядерные нейтрофилы (10*/т)

ЭИ без лечения 355,2±32,27 <0,05 431,8+42,04* <0,005

ЭИ на фоне лечения 120,3±18,45 <0,001 >0,2 175±21,80* <0,001 >0,2

Лимфоциты (10/л)

ЭИ без лечения 2721±206 <0,005 2991±270 <0,005

ЭИ на фоне лечения 3262±153 <01 <0,01 3005±289 >0,2 <0,005

Базофилы (1 OVn)

ЭИ без лечения 100,9±24,59 >0,2 QiQ**** 1 >0,2

ЭИ на фоне лечения б,6±6,6 <0,005 <0,2 0±0 1 >0,2 >0,2

Эозинофилы (10*/л)

ЭИ без лечения 76 9*13,64 >0,2 Q-j-Q***** <0,1

ЭИ на фоне лечения 38,1±12,80 <0,1 <0,1 36,9Ы 5,20 <0,05 >0,2

Моноциты (10 /л)

ЭИ без лечения 375,5±37,83 <0,01 775,0±83,0**** >0,2

ЭИ на фоне лечения 351,7±37 40 >0,2 <0,05 373,8±27,0 <0,001 <0,001

Л/СН

ЭИ без лечения 0,5±0,04 <0,005 0,3±0,03** <0,001

ЭИ на фоне лечения 1,ОНО,15 <0,01 <0,05 0,56±0,07** <0,05 <0,001

СОЭ (мм/час)

ЭИ без лечения 2,20,25 <0,01 3,2±0,25** <0,005

ЭИ на фоне лечения 1,5±0,70 <0,1 >0,2 2,3±0,21** <0,05 <0,2

ГПИ

ЭИ без лечения 1.19±0 13 <0,001 | 3,92±0,20***** <0,001

ЭИ на фоне лечения 0,63±0,11 <0.01 <0,1 1 1,37±0,13***** <0,001 <0,05

Между основными изученными показателями интоксикации (угнетение скорости ИГТ и ЛД тканей, повышение концентрации МДА в сыворотке крови и ГПИ) у животных разного возраста с экзогенной интоксикацией, разворачивающейся на фоне медикаментозной коррекции, регистрируется сильная прямая связь (г = от +0,94 до +0,99)

Полученные" результаты показывают перспективность коррекции возрастных и токсических нарушений, таких как угнетение микроциркуляции в ее лимфатическом звене и активация липидной пероксидации Это ставит задачу поиска клинических доказательств возможности замедления процессов старения с использованием изученных препаратов и их различных комбинаций

ВЫВОДЫ

1 По мере увеличения возраста у мышей нарастает эндогенная интоксикация, о чем свидетельствует прогрессирующие угнетение интерстициального гуморального транспорта и лимфатического дренажа тканей, повышение уровня малонового диаль-дегнда в сыворотке крови и гематологического показателя интоксикации Наиболее выраженные изменения этих параметров приходятся на возрастной период мышей от 3-х до 6-ти месяцев Между нарушением скорости тканевого лимфооттока, повышением концентрации малонового диальдегида в сыворотке крови и гематологического показателя интоксикации у молодых, зрелых и старых животных регистрируется прямая сильная связь (г=+0,9, р<0,001)

2 Экзогенная интоксикация, вызванная введением четыреххлористого углерода, усиливает эндогенную интоксикацию, развивающуюся при старении живошых Как у зрелых, так и у старых мышей, нарастают торможение интерстициального гуморального транспорта и лимфатического дренажа тканей, уровень малонового диальдегида в сыворотке крови и гематологический показатель интоксикации Степень активации перекисного окисления липидов под влиянием экотоксиканта одинакова у зрелых и старых мышей Нарушения лимфооттока и гематологического показателя интоксикации при воздействии четыреххлористого углерода более значительны у старых животных

3 Изученные антиоксиданты различаются по степени влияния на концентрацию малонового диальдегида в сыворотке крови зрелых мышей Мексидол и селен-актив вызывают самое значительное ее снижение Хофитол и янтарная кислота обладают умеренной антиоксидантной активностью Менее всего уровень малонового диальдегида изменяется под влиянием эмоксипина и цитохрома С

