Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Фармакологические эффекты липидов природного происхождения при экспериментальной патологии

На правах рукописи

005538684

Яценков Антон Игоревич

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ ЛИПИДОВ ПРИРОДНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИИ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

21 НОЯ 2013

Томск - 2013

005538684

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор, Венгеровский

заслуженный работник высшей школы РФ Александр Исаакович

Официальные оппоненты:

Боровская Татьяна Геннадьевна, доктор биологических наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт фармакологии имени Е.Д. Гольдберга» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, лаборатория фармакологии репродуктивной системы, заведующая лабораторией

Новожеева Татьяна Петровна, доктор биологических наук, Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт психического здоровья» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, лаборатория нейробиологии, старший научный сотрудник

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита диссертации состоится » декабря 2013 года в часов на

заседании диссертационного совета Д 001.031.01 при Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт фармакологии имени Е.Д. Гольдберга» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (634028, г. Томск, пр. Ленина, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного бюджетного учреждения «Научно-исследовательский институт фармакологии имени Е.Д. Гольдберга» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук

Автореферат разослан «_» ноября 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Амосова Евдокия Наумовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Многие лекарственные средства природного происхождения отличаются высокой биологической активностью в сочетании с низкой токсичностью (Белостоцкая Л.И. и соавт., 2006; Фролова Н.Ю. и соавт. 2010; Arora R. et al., 2003). Возобновляемые ресурсы и доступная сырьевая база делают разработку природных препаратов экономически оправданной.

В медицинской практике широко применяют препараты липидов. Среди них наиболее известны гепатопротектор эссенциале, содержащий высокоочшценную фракцию фосфатидилхолина; фосфоглив, в состав которого входят фосфолипиды и глицерризиновая кислота; лекарственные средства на основе полиеновых жирных кислот со-3 (омакор) (Машковский М.Д., 2010). Препараты фосфолипидов и полиеновых жирных кислот оказывают сосудорасширяющее, гиполипидемическое, антиагрегантное, гепатопротективное, противовоспалительное и

антипролиферативное действие. Их применяют в кардиологии, ревматологии, онкологии, при атеросклерозе и заболеваниях кожи (Гундерманн К., 2009; Calo L., 2005; Balk Е., 2006). Известно, что липиды содержатся в неокостенелых рогах (пантах) алтайского марала и торфе.

Компоненты пантов марала оказывают психостимулирующий, адаптогенный, противоопухолевый эффекты (Хлусова М.Ю., 1999; Бахтина С.М. и соавт. 2006). Биологически активные вещества торфа обладают разносторонними фармакологическими свойствами, в том числе противовоспалительным, антиоксидантным, гастропротективным действием (Саратиков A.C. и соавт. 2004; Nelson D.L., 2008).

В состав липидов пантов марала и липидов торфа входят жирные кислоты, полифенольные соединения, ситостерины, каротиноиды, аминокислоты (Суслов Н.И. и соавт., 2004; Бахтина С.М. и соавт., 2006). Указанные группы веществ обладают высоким антиоксидантым потенциалом, кроме того, незаменимые жирные кислоты способны выступать в роли регуляторов межклеточных взаимодействий, служат предшественниками стероидных гормонов, простагландинов и фосфоинозитидов (Нежинская Г.И. и соавт., 2001; Сергеева М.Г. и соавт., 2006).

Представляет интерес исследовать фармакологические свойства липидов пантов марала и липидов торфа, в частности противовоспалительную активность, гепатопротективное действие и возможное влияние на регресс доброкачественной гиперплазии предстательной железы.

Цель работы. Экспериментальная оценка противовоспалительной, гепатопротективной и антипролиферативной активности липидных фракций пантов

марала и верхового торфа в сравнении с действием диклофенака, эссенциале и экстракта Serenoa repetís.

Задачи исследования.

1. Изучить противовоспалительное и анальгетическое действие липидов пантов марала и липидов торфа в дозах 10, 30 и 60 мг/кг при остром экссудативном и альтеративном воспалении в сравнении с действием эталонного антифлогистика диклофенака в дозе 10 мг/кг.

2. Установить дозозависимое влияние липидов пантов марала и липидов торфа на развитие хронического пролиферативного воспаления при модели «хлопковой гранулемы» в сравнении с действием диклофенака.

3. Оценить противовоспалительные свойства липидов пантов марала и липидов торфа при модели иммунного воспаления, вызванного адъювантом Фрейнда, в сравнении с действием диклофенака.

4. Изучить дозозависимое гепатопротективное действие липидов пантов марала и липидов торфа при модели токсического поражения печени, вызванного введением изониазида и парацетамола, в сравнении с действием эссенциале.

5. Исследовать антипролиферативные и антиоксидантные свойства липидов пантов марала и липидов торфа при модели доброкачественной гиперплазии предстательной железы, вызванной введением сульпирида, в сравнении с действием экстракта Serenoa repens.

6. Оценить влияние липидов пантов марала и липидов торфа на содержание в крови тестостерона, 5а-дигидротестостерона и пролактина при экспериментальной доброкачественной гиперплазии предстательной железы в сравнении с действием экстракта Serenoa repens.

Научная новизна. Впервые изучены фармакологические свойства природных липидов, экстрагированных из молодых неокостенелых рогов (пантов) алтайского марала и верхового торфа. В эксперименте установлено, что липиды пантов марала и липиды торфа тормозят развитие острого экссудативного воспаления, вызванного введением агара Дифко, пролиферативного воспаления («хлопковой гранулемы») и иммунного воспаления, вызванного введением адъюванта Фрейнда, а также обладают анальгетическим влиянием. Липиды нормализуют метаболизм печени при ее поражении лекарственными средствами с выраженным потенциальным гепатотоксическим влиянием - изониазидом и парацетамолом. В механизме гепатопротективного действия липидов основное значение имеют ингибирование свободнорадикальных процессов, сохранение антиоксидантных резервов гепатоцитов, улучшение синтетической и экскреторной функций печени. Липиды, восстанавливая близкую к норме секрецию пролактина, тестостерона и 5а-

дигидротестостерона, препятствуют гиперплазии боковой и задней долей предстательной железы у крыс самцов позднего репродуктивного возраста при модели доброкачественной гиперплазии предстательной железы. По фармакологической активности липиды пантов марала и липиды торфа не уступают референтным лекарственным средствам - диклофенаку, эссенциале и экстракту Serenoa repens.

Практическая значимость работы. Липиды пантов марала и липиды торфа являются перспективными потенциальными средствами для лечения воспалительных заболеваний, патологии гепатобилиарной системы и доброкачественной гиперплазии предстательной железы. При экспериментальных моделях патологии липиды проявляют противовоспалительные свойства в такой же степени, как диклофенак; по гепатопротективной активности превосходят эссенциале; тормозят пролиферацию долей предстательной железы, перекисное окисление липидов в ее гомогенате, восстановление тестостерона в 5а-дигидротестостерон, эффективнее экстракта Serenoa repens уменьшают секрецию пролактина.

Основные положения, выпоспмые на защит}'.

1. Липиды пантов марала и липиды торфа оказывают противовоспалительное действие при моделях острого экссудативного, пролиферативного и иммунного воспаления в такой же степени как диклофенак.

2. При модели токсического поражения печени изониазидом и парацетамолом липиды пантов марала и липиды торфа, оказывая гепатопротективное действие, устраняют гиперферментемию, оксидативный стресс и восстанавливают резервы антиоксидантной защиты эффективнее эссенциале.

