Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Влияние аэрионов кислорода на перекисное окисление дипидов и некоорые антиоксидантные ферменты при комплексной фармакотерапии острого панкреатита

.'Го ^

^ О С©

МИНИСТЕРСТВО ОБЩЕГО И ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ МОРДОВСКИЙ ОРДЕНА ДРУЖБЫ НАРОДОВ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени Н. П. ОГАРЕВА

На правах рукописи

УДК (>!2.014.464:577.125

МЕЛЬНИКОВ Владимир Михайлович

ВЛИЯНИЕ АЭРОИОНОВ КИСЛОРОДА НА ПЕРЕКИСНОЕ ОКИСЛЕНИЕ ЛИПИДОВ И НЕКОТОРЫЕ АНТИОКСИДАНТНЫЕ ФЕРМЕНТЫ ПРИ КОМПЛЕКСНОЙ ФАРМАКОТЕРАПИИ ОСТРОГО ПАНКРЕАТИТА

14.00.25 — фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

САРАНСК, 1997

Работа выполнена в Мордовском ордена Дружбы народов государственном университете им. Н. П. Огарева

Научный руководитель:

доктор медицинских наук профессор А. П. Власов Научный консультант:

доктор медицинских наук профессор Я. В. Костин

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук профессор Р. С. Гараев доктор медицинских наук профессор В. И. Инчина

Ведущая организация: Российский медицинский университет

Защита состоится «'¡V » С А/ 1997 года на заседании диссертационного совета К 063.27.11 при Мордовском ордена Дружбы народов государственном университете им. Н. П. Огарева (430000 г. Саранск ул. Ульянова, 21 «А»).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Мордовского ордена Дружбы народов государственного университета им. Н. П. Огарева (ул. Большевистская, 68).

Автореферат разослан «//

Ч » МШкл1- 1997 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат медицинских наук доцент^ Л. А. Балыкова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Острый панкреатит остается одним из грозных заболеваний в абдоминальной хирургии (Савельев и др., 1996; Сажин и др., 1996; Beger et al., 1995; Foitizik et al., 1995). В настоящее время отмечается неуклонно возрастающая заболеваемость им населения нашей страны и зарубежья (Мирошнпков и др., 1994; Савельев и др., 1996; Imre, 1995).

Особенно сложной и трудоемкой проблемой ургентной хирургии является лечение больных с деструктивными формами (Филип, Костгоченко, 1994; Лищенко, Лаптев, 1995; Кубыш-кнн, 1996; Fugger et al., 1995; Harris et al., 1995). На сегодняшний день этот факт подтверждается стабильно высокими показателями летальности, частотой гнойно-септических и других фатальных осложнений (Тарасенко, 1990; Савельев, Кубышкии, 1993; Лищенко, 1994).

Патогенез острого панкреатита во многом еще не ясен (Зулкарнеев, 1994; Glosbrener, Adler, 1993; Scholmerich, Gross, 1993). При этой патологии выявлен целый ряд изменений в обмене липидов, в частности, активация их перокси-дации (Аширов, 1995; Белоклоков и др., 1996; Полуэктов и др., 1996; Тарасенко и др., 1996).

В настоящее время перекисному окислению липидов и антпоксидантной обеспеченности (защите) организма уделяется достаточно большое внимание. Многочисленные исследования ученых нашей страны и зарубежья нацелены на разработку и внедрение эффективных способов коррекции свободно-радикальных процессов, являющихся весомыми в патоге-

незс ряда заболеваний. С целью нормализации липидного обмена и стабилизации мембран панкреоцитов при пакреатите применяются такие препараты, как дибунол, делагил (Буянов и др., 1988), эмоксигшн (Дубанский, 1991), 5-фторурацил (Бондаренко и др., 1990). В последнее время все больший интерес вызывает аэроионотерапия (Скипетров и др., 1992; Инчина и др., 1993; Зорькина, 1994). Использование аэроио-иов кислорода, генерируемых электроэффлювиальной люстрой Чижевского, позволяет уменьшить явления пероксидации ли-пидоа плазмы крови (Аширов, 1995; Аксенова, 1996). Однако до сих пор антиокислительное действие аэроионов кислорода на органном уровне при остром панкреатите не изучено, не исследовано их влияние на антноксндантную систему, а молекулярный механизм терапевтического действия азроионов кислорода при исследуемой патологии не расшифрован вовсе.

Целью исследования явилось изучение влияния аэроионов кислорода на псрекпсное окисление липидов и ключевые антноксидаитпы.е ферменты поджелудочной железы, печени, кишечника, плазмы крови при различном течении острого панкреатита на фоне традиционной фармакотерапии и выявление механизмов терапевтического антпоксидантного эффекта ионизированного кислорода на молекулярном и органном уровнях.

Основные задачи. 1. Изучить в норме и остром панкреатите лнпопереокнсленпе и антиоксидантный потенциал тканей поджелудочной железы, печени, кишечника и плазмы крови.

