Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Комплексная патогенетическая терапия эпилепсии в эксперименте

/

и

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК НАУЧНОИССЛЕЗОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ОБЩЕЙ ПАТОЛОГИИ И ПАШШЗКОЛОПШ

КАРПОВА Маргарита Николаевна

хяглшсш ЯАГОГЕЯЕПЯЕСХЛЯ ТЕРЛВИЯ ЭПИЛЕПСИИ В ЭКСПЕРИШПЕ

14.00.16 - патологическая физиаяогия

Автореферат диссертации на_ соискание ученой степени доктора биологических наук

На празах рукописи

ИОСКВА - 1934

Работа выполнена в лаборатории биохимии Научно-исследовательского института общей патологии и патофизиологии Российской АМН. ...

Научные консультанты: доктор медицинских наук,

профессор, академик Российской АШ Г.Н. КРЫВАН08СКИЙ

доктор биологических наук, профессор Р.Н. ГЛЕБОВ

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор,

член-корреспондент РАМН К. В. ГАННУШКИНА

доктор медицинских наук В. К. РЕШЕТНЯК

доктор биологических наук, профессор' С.А. ЧЕПУРНОВ

Ведущее учрездение: Российский государственный медицинский Университет

^ащита диссертации состоится "/"^¿¿■'й-^и^ года в Л часов на заседании Специализированного совета Д.001.03.01 при Научно-исследовательском институте общей патологии и патофизиологии Российской АМН (125315, Москва, Балтийская ул., 8)

С диссертацией мшшо ознакомиться в биб/^готеке Института

Автореферат разослан "/6" ^¿б/Ь^Х- 1995 года

/

Ученый секретарь Специализированного совета кандидат медицинских наук

Л.Н. Скуратовская

СЕДАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ ' Аютуадьвсст! проблемы. Эпилепсия - сложное по этиологии и патогенезу верчно-псшхическое заболевание - имеет хроничес-ки-прогрэднентьое течение и характеризуется палиморфностью как пароксигмзльных проявлений, так н нарушений психической деятельности. По докладу экспертов исследовательской группы ВОЗ (Женева, 1980) эпилепсия относится к числу заболеваний борьба с которыми требует первоочередного внимания. Ее распространенность варьирует в широких пределах в зависимости от экономического развития стран и методов диагностики в этих странах,' а также рассматриваемого возргстного диапазона, и составляет в среднем 10-220 человек на 100 ООО.населения (Delgado-Escueta et al., 1985; Tsuboi, 198S). Ежегодно диагностируется 30 ООО новых больных эпилепсией, ta миллионов больных эпилепсией нетрудоспособны, s несмотря на проводимое лечение.

Современные возможности лечения с применением высокоэффективных алтизпилептических препаратов не уменьшают актуальности проблема." Существующие методы лечения эпилепсии позволяпт получить значительное подавление, реже, клиническое исчезновение эпилептических проявлений у 50-7СК больных; у 2SZ больных лечение не приводит к успеху. Кроме того, существует категория больных, резистентвых-к фармакотерапии (EL А. Карлов, . 1990; Schmidt, -Morselli, 1986).- Представленные данные свидетельствуют о сложности. ' проблемы, отсутствии эффективных' методов лечения и о недостаточном звании патогенеза эпилепсии.

Исследование мэханизмоз развития и подавления эпилептической активности (ЭпА), а также разработка новых подходов для ле-' чэния. эпилепсии, позволяшцй достичь более значительного лечебного эффекта, снизить npií этом дозы применяемых средств и уменьшить степень риска побочных эффектов, язляится одной из актуальных проблем, решение которых имеют большое медицинское, экономическое и социальное значение.

Для лечения эпилепсии применяет индивидуально подобранные прзтнвосудорожоыэ препараты из разных классов химических соединений, действущкх на те или иные механизмы эпилептогеяеза.. Их используют для проведения монотерапии для купирования определенного типа судорог; , Современные фармакологические исследования с использование« лигзкднорецепторнах методов имеют цельп найти эффективную mhesej для действия того ллти иного препарата. Однако

- г -

ионотерапия далеко не всегда эффективна и ее проведение вызывает у 602 больных осложнения от ряда побочных эффектов. Кроме того, многие больные страдают от двух и более типов судорог, • которые купируются различными антизпилептичесмми препаратами, и во многих случаях болезнь проявляется в виде сложных полиморфных синдромов. Это обстоятельство делает необходимый применение политерапии. Вместе с тем, эпилепсия представляет собой полизткологи-ческое заболевание, в патогенезе которого могут иметь значение различные факторы (П.М.Сараджишвили, Т.Ш.Геладзе, ^.977; Р.Г.Би-ниауришвили и др., 1585; В.А.Карлов, 1930). Поэтому, проводимая в настоящее время патогенетическая терапия, включает мероприятия, направленные не только на подавление судорожного синдрома, но и на нормализации сопутствующих вегетативны::, обменных, гормональных и психических нарушении. Такая терапия направлена на поликомпоаентвость болезни и в этом смысле оправдана. Однако комплексное лечение может иметь своей мишеныо не только' различные проявления эпилепсии как болезни. Объектом патогенетической терапии макет быть эпвдептогенез - патологический процесс устойчивой гипергктивации нейронов, лежащей в основе эпилепсии.

Исследования последнего времени в области общей патофизиологии нервной системы и самого зпилгптогенеза позволили прийти к заключению, что перспективное решение'указанной проблемы может заключаться в создании комплексной патогенетической терапии (КИГ).' Принцип КПТ был обоснован Г.Н. Крыжановским (1980) на моделях различных невропатологических синдромов, в основе которых лежат патологические системы. Принцип КОТ заключается в сочетанием воздействии различными по механизму действия препаратами на разные звенья патологической системы и механизмы формирования и деятельности генератора патологически усиленного возбуждения (ГНУВ). Такое воздействие является условием обеспечивающим потенцирование эффектов каждого из применяемых препаратов. Принцип КПТ . получил клиническую апробацию для лечения ряда-нервно-психических заболеваний. В отношении эпилепсии показана эффективность сочетанного применения антизшшептических средств с комплексом витаминных препаратов, которые в больших дозах действуют, нормализуя не только металлические процессы, но и состояние мембран и рецепторов (Г.Н.Крыхановский и др., 1982; В.М.Коваленко и др., 1984; А.А.Иандра, Г.Н.Крыхановский, 1984; Г.Н.Крыжановсгаш, А.А.Шандра, 1985; А.А.Шандра, 1985).

Особенность донкой работы заключается в применении принципа комплексной терапии в отношении самого базисного процесса эпи-лептизацик нейрона, который как свидетельствуют современные данные, имеет различные триггерные механизмы.

Анализ покагывает, что в основе зпилептизащш нейрона ле-. гат лза взаимосвязанных базисных механизма; нарушение тормозного колотая и г -эзмеряое усиление возбуждения СГ.Н.Крыжановскнй, 1G80, 19?Э, 1991а.б. 1992: см.обзор Р.Н.Глебов. Г.Н.Крыжановс-кей, 1233). Поэюму, КПТ эпилепсии заключается в сотетанном применения вещестз, восстанавливающих или усиливающих тормозные ме-лаппааг и ос^-слякщк возбуждающие механизмы. Комплексное применение препаратов, способствующих осуществлению этих процессов, мемет, как следует из принципа КПТ. дать более значительный лечебный эффект и снизить при этом дозы каждого из них.

Действие атлзпилептических препаратов, имеющихся в насто-:1Г,зе время в арсенале врзча, связано, в'основном. с их способностью усиливать ГАллергическое торможение (барбитураты, бензо-диазепкны, вальпроаты). ослаблять возбуждение путем инактивации Na-каналов (карбаназепин, дифенин). Однако, как показывают исследования (си.обзор Р.Н.Глебов, Г.H.Крыжановский, 1983; Prataln et al., 1983; Kslnsmann. Hamon. 1986; Wltte et al.. 1987) важным патогенетическим звеном гйпёрактивации нейрона'является усиленный вход Са2+.

Лекарственные средства, эффективно действующие на Са-звено зпилептогенеза, в настоящее время отсутствуют. Вместе с тем, з кардиологической практике широко применяются блокаторы Са-кана-лов (В.Янушевич, 1988; Bramwalcl. 1982). К началу проведения настоящего исследования появились данные об их применении для купирована ЭпА O'alden et al.. 1985; Meyer et al.. 1986). Появились п-лзкгхк использовать зти препараты в клинике (Overweg- et al., 1954; Bulua et al.» 1986; Curatolo et al.. 1986; Mancla et al... Однако, данные об эффективности указанных препаратов

пемногсч>-и1е1жн к противоречивы (см. обзор Р.Н.Глебов, М.Н.Карпова, 19ï0). Особенности действия блокатороз Са-каналов и ¡супи-ровачия ЭпА оставались неясныии к требовали дальнейшего изучения. Кроме того, появились новые препарата, антиэпилептические эффекты которше практически не изучены. Вместе с тем, исследование антиэпилептических эффектов блокатороз Са-каналов имеет вах-

вое теоретическое и практическое значение. Их выяснение имеет значение для решения вопроса об использовании данных препаратов для лечения эпилепсии. Указанные обстоятельства явились предпо- •• сылкой для проведения исследования по изучению роли Са2+ в патогенезе экспериментальной эпилепсии и подавлении ЗлА по принципу КПТ.

Все иажиенное определило цели и задачи исследования.

Дели и задачи исследования. Основной целью исследования является экспериментальная разработка принципиально нового подхода к лечению эпкзепсии в виде КПТ. представляющей собой сочетанное воздействие препаратами с целенаправленным действием на основные механизмы эпшептогенеза, а именно, на усиление ГАМКергического торможения и ингибированкя возбуждения в связи с возрастанием Ма- и Са-тска. Особое внимание уделено изучению роли потенциал-зависимых Саг каналов в развитии' и подавлении острой ЭпА и длительном процессе хронической эпилептизации мозга.

В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:

1. Изучить особенности противосудоражного действия блокато-ров Са-каналов как нового класса антиэпилептических средств на основных моделях ЭпА. вызванной конвульсантаыи с различным механизмом судорожного действия; провести сравнительный анализ эффективности действия исследуемых препаратов и антиэпилептических лекарственных средств - вальпроата натрия, фенобарбитала и диа-зепама на разных моделях ЭпА.

2. Исследовать эффективность фармакологических препаратов, активирующих процессы подавления триггерных механизмов эпшептогенеза. -

3. Определить на модели хронической зпилептизации мозга, в виде коразоаового гашдлинга и других моделях экспериментальной эпилепсии возможности подавления ЭпА путем применения исследуемых препаратов й их сочетаний.

4. Определить антиэпилептические и нейротоксические эффекты при сочетанием применении различных препаратов в разных комбинациях с вычисаеяием терапевтического индекса (ТИ).

5. Провести . сравнительный анализ эффективности исследуемых препаратов и хх комбинаций.

6. Определить оптимальное сочетание препаратов для КПТ.

Научная новизна исследований. В результате исследования .

разработан принципиально новый подход к патогенетической терапии эпилептического синдрома в эксперименте. Он заключается в сочетанием воздействии-антиэпилептическими и противосудоражными препаратами с избирательным действием на разные механизмы эпилепто-гевеза. Сочетанное применение препаратов, обеспечивающих активацию процессов подавления триггерных механизмов эпилептогенеза, «озвончи? значительно уменьшить дозы препаратов, снизить вероятность возникновения побочных эффектов и создать практические ре-лоу.Едагрга для эф$екттазого лечения эпилепсии.

Впервые в сд:шзкозых экспериментальных условиях, на одних и ч'ех не моделях с пр?Пзенением различных методов анализа выявлены особенности лротивосудорожного и нейротоксического взаимодействия препаратов при их сочетанном применении. Установлен характер протквосудорсетого и нейротоксического взаимодействия препаратов з 32 исследуемых комбинациях. Определение та позволило вы-' явить наиболее эффективные и безопасные комбинации препаратов.

Изучение антиэпклептического действия препаратов на одних и тех же моделях ЗпА и в одинаковых условиях опыта позволило впервые прогости сравнительный анализ антиэпилептической эффективности блокаторов Са-каналов и антизпилептических лекарственных препаратов другого профиля.

В работе впервые на основных моделях ЭпА в различных условиях введения препаратов изучены антизпилептичеасие свойства новых 1.4-ДИИЭДХЗЗИРИД1ШОВ (1,4-ДГЕоз).

Впервые показано, что антиконзульсантный профиль 1,4-ДГПов,. блокирующих и не блокирующих потенциал-зависимые Са-кавалы, совпадает.

Впервые выявлены особенности формирования состояния повышенной судорожной готовности мозга шел мозга у животных с разной чувствительностью к копвульсанту.

Впервые показано, что механизмы судорспшой реакции при хро-нэтескш эшиептогенезе (на модели коразолового килдлинга) и острых судорог (при однократном введении коразола) неодназначны.

Теоретичес:сач и практическая значимость г-тботы. Теоретически обоснован и разработан в эксперименте новый принцип комплексной терапии - КИТ, заключающийся в сочетанном применении анткэ-пилептпческих препаратов, действующих на основные механизмы эпилептогенеза.

- б - :

Показано, что применение антиконвудьсантов различной природы в виде двух- и многокомпонентных комбинаций приводит к значительному потенцированию противосудоротк и в меньшей степени к увеличению нейротоксических эффектов, 'что позводлет в бошлшс-тве случаев получить высокий ТИ комбинаций.

Исследование характера противосудорожного и нейротокскчес-кого взаимодействия препаратов в 32 комбинациях в одинаковы;!! условиях опыта с применением различных методов анализа позволило установить наиболее эффективные и безопасные комбинации препаратов. Это обстоятельство имеет важное значение для проведения терапии с уменьшенным риском побочных эффектов. Тем самым создан новый вид КИТ.