4 Все изученные препараты с антиоксидантной активностью усиливают интерсти-циальный гуморальный транспорт и лимфатический дренаж тканей, однако выраженность их лимфостимулирующей активности в большинстве случаев не соответствует их антиоксидантной силе Наиболее значительно время выведения лимфогропного красителя из брыжейки мышей ускоряют мексидол и эмоксипин Янтарная кислота и хофитол проявляют умеренные лимфостимулирующие свойства Менее всего на лимфатический дренаж тканей влияют селен-актив и цитохром С

5 Гематологический показатель интоксикации снижается только под влиянием хо-фитола, янтарной кислоты и селен-актива Препараты мексидол, эмоксипин и цитохром С не влияют на этот показатель

6 Применение мексидола в сочетании с хофитолом при моделировании экзогенной интоксикации, как у зрелых, так и у старых мышей, приводит к усилению скорости интерстициального гуморального транспорта и лимфатического дренажа тканей,

снижению концентрации малонового диальдегида в сыворотке крови и уменьшению гематологического показателя интоксикации, однако не доводит эти показатели до > ровня, регистрируемого у интактных животных соответствующего возраста Эффективность терапии в восстановлении лимфооттока и подавлении процессов перекисно-го окисления липидов более значительна у зрелых мышей, а в нормализации гематологического показателя интоксикации - у старых животных

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Попова CAO новом механизме действия геропротекторов с антиоксидантной активностью / JIП Свиридкина, С А Попова, С Г Топорова // Тезисы научно-практической конференции «Общество, государство и медицина - для пожилых и инвалидов» - 2005 -Москва -С 87-88

2 Попова С А Влияние антиоксидантов на скорость выведения продуктов перекис-ного окисления липидов из околоклеточного пространства / JIП Свиридкина, С А Попова, С Г Топорова // Тезисы докладов XIII Российского национального конгресса «Человек и лекарство» - 2006 -Москва -С 278

3 Попова С А Перекисное окисление липидов и лимфатический дренаж тканей пути коррекции возрастных и токсических нарушений / С А Попова, JIП Свиридкина, С Г Топорова // Тезисы конференции «Общество, государство и медицина для пожилых» - 2006 -Москва -С 76-77

4 Попова С А Препараты с антиоксидантной активностью возможность коррекции нарушений дренажной функции лимфатической систеы и перекисного окисления липидов при экзогенной интоксикации / С А Попова, Л П Свиридкина, С Г Топорова // Тезисы 1-го Сибирского съезда лимфологов с международным участием -2006 -Новосибирск -С. 269-271

5 Попова С А Влияние возраста и эндогенной интоксикации на интерстициальный гуморальный транспорт и лимфатический дренаж тканей и перекисное окисление липидов / Л П Свиридкина, С А Попова, С Г Топорова // Тезисы конференции «Перспективы фундаментальной геронтологии» -2006 -С -Петербург -С 45-46

6 Попова С А Возрастные нарушения дренажной и транспортной функции лимфатической системы при токсикозе и пути их коррекции препаратами антиоксидант-ного действия / С А Попова, Л П Свиридкина, С Г Топорова // «Свободные радикалы, антиоксиданты и старение» Тезисы международной научной конференции -2006 -Астрахань -С 39-41

7 Попова С A. Disturbances oi drainage and transport functions of lymphatic m toxicosis and the means of their correction using antioxidant agents / С А Попова, Л П Свиридкина, С Г Топорова, Г В Кукушкин // «Actualitatin ftiziopneumologie metode de limfologie chnica si rcabihtare endoecologica m pneu-mologie, ftiziologie si terapie generate» Materialele conference scientific-practice eu participate international -2006 ~ Chismau -Volume II -P 31-32

8 Попова С A Эффективность мексидола и хофитола в коррекции лимфатического дренажа при экзогенной интоксикации у мышей среднего и старого возраста / С А Попова, Л П Свиридкина, С Г Топорова // Тезисы докладов XIV Российского Национального Конгресса «Человек и лекарство» -2007 -Москва -С 865

