Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:О характере эритропоэза в эритробластических островках костного мозга при экспериментальных анемиях

ГБ ОД

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РФ ЧЕЛЯБИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

Крестьянинова Ольга Густавовна

О ХАРАКТЕРЕ ЭРИТРОПОЭЗА В ЭРИТРОБЛАСТИЧЕСКИХ ОСТРОВКАХ КОСТНОГО МОЗГА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ АНЕМИЯХ

14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Челябинск, 1994

Работа выполнена в Челябинском государственном медицинском институте.

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ:

чл. корр. АЕН РФ, доктор медицинских наук, профессор Ю. М. Захаров

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор медицинских наук, профессор В. Т. Долгих

доктор медицинских наук, профессор Б. Г. Юшков

ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ:

Научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови МЗ РФ (г. Санкт-Петербург).

Защита состоится «уГ/?^. 199 ¿г. в _ часов на заседа-

нии Специализированного ученого советаЧелябинского медицинского института (454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Челябинского медицинского института.

Автореферат разослан "¿Л?/ '/гехе/о/^ 199

Ученый секретарь Специализированного ученого совета, доктор медицинских наук Л. В. Кривохижина

Актуальность проблемы. Анемии, характерным признаком которых является снижение содержания эритроцитов и количества гемоглобина в периферической крови, являются не только специфической гематологической патологией, но и сопровождают многие соматические заболевания. Данное обстоятельство обуславливает неослабевающий интерес экспериментаторов и клиницистов к углубленному изучению этиологии и патогенеза анемий.

Так, до сих пор малорасшифрованными остаются механизмы развития анемии, сопровождающей ожоговую болезнь. Представляют, что важную роль в ее развитии играет нарушение обмена железа, укорочение продолжительности жизни эритроцитов {И. Бернат, 1975), появление токсических соединений, угнетающих эритропоэз (Р. И. Лифшиц, 1986; Н. А. ФедоровX соавт. , 1985; И. И. Долгушин и соавт. , 1989 и др.). Показано, что эритропоэз у человека и ^екопитающих протекает в эритробластических островках (ЭО) костного мозга (М. Везэ'^, 1956-1991). Тем не менее, исследований кинетики эритропоэза и ЭО костного мозга, а также функциональных свойств-центральных микрофагов (ЦМФ) ЭО при-ожоговой травме, з доступной литературе мы не встретили. Лишь в единичных работах /казывается-на чувствительноегык-деиствию повреждающих факторов, при ожоге, данных- клеточных ассоциаций (А\ Г. Рассохин и соавт. , 1991).

Хотя закономерности вовлечения КОЕэ в эритробласты в ЭО, амплификации и созревания эритроидной "короны" ЭО при сомпенсационномэритропоэзе установлены Ю. М. Захаровым(1990), (1. В. Ворговой, Ю. М. Захаровым (1990), в литературе отсутствуют :ведения о характере функциональных изменений ЦМФ ЭО, юддерживающих компенсационный эритропоэз в этих межклеточных ассоциациях.

Поэтому, как для условий компенсационного эритропоэза, так 1 угнетенного эритропоэза важно было бы: раскрыть механизмы (заимодействия ЦМФ с окружающей его эритроидной "короной"; )ыяснить зависимости между функциональным состоянием лизосом лакрофагов и продукций (или содержанием) в ЭО кислых ГАГ, тектрофоретической подвижностью ЭО (ЭФПэо) и способностью ДМФ ЭО поддерживать эритропоэз; изучить функциональные зсобенности ЭО различных компартментов костного мозга.

Таким образом, расшифровка процессов, обеспечивающих юмпенсационный эритропоэз в ЭО, а также характера его нарушений

при экспериментальных ожогах у животных, могла бы уточнить механизм анемии, сопровождающей ожоговую травму у человека.

Цель исследования. Целью работы явилось выяснение характере эритропоэза в ЭО костного мозга, состояния функций их ЦМФ состояния гуморальной регуляции эритропоэза, сопровождающи; экспериментальный ожог. Характер этих изменений в ЦМФ ЭО и и: "короне" сопоставлялся с состоянием их функций при компенсационнод эритропоэзе - при постгеморрагической анемии.

Задачи исследования.

1. Исследовать динамику показателей периферической крови кроветворения в костном мозге и селезенке при постгеморрагическо! и ожоговой анемиях.

2. Сопоставить изменения периферического отдела эритрона динамикой количественных и качественных изменений ЭО костног мозга при данных состояниях.

3. Исследовать зависимость между активностью эритропоэза островках и функциональным состоянием ЦМФ ЭО, по измененик состояния лизосомально-пластинчатого комплекса, содержания кисль ГАГ и электрических свойств мембран клеток ЭО, при остро постгеморрагической и ожоговой анемиях.

4. Сопоставить характер сдвигов эритропоэза в ЭО при ожогойс травме с эритропоэтической активностью плазмы крови обожженнь животных.

Научная новизна работы. Впервые исследовано значена функциональной перестройки ЦМФ ЭО В реализации процессс стимуляции и ингибиции эритропоэза при острой постгеморрагическс и ожоговой анемиях. Показано, что постгеморрагическая анем1 сопровождается повышением функциональной активности ЦМФ ЭС а ожоговая анемия, напротив, снижением исследованнк функциональных параметров ЦМФ ЭО. Установлены особенное гемопоэза в селезенке на указанные воздействия.

Впервые получены сведения, характеризующие прижизненж состояние лизосомального аппарата ЦМФ ЭО, электричесю свойства мембран клеток островков, содержание в них ГАГ взаимосвязь этих показателей с активностью эритропоэза в ЭО к в норме, так и при компенсационном и угнетенном эритропоэзе.

Получены новые доказательства функциональных различий 3

орковой и осевой зон костного мозга трубчатых костей жийотных.

Теоретическое и практическое значение работы. Вскрыты юнее ^неизвестные закономерности реагирования эритропоэза в Ю на возмущающее воздействие - кровопотерю. Выяснена роль арушения межклеточных и гуморально-клеточных взаимодействий в атогенезе анемии, сопровождающей ожоговую травму.

Полученные в работе результаты экспериментального сследования обосновывают изыскание новых подходов к терапии 1немических состояний через стимуляцию функциональной активности 1МФ ЭО, нарушаемой при ожогах. Отработанные в эксперименте риемы изучения функционального состояния ЦМФ ЭО позволяют босновать их применение для анализа сохранности межклеточных заимоотношений у больных с различной гематологической патологией в эксперименте при изучении патогенеза анемий.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены а: Всесоюзной конференции "Лабораторные животные для юдикобиологических исследований" (М. , 1990); Уральском съезде (изиологов "Физиологические механизмы адаптации человека и :ивотных" (Свердловск, 1990); межинститутской конференции Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных »изиологических и патологических состояниях" (Челябинск, 1990); ервом Международном конгрессе патофизиологов (М. , 1991); ральской конференции патофизиологов "Системные и клеточные 1еханизмы адаптации организма к действию повреждающих факторов" ^лябинск, 1991).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 печатных абот, из них 3 - в центральной печати, получено свидетельство на ационализаторское предложение.

Объем и структура диссертационной работы. Диссертация зложена на ¿ЗО страницах машинописного текста, ллюстрирована 14 таблицами, 11 графиками; состоит из введения, бзора литературы, описания методов исследования, глав собственных сследований, обсуждения полученных результатов, общего аключения, выводов, указателя литературы, включающего /S3 источника отечественной и зарубежной литературы.

Положения, выносимые на -защиту.

Экспериментальный ожог, III "А-Б степени", 15% поверхности ела, характеризуется развитием ожоговой анемии, связанной со

снижением функциональной активности ЦМФ ЭО, нарушение; межклеточных эритропоэтических взаимоотношений в ЭО, нарушение; синхронизации амплификации и созревания эритробластов в "короне ЭО, снижением темпа вовлечения ЦМФ ЭО в реконструкцию Н' фоне появления в плазме крови ингибиторов эритропоэза. 2. Кровопотеря 1% массы тела, характеризуется pазвитиei постгеморрагической анемии с активацией эритроидны взаимоотношений в ЭО, сопровождается повышение* функциональной активности ЦМФ ЭО и выражается в синхронно, увеличении дифференциации КОЕэ в эритробласты, синхронизаци нарастающей амплификации и созревания эритробластов в "короне ЭО.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

Материалы и методы исследования. В экспериментах был использовано 170 крыс-самок линии "Вистар", массой 170-230 г, 3 беспородных крыс-самцов, массой 230-280 г и 58 половозрелы мышей-самок линии "СВА", массой 18-20 г. Постгеморрагическу! анемию вызывали под эфирным наркозом путем забора крови и хвостовой вены в объеме 1% массы тела животного. Ожог III "А-степени", площадью 15% поверхности тела, наносили крысам п стандартной методике, отработанной на кафедре биохими Челябинского мединститута, с помощью установки свето-тепловог воздействия (Р. И. Лифшиц и соавт. , 1986).

Из показателей периферической крови у животных определял число эритроцитов и лейкоцитов, концентрацию гемоглобина показатель гематокрита, а также количество ретикулоцитс традиционными гематологическими методами. Рассчитывали: цветне показатель крови (ЦП), среднее содержание гемоглобина (ССЭ) среднюю концентрацию гемоглобина в 1 эритроците (СЮ) (Й. Тодоров, 1963).