Результаты проведенного исследования имеют значение не только для понимания механизмов развития и подавления эпилептической- активности. Они могут послуяить основой для применения в клинике нового вида КПТ эпилепсии. Использование доступных препаратов позволяет надеяться на широкое применение этого метода в клинической практике.

Использованные в работе подходы к разработке нового метода КПТ эпилепсии могут быть применены для разработки терапии других форм патологии ЦНС, характеризующихся типерактавностъ» систем.

В процессе разработки принципов и методов экспериментальной КПТ показано, что неорганические и органические антагонисты кальция, а также новые производные 1,4-ДГПа, обладают выраженными антиэгоиептическтш свойствами и способны подавлять некоторые формы ЭпА. Изучение антиконвульсантного профиля исследуемых препаратов показало, что они эффективны только против определенных типов судорог, вызванных нарушением ГАЖергических. а не глици-нергических механизмов» что свидетельствует о необходимости при проведении противосудоражной терапии учитывать как специфику действия препаратов, так и базисные патогенетические механизмы возникновения каждой формы экспериментальной и'клинической эпилепсии. Данные о том. что исследованные препараты задерживают развитие состояния ШГ мозга, но не оказывает влияния на судороги у полностью киндлингизирсзанных животных, а также о том. что ^ связывание 3Н-дказопа^а в мозжечзк псслс однократного введена судорожной дозы коразола увеличзадось. а через 11 месяцев после киндлинга - уменьшалось, заставляют думать, что механизмы судо-

рожвой реакции при хроническом эпилептогенезе и острых судорог , неоднозначны. Разработана методика предварительного отбора жи- -вотных по их чувствительности к действию конвульсаэта, которая позволяет уменьшить разброс экспериментальных данных, связанный с индивидуальными различиями между животными при разштии состояния ПСГ мозга, что, в свою очередь, делает более тотной оценку автизшшеиигаескюй эффективности изучаешх препарата при использовании меньшего числа лабораторных животных. Выявленные особенности формирования состояния ЛСГ мозга у животшх с различной чувствительностью к зпилептогенноыу воздействию и разная эффективность применяема протквосудорожных препаратов на различных сроках эпилептизации мозга требуют учета этого фактора при проведении терапии у больных эпилепсией.

Положения, выносимые на защиту.

1. Блокада потенциал-зависимых и рецептор-управляемых v Са-каналов соответствующими антагонистами кальция пряводит к подавлению ЭпА.

2. Включение блокатороз потенциал-зависимых и рецептор-ул-равляешх Са-каналов в комплексную патогенетическую терапию экспериментального судоростого синдрома значительно увеличивает эффективность комбинаций.

'3. предлагаемая- комплексная патогенетическая терапия -заклх>-чается в сочетазном воздействии на базисные механизмы зпилепто-генеза в виде блокады Ca-тока и усиления тормозного ГАМКергичес-кого контроля и обеспечивает существенное потенцирование проти-восудорорш эф^стов каждого из применяемых препаратов при значительном уменьшении их доз и высокий терапевтический индекс комбинаций.

4. Преимущество разработаннкого метода комплексной патогенетической терапии заключается в возможности применения очень малых доз препаратов и высоком ТИ комбинаций при относительно низком зотенцировглии токсических эффектов, что позволяет рекомендовать этот метод для клинического применения с целью создания белее рационгль::ой и эффективной патогенетической терапии.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на ыежла-бораторней конференции НИИ общей патологии и патофизиологии РАМН "Эпилепсия" (Москва, 1986, 1988). Советско-британской симпозиуме по неврологии (Ленинград, 1088), конференции "Антагонисты и аго-

нисты кальция: перспективы исследования и применения" (Рига, 1989), конференции "Патология центральной нервной системы" (Киев, 1989), IV Всесоюзном съезде патофизиологов (Кишинев, 1989) информационной конференции "Клиническое применение форидона" (Рига, 1990), V Всесоюзной конференции, посвященной 90-летию со дня рождения академика Х.С. Коштоянца (Москва,. 1990), 1 Учредительном - международном конгрессе по патофизиологии (Москва, 1991), конференции, посвященной 70-летию со дня рождения академика Г. Н. Кршанпзскпго (Москва, 1992), научной конференции по проекту "Ишемические повреждения и наиболее распространенные заболевания мозга:, механизмы.и методы коррекции" (Москва. 1993), симпозиуме "Физиологе-биохимические основы жизнедеятельности мозга" (Санкт-Петербург, 1994), 2 Международном конгрессе по патофизиологии (Киото, 1994).

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, 5 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы. Работа излажена на 339 страницах, содержит 43 рисунка и 67 таблиц. Список литературы включает 489 источников, из которых 56 опубликовано в отечественных и 433 в зарубежных изданиях.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

■Глава 3. МАТЕРИАЛЫ иЧЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Исследования проведены в условиях острых, полухронических и хронических экспериментов на 1420 крысах самцах линии Вистар кассой 180-300 г и на 2000 беспородных мышах самцах массой 18-28 г.

3.1. Используемые препарата и способы их введения В работе использовали следующие вещества: верапаыил (Финоп-тин, "Orion", Финляндия), нифедипин ("Sigma", США), рирдипин ("Ооридон", Латвия), Ж5С-1.1212 и глутапирон, синтезированные в Институте органического синтеза АН Латвии, Pf) 200-110 ("Sandoz", Швейцария), • вальпрогг натрия ("Sanofi", Франция), MgSC¡4, NiClg, дилтиазем ("Signa.", США), фенобарбитал, бензонал, дифенин, диа-зепам ("Relanium", "Polfa"), Мл-801, зтосуксимид ("Suxilep", "Jenafarm"), диметилсульфокснд ("Serva", ffiPT), книн-2/AM ("Sig-

та". США). Растворы 1.4-ДГПов готовили непосредственно перед введением в темной комнате при красном освещении.

Лля изучения особенностей действия препаратов, купирования ЗпА и разработки КПТ применяли разные способы введения: перо-ррльный (шее. максиуальный электрошок), внутрибрюшшый. в латеральный желудочек мозга, аппликация на сенсомоторную область коры иозга крыс. Кроме того, введение препаратов осуществляли до развитая ЭпА, на фоне развиващейся. а тагасе устойчивой ЭпА. Учитывая возможные влияния различных факторов, в каждой серии опытов нспытЕгче эффектов препаратов проводили в одно -и то же время с испытанием эффектов конвульсантов. Тазшм образом в каждой серий экспериментов было несколько групп животных: контрольные, которым вводили физиологический раствор и/шш растворители

- GZ раствор твина 80, диметилсульфоксид (ДМСО), и опытные, которым вводили препарат или комбинация препаратов.

3.2. Могеди эпилептической активности

Антиэпилептаческие свойства препаратов изучали на четырех основных модели ЗпА: фокальной. ЭпА. острых генерализованных судорогах, хронической нарастающей гпилептизации нозга - фармакологическом кинддинге Dada, 1986; Fisher, 1989 ) и судорогах, вызванные ыаксиыаяьшм электрошоком.

Лля создания счаёоз эпилептической активности использовали конрульсанты с различными механизмам: судорожного действия. С этой целью на сенсомоторную область коры головного мозга ■ крыс апплицировали фильтровальную бумагу, смоченную раствором одного кз следующих конвульсантов: а) натриевой соли бензишенициллина

- 20 ООО ME/мл или 32 ООО ME/мл при аппликация на твердую мозговую оболочку; б) стрихнина - 0.5Z и 27. р-ры; в) 4-аминопиридина (4-АПа) - 0,0171 раствор.

ЗКОГ регистрировали на элекгроэнцефалографе EES-8S (Medl-сог, Венгрия) у ненаркотизированных свободно передвигающихся животных.

Экспериментальные данные обрабатывали на вычислительном коыпликсе М-44 ("Olivetti", Италия). Ввод данных осуществляли через устройство графического ввода информации "CALCGMP 2000". Определяли: латентный период появления первого интериктального разряда (ЁИР); латентный период появления первого юсгального разряда (ИР) средккга частоту генерирования и амплитуду ШР в

каждом 10-ти минутном интервале; средвюо частоту генерирования ИР в каждом 10-ти минутном интервале; среднюю и обшую длительность ИР за время существования очага; количество ИР за время существования очага SnA; продолжительность существования очага ЭпА (время от момента аппликации эшшштогена до полного исчезновения ИИР).

Для того, чтобы избежать влияния возможного падения системного артериального давления, вызванного антагонистами кальция, на их противосудорожные свойства, и приблизить действие препаратов непосредственно на мозговые структуры или к очагу, было проведено 2 серии опытов. В 1 серии опытов PN 200-110 вводили в дозах 1 и 10 нмоль 50Z раствора ДМСО в латеральный желудочек мозга по координатам: АР-8; L-1,4; Н-4. согласно атласа (Paxlnos, Watson, 1086) за 20 мин до аппликации пенициллина. Во 2 серии опытов изучение влияния ионов магния, никеля и их комбинации на фокальную ЭпА проводили путем их аппликации на область сенсомотор-ной коры. С этой цежью на поверхность твердой мозговой оболочки ' апплицировали фильтровальную бумагу, смоченную 1Z раствором натриевой соли бензилпевициллина (контроль), или раствором, содержащим 0,5Z MgS04 и 1Z пенишшиш^(1 группа). 0.1Z NICI2 и 1Z пенициллин (2 груша). 0.5Z MgS04. 0.1Z NICI2 и 1Z панициллин (3 группа). В каждой серии опытов осмолярность применяем .растворов корректировалась с помощью NaCl и была одинаковой у контрольных и опытных животных.

В специальной серии экспериментов изучали взаимосвязь между изменением.системного давления, вызываемого риодипином. и его антиэпилептическим действием. С этой целью запись ЗКоГ осуществляли с одновременной регистрацией артериального давления на физиографе ШР-4В (Narco Bio-systems, США). Измерение давления проводили с помощью пневматического датчика непрямым бескровным способом по методу Короткова на хвостовой артерии.

Острую генерализованную ЭпА создавали внутрибрюшинныы введением коразала в дозах 60 и 75 мг/кг. Определяли латентные периоды первых судорожных проявлений, конических и тонических (падение животного на бок) судорог, длительность этих судорог, тяжесть судорожной реакции, продолжительность жизни и леталь-. ность. Тяжесть судорожной реакции оцэнивали в баллах: 1 - ионические судороги: 2 - повторные тонические судороги: 3 - тони-

- и -

ко-клскические судороги с падением животного на бок; 4 - повторные тонико-клонические судороги и/или гибель животного.

Кшщинг осуществляли ежедневным внутриброшинным введением яивотнкм корззола в. дезе 30 мг/кг в одних и тех же условиях опыта в течение 23-45 даей. Ежедневно оценивали тяжесть судорожной реакции на введение коразола и выражали ее в баллах: 1 - вздрагивание (юхание) головы; 2 - редкие (отдельные) клонические судороги всего тола; 3 - серия клонических судорог всего тела или клонус передних конечностей; 4 - клонические судороги с подъемом на задние конечности (поза "кенгуру."); 5 - клонико-тонические судороги с ПЕденизм ;дшотного на бок; б - повторные тонико-кло-ничесгае судороги иУ или гибель животного.

Для изучения влияния различных препаратов и их комбинаций на разв»тае состояния ПСГ мозга было проведено пять серий от-' тов.

В 1 серии отитов использовали рандомизированные группы животных без предварительной выборки в отношении их чувствительности к коразолу.

Результаты исследования на рандомизированной группе животных выявили значительные различия в индивидуальной чувствительности животных к кергзолу, что затрудняло оценку развития состояния ПСГ мозга-при киндлинге в общей популяции экспериментальных животных при выведении, средних показателей и в связи с этим оценку эффективности применяемых антизпилептических средств. Поэтому, был разработан метод предварительной оценки животных по их чувствительности к внутрибрюшкнному введению коразола в минимально действующей дозе 40 мг/кг. фи введении этой дозы коразол вызызал судорожную реакцию тяжестью в 1-3 балла у 1-3 крыс из каждых 10 тестируемых животных. Животных, дававших судорожную реакцию на уютаннуп дозу, считали относительно более чувствительными к згадаптогэнному воздействию коразола. эти крысы были определены условно ка: чувствительные к коразолу. Животных, ко-торыз не давали судорсшной реакции на эту дозу, считали менее чувствительный! к Зиилептогенному воздействию, они были определены условно как ^аточувствительные к коразалу лсизотные. Кинд-лглг начинали через 1 неделю после тестирования путем ежедневного введения коразола в субконвульсивной дозе 30 мг/кг.

Во 2 серии опытов было проведено изучение особенностей раз-

вшш составит ПСГ мозга у относительно чувствительных и малочувствительных к коразолу животных.

В 3.серии опытов противосудоражные эффекты, препаратов изучали на животных, которых можно было считать относительно более чувствительными к судорожному действии коразола.

В 4 серии опытов с целью выяснения продолжительности сохранения ПСГ мозга после прекращения введения коразола животным периодически вводили субконвульсивную дозу коразола (30 мг/кг).

В 5 серии опытов определяли влияние препаратов на судороги у животных, подвергшихся коразадовому киндлытгу.

Максимальный электрошок вызывали током (60 Гц. 40 мА, длительность импульса 200 икс. длительность периода раздражения 400 мс для мышей массой 18-20 г и 500 мс - для ьашзй массой 21-24 г) от электростимулятора ЭНС-01 (Львов). который подавали через ушные электрода, представляющие собой два легких зажина типа "крокодил" с плоскими посеребренными пластинами.