1. Выяснить характер изменений перекисного окисления лнпидов и аптиоксндантной защиты тканей поджелудочной железы, печени, кишечника и плазмы крови при различном течении острого панкреатита на фоне традиционной фармакотерапии.

3. .Исследовать влияние аэроионов кислорода па перекис-ное окисление липидов и ключевые антиоксидантные ферменты поджелудочной железы, печени, кишечника, плазмы крови при различном течении острого панкреатита па фоне традиционной фармакотерапии.

4. На основе модельных экспериментов установить механизмы влияния аэроионов кислорода на супероксиддисму-тазу.

Научная новизна. 1. Впервые установлена зависимость между изменениями перекисного окисления липидов и активностью .актиоксидантных ферментов в тканях поджелудочной

железы, печени и кишечника при различном течении острого экспериментального панкреатита на фоне традиционной фармакотерапии.

2. Выявлен антиоксидантный эффект комплексной терапии с включением в nee аэроиоиизацип, проявляющийся на молекулярном, тканевом и органном уровнях за счет повышения активности ключевых энзимов антнокендантной системы.

3. Впервые в опытах in vivo установлено, что механизм ннгибпрующего влияния аэроионов кислорода на свободно-радикальные процессы реализуется отчасти посредством воздействия на белковые ферментные компоненты антнокепдант-ной системы. Подтверждением обнаруженного факта является повышение под влиянием аэроионов кислорода активности супероксиддпсмутазы и изменение ее конформационией структуры в модельных опытах in vitro.

Практическая ценность работы. О выраженности расстройств гомеостаза, степени выраженности и направленности морфофункциональных изменений поджелудочной железы и печени у больных острым панкреатитом можно судить по пе-рекпеному окислению липндоз и активности антиокендантных ферментов плазмы крови.

Аэроионотераппя дозой в 20 биологических единиц по А. Л. Чижевскому в комплексном лечении острого панкреатита позволяет повысить антиоксидантный потенциал тканей поджелудочной железы, печени, кишечника и плазмы крови. Это находит эффективное отражение на важном звене в патогенезе панкреатита — свободно-радикальном процессе, что позволяет отнести аэрононотерапшо к патогенетическим методам лечения острого панкреатита.

Внедрение is практику. Разработанные диссертационные положения внедрены в Клинической больнице скорой медицинской помощи г. Саранска, включены в программу обучения студентов на кафедре факультетской хирургии медицинского факультета Мордовского ордена Дружбы народов государственного университета им. Н. П. Огарева.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены и обсуждены на XXIII—XXV Огаревских чтениях — научно-практической конференции Мордовского госуниверситета (Саранск, 1995, 1996), научной конференции молодых ученых Мордовского госуниверситета (Саранск, 1996), на 1-м Российском конгрессе по патофизиологии с международным участи-

ем (Москва, 1996), на Международном симпозиуме «Реаниматология на рубеже XXI века» (Москва, 1996).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, из них 1 — методические рекомендации.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 150 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы (1 глава), материала и методов исследования (2 глава), результатов собственных исследований (3, 4, 5 главы), обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, который включает 105 отечественных и 76 иностранных источников. Работа содержит 9 рисунков и 23 таблицы.

Положения, выносимые на защиту. 1. При остром панкреатите лигшды поджелудочной железы, печени, кишечника и плазмы крови активно вовлекаются в процесс перекисного окисления. Параллельно отмечается депрессия антиоксидант-ных энзимов исследуемых тканей. Активность супероксиддис-мутазы и каталазы уменьшается в 1,7 — 2,3 раза. При панкреонекрозе эти явления становятся более выраженными. Следовательно, гиперактивация перекисного окисления и нарушения в системе антнрадикальной защиты тканевых липи-дов — важнейшее звено в развитии панкреатита.

2. Аэроионизация в комплексе с традиционной фармакотерапией острого панкреатита приводит к подавлению перекисного окисления липидов исследованных тканей. Наиболее выраженный положительный эффект прослежен в отношении уровня малонового диальдегида. При панкреонекрозе анти-охелдантный эффект комплексной терапии проявлялся в меньшей степени, особенно в поджелудочной железе и печени.

3. Лнтноксндантное действие комплексного с аэроионотерапией лечения в исследуемых тканях сопровождается повышением активности супероксиддисмутазы и каталазы в 1,5 — 1,8 раза. При панкреонекрозе указанная терапия не способна значимо повысить активность антиоксидантных органных ферментов, особенно печени. Данный эффект свидетельствует о иекоррегируемом уровне метаболической дезадаптации этого органа.

4. Механизм ингибирующего влияния аэроионов кислорода на свободно-радикальные процессы реализуется отчасти посредством воздействия на белковые ферментные компоненты аитиоксидантной системы. Подтверждением обнаруженного факта является повышение под влиянием аэроионов кислоро-

да активности супсрокспддпсмутазы и изменением се кон-формацнонпой структуры в модельных опытах in vitro.