3. Липиды пантов марала и липиды торфа при экспериментальной доброкачественной гиперплазии предстательной железы, вызванной введением сульпирида, оказывают выраженное антипролиферативное и антиоксидантное действие, нормализуют баланс пролактина, тестостерона и 5а-дигидротестостерона.

Апробация работы.

Материалы настоящего исследования докладывались и обсуждались на конференции, посвященной 120-летию кафедры фармакологии Сибирского государственного медицинского университета (Томск, 2012), отчетной конференции аспирантов и молодых ученых кафедры фармакологии СибГМУ (Томск, 2013), конгрессах молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2011, 2012), конференции молодых ученых Волгоградского государственного медицинского университета (Волгоград, 2012), конференции молодых ученых НИИ фармакологии СО РАМН (Томск, 2013), XVIII, XIX Российских национальных конгрессах «Человек

и лекарство» (Москва, 2011, 2012). По теме диссертации опубликовано 9 работ, в т.ч. 3 статьи опубликованы в журналах, включенных в перечень российских рецензируемых научных журналов и изданий для опубликования основных научных результатов диссертаций; получен 1 патент на изобретение.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, посвященного фармакологическим эффектам и использованию в медицинской практике препаратов липидов, описания материалов и методов исследования, пяти глав, отражающих результаты собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка использованной литературы. Работа изложена на 134 е., иллюстрирована 20 таблицами. Библиография включает 195 источников, из них 93 зарубежных.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проведены на 96 белых мышах обоего пола массой 20-24 г и 480 аутбредных крысах самцах. Животных получали из отдела экспериментальных биологических моделей ФГБУ «НИИ фармакологию) СО РАМН (сертификат лабораторных животных от 17.10.2012). Эксперименты одобрены Этическим комитетом Сибирского государственного медицинского университета (протокол № 1640, 25.10.2010). Противовоспалительное и гепатопротективное действие изучали в экспериментах на 370 крысах массой 180-200 г. Для характеристики антипролиферативного действия при модели доброкачественной гиперплазии предстательной железы (ДГПЖ) использовали 110 крыс позднего репродуктивного возраста (8-10 мес) массой 500-550 г. Животные находились в стандартных условиях содержания в виварии на естественном световом режиме, при свободном доступе к воде и пище. Все манипуляции (взвешивание, введение препаратов, декапитацию) осуществляли с 9 до 12 ч. Исследования выполняли в соответствии с рекомендациями «Руководства по проведению доклинических исследований лекарственных средств» (2013).

Острую воспалительную реакцию вызывали инъекцией 1% раствора агара Дифко в изотоническом растворе КаС1 под плантарный апоневроз правой задней лапки мышей (0,05 мл) и крыс (0,1 мл). Липиды пантов марала, липиды торфа и диклофенак вводили в желудок в виде суспензии на 1% крахмальной слизи: липиды в дозах 10, 30 и 60 от/кг, диклофенак в дозе 10 мг/кг (Каратеев А.Е., 2011) за 1 ч до инъекции флогогена. Контрольные животные получали 1% крахмальную слизь. После завершения экспериментов мышей умерщвляли дислокацией шейного отдела позвоночника, крыс - декапитацией под эфирным наркозом.

На пике экссудативного воспаления, через 3,5 ч, у мышей взвешивали воспаленные и здоровые лапки. Степень подавления отека вычисляли в процентах по формуле: прирост массы лапки в контроле - прирост при введении препаратов / прирост массы в контроле.

Анальгетическое действие липидов исследовали у мышей с агаровым отеком. Для этого животных помещали на нагретую до 65 °С пластинку и фиксировали время до начала облизывания воспаленной или интактной конечности. Это время принимали за порог болевой чувствительности. Латентный период болевой реакции (облизывание задних лапок) характеризует анальгетическое действие исследуемых препаратов (Sears В., 2005).

В экспериментах на крысах объем отечной конечности измеряли онкометрически через 1, 3, 8 и 24 ч после введения агара Дифко. Противовоспалительную активность рассчитывали в процентах как отношение разности между объемом лапки до введения флогогена и объемом во время замера у крыс, получавших препараты, к аналогичной разности в контроле.

Моделью для оценки эффективности липидов пантов марала и торфа при пролиферативном воспалении служила «хлопковая гранулема», которую вызвали подкожной имплантацией крысам ватного шарика массой 15±0,5 мг. Липиды пантов марала, торфа в дозах 10, 30 и 60 от/кг и диклофенак в дозе 10 от/кг вводили ежедневно в течение 7 сут. На 8-е сут животных умерщвляли, ватные тампоны с грануляционно-фиброзной тканью извлекали, высушивали до постоянной массы при 55 °С и взвешивали. Рассчитывали разницу между массой высушенной гранулемы и исходной массой хлопковых тампонов. Степень угнетения пролиферации вычисляли в процентах по формуле: масса грануляционно-фиброзной ткани в контроле - масса при введении препаратов / масса в контроле (Шехтер А.Б. и соавт., 1984).

Для исследования резорбтивного анальгетического эффекта липидов пантов марала и торфа мышам вводили внутрибрюшинно 0,25 мл 0,75% раствора уксусной кислоты. Липиды пантов марала и торфа в дозе 30 мг/кг и диклофенак в дозе 10 мг/кг вводили на протяжении 5 дней, последний раз - за 1 ч до инъекции уксусной кислоты. Эффективность действия исследуемых препаратов при модели болевого раздражения оценивали по количеству сокращений брюшных мышц (корчей) в течение 20 мин после введения раздражителя. Степень их подавления рассчитывали по формуле: количество корчей в контроле - количество при введении препаратов / количество в контроле.

Адъювантный артрит вызывали введением под плантарный апоневроз правой лапки 0,1 мл полного адъюванта Фрейнда (убитые нагреванием микобактерии туберкулеза в вазелиновом масле). Липиды пантов марала и липиды торфа в дозе 30

мг/кг и референтное противовоспалительное средство диклофенак в дозе 10 мг/кг (Лазарева Д.Н. и соавт., 2005; Каратеев А.Е., 2011) вводили в желудок ежедневно на протяжении 14 сут, начиная с дня инокуляции адьюванта. Воспаление в лапке, в которую крысам вводили полный адъювант Фрейнда, возникало вскоре после инъекции этого флогогена, становилось выраженным через 3 сут и сохранялось до 14 сут эксперимента. Генерализация патологического процесса проявлялась воспалением контралатеральной конечности. Через 1, 8 и 14 сут после инъекции адъюванта оценивали онкометрически объем первично и вторично воспаленных конечностей, а также реакцию на тепловое раздражение (Саратиков А.С. и соавт., 1983).

Для моделирования экспериментального поражения печени животным вводили в желудок в виде суспензии на 1% крахмальной слизи: изониазид в дозе 542 мг/кг в течение б сут (ЛДи), парацетамол в дозе 2,5 г/кг в течение 2 сут (ЛД10) (Удут В.В. и соавт., 2012). Препараты липидов вводили в желудок на протяжении 12 сут после последнего введения гепатотоксинов. Липиды пантов марала и липиды торфа применяли в виде суспензии на 1% крахмальной слизи в дозах 10, 30 и 60 мг/кг, референтный гепатопротектор эссенциале форте Н (раствор в ампулах; Aventis, Германия) вводили в дозе 80 мг/кг (Бабак О.Я., 2009). Контрольные животные получали 1% крахмальную слизь или дистиллированную воду. После завершения экспериментов крыс умерщвляли декантацией под эфирным наркозом. Для исследований использовали сыворотку крови и гомогенат печени (Камышников B.C., 2000).