Для исследования костно-мозгового кроветворения проводил подсчет абсолютного числа миелокариоцитов во взвеси клетс костного мозга, а также парциальных эритрограмм в мазка: отпечатках, окрашенных по Романовскому-Гимзе, насчитывая 50 клеток. Количественный и качественный анализ ЭО проводили п методу Ю. М. Захарова и соавт. (1984, 1990) и допол'няли расчетны* показателями, включающими: общее количество КОЕэ, вступивших эритроидную дифференцировку; показатель вовлечения КОЕэ

¡эференцировку; а также показатель повторного вовлечения ЦМФ ) в эритропоэз (Л. В. Воргова. Ю. М. Захаров, 1990).

Для разделения костного мозга трубчатых костей крыс на эковую и осевую зоны использовали устройство (Г. К. Попов и звт. , 1991).

Для измерения ЭФПэо использовали модифицированный метод С. Харамоненко,-А. А. Ракитянской (1974). Проводили 100-200 лерений ЭФПэо при поочередной смене полярности, выводя ;днюю подвижность для каждого островка.

Функциональное состояние макрофагов ЭО костного мозга знивали по количеству лизосом, их рН и количеству кислых ерополисахаридов, с привлечением цитофотометрической и крофлюориметрической техники. Все цитофото- и срофлюориметрические исследования выполняли на микроскопе ОМАМ-ИЗ" с насадкой "ФМЭЛ-IA" со стабилизированным питанием :тем освещения и регистрации в пределах 0.1%. Интенсивность эаски и флюоресценции выражали в условных единицах.

Определение общей активности лизосом в ЦМФЭО проводилось методу А. Г. Рассохина и соавт. (1992) в витальных препаратах ЭО :ле из адгезии на покровных стеклах в термостате при 37°С в 1ении 40 минут. Расчет удельной активности осуществляли путем ]ения общей активности лизосом на количество клеток в ЭО.

Прижизненное определение рН лизосом осуществляли с помощью цифицированного метода А. Н. Литинской и соавт. (1979).О ггрилизосомальном рН судили по отношению интенсивности ¡товых потоков, замеренных при 470 нм (Ф-470) и 450 нм (Ф-450).

Определяли содержание кислых гетерополисахаридов в |уктурных компонентах ЭО костного мозга крыс модифицированным годом гистологической окраски А. Н. Яцковского (1987).

Исследование селезенки проводили по методу П. Д. Горизонтова оавт. (1983), определяя индекс массы органа, содержание клеток мг ткани и во всем органе; лейко/эритроцитарный коэффициент :пленограмму подсчитывали в мазках-отпечатках.

Эритропоэтическая активность плазмы крови обожженных вотных исследовалась no A. J. Erslev (1986) на 1, 3, 7 и 14 сутки

после ожоговой травмы. Плазма крови крыс, не подвергнутых воздействию, служила контролем.

Данные обрабатывали методами вариационной статистики.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ ИЗМЕНЕНИЯ КРОВИ И КРОВЕТВОРЕНИЯ В КОСТНОМ МОЗГЕ И СЕЛЕЗЕНКЕ ПРИ КРОВОПОТЕРЕ.

Изменения в периферической крови, вызванные 1% кровопотерей, совпадали с многочисленными наблюдениями других исследователей (Р. А. Дымшиц, 1956; Л. Г. Ужанский, 1968; Н. А. Федоров и соавт. 1976): анемия носила непродолжительный характер, дефицит эритроцитов проявлял себя на 6 и 24 часы, дефицит гемоглобина с 6 часа по 3 сутки. Расчет цветного показателя выявлял хорошие компенсационные возможности костного мозга в отношении внутриклеточного синтеза гемоглобина. Сниженным показатель гематокрита ставался до 7 суток после взятия крови, ретикулоцитоз был наиболее выражен на 3 сутки.

Характерными были изменения абсолютного количества миелокариоцитов, эритроидных и неэритроидных клеток костного мозга крыс после кровопотери. Клеточность костного мозга на 37 сутки увеличилась до 117.5±3.2*104/бедро (р<0.01) и 121.3*7.5*107 бедро (р<0.02), соответственно, против 90.8±4.7*107бедро в контроле, за счет увеличения числа эритроидных клеток, на что указывал сниженный лейко/эритроцитарный коэффициент. Увеличенное количество эритроидных клеток отмечалось, начиная.с 24 часа эксперимента. Реакция неэритроидных клеток после 1% кровопотери не была количественно значима.

В парциальной эритрограмме наблюдались характерные изменения в составе эритроидных клеток. Так, уже через 6 часов количество митозов почти вдвое превысило фон, видимо, за счет деления полихроматофильных нормобластов, количество которых возрастало в 1.5 раза (р<0.02). Также через 24 часа было резко увеличено содержание молодых эритроидных клёток: эритробластов, базофильных нормобластов. На 3 сутки после кровопотери волна амплификации эритроидных клеток вновь достигла полихроматофильных нормобластов. На 7 сутки в костном мозге крыс была увеличена лишь доля последних, при повышенном же проценте клеток, находящихся в митозе. Хотя количество оксифильных нормобластов не отличалось от такового у интактных животных,

>ложно все же думать об интенсивном их созревании в ретикулоциты, поскольку содержание "голых" ядер в отпечатках костного мозга в 6 раз превышало фоновое значение. На 14 сутки содержание "голых" ядер по-прежнему оставалось втрое больше, при этом в парциальной эритрограмме была снижена лишь доля оксифильных нормобластов, -¡то позволяет думать о продолжающемся их интенсивном превращении з молодые эритроциты.

Абсолютное количество ЭО после кровопотери особенно зысоким было на 3 и 7 сутки и составило 285.0±9.2*103/бедро 'р<0.05) и 446.0±55.0* 103/бедро (р<0.02), соответственно, против 209.0±23.5*1 О3 в контроле. Это подтверждает ранее сделанный зывод о том, что стимуляция эритропоэза всегда сопровождается /величением количества ЭО в гемопоэтической ткани костного иозга.

Подробный анализ изменений качественного состава ЭО после кровопотери позволил обнаружить следующую эволюцию эритропоэза з островках. Уже на 6 час после кровопотери увеличивалось количество ЭО, и ЭОр.с , что свидетельствовало как о вовлечении новых КОЕэ в эритропоэз, благодаря комплектации их с резидентными МФ костного мозга, так и вовлечении КОЕэ в контакт с МФ созревающих ЭО (реконструкция эритропоэза на базе МФ ЭОии1 ). Количество ЭОн-< в бедренных костях резко снижалось. Данный характер, изменений в ЭО сохранился и через 24 часа после кровопотери. Можно думать, что снижение абсолютного количества ЭО>н> в костном мозге бедренных костей отражало ускорение темпа созревания оксифильных нормобластов в ретикулоциты. Вместе с тем,нельзя исключить, что снижение ЭО)1и на 24 час могло отражать увеличение объема терминального эритропоэза, т. е. денуклеации полихроматофильных, а возможно и более ранних эритроидных клеток в эти часы после кровопотери.

На 3 сутки закономерно обнаруживалось движение волны амплификации эритробластов в "короне" ЭО, выразившееся в нарастании абсолютного количества Э02 и ЭОэ классов и ЭО>и1. Еще ярче устойчивое увеличение абсолютного количества всех классов зрелости ЭО: ЭО,, ЭО?, ЭОуЭОре>, и ЭОин1 обнаруживалось на 7 сутки, свидетельствуя об устойчивом прохождении удвоения эритроидных' клеток от проэритробластов до средних полихроматофильных эритробластов в Э03 и их созревании до ретикупоцитов в ЭОэ и ЭОин . Повышенная реконструкция эритропоэза

Рис. 1 Функциональные показатели эритропоэза в ЭО при кровопотере

А - КОЛИЧЕСТВО КОЕэ, ВСТУПИВШИХ В ДИФФЕИНЦИАДОЮ В 30, Б - ВЕЛИЧИНА ВОВЛЕЧЕНИЯ КОЕэ В ЭШТРСИДНУЮ Д ИФФЕ ИШ Ш РОВКУ, В - П (Ж АЗА ТЕЛ Ь ПОВТОРНОГО ВОВЛЕЧЕНИЯ МФ 30 В ЭШТРОПОЭЗ.

410

310-■

£

е а

Ъ

м к

1

•100

-8 я

80-

60-

40-

к 1

г Б

Ш

к \ а з ч

' ТШ

±8

1,о

о* 0,6 о,ч-0,2-

В

к 1

К - КОНТРОЛЬ, I - б ЧАСОВ, 2 - I СУШИ, 3-3 СУТКИ, 4-7 СУТКИ , 5 - СУТКИ * - ДОСТОВЕРНОСТЬ В СРАВНЕНИИ С КОНТРОЛЕМ.

в ЭО сохранялась до 7 суток включительно. К 14 суткам распределение ЭО по классам зрелости мало отличалось от контрольных животных.

Детально проанализировать изменение эритропоэза в ЭО после 1% кровопотери позволили расчетные показатели (Рис. 1). Они также подтвердили увеличение вовлечения КОЕэ в дифференцировку с 6 часа по 7 сутки включительно. Закономерное повышение объема реконструкции в ЭО вызвало увеличение показателя повторного вовлечения ЦМФ ЭО в эритропоэз. Интенсивность этих процессов снижалась лишь к 14 суткам после кровопотери.