Выражаю благодарность кандидату биологических наук Владимиру Александровичу Трофимову за консультативную и практическую помощь.

СОДЕРЖАНКЕ РАБОТЫ

В основу работы положены экспериментальные исследования н клинические наблюдения за 47 больными острым панкреатитом (22 больным проводилась традиционная фармакотерапия, 25 — включалась и аэроионотерапия) и 10 здоровыми лицами.

Были проведены хронические опыты на 53 взрослых беспородных половозрелых собаках обоего пола, массой от 5,9 до 13,5 кг, разделенных па следующие группы.

Первая группа (14 животных): исследовали перекпеное окисление л'шидов и активность аитноксидантных ферментов при остром экспериментальном панкреатите с благоприятным течением (животные выздоравливали) на фоне традиционной фармакотерапии.

Вторая группа (10 животных): исследовали переписное окисление лппидоз п активность аитноксидантных ферментов при остром экспериментальном панкреатите с неблагоприятным течением — развитием панкреонекроза (большинство животных погибло) на фоне традиционной фармакотерапии.

Третья группа (14 животных): исследовали влияние азроиоиотерашш дозой 20 биологических единиц по А. Л. Чижевскому на перекнснсе окисление лнпидов и активность алтиоксндакишх ферментов при остром экспериментальном панкреатите с благоприятным течением на фоне традиционной фармакотерапии.

Четвертая группа (10 животных): исследовали влияние аэроконотерашш на перекпеное окисление липпдов и актив-кость антпокепдантных ферментов при папкреонекрозе на фоне традиционного лечения.

Контрольная группа состояла из 10 животных, которым в неосложненных условиях под тпопентал-натрневым наркозом (0,04 г/кг массы) выполнялась биопсия поджелудочной железы, печени, серозно-мышечпого слоя тонкой кишки, осуществлялся забор крови из подкожных вен.

Панкреатит моделировали по способу С. А. Шалимова с соавт. (1989) следующим образом. Под тиопентал:натриевым наркозом (0,04 г/кг массы) животным выполняли лаиарото-мию, а затем поджелудочную железу инфильтрировали 20% экстрактом ткани поджелудочной железы из расчета 0,2-0,3 мл/кг массы животного. Экстракт приготавливался заранее из ткани поджелудочной железы другого животного. Брюшная полость послойно зашивалась наглухо. Релапаротомию у животных выполняли через 2-3, 5-6 и 7-9 суток после операции. Производили биопсию поджелудочной железы, печени, кишечника.

Животные опытной группы после операции содержались в условиях с повышенным содержанием аэрононов кислорода. Ежедневно проводилась аэрононнзация помещения с помощью люстры Чижевского, которая включалась на 1,5 часа. Люстра создавала в 1 кубическом сантиметре воздуха 500 тысяч отрицательных азроиоков. За время сеанса собаки получали 20 биологических единиц азрононоз кислорода (160x10x9), которые по расчетам А. Л. Чижевского (1960) представляют лечебную дозу.

Медикаментозное лечение включало в себя ежедневные внутривенные капельные инфузин глюкозо-инсулиновых смесей (25 мл/кг), солевых растворов (20 мл/кг), введение пла-тнфиллина 0,2% — 1,0 мл, папаверина 2% — 2,0 мл, димедрола 1 % — 1,0 мл, 5-фторурацила из расчета 10 мг/кг (Нес-теренко и др., 1994).

Применены следующие методы исследования

1. Экстракция лнгшдов из тканевых структур.

2. Определение содержания диеновых и триеновых конью-гатов в плазме крови, поджелудочной железе, печени, кишечнике.

3. ТБК-тест на содержание малонового диальдегида в плазме крови и тканях исследованных органов.

4. Определение активности супероксиддисмутазы в плазме крови и тканях иелледованных органов.

5. Определение активности каталазы в плазме крови и тканях исследованных органов.

6. Определение белка в плазме крови и тканях исследованных органов.

7. Исследование влияния аэроионоз кислорода ¡га актив-кость суперокснддисмутазы, в том числе с различными антн-оксидантамп (модельный эксперимент).

•2. Исследование влияния аэрононов кислорода на конфор-мациониую структуру суперокснддисмутазы путем количественного определения SH-групп фермента (модельный эксперимент).

Полученные данные обрабатывали методом вариационной статистики с использованием критерия Стыодента t. Вычисляли среднюю арифметическую выборочной совокупности (М), ошибку средней арифметической (т). Достоверность различия определяли в каждой серии по отношению к исходному или контрольному значению (Р). Вычисления производили на IBM PC АТ/286 с помощью процессора Microsoft Works. Динамика показателен отражена на графиках, построенных с использованием программы Foxgraf.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Нами установлено, что при остром экспериментальном панкреатите па фоне традиционной фармакотерапии содержание диеновых и триеновых коныогатов в поджелудочной железе по отношению к показателям нормы увеличивалось соответственно на 101,23 и 96,26% (Р (0,01). Резкое увеличение начальных продуктов перекисного окисления липидов было н в печени: соответственно па 79,43 и 109,29% (Р (0,01).