В сыворотке крови измеряли активность ферментов печеночного происхождения: аланинаминотрансферазы (АлАТ), аспартатаминотрансферазы (АсАТ), у-глутамилтранспептидазы (ГТП), кислой фосфатазы (КФ), щелочной фосфатазы (ЩФ), фосфолипазы А, содержание билирубина, белка, глюкозы, общих липидов, мочевины, аммиака и фенолов (Камышников B.C. и соавт., 2000; Подымова С.Д., 2005). Для характеристики экскреторной функции печени рассчитывали коэффициент ретенции бромсульфалеина (БСФ) как отношение его концентраций через 1 и 45 мин после внутривенного введения в дозе 5 мг/кг. В гомогенатах печени оценивали интенсивность перекисного окисления липидов (ПОЛ) по содержанию диеновых конъюгатов, оснований Шиффа и скорости образования аскорбатзависимого и НАДФН-зависимого малонового диальдегида (МДА) (Стальная И.Д. и соавт., 1977), определяли также содержание восстановленного глутатиона и активность глутатионпероксидазы (Moron A. et al., 1979).

Антипролиферативное влияние пантов марала и липидов торфа оценивали при модели ДГПЖ, вызванной у крыс самцов позднего репродуктивного возраста

ежедневным внутрибрюшинным введением сульпирида (эглонил, раствор в ампулах, Sanofi-Winthrop Industrie, Франция) в дозе 40 мг/кг в течение 60 сут (Боровская Т.Г. и соавт., 2011; Ahonen T.J. et al., 2002).

На протяжении эксперимента крысам вводили в желудок липиды пантов марала и липиды торфа в виде суспензии на 1% крахмальной слизи в дозах 10, 30, 60 мг/кг. В качестве референтного препарата применяли экстракт Serenoa repens пермиксон (Pierre Fabre Medicament Production, Франция) в дозе 50 от/кг (по экстракту Serenoa repens). Контрольные животные получали 1% крахмальную слизь. Через 60 сут крыс декапитировали под эфирным наркозом. Взвешивали переднюю, боковую и заднюю доли предстательной железы. В гомогенатах боковой и задней долей предстательной железы определяли содержание белка, диеновых конъюгатов, скорость образования МДА, количество восстановленного глутатиона, активность селензависимой глугатионпероксидазы и супероксиддисмутазы (Путилина Ф.Е., 1982; Камышников B.C., 2000). В плазме, полученной из крови сонной артерии, анализировали иммуноферментным методом содержание пролактина, тестостерона и 5а-дигидротестостерона (Andriole G. et al., 2004).

Липиды пантов марала получены экстракцией 50% этанолом из молодых неокостенелых рогов алтайского марала (Cerviis elaphus) в лаборатории геохимии НИИ химии нефти Сибирского отделения РАН. В составе липидов пантов идентифицированы следующие фракции: фосфолипиды (фосфатидилхолин, лизофосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, сфингомиелин, фосфатидилинозитол, фосфатидилсерин), простагландины, жирные кислоты (линоленовая, докозагексаеновая, эйкозапентаеновая), триглицериды, стероиды (эстрон, тестостерон). Липиды пантов марала стандартизировали по содержанию суммы фосфолипидов (фосфатидилхолин, лизофосфатидилхолин, кардиолипин; 52,4±1,4%), стеринов (15,3±2,2%) и жирных кислот ш-З (докозагексаеновая, эйкозапентеновая; II,3 t 1,2%).

Липиды торфа представляют собой липидные фракции верхового сфангового торфа Усть-Бакчарского месторождения Томской области, получены в лаборатории геохимии НИИ химии нефти СО РАН экстракцией смесью растворителей этанол : хлороформ при соотношении по массе 1:1. В липидах торфа обнаружено значительное содержание стеринов (до 6-7%), среди которых определены эргостерин, кампестерин, дигидрокампестерин, стигмастерин. Пигменты представлены каротиноидами, хлорофиллами а и ß и феофетинами. Липиды торфа стандартизировали по содержанию каротиноидов (8,3±1,5%), ß-ситостерина (12,7±2,5%) и докозагексаеновой кислоты (8,3±0,8%).

Результаты обрабатывали методом парных сравнений по критерию Манна-Уитни. В практике медико-биологических исследований общеприняты 1% и 5% уровни значимости, характеризующие достоверные отличия между группами, которым соответствуют вероятности ошибочного вывода р<0,01 и р<0,05 (Хафизьянова Р.Х. и соавт., 2006).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Полярные липиды пантов марала и торфа препятствовали развитию острого экссудативного воспаления, вызванного у мышей и крыс агаром Дифко. Этот агент повышает проницаемость капилляров в результате освобождения гистамина, серотонина, кининов и простагландинов (Sears В., 2005). Под влиянием липидов пантов марала и липидов торфа, примененных в дозе 10 мг/кг, выраженность отека у мышей снижалась на 14-19%, латентный период болевой реакции, вызванной термическим раздражением, увеличивался при действии липидов пантов марала только в интактной конечности (в 1,5 раза), под влиянием липидов торфа - в воспаленной и интактной конечностях (в 1,2-1,6 раза) по сравнению с показателями в контроле. Полярные липиды пантов марала и торфа в дозах 30 и 60 мг/кг и диклофенак в дозе 10 мг/кг подавляли развитие отека достоверно сильнее, на 34—40%, и удлиняли время до появления боли в 1,8-2,2 раза (табл. 1). В экспериментах на крысах агаровый отек прогрессировал в течение 3 ч с ростом объема воспаленной лапки вдвое, затем он постепенно становился менее выраженным, хотя и спустя 24 ч объем лапки оставался увеличенным на 41,5%. Во все сроки эксперимента липиды пантов марала и липиды торфа в дозах 30 и 60 мг/кг тормозили экссудацию в большей степени, чем липиды в дозе 10 мг/кг. Антиэкссудативное влияние липидов в дозах 30 и 60 мг/кг не уступало действию диклофенака: через сутки у крыс, получавших эти продукты, объем лапки возвращался к исходному (табл. 1).

Экесудативная стадия воспаления с повышенной проницаемостью капилляров завершается пролиферацией мезенхимальных клеток (Mantovani A. et al., 2007). При модели «хлопковой гранулемы» липиды пантов марала оказывали антипролиферативный эффект только в дозах 30 и 60 мг/кг, липиды торфа - во всех исследованных дозах, но достоверно в большей степени в дозах 30 и 60 от/кг, чем в дозе 10 мг/кг. Липиды в дозах 30 и 60 от/кг уменьшали массу грануляционно-фиброзной ткани не слабее диклофенака. У крыс, защищенных липидами в

эффективных дозах и диклофенаком, степень угнетения пролиферации составляла 28-40% (табл. 1). Для углубленного исследования противовоспалительного действия липиды пантов марала и липиды торфа вводили в дозе 30 мг/кг.

