Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Влияние новых 1,4-дигидропиридинов на эпилептическую активность

а п тучг»/чт<ггг.-гу * а дтглтггт/а л п? тгтлп /иг» 1/Т<ГЛГ ил\л/

ИАУЧНС- КССЛЕЦОЕАТ ЕЛЬСККЯ ИНСТИТУТ ОЕ2Ш35 ПАТОЛОГИЙ И ПАТОФИЗИОЛОГИИ

Ка правах рукописи

ПАНКОВ Олег Юрьевич

ВЛИЯНИЕ НОВЫХ 1,4-Д}(ГНДУОПИРНДИ1ЮВ НА ЗПНИЕПТКЧЕСЮт АКТИВНОСТЬ

14. 00.16 - патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата'биологических наук

ЫОСКЕА - 1993

X) , /

^ ) / г

' ( -У.. г/ Ч

Работа выполнена в лаборатории обвей патолог-як нервной системы Научно-исследовательского института общей патологии и патофизиологии Российской АМН.

Научные руководители: доктор медицинских наук,

профессор, академик Российской АМН Г. И. фьнаиавскнй

кандидат биологических наук 1111 Карпова

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук НЕ. РьЕетнхя

доктор биологических наук, профессор С. А. Чепуриов

Ведунье учреддение: Российский государственный медицинский Университет

Защита диссертации состоится 1ЭЭ4 года

в часов на заседании Специалкаированного совета Д. 001- 03.01 при Научнотисследовательском институте общей патологии и патофизиологии Российской АМН (125315, Ыосква, Балтийская ул., 3)

С диссертацией южно ознакомиться в библиотеке Института Автореферат разослан " /" ^¿'ё/ХИсХЛ 199^года

Ученый секретарь Специализированного совета кандидат медицинских наук

Л. Я Скуратовская

ОБЩАЯ 7АРАКГЕРИСТККА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Эпилепсия представляет сооой одно из наиболее распространении заболеваний центральной нервной системы. По докладу экспертов исследовательской группы ВО0 (Яенева, 1980) ее распространенность в разных странах колеблется от 6-8 до 20 случаев на 1000 населения. Существующие методы лечения эпилепсии оказывается малоэффективными по крайней мере у 1/4 сольных этим заболеванием (Delçado-Escueta et al.. 1986). Кроме того, существует категория больных, резистентных к фармакотерапии (Schmtdt, Morselli, 1986; Карлов. 1900). Представленные данные свидетельствуют, с одной стороны, о сложности коррекции эпилептической активности и отсутсвии эффективных методов • лечения, с другой, - о недостаточно полном поникании патогенеза эпилепсии и учитываю« при проведении противосудорохной терапии .фундаментальных процессов, лежала« в основе этого заболевания. Последнее в значительной степени связано с тем, что механизмы развития и подавления ЭпА пока еие не ясны.

Эпилептизадия нейронов и генерализация ЗпА есузгстиляется сложным комплексом экстраклеточных, мембранных и внутриклеточных механизмов, среди которых важная роль принадлежит ионам Са" (сы. обзоры Не¡пеггвш. Натоп. 1986; Vitte, 1987; Глебов. Карпова, 1990). При развитии ЭпА происходит нарушение гомеостаза CaV что является ключевым звеном в инициации и формировании ЗпА (Wadman et al.. 1985; Vttte et al.. 1936; Heinemann et al.. 1990; Ktody et al.. 1990). Вход Ca в нейрон осуществляется, в основном, через потенциал-зависимые .Са-каналы (Hainenann et al.. 1986; Campbell et al.. 1988; Tslen et al.. 1988; Zernin?, 1991), среди которых, благодаря своим физико-химическим 'свойствам, особую роль играет 1.4-дигадропиридин-чувствительные Са-каналы (Tslen et al.. 1988; Sher et al.. 1991). В этих условиях защитное влияние могут оказывать ингибиторы внутриклеточного поступления ионов Са. Поэтому в последнее время для купирования ЗпА стали применять различные! блокаторы потенциал-зависимых Са- каналов, Вместе с тем, к началу проведения настоящего исследования данные о влиянии блокаторов этих каналов на ЭпА были немногочисленны и противоречивы. Особенности действия блокаторов Са-каналов и купирования ЭпА остаются неясными и требуют дальнейшего изучения. Ш выяснение имеет значение для решения вопроса об использовании данных препаратов для лечения эпилепсии, поскольку в настоящее

время отсутствуют лекарственные средства, аффективно действующие на кальциевое звено эпилептогенеза. Указанные обстоятельства явились предпосылкой для проведения исследования по изучению роли Са в патогенезе экспериментальной эпилепсии и коррекции ЭпА.

Целью настоящего' исследования явилось изучение роли 1,4-ДТП-чувствительных Са-каналов в развитии и подавлении острой ЭпА и длительном процессе хронической элилептизации мозга. С этой целью в исследовании использовали препараты из класса 1,4-днгидропиридинов (1,4-ДГШв), блокирующие и не блокирующие потенциал-чувствигельнные Са-каналы, как широко используемые в клинике, так и вновь синтезированные.

В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:

1. Изучить антизпилепгическое действие производных 1,4-ДТП на основных моделях ЭпА, вызванной эпилептогенами с различным механизмом судорожного действия.

2. Провести сравнительный анализ эффективности антиэпилептического действия исследуемых 1,4-ДГПов и противосудорожного препарата - вальпроата натрия на разных моделях ЭпА.

а Определить антюконвульсангный профиль ^производных 1,4-ДТП. .

4- Исследовать особенности, формирования состояния повышенной судорожной готовности (ПСГ) мозга у животных с различной чувствительностью к коразолу. • •

5. Изунить влияние некоторых антагонистов Са4'нз формирование состояния ПСГ мозга у крыс к на реализацию самой судорохной реакции.

Новизна исследований. Изучение антнзпилепг.ического действия препаратов на одних и тех же моделях ЭпА и в одинаковых условиях опыта позволило впервые провести сравнительный анализ антиэпилептической эффективности 1,4-ДГПов и классических лротивосудо-рожных препаратов.

В работе впервые на основных моделях ЭпА в различных условиях введения изучены антиэпилептические свойства новых 1,4-ДГПов.

Впервые показано, что антиконвульсантный профиль 1,4-ДГПов-блокирующих и не блокирующих потенциал-зависимые Са-каналы, совпадает. '

разработана новая методика предварительного отбора экспериментальных животных по их чувствительности к действию эпилеп-

тогена.

Впервые выявлены особенности формирования состояния ГОГ мозга у чувствительных и нечувствительных к'коразолу животных.

Показано, что состояние ПСГ, сформированное в результате коразолового киндлкнга, сохраняется в течение длительных сроков наблюдения (11 месяцев).

Теоретическая и практическая значимость результатов. Проведенные исследования показали, что новые производные 1,4-ДТП обладают выраженными антиэпилёптическими свойствами и способны подавлять некоторые формы ЗпА.

Изучение антиконвульсантного профиля нового производного 1,4-ДТП - ИОС-1.1212, не являющегося блокатором потенциал-зависимых Са-каналов (Ииэа е1 а1., 1992), показало, что он, как и другие 1,4-ДГП, блокаторы Са-каналов, не эффективен против судорог, вызванных нарушением глицинергического торможения. Полученные данные свидетельствуют об эффективности 1,4-ДГШв только против определенных типов судорог и необходимости при проведении протнвосудорожной терапии учитывать как специфику действия препаратов, так и базисные патогенетические механизмы возникновения каждой формы экспериментальной и клинической эпилепсии.

Показано, что исследованные препараты задерживают развитие состояния ПСГ и не оказывают влияния на судороги у полностью гашдлинизироаанных животных. Это заставляет думать, что механизмы хронического эпилептогенеза (в данном случае в виде кикд-линг-зависимой коразоловой ПСГ) и судорожной реакции неоднозначны.

