Автореферат и диссертация по медицине (14.00.17) на тему:Влияние полипептидов из лимфы и лимфатических узлов на гемостаз и неспецифическую резистентность организма

Г I ь»

1 о лпр

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ЧИТИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

УДК 612.014:612.42:616-005

ЖГЕНТИ Георгий Рафаэлович

ВЛИЯНИЕ ПОЛИПЕПТИДОВ ИЗ ЛИМФН И ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ НА ГЕМОСТАЗ И КЕСПЕЦИМ1ЧЕСКУЮ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ ОРГАНИЗМА

14.00.17 - Нормальная физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук.

Чита - 1935

Работа выполнена в Читинском государственном медицинском институте

Научные руководители: Заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук, профессор Б. И. Кузник,

кандидат биологических наук, А.Н. Ложкина

Официальные оппоненты: доктор медицинскихнаук, профессор

В.В. Альфонсов.

доктор медицинскихнаук. профессор И. С. Пинелис

Ведущая организация: Институт физиологии СОРАМН

(г. Новосибирск)

Защита состоится . .. 1995 Г.

В 11 часов на заседании специализированного совета К 084.74.01 в Читинском государственном медицинском институте (672000. Чита, ул. Горького, 39а)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Читинского государственного медицинского института (672000. Чита, ул! Горького. 39а)

Автореферат разослан .. . 1995 Г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат биологических наук

А.Н. Ложкина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Известно, что все клетки организма еловека и животных выделяют цитокины - комплекс низкомолеку-ярных веществ,обеспечивающих межклеточные взаимодействия. В тдельную группу соединений были вынесены цитомедины - пептиды, олучаемые методом уксусно-кислой экстракции и обладающие тка-евой специфичностью (Морозов В.Г. Хавинсон В.X.,1983). Разра-отана концепция, предполагающая наличие в организме регулятор-ой системы, обеспечивающей определенную совокупность физиоло-ических свойств пептидов организма (Цыбиков H.H., 1985, Калаш-иков С.Г., 1986, Яковлев Г.М. Морозов В.Г. Хавинсон В.X., 987, Кузник Б.И.и др..1985-1994).

Тканеспецифичность цитомединов и отсутствие видоспецифич-ости позволяет использовать пептиды разных животных (свиней, упного рогатого скота и пр.) в клинической практике (Кузник 1.И., 1986, Павленко B.C. и соавт., 1987, Горбачев А.Г., Агу-!янский JI.H., 1987, Витковский Ю. А., Михальцов А.И., 1988, Мак-имова О.П. и соавт., 1989, Андреева Л.И. и соавт., 1991, Аюше-в 0.Д., 1991, Галактионов С.Г.. Николайчук В.В., 1991, Petrov :.V. Mikhailova A.A., 1991, Valentin J-P. et al. 1991).

В лимфатических узлах (ЛУ) также образуются низкомолеку-ярные соединения, играющие важную роль в регуляции иммунного таета и в поддержании гомеостаза организма ( Новиков В.И. и оавт., 1990, Антоненко и соавт., 1993, Delemarre F.G..1993 ). Сдельные группы пептидов ЛУ воздействуют на иммунологическую ^активность, активно влияют на тонус нервных центров головного юзга,повышают устойчивость животных к стресс-воздействиям, ре-•улирют состояние коагуляционного гемостаза, значительно увели-ивают работоспособность животных (Кузник Б.И.. 1986, Новиков I. И. Сидорович И. Г., 1990, Zwirner J. etal., 1989, Claverie '-M, 1990, Rouy D. et al., 1993).Тем не менее остаются практи-1ески не исследованными свойства цитомединов из ЛУ и лимфы.

Лимфатическая система выполняет в основном дренажную и 1Лиминационно-деструктивную функции. Известно, что разрушение 1ужеродных агентов факторами неспецифической защиты сопровождайся локальными или диссеминированными гиперкоагуляционными :двигами в ЛУ, лимфе и, в конечном счете, в кровотоке. (Левин

Ю.М., 1989-1992). В условиях патологии значимость лимфатическо системы в регуляции гемостаза еще более возрастает. Срыв регу ляторных механизмов гемостаза в ЛУ и лимфе может привести лимфадениту и развитию слоновости.

