Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Влияние комбинированного применения препаратов железа с антиоксидантами на показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в крови экспериментальных животных

На правах рукописи

Айвазян Гарик Гагикович

ВЛИЯНИЕ КОМБИНИРОВАННОГО ПРИМЕНЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ ЖЕЛЕЗА С АНТИОКСИДАНТАМИ НА ПОКАЗАТЕЛИ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ И АНТИОКСИДАНТНОЙ ЗАЩИТЫ В КРОВИ ЭКСПЕРИМЕНТ АЛЬ НЫХЖИВОТНЫХ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

САРАНСК-2009

003468817

Работа выполнена на кафедре общей и клинической фармакологии ГОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия» Мин-здравсоцразвития России

Научный руководитель: доктор медицинских наук,

профессор Кузин Владимир Борисович,

заведующий кафедрой общей и клинической фармакологии ГОУ ВПО НижГМА Минздрав-соцразвития России, 603005, г. Нижний Новгород, пл. Минина, 10/1

Офнциальныеоппоненты: доктор медицинских наук,

профессор Зорькина Ангелина Владимировна,

заведующий кафедрой поликлинической терапии и функциональной диагностики ГОУВПО «МГУ им. Н.П. Огарева», 430000, г. Саранск, Республика Мордовия, ул. Большевистская, 68

доктор медицинских наук, профессор Ураков Александр Ливиевич, заведующий кафедрой общей и клинической фармакологии ГОУ ВПО «Ижевская государственная медицинская академия», 426034, г. Ижевск, Удмуртская Республика, ул. Коммунаров, 281

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет», г. Казань

Защита диссертации состоится « »_2009 года в_часов на

заседании диссертационного совета Д 212.117.08 в ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н. П. Огарева» (430000, г.Саранск, ул. Большевистская, 68).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н. П. Огарева» (430000, г. Саранск, ул. Большевистская, 68).

Автореферат разослан «_»_2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор

А.Г. Голубев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Железо - жизненно важный для организма микроэлемент, принимающий участие в транспорте кислорода, окислительно-восстановительных, иммунобиологических и адаптационно-защитных реакциях. Оно является незаменимым компонентом гемоглобина, миоглобина, ци-тохромов, пероксидаз и каталаз, белков различной молекулярной конфигурации (ферритина, гемосидернна, лактоферрина и др.). Поэтому клиническая картина железодефицитной анемии (ЖДА), в основе которой лежит дефицит железа, складывается из симптомов, связанных с недостатком гемоглобина и дефицитом железосодержащих ферментов, что проявляется в виде анемического и си-деропенического синдромов (Пархутдинова В.В. с соавт., 2005; Блошанский Ю.М., Geisser Р., Хасабов H.H., 2006; Шилов A.M. с соавт., 2006; Ахлямова A.A., 2007; Синчихина М.Е., 2007; Mercuriali F. et al., 1995; Sunco G. et al., 2002).

Вследствие вышеуказанного при данной патологии препараты железа являются основой заместительной фармакотерапии. При этом ферропрепараты классифицируются в зависимости от способа введения: для приема внутрь (содержащие двух- или трехвалентное железо, которые могут быть монокомпонентными или комбинированными), а также для парентерального введения, содержащие трехвалентное железо в виде комплекса с дестраном, сахарозой или глюконатом натрия (Государственный реестр лекарственных средств, 2004; Тихомиров A.JI., 2004; Клиническая фармакология: Национальное руководство, 2009; Lebrecht A., Haberün F., Faberhard J., 1995).

Поскольку терапия железодефицитных состояний - процесс длительный, то актуальным является вопрос о побочных эффектах железосодержащих препаратов, возникновение которых в значительной степени связано с тем, что железо относится к металлам-переносчикам, является мощным катализатором образования свободных радикалов и активных форм кислорода (Defrere S. et al., 2008; Dimitrov J.D. et al., 2008; Mozuraityte R., Rustad T., Storro I., 2008).

Это тем более важно учитывать, так как само железодефицитное состояние характеризуется развитием тканевой гипоксии, при которой также происходит резкая активация свободно-радикального процесса на фоне снижения ан-тиоксидантной защиты организма (Зарубина И.В., Шабанов П. Д., 2004; Новиков В.Е. с соавт., 2005; Бегова C.B., Османова З.М., Омаров Н.С., 2007; Евсеев A.B. с соавт., 2008; Gibson G.E., Huang H. M., 2004).

Таким образом, при лечении ЖДА возникает необходимость коррекции изменений процесса свободно-радикального окисления (СРО), обусловленных как проводимой ферротерапией, так и явлениями гипоксии, являющейся одним из основных патогенетических звеньев данного заболевания. Указанная задача может быть решена за счет обоснованного выбора препарата (двух- или трехвалентного железа) и выбора наиболее комплементарного с этим препаратом ан-тиоксиданта.

В связи с вышеуказанным, исследования, посвященные изучению влияния ферропрепаратов, относящихся к различным группам (двух- и трехвапент-

ного железа), на процесс перекисного окисления липидов (ПОЛ) и антиокси-дантной защиты (АОЗ), а также наиболее комплементарных с ними антиокси-дантов при коротком курсе введения, являются актуальной задачей клинической фармакологии.

Цель исследования. Изучение влияния препаратов железа на показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в крови экспериментальных животных, а также комплементарное™ этих препаратов с антиок-сидантами при коротком курсе введения.

Задачи исследования:

1. Изучить влияние препарата двухвалентного железа сульфата/серин («Актиферрин») в эквитерапевтической дозе на показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в крови экспериментальных животных.

2. Исследовать влияние препарата трехвалентного железа (III) гидроксид полимальтозата (мальтофер) на показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в крови экспериментальных животных при введении его в эквитерапевтической дозе.

3. Изучить комплементарность водорастворимого антиоксиданта этилме-тилгидроксипиридина сукцината (мексидола) с препаратами двухвалентного и трехвалентного железа при коротком курсе введения в эксперименте.

4. Исследовать комплементарность жирорастворимого антиоксиданта витамина Е (токоферола ацетата) с препаратами двухвалентного и трехвалентного железа при коротком курсе введения в эксперименте.

Научная новизна работы. Проведено сравнительное исследование влияния препаратов железа, относящихся к различным группам - двух- и трехвалентного, на динамику показателей перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в крови экспериментальных животных на различных этапах введения этих препаратов.

Доказано, что изучаемые препараты железа, в зависимости от химической структуры, в разные сроки вызывают активацию перекисного окисления липидов. Препарат двухвалентного железа сульфата/серин («Актиферрин») активирует процесс ПОЛ через I сутки его введения, что проявляется в виде увеличения свободно-радикальной активности плазмы, замедлении роста антиоксидантной активности и повышении скорости спада процесса СРО. Препарат трехвалентного железа (III) гидроксид полимальтозат (мальтофер) на ранних этапах обусловливает незначительное, а на более поздних этапах - выраженное влияние на указанный процесс, что подтверждается увеличением скорости спада процесса СРО и снижением активности СОД (через 1 сутки его введения), снижением концентрации МДА (через 5 суток), а также снижением антиоксидантной активности и активности СОД (через 10 суток), увеличением свободно-радикальной активности плазмы и скорости спада процесса СРО (через 20 суток), снижением содержания МДА (через 30 суток).

Установлено, что при коротком курсе введения водорастворимый антиок-сидант этилметилгидроксипиридина сукцинат (мексидол) наиболее комплементарен с препаратом двухвалентного железа «Актиферрином», о чем свидетель-

ствует динамика таких показателей, как потенциальная способность плазмы к СРО, концентрация МДА и активность СОД. Жирорастворимый антиоксидант витамин Е (токоферола ацетат) наиболее комплементарен с препаратом трехвалентного железа мальтофером, что подтверждается динамикой таких показателей, как потенциальная способность плазмы к СРО, концентрация МДА и церу-лоплазмина.

Практическая ценность работы состоит в том, что полученные результаты позволяют оптимизировать терапию железодефицитной анемии на основе обоснованного выбора ферропрепарата с учетом особенностей влияния препаратов двух- и трехвалентного железа на процесс свободно-радикального окисления и сроков активации ими указанных реакций, а также сочетанного назначения с ними наиболее комплементарного антиоксиданта, под контролем динамики показателей перекисного окисления липидов.

Результаты исследований внедрены в деятельность лечебно-профилактических учреждений службы медицинского обеспечения на Горьков-ской железной дороге - филиале ОАО «Российские железные дороги».