Модель ревматоидного артрита - адъювантный артрит представляет собой экспериментальное иммунное воспаление суставов и воспалительно-дистрофические изменения в сердце, почках и печени (Саратиков A.C. и соавт., 1983). Воспаление в лапке, в которую крысам вводили полный адьювант Фрейнда, возникало вскоре после инъекции этого флогогена, становилось выраженным через 3 сут и сохранялось до 14 сут эксперимента. Генерализация патологического процесса проявлялась воспалением контралатеральной конечности. Экссудация сопровождалась снижением порога болевой реакции. На всем протяжении эксперимента, спустя 3-14 сут после инъекции адъюванта Фрейнда, липиды пантов марала и торфа и диклофенак мало различались по ангиэкссудативному и анальгетическому действию на первично и вторично воспаленную лапку (табл. 2).

При интоксикации изониазидом и парацетамолом развивалось тяжелое поражение печени с синдромами цитолиза гепатоцитов и холестаза. В наших экспериментах (табл. 3-5) цитолитическое действие изониазида и парацетамола сопровождалось выходом в кровь из паренхимы печени цитоплазматических и митохондриальных аминотрансфераз с ростом активности в 3-5,2 раза. Активность фермента цитоплазмы и микроворсинок гепатоцитов ГТП и лизосомальной КФ возрастала в 4,3-4,9 раза. Синдром холестаза характеризовался увеличением в крови содержания общего билирубина в 4,2-4,3 раза, непрямого (свободного) билирубина -в 13,5-18,5 раза, активности ЩФ - в 1,5-1,6 раза. Коэффициент глюкуронирования билирубина (отношение количества глюкуронированного билирубина к его общему содержанию) уменьшался при интоксикации изониазидом до 0,55, под влиянием парацетамола - до 0,67 (в норме - 0,82). Содержание в крови белка и глюкозы становилось в 1,7-2 раза ниже, количество общих липидов в 1,8-2,1 раза выше, чем у интактных животных.

Гепатотоксины нарушали антитоксическую и экскреторную функции печени (табл. 4, 5). В крови животных с токсической патологией печени содержание аммиака повышалось в 2,3-3,3 раза на фоне подавления его преобразования в мочевину. Содержание фенолов возрастало в 4,5-8,3 раза. Парацетамол в большей степени, чем

изониазид, тормозил детоксикацию веществ в гепатоцитах. Об ухудшении экскреторной функции печени, наряду с гипербилирубинемией, свидетельствовала выраженная ретенция БСФ. Этот краситель переносится из крови в гепатоциты, связывается в их цитоплазме с глутатионом и цистеином и в форме коньюгатов выводится в желчь. Коэффициент ретенции БСФ увеличивался в 4-5,3 раза.

Метаболит изониазида гидразин и метаболит парацетамола Ы-ацетил-и-бензосемихинонимин оказывают выраженный прооксидантный эффект. При патологии печени, вызванной этими гепатотоксинами, в гомогенатах печени образование аскорбатзависимого и НАДФН-зависимого МДА ускорялось в 2,8-5,2 раза, содержание диеновых коньюгатов и оснований Шиффа повышалось в 3,2-4 раза. Липопероксидация усиливалась на фоне значительного ослабления антиперекисной защиты: количество восстановленного глутатиона и активность глутатионпероксидазы уменьшались в 2,2-3 раза по сравнению с показателями нормы. ПОЛ сопровождалось фосфолиполизом с повышением в крови активности фосфолипазы А в 2,4-2,8 раза (табл. 4, 5). В гепатоцитах фосфолипаза А функционирует в митохондриях, эндоплазматическом ретикулуме, пластинчатом комплексе Гольджи, лизосомах и катализирует образование детергентных лизофосфатидов

При введении липидов пантов марала и липидов торфа с лечебной целью на фоне сформированной тяжелой токсической патологии улучшались метаболические и функциональные показатели печени. В дозе 10 мг/кг липиды пантов марала и липиды торфа снижали в крови животных с интоксикацией изониазидом и парацетамолом содержание общего билирубина и активность ЩФ в 1,2-1,9 раза, содержание непрямого билирубина - в 2,1-3,2 раза, но эти маркеры свидетельствовали о сохраняющемся холестазе. Коэффициент глюкуронирования билирубина составлял 0,70-0,79. Активность аминотрансфераз в крови животных, получавших липиды в дозе 10 мг/кг, оставалась повышенной как при интоксикации изониазидом, так и парацетамолом. Липиды пантов марала и липиды торфа в дозах 30 и особенно 60 от/кг оказывали значительно более выраженное гепатопротективное действие. В дозе 30 мг/кг они изменяли в сторону нормы активность ферментов и содержание билирубина, хотя эти биохимические показатели значительно отличались от показателей, регистрируемых у интактных животных. В дозе 60 мг/кг липиды

Влияние липидов пантов марала и липидов торфа на развитие экссудативиого воспаления, вызванного агаром

Дифко у мышей и крыс, и формирование «хлопковой гранулемы» у крыс (М ± ш)

Показатель Контроль Липиды пантов марала, мг/кг Липиды торфа, мг/кг Диклофе-нак, мг/кг

10 1 30 I 60 10 | 30 | 60 10

Эксперименты на мышах после введения агара Дифко

Прирост массы отечной конечности, % 62,9±2,3 48,6±2,2' 28,1±2,5'д 25,6±1,4''2 44,3±1,7' 29,3±2,41Л 28,1 ±2,01,2 23,4± 1,91,2

Степень угнетения отека, % - 22,7±2,1 55,3±3,92 58,6±2,82 29,7±2,4 53,4±1,82 55,7±2,52 62,4±3,52

Латентный период болевой реакции, с

Воспаленная конечность 16,7± 1,7 18,3±1,8 32,7±2,11,2 35,6±2,5'-2 20,5±2,0' 30,4±1,9''2 32,4±2,41,2 36,5±2,6'~

Интактная конечность 21,9±1,9 32,5±3,2' 44,7±2,7и 47,8±3,3и 34,3±3,4' 39,5±2,2' 40,1 ±2,4' 45,3±2,7'~

Эксперименты па крысах после введения агара Дифко

Прирост объема воспаленной конечности после введения агара Дифко, %

через 1 ч 51,6±3,8 33,5±1,б' 24,8±1,5''2 22,6±1,4''2 31,6±1,4' 26,6±1,71,2 20,9±1,6и 22,4±1,3

через 3 ч 102,5±4,6 38,5±3,2' 26,9±2,21'2 24,4±2,51,2 36,5±2,6' 27,1±2,5'" 22,2±2,6и 23,6±2,01,2

через 8 ч 51,9±2,5 23,4±1,9' 15,3±1,2и 14,1±1,71,2 20,5±2,11 14,3±1,01,2 12,5±1,8|Д 12,1±1,б'~

через 24 ч 30,2±4,2 8,7±1,4' 4,0±1,2''2 3,7±1,0''2 7,6±1,21'2"1 3,8±0,9'~ 4,2± 1,71,2 3,2±1,41'2

Влияние па формирование «хлопковой гранулемы» у крыс

Масса гранул я ционно-фиброзной ткани 145,0±6,4 127,4±4,9 103,7±3,5|Д 96,7±3,6и !22,6±5,8' 90,4±4,61,2 93,8±2,9'~ 85,6±3,51,2

Угнетение пролиферации, % - 12,4±1,7 28,2,1 ±2,82 33,8±1,82 15,6±1,3 37,4±2,82 35,4±4,32 40,7±2,32

Примечание. Различия достоверны при р<0,05:1 - по отношению к контролю,2 - по отношению соответственно к липидам пантов марала или липидам торфа в дозе 10 мг/кг. Приведены средние данные 6-8 определений.