Тем не менее известно, что цитомедины активно вовлекайте в модуляцию коагуляционного, тромбоцитарно-сосудистого гемоста за и фибринолиза (Колбина H.A.. Мельников В.В.. Мельников С.С., 1991, Кудряшев Б.А. и соавт., 1992, Кузник Б.И. и со авт.,1990-1994). Кроме того, полипептиды в значительной мер определяют состояние неспецифического звена защиты организм (Витковский Ю.А., 1990, Кульберг А.Я., 1993, Повевещиков А.В. др.. 1993). Выявление новых механизмов регуляции защитной функ ции лимфатической системы актуально в плане разработки новы эффективных методов лечения заболеваний, сопровождающихся нару шением трофики, гиперкоагуляцией и ослаблением защитных сил ор ганизма.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилос изучение роли пептидной фракции ЛУ и лимфы в регуляции коагуля ционного гемостаза, фибринолиза и механизмов неспецифическо защиты.

Были поставлены следующие задачи.

1. Выделить пептиды из лимфы и лимфоузлов, определить диа пазон их молекулярной массы. Провести хроматографический анапи пептидных фракций и сравнить их биохимическую активность.

2. Изучить механизм действия пептидов ЛУ и лимфы на реак ции коагуляционного каскада и фибринолиза.

3. Выявить изменения в составе и активности пептидов пос; свертывания лимфы; сравнить с отклонениями свойств пептиде после свертывания плазмы.

4. Проследить, какое действие оказывают пептиды лимфа™ ческой системы на факторы неспецифической защиты организма фагоцитоз, комплемент, лизоцим, катионные белки, общую бактер* цидную активность сыворотки.

Научная новизна. Установлено, что пептиды брыжеечных, трг хео-бронхиальных, печеночных ЛУ и лимфы участвуют в регуляц» свертывающей системы крови. Пептиды содержат антикоагулят воздействующий на контактную фазу коагуляционного гемостазе Кроме того, пептиды лимфы тормозят формирование протромбина;

ю внешнему и внутреннему пути и потребляются в процессе свер-•ывания лимфы, что свидетельствует об участии пептидов в регу-[яции микроциркуляторного русла.

Установлено, что пептиды лимфы способны в 10-12 раз тормо-1ить Хагеман-зависимый и лишь слегка - тотальный эуглобулиновый шбринолиз.

Цитомедины лимфатической системы значительно стимулируют ?агЧ)цитоз и метаболическую активность нейтрофилов, тем самым >пределяя фоновый уровень основного звена неспецифической ре-шстентности организма.

Показано, что пептиды лимфы ингибируют активацию комплекта как по классическому, так и по альтернативному пути, что тредотвращает развитие воспаления в жидкой фазе. Пептиды ЛУ регулируют (активируют или ингибируют) классический путь комплементарного каскада.

Биохимически активные пептиды имеют молекулярную массу ме-*ее 20 кД. Установлено, что пептиды разделяются на 6-11 фракций, различающихся по молекулярной массе и степени гидрофобнос-ги. Хроматографический профиль пептидов брыжеечных, тра-хео-бронхиальных и печеночных ЛУ сходен. Пептиды сыворотки лимфы и сыворотки крови отличаются от пептидов цитратной лимфы и плазмы большим содержанием гидрофобных компонентов.

На основании полученных данных сделан вывод о налички в цитомединовой фракции пептидов лимфатической системы мощного антигепаринового и антикоагулянтного фактора, воздействующего преимущественно на фактор Хагемана и/или калликреин. Физиологическая значимость этих факторов доказана в частичном или полном их потреблении в процессе свертывания лимфы. В пептидах лимфатической системы содержатся не только биохимические, но и клеточные регуляторы, стимулирующие деятельность фагоцитов.

Практическое значение работы. Антигепарнновый фактор ЛУ н лимфы нейтрализует низкомолекулярный гепарин, благодаря чему можно использовать этот пептид для ликвидации гипергепаркиемнк.

Дальнейшие исследования позволят выделить антикоагулянт-ный, антигепариновый факторы и активатор фагоцитоза в чистом виде для применения в клинической практике.

Выявленные свойства пептидов, а также изменения этих свойств в процессе свертывания крови углубляют лаки представле-

ния о механизмах регуляции гемостаза и факторов неспецифическс защиты. Результаты проведенных экспериментов создают методиче( кие предпосылки для последующего расширения и углубления иссле дований свойств пептидов лимфатической системы.

Полученные данные внедрены в учебный процесс кафедр микр( биологии, нормальной и патологической физиологии Читинского гс сударственного медицинского института, а также на кафедре но| мальной физиологии Читинского государственного педагогическо! института.