Разработана методика предварительного отбора животных по их чувствительности к действию эпилептогена, которая позволяет уменьшить разброс экспериментальных данных, связанный с индивидуальными различиями между животными при развитии состояния ЕПГ мозга, что, в свою очередь, делает более точной оценку антизли-лептической эффективности изучаемых препаратов при использовании меньшего числа лабораторных аявотных.

Выявленные особенности формирования состояния ПСГ мозга у животных с различной чувствительностью к эпидептогенному воздействию и разная эффективность применяемы»: противосудоролных препаратов на разя. ¡кых сроках эпилеяткзации мозга требуют учета этого фактора при проведении терапии у больных эпилепсией.

Полученные данные свидетельствуют о целесообразности вклю-

тения Слокагоров потенциал-зависимых Са-каналов в противосудо-рожную терапии. Использованный в работе ИОС-1.1212 не только оказывает ингкиирувщге влияние ка. ЭпА, но и способствует нормализации мозгового кровообращения. В свази с этим, представляется перспективный дальнейшее изыскание препаратов данного и других классов, на только обладавших антиэпилептической активностью, но и положительно влияшях на гемодинамику и метаболизм шага, которые изменяется при судорожных процессах.

Изложения, выносимые на аадкту.

1. 1,4-ДГП - блокаторы потенциал-чувствительных Са-сааалов, и ИСС-1.1212, ве обладающий этим свойством, оказывает противосу-дорожное действие на моделях фокальной и острой генеразиаованной ЭпА.

2. Эффективное» действия исследуемых новых 1,4-ДГПов превосходит либо сравнима с силой действия классического противоэ-пилептического препарата - вальпроаха натрия.

3. Антиэпилептические свойства 1,4-ДГПов не связаны с юс гипотензивным действием.

4. Развитие состояния ВСГ мозга зависит от индивидуальной чувствительности животного к эпилептогену.

5. Ело катары потенциал-чувствительных Са-каналов и ИОС-1.1212 задерживает развитие состояния ПСГ шзга и снижают тяжесть судорог при киндлииге, во не эффективны в снижении тяжести судорог у полностью киндлингизироваиных животных.

Апробация работ Материалы диссертации доложены на конференции молодых ученых НИИ общей патологии и патологической ф!ВКО-логии и • НИИ фармакологии АМН СССР (Шсква, 1388), на Советско-британском симпозиуме по неврологии (Ленинград, 1988), на IV Всесоюзном съезде патофизиологов (Кишинев, 1989), на 1 Мэжду-народном конгрессе по патофизиологии (Москва, 1991), на конференции, посвященной 70-лзтшз со дня рождения академика Г. Е Крына-новского (Москва, 1992).

Структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов экспериментов и их обсуждения и выводов. Работа изложена на 144 страницах машинописного текста. Диссертация иллюстрирована 29 рисунками и 14 таблицами. Библиография содержи? 225 источников, из них 211 иностранных.

- 5 -

МАТЕРИАЛЫ И ЖТОДЫ 1ССДЕДОБАННЯ

Исследования проведены в условиях острых, полухронкчэсках и хронических экспериментов на 754 крысах ешщах лшши Вястар массой 200-300 г.

В работе использовали елзду«ада препараты: ряодошЕ ("ЗЪри-дон", ИОС АН Затаю), ЙОС-1.1212 (2,6-дшетил-3,5-Сис-(2'-про-пскеиэтоксисарбопид) -4-( 2" -дифтормЕтоксифэяия) -1,4-дагцдропири-eiaí) (синтезировал в КОС АН Латвии), нифздипкн ("Signa", США), PN 200-110 (изопропид-1- (2,1,З-бекаоксидиаэол-4-ил) -1,4-дигид-ро-5-метоксикарбокил-2,6- дгмэтил-З-пиридннкарбожнлат) ("Sandez", ¿Езе&эрия), вагьпроат натрия ("Sanofi'\ ©раяакя) и воралг-

ЬИЛ (СИЯОПТИН, "CpiíGIí", ФИНЛЯНДИЯ).

Все препараты всогкди внутркбргшашс.

Растгоры 1.4-ДГПов готовили непосредственно перэд ввэдениэк в темной комнате при красном ссвеЕзэпта.

Антиэлилептичеекиз сзойства препаратов изучали sa vpex союзных моделях ЗлА: очаговой ЗлА, острах геЕераваговгакш: судорогах и хронической иапздтг»»г»й ЭЕягапгкггда: -гичесю» пшзатгв (Fisner, 1S89; Vate, ICES).

Дея создания очагов зпкддгпчггесксД атгизлссг.ч исЕсльвозап; [юнвудьегягы с различными к^каи-кз^/п; судорозасго дейстскг:

а) катркэзую соль йэпзитеа'.шнлшна (трусагцуо ГАНЕ-зрп:-чеекие торыззныз механизмы (Davidcff, 1972; Иэуег, Рг'.г.а, 1573: Lhngledine, Gisrstad, 1979; Chov, (.viche rs, 1985; SctwartZKroui, Prmce, 1330); квнаектрацая кспользуеиах растворов 20 ООО КЕ/ыл ¿uní 22 ООО sS/uл пря аппликация на тяердуя иоэгевую оболочку:

б) сгрихнкя (селективных атгсгоггист рецепторов глшстяа, расположенных на постсинаптической мзнбраяе, взаимодействуя с которыми, он блокирует хлоряуа проводимость, что приводит к гипервоз-булговсти нейронов (Aprison, '¿tensan» 1955; Esplín, Zaülocka-Esplm, 1559; Curtís at al., 1371; Curtís, Johnstcn, 1S74; Hcrnsanr. эг ai. , 1973); концентрация растворов 0,5.1 t! í,5Z.

Моделирования очаговой ЭпА сстпэствляли. апплкщтруя растворы конзульсантоа на сенсоеттеряуа область керы боавях полупатай. ао методике, описанной Нзрзовой с соавторами (1937).

ЗКоГ. рзгистрярозали яа электроэндаейалогрзф? EEG-SS Msdiccr, Еэнгри:-' у нензркотпзированкых свободно передавав-кпхея лапотках.

Зссперяшнтадьнш данные обрабатывай на вычислительно» isott-

- б -

шгексе Ы-Ы ("Olivetti", йгалхя).

Пэргд обработкой заяиал ЗЭГ разбивали на 10-к минутные интервала. Определяли лзтонтиьй период появления первого интерик-тзлькагс разряда С ИКР); латентный период появления первого ик-тального разряда (ÍÍP); средина частоту генерирования и амплитуду ИИ? в гллдсм 10 минутном интервале; средаш частоту генерирования ИР з Kzraoи 10 ижутноа интервале; срадккп длительность ИР; количество HP sa вреия судаствовандя очага ЗпА; продолжительность существования очага ЗпА. (время от мзизнта аппликации эпи-лепгсгзна «о полного исчезновения НИР).

1,4-ДТП и вадалроат яатрня вводила на'¿вне устойчивой ЗпА в пеншдаллкв-индуцированном очаге через 25-30 шн после аппликации зпиластагена. a rasca за 25-30 мин перед аппликацией пеницидли-ка.

В специальной серая опьгтсв PN 200-110 вводили в дозе 1 и 10 ндалъ в 2 шел 502 раствора Д2£Х> в латеральный желудочек ккэзга по координата«: А?=С,8; L=l,4; Н-4, согласно атласа (Paxmos, Watson, 1SS6). Етьехтт производили с дотацию стальной канши концентрической кокйигурации (внешний диаметр 0,82 мм), за 20 уик до ашшшацет пенициллина. Контрольным гагваткш вводили 50% раствор ДИ20 в тон ¡se объеме. Локализацию кончика канши контролировали после каждого эксперимента.

В стрихнин-индуцированном очаге КОС-1.1212 вводили предварительно или на фоке развиваадэйся ЭпА.

Учитывая гипотензивное действие исследуемых препаратов из группы 1,4-ДПйв, в специальной серии экспериментов изучали взаимосвязь иэвду изменением системного давления, вызываемого рио-дипкноа, и его ангязанлепгическим действием. С этой целью запись ЗКоГ осуществляли с одноврешнной регистрацией давления на физиографе DÍ/ÍP-4B (Narco Bío-systens, СЕД) при покоив каудальнсго плетивюграфа. Ден этого ¡¡квотных помешал:! в плексигласовый домик, ограничивггггй их двияэния; и регистрировали исхсдпкй уро-вепь давления.