По результатам исследования зарегистрирована Заявка на изобретение № 2008149614 «Способ лечения железодефицитной анемии у беременных» в Федеральном институте промышленной собственности Федеральной службы по интеллектуальной собственности, патентам и товарным знакам.

Основные положения работы внедрены и используются в процессе обучения студентов, клинических ординаторов и интернов на кафедре общей и клинической фармакологии ГОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия».

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Существующие различия во влиянии препаратов двух- и трехвалентного железа на процесс перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты проявляются на разных этапах их введения и обусловлены особенностями химической структуры, а также фармакокинетики железосодержащих препаратов.

2. Препарат двухвалентного железа сульфата/серин («Актиферрин») активирует процесс перекисного окисления липидов уже на ранних этапах его введения (через 1 сутки), а препарат трехвалентного железа (III) гидроксид по-лимальтозат (мальтофер) на ранних этапах обусловливает незначительное, а на более поздних этапах - выраженное влияние на указанный процесс.

3. При коротком курсе введения водорастворимый антиоксидант этилме-тилгидроксипиридина сукцинат (мексидол) наиболее комплементарен с препаратом двухвалентного железа «Актиферрином», а жирорастворимый антиоксидант витамин Е (токоферола ацетат) - с препаратом трехвалентного железа мальтофером.

Апробация работы. Результаты исследований и основные положения диссертации представлены и обсуждены на 2-й Российско-китайской научной конференции по фармакологии «Фундаментальная фармакология и фармация -клинической практике» (Пермь, 2006); Международном конгрессе «Развитие фармакоэкономики и фармакоэпидемиологии в Российской Федерации» (Моек-

ва, 2006); XIV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007); III съезде фармакологов России «Фармакология - практическому здравоохранению» (Санкт-Петербург, 2007); VI Международном конгрессе «Доказательная медицина - основа современного здравоохранения» (Хабаровск, 2007); XV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2008).

Публикации. По теме диссертации имеется 9 публикаций, в том числе 1 - в издании, рекомендованном ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, двух глав собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических рекомендаций, библиографического списка. Работа изложена на 167 страницах текста компьютерного набора, иллюстрирована 14 рисунками, 24 таблицами. Библиографический список содержит 298 названий работ, из них 170 отечественных и 128 зарубежных автора.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена на кафедре общей и клинической фармакологии с использованием экспериментально-лабораторной базы Центральной научно-исследовательской лаборатории ГОУ ВПО НижГМА.

Эксперименты проведены на 290 белых нелинейных крысах-самцах с исходной массой 70-75 г, у которых в течение трех месяцев создавалась модель алиментарной железодефицитной анемии (МУК 2.3.2.721-98. Пищевые продукты и пищевые добавки. Определение безопасности и эффективности биологически активных добавок к пище, 1998). При этом контролировались вышеуказанные гематологические показатели (табл. 1), а при снижении гемоглобина на 35% от исходного уровня считалось, что у животных имеется анемия (Красникова И.М., 2003). Для подтверждения ее железодефицитного характера часть животных забивали и определяли концентрацию сывороточного железа. Затем у животных определялись показатели ПОЛ и АОЗ. Отбор крови для определения уровня гемоглобина и количества эритроцитов проводился из хвостовой вены, для определения содержания сывороточного железа и показателей ПОЛ (АОЗ) животных забивали методом декапитации. При этом животным предварительно вводили гепарин.

В последующем из оставшейся части животных осуществлялось формирование групп животных методом случайных чисел, и животным опытных групп вводили препараты железа и антиоксиданты в эквитерапевтических дозах. При выборе доз руководствовались средними терапевтическими дозами, в которых изучаемые препараты рекомендованы для клинического применения (Государственный реестр лекарственных средств, 2004). Пересчет доз с человека на крыс осуществлялся с учетом коэффициентов поверхности тела по методу эквитерапевтических доз (Freireich E.J., 1966).

Таблица]

Динамика гематологических показателей на этапе моделирования

Этап исследования показателя Показатель

НЬ, г/л Ег, хЮ /л СЖ, м км оль/л

Исходный уровень без анемии 145,20±2,67 4,56±0,17 46,65±2,73

Исходный уровень при анемии 93,65±1,89 3,65±0,14 27,15±1,61

Примечания: НЬ - уровень гемоглобина; Ег - количество эритроцитов; СЖ - содержание сывороточного железа.

Животным контрольной группы перорально вводили дистилированную воду. Все серии экспериментальных исследований выполнялись параллельно. В течение всего периода исследований проводилось взвешивание и наблюдение за поведением животных.

Распределение животных по сериям представлено в таблице 2.

Таблица2

Характеристика серий экспериментальных животных

Серии эксперимента Характеристика серии Количество крыс

Контрольная ЖДА, п/о вода дистиллированная, 30 суток 60

«Актиферрин» ЖДА, п/о «Актиферрин» 17,14 мг/кг (в пересчете на Ре2+), 30 суток 60

Мальтофер ЖДА, п/о мальтофер 17,14 мг/кг (в пересчете на Ре элементарное), 30 суток 60

«Актиферрин»/ мексидол ЖДА, п/о «Актиферрин» 17,14 мг/кг, в/м мексидол 25,71 мг/кг, 5 суток 20

«Актиферрин»/ токоферол ЖДА, п/о «Актиферрин» 17,14 мг/кг, в/м токоферол 8,57 мг/кг, 5 суток 20

Мальтофер/ мексидол ЖДА, п/о мальтофер 17,14 мг/кг, в/м мексидол 25,71 мг/кг, 5 суток 20

Мальтофер/ токоферол ЖДА, п/о мальтофер 17,14 мг/кг, в/м токоферол 8,57 мг/кг, 5 суток 20

Примечания: п/о - перорально; в/м - внутримышечно.

Забой животных осуществлялся через 1 сутки, 3, 5, 10, 20 и 30 суток введения препаратов железа, либо через 1 сутки и 5 суток введения препаратов железа с антиоксидантами (по 10 крыс из каждой группы на каждом из указанных сроков, через 24 ч после введения препаратов). Объектом исследования являлась кровь и свежеприготовленная плазма экспериментальных животных. При этом исследовались гематологические показатели (уровень гемоглобина - на каждом из указанных сроков, количество эритроцитов и концентрация сывороточного железа - через 30 суток введения препаратов железа), а также показатели ПОЛ и АОЗ (на каждом из перечисленных этапов забоя).

Определение уровня гемоглобина, количества эритроцитов и сывороточного железа проводилось с помощью фотометрического метода. Выполнено 250 определений уровня гемоглобина, 100 - количества эритроцитов и 60 - концентрации сывороточного железа.

Для определении интенсивности СРО и антиоксидантной активности (АОА) плазмы крови использовалось измерение хемилюминесценции (XJI) с определением показателей потенциальной способности биологического объекта к ПОЛ (Гщах), светосуммы ХЛ (S) (обратно пропорциональной АОА) и тангенса угла наклона кинетической кривой ХЛ (tga2) (характеризующего скорость спада кинетической кривой ХЛ, то есть скорость снижения процесса СРО) на био-хемилюминометре БХЛ-06 (Кузьмина Е.И., Нелюбин A.C., Щенникова М.К., 1983).

Анализ содержания малонового диальдегида (МДА) проводился по реакции с тиобарбитуровой кислотой по методу Smith J.B. (1976). Исследование активности супероксиддисмутазы (СОД) выполнялось по методу Nischikimi М. (1972), каталазы - по методу Aebi Y. (1970). Изучение концентрации церуло-плазмина осуществлялось с помощью иммуно-турбидиметрического метода на биохимическом автоматическом анализаторе Olympus AU640.

Выполнено 270 исследований, включающих одновременное определение показателей ИБХЛ, концентрации малонового диальдегида, активности супероксиддисмутазы и каталазы, а также содержания церулоплазмина.