Положения, еыносшоде на защипу.

1. Пептиды брыжеечных, трахео-бронхиальных. печеночных J и лимфы содержат в своем составе антикоагулянтный фактор, бл< кируииций контактную фазу свертывания крови и Хагеман-зависиш фибринолиз. Пептиды лимфы, тормозящие формирование протромбин; зы как по внешнему, так и по внутреннему пути, потребляются процессе ее свертывания.

2. Пептиды лимфатической системы содержат антигепаринов! фактор, сохраняющий свою активность после свертывания лимфы.

3.Цитомединовая фракция ЛУ и лимфы значительно стимулиру! фагоцитарную и метаболическую активность нейтрофилов.

4. Пептиды лимфы тормозят активацию комплемента как ] классическому, так и по альтернативному пути. Пептиды ЛУ I влияют на альтернативный путь и способны модулировать класс! ческий путь активации комплемента.

Апробация работы. Материалы исследований были доложены I X межвузовской конференции молодых ученных по проблеме "Физш логия и патология иммуногенеза и гемостаза"(Чита. 1988), конф| ренции "Система комплемента" (Москва, 1988), "Актуальные вопр сы хирургии, анестезиологии и реаниматологии детского возраст; (Днепропетровск. 1989). Советско-Корейской конференции "Пои новых лекарственных средств и их исследование в клинике" 1991 на 53-ой студенческой конференции (Тбилиси 1990), конференц молодых ученых по проблеме "физиология и патология перекисно: окисления липидов, гемостаза и иммуногенеза" (Полтава, 1993 съезде физиологов России (1994), международной конференции 1 иммунореабилитации (Сочи, 1994).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 1 страницах машинописи и состоит из введения, обзора литератур

[атериала и методов исследования,трех глав собственных резуль-атов, обсуждения полученных данных, выводов, указателя литера-уры. Работа иллюстрирована 19 таблицами и 26 рисунками. Список итературы включает 182 источника.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Лимфу кошек собирали через катетер из грудного лимфатичес-;ого протока. Из лимфы выделяли три варианта пептидов: пептиды (ельной нативной лимфы, пептиды из цитратной лимфы, предвари-ельно освобожденной от форменных элементов, и пептиды, полу-1енные после свертывания лимфы.

Цитомединовую фракцию ЛУ и лимфы получали общепринятым ме-одом (Морозов В.Г. Хавинсон В.Х., 1974.). Хроматографический [Нализ полипептидных фракций проводили на сефадексе G-75 "Pharmacia") и методом высокоэффективной жидкостной хроматог->афии(ВЭЖХ) на хроматографе "Irica" (Япония). Элюция проводи-[ась градиентом метанола на колонке 4 X 250 мм с сорбентом " 1ихросорб РП-18Т " (Япония).

Состояние свертывающей системы крови оценивали по мето-1ам,опубликованным в современных руководствах по исследованию :истемы гемостаза (Балуда В.П. и др., 1980; Меньшиков В.В. и ip., 1987). Коагуляционный гемостаз исследовали по следующим гестам: время рекальцификации плазмы (Bergerhof Н.D. Roka L.. ¡954), каолиновое время (Hatterslei Р., 1966). кефалиновое вре-1Я (Larrien М., Weilland С.. 1957). протробиновое время (Quick i. 1966), тромбиновое время (Biggs R. MacFarlane R., 1962). 5ибринолитическую активность крови определяли по скорости раст-юрения фибринового сгустка эуглобулиновым методом (Kowarzuk 1., Buluk L., 1954), а также по площади зон лизиса на фибрино-¡ых пластинах (Astrup Т., Mullertz S., 1959), Кроме того, исле-ювали Хагеман-зависимый фибринолиз по К.Н. Веремеенко и соавт. [1978).

Фагоцитарную функцию гранулоцитов изучали по методу А.Г. (орозова (1961). A.G. White, S.M. Walker.(1981). Лизосомаль-ю-катионный тест оценивали по В.Е.Пигаревскому, Ю.А.Мазннгу [1981), тест восстановления нитросинего тетразолия - по методу 1.Е.Виксмана и А. Н.Малнского (1979). Лизоцим и бактерицидную

активность сыворотки определяли по способу Ю.С.Варенко и соавт. (1987). Общую гемолитическую активность системы комплемента выявляли по Л.В.Козлову. Л.С.Солякову (1982). P. Adrian. A. Gei (1983). S. Tanaka et al.(1986).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Влияние полипептидов из лимфы и лимфатических узлов на состояние системы гемостаза

Пептиды из лимфы и ЛУ обладают дозозависимым гипокоагуля-ционным эффектом в отношении контактной фазы свертывания крови, кроме того, пептиды лимфы эффективно тормозят образование прот-ромбиназы.