Таблица 2

Влияние липидов пантов марала и липидов торфа на развитие адъювантного артрита у крыс (М ± ш)

Экспериментальные группы Время после введения адьюванта Ф рейнда, сут

3 8 14

Прирост объема, % Латентный период болевой реакции, с Прирост объема, % Латентный период болевой реакции, с Прирост объема, % Латентный период болевой реакции, с

Первично воспаленная конечность

Адъювантный артрит (контроль) 28,5±1,8 14,7±1,5 29,5±1,6 15,5±1,7 32,6±2,6 14,5±1,4

Липиды пантов марала 19,7±1,3' 23,6±2,1' 13,7±1,3' 32,7±2,7' 16,7±1,9' 31,8±2,4'

Липиды торфа 22,б±1,4' 20,б±2,4' 17,б±2,1' 27,б±1,9' 19,9±1,7' 28,9±1,б'

Дивслофенак 18,4±1,41 25,б±2,4' 13,4±1,3' 34,8±3,1' 15,8±1,5' 33,9±2,9'

Вторично воспаленная конечность

Адъювантный артрит (контроль) 17,7±1,3 20,7±1,7 18,7±1,8 20,5±1,4 20,7±1,9 18,5±1,6

Липиды пантов марала 6,7±1,0' 34,б±2,б' б,5±1,2' Зб,7±2,8' 8,9±1,7' 28,3±2,2'

Липиды торфа 8,4±1,5' 33,б±2,3' 8,6±2,4' 34,5±2,9' 9,2±1,4' 2б,4±1,9'

Диклофенак 5,9±1,3' 35,7±2,4' 6,4±1,41 Зб,9±2,5' 8,0±1,2' 30,6±2,4'

Примечание. Различия достоверны при р<0,05: 1 - по отношению к контролю. Приведены средние данные 8 определений.

устраняли гиперферментемию и гипербилирубинемию и до нормы (0,83) повышали коэффициент глюкуронирования билирубина (табл. 3).

Для углубленного исследования гепатопротективного действия липиды вводили в дозе 60 мг/кг. Липиды пантов марала и липиды торфа в этой дозе нормализовали показатели цитолиза гепатоцитов (активность ГТП, КФ), фосфолиполиза (активность фосфолипазы А), антитоксической (содержание фенолов, аммиака, мочевины) и экскреторной (ретенция БСФ) функций печени, содержание в крови белка, глюкозы и общих липидов. Препараты липидов проявляли

Влияние липидов пантов марала и липидов торфа на активность ферментов и содержание билирубина в крови

при экспериментальной интоксикации изониазидом и парацетамолом (М ± т)

Показатели Интактные животные Контроль (изониазид, парацетамол) Изониазид +

Липиды пантов марала, мг/кг Липиды торфа, мг/кг Эссенциале мг/кг

10 30 60 10 30 60 80

АлАТ, мккат/л 0,07±0,01 0,2110,04' 0,17±0,03' 0,11±0,02м 0,08±0,022'1 0,19±0,05' 0,10±0,02'-3 0,07±0,012,3 0,13±0,021-2'4

АсАТ, мккат/л 0,06±0,01 0,24±0,05' 0,18±0,05' 0,!2±0,02|;! 0,09±0,022'3 0Д0±0,04' 0,11±0,03'"3 0,08±0,022,3 0,15±0,04'д4

ЩФ, Е/л 239,8±17,5 384,1±14,4' 312,2±12,9'" 290,9±16,1и 254,7±21,52'3 298,2± 11,8й 294,7±16,4и 259,0±17,72,3 304,1±15,11,2'4

Общий билирубин, мкмоль/л 13,7±2,2 57,4±4,3' 34,2±3,41Л 20,6±3,9'"3 15,6±2,52'3 31,9±4,4и 22,6±4,1'-3 16,9±2,82>3 29,3±4,6''2'4

Парацетамол +

АлАТ, мккат/л 0,07±0,01 0,26±0,041 0,19±0,04' 0,14±0,04''2 0,09±0,022'3 0,18±0,05' 0,12±0,03'~ 0,09±0,022,3 0,14±0,03'"'4

АсАТ, мккат/л 0,06±0,01 0,31±0,0б' 0,20±0,05' 0,11±0,03'~3 0,10±0,02у 0,22±0,04' 0,13±0,031*3 0,08±0,022'3 0,16±0,04''2,4

ЩФ, Е/л 239,8±17,5 388,1±25,1' 328,2± 13,б1,2 314,9±27,0и 259,9±29,82,3 308,2±12,9|д 298,7± 16,4й 268,7±14,12-3 332,9±20,31,2'4

Общий билирубин, мкмоль/л 13,7±2,1 60,6±4,11 32,2±3,8и 21,6±3,7'-3 16,3±2,62'3 38,2±2,8и 22,61:3,1 '"3 17,6±2,5" 20,9± 1,3 й

Примечание. Различия достоверны при р<0,05: сравнению с показателем 1 - интактных животных, 2 - при введении изониазида или парацетамола, * - при введении липидов пантов марала и липидов торфа в дозе 10 мг/кг, 4 - при введении липидов пантов марала и липидов торфа в дозе 60 мг/кг. Приведены средние данные 6-8 определений.

Таблица 4

Влияние липндов пантов марала и липидов торфа на биохимические показатели

при экспериментальном гепатите, вызванном изониазидом (М ± ш)

Показатели Интактные животные Изониазид Изониазид +

Липвды пантов марала, 60 от/кг Липиды торфа, 60 мг/кг Эссенциале, 80 мг/кг

Сыворотка крови

ГТП, мккат/л 0,25+0,03 1,20±0,05' 0,27+0,032 0,28±0,042 0,46±0,05м

КФ, Е/л 10,7±1,3 45,5+1,2' 14,4±1,72 17,3±2,92 20,3±1,б'"3

Фосфолипаза А, Е/л 523±28 1455±75' 603±342 639±382 845±23ы

Глюкоза, ммоль/л 6,5±0,2 3,3+0,2' 6,1±0,32 6,7±0,42 5,9±0,52

Белок, г/л 80,4±3,3 45,4±2,0* 69,2±4,22 62,2+5,12 59,4±3,4''2

Общие липиды, г/л 2,52+0,14 5,21±0,18' 2,44±0,112 2,81+0,172 3,12+0,422

Мочевина, ммоль/л 7,4+0,3 3,3±0,2' 7,0+0,22 6,7±0,32 бЛ+0,4'-2

Аммиак, тюль/л 63,7±2.8 148,3+6,2' 64,5±2,32 71,7±3,32 87,6±2,9Ы

Фенолы, мкмоль/л 58,5±3,1 483,4±9,31 68,4±4,22 73,4+3,б2 115,7±2,6М

Ретенция БСФ, % 2,1+0,3 8,4+0,5' 2,9+0,72 3,3±0,2и 5,2+0,41-4

Гомогенат печени

Диеновые конъюгаты, ЕД/мг липидов 0,27±0,03 0,92±0,04* 0,29±0,032 0,32±0,032 0,49*0,06м

Основания Шиффа, ЕД/мг липидов 1,67±0,09 5,32±0,19* 2,45±0,182 2,67±0,172 3,90±0,071-4

МДА, нмоль/мг белка/мин

аскорбатзависимый 0,25±0,03 0,71±0,04' 0,23±0,042 0,27±0,022 0,56±0,02''4

НАДФН-зависимый 0,40±0,03 2,07±0,04' 0,56±0,032 0,59±0,042 0,92±0,03м

Восстановленный глутатион, нмоль/мг белка 4,7±0,4 1,7±0,2' 4,5±0,22 ЗДАО.З1-2 г.э^юд1"4

Глутатионпероксидаза, нмоль/мг белка/мин 371±17 123±15' 279±172 245±21'- 212±111-3

Примечание Различия достоверны при р<0,05: по сравнению с показателем 1 -интактных животных, 2 - при введении изониазида,3 - при введении липидов пантов марала, 4 - при введении липидов торфа. Приведены средние данные 8-10 определений.