ИЗМЕНЕНИЯ ЦМФ ЭО ПРИ КОМПЕНСАЦИОННОМ ЭРИТРОПОЭЗЕ

Периоду наиболее интенсивного образования ЭО с 6 часа по 3 сутки после кровопотери соответствовало увеличение их ЭФП (Рис. 2). На 7-14 сутки ЭФП^ возвращалась к пределам, характерным для интактных животных. Представляется интересным, что в процентном распределении ЭО не отличались между 3 и 7 сутками, хотя их абсолютное количество и было различным: на 7 сутки возрастала доля 2, 3 классов и ЭОин1 по сравнению с 3 сутками. По-видимому, разная ЭФПэо не различавшихся в процентном отношении ЭО может объясняться изменением зарядов на их поверхности. Известно, что на распределение зарядов на мембране клеток, в частности, ЦМФ ЭО, могут влиять кислые ГАГ. Действительно, исследование кислых гетерополисахаридов в ЭО костного мозга животных в разные сроки после кровопотери обнаружило отчетливое увеличение их концентрации в ЭО на 6, 24 час и на 3 сутки. На 7 сутки их концентрация не отличалась от исходного уровня, а на 14 сутки вновь повышалась. Возможно, именно этим можно обьяснить возрастание ЭФПэос 6 часа по 3 сутки и уменьшение ее на 7 сутки после кровопотери.

Другим фактором, существенно влиявшим на повышение ЭФПэо, могло быть взаимодействие эритропоэтина с мембраной эритроидных клеток островков, поскольку суммарное количество эритроидных клеток, особенно богатых рецепторами к эритропоэтину, нарастает максимально в 1-3 сутки после кровопотери (К. АкаЬапе еК а1. 1989). Убедительно показано, что высокие значения ЭФП эритроцитов периферической крови являются признаком их высокой жизнеспособности и отражают адаптивную эритроцитарную реакцию

Рис. 2. Функциональные характеристики ЭО при кровопотере А - ОБЩЕЕ КОЛИЧЕСТВО 30. Б - В - ССИЕШНИЕ КИСЛЫХ ГАГ. Г - ОБЩА АКТИВНОСТЬ ЛИ30С0М

аО

»30. Д - рН лизосом.

ЧЗО- Г 390' 550

зю-гяа

230-• ¿90

2 I

х

1,46 1,46

1цг- ■

1,34-^30

н 'о

кШН 5

П « |

* *

к 1 г з ч 5

28 26 24'' 21-гош 16 14';

В

5,0-

* Ч5--

4,0 -

К 1 г з ч 5

3,5-

4,34 Ч£4 4,14 ЧОН' 3,94 -3.64-•

Л *

к 2 3 4 5

1_

цгзн 5.

К - КОНТРОЛЬ, I- б ЧАСОВ, 2- I СУТКИ. 3- 3 СУТКИ, 4— 7 СУТКИ, 5- 14 СУТКИ * _ тг^тгютгнпгть С1Ч прлйнгнии Г. итнттпгкЛ

остного мозга в ответ на возросшую потребность организма в еренрсчиках кислорода в различных экстремальных условиях И. Козинец и соавт., 1986; Ю. М. Захаров и соавт. , 1986; . С. Тупиневич, Л. Р. Боговазова, 1988; С. Л. Сашенков и соавт. , 989). Напротив, понижение ЭФП эритроцитов, как правило, аблюдается при значительных нарушениях функций эритрона и арактерно для железодефицитных, гемолитических, гипопластических других анемий или анемий, связанных с энзимопатиями, и часто видетельствует об укорочении жизни эритроцитов. Поэтому, величение отрицательного заряда клеток "короны" ЦМФ и ЭО в елом, сочетающееся, как мы отметили выше, с активно протекающими роцессами пролиферации и дифференциации эритроидных клеток в Ю, можно рассматривать как признак высокой функциональной 1ктивности данной клеточной ассоциации. С другой стороны, тверждение о том, что увеличение ЭФПэо отражает хорошее >ункциональное состояние клеток, подтверждают наблюдения нижения ЭФП ядросодержащих клеток при нарушении их лазматической мембраны (Г. И. Козинец и соавт. ,1986).

Увеличение содержания ГАГ в ЭО на 14 сутки после кровопотери, ероятно, связано с преобладанием среди них доли созревающих Ю: ЭОэи ЭОив(, т. к. показано, что под влиянием ГАГ увеличиваются екучесть и пространственное растяжение мембраны и цитоскелета 1МФ ЭО (Н. В. Корнилова и соавт. , 1994) этих классов зрелости.

Исследование функционального состояния ЦМФ ЭО после ровопотрери обнаружило увеличение общей активности лизосом 1МФ ЭО на 1 и 3 сутки и удельной активности лизосом на 1 и 14 утки. Повышение на 1 сутки активности лизосом коррелировало со нижением их рН. Можно думать, что указанные изменения были >бусловлены нарастанием эритрофагоцитоза, поглощением ытолкнутых ядер из созревающих нормобластов "короны" ЦМФ ЭО, оскольку на 6 час после кровопотери резко снижалось количество )Оик8 и Э03 в бедренной кости. Увеличение рН лизосом на фоне овышенной общей активности лизосом на 3 сутки, возможно, было вязано с вовлечением в эритропоэз молодых резидуальных МФ и ^онобластов, функциональное состояние лизосомально-ластинчатого комплекса которых отличалось от ЦМФ ЭО. Это редположение опирается также на высокое содержание в емопоэтической ткани ЭО, и ЭОре1,. Интересно, что резкому величению числа ЭОии на 7 сутки соответствовало и снижение рН

лизосом, отразившее интенсивность фагоцитоза в ЦМФ этих ЭО Напротив, с восстановлением показателей крови к 14 дню после кровопотери общая.активность лизосом в ЦМФ ЭО понижалась, чтс отражало снижение эритродиереза при восстановлена эритроцитарного уровня. Увеличенная же удельная активность лизосол ЦМФ ЭО в это время, на наш взгляд, объясняется преобладанием^ среди ЭО доли созревающих, в которых интенсивно идут процессь денуклеации и поглощения ядер макрофагами.

Таким образом, анализ эритропоэза, построенный на учет« эволюции в ЭО, парциальной эритрограмме, коэффициенте лейкоу эритро обнаруживает большую информативность при использовант формулы ЭО и расчетных показателей. Так, в отличие о традиционного подхода, анализ эритропоэза в ЭО улавливав движение начавшегося удвоения материнских форм эритроидны: клеток уже после 6 часа кровопотери и характеризует движение это» волны амплификации вплоть до ЭОвн1. Дополнительную информацик об активации эритропоэза дает количественная характеристике реконструкции эритропоэза на базе ЭОин>, которая регистрировалаа нами с 6 часа после кровопотери. Расчет функциональны: показателей, позволяющих установить количество КОЕэ, вовлеченны: в эритроидную дифференциацию в ЭО обнаружил, что данньн процесс продолжался вплоть до 7 суток. Таким образом, эритропоэ: при кровопотере был активирован и на 7 сутки, чего парциальна: эритрограмма не отражала.

Проведенный корреляционно-регрессионный анали: взаимоотношений между формулой ЭО и цветными показателями ЦП, ССЭ и СКЭ - обнаружил высокую степень зависимости межд1 гемоглобинизацией эритроцитов и количеством ЭО 1 и 2 классов Так, положительная зависимость между количеством ЭО, и СКЕ отмечалось на 6 и 24 часы после кровопотери: 1?=+0.962 (р<0.05) I (?=+0.966 (р<0.05) соответственно; на 14 сутки - между количествод Э02 и ЦП: 1*=+0.907 (р<0.05), а также Э02 и ССЭ: 1?=+0.906 (р<0.05) Последнее указывает на тесную взаимосвязь интенсивност! амплификации эритроидных клеток с интенсивностью внутриклеточной синтеза гемоглобина. На 7 сутки после кровопотери была выявлен« высокая степень взаимосвязи между содержанием ЭОми( 1 содержанием ретикулоцитов: 1?=+0.984 (р<0.02) в крови, что указывав на инволюцирующие ЭО, как источник ретикулоцитов, поступающи; в периферическое русло.

Известно, что у крыс эритропоэз в небольшом объеме сохраняется в селезенке, однако, при гипоксической ситуации он может быть значительно активирован (Ю. М. Захаров, 1973; В. П. Пушкарев, 1993). Исследование гемопоэза в селезенке у крыс при 1% кровопотере в литературе практически не встречается.

Кровопотеря вызывала некоторые сдвиги в гемопоэтической ткани селезенки. Они характеризовались активацией в ней эритропоэза, что выразилось в увеличении содержания базофильных и оксифильных нормобластов в ее ткани и уменьшении соотношения лейко/эритро на 3 сутки. Однако, увеличение абсолютного числа эритроидных клеток в селезенке с 0.23±0.05*108 в контроле до 0.47±0.135*108 на 3 сутки было статистически недостоверным. Возбуждение эритропоэза в селезенке сочеталось с интенсивной денуклеацией созревающих эритроидных клеток, проявлением которой явилось почти 7-кратное увеличение количества "голых" ядер. Возможно, именно интенсивной денуклеацией, утилизацией ядер можно объяснить статистически недостоверное увеличение абсолютного числа эритроидных клеток в селезенке. Уменьшение общего количества спленоцитов на 3-7 сутки, также как и абсолютного количества неэритроидных клеток в ней, селезеночного индекса на 14 сутки, может быть одним из проявлений стресс-реакции, какой является кровопотеря.