Показателем эффективности- препаратов как при раздельном, так и при сочетанном их применении являлась доза, предупреждающая возникновение тонических экстензорных судорог задних конечностей у 50Z животных - ЭДбо. значение которой определяли общепринятым методом Lltchflid и Wllcoxon (1949), используя компьютерную программу (Кал Pul Fung, 1989). Комбинации препаратов исследовали при одинаковом соотношении их доз относительно ЗД50 препаратов при раздельном применении.

Нейролюксичносшь препаратов и их комбинаций определяли, используя метод вращающегося стержня "rotorod test" (Dunham, Mlya 1957). . Показателем нейротоксичности препаратов как при раздельном, так и при сочетанном их применении являлась доза, вызывающая у 50Z животных нейротоксический эффект - ТД50. значение которой определяли методом Lltchflid и Wllcoxon (1949), используя компьютерную программу (Каш Pul Fung, 1989). При сочетанном применении препаратов UI50 определяли соблюдая одинаковое соотношение их доз. относительно SGsc. ранее установленных для каждого препарата в отдельности.

Анализ в последующую стеклу противосудоражного и нейроток-сического действия ксккуксно пргиевявгихся препаратов проводили с использованием двух методов: Loewe (1953) в модификации Ю-И.Лисункива (1961) н метода, основанного па вычислении фракщ-

онного индекса (Eilsen et al.. 1954; Kerry et al., 1875).

Для оценки препаратов и их комбинаций вычисляла терапевтический тадекс (ТИ) как отношение ТД50:ЭД50-

Все препараты вводили per os с таким расчетом, чтобы пик их действия совпадал.

3.3. Биохимические исследования Концентрация свободного Са2+ в синаптосомах, наделенных из коры головного мозга крыс по методу (Hados, 1975). определяли с помощью флюоресцентного зонда квин-2/AM. Для этого свежеЕыдеденные синаптосомы суспендировали до конечной концентрации 2-3 мг бежг/ьи в растворе Кребса-Рингера (NaCl - 132 мМ. KCl - 5 мМ, МаНгРО - 5 мМ, MgS04 - 1.3 kW. глюкоза - 10 М, HEPES-трис - 20 Мм, пируват натрия - 0,1 мМ. pH 7,4 при 30°) с добавлением Са-ЭГТА буфера (0,2 мМ СаИг и 0,3 мМ ЭТТА). К суспензии добавляли раствор квин-2/AM в ДМСО до конечной концентрации зонда 50 мкМ и инкубировали при 30° в течение 30 мин. Затем суспензию разбавляли раствором Кребса-Рингера в 25 раз и инкубировали еще 30 мин при той же температуре. Полученную суспенано синаптосом использовали для определения [Са2+] i. Измерение флуоресценции квин-2 проводили с помощью спектрофлуориметра MPF-4 ("Hitachi", Ялогпя; авоз6 =340 нм, Хал =495 нм) при t-=30° в цилиндрических ■кварцевых кюветах объемом 0,5 мл с периодическим перемешиванием. Значение [Ca£'l")í определяли, исходя из формул, приведенных з работе Tslen и сотрудников (1982). Для разрушения синаптосом ис-Польгозали дигитокин (йО мкМ).

Зля изучение связывания -^-диазепама кору головного мозга и мозжечок от каждой крысы гомогенизировали на холоду в гомогенизаторе Поттера в 10 мл среды выделения (0,32 М сахароза, 50 мМ Трис HCl pH 7.4 np;¡ 4°С и 1 мМ ЭДТА). Гомогенат центрифугировали 10 шш при 1000г. осадок отбрасывали, а супернатан? вновь центрифугировали 20 мин rrp:i 20 000g. Осадки фракции грубых синапти-чесюк мембрас (в2) замораживали при -40°С. После оттаивания осадки суспендировали в 10 мл 50 мМ трис-HCl pH 7.4 и центрифугировали 20 мин при 20 OCOg. Полученный осадок вновь суспендировали з 4 цл того ке буфера. Все процедуры выделения выполняли при температуре 4°С.

К 0,4 мл суспензии синалтических мембран добавляли 0,1 мл водного раствора ^-диазепама (68 Ки/ммоль. "Airiersham". Англия;

конечная кснцентрация в пробе - 2 нЮ и инкубировали сыесъ в течение 40 пин при 4°С. Процесс связывания заканчивали фильтрованием образца через фильтр CF/B ("Whatman", Англия) и 4-ыя промывками по 2 мл холодного буфера. Счет радиоактивности фильтров проводили с использование сцинтиллятора ЖС-8 ("Реахим", СССР). Неспецифическое связывание определяли в пар аллель них пробах ь присутствии избытка 7-брои-десыетилдиазепама как вытеснителя. Специфическое связывание вычисляли как разшщу общего и неспецифического. Все пробы выполняли в двух параллелях. Количество белка в пробах определяли по методу Lowry и сотрудников (1S51).

Статистическую обработку полученных даншх осуществляли с помощью параметрических и непараметрических критериев. В основном достоверность различий между группами оценивали с применением t-критерия Стъпдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Глава 4. антизпшептические эмекты ПРЕПАРАТОВ НА модели сокальнпй эпилЕптачЕскай активности 4.1. Влияние препаратов на пешшилднн-индуиированнув эпилептическую активность

Аппликация пенициллина приводила к появлению-на ЭКоГ; характерного паттерна ЭпА. Через 3-7 ыин регистрировали появление первых ЛИР. амплитуда которых постепенно увеличивалась', через 6-15 мил появлялись судорожные иктальные разряды (ИР) - пачки высокочастотных и высокоашшггудных гиперсивхронизированных разрядов, через 25-30 мин наступала стадия выраженной судорожной активности, которая характеризовалась регулярным появлением ИР и продолжалась 30-40 мин. после чего происходило уменьшение частоты генерирования ИР. а также частоты и амплитуды ИИР. Средняя продолжительность существования очагов с момента аппликации пенициллина до полного исчезновения ЗпА составляла от 110 до 180 минут.

Введение верапаиима в дозе 10 иг/кг на фоне устойчивой генерации ИР в очаге (через 25-30 мин после аппликации пенициллина) вызвало урежение появления ИР у 80Z животных; у 301 крыс возникло полное подавление ИР. Во всех случаях отмечалось уменьшение частот генерирования и амплитуды ИИР. Средняя продолжи-

тельное::j существования эпилептического очага сокращалась.

В аналогичных условиях опыты введение тфедипивз в дозе 10 «-tvкг у 70Х животных вызвало подавление ЗпА, которое выражалось в умекьиензи частоты генер1;рования ИИР и ИР на 31 и 71X, соответственно, а!лкштудн ИИР - на 491 и сокращении продолжительности существования очага ЭпА - на 367.. Эффект нифедипива в дозе 30 vr/icr характеризовался только более значительным уменьшением частом генерирования ИР (на 927.).

Введение риодипина в дозе 1 мг/кг в тех'же условиях опыта в 100Z случаев ризяало подавление ЭпА в очаге в виде сникепия амплитуды и частоты генерирования ИИР на 56 и 50Z, соответственно, а также частоты появления ИР - на 63Z. Общее чисто IIP га все время существования очагов ЭпА у животных данной группы снизилось еэ 522, а время существования очага - на 25Z. Увеличение дозы риодипина до 2 мг/кг вызвало подавление ЭпА в сгзаге в 877. случаев. Амплитуда и частота появления ИИР уменьшаюсь на 37 л 577., соответственно, частота появления ИР - на 951. Таким образом, эффект подавления ИР под влиянием риодипина был более выражен в дозе' 2 мг/кг. Продолжительность существования эпилептических очагов, а текжг общее число ИР было меньшим, чем у животных контрольной группы. Дальнейшее увеличение дозы препарата до 5 мг/кг не сопровождалось более, сильным подавлением ЭпА.

Предварительное введение риодипина (за 30 мин ло создания очагов ЭпА) увел1гчшзаяо на 367. латентный период возникновения ИР в очаге, уменьшало на 65/Т общее число ИР без изменения их длительности. сокращало на 21Z продолжительность существования очагов ЭпА.

Введешь Fit 200-110 в дозе 2 кг/кг (внутрибршинно) па фоне устойчивой генерацией ИР в очаге вызвало подавление ЗпА у боль-пшнетва (у 6 из 7) животных. Этот ьффэкт у 3 животных наблюдался черес 20 М1ш после введения препарата, у 2 - через 10 мин, у одной крысы отмечено полное подавление ИР и практически полное по-^nueroie JffiP. ебь.еэ число IP у животных данной группы га все время существования очага Снло на 387. меньве, чем у животных контрольной группы. V 3-х крыс уменьшение числа ИР сопровождалось увеличением числа ИИР, но с белее низкой амплитудой. Продолжительность существования очага ЭпА у подопытньн жгаотних сокращалась на 207, частота генерирования и ашлитуда ИИР е

среднем по всей группе не изменялась.

Предварительное (за 25 минут до аппликации пенициллина) введение ЯМ 200-110 в дозе 5 мг/кг (внутрибрюшинно) полностью предотвращаю развитие ЗпА у 2 из 10 животных (отсутствие ИР и НИР). Вместе с.тем у животных, у которых ЭпА возникла, препарат вызвал достоверное увеличение латентного периода появления первых ИИР (на 372). Вследствие этого частота генерирования и амплитуда ИИР в первые 15-20 мин после аппликации пенициллина у животных данной группы были меньше, чем у крыс контрольной группы, в дальнейшем эти показатели у животных обеих групп достоверно не отличались. ИР не возникли у 2 животных. У 6 крыс была отмечена тенденция к увеличению латентного периода появления первых ИР. Общее число ИР у животных, получавших препарат, по сравнению с контрольными крысами было достоверно меньше (на 402). У 4 из 6 крыс паттерн ИР отличался меньшей частотой генерирования разрядов в пачке: от 2-3 в 1 с у контрольных животных до 1 в секунду у подопытных животных. Препарат достоверно на 351 сокращал продолжительность существования очага ЭпА. Отмеченное влияние препарата на паттерн ИР сохранялось и при • уменьшении дозы до 1 мг/кг. . ,,

Предварительное введение ЯМ 200-110 в латеральный желудочек мозга'в дозе 10 нМоль выззадб увеличение латентного периода Ьо-явления первых ИИР на 602, уменьшение на 672 числа ИР и на 402 -амплитуды ИИР, а также сокращение на 242 продолжительности существования очагов ЗпА.

Ядияяиа ионов магния и никеля на ЗпА. При аппликации пенициллина с нагнием (1 группа) частота генерирования и амплитуда ИИР были снижены по сравнению с соответствующими показателями у контрольных животных (пенициллин). ИР не возникли у 4 из 7 животных. у оставшихся животных число ИР за время существования очага было та 802 меньше, чем у контрольных животных. Продолжительность существования очагов сокращалась на 36.52. , При аппликации пенициллина с никелем (2 группа) у одной крысы не возникала ЭпА (отсутствие ИИР и ИР), у других 8 животных возникай только ИИР. Частота генерирования и амплитуда ИИР были значительно меньшё по сравнению с аналогичными показателями в группе контрольных животных (пенициллин). Продолжительность существовали очагов ЭпА сокращалась на 33,62.

При сочетанном применении магния и никеля с пенициллином (3 группа) наблюдалось более выраженное подавление ЭпА ж сравнению с раздельным применением Мг2+ и Н12+: увеличивался латентный период возникновения ИИР, значительно больше снижалась частота генерирования и амплитуда КИР, а ИР не возникли ни у одного животного, значительно больше (на 53%) сокращалась продолжительность существования очагол ЭлА.

Бведение У.0С-1Л212 в дозе 2 мг/кг на фоне устойчивой генерации ЕР вызвало уменьшение на 77Z частоты генерирования ИР. Увеличение дозы до 5 мг/кг не вызвало усиления антззпилептичес-кого действия. Дальнейшее увеличение дозы до 10 мг/кг привело не только к снгаению частоты генерирования ИР на 40%. но и к уменьшению частоты и амплитуды MP на 402 и на 34%, соответственно; продолжительность существования очагов ЭпА была в 2 раза меньше, чем у животных контрольной группы.

Предварительное введение Й0С-1.1212 в дозе 10 мг/кг за 25-30 мин до создания "очагов ЭпА оказывало антиэпнлептическое действие в виде снижения на 622 частоты генерирования ИИР на поздних стадиях существования очага (60-90 мка) и сокращения на 12Z продолжительности его существования.

Введение глутгвпироиа в доза 10 мг/кг на фоне устойчивой генерации ИР в очаге не влияло на ЭпА. - Увеличение дссы препарата до 30 мг/кг привело к уменьшению частоты генерирования ИР уже через 10 мин после введения. У двух животных наблюдалось полное подавление ЭпА через 40 и 70 мин после введения препарата. Дальнейшее увеличение дозы препарата до 60 да/кг вызвало в 100% случаев подавление ЭпА в очаге, которое выражалось в уменьшении частоты генерирования ИР на-40% и сокращении продолжительности существования очагов на 49%.

Введение валъпроата. натрия в дозе 150 мг/кг в тех же условиях- опыта вызвало рптиэпилептическое действие в вазе снижения амплитуда ИКР на 17% и уменьшении частоты генерирования ИР на 24%. Увеличение дозы препарата до 200 мг/кг сопровождалось усилением его протавосудорсжной зкт'.гвнсстн и выражалось з уменьшении на 65% а)л!литуды ИИР (в контроле - снижение на 25%) и практически полном подавлении ИР.