Генерализованную ЭпА создавал;.: внутрибриганныи введением корааола в дозах 60 - 75 i я*/кг. ВзЭлвдаеше эффекты-регистрировали визуально в течение 60 ш.

Определяли латентные периоды первых судорожных проявлений, клонических и тонических (падение животного на бок) судорог, длительность этих судорог, тяжесть судорояной реакции, продсши-

тельность гязии и летальность.

Тяжесть судорожной реакции оценивал:! в баллах: 1-¡тонические судороги; 2-повторные тонические судороги; 3-тонические судороги с паленном животного на Сок: 4-повторные судороги и/или гибель лестного.

1.4-ДТП вводили за 30 мин, а вальпроат натрия - ва 10 ¡¿ия до инъекции коразола

Киндлинг осудествляли ежедневным внутркбрюгиннкм введением ответным коразола в дозе 30 1гг/кг в одних и тех еэ условиях опыта в течение 28 дней. После каждой инъекции коразола ливоткых помещали в плексигласовую камеру и наблюдали в течение 60 минут. ЕявднеЕио оценивали тяявсть судорозгаой реакция на введение ¡юра-зола и выражали ее в баллах: 1 - вздрагивание (кивание) головы; 2 - редкие (отдельные) ¡тонические судороги всего тела; а - серия клонических судорог всего тела или клонус передних конечностей; 4 - тонические судороги с подъемом на задние конечности (поза "кенгуру"); 5 - тогогаеекке судороги е падением яквотг.сго на оок; б - повторные судороги и/или гкбель ответного.

Проведено четыре серш опытов. В 1-ой серял огштоэ пспсд-зовзли рандомизированные группы животных без предварительной ьь-Оорки в отношении их чувствите ль кости к коразолу. Опытныу пшот-ным этой сер:«! вводили ряоднпин, ЗЮС-1.1212 и верапанил. Препараты вводили ва 15 !С-:п до гаждой инъекции коразола.

Результаты исследования на рандомизированной группе жвот-ных выявила значительные различия в индивидуальной чувствительности животных к коразолу, что затруднило оценку развития состояния ШГ мозга при киндлинге в обпей популяция экспериментальных животных при выведении средних ас!сазателей и в связи с этим оценку эффективности применяемых аятиэпилептическня средств. Поэтому, был разработан метод предварительной оцекки ятотиых по их чувствительное?!! к внутрибрвшннсыу введении коразола в минимально действующей дезе 40 мг/кг. При введен™ этой дозы ¡щразол вызывал судороаиую реакцию у 1-3 крыс ив каждых 10-и тестируемых кивотных. Животные. дававиие судорожную реакцию на указанную дозу были определены условно гаи: относительно чувствительные к коразолу. Животные, которые не давали судорсяаой реакции на эту дозу были определены условно как малочувствительные к гаразелу, Кинддинг начинали через 1 неделю после тестирования путем ежедневного введения коразола в субконвульсквной дозе 30 мг/кг.

Ed П серий опытов было проведено изучение особенностей развита? состояния ПЗГ мозга у относительно чувствительных и малочувствительных к коразолу ühbqtehk. С этой целью ежедневно определяли средаоэ тяазсть судороаной реакции в группах, латентно период наступления первых судорогам: проявлений! и количества га-ьатше в группах, у которые возникла судорожная реакция.

3 III серии опытов изучали эффзкты антагонистов Ca на относительно чувствительных i: коразолу штатных. Эти« крысам юра-зол вводили в той жз суйканвульсивкоа дозе 30 шУкг в течение 45 лкен. опыгньи яшотеш ладной серии вводили нифедштин. ИСС-1.1212 к Еерапашгх. Ккфедипин и ИОС-1.1212 вводили за 30 шн до ка.5дой икъйгасж коразола, а верапамил - за 15 шн.

Контрольна,! жгвэтелм I и III серий в аналогичных условиях опыта еводили в том кг объеме (ОД ш) растворители: физиологический раствор и 1001 51С0.

Б IV сепии опытов определял« влияние нифедншна. риодипика, ИОС-1.1212 и веравашла на судороги у sibotklk после окончания книдлинга, который в течение 45 дней вводили коразол в дозе 30 мг/кг. Ees препараты вводили за 30 um до инъекции коразола

Дла вкяскения продоляжгедыюста сохранения состояния ПОР тага посла окончания гашдушнга (с 45-го дня) животным контрольной группы, получавЕКУ физиологический ргстаор, и гзшэтнш, получав нш верапаАзш, пергадачеекк вводили тестирующей дозу гора-зола (30 ur/itr).

Обработку полученных данных осуществляли с применением t-критерия Стьодента к точного метода Фшера.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОВЗУШЕКИЕ 1. AHTISIEíEUr КЧЕСКЙЕ ЗМЕКШ ПРЕПАРАТОВ ИЛ ЮЩИ «ЖАЛЫЮЯ ЭПИЛЕПТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ Внюшие , препаратов на пенищцшш-кадуцированную эпилептическую активность. Аппликация пенициллина на сенсомоторную область коры приводила к появлению фокальной ЗяА: через 2-7 шга возникали отдельнш ИЯР. амплитуда которых постепенно увеличивалась, через 6-15 мин появлялись KP, через 25-30 мин- наступала стадия выраженной судорогой активности, которая характеризовалась регулярным появлением ИР и продолжалась 30-40 мкн, после чего происходило уменьаение частоты генерирования ИР, а таге«® частоты и амплитуды НИР. Средняя продолжительность существования

_ л _ з

очагов а момента алплхкации пенициллина до полного исчезновения ЭпА составляла от 110 до 180 минут. За это время обычно регистрировали 28-50 ИР.

Введение растворителей - физиологического раствора и Д!Я0 -животным контрольных групп предварительно или на фоне устойчивой ЗпА в очаге не оказывало влияния на характер и динамику развития ЗпА.

Введение нвфе&тяяа на фоне устойчивой генерации ИР в очаге (25-30 мин после аппликации пенициллина) в дозе 1, 2 и 5 иг/кг сказалось не эффективным. Антиэпилептический эффект препарата был выявлен в дове 10 иг/кг у 701 гявоткых. Через 20 минут после введения препарата он выражался в уменьвении на 31Х частоты генерирования КИР (р<0,05), снияэнии на 71% частоты генерирования И? (р<0,001) и на 49% - амплитуды ИКР (р<0,02). У тавотных контрольной группы через 30 мин после введения ДЖО частота генерирования ИКР практически не изменялась, а частота генерирования ИР и амплитуда ИИР хотя и снижались, одна}», это снимание яе было достоверным. Бремя существования очгга ЗпА сократилась на 12?. по сравнении с даннш показаталем в группе контрольных яжвотшп в этой серии (р<0,05). Зффегсг нифедктка в дозе 30 кг/кг харз:?ге-риэовался только более значительным уменьшением частоты генерирования ИР (на 922, р<0,02).

Введение рт^т.тт в дозе 1 мг/кг на стадии выраженной судорожной активности в 1002 случаев вызвало подавление ЗлА в очага, которое выражалось в снижении амплитуды и частоты появления ВИР (оба показателя - на 4ДХ; р<0,05), а такте частоты появления ИР Г на 80"; р<0.05). Обсее число 51? за все время существования очагов ЭпА у газетных данной группы уменьшаюсь на 521 (р<0,05), а время сушстаозанкя очага - на 25Х (р<0,С5).

Увеличение дозы риодипина до 2 мг/кг таюяэ вызвало снижение ЭпА в очаге в &7% случаев, причем подавление ИР было более сильным (на 351; р<0.05), чем при дсэе 1 иг/кг.

Дальнейшее увеличение дозы препарата до 5 уст/кг не сопровождалось более сильным подавлением ЗпА, чем это было отмечено при ранее примененных доза:,'. Следует отметить, что у .тавотных всех групп наиболее вырзданньй ангиэпилептичесгай эффект отмечался через 20-30 яш после введения риодипяна.