Корреляционно-регрессионный анализ, проведенный у контрольных животных, обнаружил обратную зависимость между количеством спленоцитов в органе и числом ЭО в костном мозге, что, по нашему мнению, отражало реципроктные взаимоотношения между селезенкой и костныммозгом в обеспечении эритропоэза. Напротив, на 3 сутки кровопотери между данными показателями была выявлена тесная положительная взаимосвязь: к=+0.952 (р<0.05). Учитывая, что спленоциты являются источником КСА: ИЛ-3 и КСФГМ, т. е. соединений, поддерживающих пролиферацию КОЕ-Б и БОЕэ (Ю. М. Захаров, 1991), выявленные реакции селезенки и корреляционные связи можно расценивать как компенсационные, поддерживающие данный вид эритропоэза в костном мозге при кровопотере.

Таким образом, эритропоэз, развивающийся в ЭО, его изменения на периферии в ответ на 1% кровопотерю, носил все черты, характеризующие его , как неосложненный компенсационный.

ИЗМЕНЕНИЯ КРОВИ И КРОВЕТВОРЕНИЯ В КОСТНОМ МОЗГЕ И СЕЛЕЗЕНКЕ ПРИ ОЖОГОВОЙ ТРАВМЕ • Экспериментальный ожог вызывал характерные изменения в крови, сходные с описанными ранее другими исследователями (И. И. Долгушин и соавт. , 1989; А. Г. Починский, 1989; И. Г. Попов, 1990). Важно отметить, что после ожога у животных снижение количества эритроцитов и гемоглобина оказалось близким к полученному при кровопотере, равной 1% массы тела. Так, на 7-14 сутки ожоговой травмы количество эритроцитов было на 10-12% ниже контрольного уровня, а снижение содержания гемоглобина в 1 л крови на 1 и 7-е сутки достигало 17-18%. Кроме того, после ожога у крыс обнаруживалась тенденция к снижению цветного показателя, среднего содержания гемоглобина в 1 эритроците и средней концентрации гемоглобина в 1 эритроците. Однако, несмотря на значимый дефицит эритроцитов и гемоглобина, снизивший кислородтранспортные возможности периферического отдела эритрона, реакция эритроцитарного ростка на эти проявления гемической гипоксии оказалась сниженной и даже подъем количества ретикулоцитов на 3 сутки после ожога был статистически недостоверен. Если учесть, что ожоговая травма вызывает также гистотоксическую и циркуляторную гипоксии, то указанный ответ эритроидной ткани на ожог следует признать тем более пониженным.

У обожженных крыс на 1, 7, 14 сутки наблюдался умеренный лейкоцитоз. Абсолютное число миелокариоцитов в костном мозге бедренных костей также достоверно снижалось на 1,3 и 7 сутки до 1 01.4±3.4* 1 О'/бедро, 93.6±6.7* 1 О6 и 79.4±3.5* 1 О'/бедро, соответственно, против 120±7.2*106/бедро в контроле, причем первоначально за счет неэритроидных клеток (1-3 сутки). По-видимому, появление лейкоцитоза в 1 сутки было связано с повышенным выходом депонированных белых клеток из костного мозга в кровь. Последующему лейкоцитозу (7-14 сутки) соответствовало увеличение доли белых ядросодержащих клеток в костном мозге, о чем можно было судить по нарастанию отношения лейко/эритро. Параллельно указанным изменениям лейкопоэза, на 7 и 14 сутки отмечалось уменьшение абсолютного количества эритроидных клеток в костном мозге до 18.9±2.5*104/бедро (р<0.02) и 19.0±0.9*106/бедро (р<0.01) против 30.6±3.0*10убедро в контроле. Представляется, что этому предшествовало замедление созревания эритроидных клеток на 13 сутки после ожога. Это доказывается увеличением в эти сроки

Рис. 3. Функциональные характеристики ЭО при ожоге

А - ОБЩЕЕ КОЛИЧЕСТВО ЭО, Б - ЭФПэа, ПЕШФЕШЧЕСКОЙ. £]- ЦЕНТРАЛЬНОЙ ЭЭНЫ КОСТНОП) МОЗГА В - СОДЕШНИЕ КИСЛЫХ ГАГ, Г - ОБЩАЯ АКТИВНОСТЬ ЛИЗОСОМ МФ ЭО. I - р\ ЛИЗОСОМ,

о сч

X

350|

300

250

¿00

1

1,50 1,4?

£,ЧЧ ф5

1.32т-

Я

о

г:

К. 1 2. 5 Ч

1

I

К.

I 1

* I

I

1 I £ I 3

Ч

22

20

4В

<6 •

14

1

Нл г ъ ч

8,о••

6,0" 5,04.0 :

Чз-

чд

ЧД

ЧР-;

кл г з- ч

к 1 г з ч

К - КОНТРОЛЬ, I- I СУТКИ, 2- 3 СУТКИ. 3- 7' СУТКИ, Ч- и СУТКИ * - ДОСТОВЕШОСТЬ В СРАВНЕНИИ С КОНТРОЛЕМ.

Б

содержания в парциальной эритрограмме доли полихроматофильных нормобластов, не сопровождавшимся подъемом количества оксифильных нормобластов и ретикулоцитов. На 7 сутки достоверно снижалась доля эритробластов и базофильных нормобластов, что к 14 суткам закономерно приводило к уменьшению доли оксифильных нормобластов. Доказательством того, что последнее было следствием снижения пролиферации материнских эритроидных форм, а не следствием ускорения их денуклеации, являлось отсутствие роста ретикулоцитов в периферической крови и отсутствие увеличения числа "голых" ядер эритроидных клеток в парциальной эритрограмме.

Угнетение эритропоэза при ожоге особенно отчетливо отражало уменьшение абсолютного количества ЭО в бедренных костях животных (Рис. 3). Так, дефицит ЭО на 1 сутки составил 140*103/бедро, или 38%, а на 7 и 14 сутки достиг 48-44%. Основной вклад в снижение абсолютного количества ЭО в первые сутки после ожога внесло резкое уменьшение абсолютного количества инволюцирующих ЭО со 167.6±14.9*103/бедро, в контроле, до 40.9±6.2* 103/бедро (р<0.001). Учитывая, что уменьшение количества ЭОмн> не сопровождалось, как при кровопотере, повышением ретикулоцитарного уровня крови, можно утверждать, что ожоговая травма вела к нарастанию неэффективного эритропоэза.

Резкое замедление созревания эритроидной "короны" уже через сутки после ожога показало процентное распределение ЭО по классам зрелости: содержание ЭО, и ЭОэ классов было выше контроля в 1.8-2 раза соответственно при одновременно резком (в 2.8 раза против контроля) снижении ЭО>и1 и отсутствии нарастания "выхода" ретикулоцитов в периферической крови. Интересно, что в эти же сроки уже при имеющемся дефеците гемоглобина в крови не следовало увеличения реконструкции ЭО. В последующие сроки от 7 к 14 суткам наблюдалось резкое снижение содержания всех классов ЭО, а также ЭО и ЭОиц> на бедренную кость крыс.

Уровень реконструкции в эти сроки был соответственно в 3 и 4 раза ниже, по сравнению с интактными крысами. Содержание инволюцирующих островков на 7-14 сутки хотя и возросло по сравнению с первыми, но оставалось почти на 40% ниже уровня контрольных животных.

Расчетные показатели, характеризующие состояние эритропоэза в ЭО, также отчетливо свидетельствовали о глубоком угнетении эритропоэза на 7-14 сутки после ожога (Рис. 4). Так, количество

Рис. 4. Функциональные показатели эритропоэза в ЭО при ожога

А - КОЛИЧЕСТВО КОЕэ, ВСТУПИВШИХ В ДИ»БИНШАЦЮ/ В 30. Б - ВЕЛИЧИНА ВОВЛЕЧЕНИЯ КОЕэ В ЭРИТРОЩНУ» ДИФФЕРЕНИИРОВКУ,. В - ПОКАЗАТЕЛЬ ПОВТОРНОГО ВОВЛЕЧЕНИЯ М$ 30 В ЭРИТРОПОЭЗ.

500--

400

зоо ■

гоо-

10 Й

1,60 1,40 1^0- ■ 1,00300,60-<ую

0,00+ %

в

К 1 2 3

К - КОНТРОЛЬ, 1-1 СУТКИ,. 2 - Ч СУТКИ, 3-14 СУТКИ * - ДОСТОВЕРНОСТЬ в СРАВНЕНИИ С КОНТРОЛЕМ.

КОЕэ, вступивших в дифференциацию в ЭО, оказалось более чем в 2 раза снижено на 7 сутки и примерно в 3 раза - на 14 сутки.

Одновременно в эти сроки в 3-4 раза была снижена величина вовлечения КОЕэ в эритроидную дифференцировку, что свидетельствовало о замедлении темпа дифференцировки КОЕэ в проэритробласты, взаимодействующие с ЦМФ костного мозга. Резкое угнетение повторной реконструкции эритропоэза на основе ЦМФ инволюцирующих ЭО также наблюдалось на 7-14 сутки. Возрастание показателя повторного вовлечения ЦМФ ЭО в эритропоэз через 24 часа объяснялось отмеченным выше резким уменьшением количества ЭОии1 в гемопоэтической ткани.

Проведенный корреляционно-регрессионный анализ показал, что при ожоге наблюдается высокая степень отрицательной взаимосвязи между ССЭ и абсолютным количеством ЭО 8 бедренной кости: 1?=-0.936 (р<0.05). Это указывает на нарушение у обожженных животных синхронизации амплификации и созревания эритробластов в "короне" ЭО. Данное нарушение способствовало развитию гипохромной анемии у животных с ожоговой болезнью.