При остром экспериментальном панкреатите пероксидацня липидов плазмы крови была выражена в меньшей степени. Так, содержание диеновых н триеновых коныогатов через 2-3 суток после операции повышалось соответственно на 32,61 и 67,03 % (Р(0,01). Сравнительно в меньшей степени был вовлечен в воспалительный процесс кишечника. Проявлением тому было недостоверное повышение печальных продуктов перекиеного окисления липидов. Их содержание по отношению к показателям нехода было повышено соответственно на 20,19 и 28,47% (Р (0,05).

В группе животных с благоприятным течением острого экспериментального панкреатита через 7-9 суток после операции содержание диеновых и триеновых коныогатов в тканях исследуемых органов приближалось к нормальным значениям.

В группе животных с прогрессирующим течением острого панкреатита во всех исследуемых тканях определялось накопление продуктов липопереокисления.

В поджелудочной железе содержание -диеновых и триено-еых коныогатов по отношению к исходным показателям было увеличенным соответственно на 189,60 н 233,63% (Р (0,001). Резкое увеличение начальных продуктов перекисного окисления липидов было и в печени: соответственно на 143,71 и 218,44% (Р(0,001).

Исследования показали, что при остром деструктивном экспериментальном панкреатите пероксндация липидов плазмы крови была также резко выражена. Уровень диеновых и трпеновых коныогатов повышался соответственно на 134,68 и 211,72% (Р(0,001). Особенно выраженным всплеск перекисного окисления липидов был в кишечнике. Повышение начальных продуктов перокиеного окисления по отношению к исходным показателям1 было на 236,11 и 241,15% (Р(0,001).

Одним из негативных эффектов, наблюдаемых нами при остром экспериментальном панкреатите, является свободно-радикальная модификация липидов, определяемая по возрастанию содержания продуктов, реагирующих с тиобарбитуро-вой кислотой. Эти продукты являются конечными процесса перекисксго окисления липидов. Малоновый диальдегид — основной из них. Оказалось, что в исследованных тканях при остром экспериментальном панкреатите на фоне традиционной терапии содержание ТБК-реагиругощнх продуктов возрастает.

Содержание малонового днальдегида в ткани поджелудочной железы по отношению к показателям нормы увеличивалось на 143,95%. Резкое повышение уровня этого продукта регистрировалось в печени — на 116,24 % (Р (0,001). В плазме крови отмеченное явление было выражено в меньшей сте-нснн.- Так, содержание малонового днальдегида через 2-3 су-, ток после операции повышалось на 60,69% , (Р (0,05). Анало-. гичная картина выявлена в тканях кишечника. .Проявлением, тому было повышение содержания конечных продуктов перекисного окисления лнппдоз по отношению к исходным показателям только на 22,48% (Р(0,05).

В группе животных с благоприятным течением острого гкенериментального панкреатита через 7-9 суток после операции содержание -ТБК-реагирующих продуктов во всех исследуемых тканях уменьшалось. Отметим, что в пораженном

органе в этот период еще имело место достоверное сохранение достаточно высокого уровня малонового днальдегида. В других исследованных объектах этой группы животных динамика процесса перепискою окисления липидов носила более гыраженный регрессивный характер.

Оказалось, что при остром деструктивном экспериментальном панкреатите в поджелудочной железе содержание ТБК" реагирующих продуктоз по отношению к показателям нормы было увеличенным' на 194,17% (Р (0,001). Резкое увеличение конечных продуктоз перекненого окисления липидов было в печени — на 156,33% (Р (0,001), в плазме крови — на 147,92% (Р(0,001) и кишечнике — па 162,86% (Р(0,001).

Таким образом, при остром экспериментальном панкреатите на фоне традиционной фармакотерапии лнпнды исследованных органов и плазмы крови активно вовлекаются в процесс перекненого окисления. В органах и плазме крови интенсивно накапливаются начальные (диеновые и триеновые коныогаты) и конечные (ТБК-реагирующие) продукты пере-кненого окисления. Очевидно, что наблюдаемое явление отражает комплексные изменения активности клеточных и органных систем организма, связанных с нарушением физиологической активности поджелудочной железы, печени, понижением уровня аитиокислтельной активности организма.

В противовес автокаталитическому характеру перекненого окисления липидов в распоряжении клетки и организма в целом имеется ряд адекватных механизмов, ингнбирующих ПОЛ н составляющих основу антноксидантиой системы. Состояние ферментной антиоксидантнон системы в тканях мы оценивали по активности супероксиддисмутазы и ка-талазы. Первый фермент относится к антирадикальной группе ацтиокендантов (инактивирует свободные радикалы); второй — к антиперекненон группе аитиоксидантов (инактивирует перекиси) (Биленко, 1989).