Статистическая обработка полученных результатов проводилась с использованием лицензионного статистического пакета «STADIA 7.0/prof» (№ копии 1434) и оценкой уровня значимости различий между двумя выборками с помощью параметрических и непараметрических критериев.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХИССЛЕДОВАНИЙ

В результате проведенных исследований было установлено, что препарат двухвалентного железа сульфата с серином («Актиферрин») вызывает статистически значимое увеличение максимальной интенсивности ХЛ (1тах), характеризующей потенциальную способность биологического объекта к свободно-радикальному окислению (СРО) или его свободно-радикальную активность (CPA), уже через 1 сутки его введения (на 18,89%; Р<0,01 по сравнению с исходным уровнем). Через 3 суток это повышение становится менее выраженным, чем у животных контрольной группы (Р<0,01). Через 20 и 30 суток введения «Актиферрина», напротив, регистрируется снижение указанного показателя по сравнению с исходным уровнем (на 15,08% и 5,08% соответственно; Р<0,05 на обоих указанных этапах), которое при этом не отличается от группы контроля (рис. 1). Таким образом, препарат «Актиферрин» увеличивает CPA плазмы именно на ранних этапах его введения (через 1 сутки), вызывая «ранний» окси-дативный стресс, что согласуется с данными литературы о влиянии препаратов двухвалентного железа на процесс СРО (Блошанский Ю.М., Geisser Р., Хасабов H.H., 2006; Kang J.O., 2001; Defrere S. et al., 2008; Dimitrov J.D. et. al, 2008; Hiong S. et al., 2008; Weinberg E.D., 2008).

исходный I уровень

20 30 сутки

исходный 1 уровень

20 30 сутки

..........*. *.

* >

** **

¡тПШ

исходный уровень

■

10

20 30 сутки

® актиферрин ЕЗмальтофер И контроль

Рис. 1. Динамика максимальной интенсивности хемилюми-несцентного свечения (1гаа![) (а), светосуммы хемилюминесценции (8) (б), тангенса угла наклона кинетической кривой хемилюминесценции (1§о,2) (в) плазмы экспериментальных животных при введении препаратов железа

Примечания: * - статистическая значимость различий по сравнению с исходным значением показателя; ** - статистическая значимость различий по сравнению с группой контроля; ■ - статистическая значимость различий по сравнению с другой опытной группой.

При этом препарат «Актиферрин» через 1 сутки его введения повышает общую АОА по сравнению с исходным уровнем, о чем свидетельствует дина-

мика показателя светосуммы ХЛ плазмы (Б), обратно пропорционального АОА (снижение на 7,80%; Р<0,05 по сравнению с исходной величиной). При этом АОА все же ниже, чем в группе мальтофера (Р<0,05) и группе контроля, то есть препарат «Актиферрин», вызывая «ранний» оксидативный стресс уже через 1 сутки его введения, в то же время сдерживает повышение АОА (рис. 1).

Через 20 и 30 суток введения «Актиферрина» АОА повышается существенно по сравнению с исходным уровнем, о чем свидетельствует снижение показателя Б на 23,03% и 14,26% (Р<0,001 и Р<0,01 соответственно), но при этом это снижение не отличается от группы контроля (рис. 1).

Исследования тангенса угла наклона кинетической кривой ХЛ, характеризующего скорость спада процесса СРО, выявили, что препарат «Актиферрин» увеличивает указанный показатель также через 1 сутки его введения (на 53,72%; Р<0,001), причем это увеличение более существенное (в 3 раза), чем у животных группы контроля (Р<0,001) (рис. 1).

Содержание малонового диальдегида (МДА) под влиянием препарата «Актиферрин» изменяется ступенчато в течение периода наблюдения. Через 1 сутки и 20 суток происходит некоторое повышение, а в остальные сроки исследования, напротив, снижение концентрации МДА по сравнению с исходным уровнем, что подтверждается данными литературы (Дворецкий А.И. с соавт., 2006; Заспа Е.А., 2006; Литвиницкий П.Ф. с соавт., 2006).

При этом через 1 сутки «Актиферрин» обусловливает повышение концентрации МДА на 8,64% по сравнению с исходным уровнем (Р<0,05), которое меньше такового в группе контроля (в 4 раза) (Р<0,05), а также в группе мальтофера (в 6 раз) (Р<0,01). Через 5 суток «Актиферрин» вызывает снижение содержания МДА по сравнению с исходным уровнем (на 38,27%; Р<0,001) в 5 раз более значительное, чем в группе контроля (Р<0,05) и в 3 раза более выраженное, чем в группе мальтофера (Р<0,001). Через 10 суток снижение концентрации МДА под влиянием «Актиферрина» не только несущественное по сравнению с исходной величиной, но и менее выраженное, чем в группах контроля (Р<0,01) и мальтофера (Р<0,05). Через 30 суток «Актиферрин» обусловливает снижение содержания МДА по сравнению с исходным уровнем на 40,74% (Р<0,001), причем в 2 раза более существенное, чем в группе контроля (Р<0,05) (рис. 2).

Активность супероксиддисмутазы (СОД), являющейся ферментом первого этапа антиоксидантной защиты и относящейся к антиоксидантам водной фазы, под влиянием препарата «Актиферрин» в течение 1-х - 10-х суток несколько меньше таковой в группе контроля. При этом некоторое увеличение данного показателя через 10 суток и его статистически значимое снижение на 32,53% (Р<0,01) через 20 суток являются менее выраженными, чем в группе контроля (Р<0,05 на обоих указанных этапах). Через 30 суток «Актиферрин» обусловливает повышение активности СОД, хотя и несущественное по сравнению с исходным уровнем, но отличающееся от снижения данного показателя в группах контроля и мальтофера (Р<0,05 по сравнению с обеими группами). Представленные данные свидетельствуют о том, что «Актиферрин» повышает активность СОД через 30 суток введения (рис. 3).

При этом активность каталазы, являющейся ферментом второго этапа ан-тиоксидантной защиты и относящейся к антиоксидантам водной фазы, при введении препарата «Актиферрин», хотя и снижается по сравнению с исходной величиной, но при этом она не отличается статистически значимо от таковой в группе контроля (рис. 3).

3 5 10 20 30 сутки

исходный 1 уровень

Ш актиферрин Шмалътофер В контроль

Р и с. 2. Динамика концентрации малонового диальдегида в крови экспериментальных животных при введения препаратов железа

Примечания: * - статистическая значимость различий по сравнению с исходным значением показателя; ** - статистическая значимость различий по сравнению с группой контроля; ■ - статистическая значимость различий по сравнению с другой опытной группой.

«Актиферрин» обусловливает различной степени выраженности снижение концентрации церулоплазмина, являющегося антиоксидантом липидной фазы, по сравнению с исходным уровнем на протяжении всего периода его введения, но эти изменения не отличаются статистически значимо от группы контроля. Это, по-видимому, обусловлено тем, что при введении препарата «Актиферрин» в эквитерапевтических дозах концентрация ионов железа в крови не превышает физиологических величин, и содержание церулоплазмина, обладающего феррооксидазной активностью (Ярополов А.Н., 1986; Васильев В.Б., Качурин A.M., Сорока Н.В., 1988; Закирова А.Н., 1995; Connor J.R., Bencovic А., 1992; Sergeev A. et al., 1993) и катализирующего реакцию окисления Fe:+ в FeJ+, под влиянием указанного препарата изменяется практически так же, как в группе контроля.

При этом через 10 и 30 суток снижение концентрации церулоплазмина в группе «Актиферрина» меньше такового в группе мальтофера (Р<0,05 на обоих этапах исследования) (рис. 3).

Препарат трехвалентного железа (III) гидроксид полимальтозат (мальто-фер) вызывает повышение максимальной интенсивности ХЛ (Imax) плазмы по сравнению с исходным уровнем (на 9,21%; Р<0,05) уже через 1 сутки после его введения. Следует отметить, что хотя статистически значимых различий с группой контроля при этом и не выявлено, все же тенденция к увеличению указанного показателя под влиянием мальтофера противоположна таковой в груп-

пе контроля, у животных которой, напротив, отмечается некоторое снижение показателя Imax. Увеличение данного показателя через 3 суток является менее существенным, чем в группе контроля, а через 5 суток - более выраженным, чем в группе «Актиферрина» (на 22,22%; Р<0,001 по сравнению с исходным уровнем; Р<0,05 по сравнению с группой «Актиферрина»), но при этом не отличается от группы контроля. Через 20 суток мальтофер обусловливает и статистически значимое по сравнению с исходным уровнем (на 13,81%; Р<0,05), и отличающееся от изменений аналогичного показателя не только в группе контроля (Р<0,001), но и в группе «Актиферрина» (Р<0,001) повышение Jmax (рис. 1). По-видимому, это связано с тем, что при применении препарата трехвалентного железа насыщающая концентрация возникает позже в связи с особенностями его фармакокинетики. Как свидетельствуют результаты исследования распределения гидроксид полимальтозного комплекса железа в организме экспериментальных животных, данное соединение обнаруживается, в основном, в ретикулоэндотелиальной системе (Granger S., 1999). В последующем происходит постепенная утилизация препарата, железо высвобождается для связывания с трансферрином и ферритином, депонируется, расходуясь по мере необходимости (Braga М. et al., 1995).