Предварительное введение риодипина в дозе 2 ыг/кг узелкчн- ■ вало на ЗвХ латентный пер:50д возникновения КР в очаге (р<0,01).

укаяьсзгз sa CSS обзге число ИР Cea изменения иг длительности (F<0,01), сокращало na 21 г зргмя существования очага (р<0,01) я ей злили на льгаягнай пгр;:од появления первь" НИР и частоту их генерации в тачание всего врамони суязствования очага

Б&г/трибргашнсе введение Р.'У 200-ПО в дозе 2 мг/кг на фоне роззавдиХся ЗпА с устойчивой генерацией ИР а очаге вызывало подняла Has SяА у абссдаяЕОго болыошстаа (у б из 7) животных. Этот зффзст у 3 газетке: нгйдздался через 20 мин после введения препарата, у 2 - через 10 шя, у одной крысы - сразу после введения препарата. Общзз чгсло ИР у животных данной группы га все время существования очага Йило на ЗЗХ ыеньта (p<0,G5), чем у животных контрольной группы. У 3-х крыс уменьшение числа ИР сопровождалось увалкчэяибы числа НИР, аь«плитуда которых Зыла более низкой. Цялолзительность существования очага ЭпА у подопытных яивотньк сокращалась (на E5J; р<0,05), частота генерирования и амплитуда JJ3P в среднем по всей группе • кэ избегалась.

Предварительное введение препарата в дозе 5 мг/кг за 25 кинут до аппликации пенициллина полностью предотвра!щло развитие ЗпА у 2 из 10 яйвстных (отсутствовали НР и ИИР). Выесте с тем, у ответных, у которьк ЗпА возникла, препарат выаигал достоверное увеличение латентного периода поязлеш^ первых ИИР (на 37Z; р<0,05). Вследствие этого частота генерирования и амплитуда ИИР яирзш 15-20 íoih после аппликации пенициллина у животных данной группы бшаг ьйяьлэ, чей у крьс контрольной группы, в дальнейшей эти показатели у ииаотиых обеих групп достоверно не отличались. ИР не возникли у 2 животных. У 6 крис была отмечена тенденция к увеличению латентного периода появления первых ИР. Общее число ИР у животных, получавших препарат, по сравнению с контрольный! крысами бьао достоверно менызе (на 402; р<0,05). У 4 из 6 крыс паттерн ИР отличался меньшей частотой генерирования разрядов в пачке: от 2-3 в 1 с у контрольных животных до 1 в секунду у подопытных кивотных. Дззпарат достоверно сокраяял время существования очага ЭпА до 80 шк (123 мнк у контрольных жаот-khz-, р<0,02). Отмеченное здизяга препарата на паттерн ИР сохранялось и при уменьшении дозы до 1 мг/кг. Предварительное введение ДШО яэ оказывало воздействия на характер ЗпА.

Предварительное внутрияэлудочковое введение РН 2CG-110 в доге 1 нМоль ке оказывало влияния на развитие и характер ЭпА. Препарат в доге 10 н.\£ль вызывал достоверное увеличение латент-

пего периода появления первых КНР (ка GOt; р<0,031), доггеагрш уменьшал число ИР (на 67Х; р<0,05) я сокраарл время суаргтзова-ния очага (на 242; р<0,001). Введение препарата в этой дот;о вызывало тага® значительное уепьшекие амплитуды КИР. Частота генерировал кя ИКР у опытных животных была не'л.ллъкп '.т.чьпа, чам у контрольных, но достоверными зтя различия били толы to ira 10, 20, 50 и 100 минутах. Предварительное внутрюэлудочковое введение 2 мкл 50Х-го раствора ДИОО не оказывало влияния на хараэтзр ЭпА.

Введение ЯОС 1.1212 в дозе 2 иг/кг на фоне устойчивой генерации ИР в ¡л из ало уменьшение па 77Х частоты генерирования К? через 20 мин после введения (р<0,01); частота генерирования и ai.Tr литуда ИКР, з таклз продолжительность существования очагов не изменялись. Увеличение дозы до 5 иг/кг ке вызывало усиления антиэпилептичесного действия . Дальнейшее увеличение ддаы до 10 >£г/кт привело не только к енгажнет частоты генерирования m 40% (р<0,01), но и к уменьшил» частоты к ашхятуя; ('"< 4QZ я sa 34Z, соответственно (реп,02); грбдогеггеги.тет«, c;,-ií..-v Гаагой очагов ЭлА была в 2 раза меньпэ, чем у япютшлс poKrpsxuicft группы (р<0,02).

У некоторых япзотпых аашшяцка Ii раствора прк:!л~.л.!ггяа приводила к псавленио Зп&, которая характеризовалась л:тсГ.чквэЛ генерацией ИИР без возникновения ИР. Средняя прогол.\7гг9л;-яэсть существования очагов ЭпА составляла 213 кзтаут.

Введение препарата в дозе 2 и 10 irr/r-r на фокг устойчпзой генерации НИР в очаге (20-30 глж после адшккацйи пентшклдаза) ко вьгзьзало изменений ЭпА п на со;:радз-го зреиа сугастгованга очага.

Предварительное, за 25-23 шел до создания очагов ЭпА, аке-дснио И0С-1.1212 з доге 10 it/кг оказывало антгапкяептгсиеейоэ в виде спигания частоты генерирования ИИР ка поздних стадиях существования очага (ка 622; р<0,05) и в угкдаьзенкл ка 12% продолжительности его существования (р<0,001). Зое другие характеристики очага ЭпА бшм по своим параметрам близ::« к значгтзш г-группе ¡гаитрольких жкзотпых.

Введение взлхрог.та ттряв- в доге 100 кг/кг через 25-30 ьч:п после аппликации пенициллина на tene устойчивой генерации KP з очаге не вызывало подавления ЭпА. Аэтизпклептичзский эффект препарата бш выявлен в доге 200 мг/кг и вкргзался в ушньпэяии па с5%. амплитуды S3ÍP (р<0,01) и практически полном подавлегжи KP

(p<0,00i). Остальные показатели не отличались ст соответствующее показателей з группе контрольных животных.

Сравнительная характеристика ангиэпилептических эффектов 1 .4-дигидропиридинов и вальпроата натрия на модели фокальной эпилептической активности. Эффективность воздействия на отдельные характеристики отага неодинакова у разных препаратов, их иэжяс расположить в следующем ряду:

а) по эффективности подавления частоты генерирования ИКР -риодипин > ИОС-2.1212 > нифедипин > вальпроат натрия > PN 200-110;

ö) ло эффективности снижения амплитуды ИИР - вальпроат натрия > ркодютин - нифедипин > ИОС-1.1212 > PN 200-110;

в) по эффективности подавления частоты генерирования ИР -вальпроат натрия > PN 200-110 > риодипин > нифедипин >

ИОС-1.1212;

г) по степени сокращения продолжительности существования очага ЭпА - ИОС-1.1212 > нифедипив > PN 200-110 - риодипин > вальпроат натрия.

Таким оСразом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что 6локаторы Ca-каналов из группы 1,4-ДГПов нифедипин, риодипин, PN 200-110 оказывают противсэпилептическое действие на модели пенишшшя-индунировакной зла. Цютивосудо-рожяое действие проявляет и ИОС-1.1212, который, в отличие от других изучаемых 1,4-ДГПов. не блокирует потенциал-чувствительные Са-каналы. Максимальный актжншлептический эффект 1,4-ДТП проявляли через 20-30 шн после введения.

