Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Влияние острой застойной экспериментальной спленомегалии у крыс на эритропоэз в эритробластических островках костного мозга

1МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РФ ЧЕЛЯБИНСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДОЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ

Го ОД I ^ МАЙ «96

На правах рукописи

Тишевской Игорь Андреевич

ВЛИЯНИЕ "ОСТРОЙ ЗАСТОЙНОЙ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ СПЛЕНОМЕГАЛШ У' КШС НА ЭРИТРОГОЭЗ В ЭРИТРОБЛАСТИЧЕСКИХ ОСТРОВКАХ КОСТНОГО МОЗГА

14.00.16. - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск. 1996

Работа выполнена в Челябинской медицинской академии.

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ:

академик АЕН РФ, доктор медицинских наук, профессор О. М. Захаров

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор медицинских наук, профессор С. Н. Те плова доктор медицинских наук, профессор Б.Г.Юшков

ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ:

НИИ гематологии и переливания крови С г. Санкт-Петербург}

Защита состоится "_"_1996г. в _ часов на

заседании Ученого совета Челябинской государственной медицинской академии С454092. г. Челябинск, ул. Воровского, 64)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Челябинской государственной медицинской академии.

Автореферат разослан ¿¿л^еля _ 1996 г.

Ученый секретарь Ученого совета

доктор медицинских наук, профессор Л. В. Кривохижина

Актуальность проблемы.

Работа посвящена важной проблеме современной патофизиологии -изучению роли увеличенной селезенки в регуляции кроворазру-шения в организме и эритропозза в костном мозге, локализующемся преимущественно в эритробластических островках, которые являются морфо-функциональной единицей эритропозза. Данное направление является актуальным, так как оно способствует выяснению механизмов, вызывающих изменения в эритроне при спленемэталиям и состоянии, обозначаемом в патофизиологии как "гиперспленизм". Исследование имеет и прикладной аспект, так как раскрывает патогенез синдрома гиперспленизма и открывает новые пути в диагностике этого состояния и эффективности его лечения.

Цель исследования состояла в изучении характера эритропозза в эритробластических островках костного мозга и кро-воразрушения в условиях острой застойной спленомегалии. вызванной оперативным путем, а также влияния на эти процессы изоляции селезенки с целью замедления образования венозных коллатералей между селезенкой и сальником.

Задачи исследования:

1. Воспроизвести в эксперименте оперативным путем острую застойную спленомегалию с признаками гиперспленизма у. крыс.

2. Исследовать функциональное воздействие увеличенной после перевязки селезеночных вен селезенки на процессы кро-веразрушения и на состояние эритропозза в эритробластических островках костного мозга.

3. Исследовать, как влияет процесс венозной реваеку-ляризации селезенки на ее гемопозтическую функцию в условиях спленомегалии.

Новизна работа. Впервые была разработана экспериментальная модель острой застойной спленомегалии у крыс, позволяющая исследовать процессы кроваразрушения и характер кроветворения в эритробластических островкаЯ костного мозга при гиперспленизме. Определен вклад замедления венозной реваску-ляриэаиии в поддержании спленомегалии у крыс с перевязанными венами селезенки. Доказывается проявление увеличенной селезенкой усиленной гемолитической и гемопоэзингибирушея функции, являвшихся патогенетическими факторами сопутствующей анемии.

Теоретическое значзниэ работа определяется тем, что в ней исследовано влияние острой застойной спленомегалии на зритрон крыс. Результаты исследования внедрены в учебный процесс на кафедре нормальной физиологии ЧГМА с 1996 года.

Апробация работы. Материалы диссертации изложены в 3 печатных работах, докладывались на совместном заседании кафедр нормальной и патологической Физиологии ЧГМА в 1996 году.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на страницах машинописного текста, иллюстрирована 21 таблицей и 19 рисунками; состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, трех глав результатов собственных наблюдений, заключения, выводов, указателя литературы, включаицего отечественных и "¿Z4 зарубежных источников.