Нами установлено, что при остром экспериментальном панкреатите на фоне традиционной фармакотерапии повышение интенсивности перекненого окисления липидов в поджелудочной железе сопровождается снижением активности обоих антисксидантных ферментов. Активность супероксиддисмутазы и каталазы снизилась по отношению к показателям нормы соответственно на 61,5 и 54,2 % (Р (0,01). Резкое снижение активности антиоксидантных ферментов регистрировалось и в печени: соответственно на 59,2 и 44,7% (Р(0,01).

Сравнительно в меньшей степени это состояние прослежи-

ьаЛосъ в кишечнике. Активность каталазы понижалась несущественно — на 9,78%. Активность супероксиддисмутазы понижалась значимо на 57,19% (Р (0,05). При остром экспериментальном панкреатите, как было указано выше, перокси-дацня лшшдов плазмы крови была выражена в меньшей степени. Состояние же ферментной антиоксидантной системы здесь было иным. Активность супероксиддисмутазы и каталазы через 2-3 суток после операции понижалась соответственно на 62,66 и 57,23% (Р(0,01).

В группе животных с благоприятным течением острого экспериментального панкреатита через 7-9 суток после операции активность обоих ферментов антиоксидантной системы приближается к нормальным показателям. Нами установлено, что в поджелудочной железе в этой точке течения патологического процесса активность супероксиддисмутазы была ниже исходного значения на 23,19% (Р(0,05) и каталазы — на 32,75% (Р(0,05). Сопоставимые этим, получены результаты и в тканях другого исследуемого органа — печени. Снижение активности антиоксидантных ферментов составило соответственно 40,73 (Р(0,05) и 20,35% (Р(0,01).

В кишечнике же активность антиоксидантных ферментов вплотную приближалась к нормальным значениям, что соответствовало состоянию перекисного окисления тканевых липи-дов этого органа. Активность супероксиддисмутазы и каталазы была ниже нормы на 49,22 и 55,61% (Р(0,05). В плазме крови этой группы животных был прослежен аналогичный эффект. Состояние ферментной антиоксидантной системы было сопоставимо с исходным состоянием. Активность супероксиддисмутазы и каталазы изменялась соответственно на •11,82 и 46,95% (Р (0,05).

В группе животных с прогрессирующим течением острого панкреатита нами установлены наиболее выраженные изменения в антиокендантном потенциале исследуемых тканей.

При ианкреоиекрозе резкое повышение интенсивности перекисного окисления липидов сопровождается резким снижением активности антиоксидантных ферментов. Так, актив-' пость супероксиддисмутазы и каталазы в поджелудочной железе уменьшалась по отношению к показателям нормы соответственно на 82,79 и 76,10% (Р (0,001). Сопоставимая этой была динамика процесса и в печени: активность антиоксидантных ферментов уменьшалась соответственно на 92,16 и 63,69% (Р (0,001).

Следует особо обратить внимание на факт, что и в кйШеч-нике при таком патологическом процессе наблюдалось значимое снижение активности обоих ферментов — на 90,47 и 76,53% (Р (0,001). В плазме крови этой группы животных состояние ферментной аитиокспдантной системы было аналогичным. Активность супероксиддисмутазы и каталазы уменьшалась на 89,43 и 79,20% (Р(0,001).

Таким образом, при остром экспериментальном панкреатите повышение интенсивности перекисного окисления лнпи-дов в исследуемых тканях сопровождается снижением активности обоих антпоксидантных ферментов. При этом обнаружена тесная взаимосвязь между степенью активности ПОЛ и состоянием ферментной антиоксндантной системы. При остром панкреатите более уязвимыми оказались ферменты поджелудочной железы и печени. В меньшей степени в процесс пероксидации вовлекались плазма крови и кишечник. Однако следует подчеркнуть, что при панкреонекрозе отмеченные различия почти не проявлялись.

Снижение активности ферментных антпоксидантных систем при остром экспериментальном панкреатите является, скорее всего, следствием активации перекисного окисления липидов, дестабилизации биомембран, увеличения потери ферментов клетками и повреждающего действия на них сво-боднорадикальных форм кислорода и продуктов ПОЛ (Островская и др., 1994).

Вышеизложенный материал позволяет считать, что свобод-норадикальные процессы при рассмотренной патологии охватывают весь организм, с одной стороны, и являются одним из значимых составляющих в патогенезе панкреатита — с другой. Последнее определено тем, что липопереокисление не может не приводить к ряду негативных эффектов, проявляющихся на уровне ингибирования клеточных и органных функций и лежащих в основе нарушений гомеостаза (Коган и др., 1996). Прикладное значение выявленного факта заключается в том, что терапия острого панкреатита может быть успешной тогда, когда одними из ее составляющих будут способы, кор-регирующие свободнорадикальные процессы и тем самым нормализующие явления перекисного окисления липидов.