Следует отмгтить, что наиболее-выраженным противоэпилепти-чесют эффектом 1,4-ДГПов являлось ослабление генерирования судорожных разрядов. Это объясняется тем, что возникновение судорожных разрядов сопровождается значительно Солшш (примерно в 2 раза) падением внеклеточной концентрация Ca1", чем возникновение ИИР (Hablitz, Heineirann, 1887; Pumain et al. , 1986). Вероятно поэтому.'блокаторы Ca-каналов предотвращают возникновение в первую очередь ИР. Преимущественное подавление ИР - обнаружено и при исследовании противосудорожного действия таких антиконвульсан-тов, как диазепам и дифенилгидантоин (Festoff, Appel, 1968; Рехтман и др., 1980), в сложный механизм действия которых входит и блокада кальциевых ' каналов кейрональных мембран (Woodbury, 1980; Ranpe et, al., 1987). .

Учитывая в спа s препарата его -фиктивную дозу и степень воздействия на все характеристики эпилептического очага (снижение амплитуды НИР, частоты ISC к ИР, сокращение продолжительности существования ЭпА). а также данные, полученные в аналогичных условиях опыта для Слокатора потенциал-чувствительных Са-ка-язлоз из группы фэнилалкилакинов - верапакмла (Карпова и др. .

387;. г.с.ткс сделать вывод о том. что самым сильным из исследованных нгиш препаратов, оказывасетм антиэпилептичаское действие в сравнительно малой концентрация, является риодипин ("2сри-г.сн"). Его противосудороляое действие по некоторым показателям близко к действию ЙОС-1.1212, т антагониста кальция, к превосходит действие препарата сравнения - вальпроата натрия. К по-лояительнш свойствам моино отнести и его значительно меньшую, по сравнении с вальпроатом натрия, токсичность (Kimenis et. al. , 1385; Sorei et al.. 1985). Высокая противосудорожная активность 3.4-ДГПов, и в частности ркозипина, обусловливается так же тем. что ¡благодаря свита липоцильным свойствам; 1,4-ДТП легко поохо-.тат через ГЗВ (Eodor ; O'Neill. Böiger, 1938, 1989) и также лег-то проникают в липидньй Сислсй нейрональных мембран и мэкйрая внутриклеточных органелл, блокируя выброс Се?*из внутриклеточных депо (Белевич и др. , 1985: Бэлевич. 1988; Zemins, 1991 'i.

Таким образом, полученные даяныэ свидетельствуют о способности исследуемых 1,4-ДГПов оказывать противсэпилептическое действие на модели очагоссй пенициллин-индуцированной ЭпА. что согласуется с данным других авторов (Waiden et al., 1385; Waiden, Speckrann, 1986; Witte et al. , 1987; Speckmann et al., 1989), показавших эффективность действия антагонистов Саг+(вера-памила, DB9Q) против этого типа ЭпА.

Вместе с тем, противосудоражные эффекты 1,4-ДТП могут быть связаны с их гипотензивным действием. Это обстоятельство невсегда учитывалось в работах других авторов ((feyer et al., 1987; Vezsani et al. , 1983). В связи с изложенным, для изучения влияния гипотензивного действгга риодипика на активность эпилептического очага была проведена специальная серия экспериментов. Как показали результаты этой серии, введение риодипина интактным крысам в дозе 1 мг/кг вызывало небольшое снижение давления (на 7-147.);. при введении 5 мг/кг око было более значительным (на Z X - 47%). После аппликации пенициллина отмечено поязление ЭпА б счаге и увеличение давления на 5-45 мм рт. ст.. Введение препара-

та на зтоы фоне снижало давление до исходного уровня, Наиболее выраженный протиЕОЗпилелтический эффеи? препарата отмечали не в первые минуты после введения, когда наблюдали наибольшее паденко давления, а через 20-30 минут, т. е. в период его нормализации. Антиэпилептический аффект препарата в дозах 1 и 5 «¿г/кг одинаков, несшгря на более значительное снижения давления при дозе 5 мг/кг. Таким образом, полученные наш результаты свидетельствует об отсутствии взаимосвязи между изменением системного кровяного давления под действием риодишша к сшиванием ЭпА в очаге. В пользу такого вывода свидетельствует и тот факт, что эффективность противосудорожного действия Pí¿ 20D-11D а других Слокаторог потенциал-чувствительных Са-каналов (De Sarro et al., 1S3S) на ЗпА примерно одинакова как при введении их в латеральный желудочек мозга, так к при системном введении. Вместе с тем, несмсгря на полученные результата, вопрос о возможном влиянии снижений давления под действием 1,4-ДГШв ка активность эпклэптогекного очага остается открытым и требует дальнейшего исследования.

Результаты наяшх экспериментов к данные литературы свидетельствуют о том, что Слокаторы потенциал-чувствительных Са-г^-налов звдйктизеы только против определенного типа судорог, тагеяс как пенициллин-, бикукуляин-, коразол-кндуцировзнпых,. а такжэ вызванных электрошоком, клешей и аудиогенних судорогах (Walden et al., 1985; Val den, Speckmsn, 19SS; Ifcyer et al., 19S5, 1935a; De Sarro et al. , 1983; Speckman et al., 1Э8Э), и не действуют ка судороги, вызванные стрихнином (Dolin et al. , 1938). Это, по-ви-дтюьг/, обусловлено особенностями тркггерных механизмов судорожного действия пенициллина и стрихнина: .эффект пенициллина СЕязан с подавлением РАМЕергического тормояения (Curtis et. al., 1072; РеПшг, V/ilson, 1977), а стрихнина - глицинэргичеекзго тормоке-нкл (Curtis et al., 1871; Marvizan et al., 1935). Как показали исследования Eblhara и Akaike (1932), судорожное действие стрихнина на зависит от изменения внутриклеточной концентрации Са. te этого можно сделать биеод о нецелесообразности применения препа-' ратов из группы 1,4-ДГПсв в случае, ютда возникновение эпилепсии .вызвано нарукэнкем глицанэргкчэского ториакепия.

Нами было показано, что противосудераяаке эффекты нового 1,4-ДТП КОС-1.1212, который не является блокатороы Са-каналов, я других 1,4-ДГПоб, яелязияхся блочатораки Са-каналов. но шагом похояк. Возникает вопрос о епе;стрв его антяконвульсалтного

_ -» с; _

Ж V*

действия. В связи с зим была проведена серия экспериментов, в гагарой исследовали действие ИОС-1.1212 на стрихнин-индуцированную ЭпА.

Влияние ИОС-1.1212 на стрихнин-индуцированную эпилептическую активность,. Аппликате? 0,5" растЕора стрихнина на твердою мозговую оболочку коры больших полушария головного мозга icpuc приводила к появлению ЗпА: через 30-50 с на фоне спонтанной ЗКоГ появлялись отдельные КИР, амплитуда и частота которых постепенно увеличивалась. Время существования очага ЭпА с момента апплика-щш стрихнина до полного исчезновения КИР составило 40-50 шш. Епэдение ДУСО не оказывало влияния на характер ЭпА.

Апплигсаши 1,52 раствора стрихнина вызывала более сильную ЭпА: через 20-50 с на фоне спонтанной ЭКоГ появлялись отдельные и сгруппированные ЯйР, а гак_та КР- Время существования очага ЭпА составило 55-70 минут.

ИОС-1.1212 в дозе 2 кг/кг и 10 мг/кг, введенный за 30 мин до аппликации или через 5-12 мин после аппликации 0,52 или 1,52 раствора стрихнина нэ оказывал существенного влияния на амплитудно-частотные харатеесистггси и продолжительность существования очага ЭпА. Таким образом, хотя препарат и не обладает свойствами антагониста кальция (Klusa et al., 1S32), спектр его антикон-зудьсаптного действия совпадает с аналогичной противосудорожной активностью 1,4-ДГПов - Слокаторов потенциал-чувствительных Са-каналов.