Полипептиды из ЛУ удлиняют время рекапьцификации и, i меньшей степени, - каолиновое, кефа линовое. протромбиновсн время. (Табл. 1) Так как воздействие на каолиновое время н< столь значительно, как на кефалиновое и время рекальцификации, можно предположить, что механизм ингибиции связан с контактно! фазой свертывания крови.

На значимость данных регуляторов указывает тот факт. чт< пептиды с антикоагулянтной активностью потребляются в процессе свертывания плазмы и лимфы. Кроме того, в процессе свертыванш плазмы тромбином без активации ферментативного свертывающей каскада антикоагулянтные факторы сохранялись (Колдаев P.A.. 1988).

Увеличение протромбинового времени в присутствии полипептидов из ЛУ свидетельствует о способности регулировать свертываемость лимфы и крови по внешнему механизму и тем самым предотвращать тромбообразование в синусах ЛУ при запуске иммунного ответа. сопровождающегося повышенной продукцией апопротеина III.

Сокращение тромбинового времени обусловлено наличием пептидов. связывающих гепарин. После добавления к цитратной плазмЕ равного объема раствора гепарина (0,5 ед/мл) время рекальцификации удлинялось в 3.5 раза. Однако в присутствии пептидов лимфы или пептидов из брыжеечных ЛУ время свертывания достигалс контрольных значений.

Поскольку гепарин ингибирует преимущественно поздние ста-

Таблица 1

Влияние полипептидов (1 мг/мл) из цитратной лимфы и ЛУ на показатели коагуляционного гемостаза и фибринолиз (М ± м; п=7-15)

Показатели Контроль Цитомедины Цитомедины из лимфатических узлов . цитратной -

лимфы брыжейки . бронхов печени

Время ре-кальцифи-

кации, с. 163+15 370+26** 229+19** Каолиновое время, с. Кефалино-вое время, с.

Протромби-новое время, с. Тромбино-вое время с.

Хагеман-за-висимий фибринолиз, мин. 13+0,3 155+14** 40+3** Эуглобулино-вый фибринолиз, мин. 198+8 242+7* 201+4

66+3 206+19** 71+1*

81+5 196+4** 100+4**

24+0,5 52+5** 27+1,0*

21+1 17+1** 17+1**

266+23** 255+17**

73+2** 76+3*

96+3* 99+3**

28+0,5** 27+0,3**

16+2** 17+1**

70+5** 71+3**

198+8 199+12

Примечание * - Р<0,05; ** - РС0.001

дии' свертывающего каскада (высокомолекулярный ингибирует тромбин, низкомолекулярный - фактор Ха) антигепариновая фракция ци-и тромбиновое время. Тем не менее протромбиновое время удлиняется, то есть по свойствам из суммы антигепаринового (прокоагу-

томединов лимфатической системы должна сокращать протромбиновое лянтного) и антикоагулянтного фактора превалирует ингибитор контактной фазы. По-видимому, низкомолекулярный гепарин блокируется цктомединами эффективнее, чем высокомолекулярный. Антигепариновый фактор не потребляется в процессе свертывания лимфы и плазмы, более того - высвобождается в результате частичного потребления гепарина, что приводит к повышению его активности. Отсюда можно сделать вывод, что регуляция физиологической активности гепарина обратимая.

Пептиды лимфатической системы значительно тормозили Хаге-ман-зависимый фибринолиз (с 13+0,3 до 98+7 мин.). Эта реакция особенно интенсивно проявляется в присутствии цитомединов лимфы. которые замедляли лизис фибринового сгустка в дозе 0,125 мг/мл. Действие пептидов в данном случае.аналогично механизму влияния на контактную фазу свертывающего каскада и связан со снижением ферментатывной активности фактора Хагемана и каллик-реина. о чем говорит удлинение времени рекальцификации.