Положения, выносимые на защиту:

1. После перевязки селезеночных вен у крыс развивается острая застойная спленомегалия, сопровождающаяся истинной нормохромной гемолитической анемией с пониженной компенсационной реакцией эритроидного ростка костного мозга. Гемолитическая анемия проявляется признаками усиленного кроверазру-шения в период спленомегалии: ретикулоцитозом, увеличением в периферической крови количества эритроцитов с малым диаметром, уменьшение устойчивости эритроцитов к действию гемоли-тика и отложение в селезенке и печени гемосидерина. Длительность анемического периода зависит от скорости реваску-ляризаши селезенки.

2. Экспериментальная спленомегалия сопровождается угнетением зритропоэза, задержкой созревания эритробластов в зритроблаетических островках костного мозга, нарушением межклеточных взаимодействий и организации зритробластических островков костного мозга, а также торможением созревания ре-тикулоиитов в периферической крови.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ.

Материалы и методы исследования. Исследования выполнены на 160 белых беспородных крысах-самках с массой тела 1S0-220 граммов и 100 мышах линии "Black" с массой тела

20-25 граммов. Все животные содержались в стандартных условиях на стандартных рационах питания. Для решения поставленных задач в работе использовались следующие модели: перевязка селезеночных вен у крыс без изоляции селезенки и перевязка селезеночных вен -с помещением селезенки в просторный капроновый мешочек, с целью замедления восстановления венозного оттока из органа. Операции производили под эфирным наркозом. Перевязка селезеночных вен осуществлялась на расстоянии 3-4 мм от верхнего края селезенки с использованием атравматических игл. Контролем служили ложно-оперированные животные, которым производилась лапаротомия с массажем селезенки.

В работе использовались гематологические методы: определение количества эритроцитов, лейкоцитов, ретикулоцитов, определение содержания гемоглобина цианметгемоглобиновым методом, определение гематокрита, эритроцитометрия с построением кривой Прайс-Джонса, определение кислотной устойчивости эритроцитов С по Гительзону И.И., Терскову И.А., 1959) и определение объемов циркулирующей крови полиглисиновым методом.

Абсолютное количество зритробластаческих островков СЭО) и классификацию их по классам зрелости проводили по Ю.М.Захарову и соавт. С1984, 19905. Для оценки интенсивности зритропозза в эритробдастических островках использовались расчетные показатели, -основанные на классификации ЭО по

ф

классам зрелости СВоргова Л. В.. Захаров Ю.М., 1990).

На 7 и 14 сутки после операции проводили морфологическое и гистологическое исследование селезенки и печени, рассчитывался весовой индекс селезенки, а также отдельно белой и красной пульп селезенки.

Проверка наличия в плазме животных гуморального ингибитора зритропозза-осуществлялась на 7 сутки после операции. В качестве тестовой системы использовались мыши, эритропоэз которых был стимулирован фенилгидразиновой гемолитической анемией. 0

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

ДИНАМИКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ КРЫС ПОСЛЕ

ПЕРЕВЯЗКИ СЕЛЕЗЕНОЧНЫХ ВЕН.

Динамика количества эритроцитов, концентрации гемогло-

бина и показателя гематокрита в периферической крови крыс после операции представлена на рисунке 1. Достоверное уменьшение числа эритроцитов в периферической крови опытных животных наблюдалось уже на 3 сутки после операции. На 7 сутки определялся пик анемической реакции: количество эритроцитов снижалось до 4,77±0, 84хЮ11;/л, тогда как в контрольной группе этот показатель был равен 7,97±0,14х1015;/л Ср<0,05). На 10, 14, 21 и 30 сутки после операции количество эритроцитов у опытных животных не отличалось от показателей контрольных и интактных животных.

Подобная динамика .наблюдалась и со стороны показателей гемоглобина и гематокрита: максимум их снижения наблюдался на 7 сутки после операции, при этом гемоглобин снижался до 115,3±15,7 г/л, а гематокрит - до 37%. На 10 суткм значения гематокрита и гемоглобина были достоверно ниже показателей у контрольных и интактных животных и возвращались к исходному уровню лишь на 14 сутки.

Динамика числа ретикулоцитов характеризовалась 2-крат-ньш увеличением их количества в периферической крови опытных животных на 3 сутки после операции С 775,1±122,2х10у/лЗ по сравнению с интактными животными (368,5±21,6х10у/л, р<0,052 и сохранением неизменного ретакулоштоза на протяжении всего срока наблюдений. В группе контрольных животных подобных изменений не наблюдалось.