Препарат мальтофер в течение 1 -x-5-x суток его введения обусловливает также повышение АОА по сравнению с исходным уровнем, о чем свидетельствует снижение показателя S (на 19,02%; Р<0,001 - через 1 сутки; на 12,23%; Р<0,01 - через 3 суток), однако не отличающееся от такового в группе контроля. Через 10 суток препарат мальтофер вызывает снижение АОА, о чем свидетельствует увеличение показателя S на 13,10% (Р<0,05) по сравнению с исходным уровнем, причем более существенное, чем в группе контроля (Р<0,05) (рис. 1).

Через 20 суток мальтофер обусловливает снижение показателя S на 6,76% (Р<0,05), то есть увеличение АОА, по сравнению с исходным уровнем, которое при этом является в 3 раза менее значительным, чем в группах «Актиферрина» (Р<0,001) и контроля (Р<0,01). Таким образом, препарат мальтофер, обусловливая повышение CPA плазмы экспериментальных животных в более поздние сроки, чем «Актиферрин», а именно через 20 суток от начала его введения, в этот же период также сдерживает повышение АОА (рис. I).

Кроме того, препарат мальтофер увеличивает скорость спада процесса СРО через 1 сутки и 20 суток его введения - на 55,32% и 63,83% соответственно (Р<0,001 - по сравнению с исходным уровнем на обоих этапах исследования; Р<0,001 и Р<0,01 - по сравнению с группой контроля соответственно через 1 и 20 суток). При этом увеличение указанного показателя под влиянием маль-тофера через 5 (на 61,17%) и 20 (на 63,83%) суток является более значительным, чем в группе «Актиферрина» (Р<0,05 на обоих указанных этапах) (рис. 1).

Мальтофер вызывает снижение концентрации МДА через 5 суток, несущественное по сравнению с исходной величиной, но в 2 раза более значительное, чем в группе контроля (Р<0,001). Снижение содержания МДА под влиянием мальтофера сохраняется до конца периода исследования, и через 20 суток оно отличается от некоторого увеличения аналогичного показателя в группе

«Актиферрина» (Р<0,05), а через 30 суток мальтофер обусловливает в 2 раза более существенное снижение концентрации МДА, чем у животных группы контроля (на 37,04%; Р<0,001 по сравнению с исходной величиной; Р<0,05 по сравнению с группой контроля) (рис. 2).

исходный 1 3 5 10 20 30 сутки

уровень

а

: ГП Щ _ . * * и™, : ил- «гт^ л к *

||||| 1 ■ ш * Н * *................................* А...... и; п, я-п ГГп

исходный 1 3 5 10 20 30 сутки

уровень

б

25 -г-

исходный 1 3 5 10 20 30 сутки

уровень

в

Ш актиферрин ЕЗ мальтофер И контроль

Р и с. 3. Динамика активности супероксиддисмутазы (а), каталазы (б) и концентрации церулоплазмина (в) в крови экспериментальных животных при введении препаратов железа

Примечания: * - статистическая значимость различий по сравнению с исходным значением показателя; ** - статистическая значимость различий по

сравнению с группой контроля; ■ - статистическая значимость различий по сравнению с другой опытной группой.

Активность СОД при введении мальтофера снижается через 1 сутки и 10 суток, причем через 1 сутки - несущественно по сравнению с исходной величиной, но при этом это снижение отличается от увеличения аналогичного показателя в группах контроля (Р<0,01) и «Актиферрина» (Р<0,05), а через 10 суток

- статистически значимо относительно исходного уровня (на 31,32%; Р<0,01) и в отличие от увеличения данного показателя в группах контроля (Р<0,01) и «Актиферрина» (Р<0,05). Через 3, 20 и 30 суток мальтофер вызывает также снижение активности СОД по сравнению с исходным показателем: через 3 суток - на 12,71% (Р<0,05), через 20 суток - на 25,56% (Р<0,001) и через 30 суток

- несущественное. При этом на всех трех указанных этапах снижение активности СОД менее значительное, чем в группе контроля (Р<0,05; Р<0,01 и Р<0,05 соответственно). Кроме того, через 3 и 20 суток оно еще и менее выраженное, чем в группе «Актиферрина» (Р<0,01 и Р<0,05 соответственно). Через 5 суток отмечается некоторое повышение активности СОД по сравнению с исходным уровнем (рис. 3).

Активность каталазы при введении мальтофера, хотя и снижается по сравнению с исходным уровнем на протяжении всего периода исследования, все же она практически не отличается от таковой в группе контроля (рис. 3).

Мальтофер обусловливает снижение концентрации церулоплазмина по сравнению с исходным уровнем на протяжении всего периода его введения. При этом наиболее высокий уровень церулоплазмина (за исключением исходного) регистрируется через 3 суток введения мальтофера. Концентрация изучаемого фермента в указанный срок выше таковой в группах «Актиферрина» и контроля, а снижение содержания церулоплазмина по сравнению с исходной величиной менее выраженное, чем в этих группах (Р<0,01 - по сравнению с группой контроля и Р<0,05 - по сравнению с группой «Актиферрина») (рис. 3).

Влияние препарата трехвалентного железа на указанные показатели ПОЛ и активность антиоксидантой системы в более поздние сроки по сравнению с препаратом двухвалентного железа связано, по-видимому, с особенностями всасывания, распределения и депонирования препаратов трехвалентного железа (Воробьев П.А., 2001; Михайлов И.Б., 2001; Карпов О.И., 2006; Дворецкий Л.И., Заспа Е.А., 2007; Braga М. et al., 1995; Blot I., Diallo D„ Tcheria G., 1999).

Обращает на себя внимание, что концентрация фермента липидной фазы (церулоплазмина) на фоне введения мальтофера на протяжении всего исследованного периода изменяется практически также как в группе контроля. Последнее, по-видимому, связано с тем, что феррооксидазная активность церулоплазмина при применении препарата трехвалентного железа, не требующего окисления и сразу встраивающегося в молекулу трансферрина, не проявляется.

Анализ результатов исследования показателей ПОЛ и АОЗ в крови экспериментальных животных при введении препаратов железа с антиоксидантами свидетельствует о том, что сочетание препарата «Актиферрин» и водорастворимого антиоксиданта мексидола через 1 сутки введения обусловливает тен-

денцию к снижению потенциальной способности плазмы к СРО по сравнению с исходным уровнем (табл. 3). Кроме того, данная комбинация препаратов вызывает снижение концентрации МДА (на 56,79%; Р<0,001 - по сравнению с исходным уровнем), причем более существенное, чем под влиянием сочетания мексидола с препаратом мальтофер (Р<0,001) и отличающееся от увеличения данного показателя в группе контроля (Р<0,001), а также в группе «Актифер-рин»/токоферол (Р<0,001) (рис. 4). При этом оба указанных эффекта отличаются от увеличения аналогичных показателей при введении указанного препарата железа без антиоксиданта. Очевидно, что эффект снижения концентрации МДА под влиянием данной комбинации обусловлен действием мексидола, что подтверждается данными литературы (Проданец H.H., 2007).