Полипептиды из ЛУ и не изменяли скорость тотального эугло-булинового фибринолиза и лизиса фибрина в присутствии тромбоп-ластина. Пептиды (0.5 мг/мл) не оказывали существенного влияния на активность плазмина (фибринолизина; 3 мг/мл), стрептокиназы (1 мг/мл) и трипсина ( 1 мг/мл). Исключение составляли пептиды из брыжеечных ЛУ, стимулирующие лизис в присутствии трипсина.

Отсутвие влияния большинства пептидов ЛУ на эуглобулиновый фибринолиз, действие фибринолизина, стрептокиназы и трипсина свидетельствует о том, что цитомединовая фракция ЛУ не содержит антипротеаз широкого спектра действия. В лимфоидных органах происходит расщепление.чужеродных элементов и наличие неспецифических антипротеазных соединений в клетках ЛУ препятствовали бы деструкции этого материала.

Напротив, полипептиды лимфы тормозят большиство изученных ферментативных реакций, в том числе и эуглобулиновый фибринолиз. то есть содержат в своем составе антипротеазы широкого спектра действия. Пептиды сыворотки лимфы влияют на фибринолиз слабее, чем пептиды нативной лимфы: 198+8 мин. в контроле. 242+7 мин. (Р<0,05) в присутствии пептидов сыворотки лимфы х 304+21 мин. (Р<0,05) с пептидами цельной лимфы.

Таким образом, полипептиды из лимфы и лимфатических узлое

зко тормозят Хагеман-зависимый фибринолиз, не влияют на эуг-|булиновый лизис, ингибируют контактную фазу свертывающего 1скада и инактивируют гепарин. Пептиды лимфы, кроме того, тор-1зят коагуляцию по внешнему пути.

Влияние пептидов из лимфы и лимфатических узлов на факторы неспецифической защити организш

Выделенные нами пептиды из брыжеечных, бронхиальных и пе-:ночных ЛУ не изменяли активацию комплемента по альтернативно-1 пути (АПК) и неодназначно влияли на классический путь (КПК) Габл. 2).

Пептиды, выделенные из цитратной плазмы, дозозависимо ин-1бируют как КПК. так и АПК (соответственно на 60% и 40%).Пеп-1ды, полученные из сыворотки лимфы, тормозили КПК и не влияли 1 АПК. Так как свойства пептидов, выделенных из лимфы, не сов-адают с таковыми из ЛУ, можно предположить, что цитомедины ЛУ. эаботают" локально или поступают в лимфоток лить в небольших эличествах. Пептидная фракция плазмы обладала свойствами, по-эбными пептидам лимфы (Колдаев P.A., 1988).

Пептиды из брыжеечных, бронхиальных, печеночных ЛУ и лимфы эвышают фагоцитарный показатель на 27-88%. фагоцитарный индекс на 18-62% (Табл. 2). Наименьшую стимулирующую активность про-зляли цитомедины, выделенные из бронхиальных ЛУ, наибольшую -олипептидная фракция ЛУ печени. Пептиды, выделенные из натив-ой лимфы, были гораздо активнее, чем пептиды цитратной лимфы, е содержащей клеточных элементов.Фагоцитарный показатель под ействием пептидов цитратной лимфы увеличивался на 24%. тогда ак в присутствии пептидов нативной лимфы фагоцитарную актив-ость начинали проявлять в 2 раза большее количество клеток.

Исследование свойств цитомединов из ЛУ и лимфы не выявило аких-либо отклонений в активности лизоцима. Содержание лейко-итарных катионных белков в присутствии пептидов достоверно нижалось: бактерицидная активность сыворотки не изменялась.

Таким образом, пептиды лимфатической системы регулируют ктивность комплементарного каскада и значительно стимулируют агоцитоз.

Таблица N 2

Влияние полипептидов ЛУ и лимфы на неспецифическую резистентность организма (М+м: п=10)

Фагоци- Фагоци- НСТ-пози- Индекс Комплементар-

Вариант тарный тарный тивные • актива- ная актив-

показа- индекс. нейтрофи- ции ней- ность (% ге-

опыта тель , % % лы. % трофилов молиза)

Воздействие пептидов из ЛУ КПК АПК

Контроль ' 1411 4.4Ю.2 14Ц 0.22+0.01 58+4 61+

Пептиды из

брыжеечных

ЛУ 2011* 6, 110.1** 4012** 0.7910,05** 7514* 66+

Пептиды из

бронхиаль-

ных ЛУ 1711* 5.210.2** 3112** 0.5210,02** 2512* 67+

Пептиды из

печеночных

ЛУ 24.11* 6,810.2** 5012** 1,0610,01** 64+4 69+

* Воздействие пептидов из лимфы КПК АГО

Контроль 25.il 8.410,2 1611 0,3110,01 6314 85;