Одновременно с количественными изменениями периферического звена зритрона отмечались и качественные изменения. У опытных животных на 3 и 7 сутки после операции на кислотных эритрограммах наблюдалось укорочение времени гемолиза и сдвиг пика кривой влево. Это свидетельствовало об увеличении в циркуляции количества малоустойчивых к действию гемолитика эритроцитов в сравнении с контрольными и интактными животными, а также, о сниженной продукции костным мозгом молодых высоко устойчивых к действию гемолитика эритроцитов. Начиная с 10 суток кислотные зритрограммы животных с перевязанными венами селезенки не отличались от кривых животных контрольных и интактных групп.

При зритроцитомэтрическом исследовании у опытных животных было выявлено изменение морфологии эритроцитов, которое сильнее всего было выражено на 7 сутки после операции. Это

Рисунок 1. Динамика показателей периферической крови при экспериментальной спленопатии.

Эритроциты 1012 /л

А

*\ у

V **

3 7 10 14 21 30 сутки

Гемоглобин

г/л 190- Б

Л

170-

1КН *

130-

110" > ? ** 1 1 »1

10

14

21

30 сутки

Гематокрит %

48 44 40 36 32

В

'Л \\л\\ л-'- .....'Лл\\ 1

** •

3 7 10 14 21 30 сутки х - достоверность различий с иктактшш животными ** -.достоверность различий с контрольным показателем V- достоверность различий с предыдущим сроком ■ I - опыт

- - контроль

у^уулу • интактные животные

проявлялось в увеличении среднего диаметра эритроцитов С7.28±0,12x10-° м) по сравнеию с контрольными животными (6,42±0.05х10-° м, р<0,05). При этом кривая Прайс-Джонса животных с перевязанными венами имела два пика: первый приходился на эритроциты с диаметром 5-6 мкм. а второй - с диаметром 8-9 мкм, основание кривой было расширено вправо. На 10 сутки основание кривой опытных животных остовалось широким, но пики сближались. На 14 сутки после операции кривая имела один пик, который • располагался правее пиков контрольных а интактных животных. На последующе сроки наблюдения зритроцитометрическая кривая опытных животных на отличалась от кривых в контрольной и интактной группе.

Помимо изменения среднего диаметра эритроцитов, в периферической крови оперированных животных увеличивалось количество клеток с локальными дефектами мембраны. Так, на пике анемии на 7 сутки после операции таких эритроцитов в опыте было 25,5±1,5%, то есть в 4 раза больше, чем в контроле С6,8±1,3%, р<0,053. К 14 суткам в контрольной группе животных количество эритроцитов с локальными дефектами мембраны С2,3+1,250 не отличалось от аналогичного показателя у интактных животных С1,7±1,6%. р<0,05), а у животных с экспериментальной спленомегалией их количество сохранялось увеличенным в 3 раза С7.5±0,5%, р<0,05). Также у животных с перевязанными селезеночными венами обнаруживалось около 12% "шиповатых" эритроцитов, то есть эритроцитов сл значительными дефектами мембраны. Ни у интактных, ни у контрольных животных таких клеток не было.

ИССЛЕДОВАНИЕ ОБЪЕМОВ ЦИРКУЛДОЭУЩЕЙ КРОВИ.

Для того, чтобы выяснить, не являлась ли анемия у опытных животных результатом гемодилюции, определялись объем циркулирующих эритроцитов СОЦЭ) и объем циркулирующей плазмы СОЦП). Оказалось, что если у интактных животных ОЦЭ составлял 2,2±0,1 мл/100 г веса животного, а ОЦП - 3,7±0,1 мл/100 г веса животного, то на 7 сутки после перевязки селезеночных вен ОЦЭ уменьшился до 0,9±0.2 мл/100 г веса (р<0,05), а ОЦП - до 2.9+0.3 мл/100 г веса Ср<0,05). Это является свидетельством истинного характера анемии при спленомегалш. На 14 сутки после операции ОЦЭ и ОЦП вернулись к исходным зна-

чениям. В контрольной группе животных изменений в объемах циркулирующей крови не наблюдалось. Такие резкие изменения объемов циркулирующих эритроцитов и циркулирующей плазмы у опытных животных несколько не согласуются с динамикой числа эритроцитов в периферической крови. Мы предполагаем, что это несоответствие, вероятно, связано с ошибкой полиглюкинового метода определения объемов циркулирующей крови. Это может бьггь следствием перегрузки Фагоцитарной системы обломками эритроцитов при спленомегалии.