ТаблицаЗ

Динамика показателен индуцированной биохемилюминесценцин плазмы при введении препаратов железа с антиоксидантами (М±щ)_

Этап исследования Группы экспериментальных животных

«Актифер-рин»/мекси ДОЛ «Актифер-рин»/токо-ферол Мальтофер/ мексидол Мальтофер/ токоферол Контроль

Максимальная интенсивность XJI (1ша*). mV

Исх.уровень 6,30±0,22 6,30±0,22 6,30±0,22 6,30±0,22 6,30±0,22

1 сутки 6,28±0,28 7,23±0,13 *. **• р . Ч 5 1 I-2J Р2-4 6,28±0,16 4,65±0,23 *. **. р, > ; гЗ-4 6,24±0,18

5 суток 7,06±0,21 * 6,45±0,14 Р.-2 1 5,67±0,13 **. р, 5 У * 1-3 5,52±0,21 *; **; Р2-4 7,12±0,20 *

Светосумма XJI (S), mV

Исх.уровень 47,33±1,40 47,33±1,40 47,33±1,40 47,33±1,40 47,33±1,40

1 сутки 42,59±1,93 45,09±0,98 **;Р2-4 44,15±0,99 Рз-4 37,24±1,21 * 38,57±1,09 *

5 суток 49,50±1,45 **;Pi-2;Pi-3 43,61±1,04 ** 43,31±0,98 44,42±1,40 41,64±0,92 *

Тангенс угла наклона кинетической кривой XJI (tga2)

Исх.уровень 1,88±0,06 1,88±0,06 1,88±0,06 1,88±0,06 1,88±0,06

1 сутки 2,16±0,11 * 2,54±0,04 *; **; Рь2; Р2-4 2,12±0,04 * 1,69±0,09 > гЗ-4 2,24±0,06 *

5 сутки 2,40±0,10 ** ? 2,05±0,04 *; **;Pi-2 1,70±0,05 *; **; Р|-з 1,78±0,05 **; Р2-4 2,79±0,09 *

Примечания: * - статистическая значимость различий между показателем через 1 сутки, 5 суток и исходным уровнем; ** - статистическая значимость различий по сравнению с группой контроля; Р^ 3.4; 1-з; 2-4 - статистическая значимость различий между изменениями показателя в соответствующих группах животных.

На этом же этапе исследования сочетание «Актиферрин»/мексидол обусловливает статистически значимое по сравнению с исходным уровнем повышение активности СОД (на 40,53%; Р<0,001), не отличающееся при этом от группы контроля (табл. 4). Это свидетельствует о том, что мексидол, являющийся водорастворимым антиоксидантом, именно в комбинации с препаратом двухвалентного железа «Актиферрином» через 1 сутки введения способствует более существенному повышению активности фермента водной фазы СОД по сравнению с изменением этого показателя при введении «Актиферрина» без антиоксиданта, когда активность СОД увеличилась лишь на 23,85%.

Таким образом, мексидол в комбинации с препаратом двухвалентного железа «Актиферрином» именно в ранние сроки, когда данный препарат железа активирует ПОЛ, позволяет уменьшить CPA плазмы и концентрацию малонового диальдегида, а также более существенно, чем при введении указанного препарата железа без антиоксиданта, повысить активность фермента СОД. Указанные эффекты обусловлены механизмом действия мексидола, взаимодействующего с ионами Fe2+ и за счет этого снижающего эффективную концентрацию катализатора свободно-радикального процесса, кроме этого, повышающего активность антиоксидантной системы за счет действия на ферментные системы (Воронина Т.А., 2001; Залесский В.Н., Великая Н.В., 2003; Середенин С.Б. с соавт., 2005; Проданец H.H., 2007).

Через 5 суток комбинация «Актиферрин»/мексидол снижает активность антиоксидантной системы, о чем свидетельствует увеличение показателя свето-суммы ХЛ (Р<0,05 - по сравнению с группой контроля, сочетаниями «Акти-феррин»/токоферол и мальтофер/мексидол) (табл. 3). Это сопровождается статистически значимым снижением активности СОД (на 27,66%; Р<0,001), в отличие от повышения этого показателя на предыдущем сроке исследования. Увеличивает скорость спада процесса СРО (на 27,66%; Р<0,001), хотя и не так значительно как в группе контроля (на 48,40%) (Р<0,05 между контрольной группой и группой «Актиферрин»/мексидол) (табл. 3), однако при этом снижается содержание МДА (на 48,15%; Р<0,001), причем наиболее значительно из всех сравниваемых групп (Р<0,01 - по сравнению с группой контроля; Р<0,001 - с группой «Актиферрин»/токоферол; Р<0,01 - с группой мальтофер/мексидол) (рис. 4).

Комбинация «Актиферрин» с жирорастворимым антиоксидантном токоферола ацетатом через 1 сутки ее введения обусловливает увеличение потенциальной способности плазмы к СРО как по сравнению с исходной величиной (на 14,76%; Р<0,01), так и с группами контроля (Р<0,05), «Актиферрин»/мексидол (Р<0,05) и мальтофер/токоферол (Р<0,001), о чем свидетельствует показатель максимальной интенсивности ХЛ плазмы (табл. 3). На этом же этапе исследования указанное сочетание препаратов сдерживает увеличение АОА, как по сравнению с группой контроля (Р<0,05), так и по сравнению с комбинацией токоферола ацетата с препаратом трехвалентного железа мальтофером (Р<0,01), что подтверждается динамикой показателя светосуммы ХЛ (табл. 3). Увеличивает скорость спада процесса СРО (на 35,11%; Р<0,001 - по сравнению с исходным уровнем и группой мальтофер/токоферол; Р<0,01 - по сравнению с

группами контроля и «Актиферрин»/мексидол) (табл. 3). Вызывает некоторое увеличение концентрации МДА по сравнению с исходным уровнем, однако, не такое значительное, как в группе контроля (Р<0,05) (рис. 4). Снижает активность СОД как по сравнению с исходной величиной (на 34,37%; Р<0,001), так и с группами контроля (Р<0,001), «Актиферрин»/мексидол (Р<0,001) и мальто-фер/токоферол (Р<0,01) (табл. 4). Уменьшает концентрацию церулоплазмина | (на 20,68%; Р<0,05), однако, не столь значительно, как в группе контроля (Р<0,05) (табл. 4).

исходный уровень 1 5 сутки

ИИ актиферрин+мексидол I...........J актиферрин+токоферол I.....I мальтофер+мексидол

ШЯ мальтофер+токоферол ♦ контроль

Р и с. 4. Динамика концентрации малонового диальдегида в крови экспериментальных животных при введении препаратов железа с антиок-сидантами

Примечания: * - статистическая значимость различий по сравнению с исходным значением показателя; ** - статистическая значимость различий по сравнению с группой контроля; 1-2 и т.д. - статистическая значимость различий между соответствующими группами.

Некоторое увеличение CPA плазмы регистрируется и через 5 суток введения комбинации «Актиферрин»/токоферол, но оно менее выраженное, чем в группе «Актиферриш/мексидол (Р<0,05) (табл. 3). Кроме того, через 5 суток введения комбинация «Актиферрин»/токоферол снижает показатель S (на 7,86%; Р<0,05) и увеличивает tga2 (на 9,04%; Р<0,05), но менее значительно, чем в группе контроля (Р<0,05 и Р<0,001 соответственно) (табл. 3). Несколько снижает концентрацию МДА, при этом менее существенно, чем в группе контроля (Р<0,01) (рис. 4). Уменьшает активность СОД по сравнению с исходной величиной (на 29,17%; Р<0,001) и группой контроля (Р<0,001) (табл. 4). Несколько увеличивает концентрацию церулоплазмина по сравнению с исходной величиной, что отличается от ее снижения в группах контроля (Р<0,001) и «Ак-тиферрин»/мексидол (Р<0,01) (табл. 4).

Сочетание препарата мальтофер с мексидолом через 1 сутки введения обусловливает тенденцию к снижению потенциальной способности плазмы к СРО по сравнению с исходным уровнем (табл. 3). Сдерживает увеличение АОА по сравнению с группой мальтофер/токоферол, о чем свидетельствует незначи-

тельное снижение показателя светосуммы ХЛ (табл. 3). Снижает концентрацию МДА, хотя и незначительно по сравнению с исходным уровнем, при этом это снижение отличается не только от группы контроля (Р<0,05), у животных которой, напротив, регистрируется повышение данного показателя, но и является менее выраженным, чем у животных на фоне сочетанного введения препаратов мальтофер/токоферол (Р<0,05) (рис. 4). Уменьшает активность СОД, как по сравнению с исходным уровнем (на 44,38%; Р<0,001), так и по сравнению с группами контроля (Р<0,001), «Актиферрин»/мексидол (Р<0,001) и мальтофер/токоферол (Р<0,001) (табл. 4). Увеличивает концентрацию церулоплазми-на, хотя и несущественно по сравнению с исходной величиной, но в отличие от снижения данного показателя в группе контроля (Р<0,01) (табл. 4).