9 Попова С А Природные антиоксиданты возможность коррекции нарушений дренажной функции лимфатической системы и перекисного окисления липидов / С А Попова, Л П Свиридкина, С Г Топорова // Тезисы всероссийской иаучно-

практической конференции «Санаторно-курортное лечение фундаментальные, прикладные и организационные аспекты» -2007 -Новосибирск -С 51-52

10 Попова С А Детоксикационный эффект лимфостимуляции сочетанным применением хофитола и мексидола при усилении перекисного окисления липидов у мышей разного возраста / С А Попова, JIП Свирвдкина, С Г Топорова // Тезисы конференций «Общество, государство и медицина для пожилых» -2007 -Москва -С 84-85

11 Попова С А ЭРЛ в геронтологам Возрастные аспекты лечебных воздействий на ИГТ и метаболизм (экспериментальное исследование) / С А Попова // Глава в монографии «Прорыв в эндоэколотческую медицину Новый уровень врачебного мышления и эффективной терапии» под редакцией Ю М Левина -2007 -Москва -Том II -С 167-171

12 Попова С А Открытие свойства влиять на транспорт тканевой жидкости (ТТЖ) и лимфатический дренаж (ЛД) тканей у некоторых известных лекарственных препаратов / Ю М Левин, С Г Топорова, Л П Свиридкина, Ф А Баркинхоева, С А Попова, Г В Кукушкин // Тезисы III международного конгресса «Эндоэкологиче-ская медицина» -2007 -Кипр -С 69

13 Попова С А Эндоэкологическая концепция противодействия преждевременному старению / С Г Топорова, Свиридкина Л П, С А Попова, О И Лопырева // Тезисы III международного конгресса «Эндоэкологическая медицина» -2007 -Кипр -С 23-24

14 Попова С А Оптимизация дренажной функции лимфатической системы (ЛС) ан-тиоксидантами при интоксикации в зависимости от возраста / С А Попова // Тезисы III международного конгресса «Эндоэкологическая медицина» -2007 -Кипр -С 24-25

15 Попова С А Внесосудистыи гуморальный транспорт и лимфатический дренаж тканей - новые мишени лечебных воздействий у пациентов пожилого и старческого возраста / С Г Топорова, Л П Свиридкина, Ф А Баркинхоева, С А Попова, Г В Кукушкин // Тезисы XII международной научно-практической конференции "Пожилой больной Качество жизни" -2007 -Москва -С 89-90

16 Попова С А Возрастные изменения функций лимфатической системы при экзогенной интоксикации и пути их коррекции /С А Попова, Л П Свиридкина, С Г Топорова//Успехи геронтологии -2008 -№1 -С 122-126

17 Попова С А Влияние мексидола и хофитола на лимфатический дренаж тканей и перекисное окисление липидов у интактных зрелых мышей и при экзогенной интоксикации /С А Попова // Тезисы докладов XV Российского национального Конгресса «Человек и лекарство» - 2008 -Москва -С 686

Список сокращений

ГПИ Гематологический показатель интоксикации ИГТ Интерстициальный гуморальный транспорт ЛД Лимфатический дренаж

Л/СН Соотношение лимфоцитов к сегментоядерным нейтрофилам

(индекс Гаркави) МДА Малоновый диальдегид СОЭ Скорость оседания эритроцитов ЭИ Экзогенная интоксикация

Актуальность темы

Известно, что экологическая ситуация в России остается крайне тревожной и сопровождается ухудшением показателей здоровья населения [4]. При этом размеры физического и химического загрязнения внутренней среды уже достигли таких величин, которые могут представлять реальную угрозу нарушению фундаментальных биологических и биохимических основ жизнедеятельности современного человека. Ионизирующая радиация, ультрафиолетовое излучение, табачный дым, смог, пищевые консерванты, пестициды и ряд других химических веществ проникают в организм человека и животных через легкие, кожные покровы или желудочно-кишечный тракт. Подавляющее большинство ксенобиотиков подвергается целому ряду биохимических превращений, в процессе которых происходит образование побочных высокореактивных продуктов радикальной природы, способных инициировать процессы перекисного окисления биомолекул [27, 218, 224]. Свободные радикалы генерируются и при биотрансформации многих лекарственных препаратов. Таким образом, как экзогенная, так и эндогенная интоксикация, реализуются через процессы перекисного окисления липидов, продукты которого являются ее основным субстратом [25, 176, 212]. Можно предположить, что экзогенным токсическим воздействиям наиболее подвержены лица пожилого и старческого возраста, число которых в структуре населения России возрастает [211, 247].