Исследование эритролоэтических свойств крови обожженны> животных обнаружило резкое угнетение эритропоэтической активное^ плазмы на все сроки наблюдения: 1, 3, 7, 14 сутки. При этом плазме приобретала способность угнетать эритропоэз у интактных мышей реципиентов. Более всего она обладала способностью угнета™ эритропоэз на 7-14 сутки после ожога. Эти изменения могу расцениваться либо как следствие снижения воспроизводстве эритропоэтина почками, либо как следствие усиленной продукц^ гуморальных ингибиторов эритропоэза и , возможно, ингибиторе продукции эритропоэтина. Снижение продукции эритропоэтина > обожженных животных в почках, а также МФ-ах печени и костногс мозга, могло быть вызвано глубокими изменениями метаболизма I "интактных" органах обожженных животных (Р. И. Лифшиц, 1987) Вместе с тем, ингибиторами эритропоэза в крови обожженных крьп могли выступать накапливающиеся в ней после ожоге среднемолекулярные пептиды (Р. И. Лифшиц и соавт. , 1987-1993) обладающие угнетающим действием на эритроидные клетки предшественницы (В. И. Гудим, 1983). С другой стороны, известно что ожоговое поражение резко снижает колониестимулирующук активность крови в отношении гранулоцитарных-моноцитарных клеток предшественниц на 7-14 сутки (И. Г. Попов, 1990). Это позволяв

редполагать снижение также бурстпромоторной активности (БПА) эови после ожогов, поскольку она представлена сочетанием КСФГМ эритропоэтина (Ю. М. Захаров, 1991) и активирует пролиферацию дифференциацию БОЕэ и КОЕэ. Поэтому, отмеченное нами резкое эрможение дифференциации КОЕэ в эритроидные элементы ЭО ожет быть объяснено уменьшением количества КСФГМ и эитропоэтина в крови животных.

ИЗМЕНЕНИЯ ЦМФ ЭО ПРИ УГНЕТЕНИИ ЭРИТРОПОЭЗА Функциональные изменения ЦМФ ЭО при экспериментальном коге, приводящем к угнетению эритропоэза, имели противоположную эправленность функциональным изменениям ЦМФ ЭО после ювопотери. Так, нарастание амплификации эритробластов в ЭО, эвышение аффинитета макрофагов к КОЕэ и ускорение созревания жтроидной "короны" после кровопотери сочетались со значительным гилением активности лизосомального комплекса ЦМФЭО. Напротив, эи ожоге анализ функционального состояния МФ ЭО обнаружил гзкое снижение как общей, так и удельной активности лизосом (Рис. . На протяжении 1-7 суток после ожоговой травмы имело место 1кже увеличение рН лизосом ЦМФЭО. Лишь на 14 сутки отмечалось гкоторое снижение рН, видимо, связанное с утилизацией >врежденных при ожоге эритроцитов.

Представляется, что понижение функциональной активности МФ ЭО являлось частью общего угнетающего влияния ожоговой авмы на систему фагоцитирующих мононуклеаров, что ранее было жазано на примере МФ печени, селезенки и моноцитов крови . И. Долгушин и соавт. , 1989).

Снижение активности лизосомального аппарата ЦМФ ЭО у >ожженных крыс могло быть также обусловлено падением 1тенсивности денуклеации нормобластов, и , следовательно, ижением объема фагоцитоза вытолкнутых ядер.

Характер изменений количества ГАГ в ЦМФ ЭО при ожоговой авме, в целом, был противоположен характеру изменений их личества после кровопотери. Так, на 1 и 3 сутки их количество в ЭО не отличалось от контроля. На 7 сутки было обнаружено еличение содержания ГАГ в ЦМФ ЭО, а на 14, напротив, резкое ижение. Снижение ГАГ в ЦМФ ЭО' у обожженных крыс могло быть язано с резким снижением доли созревающих ЭОэ и ЭОимв в >*опоэтической ткани, поскольку именно с этими классами ЭО

связывают накопление ГАГ в островках (Н. В. Корнилова и соавт. , 1994). С другой стороны, увеличение содержания ГАГ в ЦМФ ЭО могло быть обусловлено подавлением секретных функций макрофагов и накоплением этих невостребованных модуляторов гемопоэза. На резко подавленные функции ЦМФ ЭО на 7 сутки ожоговой травмы указывают максимально низкое содержание ЭО в костном мозге и максимальное угнетение общей активности лизосом ЦМФ ЭО, т. е. угнетенные гемопоэтическая и фагоцитарная функции. Представляется, что нарушение обмена ГАГ, столь важных соединений, поддерживающих дифференциацию эритроидной ткани, могло затормозить эритропоэз в ЭО у крыс при ожоге.

Ранее было показано, что ЭО корковой и осевой зон костного мозга трубчатых костей крыс представлены островками разных классов зрелости (А. Г. Рассохин и соавт., 1991), а именно: корковая зона богата пролиферирующими, молодыми ЭО, а центральная, прилегающая к синусоидам, напротив, богата зрелыми ЭО. Это послужило основанием для раздельного исследования ЭФПэо корковой и осевой зон костного мозга интактных и обожженных крыс.

Из графика, представленного на Рис.3, следует, что ЭФП островков, выделенных из периферической зоны костного мозга контрольных животных и богатых пролиферирующими эритроидными клетками с большим количеством рецепторов к эритропоэтину, было выше ЭФП островков, полученных из центральной зоны.

После ожога отражением перестройки функционального состояния ЭО явилось возрастание их ЭФП. В первые сутки наиболее существенно возросла ЭФП островков, прилегающих к центральному синусу, а на 3,7 и 14 сутки, напротив, более выраженное увеличение ЭФП^ отмечалось у островков, расположенных в генеративной, корковой зоне. Не исключено, что ЭО осевой зоны, известной как зона созревания гемопоэтических клеток и более интенсивного кровотока, раньше, нежели ЭО периферической зоны, реагировали на изменения биохимического состава крови, а именно, на появление ингибиторов эритропоэза.

Последний факт заслуживает внимания, поскольку ингибирующими свойствами на эритропоэз могут облагать молекулы средней массы, повышение концентрации которых обнаружено в крови обожженных животных (Р. И. Лифшиц, 1977; Р. А. Арутюнян и соавт. , 1978). Известно, что их адсорбция на мембране эритроцитов ускоряет ЭФП последних. (С. Л. Сашенков и соавт. , 1989) можно думать, что ускорение ЭФП 0 могло быть связано с адгезией СМП

на поверхности клеток, составляющих ЭО. Следствием этой адсорбции, вероятно, оказывалось изменение функционального состояния ЦМФ ЭО и свойств эритроидной "короны".

Исследование состояния селезенки при ожоге обнаружило активацию в ней эритропоэза, сопровождающуюся увеличением абсолютного количества эритроидных клеток на всех сроках наблюдения. Увеличенное число спленоцитов в 1 мг ткани селезенки отмечалось на 1 и 7 сутки, и, вероятно, на 1 сутки было обусловлено миграцией в орган гемопоэтических клеток-предшественниц, а на 7 - пролиферирующими эритроидными элементами. Интересно, что селезеночный индекс при ожоге не претерпевал существенных изменений, что указывает на отсутствие заинтересованности селезенки в появлении ингибиторов эритропоэза при ожоговой травме. Как известно, ингибиторы эритропоэза обнаруживаются при усилении депонирующих функций данного органа.

Вспышка эритропоэза в селезенке после ожоговой травмы сопровождалась увеличением числа митозов эритроидных клеток на 3, 7 и 14 сутки, и увеличением содержания базофильных и полихроматофильных нормобластов в эти же сроки. Однако, увеличение содержания оксифильных нормобластов на фоне сниженного количества "голых" ядер, указывало на замедление созревания поздних эритроидных клеток.

Нам представляется, что возбуждение эритропоэза в селезенке после ожога носило неспецйфический характер и отражало реакцию гемопоэтической ткани селезенки на стресс. Подобная вспышка эритропоэза у крыс в селезенке обнаруживается при действии на животных самых разнообразных факторов стрессовой (физической, химической, биологической, болевой) природы. Таким образом, возбуждение эритропоэза в селезенке у крыс после ожога, может быть отнесено к неспецифическим реакциям крови на сильный раздражитель (И. В. Васильев, Ю. М. Захаров, 1992).

Таким образом, анализ изменений эритрона, его гуморальной регуляции и состояния межклеточных эритропоэтических взаимодействий в ЭО после ожога, показывает, что возникающая у животных гипохромная анемия связана с торможением эритропоэза, эбусловленным сложными нарушениями в звеньях его регуляции. В этличие от компенсационного эритропоэза после острой кровопотери, сопровождающегося усиленным воспроизводством эритропоэтина, а з дальнейшем усилением эритропоэтических функций ЦМФ ЭО, после ожога оказывается сниженным, вероятно, не только воспроизводство эритропоэтина, но угнетена способность ЦМФ ЭО

к повторной реконструкции :эрйтропоэза в ЭО. Изменение функциональных свойств ЦМФ ЭО объясняет низкое вовлечение КОЕэ в дифференцировку, торможение амплификации и созревания эритроидных клеток в "короне" ЭО.

ВЫВОДЫ

1. Характерными чертами компенсационного эритропоэза, следующего на потерю крови объемом 1% массы тела, оказываются увеличение: дифференциации КОЕэ в эритробласты в ЭО, темпа амплификации, синхронного созревания эритробластов в "короне" ЭО.

2. Для компенсационного эритропоэза в ЭО, вызванного кровопотерей, характерны изменения функциональных свойств ЦМФ ЭО, включающие: увеличение активности лизосом, уменьшение их рН, накопление кислых ГАГ, увеличение общего отрицательного электрического заряда поверхности ЭО и ЭФП^, резкое увеличение повторного вовлечения МФ ЭО(и1 в реконструкцию эритропоэза.