Вместе с тем, при анализе полученных данных возникает вопрос: почему ИОС-1.1212,- не яаляюззйся антагонистом Саг+, имеет антиконвулъсаятньй профиль аналогичный профилю 1,4-ДГПов - бло-катороз Са-каналов? Ответ sa него следует искать, по-видимому, в механизме действия препарата. Его молекула содергался аминокислотную часть (аналог НКЕА) и дигндрсникотикамидньй остаток, рассматривается как яептидоподобная структура, имекзяая схожий с пептида}«! механизм действия, для которого характерно длительное постепенное развитие эффектов к их стабильность при широком диапазоне применяемых доз (Klusa et al, , 1992).. Имеются данные, по-казызащие,' что 1,4-ДГП-чувствительны£ участок Са-канала может связываться не только с агояисташ или антагонистами из группы 1,4-ДГПов, но и с эндогенными лигаядами, таким! как нейроиедиа-торы и пептиды (Triggle et al., 1909). Некоторые пептиды (900 Da) сбладшот болыпим сродством к 1,4-ДГЛ-связываЕадм участкам

Са-канала, чем сами 1,4-ДТП, и могут Еытеснять эти препараты из их мест связывания, увеличивая вход Са в клетку (геггнпе, 1931). Все эти данные свидетельствуют не только о сложности механизма регулирования 1,4-ДТП-чувствительного Са-катила, но и о возможной, до сих пор не изученной роли эндогенных пептидов как в зпи-лептизация мозга, так и в купировании этого процесса (КгугПало'лзк!I еР а!., 1989; Крыжановский м др., 1992-, Годлевский, 1992). Исходя из выиапреведенных данных, можно полагать, что противосудорожные эффекты ИОС-1.1212 обусловлены его модулирующим пептидсподобкым действием на 1,4-ДТП-чувствительный Са-канал.

2. АНТИЭГШЕПГИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ ПРЕПАРАТОВ НА ЮДЫК ГЕНЕРАЛИЗОВАННОЙ ЭПИЛЕПТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ Ддя изучения влияния 1,4-ДГПов на острую генерализованную ЭпА использовали модель, создаваемую системным введением коразо-ла (Саш, 1980, Каг1ег еР а1. , 1989).

Введение корааола приводило щ развитию генерализованной ЭпА: через 30-50 с появлялись первые судорошые проявления в виде вздрагивания головы, которые переходили в клонические вздрагивания всего туловищу Затеи следовали каоническиэ судороги передних конечностей с подъемом «квотного на задние лапы (поза "кенгуру"). Завершались судороги падением животного на Сок (тонические судороги) и постпристулной депрессией. Иногда у животных не найлядали падения на бок; в этом случае имели место повторные клонические судороги передней конечностей с подъемом животного на задние лапы.

Предварительное введение ниг!&дилянв в дозе 10 иг/кг уменьшало длительность кданических судорог на 27Х (р<0,05), увеличивало на 85« латентный период наступления тонических судорог (р<0,05), а такта уиенькало их длительность на 24% па сравнения с группой контрольных аивотных (р<0,05). Летальность в группе контрольных животных составила 54,87. (погибло 7 из 13 хкеотньоО , з в группе подопытных животных - 20% (погибло 2 из 10).

Введение ршлипжга в дозе 0,75 кг/кг не оказавало действия на острые генерализованные судороги, в дозе 1 мг/кг он проявил антизпилэдтическое'действие, которое выражалось з достоверном увеличении латентного периода первых судорожных проявлений (на 32% р<0,001), задержи на 502 развития клоничес.чих судорог

(píO.OOl). укеиьвенАи числа ¡швотных с тонически»®! судорогами, снижении тягости судорог (р<0,001) и летальности (р<0,025).

Предварительное введение ИОС-1. 1212 в дозе 2 мг/кг $гвеличи-вало па 402 (р<0,05) латентнкй период первых судорожных проявлении; задерживало развитие клонических (на 342; р<0,001) и тонических судорог (з Z pasa; р<0,001). Летальность б группе контрольных яивотиш: составила 71Z, в группе опытных животных - 5ОТ., время ¡аапп у контрольных животных было почти в 3 раза короче, чем у опытных (р<0.01). Увеличение дозы препарата до 10 шУкг яэ оказало сусрственяого влияния на увеличение его антиэпилептического аффекта по сравнении с тшсовш при применении его в дозе Z кг/кг.

Зэльпроат натрия в дозе 70 иг/кг, оказал аятизпилептическое действие в виде снижения тяжести судорог ка 15?. (р<0,С2) и задержи е 3.5 раза (р<0.05) развития тонической фазы судорог. В дозе ВО иг/кг он проявлял более значительный аятизпилептический эффект, который зыражзлся в увеличении ка 211 (р<0,05) латентного периода прррьк судорожных проявлений и на 18Х (р<0,01) - латентного периода наступления тонических судорог, а также значительней (в 3 раза; р<0,001) задерякэ качала развития тонических судорог. У ливотных, у которых коразол ке вызывал тонических судорог с падением на бок, такте, как в группе контрольных животных имели мзсто повторные клинические судороги. Средняя тяаэсть судорог у .тавотных а этой группе била значительно жиг по сравнения с аналогичным показателем в группе контрольных гивотных. В группе опытных кивотных после введени пиразола не погибло ни одна кшса, в та врекя, !сак в группе контрольных яивотных сортность составила 50Х (р<0,025).

Сравнительная характеристика . аятиэпилепгических зффеетов 1.,4-дигкдропкридинов и вальпроага натрия яа модели острой генерализованной Зпй. Таким образом, результаты проведенных исследований таюв свительствукг о том, что препараты из группы 1,4-ДТП ИОС-1.1212 и блокаторы Са-каналов из этой да группы - нифедипин, ркодипин оказывают противоэпилептячзское действие на модели острей генерализованной коразол-индуцированной ЭпА. Степень- воздействия на отдельные характеристики этой активности у разных препаратов также неодинакова. Вэс^ства можно распологятть в сл«-дугаэем ряду:

а) по длительности задержи первых судорожных проявлений -

- 18 -

ИОС-1.1212 > риодигшн > вадьпраат натрия > нкфэдиакз;

б) но длительности вадердки клоккчееюнс судорог - рясдцпкн > нифедишш > КОС-1.1212 > вальпроат натрия;

в) по длительности задержи тонических судорог - вальпроат натрия > КОС-1.1212 > нифздщш > риодипкз;

г) по эффективности сюовнзя тяжести судорог - вадьпроат натрия > риодипин > 10С-1.1212 > нифедишш;

д) по эффективности защиты животных от гибели - Бальпрсат на-тр>ш > ИОС-1.1212 > риодшшн > нифедипкн.

Анализ полученных данных приводит к выводу, что каяболэе эффективным в отношении подавления генерализованной судоромкгй реакции из группы 1,4-ДГЕов • блокаторав Са-каналов является ри-одипин. Следует отметить, что эффективность ркодипкка и КОС-1.1212 почти одинакова, несмотря на то, что они обладают разными свойства;.^ в отноезнии . Са-каналов.

3. АШ'1!Э1ШЛЕШ,1ЯЕСК11Е ЭФФЕКТЫ ПРЕПАРАТОВ НА ШЯКЛЙ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОГО КШЩШГА

В I серии опытов у животных первой контрольной группы, которым вводили коразол после физиологического раствора, судороги тяжестью в 1 балл регистрировались на 5-й день после ежедневной инъекции коразола ¡сакспыальное проявление судорожной реакции (до 8-и баллов) отмечено с б-го по-10-й день. Б дальнейшем наблюдали постепенное уменьшение средней тяязстн судорог, и на 16-й день она составляла 2 балла. У «¡¡¡потных второй контрольной группы с введением ДШЮ судороги в 1 балл регистрировались после-12-й инъекции коразола.

У .тавотных. которым вводили ИОС-1.1212 в дозе 10 кг/кг, наблюдали задержу развития судорогой реакции судороги возникали лишь после 14-й инъекции коразола и тяжесть их составляла 1 балл.