В настоящее время одной из плодотворно развивающихся фундаментальных теорий в геронтологии является свободнорадикальная теория старения [15, 60, 79, 99, 128, 264, 274, 296]. Основные аргументы, которые приводят сторонники этой теории, сводятся к следующему. С возрастом в организме нарастает продукция активных форм кислорода при одновременном уменьшении способности антиоксидантной защиты и снижении эффективности процессов репарации окислительных повреждений [14]. Накапливаясь в органах и тканях, они ускоряют процессы естественного старения, способствуют преждевременному старению и раннему формированию болезней пожилого возраста, включая рак, атеросклероз, сердечно-сосудистые заболевания, возрастную иммунодепрес-сию, нейродегенеративные заболевания и дисфункции мозга [15, 264, 284, 296].

Согласно другой теории старения, названной гуморальной, главной его причиной является интоксикация организма вследствие затруднения выведения из интерстиция накопившихся продуктов метаболизма [86, 87]. Учитывая, что с возрастом показатели эндогенной интоксикации нарастают, существует мнение, что старение и есть интоксикация [23].

Как возраст, так и интоксикация, вызывают однонаправленные нарушения в различных звеньях микроциркуляторного русла: в кровеносном [4, 52, 85, 142, 350], интерстициальном [75, 82, 178, 230] и лимфатическом [32, 47, 104, 178, 259]. В системе околоклеточного гуморального транспорта происходят изменения, ограничивающие как доставку в межклеточный матрикс, а затем в клетку, необходимых питательных веществ, лекарств и кислорода, так и выведение продуктов жизнедеятельности [212]. Накапливаясь в околоклеточном пространстве, метаболиты и ксенобиотики могут запускать комплекс реакций, таких как стимуляция фагоцитоза и образование цитокинов, активация перекис-ного окисления липидов, систем калликреин-кинина, комплемента, свертывания крови и лимфы [25, 50, 87, 323]. Нарастающая интоксикация ведет к снижению активности окислительных ферментов, падению способности к адаптации при уменьшении напряжения кислорода в крови, результатом чего является развитие гипоксической, циркуляторной и тканевой гипоксии [88, 278]. Эти изменения становятся предпосылкой к преждевременному старению и предопределяют возрастную специфику течения заболеваний - полиморбидность, склонность к хронизации, наличие осложнений, потребность в назначении большого количества лекарственных препаратов. Следовательно, лица пожилого и старческого возраста, так же как и пациенты с эндогенной и экзогенной интоксикацией, независимо от имеющейся у них патологии, нуждаются в анти-оксидантной защите, в усилении гуморального транспорта в межклеточном матриксе и лимфооттока.

Идея возможности медикаментозного управления интерстициальным гуморальным транспортом и лимфатическим дренажом тканей, выдвинутая Ю.М. Левиным [145], в последние годы находит все большее подтверждение [43, 147, 186, 208, 226, 241], что открывает новые пути решения этой проблемы. В настоящее время в профилактике и лечении широкого круга заболеваний большая роль отводится антиоксидантам [53, 58, 80, 106, 115, 120, 124]. Однако, несмотря на расширение знаний о влиянии лекарственных средств на лимфатический дренаж тканей, сведения о действии препаратов с антиоксидантной активностью на лимфоотток остаются единичными [34, 170, 201].

Цель исследования: сопоставить возрастные изменения дренажной функции лимфатической системы с активностью перекисного окисления липидов в норме и при экзогенной интоксикации и определить пути их медикаментозной коррекции.