3. Компенсационному эритропоэзу при острой кровопотере соответствует активация эритропоэза в селезенке с резким нарастанием интенсивности денуклеации в ней нормобластов.

4. Анемия после ожога "III А-Б" степени, 15% поверхности тела носит гипохромный, гипорегенераторный характер, вызванный нарушением гуморально-клеточных механизмов регуляции эритропоэза. У обожженных животных снижены эритропоэтические и увеличены ингибирующие эритропоэз свойства плазмы. Ожоговая анемия не сопровождается увеличением интенсивности вовлечения КОЕэ в дифференциацию в проэритробласты в ЭО костного мозга. В ЭО нарушена синхронизация амплификации и созревания эритробластов в эритроидной "короне".

5. У обожженных животных имеют место нарушения функциональных свойств и метаболизма в ЦМФ ЭО: в отличие от интактных животных и животных после острой кровопотери, в их ЦМФ снижена активность лизосом, нарушен метаболизм кислых ГАГ, изменен поверхностный электрический заряд ЭО, снижено вовлечение МФ ЭО в комплементацию с КОЕэ.

6.. В селезенке обожженных животных усилен эритропоэз и увеличена клеточность, что носит неспецифический характер.

Жизненноважная роль, выполняемая в организме системой крови, определяет неослабевающий интерес экспериментаторов и клиницистов к углубленному изучению различных сторон ее функционирования. При этом, фундаментальным аспектом исследований продолжает оставаться проблема пролиферации и дифферен-цировки гемопоэтических клеток (А.Н.Фриденштейн, Е.А.Лурия, 1980; И.Л.Чертков, О.А.Гуревич, 1984; Б.В.Афанасьев, В.А.Алма-зов, 1985; Т.М.Dexter et.al., 1984; J.Paulus, M.Aster, 1986; R.Schofield et.al., 1986; J.K.Fraser et.al., 1986; S.Tsai et.al., 1987; F.Hermann, R.Mertelsmann, 1989).

Анемии, характерным признаком которых является снижение содержания эритроцитов и количества гемоглобина в периферической крови, являются не только специфической гематологической патологией, но и симптомом различных органических поражений и заболеваний, представляя собой не только яркий пример нарушения пролиферативно-дифференцировочных процессов, но и удобную модель для их экспериментального изучения. В последние годы анемии стали предметом пристального внимания специалистов в области космической и радиационной медицины, экологии и онкологии (В.П.Карпенко, 1981; К.Р.Седов, Р.Н.Бутакова, 1984; Л.П.Кишева с соавт., 1984; Г.А.Алексеев, 1988; В.П.Дударев, 1988; Б.А.Велиев, 1989; Г.Б.Берлингер, 1990; В.В.Гладыш, Н.С.Турбина, 1990; В.И.Гудим с соавт., 1991; Ю.Н.Токарев, 1991 и др). Во многом это было обусловлено тяжелыми последствиями загрязнения окружающей среды в зонах активной хозяйственной деятельности человека и экологических катастроф: Чернобыль, Уфа, Семипалатинск и др.

Оставаясь целостной системой, кроветворная ткань, циркулирующая кровь и органы кроворазрушения, чутко реагируют на изменения внутренней среды организма и формируют ответ, обеспечивающий поддержание гомеостаза. Степень возникающего в системе напряжения при адекватной реакции сохраняет жизнь и здоровье индивидуума, а при неадекватной - ведет к развитию патологии. Четкое разделение нормы и патологии в биологии и медицине достаточно затруднено, что нашло свое отражение в появлении таких понятий, как "предболезнь" и "предпатология". С этих позиций, многие авторы рассматривают анемию как предпатологическое состояние, как ранний информативный диагностический симптом, не наполняя, однако, данное представление конкретным содержанием. В то же время, разработанные в последние годы технические приемы и методы исследований дали возможность по-новому подойти к решению как фундаментальных, так и прикладных проблем гематологии. Наиболее продуктивной оказалась концепция о роли межклеточных взаимодействий и кооперативных взаимоотношений различных кроветворных линий в обеспечении функционирования ткани костного мозга. Ярким подтверждением сказанному служат эритробластические островки (ЭО) костного мозга, представляющие собой морфо-функциональную ассоциацию клеток 'моноцитарно-макрофагальной и эритроидной линий (M.Bessis

1958-1991).

Анализ соотношения гуморальных механизмов регуляции эритропоэза: условия образования эритропоэтина (Эп), его кинетика (О.И.Моисеева, 1985; А.Д.Павлов, Е.Ф.Морщакова, 1987), а также клеточных факторов: роль макрофагов (Мф) и стромы костного мозга (И.Л.Чертков, О.А.Гуревич, 1984; Е.Б.Владимирская, 1990; Т.М.Dexter, 1989;) позволили по-новому взглянуть на патогенез апластических и гемолитических анемий, истинной и вторичной полицитемии (А.В.Коробкин с соавт., 1988; А.Г.Рассохин с соавт., 1990; Ю.М.Захаров с соавт., 1990; А.В.Волков, 1991; Б.В.Медяник, 1993).

Известно, что ожоговая травма вызывает нарушение функций и изменение количественного представительства клеток периферической крови и различных ростков кроветворения. Значительный прогресс был достигнут в расшифровке нарушений грануло- и м'оноцитарных ростков кроветворения при ожогах (И.Г.Попов, 1986, 1990, А.Г.Починский, 1989; Г.К.Попов с соавт., 1989), а также функциональных свойств тромбоцитов (В.Г.Хайдукова. с соавт., 1987), вызванных ожоговой травмой.

Однако, до сих пор малорасшифрованными остаются

Диссертация на соискание степени кандидата биологических наук Страница № 6 механизмы развития анемии, сопровождающей ожоговую болезнь. Представляется, что важную роль в ее развитии играет нарушение обмена железа, укорочение продолжительности жизни эритроцитов (И.Бернат,1975), появление токсических соединений, угнетающих эритропоэз (Р.И. Лифшиц, 1986; Н.А.Федоров с соавт., 1985; И.И.Долгушин с соавт., 1989 и др.). Тем не менее, исследований кинетики эритропоэза в ЭО костного мозга, а также функциональных свойств центральных макрофагов (ЦМф) ЭО при ожоговой травме, в доступной литературе мы не встретили. Лишь в единичных работах указывается на чувствительность к действию повреждающих факторов, при ожоге, данных клеточных ассоциаций (А.Г. Рассохин с соавт.,

1991).

Хотя закономерности вовлечения КОЕэ в эритробласты в ЭО, амплификации и созревания эритроидной "короны" ЭО при компенсационном эритропоэзе установлены Ю.М.Захаровым с соавт. (1989), Л.В.Ворговой, Ю.М.Захаровым (1990), в литературе отсутствуют сведения о характере функциональных изменении ЦМф ЭО, поддерживающих компенсационный эритропоэз в этих межклеточных ассоциациях.

Поэтому, как для условий компенсационного эритропоэза, так и угнетенного эритропоэза важно было бы: раскрыть механизмы взаимодействия ЦМф с окружающей его эритроидной "короной"; выяснить зависимости между функциональным состоянием лизосом Мф и продукцией (или содержанием) в ЭО кислых ГАГ, электрофоретической подвижностью ЭО (ЭФПэо) и способностью ЦМф ЭО поддерживать эритропоэз; изучить функциональные особенности ЭО различных компартментов костного мозга.

Таким образом, расшифровка процессов, обеспечивающих компенсационный эритропоэз в ЭО, а также характера его нарушений при экспериментальных ожогах у животных, могла бы уточнить механизм анемии, сопровождающей ожоговую травму у человека.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью работы явилось выяснение характера эритропоэза в ЭО костного мозга, состояния функций их ЦМф, состояния гуморальной регуляции эритропоэза, сопровождающих экспериментальный ожог. Характер этих изменений в ЦМф ЭО и их "короне" сопоставлялся с состоянием их функций при компенсационном эритропоэзе - при постгеморрагической анемии.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Исследовать динамику показателей периферической крови, кроветворения в костном мозге и селезенке при постгеморрагической и ожоговой анемиях.

2. Сопоставить изменения периферического отдела эритрона с динамикой количественных и качественных изменений ЭО костного мозга при данных состояниях.

3. Исследовать зависимость между активностью эритропоэза в островках и функциональным состоянием ЦМф ЭО, по изменению: состояния лизосомально-пластинчатого комплекса, содержания кислых ГАГ и электрических свойств мембран клеток ЭО, при острой постгеморрагической и ожоговой анемиях.

4. Сопоставить характер сдвигов эритропоэза в ЭО при ожоговой травме с эритропоэтической активностью плазмы крови обожженных животных.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ.

Впервые исследовано значение функциональной перестройки ЦМф ЭО в реализации процессов стимуляции и ингибиции эритропоэза при острой постгеморрагической и ожоговой анемиях. Показано, что постгеморрагическая анемия сопровождается повышением функциональной активности ЦМф ЭО, а ожоговая анемия, напротив, снижением исследованных функциональных параметров ЦМф ЭО. Установлены особенности ответов гемопоэза в селезенке на указанные воздействия.

Впервые получены сведения, характеризующие прижизненное состояние лизосомального аппарата ЦМф эо, электрические свойства мембран клеток островков, содержание в них ГАГ и взаимосвязь этих показателей с активностью эритропоэза в ЭО как в норме, так и при компенсационном и угнетенном эритропоэзе.