Исследования Р. 3. Аширова (1995), С. В. Аксеновой (1996) показали, что аэроионотерапия дозой в 20 биологических единиц по Чижевскому позволяет уменьшить явления пероксидации липидов плазмы крови. Однако на органном

уровне действие аэроионотерапии на липопереокисление до настоящего времени не изучено. Между тем начальная реакция организма при патологии наблюдается на клеточном уровне пораженного органа, проявлением чего являются различной выраженности и характера изменения в крови. Кроме того остался без внимания вопрос модификации антнокси-даотион ферментной системы под действием аэропонотерашш.

Нами установлено, что биологическое действие аэроионов кислорода на состояние органных липидов и плазмы крови как в норме, так и при рассмотренной патологии проявляется достаточно убедительно.

Нами установлено, что при остром экспериментальном панкреатите после 3 сеансов аэрононотерапин на фоне традиционного лечения содержание диеновых и триеновых коньюгатов в поджелудочной железе по отношению к показателям коп-треля (ими приняты данные исследований состояния керекпеного • окисления лппндов в этот период у животных, которым не проводилась аэроионотераппя) были уменьшенными соответственно на 40,9 и 21,7% (Р (0,0Í). Уменьшалось накопление начальных продуктов перекисного окисления ли-пидозч1 в печени: соответственно на 18,2 и 28,2% (Р(0,01). ' 1 Аэроионотерапия в сравнительно меньшей степени влияла на свободнорадикальные процессы в кишечнике. Напомним, что при моделируемой патологии явления лппопереокисления в этом органе отличались незначительной выраженностью. Установлено снижение накопления начальных продуктов перекисного окисления липидоз к показателям контроля соответственно на 13,7 н 16,7% (Р(0,05). Положительный эффект влияния аэроионов кислорода прослежен по отношению плазмы крови. Содержание диеновых и триеновых коньюгатов в ней после 2-3 сеансов аэроионотерапии понижалось соответственно на 15,9 и 33,4% (Р(0,01).

В группе животных с благоприятным течением острого экспериментального панкреатита после 7 сеансов аэрононотерапин интенсивность пероксидации как органных, так и липидов плазмы крови по сравнению с контролем уменьшалась. Уровень диеновых и триеновых коньюгатов в исследуемых тканях вплотную приближался к исходным значениям.

В группе животных с деструктивным панкреатитом после 5-сеансов'аэроионотерапии на фоне традиционного лечения содержание диеновых и триеновых коньюгатов в поджелудочной железе по отношению к показателям контроля пони-

жалось соответственно на 18,7 (Р(0,01) и 22, 7% (Р(0,05), в

печени на 8,42 и 21,1% (Р (0,05). Аэроионотерапия при деструктивном панкреатите значимо не влияла на уровень трне-ковых коныогатов плазмы крови: уменьшение их сказалось только 9,7% (Р (0,05). Содержание в крови диеновых же коныогатов было меньше контроля на 23,9% (Р (0,01). Аналогичная картина определялась и в кишечнике. Понижение начальных продуктов перекнского окисления — диеновых и триеновых коньюгатов — по отношению к контрольным показателям было на 26,3 (Р(0,05) н 9,1% (Р(0,05).

Однако следует подчеркнуть, что, несмотря на проводимую аэроионотерапшо, накопление в тканях начальных продуктов лнпопереокисления по сравнению с исходными показателями было существенным.

Нами установлено, что наиболее выраженным эффект аэроионотерапии был по отношению к конечным продуктам нереокнелення.

Аэрононизацня в течение 3 сеансов при остром экспериментальном панкреатите приводила к уменьшению содержания малоиозого днальдегида в тканях поджс-лудочпсй железы по отношению к показателям контроля на 35,6% (Р (0,001), с печени — на 30,2% (Р(0,05). Положительное влияние аэро-ноиов кислорода на перекисное окисление лнпидоз прослеживалось и в тканях кишечника. Уровень ТБК-реагирующих продуктов уменьшался по сравнению с контрольными значениями на 20,9% (Р(0,05). Наиболее отчетливо эффект аэрононов кислорода определялся па уровне плазмы крови. Содержание конечных продуктов перекненого окисления ли-' индов по отношению к контрольным показателям уменьшалось на 49,9% (Р (0,001).

В группе животных с благоприятным течением панкреатита во всех исследуемых тканях под влиянием терапевтической дозы аэроионизацни отмечена положительная динамика показателей конечных продуктов лнпопереокисления. В среднем содержание ТБК-реагирующих продуктов уменьшалось па 15 — 20%.

При паикреонекрозе аэроионотерапия приводила к уменьшению накопления малонового днальдегида в поджелудочной железе по отношению к показателям контрольной группы на 17,7% (Р(0,05), в печени — на 16,8% (Р(0,05), в плазме крови — на 15,6% (Р (0,001), в кишечнике — на 20,2% (Р (0,05).

Йнтсресные данные по влиянию аэроионотерапии на содержание ТБК-реагирующих продуктов нами получены в группе здоровых животных.