Таблица 5

Влияние липидов пантов марала и липидов торфа на биохимические показатели

при экспериментальном гепатите, вызванном парацетамолом (М ± т)

Показатели Интактные животные Парацетамол Парацетамол +

Липиды пантов марала, 60 мг/кг Липиды торфа, 60 мг/кг Эссенциа-ле, 80 мг/кг

Сыворотка крови

ГШ, мккат/л 0,22±0,01 0,95±0,03' 0,24±0,032 0,2610,052 0,3910,03'"*

КФ, Е/л 9,8+1,4 48,2+2,8* 12,5+2,12 15,7+2,б2 21,5+1,8'"3

Фосфолипаза А, Е/л 569+33 1377±811 6541212 643+312 773124м

Глюкоза, ммоль/л 6,4±0,2 3,8±0,2' 5,710,32 5,910,42 6,110,52

Белок, г/л 72,013,5 38,612,5' 70,411,72 65,7+3,22 58,7±2,4ЬЗ

Общие липиды, г/л 1,62±0,09 2,84±0,12' 1,7410,072 1,81+0,112 1,7210,322

Мочевина, ммоль/л 8,3+0,3 4,110,2' 6,810,22 5,9+0,42 5,4Ю,6'-2

Аммиак, ммоль/л 41,1+2,1 124,6+5,9' 54,3+2,52 60,213,52 84,913,11"4

Фенолы, мкмоль/л 60,5±3,2 270,418,1' 94,816,21'2 83,915,7й 136,914,2м

Ретенция БСФ, % 1,8+0,3 9,6+0,6' 3,0±0,52 з,4+о,2и б.З+О^1'4

Гомогенат печени

Диеновые коньюгаты, ЕД/мг липидов 0,21±0,03 0,85±0,04' 0,27±0,032 0,33±0,042 0,46±0,02м

Основания Шиффа, ЕД/мг липидов 2,52±0,09 4,96±0,11' 2,69±0,132 2,79±0,122 3,72±0,091-4

МДА, нмоль/мг белка/мин

аскорбатзависимый 0,24±0,02 0,68±0,02' 0,26±0,042 0,29±0,032 0,51±О,02м

НАДФН-зависимый 0,47±0,03 1,34±0,03' 0,49±0,022 0,55±0,052 олно.ог1"4

Восстановленный глутатион, нмоль/мг белка 5,2±0,4 2,4±0,3' 4,0±0,2и 3,8±0,4''2 3,8±0,4и

Глутатионпероксидаза нмоль/мг белка/мин 320±16 144±131 284±142 232±12и 235±10'"3

Примечание Различия достоверны при р<0,05: по сравнению с показателем 1 -интактных животных, 2 - при введении парацетамола, 3 - при введении липидов пантов марала, 4 - при введении липидов торфа. Приведены средние данные 8-10 определений.

антиоксидантные свойства. В гомогенатах печени они уменьшали в 1,8-3,7 раза скорость продукции МДА, содержание диеновых коньюгатов и оснований Шиффа. Липиды, экстрагированные из пантов марала, также восстанавливали до нормы содержание восстановленного глутатиона и активность глутатионпероксидазы (табл. 4, 5).

При введении эссенциале форте Н в дозе 80 от/кг на фоне интоксикации изониазидом и парацетамолом достоверно меньше, чем под влиянием липидов пантов марала и липидов торфа в дозе 60 мг/кг, снижались активность аминотрансфераз, фосфатаз, ГТП, фосфолипазы А, содержание общего, непрямого билирубина, аммиака, фенолов. Эссенциале форте Н умеренно стимулировал экскреторную функцию печени и оказывал более слабое по сравнению с эффектом липидов антиоксидантное действие. Эссенциале форте Н в гомогенатах печени уменьшат в 1,3-2,2 раза скорость продукции МДА, содержание диеновых конъюгатов и оснований Шиффа, повышал в 1,6-1,7 раза содержание восстановленного глутатиона и активность глутатионпероксидазы. Эссенциале форте Н не нормализовал ни один изученный биохимический показатель, и его эффекты соответствовали действию липидов в дозе 10 от/кг (табл. 3-5).

Сульпирид, блокируя 02-рецепторы тубероинфундибулярной системы (ОШпег К., 2003) значительно увеличивает секрецию стимулятора пролиферации предстательной железы пролактина с развитием экспериментальной ДГПЖ. При введении сульпирида в течение 60 сут масса передней доли предстательной железы не изменялась, масса боковой и задней долей и весовые коэффициенты (отношение массы железы к массе тела животных) становились в 1,8-2,1 раза больше, чем у интактных животных (табл. 6, рис. 1). В гомогенатах боковой и задней долей предстательной железы в 1,6 раза увеличивалось содержание белка и активировалось ПОЛ на фоне ингибирования антиперекисной защиты. Содержание диеновых конъюгатов повышалось в 2,1 раза по сравнению с их количеством в норме, продукция МДА в присутствии аскорбата ускорялась в 2,2 раза, после добавления НАДФН - в 2,7 раза. Содержание восстановленного глутатиона, активность глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы уменьшались в 1,7-2,2 раза. В сыворотке крови крыс с экспериментальной ДГПЖ содержание пролактина возрастало в 5,8 раза, 5а-дигидротестостерона - в 1,5 раза, количество тестостерона снижалось в 3,2 раза (табл. 6).

Липиды пантов марала и липиды торфа в дозах 10, 30 и 60 мг/кг и экстракт Serenoa repens в дозе 50 мг/кг эффективно препятствовали прогрессированию экспериментальной ДГПЖ, вызванной инъекциями сульпирида у крыс самцов позднего репродуктивного возраста. Липиды пантов марала, липиды торфа в дозе 10 мг/кг и экстракт Serenoa repens снижали массу боковой и задней долей предстательной железы в 1,4-1,5 раза, хотя она оставалась в 1,3—1,4 раза больше, чем в норме. В дозах 30 и 60 мг/кг липиды пантов марала и липиды торфа уменьшали массу боковой и задней долей в 1,8-2,1 раза, при этом масса становилась такой же, как у интактных животных. Весовые коэффициенты снижались в 1,8-2,1 раза. Антипролиферативное действие липидов пантов марала и липидов торфа в дозах 30 и 60 мг/кг превосходило эффект экстракта Serenoa repens (рис. 1 ).