Таблица4

Динамика эндогенных антиоксидаитов при сочетанием введении ферропрепаратов с препаратами антиоксидантов (М±т)_

Этап исследования Группы экспериментальных животных

«Актифер-рин»/мекси дол «Актифер-рин»/токо-ферол Мальтофер/ мексидол Мальтофер/ токоферол Контроль

Активность супероксиддисмутазы (СОД), ед.акт./гНЬмин

Исх. уровень 57,98±2,53 57,98±2,53 57,98±2,53 57,98±2,53 57,98±2,53

1 сутки 81,48±1,87 * 38,05±0,91 *• **• Р, • ? 5 1 1-2> Р2-4 32,25±1,36 *; **; Рьз; Рз-4 49,05±2,06 * 74,53±5,23 *

5 суток 41,94±0,89 ** > 41,07±1,32 ** 50,92±3,35 **.р . р 5 "1-3» * 3-4 40,93±1,21 9 72,43±9,55

Активность каталазы, ед.акт./гНЪсек

Исх.уровень 104,40± 12,06 104,40± 12,06 104,40± 12,06 104,40± 12,06 104,40± 12,06

1 сутки 79,03±10,31 56,51±4,67 * 59,49±10,00 * 51,50±3,93 * 58,65±12,70 *

5 суток 97,19±9,64 Р1-2; Р1-3 39,85±0,97 * 38,22±1,44 * 48,97±3,33 * 66,09±13,19 *

Концентрация церулоплазмина, мг/л

Исх.уровень 19,20±1,46 19,20±1,46 19,20±1,46 19,20±1,46 19,20±1,46

1 сутки 18,90±3,53 * * 15,23±1,21 ** 19,77±2,30 ** 15,50±0,73 9 8,16±1,10 *

5 суток 14,28±1,20 * 20,55±0,37 **; Р,-2 18,53±1,18 **. р > "1-3 24,13±5,71 ** 9,97±1,37 *

Примечания: * - статистическая значимость различий между показателем через 1 сутки, 5 суток и исходным уровнем; ** - статистическая значимость различий по сравнению с группой контроля; Р^ з_4; ьз; 2-4- статистическая значимость различий между изменениями показателя в соответствующих группах животных.

Через 5 суток введения комбинация мальтофер/мексидол вызывает снижение CPA плазмы по сравнению с исходным уровнем (на 10,00%; Р<0,05), отличающееся при этом от увеличения этого показателя в группе контроля (Р<0,01), а также в группе «Актиферрин»/мексидол (Р<0,01) (табл. 3). Уменьшает скорость спада процесса СРО как по сравнению с исходной величиной (на 9,57%; Р<0,05), так и по сравнению с группами контроля (Р<0,001) и «Акти-феррин»/мексидол (Р<0,001) (табл. 3). Обусловливает менее существенное снижение активности СОД, чем в группах животных, которым вводили комбинацию «Актиферрин»/мексидол (Р<0,01), а также сочетание мальто-фер/токоферол (Р<0,01), и отличающееся при этом от повышения активности СОД в группе контроля (Р<0,01) (табл. 4). Несколько снижает концентрацию церулоплазмина по сравнению с исходным уровнем, причем менее значительно, чем в группах контроля (Р<0,01) и «Актиферрин»/мексидол (Р<0,05) (табл.

4).

Комбинация мальтофер/токоферола ацетат через 1 сутки ее введения вызывает снижение CPA плазмы (на 26,19%; Р<0,001 - по сравнению с исходным уровнем; Р<0,01 - по сравнению с группой контроля и Р<0,001 по сравнению с группой мальтофер/мексидол) (табл. 3), а также снижение скорости спада процесса СРО (Р<0,001 - по сравнению с группами контроля и мальтофер/мексидол) (табл. 3). Обусловливает статистически значимое снижение концентрации МДА по сравнению с исходным уровнем (на 22,22%; Р<0,01), отличающееся при этом от ее увеличения в группе контроля (Р<0,01) (рис. 4). Уменьшает содержание церулоплазмина по сравнению с исходной величиной (на 19,27%; Р<0,05), но оно не такое значительное, как у животных контрольной группы (Р<0,05) (табл. 4).

Через 5 суток введения препаратов мальтофер/токоферол эффект снижения потенциальной способности плазмы к СРО также регистрируется (на 12,38%; Р<0,05) и отличается по направленности изменений от групп контроля (Р<0,01) и «Актиферрин»/токоферол (Р<0,01), у животных которых, напротив, отмечается увеличение этого показателя (табл. 3). Кроме того, на этом этапе исследования сочетание мальтофер/токоферол уменьшает скорость спада процесса СРО по сравнению с группами контроля (Р<0,001) и «Актифер-рин»/токоферол (Р<0,05) (табл. 3). Увеличивает концентрацию МДА по сравнению с исходным уровнем (на 14,81%; Р<0,05), в отличие от всех других обследованных групп животных, у которых, напротив, регистрируется различной степени выраженности снижение концентрации МДА (Р<0,001 - по сравнению с группой контроля; Р<0,01 - с группой мальтофер/мексидол) (рис. 4). Снижает активность СОД как по сравнению с исходной величиной (на 29,41%; Р<0,001), так и по сравнению с группой контроля (Р<0,001). Обусловливает некоторое увеличение концентрации церулоплазмина по сравнению с исходной величиной, которое отличается от снижения аналогичного показателя в группе контроля (Р <0,01) (табл. 4).

Следовательно, токоферола ацетат в сочетании с препаратом трехвалентного железа мальтофером позволяет уменьшить CPA плазмы и снизить содержание МДА уже через 1 сутки введения, в отличие от применения этого же

препарата железа без антиоксиданта. Данный факт может быть обусловлен тем, что за счет вводимого экзогенного токоферола увеличивается емкость эндогенной антиоксидантной системы, но при этом по принципу обратной связи несколько уменьшается ее активность, в частности, составляющих ее ферментов (супероксиддисмутазы и каталазы). Вместе с тем, несмотря на то, что сам маль-тофер несколько повышает прооксидантную активность на ранних сроках его введения, вводимого токоферола достаточно, чтобы снизить эту активность, что и выражается в уменьшении потенциальной способности плазмы к СРО, а также снижении концентрации МДА. Это согласуется с данными литературы (Федорчук A.C. с соавт., 1998). Кроме того, указанное сочетание позволяет повысить концентрацию антиоксиданта липидной фазы церулоплазмина через 5 суток его введения.

Таким образом, при коротком курсе применения водорастворимый анти-оксидант мексидол является наиболее комплементарным с препаратом двухвалентного железа «Актиферрином», усиливающим процесс ПОЛ именно в ранние сроки. О наибольшей эффективности указанной комбинации по сравнению с другими изученными сочетаниями препаратов свидетельствует динамика таких показателей, как потенциальная способность плазмы к СРО, концентрация МДА и активность СОД. Это связано с особенностями механизма действия и фармакокинетики данного антиоксиданта (Воронина Т.А., 2001; Котляров A.A., Смирнов Л.Д., 2004; Поварова О.В. с соавт., 2004; Андреева H.H., Мухина И.В., 2005; Середенин С.Б. с соавт., 2005).

Жирорастворимый антиоксидант токоферола ацетат при коротком курсе применения наиболее комплементарен с препаратом трехвалентного железа, о чем свидетельствует показатель потенциальной способности плазмы к СРО, а также концентрация МДА. Это, по-видимому, связано с особенностями распределения токоферола, который в наибольших концентрациях обнаруживается в ретикулоэндотелиальной системе, то есть там же, где и гидроксид полималь-тозный комплекс железа (Наумов В.З., с соавт., 2000). При этом токоферола ацетат повышает концентрацию эндогенного антиоксиданта липидной фазы (церулоплазмина) через 5 суток введения, как в сочетании с препаратом двух-, так и трехвалентного железа.

ВЫВОДЫ:

1. Препарат двухвалентного железа сульфата/серин («Актиферрин») в дозе 17,14 мг/кг:

- увеличивает свободно-радикальную активность (CPA) и скорость спада процесса свободно-радикального окисления (СРО) в плазме экспериментальных животных (через 1 сутки его введения);

- снижает содержание малонового диальдегида (МДА) (через 5 и 30 суток);

- повышает активность супероксиддисмутазы (СОД) (через 30 суток).

2. Препарат трехвалентного железа (III) гидроксид полимальтозат (маль-тофер) в дозе 17,14 мг/кг:

- увеличивает CPA плазмы (через 20 суток введения);

- снижает антиоксидантную активность (АОА) (через 10 суток);

- повышает скорость спада процесса СРО (через 1 сутки и 20 суток);

- снижает концентрацию МДА (через 5 и 30 суток);

- уменьшает активность супероксиддисмутазы (через 1 сутки и 10 суток).