В анаиспг-пйк условиях опыта яведенме дигзепама в дезе 0,1 •«¡г/кг оказалось не эффективным. Препарат з дозе 0,25 мг/кг

зывал антиэпилептическое действие в виде подавления частоты генерирования ИР в очаге, которое наблюдалось сразу после введения. Увеличение дозы .препарата до 0,5 ыг/кг вызвало,, более значительное подавление ЗпА, которое выражалось не только в уменьшении частоты генерирования ИР (на 33Z), но и в снижении частоты генерирования' и амплитуды ИИР (на 15 и 26Z, соответственно). Дальнейшее увеличение дозы препарата до 1 мг/кг не оказывало более значительного подавления ЭпА в очаге.

Фенобарбитал в дозе 30 мг/кг, введенный в тех же условиях опыта, вызвал уменьшение частоты генерирования ИР на 877. и ИИР -на 107..

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о способности исследуемых органических и неорганических блокаторов Са-каналов и препаратов (КОС-1.1212 и глуталлрон), не обладающих этими свойствами, оказывать противоэпилептическое действие на модели очаговой пенициллин-индуцированной ЭпА, что согласуется с данными других авторов (Waiden et al., 1085; Waiden, Spackmann, 1986; Witte et al., 1987; Speckmann et al., 1989), показавших эффективность действия антагонистов Са2+ (верапамила, D 890) против этого типа ЗпА.

Следует отметить, что наиболее выраженным противоэпилепти-ческим эффектом препаратов являлось ослабление генерирования ИР. С одной стороны, это ыожно объяснить тем, что возникновение ИР сопровождается значительно большим (примерно в 2 раза) падением внеклеточной концентрации Са2+, чем возникновение ИИР (Ршгл1п et al., 1986; Hsblltz. Heinemann, 1987). Вероятно поэтому, блокато-ры Ca-каналов предотвращают возникновение в первую очередь ИР. Преимущественное подавление ИР обнаружено нами и другими авторами (Festoff, Appel, 1968; М.Б. Рехтман и др., 1980) и при исследовании противосудорсдного действия таких антиконвульсантов,. как вальпроат натрия. диазепа^. фенобарбитал и дифенилгидантоин. в сложный механизм действия которых входит и блокада Са-каналов нейрональных мембран (Woodbury. 1980; Rampe et al., 1987). С другой стороны, преимущественное подавление ИР оказывают препараты, не обладающие свойствами блокаторов Са-каналов. По-видимому, данное обстоятельство требует специальных исследований.

4.2. Влияние препаратов на 4-AI7-индуцированную эпилептическую активность

Аппликашч 4-АПа приводила к характерному паттерну ЭпА: через 1-3 шн гоячлялся судорожный IIP - панка высс:шчастотных гиперсянхроннзирозанвых разрядов; затем происходило постепенное увеличение частоты генерирования и длительности ИР. а также увеличение амплитуды отае.тьных разрядов в пачке. Продолжительность существования очагов ЭпА с момента появления первого ИР до окончания яооледнего составляла в среднем 40-50 мин.

Введение риодцлиза в дозе 1 мг/кг на фоне развивающейся ЗпА после появлени 1 2 ИР вызвало уменьшение числа ИР на 32Z и их сОщей длительности за время существования очага - на 50Z.

Введение гдутзпирона в дозе 60 ыг/кг в аналогичных условиях опыта приводило к уменьшению числа ИР на 381 и их общей длительности - на 481.

Предварительное (за 1 ч до аппликации 4-АПа) введение гду- * тапкрена в дезе 30 мг/кт вызвало у 501 животных подавление ЗпА в очаге. У этих животных уменьшалась частота генерирования ИР на 46*.. общая длительность шзрядоз за время существования очага -на 527. и продолжительность существования очагов ЭпА - на 421. Дальнейшее увск-чение дозы препарата до 60 иг/кг в 100% случаев вызвэлс псдав;:е:п!е ЭпА з очаге, тоторое выражалось в уменьшении частоты генерирования ИР ка 571, общей длительности разрядов -на 537. и сокращении гременя существования счагев ЭнА - на 41Z...

Предварительное (за 33 ш до алплккашш) введение вальлро-игд ^алрця в дозе 80 мг/кг вызвало уменьшение средней и общей длительности ИР за время существования очага на 35 и 532, соответственно. Бри увеличении дозы препарата до 150 ыг/кг наблюдалось " более значительное ингибирование ЭпА в очаге. Это выражалось в увеличении латентного периода появления первого ИР на 1.102, уменьшении числа ИР на 527.. общей длительности ЕР за время существования очага - на 521 и продолжительности существования очагов ЭпА - на 521.

4.3. Влияние препаратов на стрихнин-индуцированную эпилептическую активность

Аппликадня 0,5Z раствора еярихнива на твердую мозговую оболочку коры больших полушарий головного мозга крыс приводила к появлению ЭпА: через 30-60 с появлялись отдельше и сгруппированные ИКР, амплитуда и частота которых постепенно увеличивались. а через 25-35 мин - постепенно уменьшались. Прсдолжитель-

вость существования очагов ЭпА с момента аппликации стрихнина до полного исчезновения ИКР составила 40-60 мин.

Аппликация 1.5Z раствора сщрштша приводила к формированию более сильного очага ЗпА: через 20-60 с на фоне спонтанной ЭКаГ появлялись отдельные и сгруппированные МИР, а также ИР. Продолжительность существования очагов ЗпА составила 55-70 минут.

Введение рцодишнз в дозах 1 и 2 мг/кг на фоне развивающейся ЭпА в относительно "слабых" и "сильных" очагах, вызванных аппликацией 0,5 и 1,52 растворов стрихнина, соответственно, не оказывало влияния на амплитудно-частотные характеристики и продолжительность существования очагов ЗпА.

В аналогичных условиях опыта введение КОС-1.1212 в дозах 2 мг/кг и 10 мг/кг и гдуталирона в дозах 30 к 60 мг/кг также оказалось неэффективным. .

Предварительное (за 30 мин до аппликации стрихнина) введение этих же нрепаратов в тех же дозах также не влияло на развитие и характер ЗпА в относительно "слабых" и "сильных" очагах.

4.4. Влияние гипотензивного действия рнодипина на активность зпклептогевяого очага

Противосудоражные эффекты 1,4-ДГПое могут быть^связазы с их гипотензивным действием, которое может приводить к критическому снижению энергетического метаболизма мозга через уменьшение кортикального кровотока и тем самым к подавлению судорожных разрядов. Это обстоятельство не всегда учитывалось в работах других авторов (Meyer et al., 1S87; Vezsani et al., 1988). В связи с изложенным быха проведена специальная серия экспериментов, в которой запись ЗдА осуществляли с одновременной регистрацией давления.

Как показали контрольные опыты, введение риодипина интакт-ныы крысам в дозе 1 мг/кг-вызвало незначительное снижение давления (на 7-14Z), при введении 5 мг/кг отмечалось более значительное снижение давления (на 252. и на 47Z - у 1 крысы). Это снижение было наиболее выражено в течение первых 3-10 мин после введения.

После аппликации пенищ* плита регистрировали появление ЭпА в очаге и увеличение давления на 5-45 ш рт. ст. у всех исследуемых животных. Введение препарата на этом фене снижало давление до исходного уровня. Следует оту-тихь, что наиболее выраженный

противозпилептический эффект препарата в отношении частоты генерирования НИР и ИР отмечался не в первые минуты после введения, когда наблюдается наибольшее падение давления, а через 20-30- минут, т.е. в период его восстановления. Таким образом, подавление ЭпА в очаге не коррелировало со временем и степенью падения давления. Тагай вывод согласуется с данными о том. что противоэпи-лелтичесгсгй эффега препарата в дозах 1 и 5 мг/кг практически одинаков, несмотря на Солее значительное снижение давления при дозе 5 мг/кг.

Таким образом, полученные нами результаты свидетельствуют об отсутствии взаимосвязи между изменением системного кровяного давления под действием риодипина и снижением ЭпА в очаге. В пользу такого вывода свидетельствует и тот факт, что эффективность противосудоражного действия PN 200-110 и других блокаторсв гютенциад-чувстЕителызых са-каналов (De Sarro et al., 1988) на ЭпА примерно одинакова как при введении их в латеральный желудочек мозга, так и при системном введении. Вместе с тем, несмотря на полг/ченнче результата, вопрос о возможном влиянии снижения давления иод действием этого и других 1,4-ДГПоз на активность эгилептогекного очага остается открытым и требует дальнейшего исследования.

4.5. Сравнительная характеристика антизпилептических эффектов препаратов на модели фокальной пекшдшш-индуци-рованной эпилептической активности

По зффегаивности воздействия на отдельные характеристики очага ЭпА препарата мочно расположить в следующем ряду:

а) по эффективности подавления частоты генерирования ИИР -риодипин > ИОС-1.1212 > нифедипин > вераламил г диазепам >, фенобарбитал;

PN 200-110, глутапирон и вальпроат натрия - не влияли на частоту генерирования ИИР.

б) по эффективности снижения амплитуды ИИР - вальпроат натрия > риодипии i- нифедипин > диазепам г ИОС-1.1212;

PN 200-110, фенобарбитал, вераламил и глутапирон - не влияли на амплитуду ИИР.

в) по эффективности подавления частоты генерирования ИР -вальпроат натрия > фенобарбитал > PN 200-110 > риодипин > нифедипин > диазепам > глутапирон > ИОС-1.1212 > вераламил

г) по степени сокращения продолжительности существованья очагов ЭпА - глутапирон > нифедипин >✓ ИОС-1.1212 •>, верапамил г-риодипин •>, И 200-110 ъ фенобарбитал;

вальпроат натрия и диазепам не сокращали продолжительность существования очагов ЭпА.

Глава 5. АНТИЗПШЕПТИЧЕСКИЕ ЭМОТЫ ПРЕПАРАТОВ НА МОДЕЛИ ГЕНЕРАЛИЗОВАННОЙ ЭПИЛЕПТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ 5.1. Влияние препаратов на коразод-ину/хмрованную эпилептическую активность Введение коразола приводило к развитию генерализованной ЭпА: через 25-50 с появлялись первые судорожные проявления з виде вздрагивания головы или отдельных ыыщц туловища, которые переходили в клонические вздрагивания всего тела. Затем следовали тонические судороги передних конечностей с подъемом животного на задние лапы (поза "кенгуру"). Завершались судороги тонн-ко-клоническим припадком с падением животного на бок и фазой постпристушой депрессии. г

Нифедипин в дозе 10 мг/кг. введенный за 30 мин до инъекции коразола. уменьшал длительность клонических судорог на 777., увеличивал на 85Х время наступления тонических судорог, а также уменьшал-их. длительность на 241 по сравнению с группой контроль- -ных животных. Летальность в группе контрольных животных составила 54.8Z, а в группе подопытных животных - 20Х.

Риодилан в дозе 1 мг/кг в тех же условиях опыта увеличивал на 327. латентный период первых судорожных проявлений и на 5QZ -латентный период наступления клонических судорог, уыеапал число животных с тоническими судорогами, снижал тяжесть судорог и летальность. Введение риодипина в дозе 2 мг/кг не вызвало усиления его противосудорожных эффектов.

ИОС-1.1212 в дозе 2 мг/кг увеличивал латентный период первых судорожных проявлений на 40X. задерживал наступление клонических и тонических судорог на 34 и 327., соответственно. Летальность в груше контрольных животных составила 71Z, в группе подопытных животных - 507.; продолжительность жизни у' контрольных животных была почти в 3 раза короче, чем у опытных животных. Увеличение дозы препарата до 10 иг/кг не оказало существенного влияния на усиление его антиэпилептического эффекта.

Глутпироя в дозе 10 мг/кг. введенный за 1 час до инъекции коразола, задерживал развитие тонических судорог на 651 и уменьшал число псгкбшх животных ка 757. Введение препарата в той же дозе за 3 часа до инъекции коразола вызвало увеличение латентно-. го периода первых судорожных проявлений, а также клонических и тонических судорог - на 33, 26 и 471, соответственно, увеличивало в 2,5 раза продолжительность жизни животных, снизало на 17% тяжесть судорог. Увеличение дозы препарата до 20 мг/кг не приводило. к уеиешто его антизпилэптического действия. Следует отметить, что аятгапклептический эффект препарата, введенного за 1 и 3 ч до инъекции коразола, был практически одинаков.

Бзлъпрозт ивтрая в дозе -70 мг/кг. введенный за 20 мин до инъекции гаразола, оказывал антизпилептическое действие в виде снижения тяхести судорог и задержки развития тонических судорог. В дозе 80 мг/кг он пронятая более значительный антиэпилептический эффект, который выражался в увеличении на 21" латентного периода первых судораапк проявлений- и ей 18% - латентного периода наступления клонкческих судорог, а таске значительной (в 3 раза) зздеряке начала развятрч тонических судорог и снижении на 48% тяяести судорог. В группе опытных животных после введения кора-зола не погибла ни сдна крыса, в то время, как в группе контрольных гсавотик гибель составила. 50%.

?чазепач в дозе 0,1 мг/кг увеличивал латентный период первых судорсганых проявлений на 28%, задерживал развитие клоничес-гак судорог и уиеньсал яч длительность на 25 и 41%, соответс-Твешю, сшиал тлжссть судорог на 29%, вдвое уменьшал число погибших животных и з 1,5 раза увеличивал продолжительность их жизни. Увеличение дозы диазепама до 0,25 мг/кг предотвращало гибель 80% зкивотекх. Наиболее выраженный антиэпилептический эффект был выявлен при применении 0,5 мг/кг диазепама; в этом случае . только у едного кнвегнего наблюдали тонико-¡атонические судороги с па^ениса зпгзотного па бок и ни одна крыса не погибла.