Для углубленного исследования антипролиферативного действия при модели ДГПЖ липиды пантов Марата и липиды торфа вводили в дозе 30 мг/кг. В гомогенатах боковой и задней долей предстательной железы экспериментальная терапия липидами пантов марала и липидами торфа сопровождалась снижением содержания белка в 1,5 раза, при действии экстракта Serenoa repens — в значительно меньшей степени, в 1,3 раза (табл. 6).

Липиды пантов марала, как и липиды торфа, оказывали выраженное антиоксидантное действие. В гомогенатах боковой и задней долей предстательной железы содержание продуктов ПОЛ и показатели антиперекисной защиты -количество восстановленного глутатиона, активность глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы нормализовались. Содержание диеновых конъюгатов уменьшалось в 2,2 раза, продукция аскорбат- и НАДФН-зависимого МДА замедлялась в 1,8-2,1 раза, содержание глутатиона, активность глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы повышались в 1,5-2 раза по сравнению с показателями при модели ДГПЖ. При введении экстракта Serenoa repens интенсивность липопероксидации снижалась в 1,4-1,8 раза, активность антиперекисной защиты возрастала в 1,3-1,5 раза. Скорость продукции МДА превышала скорость в норме в 1,4-1,5 раза, содержание восстановленного глутатиона, активность глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы оставались сниженными в 1,4 раза (табл. 6).

В крови крыс, получавших липиды пантов марала и липиды торфа, содержание пролактина снижалось втрое по сравнению с уровнем гормона у крыс, которым

вводили только сульпирид, но оно в 1,9 раза превышало норму. При введении экстракта Serenoa repens содержание в крови пролактина уменьшалось в меньшей степени - в 1,5 раза, оставаясь в 3,8 раза выше нормы и вдвое больше, чем при введении исследуемых липидов. Содержание мужских половых гормонов в крови крыс, защищенных липидами пантов марала или липидами торфа и экстрактом Serenoa repens, изменялось в одинаковой степени и становилось близким к количеству гормонов у интактных животных - содержание тестостерона повышалось в 2,2-2,6 раза, 5а-дигидротестостерона снижалось в 1,5-1,7 раза по сравнению с количеством этих гормонов, измеренном при введении одного сулышрида (табл. 6).

Таким образом, при моделях воспаления липиды пантов марала и лип иды торфа оказывают выраженное антиэкссудативное, антипролиферативное и анальгетическое действие. Их фармакологические эффекты не уступают действию эталонного нестероидного антифлогистика диклофенака. В составе липидов пантов марала противовоспалительное действие оказывают полиеновые жирные кислоты ю-3, а также вещества с антиоксидантным эффектом - фосфолипиды, каротиноиды и ß-ситостерин. Жирные кислоты со-3 снижают в клеточной мембране количество арахидоновой кислоты и по конкурентному механизму ингибируют ферменты ее метаболизма - циклооксигеназу, простагландинсинтазу и лейкотриенсинтазу. Такой эффект сопровождается уменьшением в тканях количества инициаторов воспаления -простагландинов Е, F2a и лейкотриенов A4-F4 (Calder P.C., 2009). Напротив, жирные кислоты ш-3 являются предшественниками противовоспалительных эйкозаноидов -лейкотриенов пятого типа и простациклина-3 (Сергеева М.Г., 2006). Антиоксиданты липидов прямо нейтрализуют свободные радикалы нейтрофилов и макрофагов и эндопероксиды, образующиеся в циклооксигеназной реакции, а также потенцирует антиперекисную защиту. Ингибирование перекисного окисления сопровождается снижением продукции про воспалительных и алгогенных факторов - кининов, интерлейкинов-1, 6, 8, интерферона-ß, фактора некроза опухоли-а, комплемента и молекул клеточной адгезии, ослаблением синтеза коллагена и гликозаминогликанов в фибробластах (Mantovani А., 2007).

При моделях острой токсической патологии печени, вызванной прооксидантами изониазидом и парацетамолом, липиды пантов марала и липиды торфа в дозе 60 мг/кг оказывают выраженное гепатопротективное действие. В составе

Влияние лнпндов пантов марала и липидов торфа на липопероксидацию и содержание гормонов в крови в сравнении с

действием экстракта Serenoa repens (пермиксон) при модели доброкачественной гиперплазии

предстательной железы (М ± ш)

Показатель Интактные животные Сульпирид Липиды пантов марала Липиды торфа Экстракт Serenoa repens

+ сульпирид

Гомогенат предстательной железы

Белок, мг/г ткани 120,7±7,9 197,4±10,3' 129,0±5,92 124,4±6,82 156,8±7,31,2'3

Диеновые конъюгаты, мкмоль/г ткани 18,6±1,5 38,7±2,7' 17,9±1,62 23,4±2,22 26,8±3,42'3

МДА, нмоль/мг белка»мин:

аскорбатзависимый 0,44±0,03 0,98±0,07' 0,55±0,062 0,48±0,062 0,63±0,071,2

НАДФН-зависимый 0,57±0,06 1,54+0,06' 0,75±0,082 0,68±0,07: 0,88±0,091,2

Восстановленный глутатион, нмоль/мг белка 5,2±0,4 2,4±0,3' 4,8±0,72 4,4±0,32 3,5±0,5''2

Глутатионпероксидаза, нмоль НАДФН / г ткани'мин 2528±123 1478±9б' 2198±1192 2223Ü092 1865±1141,2

Супероксиддисмугаза, Е/мг белка 0,87±0,07 0,41 ±0,05' 0,69±0,082 0,81±0,072 0,61±0,061,2

Сыворотка крови

Пролактин, нг/мл 10,9±1,8 62,7±3,3' 21,1±2,5'-2 24.5±2,1u 41,7±5,3''"

Тестостерон, пг/мл 2187±312 673±57' 1765±1642 1834±1312 1460±972

5а-Ди гидротестостерон, пг/мл 179,7±10,9 265,9±23,4' 171,6±13,52 167,4±17,22 158,7±17,92

Примечание. Различия достоверны при р<0,05: по сравнению с показателем 1 - интактных животных, 2 - при введении сульпирида,3 - при введении липидов пантов марала.

ю ю

80 70 60 50 40 30 20 10

Экстракт Serenoa repens, 50 мг/кг

5 Боковая доля при введении липидов пантов марала

□ Задняя доля при введении липидов пантов марала И Боковая доля при введении липидов торфа

□ Задняя доля при введении липидов торфа

■ Боковая доля у интактных животных, при введении сульпирида и экстракта Serenoa repens

□ Задняя доля у интактных животных, при введении сульпирида и экстракта Serenoa repens

Рис I. Влияние липидов пантов марала и липидов торфа в сравнении с действием экстракта Serenoa repens (пермиксон) на массу боковой и задней долей предстательной железы при модели ее доброкачественной гиперплазии (X ± гп)

липидов терапевтическое действие оказывают полиеновые жирные кислоты со-3, фосфолипиды, каротиноиды и p-ситостерин. Жирные кислоты со-3, каротиноиды и (5-ситостерин богаты ненасыщенными связями и в результате этого способны нейтрализовать свободные радикалы кислорода и гепатотоксинов и восстанавливать нормальный фосфолипидный спектр мембран гепатоцитов (Гундерманн К., 2009). Они уменьшают проницаемость цитоплазматической мембраны и органоидов для выхода в кровь ферментов, локализованных в различных компартментах печеночной клетки; улучшают детоксикацию эндобиотиков и ксенобиотиков - глюкуронирование билирубина, включение аммиака в орнитиновый цикл синтеза мочевины, сульфатирование фенола; стимулируют экскрецию билирубина и синтетического красителя БСФ. Фосфолипиды, входящие в состав липидов пантов марала и торфа замещают мембранные фосфолипиды, поврежденные свободными радикалами и электрофильными интермедиатами гепатотоксинов, и как структурные антиоксиданты препятствуют проникновению в мембрану этих токсических продуктов (Меньшикова Е.Б. и соавт., 2006). Больший гепатопротективный эффект новых препаратов липидов по сравнению с действием эссенциале форте Н обусловлен их значительным антиоксидантным влиянием и наличием противовоспалительных свойств (Calder Р., 2009).