Получены новые доказательства функциональных различий ЭО корковой и осевой зон костного мозга трубчатых костей животных.

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ И ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ РАБОТЫ.

Вскрыты ранее неизвестные закономерности реагирования эритропоэза в ЭО на возмущающее воздействие - кровопотерю. Выяснена роль нарушения межклеточных и гуморально-клеточных взаимодействий в патогенезе анемии, сопровождающей ожоговую травму.

Полученные в работе результаты экспериментального исследования обосновывают изыскание новых подходов к терапии анемических состояний через стимуляцию функциональной активности ЦМф ЭО, нарушаемой при ожогах. Отработанные в эксперименте приемы изучения функционального состояния ЦМф ЭО позволяют обосновать их применение для анализа сохранности межклеточных взаимоотношений у больных с различной гематологической патологией и в эксперименте при изучении патогенеза анемий.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.

Основные положения диссертации доложены на: Всесоюзной конференции "Лабораторные животные для медикобиологических и биотехнологических исследований" (М., 1990); Уральском съезде физиологов "Физиологические механизмы адаптации человека и животных" (Свердловск, 1990); межинститутской конференции "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях" (Челябинск, 1990); первом Международном конгрессе патофизиологов (М., 1991); * Уральской конференции патофизиологов "Системные и клеточные механизмы адаптации организма к действию повреждающих факторов"

Челябинск, 1991).

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ. Диссертация изложена на 123 страницах машинописного текста, иллюстрирована 14 таблицами, 11 графиками; состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, общего заключения, выводов, указателя литературы, включающего 160 источников отечественной и 126 зарубежной литературы.

ПОЛОЖЕНИЯ ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1. Экспериментальный ожог, "III А-Б" степени, 15% поверхности тела, характеризуется развитием ожоговой анемии, связанной со снижением функциональной активности ЦМф ЭО, нарушением межклеточных эритропоэтических взаимоотношений в ЭО, нарушением синхронизации амплификации и созревания эритро-бластов в "короне" ЭО, снижением темпа вовлечения ЦМф ЭО в реконструкцию на фоне появления в плазме крови ингибиторов эритропоэза.

2. Кровопотеря 1% массы тела характеризуется развитием постгеморрагической анемии с активацией эритроидных взаимоотношений в ЭО, сопровождается повышением функциональной активности ЦМф ЭО и выражается в синхронном увеличении дифференциации КОЕэ в проэритробласты, синхронизации нарастающей амплификации и созревания эритробластов в короне ' ЭО.

ВЫВОДЫ:

1. Характерными чертами компенсационного эритропоэза, следующего на потерю крови объемом 1% массы тела, оказываются увеличение: дифференциации КОЕэ в эритробласты в ЭО, темпа амплификации и синхронного созревания эритробластов в "короне"

ЭО.

2. Для компенсационного эритропоэза в ЭО, вызванного крово-потерей, характерны изменения функциональных свойств ЦМф ЭО, включающие: увеличение активности лизосом, уменьшение их рН, накопление кислых ГАГ, увеличение общего отрицательного электрического заряда поверхности ЭО и ЭФПэо, резкое увеличение повторного вовлечения Мф ЭОинв. в реконструкцию эритропоэза.

3. Компенсационному эритропоэзу при острой 1% кровопотере соответствует активация эритропоэза в селезенке с резким нарастанием интенсивности денуклеации в ней нормобластов.

4. Анемия после ожога "III А-Б" степени, 15% поверхности тела у крыс, носит гипохромный, гипорегенераторный характер, вызванный нарушением гуморально-клеточных механизмов регуляции эритропоэза. У обожженных животных снижены эритропоэтические и увеличены ингибирующие эритропоэз свойства плазмы. Ожоговая анемия не сопровождается увеличением интенсивности вовлечения КОЕэ в дифференциацию в проэритробласты в ЭО костного мозга. В ЭО нарушена синхронизация амплификации и созревания эритробластов в эритроидной "короне".

5. У обожженных животных имеют место нарушения функциональных свойств и метаболизма в ЦМф ЭО: в отличие от интактных животных и животных после острой кровопотери, в их ЦМф снижена активность лизосом, нарушен метаболизм кислых ГАГ, изменен поверхностный электрический заряд ЭО, снижено вовлечение Мф ЭО в комплементацию с КОЕэ.

6. В селезенке обожженных животных усилен эритропоэз и увеличена клеточность, что носит неспецифический характер.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ. ВЫВОДЫ.

Нами охарактеризованы черты компенсационного эритропоэза в ЭО, следующего на потерю крови объемом 1% от массы тела. Полученные нами данные, об ответе эритропоэза в ЭО на 1% кровопотерю, обнаруживают отчетливое различие в ответе эритрона на 2% кровопотерю, исследованную в нашей лаборатории (В.П.Пушкарев с соавт., 1991). Для нее была характерна более глубокая анемия, в которой: восстановление гемоглобина отмечалось к 10 суткам, числа ретикулоцитов вплоть до 15 суток, а увеличенное количество ЭО на бедренную кость по 10 сутки. Столь же резко при 2% кровопотере были увеличены: показатель вовлечения КОЕэ в дифференцировку - по 15 день и показатель повторного вовлечения ЦМф в эритропоэз - с 1 по 10 сутки. Признаки эритродиереза, сдвиги метаболизма в костном мозге, в популяции эритроцитов, воспроизводимых в костном мозге, были также . более глубоки (В.П.Пушкарев с соавт., 1991).

1% кровопотерю характеризуют: восстановление содержания гемоглобина в 1л крови, уже к 7 суткам; к 14 суткам - ретикулоцитов; к 7 суткам нормализуется увеличенное количество ЭО на бедренную кость. В отличие от 2% кровопотери, показатель вовлечения КОЕэ в дифференцировку был увеличен в 2 раза, после 1% кровопотери с 6 часа по 7 сутки включительно, а к 14 суткам достоверно снижался в 1,5 раза по сравнению с контролем. Показатель повторного вовлечения ЦМф в эритропоэз был достоверно выше лишь с 6 часа по 3 сутки, а начиная с 7 суток 1% кровопотери наблюдалось достоверное его снижение к 14 суткам - почти в 2 раза против контроля.

Полученные материалы позволяют, на наш взгляд, сравнивать черты компенсационного эритропоэза при 1% кровопотере с другими состояниями, сопровождающимися примерно равным ей дефицитом эритроцитов, используя модель этой кровопотери в качестве условного эталона быстрой регенерации эритроцитов. Вместе с тем, модель 1% кровопотери также подтверждает большую чуткость исследования эритропоэза с помощью его оценки в ЭО, по сравнению с традиционными подходами.

Так, анализ эритропоэза, построенный на учете его эволюции в ЭО, в сравнении с данными парциальной эритрограммы, костного мозга, коэффициентом лейко/эритро, обнаруживает большую информативность при использовании формулы ЭО, расчетных показателей, оценивающих эритропоэз в ЭО и его кинетику. Так, в отличие от традиционного подхода, анализ эритропоэза в ЭО улавливает движение начавшегося удвоения материнских форм эритроидных клеток уже после 6 часа кровопотери и характеризует движение этой волны амплификации вплоть до ЭОинв.

Дополнительную информацию об активации эритропоэза дает количественная характеристика его реконструкции на базе ЭОинв, которая регистрировалась нами с 6 часа после кровопотери. Подобных сведений о возможности оценки повторного вовлечения макрофагов в эритропоэз другими методами, в доступной литературе мы не встретили.

Расчет функциональных показателей, позволяющих установить количество КОЕэ, вовлеченных в эритроидную дифференцировку в ЭО обнаружил, что данный процесс продолжался вплоть до 7 суток. Таким образом, эритропоэз при кровопотере был активирован и на 7 сутки, что парциальная эритрограмма не отражала.

Проведенный корреляционно-регрессионный анализ взаимоотношений между формулой ЭО и цветными показателями -ЦП, ССЭ и СКЭ, обнаружил высокую степень зависимости между гемоглобинизацией эритроцитов и количеством ЭО 1 и 2 классов. Так, положительная зависимость между количеством Э01 и СКЭ отмечалась на 6 и 24 часы после кровопотери: R=0,962 (Р<0,05) и R=0,966 (Р<0,05) соответственно, на 14 сутки - между количеством Э02 и ЦП: R=0,907 (Р<0,05), а также Э02 и ССЭ: R=0,906

Р<0,05). Эти данные указывают на тесную взаимосвязь интенсивности амплификации и дифференциации эритроидных клеток с интенсивностью внутриклеточного синтеза гемоглобина.

На 7 сутки была выявлена высокая степень взаимосвязи между содержанием ЭОинв и содержанием ретикулоцитов: R=0,984

Р<0,02) в крови, что указывает на инволюцирующие ЭО, как источник ретикулоцитов, поступающих в периферическое русло.

В противоположность установленной высокой степени положительной взаимосвязи между ССЭ и абсолютным количеством ЭО при компенсационной реакции эритрона на 1% кровопотерю, у животных после ожога была обнаружена отрицательная взаимосвязь между абсолютным содержанием ЭО в бедренной кости и ССЭ на 14 сутки: R=-0,936 (Р<0,05). Это указывает на нарушение у обожженных животных синхронизации амплификации и созревания эритробластов в "короне" ЭО. Нарушение данного процесса способствовало развитию гипохромной анемии у животных с ожоговой болезнью.