Фепобгрбшпая в допе 10 мг/кг снижал тяжесть судорог на 46% и уменьпаз число погибах иивотных на Б0%. В дозе 15 мг/кг пре-.пзрат вызван более значительное подавление ЭпА. которое выражалось в угелшчелип латентного периода первых судо^ххоап проявлена па 657, задержке развития клонических и тонически судорог на 19 и 16%, соответс-гвонпо. уменькгн'.ш д-ютелъкоети клонических

судорог на 14,52, снижении тяжести судорог на 632; в этой группе только у одного животного наблюдали тонико-клонические судороги и ни одна крыса не погибла. Увеличение дозы до 30 мг/кг вызывало более значительное подавление ЭпА; в этом случае ни у одного животного не наблюдали тонико-клоняческих судорог.

5.2. Сравнительная характеристика аитизпилептических эффектов препаратов на модели генерализованной эпилептической активности

По степени воздействия на отдельные характеристики ЭпА препараты можно расположить в следующем ряду:

а) по длительности задержки первых судорожных проявлений -диазепам > фенобарбитал > ИОС-1.1212 > глутапирон >„ риодипин > вальпроат натрия;

нифедипин не влиял на латентный период первых судорожных проявлений.

б) по длительности задержки развития клонических судорог -диазепам >,. риодипин > ИСС-1.1212 > глутапирон > фенобарбитал >„ вальпроат затрия:

нифедипин не оказывал влияния на развитие клонических судорог. :

в) по длительности задержки развития тонических судорог -вальпроат натрия > ИОС-1.1212 > нифедипин > глутапирон > диазе-. пам > фенобарбитал;

риодипин не оказывал влияния ка развитие тонических судо-

' рог.

г) по эффективности снижения тяжести судорог - диазепам фенобарбитал > вальпроат натрия > риодипин >, глутапирон;

КОС-1.1212 а нифедипин не оказывали влияния на тяжесть судорог.

Глава 6. АНТИаШЕПТИЧЕСКИЕ ЭИЕКТЫ ПРЕПАРАТОВ НА МОДЕЛИ (КОРАЗОЛОВОГО) ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОГО КИШШШГА

У контрольных рандомизированных животных 1 серии без предварительной выборки в отношении чувствительности к конвульсанту, которым коразол вводили после физиологического раствора, судороги тяжестью в 1 балл регистрировались на 5-й день после ежедневного введения коразога. Максимальное проявление судорожной реакции (до 6 баллов) отаечено с 6-го по 10-й день.

Введение препарате® значительно задерживали развитие судорог. Судороги возникли лишь после 14 инъекции керазола в условиях предварительного введения верапамила (10 мг/кг), сульфата магкия (0,15 ил 5% р-ра/100 г массы животного) и ИОС-1.1212 (10 мг/кг) и лосле 16 5шъекции коразола в условиях предварительного введения риодшшна (2 мг/кг): их тяжесть составила 1 балл. В дальнейшем происходило увеличение тяжести судорог у животных всех групп, но тяжесть судорог (усредненный балл) у животных, получавших антагонисты кальция и ИОС-1.1212, была меньшей по сравнению с соответствующей группой контрольных жиеотных. Различие наблюдалось вплоть до 21-23 дня. В последующие дни различий з группах контрольных и опытных животных не отмечалось.

Таким образом, введение верапамила, риодипина. ИОС-1.1212 и магния задерживало развитие состояния ПСГ мозга.

Известно, что при фармакологическом киндлинге» как и при' здектростимуляционном, наблюдаются не только видовые (Racine, 1978), но и индивидуальные различия в чувствительности животных к эпидептогениым воздействиям (Leech, Mcintyre, 1976; Racine et al., 1973; Sanbere, Ossekopp. 1978; Zaide, 1974). Отмечена большая вариабельность числа злектростимуляций мозговых структур (Le Gal La Salle, 1981: Sanberg. Ossenkopp, 1978) и системных введений эпилептогенов (А.А.Шандра и др., 1983), необходимых для достижения генерализованных тонюю-клонических судорог у животных. Указанные различия в индивидуальной чувствительности затрудняют оценку развития судорожной готовности при киндлинге в общей популяции экспериментальных животных при выведении средних показателей и в связи с этим оценку эффективности применяемых антиэпн-лептических средств. Поэтому был разработан метод предварительного тестирования животных по их чувствительности к коразолу (см. методику). Проведенное исследование( 2 серия) показало, что развитие ПСГ ыозга у животных относительно чувствительных и малочувствительных к коразолу осуществляется по-разному. ' Так, в группе животных чувствительных к коразолу, судороги тяжестью 1 балл появлялись уже после 2-й инъекции (26Х животных). У животных с низкой чувствительностью к коразолу такая реакция была отмечена только после 6-й инъекции (20Z животных). Судороги в процессе киндлинга возникли только у половины крыс малочувствительных к коразолу и у всех животных, чувствительных к коразолу. Ла-

■рентный период наступления первых судорожных проявлений после-каждой ежедневной инъекции коразола с 12-го по 18-й день был ■меньше у животных чувствительных к коразоду по сргьиошао с таковым у животных с низкой чувствительностью к коразоду. Тагам образом, полученные результаты показали, что индивидуальные различия между животными по их чувствительности к коразсиг/ могут приводить к значительному разбросу данных при проведении экспериментов на рандомизированных группах животных.

Учитывая вышеизложенное, з 3 серии опытов изучение влияния препаратов на развитие состояния ПСГ :.:озга проводила на предваг рительно отобранных животных, которых место было считать более чувствительными к судорожному действию коразола. Введение шфе-дипкна, ИОС-1.1212, а также верапашша, кагвля либо их одновременно задерживало (на 1 день) развитие судорог. Примечательно, что у животных, получавших препараты, различия в тяжести судорог по сравнению с контрольными животными значаде (в течение 10 дней) не проявлялись к стали выражены в более поздкъэ сроки. Это может быть объяснено тем, что у животных, чувствительных к кора-золу. происходит более значительная активация Са-каналоз, ь связи с чем препараты становятся эффективными лишь при сравнительно длительном их применении. Различия в тяжести судорог сохранялась и при дальнейшем введении коразола вплоть до 6-7 недели, причем у контрольных крыс отмечали дальнейшее повышение тяжести судорог (4 балла), в то время как у опытны:-; азвотных судорссаш реакция сохранялась на уровне 1 балла. Нифедши^ в псслэдуекой дозе (10 мг/кг) был не эффективен.

В А серии опытов изучение продолжительности сохранения состояния БСГ мозга после прекращения введения коразола путем периодического введения субконвульсивной дови (30 мг/кг) показало, что ПСГ сохраняете.1; у крыс в течение всего срока нэблодгния - 11 месяцев. Тяжесть судорог у животных после ококакг. киндлинга практически не изменялась' в течение всего срока наблюдения.

В 5 серии опытов определение влияния препаратов на судороги у животных, которые посла окончания киздлгага реагировали Еа субксЕвульсивнуй дозу коразола (30 кг/кгj судораяюй реакцией в 3-5 балла, доказало, что введете всрацаниа (15 к 30 мг/кг), нйфедииаг (10 и 30 vt/кг) , ИОС-1.1212 (2 к 10 кг/кг) и риодши-вз (2 и 10 :,с7::г; не сстгглдо тяжссл! судорог в итвет >:а сгубкон-

вульсивную дозу ¡соразола даже при использовании их в увеличенной з 2-3 раза дозе: их интенсивность была такой же, как и при введении одного корагола. Таким образом, результаты наших исследований и данные других авторов (McNaroara et al., 1988; Sato.et al., 1990) свидетельствуют о том. что препараты, подавляя развитие ПСГ ' мозга, вместе с тем не влияют существенным образом на реализации сачой судорожной реакции. С другой стороны, судороги у животных, подвергшихся киндлингу. могут иницироваться другими механизмами, чем активация кальциевых потенциал-зависимых или рецептор-управляемых (№ЯЭА) каналов, о чем свидетельствуют и данные McNamara с сотрудниками (1988). На основании проведенного исследования можно сделать вывод, что судороги, возникающие после однократного введения коразола, и судороги, вызываемые кера-золом в условиях юшдлинга, неоднозначны.

Совокупность получении данных свидетельствуют о том, что 4 органические антагонисты кальция - Mg2+ и Ni2+, а также неорганические блокаторы потенциал-зависимых Са-каналов - верапамил, относящийся к классу фенилалкиламинов, нифедипин и новые 1,4-ДГПы - рнодипин. ИОС-1.1212 и PN 200-110 способны оказывать противоэгооептичеасое действие на моделях фокальной пенициллин-и 4-АЛ-индуцированной ЭпА, острых генерализованных коразоловых судорог и. на процесс хронической .эпилептизации мозга (коразоло-.. вый кшщлинг).

Глава 7. БИОХИШЧЕСХИЕ КОРРЕЛЯТЫ СЛЕДОВЫХ ПРОЯВЛЕНИЙ ПОСЛЕ КИНДЛИНГА

7.1. Влияние вераламида и риодипина на содержание свободного кальция в синаптосомах мозга крыс после окончания киндлинга Вераламил, нифедипин и другие антагонисты кальция ;являются мощными и селективными ингибиторами кальциевого тока через по-тенциалзависимые Са-каналы в гладко-мышечных и сердечных клетках (см. обзоры Fleckensteln, 1983; McDonald et al., 1994). Влияние органических антагонистов Кальция, особенно 1.4-ДГПов, на некоторые нейрональные препараты, включая синаптосомы. остается достаточно спорным, поскольку имеются данные, свидетельствующие об отсутствии ига малой эффективности этих препаратов (Rampe et al.. 1984; Mlddlemlss. Speddlns. 1985; Carvalho, 1987; Maloteaux

et al.. 1988; Kobayashl et al.. 1092). Расхождения могут быть связаны, с одной стороны, с различиями в распределении 1,4-ДТП-чувствительных и нечувствительных потенциалзависимых Са-каналов в нейронах различных областей мозга, которые являшсп объектом исследований (Thayer, et al., 1986), и с i-ендевцией большей локализации их ь соме нейрона, чем в теришшях (Sleke-vltz et al., 1986). С другой стороны, с тем, что исследований проводились, главным образом, на нейрональной ткани здоровых животных, а не животных, подвергшихся какому-либо воздействию, которое так или иначе влияет на активацию Са-тока. (Carvaliio, 1987; Maloteaux et al., 1988; Rampe et al., 1984). Следует отметить также, что при зпилептизации вход Са2+ отмечен в дендритах и в соме нейронов (Traub, Lllnas, 1979), изменения же содержания Са2+в нервных окончаниях практически не изучены.

Результаты нашего исследования показали, что при развитии ПСГ мозга в условиях коразолового гашдлинга наблюдается узеаичг-ние содержания свободного Са2+ в спнаптосомах мозга крыс в среднем на 602, причем этот эффект обнаруживается через 7 дней после окончания введения коразода. Он не связан, таким образом, с непосредственным действием коразсиа, о чем говорит также к тот факт, что данный эффект отсутствует после однократного введения коразола даже в дозах, в 2-2,5 раза превышающих субконвульсивные. Этот эффект на связан с сами судорожным процессом, так как после судорог, вызванных однокра-гным введением коразола, он не возникает. Все эти особенности позволяют прийти к выводу, что устойчивое накопление свободного Са2+ в синаптосомах связано с пластическими перестройками в нервной ткани, возникающий! при хроническом воздействии конвульсанта в субконвульсивных дозах (кшэдшнг), и обеспечивающих устойчивое состояние ПСГ мозга.

Введение антагонистов кальция не только задерживало развитие судорог к снижало тяжесть судорог в процессе киндлинга, но и предотвращало увеличение концентрации свободного Са2+ в синаптосомах.

• 7.3. Связывание ^-диазепама в головном мозге крыс спустя 11 месяцев после киндлинга

Изучение связывания 3Н-диазепама с силаптическими мембранами мозга крыс показало достоверное его уменьшение в мозжечке на 141. причем этот эффект обнаруживается через 11 месяцев после

окончания кищшшга. Эти изменения не связаны с непосредственным действием коразола, поскольку данный эффект отсутствует после однократного введения коразсша даже в дозах, в 2-2,5 раза превышающих субконвульсивные. Более того, острое введение коразола вызвало повышение связывания 3Н-диазепаыа на 19,52. Эти данные наводят на мысль, что острые судороги, возникающие после однократного введения коразола и судороги, вызываемые коразолом в условиях киндлинга. имеют по-видимому разную природу и разные условия ее реализации. В этом отношении представляет интерес и тот факт, что у крыс линии Круппшского-Малодкиной. генетически предрасположенных к аудиогенным судорожным припадкам, связывание 3Н-диазепзма с бензодиазепиновыми рецепторами в мозжечке через сутки после припадка также снижалось на 30-351 (В.В.Жулин. М.Г.Плескачева, 1991). Представленные данные подтверждают вывод о том, что механизмы хронического эпилептогенеза (в данном случае в виде киндлинг-вызванной коразоловой ПСГ мозга) и судорожной реакции, неодназначны.