Введения рвэдштянз в дозе 2 мг/кг и вералашма з дозе 10, _ мг/кг такта вызывали значительную задержку развития судорожной раакции и снижение ее тяжести у животных. Она возникала лишь после 14-16-й инъекции коразола и тягксть ее составляла 1 балл.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что зведениэ риоднпина, вераламида и КОС-1.1212 достоверно задерживает развитие в мозге состояния ПСГ в рандомизированных группах животных. Аналогичные дачные были получены и при действии других

- IS -

алокатороз Ca-iraflanc., (Ерыжановский и др. , 1S90). Неожиданным оказался йакг задержки развития формирования состояния ШГ иозга у швстжи, получавют перед коразолом Д5Ж0. Действие ДЯО в данном случаэ, по-видимому, связано с реализацией самой судорож-лсй рбй/чгш, а не с развитием синдрома ШГ. Возможно, это обусловлено антиоксздалтнсй активностью ДЮО (Hallivell, Gutteric^o, 1ЙС5) ■ так как ингибиторы перекисного окисления ли-пидов ослабляют судорокнуго реакцию (Крцяаяовский и др., 1980). Ее исключена вероятность и того, что соотяопеиие чувствительны}: и нечувствительных к эпнлаптогену яшоткых в рандомизированных группах различно, что отражается иа статистических результатах при: малой выборке.

Известно, что при - фар\акслогическом киндлинге. как и при элеетрсетимуляционком» наблюдаются не только Еидовые (Racine, 1878), ко и индивидуальные различия в чувствительности йивотных к эпилептогенкум воздействиям (Leech, Ktelntyre, 1976; Racine et al., 1S73; Sanberg-, Ossekopp, 1S78; Zaide, 1974). Эти разл1!чия в индивидуальной чувствительности затрудняют оценку развития судо-. ротгой гегсзвсстн при кшцшяге в оспей популяции эксаеримеи-тгльных :яшо?ньх яри выведении средних показателей и в связи с этим оценку эффективности пряменяешх антиэпилептических средств. Поэтому для проведения исследования по изучению влияния 1,4-ДГПов и зерапампла иа процесс формирования в мозге состояния ПСГ сил разработан метод предварительного тестирования животных по их чувствительности к коразолу и во Л серии опытов изучены особенности формирования состояния ПСГ мозга в группах относительно чувствительных и малочувствительных к коразолу гкавотных. Результаты экспериментов показали, что в группе относительно чувствительных к коразолу жжогных, т. е. дававших судорожную ре-акцио в ответ на тестирукэдпо дозу коразола, при ежедневном внут-рябрпеткном введении коразола в суокоявульсивяой дозе судороги тялэстью 1 балл появлялись уде после 2-й инъекции (267, животных). У группы малочувствительных к коразолу ливоткых такая реакция была отмечена только после б-й инъекции (20Z животных). Ва 8-10 д-эпь введения коразола различия в тяаести судорожной реакции у жзстных указанных групп были недостоверны. Б дальнейшем, начиная с 12-го дня, эти различия становились все Солее выракс i-ными и достигали максимума на 16-й день введения коразола

Следует отметить, что на 10-й день судорожные реакции воз-

никалв уже у Есех чувствительных к коразолу авшотнцх. В то яб время у животных малочувствительных к коразолу судороги бьш; отмечены у 53Х крыс. Зтн различия сохранялись к в после дукциэ дКИ введения корааола.

Определенна латентного периода наступления первых судорожных проявлений после каждой ежедневной инъекции корааола показало, что с 12-го по 18-й день оа был достоверно меньше у относительно чувствительных к коразолу животных по сравнения с таковым у малочувствительных к коразолу животных.

Из полученных данных «окно сделать вывод, что индивидуальные различия швду ¡атагкши по чувствительности к коразолу могут приводить к значительному разбросу данных при проведении экспериментов на рандомизированных группах.

Учитывая выекизлозвэкноэ, изучение влияния 1,4-ДГПов и вера-памила на формирование в мозге состояния ШГ в III серии экспериментов проводили на предварительно отобранных, относительно чувствительных к коразолу животных. У двух групп контрольных животных зтой es рак, получавпих гс^ред коразолоа физиологический раствор или ДКСО, введение эпкдэптогепа ужо на 2-й день вызвало судороянуо реагаию тяжестью в 1 Саля. Таким образом, 2JSC0 не оказывал влияния на развитие повышенной судорожной готовности, что может свидетельствовать о правомочности вышеизложенного предположения о значительном влияния индивидуальных различий на результаты статистической обработки данных при малой зыбоске. Возможо, что з(£фект ДЫСО в рандомизированной группе животных объясняется преобладанием а ней крыс, малочувствительных к коразолу.

У опытных животных, одним из которых вводили ИОС-i. 1212 в дозе 2 ыг/кг, а другим - ве сада¡глж в дозе 15 мг/кг, судороги тяжестью а 1 балл регистрировалась на 3-й день с ¿гамзнта качала гашддикга, т. е. ка 1 день позже, чем у контрольных .тавотных. В дальнейшем, з течение всего периода ккндлнкга (45 дной) максимальные различия з тяжести судорог наолзздзли ыэкзу реакцией контрольных крыс, которым вводили Физаллогичрский раствор или ДЗЗО, и реакцией опытных крыс, когоркм »сзлнаи цорапамнл (с 14-го дня о<0,001). Разлитом ме-хпу реакцией на введение чоразола у контрольных яаготных и тавотных, получали ИСС-1.1212 начала отмечаться и были достоверно выражены лине, начиная с 3-й неде-лл (с 17-го дан р-сО,01); ош; сохранялись и при дальнеигем введении

ксразода (4-я неде; ).

Тагам образом, введение препаратов вызывало задержку развития состояния ГОГ мозга . Весьма важно, что этот эффект отмечен при применении блокаторов Са-каналов различной природы: производных 1,4-ДТП и фенилалкиламина, блокаторов и не блокаторов Са-каналов. Примечательно, что у животных, более чувствительных к коразолу, получавших перед коразодом верапамил или ИОС-1.1212, различия в тяжести судорог по сравнению с контрольными животными вначале, в течение первых 10 дней, не проявлялись, и стали выраженными в более поздние сроки. Это может быть объяснено тем, что у животных, чувствительных к коразолу, происходит более значительная активация Са-каналов, в связи с чем антагонисты Са становятся эффективными лишь при сравнительно длительном их применении.

Введение вифедхтпт в дозе 10 мг/кг перед каждой инъекцией коразола не оказывало влияния на развитие состояния ГОГ мозга и тяжесть судорожной реакции в ответ на каждую инъекцию коразола в процессе киндлинга. Vezzaní с соавторами (1988) показали, что нифе лития в дооз 40 мг/кг, подавляя некоторые виды ЭпА. не влияет на судороги, вызванные введением в гиппокамп хинолшовой и каиновой кислот. Однако он сникает тяжесть судорог после элект-ростимуляционного киндлинга гиппокампа в дозе 20 мг/кг у 57Z животных. Учитывая эти данные .можно полагать, что отсутствие действия нифедипяна на развитие повышенной судорожной готовности при коразоловом киядлинге в нашх опытах могло быть связано как с применением его в относительно небольшой дозе, из-за чего в мозге не достигалась его эффективная концентрация (Panza et al., 1385), так и с видом киндлинга (фармакологический в отличие от злектростимудяционного). Более того, свойства 1,4-ДПЬ чувствительных Са-каналов качественно и количественно зависят от многих факторов, в число которых входят хроническая активация канала и длительное воздействие на него лекарственных веществ, и которые могут изменять как число, так и функционирование этих каналов (Hosey, Lazdunski, 1983; Triggle, 1990). Так, применение нифеди-пина в течение пяти дней может приводить к возрастанию плотности 1,4-ДТП-чувствительных Са-каналоа на яейрональной мембране и увеличении, а не снижению, входа Са?*в клетку (Zermng, 1991).

Изучение продолжительности сохранения повышенной судорожной готовности показали, что состояние ГОГ сохраняется у крыс в те-

чение всего срока наблюдения - 11 месяцев. Тякэсть судорог после окончания киндлинга в течение всего срока наблвдения у контрольных животных практически не изменялась. Длительность сохранения синдрома ПСГ после прекращения введения конвулъсанта отмечали и другие авторы (Wasterlam et al., 1981). Известно, что ШГ сохраняется длительное время и при злектростимуляционноы киндлинге мозговых структур (Goddard et al., 1969; Wada et al., 1974). механизм этого явления остается неясным, и может быть обусловлен различными факторами, одам из которых является нарушение межклеточных взаимодействий на синаптическом уровне; другим - долговременные изменения свойств отдельных нейронов и их мембран (Deleado-Escueta et al., 1986; Itody, Heinemann, 1987; Mody et al., 1988, 1990).