Пептиды из

нитратной

лимфы 32:.1* 12.210.1** 2812* 0,4810, 05* 2412** 55;

Пептиды из

цельной

лимфы 4811** 13,610.2** 4812** 1,0510. 01**

Примечание: * - Р<0.05: ** - Р<0,001

Хроматографический анализ пептидов, выделеннъа из ЛУ и лимфы

Методом гельфильтрации установлено, что выделенные из ЛУ и имфы вещества пептидной природы сосредотачивались в области елков с молекулярной массой до 30 кД. Коагулологическую и омплементарную активность проявляли разные пептиды с молеку-ярной массой от 3 до 20-25 кД.

Методом аналитической ВЭЖХ пептиды из бронхиальных, брыже-чных и печеночных ЛУ разделялись соответственно на 7. Э и 11 иков (фракций). Наиболее гидрофобными оказались пептиды брыже-чных ЛУ.

Хроматографический профиль пептидных фракций, выделенных з различных ЛУ, оказался сходным. Пептиды выделяются как бы в этапа:

1. 35-4035 вещества элюировалось через 11.2-12.4 минут пос-е начала элюции в виде 2-4 смежных пиков;

2. 22-32% соединений отделяются от сорбента позже - на 4-15 минуте в виде одного основного пика;

3. два последних пика элюируется на 17-19 минутах и сос-авляют 5%, 13Ж и 21% пептидов соответственно из брыжеечных, вченочных и бронхиальных ЛУ.

В цитомединах нативной и цитратной лимфы выявлялись по 8 лков. 80% пептидов нативной лимфы сосредоточено в двух смежных «сах, выходивших на 12-ой минуте. Этому времени в полипептидах 1тратной лимфы соответствовало лишь 50% вещества, а последую-1е 30% элюировались позже - на тринадцатой минуте. Отсюда мож-) сделать вывод, что основной пик элюции пептидов формируют юдукты деятельности клеток.

В процессе свертывания лимфы потреблялись пептиды первой )акции, включающей 6% вещества. Однако появились 2 пика на Г-19 минутах, содержащий 6% соединений.

В первых пиках ВЭЖХ отделяются соединения либо с меньшей пекулярной массой, либо более заряженные молекулы. В хрома->граммах, полученных путем гельфильтрации, наблюдалась тенден-гя к увеличению в процессе свертывания содержания цитомединов большей молекулярной массой. Отсюда можно сделать вывод, что •требившаяся первая фракция содержит легко растворимые заря-

женные вещества.

Аналогичные различия выявлены в пептидах плазмы и сыворо1 ки крови.После свертывания плазмы тромбином относительное сс держание последних пиков элюции не изменялось, следовательнс фрагменты расщепления фибриногена не влияют на хроматографиче( кий профиль цитомединов. Поэтому повышенное содержание вещест! поздних фракций при запуске всего свертывающего каскада (р< кальцифицированная плазма) можно связать с увеличением гидр< фобных компонентов цитомединов в фазу формирования протромбин: зы на фосфолипопротеидных структурах.

В большинстве низкомолекулярных регуляторных пептидов о: мечено наличие большого количества гидрофобных аминокислота! остатков (МеклерЛ.Б.. 1969, Никифорович Г.В. исоавт.. 198! Чипенс Г.И. и соавт.. 1989 - 1991. Roth J., 1985, Bost K.L. ( al.. 1989. River J.E. et al., 1990, Dotmers P.A. et. al.. 0] penhelm J.J. et al., 1991, Wang S. et. al.. 1993). Так как пепт! ды клеток ЛУ отличались большей гидрофобностью, чем цитомедин< вая фракция лимфы и плазмы, можно предположить, что тканеспец! фичность определяется фиксированным положением синтезируем! пептидов.

Пептиды ЛУ и лимфы с молекулярной массой до 25 кД содерж. в своем составе большое количество лабильных и "мембранных" mi дуляторов функционального состояния лифатической системы. Бол! шинство из них действует локально и "адресно". Суммарная фра] ция цитомединов ингибирует свертывание крови и фибринолиз. Пе тиды лимфатической системы активируют фагоцитоз, метаболическ; активность лейкоцитов, регулируют систему комплемента, ингиб! руя активацию комплементарного каскада в лимфатическом русле, состав цитомединов лимфы входят неспецифические ингибиторы ря протеолитических ферментов, потребляющиеся в процессе свертыв ния.