Задачи исследования:

1. Выявить возрастные особенности скорости интерстициального гуморального транспорта и лимфатического дренажа тканей, уровня малонового диальде-гида в сыворотке крови и показателей общего анализа крови.

2. Исследовать влияние экзогенной интоксикации, вызванной четыреххлори-стым углеродом, на перечисленные показатели у мышей разного возраста.

3. Провести сравнительное изучение действия препаратов с известной антиоксидантной активностью на концентрацию малонового диальдегида в сыворотке крови зрелых мышей.

4. Оценить действие препаратов с антиоксидантной активностью на скорость интерстициального гуморального транспорта и лимфатического дренажа тканей у зрелых мышей

5. Изучить динамику показателей общего анализа крови у зрелых мышей при воздействии препаратов с антиоксидантной активностью.

6. Определить эффективность совместного применения препаратов мексидол и хофитол в коррекции экзогенной интоксикации у мышей разного возраста.

Научная новизна:

• Установлена прямая корреляция между угнетением интерстициального гуморального транспорта, повышением концентрации малонового диальдегида в сыворотке крови и гематологического показателя интоксикации у мышей разного возраста.

• Обнаружено, что наиболее выраженные изменения лимфатического дренажа тканей, уровня малонового диальдегида и гематологического показателя интоксикации происходят в период достижения мышами зрелого возраста.

• Выявлено, что нарушение микроциркуляции в межклеточном и лимфатическом ее звеньях, изменение активности перекисного окисления липидов и показателей интоксикации крови, развивающиеся при старении и под влиянием экзогенной интоксикации, имеют однонаправленный характер.

• Впервые установлено, что препараты с антиоксидантной активностью обладают способностью стимулировать интерстициальный гуморальный транспорт и лимфатический дренаж тканей, однако степень их антиоксидантного и лим-фостимулирующего действия различна.

• Доказана эффективность медикаментозной коррекции угнетения лимфообразования и лимфооттока, возникающих, как по мере старения, так и в результате воздействия экотоксикантов.

• Показано, что при экзогенной интоксикации эффективность препаратов с антиоксидантной активностью в восстановлении лимфооттока и снижении активности перекисного окисления липидов выше у зрелых мышей, а в нормализации гематологического показателя интоксикации — у старых животных.

Теоретическая значимость работы

Анализ результатов проведенной работы позволяет прояснить некоторые механизмы старения, выявить возрастные особенности реакции на экзогенные токсины и раскрыть новые аспекты действия препаратов, известных своими ан-тиоксидантными свойствами.

Практическая значимость работы

Показано, что сочетанное применение препаратов мексидол и хофитол корректирует нарушения процессов перекисного окисления липидов и лимфатического дренажа тканей, возникающие с возрастом и при экзогенной интоксикации. Это ставит задачу дальнейших клинических исследований для определения показаний к комплексному применению препаратов с антиоксидантной активностью с целью протекции от воздействия экотоксикантов, предотвращения преждевременного старения и лечения заболеваний, обусловленных возрастом. Основные положения, выносимые на защиту

1. По мере старения наблюдается прогрессирующее угнетение интерстициального гуморального транспорта и лимфатического дренажа тканей, активация перекисного окисления липидов и повышение гематологического показателя интоксикации. Действие экзогенного токсина усиливает эти процессы.

2. Все изученные препараты обладают способностью снижать концентрацию малонового диальдегида в сыворотке крови и усиливать интерстициальный гуморальный транспорт и лимфатический дренаж тканей, однако выраженность их лимфостимулирующей активности в большинстве случаев не соответствует их антиоксидантной силе. Наличие антиоксидантных свойств у лекарственного препарата не гарантирует его положительного влияния на гематологический показатель интоксикации.

3. Сочетанное применение препаратов мексидол, проявляющего наибольшую антиоксидантую и лимфостимулирующую активность, и хофитол, обладающего способностью значительно снижать гематологический показатель интоксикации, уменьшает проявления экзогенной интоксикации, как у зрелых, так и у старых животных.

Апробация работы

По результатам исследований опубликовано 17 работ, в том числе 1 глава в монографии и 1 статья в журнале, рекомендованном ВАК.