В целом, анализ изменений эритрона, его гуморальной регуляции и состояния межклеточных эритропоэтических взаимоотношений в ЭО после ожога, показывает, что возникающая у животных гипохромная анемия связана с торможением эритропоэза, обусловленным сложными нарушениями в звеньях его регуляции. В отличие от компенсационного эритропоэза после острой кровопотери, сопровождающегося усиленным воспроизводством Эп, а в дальнейшем усилением эритропоэтических функций ЦМф ЭО, направленных на интенсификацию реконструкции эритропоэза в ЭО, после ожога оказывается сниженным не только воспроизводство Эп, но угнетена способность ЦМф ЭО к повторной реконструкции эритропоэза в ЭО. Вероятно, этим изменением функциональных свойств Мф ЭО, в частности, способности к комплементарному взаимодействию с КОЕэ, сочетающемуся с низкой продукцией Эп, объясняется низкое вовлечение КОЕэ в дифференцировку в "короне" ЭО. Угнетение способности Мф к воспроизводству Эп могло затормозить амплификацию и созревание эритроидных клеток в "короне" ЭО и, как следствие, приводить к воспроизводству эритроцитов с пониженной гемоглобинизацией.

Характерна перестройка метаболизма в ЦМф ЭО у обожженных крыс. В отличие от животных с компенсационным эритропоэзом, у них обнаруживаются изменения функций лизосомально-пластинчатого комплекса, обмена ГАГ, поверхностного электрического заряда.

Диссертация на соискание степени кандидата биологических наук Страница Na 93

Ранее было установлено (А.В.Волков, 1991; В.П.Пушкарев, 1993), что в присутствии даже низких доз Эп ЦМф ЭО, а также резидуальные Мф костного мозга, под влиянием секрета активированных нейрофилов, моноцитов и лимфоцитов могут повышать аффинитет в отношении эритроидных клеток-предшественниц. Таким образом, способность к увеличению аффинитета ЦМф к ранним эритроидным клеткам после ожогов оказывается угнетенной. По-видимому, и этот механизм не реализовался у обожженных животных, поскольку у них не нарастало количество ЭОрек. и Э01 в гемопоэтической ткани. С другой стороны, анализ функционального состояния Мф ЭО крыс обнаружил резкое снижение как общей, так и удельной активности их лизосом. Видимо, в связи с этим, в отличии от интактных животных и животных после кровопотери, на протяжении 1-7 суток после ожоговой травмы имело место увеличение рН лизосом ЦМф ЭО. Лишь на 14 сутки отмечалось небольшое снижение рН, которое могло быть связано с усилением внутриклеточного гемолиза эритроцитов, повреждаемых в ходе ожоговой болезни животных. Нам представляется, что понижение функциональной активности Мф ЭО есть часть общего угнетающего влияния ожоговой травмы на систему фагоцитирующих мононуклеаров. Ранее это было показано на примере Мф печени, селезенки и моноцитов крови (И.И.Долгушин с соавт.,

1989).

Снижение активности лизосомального аппарата ЦМф ЭО у обожженных крыс могло быть также обусловлено падением интенсивности денуклеации нормобластов и, следовательно, снижением объема фагоцитоза вытолкнутых ядер. Таким образом, за изменениями лизосомальной активности стоит изменение фагоцитарной активности ЦМф ЭО у обожженных животных. С другой стороны, уменьшение общей активности лизосом в ЦМф позволяет высказать и другое предположение: это явление могло отражать угнетение биосинтетической активности в Мф. Нельзя исключить, что снижение эритропоэтической функции ЦМф, т.е. воспроизводства в них Эп, могло иметь ту же природу.

Изменение содержания кислых ГАГ в ЭО у обожженных животных имело направленность, противоположную отмеченной нами

Диссертация на соискание степени кандидата биологических наук Страница № 94 ранее у крыс при компенсации эритропоэза в ЭО после 1% кровопотери. Создается впечатление, что нарушение обмена ГАГ, столь важных соединений, поддерживающих дифференциацию эритроидной ткани, могло затормозить эритропоэз в ЭО крыс при ожоге.

Снижение содержания ГАГ в ЦМф ЭО у обожженных крыс могло быть связано с резким снижением доли созревающих ЭОЗ и ЭОинв в гемопоэтической ткани, поскольку именно с этими классами ЭО связывают накопление ГАГ в островках (Н.В.Карнилова с соавт.,1994).

С другой стороны, увеличение содержания ГАГ в ЦМф ЭО на 7 сутки после ожога, могло быть обусловлено подавлением секреторных функций Мф и накоплением этих невостребованных модуляторов гемопоэза. На это предположение наталкивает обнаруженное нами наиболее резко выраженное подавление функций ЦМф ЭО на 7 сутки после ожоговой травмы, поскольку к этому сроку наблюдалось максимально низкое содержание абсолютного количества ЭО в костном мозге и максимальное угнетение общей активности лизосом ЦМф ЭО, т.е. сочетанное угнетение гемопоэтической и фагоцитарной функций ЭО.

При исследовании состояния зарядов на поверхности ЭО центральной и периферической зон костного мозга интактных животных была обнаружена более высокая ЭФПэо периферической зоны, богатой пролиферирующими эритроидными клетками. Поскольку известно, что мембраны эритробластов, входящих в состав молодых ЭО, способны связывать рецепторами наибольшее количество Эп, то и большую ЭФП можно поставить в связь с этим обстоятельством. С другой стороны, известно, что в мембране молодых эритроидных клеток - проэритробластов, начинает формироваться группа интегральных белков - гликофоринов, также влияющих на электрический заряд клетки (гликофорин А). Кроме того, известно, что под влиянием Эп ранние эритробласты увеличивают содержание свободного кальция, одновременно активируя калий-натриевые и магний-кальциевые АТФазы, что значительно влияет на электрический заряд поверхностной мембраны клеток (В.A.Miller et.al., 1988).

Рост ЭФП при ожоговой травме, отразивший изменение функционального состояния ЦМф ЭО, не представляется возможным объяснить увеличением связывания рецепторами клеток ЭО Эп, что может быть вероятным после кровопотери, когда его титр достоверно превышает контрольный уровень с 6 часа по 3 сутки включительно (М.Г.Кахетелидзе, 1964; Ю.М.Захаров, 1973; K.Akahane et. al., 1989; V.Kaladgieva, 1993), т.к. титр Эп после ожога был снижен и нарастали ингибирующие свойства плазмы крови. Последний факт заслуживает внимания, поскольку ингибирующими свойствами на эритропоэз могут обладать молекулы средней массы, повышение концентрации которых обнаружено в крови обожженных животных (Р.И.Лифшиц, 1977; Р.А.Арутюнян с соавт., 1978). Известно, что их адсорбция на мембране эритроцитов ускоряет ЭФП последних (Р.И.Лифшиц с соавт., 1988; С.Л.Сашенков с соавт., 1989). Можно думать, что ускорение ЭФПэо может быть связано с адгезией СМП на поверхности клеток, составляющих ЭО. Следствием этой адсорбции, весьма вероятно, могло оказаться изменение функционального состояния ЦМф ЭО и свойств эритроидной "короны". Вместе с тем, следует отметить, что несмотря на ускоренное ЭФП у обожженных животных, вцелом они сохранили присущую интактным животным большую ЭФП, островков периферической зоны, по сравнению с островками центральной зоны.

Связано ли это обстоятельство с больщей афинностью мембраны молодых эритробластов к СМП, чем зрелых нормобластов? Этот вопрос нуждается в специальном изучении.

Таким образом, нарушение метаболизма и функциональных свойств ЦМф костного мозга у обожженных животных могло стать одним из звеньев нарушения функций эритрона, т.к. ЦМф ЭО могли уменьшить способность к созданию благоприятной "экологической ниши" для созревания эритробластов (M.Bessis et.al., 1978).

Весьма характерно отличие гемопоэза в селезенке, возникающего в ответ на 1% кровопотерю и на ожоговую травму. В первом случае возбуждение эритропоэза в селезенке характеризуется увеличением эритроидной массы с весьма интенсивными признаками денуклеации эритроидных клеток и превращением их в ретикулоциты и в своих чертах укладывается в признаки компенсационного эритропоэза.

Вспышка же эритропоэза в селезенке, возникающая после термической травмы у животных и характеризующаяся резким увеличением эритробластов в ее ткани, одновременно демонстрирует отчетливое замедление созревания эритроидных клеток, снижающее компенсационные возможности селезеночного эритропоэза при ожоге. На замедленную денуклеацию нормобластов в селезенке и, следовательно, количественно сниженное их превращение в эритроциты, указывает много меньшее, чем в физиологических условиях, содержание "голых" ядер в ткани селезенки. Отсутствие нарастания доли оксифильных нормобластов при увеличении порции полихроматофильных можно отнести не к ускоренному созреванию оксифильных нормобластов в эритроциты, а к замедленному созреванию предшествующей им стадии развития эритроидных клеток.

Нам представляется, что возбуждение эритропоэза в селезенке после ожога носило неспецифический характер и отражало реакцию гемопоэтической ткани селезенки на стресс. Подобная вспышка эритропоэза у крыс в селезенке обнаруживается при действии на животных самых разнообразных факторов стрессовой (физической, химической, биологической, болевой) природы. Таким образом, возбуждение эритропоэза в селезенке у крыс после ожога, может быть отнесено к неспецифическим реакциям крови на сильный раздражитель (Н.В.Васильев, Ю.М.Захаров, 1992). Реализовать же возросший пул эритроидных клеток в селезенке для компенсации дефицита эритроцитов в периферической крови, не позволяют, вероятно, как сниженное воспроизводство Эп в организме, так и ингибирующие эритропоэз свойства плазмы крови.