выводы

1. Полипептиды из брыжеечных, трахео-бронхиальных, печенных ЛУ и лимфы имеют молекулярную массу до 30 кД. Наиболее тивные их фракции сосредоточены в диапазоне 3-20 кД.

2. Полипептиды ЛУ сходны по составу, разделяются методом 1сокоэффективной жидкостной хроматографии на 7-11 фракций, сличающихся по молекулярной массе и степени гидрофобности. шбольшей гидрофобностью обладают полипептиды брыжеечных ЛУ.

Пептиды цитратной лимфы и плазмы сходны по хроматографи-¡скому профилю элюции и разделяются на 8 фракций. Пептиды сы-фотки лимфы и крови отличаются от пептидов цитратной лимфы и 1азмы большей степенью гидрофобности и меньшим содержанием 13комолекулярных соединений, что свидетельствует об их потребуй в процессе свертывания.

3. Полипептиды лимфы и, в меньшей степени, ЛУ тормозят штактную фазу коагуляционного гемостаза. Время рекальцифика-ш удлиняется в 1,5 раза в присутствии пептидов "У и более чем 2 раза - под действием пептидов лимфы (1мг/мл). Пептиды лимфы >рмозят формирование протромбиназы по внутреннему и внешнему гти. Антикоагулянтный фактор изучаемых полипептидов сосредото-:н в диапазоне молекулярных масс 5-20 кД с пиком активности, ютветствующим 15 кД.

4. Полипептиды ЛУ и лимфы содержат антигепариновый фактор, ютветствующий молекулярной массе 10-18 кД. В процессе сверты-шия лимфы антигепариновый фактор не потребляется.

5. Пептидные фракции ЛУ способны в 3-5 раз, а пептиды лим-1 (1 мг/мл) - в 10-12 раз тормозить Хагеман-зависимый фибрино-13. Антифибринолитическая активность в пептидах сыворотки лим-1 отсутствует.

6. Полипептиды ЛУ и лимфы (1мг/мл) в 1,5-3 раза увеличива-г число фагоцитирующих нейтрофилов и на 50% - количество пог->щенных микроорганизмов. При этом в 2-3 раза повышается мета-)лическая активность нейтрофилов.

7. Полипептиды лимфы ингибируют активацию комплемента как ) классическому, так и по альтернативному пути. Свертывание шфы приводит к снижению антикомплементарных свойств пептидов. ;птиды ЛУ не влияют на АПК и содержат соединения, как стимули-дощие, так н ингибирующие КПК.

СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Жгенти Г.Р. Влияние полипептидов лимфы на свертываемое! крови и гемолитическую активность комплемента // Цитомедины. Чита. 1988. - С. 36-37.

2. Жгенти Г.Р. Гемолитическая активность комплемента лимА // Система комплемента. - Москва, 1988. - С. 80-81.

3. Жгенти Г.Р. Некоторые практические аспекты катетеризаци грудного лимфатического протока // Актуальные вопросы хирургии анестезиологии и реаниматологии детского возраста. - Днепропе! ровск, 1989. - С. 93-93.

4. Ложкина А.Н., Колдаев P.A., Аюшеев O.A., Жгенти Г. Р. Пс липептиды /цитомедины/ системы крови и комплемент // Поиск не вых лекарственных средств и их исследование в клинике. - Читг 1990. - С. 168-170.

5. Жгенти Г.Р. Влияние полипептидов из лимфы на некотор! показатели свертывания крови и гемолитической активности komi лемента // Материалы 53-ей студенческой конференции. - Тбилиы 1990. - С. 39-40.

6. Жгенти Г.Р. Влияние полипептидных фракций лимфатичесю узлов и лимфы на свертывание крови и фибринолиз // Физиология патология перекисного окисления липидов. - Полтава. 1993,- < 65-66.

7. Жгенти Г.Р. Гепарин блокирует торможение плазмина пепт! дами лимфы // Успехи физиологических наук. - 1994. - Т. 25, 1. - С. 136-137.

8. Zhgenty G.R. Immunocorrection by lymphaden peptides , International journal of immunorehabilitation. - 1994. -Ml. P. 394-394.