Представляет интерес тот факт, что после отмены блокатора Са-канала верапамила (после 45-го дня опытов) в этой группе появилась тенденция к постепенному увеличению тяжести судорог в ответ на тестирующую дозу коразола до уровня контрольных животных. Аналогичный факт увеличения тяжести судорог наблюдает и в клинике у больных эпилепсией после отмены противосудорожной терапии. Ш-видимому, это связано с тем, что у животных, подвергшихся киндлингу, имеет место скрытая, компенсированная в условиях применения блокаторов потенциал-чувствительных Са-каналов, тенденция к активации не только этих, но и связанных с ШЗА-рецептора-ми Са-каналов (Mody, Heinemann, 1987; Mody et al. , 1988, 1990; Marrisett et al., 1989), что находит свое выражение в увеличении тяжести судорог после отмены препарата.

В IV серии экспериментов изучали влияние 1,4-ДГПзв на тяжесть судорог у животных после окончания киндлинга. У контрольных животных (физиологический раствор + коразол), которые после окончания киндлинга реагировали на тестирующую дозу коразола судорожной реакцией в 3-5 баллов, введение нифэдипияа в дозах 10 и 30 мг/кг, ргодишшз в дозах 2 и 10 мг/кг и ИОС-1.1Z1Z в дозах -2 и 10 мг/кг за 30 минут до инъекции коразола не оказывало существенного влияния на тяжесть судорог: юс интенсивность была такой же, как и.при введении одного коразола и составляла примерно 3 балда . Таким образом, данные этой серии опытов свидетельствуют о том, что антагонисты Са4'и ИОС-1.1212, подавляя развитие повышенной судорожной готовности, вместе с тем не влияга существенным образом на реализацию самой судорожной реакции даже при

использования их в увеличенной в 2-3 раза дозе. На основании проведенного исследования можно сделать вывод, что механизмы хронического эпилептогенеза (в данном случае, в вид? кинд-линг-зависимой ПСГ) и судорожной реакции неоднозначны. Из данного заключения следует, что не все антиконвульсанты могут являться истинными антиэпилептическими средствами, и .наоборот -средства, купирущие зпилептогенез, не обязательно должны быть антиконвульсантами. Аналогичное заключение было сделано в статьях McNamara с соавторами (1988) и Sato с соавторами (1990). Они считают, что термин "антиэпилептические" следует относить к ве-¡цэствам, тормозящим процесс эпилептизадаи мозга, тогда как термин "противосудорожные" - к веществам, препятствующим развитию судорог.

Таким образом, результаты проведенных исследований показывают, что блокаторы потенциал-чувствительных Са-каналов: верапамил, относящийся к классу фенилалкиламинов, и новые 1,4-ДТП - риоди-пин, га 200-110, а также ИОС-1.1212, не являющийся блокатором Са-каналоз, способны оказывать противоэпилептическое действие на' моделях фокальной ЗпА, острых генерализованных судорог и на процесс хронической эпилептизации мозга. Нифедипин в исследуемых дозах подавлял фокальную и острую генерализованную ЭпА и был неэффективен при киндлинге.

Учитывая профиль ангиэпилептического действия каждого препарата, его эффективную дозу, можно сделать вывод о. том, что лучшим из исследованных препаратов является риодипин, чье противоэпилептическое действие дополняется положительным влиянием на мозговое кровообращение (Чернышева и др., 19S9).

Полученные данные свидетельствуют о целесообразности включения 1,4-ДГШв в противосудорожную терапию. .В этой связи представляется перспективным применение препаратов не только обладающих антиэпилептической активностью, но и положительно влияющих на гемодинамику и метаболизм мозга, которые изменяются при судорожных процессах.

ВЫВОДЫ.

1. 1,4-дигидропирздины: риодипин, нифедипин, PN 200-110 -блокаторы потенциал-чувствительных Са-саналов, и И0С-1.1212, не обладающий этим свойством, оказывают выраженное антиэпилептическое действие на модели фокальной пенициллин-индуцированной ЗпА и

- 24 -

острых генерализованных корааол-вызванных судорогах.

2. Антиэкйлептическио свойства 1,4-дигидропиридинов не связаны с их гипотензивным действием.

3. 1,4-дигвдропиридины, б локаторы к не 0 локаторы потенциал-чувствительных Са-каиалов, эффективны только против определенных типов судорог, например, вызванных нарушением тормозных ГАМКергических механизмов, и не эффективны в отношения судорог, вызванных нарушением глидинергического торможения.

4. Елокаторы потенциал-чувствительных Са-каналов и ИОС-1.1212 оказывают противоэпилептическое действие на модели коразолового киндлинга, задерживая развитие состояния ПСГ мозга и снижая тяжесть судорог.

5. Блокаторы ' потенциал-чувствительных Са-каналов и ИОС-1.1212 оказывают влияние на развитие состояния ПСГ мозга и не эффективны в снижении тяжести судорог у полностью киндлинизи-рованных животных. Полученные дачные свидетельствует о том, что механизмы хронического эпилептогенеза и судорожной реакции неоднозначны.

6. Антиконвульсантные профили 1,4-ДГШз, блокаторов и не блокаторов потенциал-чувствительных Са-каналов, одинаковы.

7. Эффективность действия исследуемых новых 1,4-дигидропиридинов превосходит либо сравнима с силой действия классического противоэпидемического препарата - вальпроата натрия. Лучшим из исследованных 1,4-дигидролиридшгав, действующим против разных типов эпилептической активности в сравнительно небольшой дозе (1 мг/кг), является ркодигаи.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕШ ДИССЕРТАЦИИ

1. Регуляция Са-каналов как способ антиэпилептической кор-рекции//Тез. докл. IV Всесога. съезда патофизиол, 3-6 акт. -Кишинев.- 1939.-С. 24. (В соавт." с tó. Е Карповой, С. Bl Титовым, Р. Е Глебовш)

2. Влияние . блокатора Са-каналов риодипина на очаговую и генерализованную ■ эпилептическую агегивность//Рш. эксперт/, биол. и мед. -1989.- N 11.-С. 553.-555. (В соавт. с М. Е Карповой, Р.Н.Глебовны, С. К. Германе, Ё. Е. Клуша, Г. Я Дубуром).

3. Еаияние органических кальциевых антагонистов и .магния развитие коразолового киндлинга//Еюд. зксперим. биол. и мед. -1990. -М10.-С. 348-350. (В соавт. с Г. Е Крыяановским, 'М. Е Карповой).

4. Влияние PN "10-110 на пенициллин-индуцированную эпилептическую истинность в коре головного мозга крыс// Бюд. экпперим. би-ол.и мед. -1991. -N 4.-С. 351-353. (В соавт. с Г. Н. Кръиаяовским,

И. Н. Карповой).

5. С5 антизпилептических эффектах кифедилина//Бш. эксперт*, биол. и мед. -1991. -N 9. -С. 260-2Б2. (В соавт. с ЕЕ Карпове Я, Г. Н. Крьшановским, Р. Е Глебовым).

6. Анткэпилептические эффекты нового блока:'ора Са-каналов ИОС-1.1212//йш1. эксперим. Сиол. и мед. -1991. -N10- -С. 362-355-, (В соавт. с Ы. Н. Карповой, Р. Н. Глебовым, Г. Я ДуСуром, С. К. Германе, В. Е. Клуша).

7. Норазоловый кикдлинг у животных с различной чувствительностью к эпилептогену//Епл. эксперим. биол. и мед. -1991. -N 11. -С. 459-460. ( В соавт. с Г. Е крьгаановским, M. Н. Карповой).

8. Effect of organic calcium antagonists and magnesium on the development of pentylenetetrazol kindling//Proc. Int. soc. for Pathophys.- - Moskow, may 28 -june l, 1991. -P. 19-20. (Coautor: M. N. Karpova).