Таким образом, совокупнрсть данных, полученных в злектро-физиологических и биохимических исследованиях, свидетельствует о важной роли Са2+ в патогенезе экспериментальной эпилепсии, об эффективности некоторых блокаторов Са-каналов и 1,4-1ГПов,, не. - обладающих зтши свойствами, в ингибирований ЗпА,а также о цё-лесообразности их включения в КПТ эпилепсии* • ' ^

Глава 8. РАЗРАБОТКА КСШЛЕКСНСЙ ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЙ ТЕРАПИЙ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ЭПИЛЕПСИИ 8.1. Сочетанное применение препаратов, ингибирующих Са-зависимый эпилептогенез Исследования эффективности препаратов блокаторов потенциал-чувствительных ' и рецептор-управляемых Са-каналов, а также 1.4-ДГПов, не обладающих этими свойствами, показали, что проти-восудорожной активностью по тесту максимального электрошока обладают дифенилпиперазин - флунаризин. 1,4-ЛГПы - нифедишш, рио-дипин - и неконкурентный антагонист рецепторов ШЛА МК-801. Среди 1.4-ДГПов. не являющихся блокаторами Са-каналов. противосудо-рожную активность проявлял только ИОС-1.1212, а глутапирон оказался неэффективным. Блокаторы Са-каналов верапамил (фениалкила-мин) и дилтиазем (бензотиазепин) в данных условиях опыта также

-за-

были неэффективными. Различия в противосудсрогной з£фективнссти антагонистов кальция могут быть связаны с тем. что антагонисты кальция из разных групп связываются с различными спецч>ячеокюги участками Са-канала. Известно, что антагогшсты кажьцил, действующие на внешний участок Са-канала (флунаризда, 1,4-ДГЫ), оказывают более мощный эффект, чем вещества, действующие на внутренний участок Са-канала (дилтиззем, вэрапамрл) или на внутриклеточные ыембраш (НА 1004) (Б'о<згтап & а1., 1932; Босй'гашс], 1934; Нозеу, 1_агс!ипзк1, 1988). Вместе с тем показано, что дилти-азем (1,5 и 5 мг/кг внутрибряшинво), но не верзламил, увеличивает порог злектрошоковых судорог (Сгисгяаг е1 а!., 1933). Поэтому в дальнейших опытах мы использовали дилтиазе..! б дозе 5 »¿г/кг.

Оценка эффективности противосудорохного действия двух совместно применяемых препаратов, проведенная с помощью изобологра-фического анг.тгиза, показала, что в случае соче^анного применения Олскаторов Са-каналов из группы 1,4-дГПов - нифедгсшна и пиоди-пина имеет место синергизм действия типа потенцирования: ЭД50 каждого препарата в комбинации мала;о было уменьшать ь 3,6 раза. Оценка эффективности противосудорскною действия, проърденная с помощью вычисления индекса СЩ, подтверждает потенцирующий характер взаимодействия между этими препаратами.

При" сочетанием применении 1,4-ДГПов риодилика - блокатора Са-кавалов и ИОС-1,1212, не оОладаяг,еге этими свойствами, имеет меото аддитивный эффект: ЭД50 препаратов в зток комбинации мокно било уменьшить только 2,2 раза. Вычисление индекса данной

комбинации препаратов также свидетельствует об аддитивном характере взаимодействия.

Сочэтанное применение аятагокистоз кальция из разп^; групп - нифедипина и дилткзэема - привело к синергизму действия типа потенцирования: ЭД50 для нифедипина в этих условиях могла быть уменьшена в 4,9 раза. Такой жэ зф^ект отмечен и при сочетаыно^ применении нифедипина с Х1К-801:~ ЭД50 каждого препарата в комбинации могла быть уменьшена в 6,3 раза.

Наибольшее потенцирование найщцали в случае применения б.-экатора 1,4-ДТП-чувствительного Са-канала риодишка и неконкурентного антагониста рецепторов КМЛА МК-В01: ЭДзо каждого препарата б комбинации маяно было уменьшить з 45 раа. Оценка противо-судоролшого действия препаратоз с применением индекса ОЭД также

свидетельствует о более сильном характере потенцирования: его значение в этой комбинации препаратов - 0,04.

Исследование характера нейротоксического взаимодействия показало, что потенцирование противосудорскных эффектов препаратов в комбинации сопровождалось увеличением их нейротоксических эффектов, так как во всех случаях сочетанного применения ТД50 препаратов в комбинации снижается, т.е. токсичность препаратов увеличивается, поскольку для достижения того же эффекта требуется меньшая доза. Так, ТД50 для риодшпша и нифедипина з комбинации снижались в 2,9 и 1,9 раза, а для риодипина и МК-301 в 2,0 и 1,3 раза, соответственно. Оценка характера нейротоксического взаимодействия, проведенная с помощью вычисления индекса ФТД, показала, что з данных условиях опыта токсическое действие препаратов носило аддитивный характер.

При сочетанном применении риодипина с MK-S01, а также с нифедипином имеет место значительное потенцирование противосудо-рожных эффектов л аддитивный характер нейротоксического взаимодействия. Поскольку уменьшение ЗД50 препаратов в комбинации было более значительным по сравнению с уменьшением ТД50, ТИ комбинации был выше, чем каждого препарата.

Наиболее эффективной оказалась комбинация риодипина с МХ-801. -ТИ этой комбинации-был самым- высоким -(41)-; -при этом -ЭДбо каждого препарата в комбинации место было уменьшить в 45 раз.

Результаты проведенного исследования свидетельствуют о том, что сочетанное применение препаратов, действующих на разные каналы (потенциал-зависимые и рецептор-управляемые) или на разные участки связывания Са-каналов, более эффективно, чем на один и тот же, как это имеет место в случае сочетанного применения нифедипина с риодипилом или риодипина с ИОС-1.1212, поскольку блокада специфических мест ' связывания канала одним препаратом не позволяет в полной мере реализовать эффект блокады другим веществом. Возможно, что потенцирующий эффект нифедипина и дилтиа-зема также связан и со способностью дилтиазема увеличивать концентрацию . нифедипина в плазме путем ингибирования окислительных ферментов, метаболизируюших нифедипин (Tatelshl et al., 1989), и усиливать связывание дигидропиридинов с их рецептором (Boles et al.. 1984).

Таким образом, сочетанное применение препаратов, ингибиру-

ющих гиперактивацию нейронов, связанную с входом Са2+, позволяет значительно уменьшить дозы препаратов и достигнуть высокого ТИ.

8.2. Сочетанное применение препаратов, усиливающих

тормозный ГАМКергический контроль Условием возникновения ЭпА в мозгеь является недостаточность тормозных, в частности, ГЛМКергических механизмов (Г.Н.Крыжановский, 1900). ГЛЩергическое тормохекие реализуется при активации ГАМКд-рецепторного комплекса, состоящего из субъединиц, связывающих ГАМК, бензодиазепины и барбитураты (Olsen, 1982: А.Я. Корнеев, Г.Р.Лидеман. 1S35). Эти субъединицы оказывают взаимопотенцирующее влияние, что приводит к усилению активности всего комплекса, завершающейся возрастанием хлорного тока, который вызывает гиперполяризационное торможение нейрона (Крыжа-новский, 1901; Study, Barker. 1981; MacDonald et al.. 1986).

Поэтому. на следующем этапе ваших исследований'изучали эффективность сочэтанкого применения препаратов, действующих на указанные субъединицы ГАМКд-рецепторного комплекса - диазепама,. стимулирующего действие ГАМК увеличением частоты открытия С1-ка-налов (Study, Barker,- 1982; MacDonald et al., 1986) и фенобарбитала, действующего путем пролонгирования открытого систояяия этих каналов (Olsen. 1932; Akalke et al'., 1985), а также валь-прсата натрия, усиливающего, тормозные ГАМКергические механизмы.. путем увеличения уровня ГАМК в мозге (Loscher, 1985).

Изоболографический-анализ протшэсудорсшюго действия валь-проат натрия, фавобзрбигггла и доазег-ама, применявшихся в виде . 2-х компонентных, комбината в разных сочетания;; показал, что во всех случаях комбинированного применения препаратов имел место синергизм действия типа потенцирования. Степень потенцирования зависела от характера комбинации. Наименьшее потенцирование наблюдали в случае сочетанкого применения вальпроата натрия и диа-зепама: ЭД50 каждого препарата в комбинации можно было уменьшить в 7 раз. При сочетанном воздействии вальпроата натрия и фенобарбитала cßfeo каждого препарата можно было уменьшить в 12 раз, в случае сочетанного применения фенобарбитала и диазепама - б 14 раз. Оценка протиьсоудоражной эффективности препаратов в комбинациях с вычислением индекса 5ЭД позволяет сделать аналогичный еывод о характере и степени потенцирования.

Аддитибнш' эффект наблюдали при сочетанном применении дгух

бенгодиазепинов - диазепама с феназепамон: ЗЛ50 каждого препарата в комбинации можно было уменьшить только в 2 раза. Следует отметить, что аддитивный эффект наблюдали и в случае применения двух барбитуратов - фенобарбитала и бензонала. к такому же заключению можно прийти и на основании вычисления индекса его значение в этих комбинациях больше 0,7, что свидетельствует об аддитивном характере взаимодействия между препаратами.

Наиболее эффективной оказалась комбинация, состоящая из трех препаратов - вальпроата натрия, фенобарбитала и диазепама: ЗД50 каждого из применяемых препаратов в комбинации могла быть уменьшена в 26 раз.

Потенцирование противосудорожного действия двух комплексно применявшихся препаратов сопровождалось увеличением их нейроток-сических эффектов: дозы, вызывающие токсические эффекты уменьшались. Taie, в 2-х компонентной комбинации ТД50 для фенобарбитала и диазепама снижалась соответственно в 15.1 и 3.2 раза, для вальпроата натрия и Фенобарбитала - в 4.2 и 16,5 раза, для вальпроата натрия и диазепама - в 2,6 и 2,0 раза. ТД50 в 3-х компонентной комбинации для вазьпроата натрия, фенобарбитала-и диазепама также уменьшалась в 3. 12 и 2,4 раза соответственно.

Определение характера нейротоксического взаимодействия между препаратами, проведенное с помощью вычисления индекса ФТД показало, что в 2-х компонентных комбинациях вальпроата натрия с фенобарбиталом и фенобарбитала с диазепамом, а также в 3-х компонентной комбинации вальпроата натрия с фенобарбиталом и диазепамом имело место потенцирование, поскольку его значение было меньше 0,7. Аддитивный характер взаимодействия был выявлен в комбинации вальпроата натрия с диазепамом.

ГИ 2-х компонентных комбинаций вальпроата натрия с диазепамом равнялся 3.2, вальпроата натрия с фенобарбиталом - 3,4, фенобарбитала с диазепамом - 4,4. ТИ 3-х компонентной комбинации вальпроата натрия с фенобарбиталом и диазепамом был наиболее высоким и равнялся 6.2.

Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют о том. что сочетанное применение препаратов в виде воздействия на разные звенья ГАМКового тормозного контроля позволяет значительно уменьшить дозы препаратов и увеличить ТИ комбинаций.

8.3. Сочетадное применение препаратоь, кнгиОирумих Са-зависимый эпидептогенез и усидизазших тормозный ГАМКергическни контроль

Активацию процессов, ослабляющих развито ЭпА. осуществляли в виде сочетанного применения блокаторов 1,4-ДГ11-чувствитель-ных Са-каналов риодшшна, нифедипина и неконкурентного антагониста рецепторов НМОА МК-801 с различными антиэиилептическими препаратами.

Оценка эффективности протнвосудоромого действия двух комплексно гриыенявшихся препаратов, проведенная с помощью нго-болографичсского анализа, показала, что во всех случаях сочетанного применения риодипина с аятиэпидептчгсхиш препаратами наблюдался синергизм действия типа потенцирования. Степень потенцирования зазисела от характера комбинации (табл. 1). Наибольшее потенцирование наблюдали в случае сочетанного применения риоди-•пина с вальпрсатом, наименьшее - с фенобарбиталом. О потенцирующем характере прстивосудоражного взаимодействия риодипииа с ан-тиэпиленгическими препаратами свидетельствует п индекс 5ЭД, поскольку его значения во всех случаях сочетанного применения препаратов меньше 0,7.

Нейротоксичность препаратов в комбинации увеличивалась, т.е. и>; . ТДэо уменьшалась в комбинации риодипииа .с вальпроатом натрия в 3,3 и 1,3 раза, риодипииа с диазепамом - в 5.5 и 1,8 раза, риодипииа с карбамазепином - в 2,2 и и 3,3 раза, риодишла с дифештоы - ь 1.5 и 2.0 раза, риодипииа с зтосутсимндом - в 4.1 н 1.6 раза, риодипина с фенобарбиталом - в 2,3 и 4 раза, соответственно. Определение хара1ггера- гейротоксического взаимодействуй между препаратами, проведенное с помощью вычисления индекса ФТД. показало, что во всех-случаи сочетанного применения взаимодействие риодипина с ¿штиконвулъсант&ми носило аддитивным характер.

Таким образом, применение риодипииа с ачтиконвульсаитами различной природы в виде 2-х-компонентннх комбинаций приводит к значительному потенцированию противосудорожяых эффектов к адди-тнвяому харзктзру нейротоксического взаимодействия. Поэтому, ТИ исех исследуе>гых комбинаций увеличивается.

Таблица 1.

Изменение ЭДьо и ТИ риодшнша и антиэпшептических препаратов при их сочетанном применена?

1 1 11 _ Состав Уменьшение та ) ТИ I

|п/п комбипащш ЭДйо в препарата комбинации!

комбинации

в п раз

1 1 РШИПИН 30.0 2.7 26.8 |

ВАЛЫ1Р0АТ 1.2

1 2 РИОДИПИН 15.1 2.7 7.4 |

2ИАЗЕПАМ 0.9

1 3 РИОДИШН 10.0 2.7 12.4 |

КАРБАМАЗШШ 4.8

1 4 РИОДИПИН 7.8 2.7 14.5 |

ЛИФЕНИН 3.7

1 5 июдшшн • 7.0 • 2.7- 4.5 |

ЭТОСУКСИЩ 1.1

1 6 РИОДИПИН 4.7 2.7 5.7 |

«ЕНОБАРБИШ 4.6

1 ■ 1

Синергизм действия типа потенцирования наблюдали во всех случаях сочетавного применения нифелипияа с аятэп'ологштгскиии лреларалши. ЗДзо каждого препарата в комбинации иогла быть уменьшена при сочетаиноц применении нифедшпша с фенобарбиталои в 4,6 раза, с вальпроатом натрия - в 3,9 раза, с дназепаюм - в 4 рага. Таким образом, степень потенцирования нифедшпша с анти-зпилептическими препаратами не зависела от характера комбинации и била примерно одиншсовой. о чем свидетельствует и индекс ФТЛ-

ТДбо Для нифедшпша в комбинации с фенобарбиталом уменьшалась соответственно в 1,9 и 5,0 раза, с вальпроатом натрия - в

■4,4 и 2,8 раза, с диазепамом - в 2,9 и 1,5 раза. Оценка нейротоксического взаимодействия, проведенная с помощью определения индекса ФТД, свидетельствует об аддитивном характере взаимодействия препаратов в этих комбинациях, поскольку его значения находятся в диапозоне от 0.7 до 1.03.