3. Этилметилгидроксипиридина сукцинат (мексидол) в дозе 25,71 мг/кг:

- в комбинации с препаратом «Актиферрин» снижает CPA плазмы и концентрацию МДА (через 1 сутки введения); уменьшает антиоксидантную активность, снижает содержание МДА и активность СОД (через 5 суток);

- в сочетании с препаратом мальтофер - уменьшает концентрацию МДА и активность СОД, а также повышает концентрацию церулоплазмина (ЦП) (через 1 сутки); снижает CPA плазмы, скорость спада процесса СРО, активность СОД (через 5 суток).

4. Витамин Е (токоферола ацетат) в дозе 8,57 мг/кг:

- в комбинации с препаратом «Актиферрин» увеличивает CPA плазмы, скорость спада процесса СРО и снижает активность СОД (через 1 сутки введения); уменьшает активность СОД и повышает концентрацию ЦП (через 5 суток);

- в сочетании с препаратом мальтофер - уменьшает CPA плазмы, скорость спада процесса СРО и содержание МДА (через 1 сутки); снижает CPA, скорость спада процесса СРО, активность СОД и увеличивает концентрацию МДА, а также ЦП (через 5 суток).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Выбор препарата железа при лечении железодефицитной анемии должен быть строго обоснованным. При этом необходимо учитывать особенности влияния препаратов, относящихся к различным группам (двух- и трехвалентного железа), на процесс свободно-радикального окисления и сроки активации ими указанных реакций.

2. Препараты железа следует назначать сочетание с антиоксидантами, с учетом их наибольшей комплементарное™.

3. Рекомендовать контроль динамики показателей перекисного окисления липидов при проведении ферротерапии железодефицитной анемии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Айвазян Г.Г. Клиническая эффективность препаратов двухвалентного железа при лечении железодефицитной анемии / Г.Г. Айвазян, В.Б. Кузин, Л.В. Ловцова, Д.В. Тепаев // Fundamental pharmacology and pharmacy - clinical practice: Mat. of the 2-nd Russian-Chinese intern, seien, conf. on pharmacology, Perm, Russia, 25-27 September 2006. - Perm, 2006. - P. С. 10-11.

2. Ловцова Л.В. Клиническая эффективность препаратов двухвалентного и трехвалентного железа при лечении железодефицитной анемии / Л.В. Ловцо-

ва, В.Б. Кузин, Г.Г. Айвазян, Ю.В. Минеичева, Е.А. Петрова // Нижегородский медицинский журнал. - 2006. - Спец. выпуск № 2. - С. 237-240.

3. Ловцова Л.В. Фармакоэкономическая эффективность препаратов двухвалентного железа при лечении железодефицитной анемии / Л.В. Ловцова, Г.Г. Айвазян, Ю.В. Минеичева, Е.А. Петрова, Д.В. Тепаев // Межд. конгр. «Развитие фармакоэкономики и фармакоэпидемиологии в Российской Федерации», Москва, 18-19 декабря 2006 г.: Тез. докл. - М., 2006. - С. 198-199.

4. Айвазян Г.Г. Влияние препаратов двухвалентного железа на динамику лабораторных показателей при лечении железодефицитной анемии / Г.Г. Айвазян, Л.В. Ловцова, Ю.В. Минеичева, Е.А. Петрова, В.В. Дугина // XIV Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство»: Сб. мат. конгр. (тез. докл.), Москва, 16-20 апреля 2007 г. - М„ 2007. - С. 661-662.

5. Минеичева Ю.В. Клиническая эффективность препарата трехвалентного железа (III) гидроксид полимальтозного комплекса при лечении железодефицитной анемии / Ю.В. Минеичева, Л.В. Ловцова, Г.Г. Айвазян, Е.А. Петрова, В.В. Дугина // XIV Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство»: Сб. мат. конгр. (тез. докл.), Москва, 16-20 апреля 2007 г. - М., 2007. - С. 718-719.

6. Ловцова Л.В. Влияние препарата железа сульфата с серином на показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в эксперименте / Л.В. Ловцова, В.Б. Кузин, Г.Г. Айвазян, Ю.В. Минеичева, Е.А. Петрова // Психофармакология и биологическая наркология. - 2007. - Т. 7, Спец. выпуск (сентябрь) (Мат. III съезда фармакологов России «Фармакология - практическому здравоохранению», СПб, 23-27 сентября 2007 г.), ч. 1. - С. 1772.

7. Кузин В.Б. Изучение клинической и затратной эффективности препаратов двухвалентного железа при лечении железодефицитной анемии / В.Б. Кузин, Л.В. Ловцова, Д.В. Тепаев и др. // Доказательная медицина - основа современного здравоохранения: мат. Межд. конгр., Хабаровск, 8-12 октября 2007 г. Под ред. С.Ш. Сулейманова, Г.В. Чижовой. - Хабаровск: Изд. Центр ИПКСЗ, 2007. - С.194-197.

8. Айвазян Г.Г. Динамика показателей перекисного окисления липидов при применении препарата двухвалентного железа сульфата с серином / Г.Г. Айвазян, Л.В. Ловцова, В.Б. Кузин, Ю.В. Минеичева // XV Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство»: Сб. мат. контр, (тез. докл.), Москва, 14-18 апреля 2008 г. -М., 2008.-С. 574.

9. Минеичева Ю.В. Изучение влияния препарата трехвалентного железа (III) гидроксид полимальтозного комплекса на процессы свободно-радикального окисления / Ю.В. Минеичева, Л.В. Ловцова, В.Б. Кузин, Г.Г. Айвазян // XV Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство»: Сб. мат. конгр. (тез. докл.), Москва, 14-18 апреля 2008 г. - М., 2008. - С. 667.

Подписано в печать 24.04.2009 г. Гарнитура Тайме. Печать RISO RZ 570 ЕР. Усл.печ.л. 1,0. Заказ № 69. Тираж 100 ж

Отпечатано ООО «Стимул-СТ» 603155, г.Нижний Новгород, ул.Трудовая,6 Тел.:436-86-40

Железо является важнейшим элементом, выполняющим широкий спектр физиологических функций, а его дефицит приводит к развитию такого заболевания, как железодефицитная анемия (ЖДА) (Захарова И.Н., Заплатников А.Л., Малова Н.Е., 2003). По данным Всемирной организации здравоохранения, же-лезодефицитной анемией в мире страдает около 1 800 ООО ООО человек (WHO, 1998).

При данном заболевании формируются функциональные и морфологические изменения в различных органах и тканях (Дворецкий Л.И., 2001; Казакова Л.М., 2001; Захарова И.Н., Заплатников А.Л., Малова Н:Е., 2003), которые проявляются в виде анемического и сидеропенического синдромов (Протокол ведения больных. Железодефицитная анемия, 2005). При этом основным патогенетическим звеном является-тканевая гипоксия, при которой активируется свободно-радикальный процесс и снижается активность антиоксидантной системы вследствие, в частности, нарушения белковообразующей функции (Зарубина И.В., Шабанов П. Д., 2004; Новиков В.Е., Левченкова О.С., Парфенов Э.А., 2005; Бегова С.В., Османова З.М., Омаров Н.С., 2007; Евсеев А.В. с соавт., 2008; Gibson G.E., Huang Н. М., 2004).

Вместе с тем, известно, что ферропрепараты, являющиеся основой заместительной терапии дефицита железа, также могут активировать процесс пере-кисного окисления липидов (Defrere S. et al., 2008; Dimitrov J.D. et al., 2008; Mozuraityte R., Rustad Т., Storro I., 2008).

Вследствие этого при лечении ЖДА возникает необходимость коррекции изменений процесса свободно-радикального окисления, обусловленных как проводимой ферротерапией, так и явлениями наблюдаемой гипоксии. Указанная задача может быть решена как за счет обоснованного выбора двух- или трехвалентного препарата железа, так и выбора наиболее комплементарного с этим препаратом антиоксиданта.

При этом вопросы, касающиеся влияния препаратов железа на показатели перекисного окисления липидов, и антиоксидантной защиты, до настоящего времени остаются недостаточно изученными (Блошанский Ю.М., Geisser Р., Хасабов Н.Н., 2006; Заспа Е.А., 2006; Dimitrov J.D. et. al., 2008; Hsiao J.K. et al., 2008; Wang L. et al., 2008; Weinberg E.D., 2008).

В связи с вышеуказанным, исследования, посвященные изучению влияния ферропрепаратов, относящихся к различным группам (двух- и трехвалентного железа), на процесс перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты, а также наиболее комплементарных с ними антиоксидантов при коротком курсе введения, являются актуальной задачей клинической фармакологии.