ИССЛЕДОВАНИЕ ИНГИБОТУЩЕГО ВЛИЯНИЯ НА- ЗРИТРОПОЗЗ

ПЛАЗМЫ ЖИВОТНЫХ С ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ СПЛЕНОМЕГАЛИЕЙ.

Так как в литературе имеются высказывания от возможном Гуморальном механизме торможения эритропоэза при гиперспле-низме, нами было проведено исследование влияния плазмы животных с экспериментальной спленомегалией на эритропозз мышей, стимулированный Фенилгидразиновой анемией. Плазма опытных и контрольных животных вводилась мышам через 1 сутки после инъекции Фенилгидразина, когда количество ретикулоци-тов у мышей-реципиентов составляло 968.1±5,7%о. Через 4 суток после введения тестируемой плазмы количество ретикулоци-тов у мышей, получивших инъекцию плазмы опытных животных, было достоверно меньшим С768,3±30,1%о), чем у мышей, которым вводилась плазма контрольных крыс С 945,3±13,9%о, р<0,05). Эти результаты свидетельствовали о наличии в плазме крыс с экспериментальной спленомегалией гуморального ингибитора эритропоэза.

ЮРФО ЛОГИЧЕСКИЕ, ГИСТОЛОГИЧЕСКИЕ И ГИСТОХИМИЧЕСКИЕ

ИЗМЕНЕНИЯ В СЕЛЕЗЕНКЕ И ПЕЧЕНИ ПОСЛЕ ПЕРЕВЯЗКИ СЕЛЕЗЕНОЧНЫХ ВЕН И ЛОЖНОЙ ОПЕРАЦИИ.

Морфологическое изучение селезенок выявило увеличение этого органа у опытных животных на пике анемии, т.е. на 7 сутки после операции Срисунок 2). Весовой индекс селезенок животных с перевязанными венами составлял 0,72±0.12% от массы тела и достоверно превышал аналогичные показатели у контрольных СО. 42±0,16% от массы тела. Р<0,05) и интактных животных С 0,44±0,022 от массы тела, р<0,05). Такое увеличение селезенки было обусловлено увеличением в 2.2 раза (0,6610,14%

Рисунок 2. Селезенки опытнах и контрольных животных ка 7 сутки после операция.

ПС

_01__ .______

опыт контроль '

Рисунок 3. Селезенки опытных и контрольных животных на 14 сутки после операции.

опыт контроль

- 11 -

от массы тела) количества красной пульпы селезенки по сравнению с интактаыми С0,31±0,032, р<0,05) и контрольными животными С 0.29±0.02%. р<0,05). Весовой индекс белой пульпы при этом не изменялся £0,10+0.02% от массы тела). Микроскопически во всех функциональных зонах селезенки определялись поля скопления макрофагов с хорошо выраженной пенистой зози-нофильной цитоплазмой, а также большое количество гранул ге-мосидерина, как свободно лежащих, так и заключенных в макроФаги.

На 14 сутки после перевязки селезеночных вен, когда показатели периферического звена эритрона нормализовались, в селезенке наблюдались атроФические изменения С рисунок 3). Весовой индекс красной пульпы был достоверно меньше, чем на 7 супси С 0,23±0,01% от массы тела, р<0,05) и не отличался от аналогичного показателя у интактньк животных. Атрофия белой пульпы селезенки проявлялась в 2-кратном снижении ее весового индекса СО, 04±0.01Х от массы тела, р<0,05). По всей ткани селезенки наблюдались пролиферация Фибробластов и Формирование коллагеновых волокон, а также обнаруживались сидерофаги. количество которых было меньше, чем в селезенках опытных крыс на 7 сутки после операции.

Морфологическое исследование печени не выявило, изменений массы этого органа у опытных животных. Микроскопически в печени на 7 и 14 сутки после операции определялась выраженная гидропическая дистрофия гепатоцитов без изменения структуры печени. При окраске по Перлсу в купфферовских клетках опытных животных определялся гемосидерин. У контрольных животных печень не отличалась от печени интактньк животных, гемосидерина в гепатоцитах обнаружено не было.