Таким образом, во всех случаях сочетэнного применения ни-федишша с противосудорожными препаратами различной пр!фоды наблюдали потенцирующий характер противосудоражного взаимодействия и аддитивный характер нейротоксического взаимодействия. Поскольку уменьшение ЭД50 препаратов в комбинации сравнимо с уменьшением их ТЛ5о, ТИ комбинаций по сравнению с ТИ отдельных препаратов увеличивался, но незначительно, или существенно пе изменялся.

При сочетанном применении МК-801 с аж.иэпш;ептич°скиии препаратами также имел место синергизм действия типа потенцирования. Наибольшее потенцирование наблюдали при сочетанном применении МК-801 с вальпроатом натрия:" ЭД50 препаратов в комбинации мсишо было уменьшить в 26,4 раза. Степень потенцирования МК-801 с диазепамом, этосуксимидом и фенобарбиталом была примерно одинаковой: ЗД50 препаратов в комбинации могла быть уменьшена в 5,1, 5,3 и 4,2 раза соответственно. Индекс ФЭЛ также свидетельствует о потенцирующем характере взашодействия МК-801 с анти. конвульсануами- ..................,.

Нейротоксичность препаратов в комбинации уменьшалась для МК-801 с вальпроатом натрия в 3,2 раза для каждого препарата, с этосуксимидом - в 4,8 и 4,2, соответственно. При этом, как показывает индекс ФТД, в этих комбинациях характер нейротоксического взаимодействия между препаратами представляет собой синергизм типа потенцирования.

Несмотря на то, что при сочетанном применении МК-801 с вальпроатом натрия наблюдали потенцирование как противосудорож-ных, так и вейротоксических эффектов, тем не менее из-за большего потенцирования противосудоражного действия по сравнению с нейротоксическим, ТИ комбинации в большинстве случаев был выше, чем ТИ препарата, входящего в нее.

Изободогрзфический анализ противосудоражной эффективности сочетанного применения валъпэоат вгтрия с блокалюрами лопепци-ах-аапистш и рецептор-управляемых Са-канатов и КОС-г. 1212, не обладЕющего этими свойствами, показал, что во всех случаях имел

место место синергизм действия типа потенцирования. Степень потенцирования вальлроата натрия с 1,4-ДГПами нифедипином и ИОС-1.1212 была примерно одинаковой: ЭД50 каждого препарата можно было уменьшить в комбинации вальпроата натрия, с нифедипином в 2,8 раза, с ИОС-1.1212 - в 2,7 раза. Выше было потенцирование в комбинации вальпроата натрия с флунаризином.* ЭД50 препаратов можно было уменьшить в 3,6 раза. Наибольшее потенцирование наблюдали в комбинации вальпроата натрия с риодишшом, а также с МК-801: ЭЛ50 препаратов в комбинации можно было уменьшить в 30 и 26,4 раза, соответственно. Индекс 59Д также свидетельствует о потенцирующем характере взаимодействия препаратов, который наиболее выражен в комбинациях вальпроата натрия с риодипином. а также с МК-801, но в отличие от изоболографического анализа указывает не на потенцирующий, а на аддитивный характер взаимодействия ыегду вальпроатом натрия и ИОС-1.1212, поскольку его значение больше 0,7.

Исследование нейротоксических эффектов препаратов при их сочеталгом применении показало, что ТД50 уменьшалась в комбинациях вальпроата натрия с риодипином в 1,3 и 3,3 раза, с МК-8С1 -в 3,2 раза для каждого препарата, с нифедипином - в 2,9 и 4,4 раза, соответственно. Оценка нейротоксического взаимодействия препаратов, проведенная с помощью определения индекса ФТД. позволила выявить аддитивный характер взаимодействия вальпроата натрия с риодишшом и с нифедипином и потенцирующий - с МК-801.

ТИ комбинации вальпроата натрия и риодипина равнялся 26,8 и был. соответственно, в 22,2 и 9,9 раза выше, чем ТИ каждого препарата, входящего в комбинацию. ТИ комбинации вальпроата натрия и МК-801 равнялся 9.7 и был в 8.1 раза выше, чем ТИ соответствующего препарата. ТИ комбинации вальпроата натрия и нифе-дипина существенно не отличался от ТИ препаратов, входящих з комбинацию.

Исследование различных сочетаний ангпиэпилепптеских препаратов в виде 2-х кошюнетлних комбинаций показало, что во всех случаях имел место синергизм действия типа потенцирования, о чем свидетельствует кгк изоболографический анализ противосудорожной эффективности, так и индекс ФЭД. Степень потенцирования зависела от характера комбинации (табл. 2).

- Таблица 2.

Изменение ЭД50 и терапевтического индекса (ТИ) антиэпилептических препаратов в шйикециях

Г Г------ ------ | N | Состав — Уменьшение Б! i та |

|п/п| шЛивацик СЙ50 в препарата коыбияац;ш|

I 1 комбинации

í 1 i i в п раз

I 1 | 1 ¡ДИФЕНИН 8.6 3.7 14.3 !

| | ФЕНОБАРБИТАЛ i i 4.6

1 1 | 2 1ДИФЕНИН 8.1 3.7 4.5 |

| |ДИАЗЕПАМ 0.9

1 1 | 3 13Т0СУКСИМШ 6.4 1.1 5.5 |

| (ВАЛЬПРОАТ f t 1.2 ' |

i J | 4 13Т0СУКСИШЯ - 5.4 1.1 3.8 |

| |ФЕНОБАРБИТАЛ i i 4.6

1 i 5 ) ЗТОСУКСКМИЛ' ' 5.3 '1.1 2.4 |

\ 1ДИА5ЕПАМ i i 0.9

1 1 | 6 |ДИФЕНИН 5.2 3.7 2.4 |

| 13ТОСУКШВД i i 1.1

1 i | 7 |ДИФЕНИН 4.1 3.7 2.3 |

¡ 1ВАЛЫ1РОАТ 1.2 ( i i

Погеяцировааие противосудороашых эффектов сопроваздашсь увеличением их нейротокеических эффектов: ТД50 антиэпилзптмес-ких препаратов в ¡аэмбинациях уменьшались. Определение характера нейрстоксического взаимодействия препаратов с помощью вычисления шдасса ФТД показало, что взаимодействие было аддитивным в комбинациях дифевика с февобр-рбитадом, дкфенина с диазепамом, это-суксимида с дяазепаыом и антагонистическое - при сочетанаом при-

уенеяии этосуксимида и вальпроата натрия; в других комбинациях наблюдалось слабое потенцирование.

ТИ комбинаций, в которых наблюдался аддитивный характер нейротоксического взаимодействия препаратов, увеличивался. Самый высокий ТИ (14,3) был в комбинации дифенина с фенобарбиталом.

Наиболее эффективной оказалась комбинация дифенина с фенобарбиталом.

Англизируя результаты исследований различных 2-х компонентных комбинаций анткзпилептических препаратов, можно прийти к заключению, что они менее эффективны, чем их комбинации с анта-гснистсыи кальция. Поэтому, на следующем этапе наших исследований изучали эффективность различных сочетаний атпизпихегшческих препаратов с риодипинш и МК-801 (с наиболее эффективными блока-торами Са-каналов) в виде 3-х компонентных комбинаций. Результаты исследования показали, что во всех случаях комбинированного, применения препаратов имел место синергизм действия типа потенцирования. Наибольшее потенцирование наблюдали в комбинациях вальпроата натрия с ЫК-801 и риодипином, а также вальпроата натрия с риодипином и этосуксимидом: ЭД50 каждого препарата в комбинациях можно было уменьшить в 91 и 83,3 раза соответственно (табл. 3). Определение индекса КШ в этих комбинациях также свидетельствует .о потенцирующем характере взаимодействия.

Потенцирование противосудорожных эффектов сопровождалось увеличением их нейротоксических эффектов: ТД50 препаратов в комбинациях уменьшались. Оценка нейротоксического взаимодействия препаратов, проведенная с помощью вычисления индекса ФТД, выявила потенцирующий характер противосудорожного взаимодействия в комбинациях: - вальпроата натрия с МК-801 и риодипином, а также фенобарбитала с диазепамом и риодипином. В других комбинациях характер нейротоксического взаимодействия был аддитивным.

Поскольку увеличение противосудорожной эффективности было более значительным по сравнению с нейротоксической. та четырех из пяти комбинаций был выие по сравнению с ТИ препаратов, входящих в комбинацию. Наиболее эффективной, оказалась комбинация вальпроата натрия с этосуксимидом и риодипином (см. табл. 3).

' Исследование различных сочетаний автэпшешлческчх препаратов с риодипинш и МК-801 в виде 4, 6 и 7-ий членных комбинаций обнаружило значительное потенцирование противосудорожной эф-

Таблица 3.

Изменение ЗД50 и ТИ антизпилепткческих препаратов, риодипива и МК-801 при их сочетаняом применении

1 1 N . Состав Уменьшение ТА 1 ТИ 1

|п/п комбинации ЗД50 в препарата комбинации)

комбинации

в п раз

ВАЛЬПРОАТ 1.2

| 1 МК-801 90.9 1.2 13.5 1

РИОДШИН 2.7

ВАЛЬПРОАТ 1.2

1 2 этосжзаад 83.3 1.1 33.6 |

рирдишн г» г» 1

СЕНОКАРНИТАЛ 4.6

1 з ДИАЗЕПАМ 37.0 0.9 10.2 I

РИСЩИШН п Г* <

ЕАЛЫРОА Г А О

1 4 ДИАЗЕПАМ 16.4 0.9 Е. 1 |

1 - ЕИВДИПИН- п п /

ВАЛЬПРОАТ 1.2

1 5 ФЕНОБАРБИТАЛ 8.3 4.6 4.7 |

г ВДЦШЫН О ГЧ / I

фективности: ЭД50 каждого препарата4 в комбинации можно было уменьшить от 22 до 616. Наиболее сильное потенцирование наблвда-ли в 7-ми компонентной комбинации, о чем свидетельствует и индекс (ИЗД.

Потенцирование противосудоражного' действия сопровождалось и значительным увеличением нейротоксических эффектов препаратов, особенно, в 7-ми компонентной комбинации, в которой ТД50 пяти препаратов уже выражалась пе в мг, а в мкг. Определение характь1

ра нейротоксического взаимодействия препаратов с помощью вычисления индекса ФТД показало, что во всех исследуемых комбинациях имел место синергизм действия типа потенцирования. •

ТИ 4-х компонентвой комбинации вальпроата натрия с фенобарбиталом, диазепамом и риодшгоном был выше - соответственно в 4,2, 1.1, 5,7 и 1,9 раза, чем ТИ каждого препарата. ТИ 6-ти компонентной комбинации был также выше, чем ТИ каждого препарата. ТИ 7-ни компонентной комбинации был меньше ТИ трех препаратов, входящих в комбинацию (табл. 4).

8.4. Сравнительный анализ эффективности некоторых

комбинаций препаратов Результаты проведенных исследований свидетельствуют об эффективности сочетанного применения препаратов, действующих на разные механизмы зпилептогенеза. С теоретической и практической точки зрения комбинацию препаратов можно считать благоприятной при условии, что ТИ комбинации должен быть вше. чем каждого препарата, примененного раздельно. Следует отметить, что в большинстве случаев при комбинированном применении исследуемых препаратов имеет место потенцирующий характер противосудорсошого и нейротоксического взаимодействия. Однако, поскольку увеличение противосудорожной эффективности было более значительным по сравнению с-нейротоксической, ТИ комбинаций препаратов в большинстве случаев был выше, чем каждого препарата в отдельности. Так. как видно из таблицы 4, ГИ противосудорожных препаратов, использованных в настоящем исследовании, был в пределах от 0,9 до 4,6, тогда как ТИ комбинаций препаратов мог быть увеличен до 41. Анализ полученных результатов позволяет сделать вывод о том. что наиболее эффективными являются комбинации, в которых потенцирующий характер противосудорожного взаимодействия сопровождается антагонистическим или аддитивным характером нейротоксического взаимодействия. ТИ комбинаций с таким характером противосудорожного и нейротоксического взаимодействия препаратов значительно выше, чем ТИ комбинаций с потенцирующим характером противосудорожного и нейротоксического взаимодействия.

Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют о целесообразности применения КПТ для подавления ЗпА. Преимущество разработанного метода заключается прежде всего в возможности применения очень малых доз антиэпилептических

Таблица 4.