Оказалось, что в поджелудочной железе накопление их уменьшилось недостоверно (на 4,9%). Аналогично действие аэроионов кислорода в норме прослеживалось в кишечнике (на 16,3%). В печени отмечен значимый эффект аэроионотерапии (на 28,3 Р (0,01). Наиболее отчетливо влияние отрицательно заряженных ионов прослеживалось в плазме крови. Уровень малонового диальдегида уменьшался на 29,9 % (Р (0,001).

Таким образом, при остром экспериментальном панкреатите нами установлен положительный эффект аэроионотерапии на процесс перекисного окисления тканевых липидов резлич-ных органов. Оказалось, что наиболее значимое влияние на липопереокисление аэрононы кислорода оказывали после 3 сеансов. В группе животных с панкреонекрозом результаты были менее значимыми. Вероятно, при таком патологическом состоянии аэроионотерапия на фойе традиционного лечения не способна существенно оказывать влияние на процесс перекисного окисления липидов.

Параллельно исследованиям ПОЛ нами изучена и антиок-сидантная тканевая ферментная система этих органов.

Установлено, что после 3 сеансов аэроионы кислорода оказывают выраженное нормализующее влияние на активность обоих антиоксидантных ферментов поджелудочной железы. Активность супероксиддисмутазы и каталазы повысилась по отношению к показателям контроля соответственно на 69,3 и 76,2 % (Р(0,05). Повышение активности антиоксидантных ферментов под влиянием аэроионотерапии регистрировалось и в печени: соответственно на 31,6 и 52,4% (Р(0,01).

Сравнительно в меньшей степени эта реакция наблюдалась со стороны кишечника. Активность супероксиддисмутазы повышалась на 70,2 % (Р (0,05), а каталазы — несколько снижалась на 0,1% (Р(0,05). При остром экспериментальном панкреатите выраженный эффект аэроионотерапии на состояние антиоксидантной системы прослеживался в плазме крови. Активность супероксиддисмутазы и каталазы повышалась соответственно на 81,0 и 69,6% (Р(0,01).

В группе животных с благоприятным течением острого экспериментального панкреатита через 7 сеансов после операции активность обоих ферментов антиоксидантной системы

исследованных тканей вплотную приближалась к нормальным показателям. Нами установлено, что в поджелудочной железе в этот период течения патологического процесса активность супероксидднсмутазы и каталазы относительно контрольных показателей была повышена на 54,3 и 92,6% (Р(0,01). Сопоставимые этим, получены результаты и в тканях другого исследуемого органа — печени. Активность анти-окспдактных ферментов относительно контрольных данных соответственно повышалась на 60,5 и 39,9% (Р (0,01).

В кишечнике активность антиоксидантных ферментов вплотную приближалась к нормальным значениям, что соответствовало состоянию перекисного окисления тканевых ли-пндов этого органа. Активность супероксидднсмутазы и каталазы была выше контрольных данных на 75,9 и 90,4% (Р(0,01). В плазме крови этой группы животных аэроионотерапия вызывала наиболее выраженный положительный эффект. Состояние ферментной антиоксидантной системы было сопоставимо с исходным состоянием. Активность супероксидднсмутазы и каталазы повышалась соответственно на 67,9 и 168,4% (Р (0,01).

В группе животных с прогрессирующим течением острого панкреатита проведенная аэроионотерапия на фоне традиционного фармаколечения обусловливала некоторое повышение активности исследуемых ферментов анткоксидаитнон защиты. Однако в целом она не смогла существенно приблизить эти показатели к исходному уровню. Обращал на себя факт наименьшего влияния аэроионов кислорода на антиоксидант-иую систему печени — влияние оказалось несущественным. В поджелудочной железе, кишечнике, плазме крови наблюдалось достоверное увеличение активности антиоксидантных исследованных ферментов соответственно на 30,0 и 50,9% (Р (0,05), 41,0 и 86,4% (Р(0,05) и 114,3 и 77,8% (Р(0,001),

Нами установлен факт воздействия аэроионов кислорода на активность тканевых ферментов антиоксидантной системы у здоровых животных. В поджелудочной железе активность супероксидднсмутазы и каталазы повышалась соответственно на 22,4 и 21,8% (Р(0,05), в печени — на 38,5 и 33,4% (Р(0,01), в кишечнике — на 22,5 и 10,5% (Р(0,05) и плазме крови — на 26,1 и 17,6% (Р(0,05).

Таким образом, аэроионотерапия при остром экспериментальном панкреатите повышает активность обоих исследованных антиоксидантных ферментов. Положительный эффект прослежен во всех группах. Наиболее значимый результат на-

ми получен после 3-7 сеансов аэроионотерапии у животных с благоприятным течением острого панкреатита.