ИЗМЕНЕНИЕ-ЭРИТРОГОЭЗА В ЭРИТРОБЛАСТИЧЕСКМХ ОСТГОВКАХ

ПОСЛЕ ПЕРЕВЯЗКИ . СЕЛЕЗЕНОЧНЫХ ВЕН У КИК.

В костном мозге после перевязки вен селезенки на 7-е сутки наблюдалось выраженное угнетение эритропоээа С таблицы 1,2). Абсолтное количество зритробластичееких островков по сравнению с группой интактньк животных снизилось в 2 раза. Значительно уменьшилось количество островков пролиФерирую-щих классов - в 2.4 раза снизилось число ЭОрек. ЭО 1 и 30 2 классов в костном мозге опытных животных не определялись. Об

Таблица 1. Эритроблаетические островки костного мозга на 7-е и 14-е сутки после перевязки селезёночных вен у крыс.

1 I 1 1 1 ----------------- ■ ■ 7-е сутки I 1 14-е сутки 1

1 1 Интактные 1 после 1 после i

! I 1 { животные I операции 1 операции 1

1 1 1 Абсолютное 1 * 1 к* |

1 количество 30 1 238,6±8.46 1 113.8+2.7** 1 154.2+15. Я** 1

1С хЮ^/бедр. к.3 1 1 | 254,4±10,3 1 226,4±5,89 I

1 ЭО 1кл. 1 6,53±1.57 1 _ 1 1.63+0.25** 1

|Сх1СР/бедр. к. 31 | | 7.7±2,78 1 9,23±3,03 1

1 ЭО 2кл. 1 9,33±2,31 1 , | I

КхЮ^/бедр.к. 31 1 | 10,4±3,71 1 13,3±4,7 1

1 1 1 ЭО Зкл. ! 31,73±1,32 | Я5.8+10.4 1 18.2+5.84* I

|Сх10^/бедр.к-3| 1 | 63,4±3.49* 1 29.7±6,21 1

1 1 1 Ю инв. 1 157.33*14.511 №.. 8+14.4**1 84. 6+2S. 5* 1

1 (хЮ^/бедр. к. 31 124,4±9,02 1 111,8±17,2 1

1 1 1 ЭО рек. I 35.07±3,32 I .14.7+0.66^1 23.9+6.59*«, 1

1С хЮ^/бедр. к. 31 1 1 1 1 1 -------------1_ 1 45,2±4.23 I | 61.4±1.54* 1 }

Ппимриднир: в числителе - опыт, в знаменателе - контроль. * - достоверность различий между группой опытных животных и группой интактных животных Ср<0,05). ** - достоверность различий между группой опытных и

группой контрольных животных Ср<0.01). а - достоверность различия с предыдущим сроком.

Таблица 2. Расчетные показатели, характеризующие эритропоэз в эритробластических островках при спленомегалиии.

1----- !Срок после 1 операции I Показатель вовлечения в дифференциацию в Сх10а /бедр. кость) КОЕ-Э 30 1 Показатель повторного во-1 влечения макрофагов 30 в 1 эритропоэз 1 1 1 Показатель созревания 1 эритробластов в ЭО 1

Г 1 1 интактные 1 животные 41,6±4,9 1 1 0,226±0,032 1 3,82±0,61 |

1 17 сутки после 1 операции: ! опыт 1 контроль к 14,7±6,6 *» 52.9±5,1 0,275±0,031 | .0,366±0,043 - | 1 *« [ 8,54±3,83 ** 1 3.13±0,55 |

1 114 сутки после 1 операции: 1 опыт 1 контроль 1,...,...................... н 25.3±4,5 ** а 70,6±2,2 н 1 1 1 0.320±0,093 | 0,579±0,013 * I 1 4,18±1,01 и* а | 1,71±0,17 * 1 ................... ....... .. 1

« - достоверность различий между группой опытных животных и группой интактных животных Ср<0,05). - достоверность различий между группой опытных и группой контрольных животных Ср<0,01). * - достоверность различия с предыдущим сроком.