Материалы диссертации доложены на 13-ти российских и международных конференциях, съездах и симпозиумах, в том числе: на П-й конференции (Москва, 2005); III-й (Москва, 2006), IV-й (Москва, 2007) Всероссийских научно-практических конференциях «Общество, государство и медицина - для пожилых и инвалидов»; на 1 Сибирском съезде лимфологов с международным участием «Проблемы экспериментальной, клинической и профилактической лим-фологии (Новосибирск, 2006); на международной научно-практической конференции «Актуальные методы клинической лимфологии и эндоэкологической реабилитации в фтизиопульмонологии, физиологии и общей терапии» (Кишинев, 2006); на конференции «Перспективы фундаментальной геронтологии» (С.-Петербург, 2006); на международной научной конференции «Свободные радикалы, антиоксиданты и старение» (Астрахань, 2006); на XIY-ом (Москва,

2006); XY-ом (Москва, 2007); XYI-ом (Москва, 2008) Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство»; на Всероссийской научно-практической конференции: «Санаторно-курортное лечение: фундаментальные, прикладные и организационные аспекты (Новосибирск, 2007); на XII международной научно-практической конференции «Пожилой больной. Качество жизни» (Москва,

2007); на III Международном конгрессе «Эндоэкологическая медицина» (Кипр, 2007).

Внедрение в учебный процесс

Результаты исследований используются в учебном процессе на кафедрах фармакологии Российского медицинского университета и медицинского факультета Мордовского государственного университета, клинической лимфологии и эндоэкологии Факультета повышения квалификации медицинских работников РУДН.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 142 страницах, состоит из введения, обзора литературы, главы «Объекты и методы исследования», 3-х глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы, включающего 264 отечественных и 88 зарубежных источников, иллюстрирована 47 таблицами и 51 рисунком.

1.6. Заключение

Анализ литературы показал, что в развитии патологических процессов при старении, эндогенной и экзогенной интоксикации большую роль играет активация перекисного окисления липидов на фоне снижения антиоксидантной защиты организма. Изменения микроциркуляторного русла в его кровеносном, интерстициальном и лимфатических звеньях в этих ситуациях также имеют однонаправленный характер. В системе околоклеточного гуморального транспорта происходят нарушения, ограничивающие как доставку в межклеточный мат-рикс, а затем в клетку, необходимых питательных веществ, лекарств и кислорода, так и выведение продуктов свободнорадикального окисления, метаболитов и ксенобиотиков [212]. Последние, накапливаясь в межклеточном матриксе, могут запустить комплекс реакций, таких как стимуляция фагоцитоза и продукции цитокинов, дальнейшая активация систем перекисного окисления липидов, калликреин-кинина, комплемента, свертывания крови и лимфы [10, 25, 50]. Нарастающая интоксикация ведет к снижению активности ферментов, падению способности к адаптации при уменьшении напряжения кислорода в крови, нарастанию явлений гипоксической, циркуляторной и тканевой гипоксии [127, 130, 345]. Эти изменения являются предпосылкой к развитию преждевременного старения и предопределяют специфику течения заболеваний (полиморбид-ность, склонность к хронизации, наличие большого количества осложнений), разворачивающихся как по мере старения организма, так и в результате интоксикации различного генеза. Следовательно, лица пожилого и старческого возраста и пациенты с эндогенной и экзогенной интоксикацией, независимо от имеющейся у них патологии, нуждаются в антиоксидантной защите, в усилении гуморального транспорта в межклеточном матриксе, лимфообразования и лим-фооттока. Несмотря на расширение в последние годы знаний о влиянии лекарственных средств на лимфатический дренаж тканей, сведения о действии препаратов с антиоксидантной активностью на лимфоотток остаются единичными. В литературе мы встретили лишь две работы [34, 201], поднимающие вопрос коррекции перекисного окисления липидов антиоксидантами в корреляции с восстановлением лимфатического дренажа. Однако возрастные аспекты такого подхода не разработаны.