Липиды пантов марала и липиды торфа при модели ДГПЖ снижают массу боковой и задней долей предстательной железы, содержание пролактина и 5а-дигидротестостерона, повышают содержание тестостерона, таким образом, препятствуют прогрессированию гормонозависимого воспаления и гиперплазии. Содержащиеся в липидах пантов марала и липидах торфа полиеновые жирные кислоты служат предшественниками противовоспалительных простагландинов, конкурируют с арахидоновой кислотой, обладают антиоксидантными свойствами (Coppenole V. et al., 2000; Raynaud J. et al., 2002).

выводы

1. Липиды пантов марала и липиды торфа в дозе 10 мг/кг оказывают умеренное, в дозах 30 и 60 мг/кг проявляют выраженное противовоспалительное и анальгетическое действие при модели острого экссудативного воспаления, вызванного введением агара Дифко. Липиды уменьшают прирост массы и объема конечности и повышают порог болевой чувствительности не слабее диклофенака в дозе 10 мг/кг.

2. При модели пролиферативного воспаления («хлопковая гранулема») липиды пантов Марата и липиды торфа в дозе 10 мг/кг и особенно 30 и 60 мг/кг аналогично диклофенаку уменьшают массу грануляционно-фиброзной ткани.

3. При модели иммунного воспатения, вызванного введением адьюванта Фрейнда, липиды пантов марала и липиды торфа в дозе 30 мг/кг в равной степени с диклофенаком в дозе 10 мг/кг снижают объем первично и вторично воспаленной конечности и увеличивают латентный период болевой реакции.

4. При моделях токсического поражения печени изониазидом и парацетамолом липиды пантов марала и липиды торфа оказывают дозозависимое гепатопротективное действие. В дозах 30 и 60 мг/кг липиды вызывают регресс гиперферментемии и гипербилирубинемии, увеличивают в крови содержание белка, глюкозы, мочевины, снижают уровень аммиака, общих липидов и свободных фенолов, в гомогенате печени уменьшают содержание диеновых конъюгатов, оснований Шиффа, замедляют образование аскорбатзависимого и НАДФН-зависимого малонового диальдегида, повышают содержание восстановленного глутатиона и активность глутатионпероксидазы. Гепатопротективное действие липидов пантов марала и липидов торфа выражено в большей степени, чем эффект эссенциале в дозе 80 мг/кг.

5. При модели доброкачественной гиперплазии предстательной железы у крыс самцов позднего репродуктивного возраста, вызванной введением сульпирида, липиды пантов марала и липиды торфа в дозе 30 и 60 мг/кг снижают массу боковой и задней долей предстательной железы эффективнее экстракта Serenoa repens в дозе 50 мг/кг. В гомогенате предстательной железы липиды уменьшают содержание диеновых конъюгатов, тормозят образование аскорбатзависимого и НАДФН-зависимого малонового диальдегида, повышают содержание

восстановленного глутатиона, активность глутатионпероксидазы и суперокеиддисмутазы.

6. При модели доброкачественной гиперплазии предстательной железы липиды пантов марала и липиды торфа увеличивают содержание в крови тестостерона и снижают уровень 5а-дигидротестостерона и пролактина (в большей степени, чем экстракт Serenoa repens).

Перечень работ, опубликованных по теме диссертации

1. Яценков, А.И. Противовоспалительная, антиоксидантная и гепатопротективная активность липидов торфа / А.И. Яценков // XII конгресс молодых ученых и специалистов «Науки о человеке». - Томск: Сибирский государственный медицинский университет, 2011. - С. 85-86.

2. Яценков, А.И. Противовоспалительное и анальгетическое действие липидов торфа и пантов марала при адъювантном артрите / А.И. Яценков, Е.И. Гришина // Материалы научной конференции молодых ученых и аспирантов «Актуальные проблемы фармакологии». - Томск: Печатная мануфактура, 2011. - С. 77-80.

3. Фармакологические эффекты природных липидов / В.Н. Буркова, С.Г. Боев, А.И. Венгеровский, А.И. Яценков и др. // XIII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». - М.: ЗАО РИЦ «Человек и лекарство», 2011. - С. 423.

4. Яценков А.И. Гепатопротективное действие природных липидов при экспериментальном токсическом гепатите / А.И. Яценков // Материалы конференции молодых ученых «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии». - Томск: Печатная мануфактура, 2012. - С. 60-62.

5. Яценков, А.И. Противовоспалительное действие препаратов природных липидов / А.И. Яценков, А.И. Венгеровский, В.Н. Буркова // XIX Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». - М.: ЗАО РИЦ «Человек и лекарство», 2012. - С. 441^42.

6. Яценков, А.И. Влияние липидов, полученных из торфа и пантов марала на течение экспериментальной воспалительной реакции / А.И. Яценков // VI Всероссийский научно-практический семинар молодых ученых «Современные проблемы медицинской химии. Направленный поиск новых лекарственных средств». - Волгоград: ВолгГМУ, 2012. - С. 183-184.

7. Противовоспалительное и анальгетическое действие полярных липидов пантов марала и торфа при экспериментальном воспалении / А.И. Венгеровский, В.Н. Буркова, Н.В. Юдина, А.И. Яценков // Бюллетень сибирской медицины. - 2012. -Т. 11,№6.-С. 31-35.

8. Яценков, А.И. Гепатопротективное действие полярных липидов пантов марала и торфа при экспериментальном поражении печени изониазидом и парацетамолом / А.И. Яценков // Бюллетень сибирской медицины. - 2013. - Т. 12, № 1. - С. 80-

9. Антипролиферативный эффект полярных липидов пантов марала и торфа при модели доброкачественной гиперплазии предстательной железы / А.И. Венгеровский, В.Н. Буркова, Н.В. Юдина, А.И. Яценков // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2013. - Т. 76, № 5. - С. 27-31.

10. Патент № 2482857 РФ / В.Н. Буркова, Н.В. Юдина, А.И. Венгеровский, А.И. Яценков // Антипролиферативное средство. Опубл. 27.05.2013 г.

84.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АлАТ - аланинаминотрансфераза

АсАТ - аспартатаминотрансфераза

БСФ - бромсульфалеин

ГТП - у-глутамилтранспептидаза

ДГПЖ - доброкачественная

гиперплазия предстательной

железы

КФ - кислая фосфатаза

МДА - малоновый диальдегид

НАДФ - никотинамидаденин-

динуклеотидфосфат

ПОЛ - перекисное окисление

липидов

ЩФ - щелочная фосфатаза

Тираж 120. Заказ 1077. Томский государственный университет систем управления и радиоэлектроники.

634050, г. Томск, пр. Ленина, 40. Тел. 533018.