- 14 -

угнетении пролиферативных процессов в эритробластических островках свидетельствует также снижение "показателя вовлечения КОЕ-Э в дифференциацию в эритробластические островки", в 2,8 раза по сравнению с таковым показателем у интактных животных и животных контрольной группы. На угнетение процессов пролиферации у опытных животных указывает увеличение в 2,2 раза "показателя созревания зритробластов в эритробластических островках", который в контрольной группе оставался неизменным. Поскольку "показатель повторного вовлечения макрофагов эритробластических островков в эритропозз" у животных с перевязанными селезеночными венами не изменялся, очевидно, что костномозговые макрофаги не присоединяли к своей зрелой "короне" СЭОинв) молодые проэритробласты и не превращались в ЭОрек. Некоторое увеличение данного показателя у контрольных животных можно объяснить оживлением эритропозза после ложной операции. У животных с экспериментальной спле-нопатией наблюдалось увеличение количества эритроидных клеток, входящих в состав 30 3 класса, причем это изменение происходило за счет увеличения числа ядросодержащих клеток СполихроматоФильных и оксифильных нормобластов). Так, если среднее число эритроидных клеток в ЭО 3 класса интактных животных составило 24,2±1.79, то ЭО 3 класса опытных животных содержали 36,9±3,05 эритроидных клеток Св контрольной группе этот показатель был равен 21.1±0,92). Среднее количество ядросодержащих клеток в ЭО 3 класса было 27,7±1,74, что достоверно отличалось от показателя в контрольной группе С18,3±1.56, р<0,015. и показателя у интактных животных С15,8±1.53, р<0.01). На 7-е сутки у опытных животных наблюдалось увеличение процентного содержания эритробластических островков, имеющих в СЕоем составе клетки зозинофильного ряда С21.9±2,730, при этом у контрольных животных количество таких островков (10,3±1.7%) не отличалось от аналогичного показателя в группе интактных животных с 10.7±1,8%). Кроме этого, на 7-е суткм отмечалось достоверное увеличение количества "атипичных" островков, т.е островков, не имеющих центрального макрофага С18,2±2,8 на 100 ЭО) по сравнению с контрольными С 5,3±2,2, р<0,05) и интактными С 7,8+1,7. р<0.05) животными.

На 14-е сутки после перевязки селезеночных вен абсолхтг-

ное количество зритробластических островков С154,2+5,9x10^/ /бедр.кость) оставалось достоверно ниже как контроля С226,4± ±5,89х10^/бедр. кость), так и абсолютного количества 30, определенного у интактных животных. Однако, по сравнению с 7-ми сутками, количество эритробластаческих островков в костном мозге достоверно увеличилось Ср<0,01) (таблица 7). К этому сроку в костном мозге появились зритробластические островки 1 и 2 классов, увеличилось количество ЭОрек. Ср<0,01). Увеличение абсолютного количества зритробластичес-■ ких островков в костном мозге вместе с синхронным увеличением ЭО 1, 2-го классов и ЭОрек. свидетельствует об увеличении дифференциации КОЕ-Э в проэритробласты.* Этот процесс отражается в изменении "показателя вовлечения КОЕ-Э в дифференциацию в зритробластические островки": на 14-е сутки он составил 25,3±4,51, в 1,7 раза превысив этот показатель на 7-е сутки (р<0,05). Изменение соотношения между процессами пролиферации и созревания отразились в изменении "показателя созревания эритробластов в зритробластических островках", который на 14-е сутки пбсле операции в опытной группе достоверно снизился в 2 раза по сравнению с показателем, полученным на 7-е сутки Ср<0,01). Причиной увеличения "показателя вовлечения КОЕ-Э в дифференциацию в зритробластические островки", "показателя повторного вовлечения макрофагов ЭО в эритропоэз". а также снижения "показателя созревания эритробластов в ЭО" у контрольных животных, возможно, является операционная травма, приводящая к стимуляции эритропоэза у ложно-оперированных животных. На 14-е сутки общее количество эритроидных клеток в ЭО 3 класса снизилось по сравнению с 7-ми сутками С21,1+0,9, р<0»01), достигнув значения, отмеченного у интактных животных. При этом достоверно снизилось количество ядросодержащих клеток в ЭО 3-го класса с 16,4+2,28, р<0,02) по сравнению с 7-ми сутками после операции. У опытных животных на 14-е сутки число ретикулоцитов, входящих в состав ЭО 3-го класса, в 2 раза превышало количество ретику-

о

лоцитов в ЭО 3-го класса контрольных животных С 4,73+1.44 и 2.4±0,92 соответственно. р<0.01), что объясняется, по-видимому, большей скоростью выхода ретикулоцитов из "короны" ЭО 3-го класса и ЭОинв. у контрольных животных.