Глава 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В исследование включено 599 белых беспородных лабораторных мышей массой от 20 до 40 г., находящихся в идентичных условиях содержания и получавших одинаковый, стандартный для мышей, рацион питания.

Эксперименты проведены на молодых (3 месячных) мышах массой 18-22 г., зрелых (6-ти месячных) мышах массой 30-34 г. и старых (20-ти месячных) мышах массой 36-41 г. в острых опытах с соблюдением правил работы на животных согласно базисным нормативным документам Минздрава России и ВОЗ [36, 352]. Во время эксперимента мыши находились под нембуталовым наркозом (5 мг/100 г массы внутримышечно), после его окончания животные забивались введением летальных доз нембутала. Изучались скорость интерстициаль-ного гуморального транспорта (ИГТ) и лимфатического дренажа (ЛД) тканей, активность перекисного окисления липидов и показатели периферической крови с расчетом гематологических индексов интоксикации.

Исследование скорости ИГТ и ЛД тканей

Для определения состояния ИГТ и ЛД тканей использовали общепринятую методику изучения микроциркуляции в брыжейке тонкой кишки методом витальной микроскопии в проходящем свете [225, 245]. Скорость ИГТ и ЛД тканей определяли по времени (мин), за которое происходило полное выведение из ткани брыжейки предварительно введенного в нее лимфотропного маркера. В качестве маркера использовали краситель Evans blau «Merck», который вводили в толщу корневого участка брыжейки (область илеоцекального угла) мышей, с помощью прецизионного шприца Microliter™ Syringes фирмы Hamilton Bona-duz AG в дозе 0,002 мл 2% раствора. После введения красителя появлялась хорошо визуализируемая метка в виде синего пятна с четкими границами (рис.1). Известно, что краситель Evans blau в тканях соединяется с белками интерсти-циальной жидкости и вместе с ними направляется в сторону лимфатических капилляров, чему способствует коллоидная структура красителя [182]. В связи с этим время полного удаления пятна маркера служит показателем не только скорости ИГТ, но и сопряженного с ним процесса ЛД ткани,

Рис. 1. Исследование скорости ИГТ и ЛД в брыжейке мышей. Метка лимфотропного красителя синего Эванса: Ав начале эксперимента; Б — в середине эксперимента; В - в конце эксперимента

А Б В

На протяжении всего эксперимента температура мышей поддерживалась на уровне 37°С: постоянно подогревался столик, на котором располагалось животное, а брыжейка кишки капельным способом орошалась подогретым изотоническим раствором хлористого натрия. О состоянии животного судили по частоте дыхания и перистальтических сокращений кишки, окраске видимых слизистых покровов.

Оценка активности перекисного окисления липидов

О состоянии перекисного окисления липидов судили по уровню малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови, определяемому по тесту с тиобарбиту-ровой кислотой [62]. Концентрацию МДА рассчитывали по уравнению регрессии: С=0,81 + 106 х ДД (С - концентрация тиобарбитуровой кислоты, ДД - разница показателей оптической плотности) и выражали в наномолях на 1 мл биологической жидкости (нмоль/мл). Исследования проведены в лаборатории ли-пидного обмена ФГУ РНИИ геронтологии Росздрава.

Изучение параметров общего анализа крови с расчетом индексов интоксикации

Общий анализ крови осуществлялся на гематологическом анализаторе АВХ Micros 60. Поскольку процентное выражение клеток периферической крови не отражает их истинное содержание, что может привести к ошибочным выводам.

Поэтому при анализе полученных результатов мы использовали абсолютные значения клеток периферической крови. По показателям общего анализа крови рассчитывали следующие гематологические индексы интоксикации.

Лейкоцитарный индекс интоксикации Кальф-Калифа (ЛИИ) предложенный автором еще в 1941 году [112], раскрывает соотношение гранулоцитарного и агранулоцитарного ростков белой крови и рассчитывается по формуле:

4 миелоциты+3 юных+2 палочкояд.+сегмантояд.) х (плазм, клетки+1)

ЛИИк= лимфоциты+моноциты) х (эозинофилы +1)

В норме ЛИИ составляет 0,62 ±0,3.