Цель исследования. Изучение влияния препаратов железа на показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в крови экспериментальных животных, а также комплементарности этих препаратов с антиоксидантами при коротком курсе введения.

В соответствии с поставленной» целью решались следующие задачи:

1. Изучить влияние препарата двухвалентного железа сульфата/серин («Актиферрин») в эквитерапевтической дозе на показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в крови экспериментальных животных.

2. Исследовать влияние препарата трехвалентного железа (III) гидроксид полимальтозата (мальтофер) на показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в крови экспериментальных животных при введении его в эквитерапевтической дозе.

3. Изучить комплементарность водорастворимого антиоксиданта этилме-тилгидроксипиридина сукцината (мексидола) с препаратами двух- и трехвалентного железа при коротком курсе введения в эксперименте.

4. Исследовать комплементарность жирорастворимого антиоксиданта витамина Е (токоферола ацетата) с препаратами двух- и трехвалентного железа при коротком курсе введения в эксперименте.

Научная новизна работы. Проведено сравнительное исследование влияния препаратов железа, относящихся к различным группам - двух- и трехвалентного, на динамику показателей перекисного окисления липидов и анти-оксидантной защиты в крови экспериментальных животных на различных этапах введения этих препаратов.

Доказано, что изучаемые препараты железа, в зависимости от химической структуры, в разные сроки вызывают активацию перекисного окисления липидов. Препарат двухвалентного железа сульфата/серин («Актиферрин») активирует процесс ПОЛ через 1 сутки его введения, что проявляется в виде увеличения свободно-радикальной активности плазмы, замедлении роста антиокси-дантной активности и повышении скорости спада процесса СРО. Препарат трехвалентного железа' (III)1 гидроксид полимальтозат (мальтофер) на ранних этапах обусловливает незначительное, а на более поздних этапах - выраженное влияние на указанный процесс, что подтверждается увеличением скорости'спада процесса СРО и снижением активности СОД (через 1 сутки его введения), снижением концентрации МДА (через 5 суток), а также снижением антиокси-дантной активности и активности СОД (через 10 суток), увеличением свободно-радикальной активности плазмы и скорости спада процесса1 СРО (через 20 суток), снижением содержания МДА (через 30 суток).

Установлено, что при коротком курсе введения водорастворимый антиок-сидант этилметилгидроксипиридина сукцинат (мексидол) наиболее комплементарен с препаратом двухвалентного железа «Актиферрином», о чем свидетельствует динамика таких показателей, как потенциальная'способность плазмы к СРО, концентрация МДА и активность СОД. Жирорастворимый антиоксидант витамин' Е (токоферола ацетат) наиболее комплементарен с препаратом трехвалентного железа мальтофером, что подтверждается динамикой таких показателей, как потенциальная способность плазмы к СРО, концентрация МДА и церу-лоплазмина.

Практическая ценность работы состоит в том, что полученные результаты позволяют оптимизировать терапию железодефицитной анемии на основе обоснованного выбора ферропрепарата с учетом особенностей влияния препаратов двух- и трехвалентного железа на процесс свободно-радикального окисления и сроков активации ими указанных реакций, а также сочетанного назначения с ними наиболее комплементарного антиоксиданта, под контролем динамики показателей перекисного окисления липидов.

Результаты исследований внедрены в деятельность лечебно-профилактических учреждений службы медицинского обеспечения*на Горьков-ской железной дороге - филиале ОАО «Российские железные дороги».

По результатам исследования зарегистрирована Заявка на изобретение № 2008149614 «Способ лечения железодефицитной анемии у беременных» в Федеральном институте промышленной собственности Федеральной службы по интеллектуальной собственности, патентам и товарным знакам.

Основные положения работы внедрены и используются в процессе обучения студентов, клинических ординаторов и интернов на кафедре общей и клинической фармакологии ГОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия».

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Существующие различия во влиянии препаратов двух- и трехвалентного железа на процесс перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты проявляются на разных этапах их введения и обусловлены особенностями химической структуры, а также фармакокинетики железосодержащих препаратов.

2. Препарат двухвалентного железа сульфата/серин («Актиферрин») активирует процесс перекисного окисления липидов уже на ранних этапах его введения (через 1 сутки), а препарат трехвалентного железа (III) гидроксид полимальтозат (мальтофер) на ранних этапах обусловливает незначительное, а на более поздних этапах - выраженное влияние на указанный процесс.

3. При коротком курсе введения водорастворимый антиоксидант этилме-тилгидроксипиридина сукцинат (мексидол) наиболее комплементарен с препаратом двухвалентного железа «Актиферрином», а жирорастворимый антиоксидант витамин Е (токоферола ацетат) - с препаратом трехвалентного железа мальтофером.

Апробация работы. Результаты исследований и основные положения диссертации представлены и обсуждены на 2-й Российско-Китайской-научной конференции по фармакологии «Фундаментальная фармакология и фармация — клинической практике» (Пермь, 2006); Международном конгрессе «Развитие фармакоэкономики и фармакоэпидемиологии в Российской Федерации» (Москва, 2006); XIV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007); III съезде фармакологов России «Фармакология - практическому здравоохранению» (Санкт-Петербург, 2007); VI Международном, конгрессе «Доказательная медицина - основа современного»здравоохранения» (Хабаровск,

2007); XV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва,

2008).

Публикации. По теме диссертации имеется 9 публикаций, в том числе 1 - в издании, рекомендованном ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, двух глав собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических рекомендаций, библиографического списка. Работа изложена на 167 страницах текста компьютерного набора, иллюстрирована 14 рисунками, 24 таблицами. Библиографический список содержит 298 названий работ, из них 170 отечественных и 128 зарубежных автора.

ВЫВОДЫ:

1. Препарат двухвалентного железа сульфата/серин («Актиферрин») в дозе 17,14 мг/кг:

- увеличивает свободно-радикальную активность (CPA) и скорость спада i процесса свободно-радикального окисления (СРО) в плазме экспериментальных животных (через 1 сутки его введения);

- снижает содержание малонового диальдегида (МДА) (через 5 и 30 суток);

- повышает активность супероксиддисмутазы (СОД) (через 30 суток).

2. Препарат трехвалентного железа (III) гидроксид полимальтозат (мальтофер) в дозе 17,14 мг/кг:

- увеличивает CPA плазмы (через 20 суток введения);

- снижает антиоксидантную активность (АОА) (через 10 суток);

- повышает скорость спада процесса СРО (через 1 сутки и 20 суток);

- снижает концентрацию МДА (через 5 и 30 суток);

- уменьшает активность супероксиддисмутазы (через 1 сутки и 10 суток).

3. Этилметилгидроксипиридина сукцинат (мексидол) в дозе 25,71 мг/кг:

- в комбинации с препаратом «Актиферрин» снижает CPA плазмы и концентрацию МДА (через 1 сутки введения); уменьшает антиоксидантную активность, снижает содержание МДА и активность СОД (через 5 суток);

- в сочетании с препаратом мальтофер - уменьшает концентрацию МДА и активность СОД, а также повышает концентрацию церулоплазмина (ЦП) (через 1 сутки); снижает CPA плазмы, скорость спада процесса СРО, активность СОД (через 5 суток).

4. Витамин Е (токоферола ацетат) в дозе 8,57 мг/кг:

- в комбинации с препаратом «Актиферрин» увеличивает CPA плазмы, скорость спада процесса СРО и снижает активность СОД (через 1 сутки* введения); уменьшает активность СОД и повышает концентрацию ЦП (через 5 суток);

- в сочетании с препаратом мальтофер - уменьшает CPA плазмы, скорость спада процесса СРО и содержание МДА (через 1 сутки); снижает CPA, скорость спада процесса СРО, активность СОД и увеличивает концентрацию МДА, а также ЦП (через 5 суток).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Выбор препарата железа при лечении железодефицитной анемии должен быть строго обоснованным. При этом необходимо учитывать особенности влияния препаратов, относящихся к различным группам (двух- и трехвалентного железа), на процесс свободно-радикального окисления и сроки активации ими указанных реакций.

2. Препараты железа следует назначать сочетанно с антиоксидантами, с учетом их наибольшей комплементарности.

3. Рекомендовать контроль динамики показателей перекисного окисления липидов при проведении ферротерапии железодефицитной анемии.