Количество островков, имекшх в своем составе клетки

эозинофильного ряда, на 14-е сутки после операции у опытных животных С15,4±1.6%) не отличалось от показателей в интак-тнои и контрольной группах- Содержание в костном мозге опытных животных атипичных островков на 14-е сутки после операции оставалось высоким С26.1±3,3 на 100 303, достоверно отличаясь от показателей в контрольной С6.4+3,2 на 100 30) и интактаой группах.

В отличие от спленомегалии без изоляции селезенки, спленомегалия в эксперименте с сочетанием перевязки вен селезенки с ее одновременной изоляцией сохранялась и на 14-е сутки после операции СО,49+0,12% от массы тела животного). При этом наблюдался более длительный период анемии у опытных животных Сдо 14 суток после операции). Уменьшение весового индекса селезенки в группе'опытных животных было отмечено нами лишь на 30-е сутки после операции С0.27+0,02% от массы тела). Весовой индекс селезенки в группе контрольных животных не претерпевал каких-либо изменений по сравнению с интактными животными. Весовой индекс печени у опытных и контрольных животных в течение всего срока наблюдений не изменялся. Так как достоверных отличий в количественном и качественном составе эритробластических островков костного мозга между вариантами экспериментальной спленомегалии выявлено не было, мы предполагаем, что анемия в опыте с изоляцией органа поддерживалась за счет преобладания гемолитического действия селезенки над продукцией эритроцитов костным мозгом. Восстановление венозного оттока, атрофия органа и, связанное с ней, уменьшение угнетающих эффектов селезенки на костный мозг, приводили к восстанавлению эритропоэза. что, в конечном счете. ликвидировало анемию.

Данные корреляционно-регрессионного анализа выявили, что увеличение селезенки при острой застойной спленомегалии прямо связано с увеличением числа ретикулоцитов в периферической крови и с задержкой созревания эритроидных клеток в зрелых эритробластических островках костного мозга.Последнее позволяет допустить, что рост числа ретикулоцитов в периферической крови был также связан, не только с их усиленным выходом из костного мозга, но и с замедлением соревания

- 17 -

ретикулоцитов в эритроциты. Тормозные эффекты веществ, продуцируемых в селезенке, на созревание ретикулоцитов были получены рядом авторов СЗахаров KLM., 1967. Paulino et al., 1957). Взаимоотношение слленомегалии с количеством эритроцитов в периферической крови, с объемами шркулирушей крови, с количеством эритробластических островков в костном мозге имеет вид обратной зависимости, что подтверждает причинную связь между увеличением селезенки, развитием истинной анемии и торможением зритропоэза в эритробластических островках костного мозга.

Полученные данные позволяет говорить о том, что перевязка селезеночных вен приводит к замедлению оттока крови из селезенки. Это создает в селезенке неблагоприятную для эритроцитов среду, в результате чего повреждается мембрана эритроцитов, снижается их устойчивость и развивается гемолитическая анемия. По мере накопления в циркуляции поврежденных эритроцитов, все большее их число задерживается, разрушает^ ся и Фагоцитируется в селезенке и макрофагах печени. Усиление Фагоцитарной функции селезенки и .печени осуществляется за счет увеличения содержания мононуклеарных фагоцитов в зтик органах и их активации. Из литературы известно CSassa S. et al., 1983, 1987, Feldman L. et al., 1986. Broxmever H. et al., 1985, Wang C.Q., 1987), что активированные макрофаги секретируют ряд веществ, оказывающих тормозящее влияние на эритропозз, в частности: Фактор некроза опухоли, простаглан-дин Е2. интерферона гама и бета-1. ИЛ-1. ИЛ-2. ИЛ-6, КСФ-ГМ. Вероятно, что тормозящее воздействие макрофагов селезенки и печени на зритропоэз в костном мозге существует и в норме, что является механизмом отрицательной обратной связи в системе эритрона, препятствующим перегрузке кровяного русла форменными элементами. Частично этот механизм воспроизведен нами на модели застойной спленомегалии. когда он проявляет себя в увеличенном объеме С развивается экспериментальный ги-перспленизм) и приводит к угнетению нормального кроветворения. Угнетение эритропоээа в костном мозге вместе с усиленным гемолизом эритроцитов и, отчасти, с депонированием эритроцитов в увеличенной селезенке и являются причинами глубокой анемии. Длительность анемии зависит от скорости ве-