Эффективность нркоторых исследуемых комбинаций препаратов

N п/п Состав геэу.Оипации Уменьшение эд50 в комбинации в п раз Характер ней-ротэксического взаимодействия та комбинации ТИ препарата

1 РИ0ДИПИН+МК-801 45 ■ аддитивный 41 2.7 И 1,2

2 КЮД.ШИН+ВАЛЬПРОАТ 30 аддитивный 26.8 2.7 и 1.2

3 ТООДИШИДИФЕНИН 8 аддитивный 14.6 2.7 И 3.7

4 РИОДИПИН+КАРоАМАЗЕПИН 10 аддитивный 12.4 2.7 И 4.8

Б ВАЛЪПРОАТ+ЗТОСУКСИЩЦ 6 антагонизм Б.Б 1.2 и 1.1

5 ВАЛЬПРОАТ+ЭГОСУКСИМад -и=шциш 83 аддитивный 33^6 1.?, 1.1 2.7

ГУ ! ВАЛНГ0ЛТ+МК-801 +РИОДШИН 91 потенцирование 18.6 1.2, 1.2 2.7

8 „ ВАЛЬПРОАТ+ЭТОСУКСИЩЦ ■К5ЕН0БАНБИТЛЛ+МК-301+ ДИАЗЕПАМ+РИЦДИПИН+ДИ-ФЕ1МН 616 потенцирование 1.1 1.2, 1.1, 4.6, 1.2, 0.9, 2.7, 3.7

средстз. Разработанная КПТ дает достаточно высокий ТИ при относительно низком потенцирозании тгассических эффектов. Эти особенности метода имеют важное значение.для.лечения эпилепсии, которое при монотерапии требует назначения сравнительно больших доз препаратов при длительном лечении. Все это позволяет, рекомендовать метод КПТ для клинического применения. Дальнейшие исследования в экспериментальном плане должны состоять в подборе наиболее эффекттаных и малотоксичных комбинаций антиэпилептических средств.

ВЫВОДЫ

1. Антагонисты кальция, неорганические Ш2*, Мг2+) и органические разных ¡аассов (фенилалкиламины, 1.4-дигидропиридины. бензстпазепины, дкфеншшиперазины). оказывают выраженное антиэ- ч пилептическое действие на модели фокальной пенициллин-индуциро-ваннсй эпилептической активности в коре головного мозга и острых генерализованных судорогах, вызванных системным введением кора-зола.

2. Антиконвульсантные эффекты 1,4-дигидропиридииов - блока-торов потенциал-зависимых Са-каналов и новых производных 1,4-ди-гидропиридина (ИОС-1.1212, глутапирон). не обладающих этими свойствами, одинаковы в отношении фокальной пенициллин-, 4-ами-нопиридин-. стрихнин-индуцированной эпилептической активности в коре головного мозга, генерализованной . коразол-индуцированвой эпилептической активности и коразолового киндлинга.

3. Протизосудоражные эффекты 1.4-дигидропиридинов в дозах, жгибирующих эпилептическую активность, не связаны с их гипотензивным действием.

4. Влокатсры потенциал-зависимых Са-каналов разных классов (верапамил, нифедипин, риодипин) и производные 1,4-дигидропири-дина. (ИОС-1.1212. глутапирон) эффективны в отношении эпилептической активности, вызванной нарушением тормозных ГАМКергических механизмов, и не эффективны в отношении эпилептической активности, вызванной нарушением глиданергического торможения (стрихнин).

5. ¿локаторы потенциал-зависимых Са-каналов (Мг2+, верапамил, риодипин) и ИОС-1.1212 оказывают противоэпилептическое действие на модели коразолового киндлинга. задерживая развитие

состояния повышенной судорожной готовности мозга к снижая тяжесть судорог.

6. Судороги, возникающие после однократного введения кора-зола. и судороги, вызываемые коразолом в условиях кищшшга,-имеют разную природу и разные условия ее реализации.

7. При развитии повышенной судорс.асй готовности •-•озга (ко-разоловый киндлинг) увеличивается содержание овоб-.-зного Са2+ в синаптосомах мозга крыс. Введение блокаторов потенциал-зависгоак Са-каналов различной природы - верапаштла (фенилалкиламин) и нк-федипина (1,4-дигидропиридин) предотвращало это увелдозние.

8. Подавление итеративности нейронов путел сочетанного применения различных блокаторов Са-каналов позволяет значительно уменьшить дозы этих препаратов при увеличении терапевтического индекса их комбинаций.

9. Подавление гиперактивности нейронов -путем сочетанного применения, усиливающих тормозный ГАМКергичееккй контроль, позволяет значительно уменьшить дозы препаратов при увеличении терапевтического индекса их комбинаций.

10. Подавление гиперактивности нейронов путем сочетанного применения препаратов, блокирующая Са-каналы и усиливающих тормозный ГАМКергический контроль, существенно уменьшает дозы ука-•занных препаратов и-увеличивает-терапевтический индекс щ комбинаций.

11. При комплексном применении 1.4-дигидропиридинов риодипииа и нифедипина с друпши антизпилептическиш; средствами возрастание нейротоксического эффекта газет не потенцирующий, а лишь аддитивный характер, в то время как возрастание противосудорож-ного эффекта имеет характер потенцирования.

12. Разработанный принципиально новый- подход к подавлению эпилептической активности в виде комплексной патогенетической , терапии, заключающейся в сочетанном воздействии лекарственными препаратами на базисные механизмы эпилептогенеза, открывает новые возможности для создания рационального и эффективного лечения эпилепсии.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТВ.Е КССЕРТАПИИ

'1. Влияние верапамила на очаговую эпилептическую активность

z коре головного мозга крыс // Бил.экспериы.биол.и мед. - 1Q87. - М 7. - С. 54-57. Соавт.: Г.Н.Крыжаловский, Р.Н.Глебов, О.Л.Агатова.

2. Регуляция Са-каналоз как способ антиэпилептической коррекции // Тез.докл.IV Всесоюз.съезда патофизиол. 3-6 окт. - Кишинев, 1989. г- С. 24. Соавт.: О.Ю.Панков. С.Ю.Титов, Р.Н.Глебов.

3. Влияние блокатора Са-каналов риодипина на очаговую и генерализованную эпилептическую активность // Бюл.зксперим.биол.и мед. - 1989. - N 11. - С. 553-555. Соавт.: О.Ю.Панков. Р.Н.Где-боз. С.К.Германе, В.Е.Клуша, Г.Я.Дубур.

4. Влияние органических кальциевых антагонистов и магния развитие коразолового киндлинга// Бюл.зксперим.биол.и мед. -1990. - N 10. - С. 343-350. Соавт.: Г.Н.Крцкановсгаш, О.Ю.Панков.

5. Изменение концентрации внутриклеточного свободного Са2+ч в синаптосомах ыозга крыс при различных воздействих // Тез. докл. V Всесоюзной конф.. поев. 90-летаю Х.С.Коштоянца. - М., окт.1990. - С. 16. Соавт.-: И.М.Антоников, О.Ю.Панков.

6. Роль Са2+ в-патогенезе эпилепсии. Антагонисты кальция -новый класс антиконвульсантов (обзор) // Патол.физиол.и экспер. терапия. 1990. - N 3. - С. 57-61. Соавт.: Р.Н.Глебов.

7. Влияние PN 200-110 на пенициллин-индуцированную эпилептическую/ активность в коре головного мозга крыс // Бюл.зксперим.биол.и мед. - 1991. - N 4. - С. 351-353. Соавт.: Г.Н.Крыжа-вовский. О.Ю.Панков.

8. Об антиэпилептических эффектах нифедипина // Бюл.зксперим.биол.и мед. - 1991. - N 9. - С. 260-262. Соавт.: Г.Н.Крыжа-новский, О.Ю.Панков. Р.Н.Глебов.

9. Антиэпилептические эффекты нового блокатора Са-каналов ИОС-1.1212 // Бюл.зксперим.биол.и мед. - 1991. - N 10. - С. 362-365. Соавт.: О.Ю.Панков. Р.Н.Глебов. Г.Я.Дубур. С.К.Германе. В.Е.Клуша.

10. Коразоловый киндлинг у животных с различной чувствительностью к эпилептогену // Бюл.зксперим.биол.и мед. -- 1991. - N И. - С. 459-460. Соавт.: Г.Н.Крыжановский. О.Ю.Панков.

11. Effect of organic calcium antagonists and magnesium on the development of pentylenetetrazol kindling // Proc. Int.soc. for Pathophysiology. - Moscow, may 28 - june 1, 1991. - P. 19-20. Coauthor: O.Yu.Pankov.

12. Neuronal membrane 1,4-dlhydropyridlne-receptor complex state after pentylenetetrazol kindling // Proc. Int.soc. for Pat-hophys. - Moscow, may 28 - June 1. 1991. - P. 28r29. Coauthor: A.A.Tlmofeev, O.Yu. Pankov, R.N. Glebov.

13. Влияние ионов магния и никеля на фокальную пеницил-лин-индуцированную эпилептическую активность в коре головного мозга крыс // Бюл.эксперим.биол.и мед. - 1992. - N 4. - С. 347-349. Соавт.: Г.Н.Крыжановский, И.Б.Озерова, Р.Н.Глебов.

14. Органические антагонисты калыгг. ззрапамил и риодипин предотвращают увеличение свободного калы&я в сиьаптосс:.:^ могга крыс в течение коразолового киндлинга // Бкл. эксперт. С-юл. к мед. 1992. - N 9. - С. 252-254. Соавт.: И.М.Антониксз, О.Ю.Пан-ков, Р.Н.Глебов.

15. Антизпилептические эффекты вальпроата натрия и антагониста калышя риодишша при кх сочетакноы применен®1, га модели фокальной петщшьцш-кндуцированной эпклептичоскоь активности // Вал.эксперт.биол.и мед. - 1992. - !■! 10. - С. 360-3^0. Соавт.: Г.Н.Крыкановскхй, И.Ю.Абросимов. Е.М.Л?реша.

16. Анткзшиептическче эффекты ва^проата натрия л антагониста кальция риодипина при их сочетанием применении на модели генерализованной коразол-индуцированной ^тшлептическо;' актизнос-ти'// Бш.гкспёрим.бвол.и мед. -'1992. - N 10. - С. 375-073. Со- " азу.: Г.Н.Крыуановский, О.Ю.Панков, Е.М. Абрамова, И.Ю.Абрссчже.

17. Прстилссудорсиная активность вальпроата натрии к н^:юто-рых антагонистов кальции при их сочетанием применении у // Езол.яксперим.биол.и мед. - 1993. - N 3. - С. 231-233. Соавт.: Г.Н.Крыжановский, К.Ю.Абросимов. О.Ю.Панков, М.Е.Калинина.

18. Влияние вальпроата Na. фенобарбитала и диазепа^-. их сочетанном применении на судороги, вызванные электротоком у мышей // Бюл.эксперта.биол.и мед. - 1993. - К 3. - С. 238-240. Соавт.: Г.Н.Крыжановский, И.Ю.Абросимов.

19. Протьгосудоражная активность производного 1.4-дкгидропн-ридина риодишва и других антиконвульсантог при ж сочетанном применении // Бюл.эксперт.биол.и мед. - 1S33. - N 7. - С. 15-17. Соавт.: Г.Н.Крыгг£НОБСКИй. И.В.Абросимов.

20. Противосудорожные свойства гчутаплрег - производного нового типа - а^шяогаслотсодерказих i, 4-дипздуишридкнов // Вюл.эксперим.биол.л мед. - 1993. - к 9. - С. 283-286. Соавт.:

С.К.Германе, Г.Цеберс, О.Ю.Панков, В.Е.Клума. Г.Я.Лубур. Э.А.Би-сениекс.

21. Влияние нового аминокислотсодерясащего 1,4-дигидропириди-на глуталирона на фокальную пенициллин-индуцированную эпилептическую активность и судороги, вызванные бикукуллшном и тиосеми-карбазидом // Вол.эксперта.биод.и мед. -1993. -N10. - С. 357-360. Соавт.: С.К.Германе. О.Ю.Панков. В.Е.Клуша, Г.Я.Лубур.

22. Изменения уровня циклических нуклеотидов в левой и правой сенсомоторной области торы мозга крыс после горазолового киндлинга // Бюл.эксперим.биол.и мед. - 1993. - fJ.ll. - С. 491-493. Соавт.: Р.Н.Глебов, Т.В.Горячева. И.О.Михальская, М.Е.Спасска^, О.Ю.Панков.

23. Антиэпилептические эффекты сочетакного воздействия нового производного 1,4- дигидропиридина глуталирона с вальпроатом натрия и фенобарбиталом // Бюл.эксперим.биол.и мед. -.1993. - N 12/ - С. 586-588. Соавт.: О.Ю.Панков, С.К.Германе, В.Е.Клуша, Г.Я.Дубур.

24. Связывание 3Н-диазепама в головном мозге крыс спустя 11 месяцев после окончания коразолового киндлинга У/ Бюл.эксперим.биол.и мед. - 1994. - N 2. - С. 135-137. Соавт.: В.В.Жулин. Р.Н.Глебов. О.Ю.Панков. Р.И.Кругликов.

25- Complex pathogenic therapy: .combined action on epileptic mechanisms // The Internat. Syinp. "Physiological and Biochemical basis of brain activity", June 22-24, St.Petersburg. 1994. - P. 76. Coauthor: Yu. Abrosimov.

26. Противосудорсокные и нейротоксические эффекты различных комбинаций фенобарбитала, диазепама, вальпроата натрия и 1.4-дигидропиридина риодипина // Бюл.эксперим.биол.и мед. - 1994.- N 7. - С. 14-16. Соавт.: Г.Н.Крызкановский, И.Ю.Абросимов.

27. Changes of 3H-dia2epam binding and intracellular regulators content in rat brain, after pentylenetetrazol kindling // J. Neurochem. - 1994. - V. 63, Suppl.l. - P. 85. Coauthor: R.N. Glebov.

28. Combined action of Ca-antagonists and anticonvulsants with different target-point mechanisms In supression of epileptic activity // Pathophysiology - 1994. - V. l. Supply- (add. abstract 2nd Int. Congress of Pathophysiology - Kyoto, 19-24 november, 1994). - P. 100. Coauthor: Yu. Abrosimov.