- 18 -

нозной реваскуляризаши селезенки. В последующем спленомега-лия сменяется атрофией органа вследствие активации Фиброблас-тов и накопления в тканях селезенки коллагена, уменьшением гемолитической функции и тормозных влияний на костный мозг и Функция•эритрона восстанавливается.

ВЫВОДЫ:

1. Наложение лигатур населезеночные вены вызывает у крыс острую застойную спленомегалию с признаками гиперспленизма.

2. После острой спленомегалии у крыс развивается атрофия селезёнки. Замедление образования венозных коллатералей увеличивает длительность периода спленомегалии.

3. При острой экспериментальной застойной спленомегалии с 3 по 10 сутки наблюдается истинная, гемолитическая, нормохром-ная анемия с пониженной компенсационной реакцией зритроидно-го ростка костного мозга, выраженность которой прямо пропорциональна степени спленомегалии.

4. Характерными признаками усиленного кроверазрушения в период спленомегалии являются: увеличение в периферической крови количества ретикулоцитов, эритроцитов с малым диаметром, уменьшение устойчивости эритроцитов к действию гемоли-тика, а также отложение в селезенке и печени гемосидерина.

5. Плазма крыс с экспериментальной спленомегалмэй подавляет стимулированный Фенилгидразиновой анемией зритропоэз у мышей, что указывает на гуморальный механизм его торможения.

6. Гуморальный механизм торможения зритропоэза в костном мозге крыс со спленомегалией сочетается с депрессией поддер-живаших зритропоэз межклеточных взаимодействий в костном мозге.

7. В костном мозге крыс со спленомегалией уменьшается абсолютное количество эритробластических островков за счет про-лиферирущих классов, тормозится дифференциация КОЕ-З в проэритробласты в эригробластаческие островки и созревание эритробластов в эритробластических островках 3-го класса С образуются "Супер ЭО"!).

8. У крыс со.спленомегалией наблюдается нарушение организации эритробластических островков: увеличивается количество "атипичных" островков лишенных центрального макрофага, и островков, содержащих в "короне" зозинофильные лейкоциты.

9. Острая спленомегалия у крыс сопровождается лейкоцитозом с абсолютными нейтроФилией, ыоноцитозом и лимфоцитозом.

10. Формирование венозных коллатералей в сочетании с "функциональной аспленией" через 14 суток после операции устранявт проявления гиперспленизма и постепенно нормализует состав периферической крови.

Список работ, опубликованных по теш диссертации:

1. Динамика показателей периферической крови при перевязке селезеночных вен у крыс // Актуальные вопросы практической и теоретической медицины. Материалы научной конференции ЧМИ. -1995,- С. 68.

2. Влияние экспериментальной спленомегалии на клеточный состав белой крови у крыс// Тезисы научных сообщения 2 съезда 4мзиологов Сибири и Дальнего Востока. Новосибирск.- 1995.-Ч.2.- С. 434.

3. Морфологические изменения в селезенке при перевязке селезеночных вен // Материалы конференции Челябинского областного научного общества терапевтов.- 1996. - С17-18 С Соавторы: Новичкова О-В., Воронова'Л. В.):

ЛРЖШ364. 20.01.92. Подписано в печать 23.04,96. Формат 60x84 1/16. Печать офсетная. Усл.-печ.л. 1,16. Уч.-изд.л. 1,0. Тира* 100 эяз. Заказ 204.

ТОП издательства. 454060, г. Челябинск, пр.им. В.И. Ленина, 76.

\