При прогрессироваиии патофизиологических явлений аэроионы кислорода не способны приводить к существенному антиоксидантпому эффекту. Отмеченное особенно четко проявляется на уровне печени, где при паикреонекрозе аэрононоте-рапия почти не влияла на псрекисное окисление липидов. Однако полученные результаты резко отличались от исходных. Обращает на себя внимание факт положительного влияния аэроионов кислорода на активность тканевых ферментов актиоксидантной системы здоровых животных.

Нами проведены исследования по изучению влияния азроно-иов кислорода в клинической практике. Оказалось, что у больных острым панкреатитом на фоне традиционной фармакотерапии содержание диеновых и триеновых коныогатов возрастает по отношению к нормальным показателям соответственно на 43,78 и 60,90% (Р (0,001), а малонового диальде-гида на 81,94% (Р (0,001).

Нами обнаружено позитивное влияние аэроионов кислорода на процесс лерекисного окисления лшшдов плазмы крови больных острым панкреатитом. После трех сеансов аэроио-нотерапип терапевтической дозой регистрировалось уменьшение содержания диеновых и триеновых коныогатов соответственно на 21,44 (Р (0,01) и 20,58% (Р (0,05), а малонового диальдегнда на 28,23% (Р (0,001).

Нами исследовано состояние антиоксидантной ферментной системы здоровых людей и больных острым панкреатитом.

Установлено, что параллельно повышению уровня продуктов лнпопереокисления в плазме крови больных отмечено уменьшение активности исследованных ферментов. Активность супероксиддисмутазы и каталазы соответственно уменьшалась на 47,70 и 32,78% (Р (0,001).

После трех сеансов аэроионизации на фоне традиционной фармакотерапии активность обоих исследованных ферментов повышалась соответственно на 32,72 (Р (0,001) и 18,07 (Р (0,05) %.

Таким образом, анализ клинического материала показывает, что при остром панкреатите активизируется перекисное окисление липидов. Параллельно угнетается активность антиоксидантной системы, то есть полученные данные соответствуют экспериментам на животных.

Нами также доказано, что аэрононотерапия больных острым панкреатитом, при всех прочих условиях, приводит к снижению перекисного окисления лнпидов и активизирует аитиоксидантную ферментную систему, что соответствует результатам экспериментальных опытов (на уровне плазмы крови).

Полученный фактический материал с достаточной убедительностью показывает о способности аэроионов кислорода активно влиять на перекисное окисление лнпидов. Одним из путей реализации этого эффекта, как показали наши опыты, является активизация антнокепдантной ферментной системы. Перед нами возникла задача по выяснению механизма стимуляции аэроионам» кислорода аитиокендантных энзимов.

Современные представления о механизмах реализации биологического действия аэрононов кислорода на организм основываются на явлении «биокаталнтической вспышки» отрицательного заряда, которая, по-видимому, происходит в про-тсогликаноЕом слое сурфактанта легких при электрообмене между каталитически вырабатываемыми здесь отрицательными зарядами и положительными, которые поступают в легкие с током крови (Мачабели, Теряев, 1992). По такому же принципу происходит обмен электрическими зарядами между тканями организма. Полагают, что аэроионы кислорода в системе крови увеличивают отрицательные заряды как молекулярных, так и клеточных компонентов крови. Кровь переносит отрицательные ноны кислорода на клеточные системы, тем самым, стабилизируя состояние клеток и предотвращая их электроразрядку и коагуляцию с переходом из золя в гель (Скипетров и др., 1995). Таким образом, даже и в таких сложных системах имеет место непосредственное взаимодействие ионизированного кислорода с белками.

В модельных экспериментах изучено влияние аэроионов кислорода па активность супероксиддисмутазы из эритроцитов человека. Супероксидднсмутаза — ключевой фермент утилизации активированных форм кислорода и его каталитическая деятельность во многом определяет эффективность функционирования антпокендантной системы (Биленко., 1989).

При стимуляции аэроноиамн кислорода дозой в 10 биологических единиц активность супероксиддисмутазы по отношению к контролю возрастает на 36,14% (Р (0,001). Увеличение дозы воздействия аэроионами до 20 биологических еди-

ниц наблюдается дальнейший рост активности антиоксидант-ного фермента. В зтом случге по отношению исходного значения активности обнаружен прирост на 47,36% (Р(0,001).

Следовательно, данная динамика увеличения активности фермента при аэроионизации является важнейшим фактическим подтверждением благоприятного действия отрицательно заряженных аэроионов кислорода на энзимную антиоксидант-ную систему. Супероксиддисмутаза является ключевым ферментом антиоксидантноп системы организма, предохраняющим биологические мембраны и клеточные структуры от повреждающего действия свободных радикалов. Указанный эффект прежде всего проявляется в отношении активированных форм кислорода и поэтому возрастание активности суперок-сиддисмутазы является признаком благоприятного действия ионизированного кислорода.

Активизация каталитической деятельности супероксиддис-мутазы под влиянием аэроионов кислорода может быть опос-ледована как стимуляцией фермента субстратом, так и связана с непосредственным воздействием отрицательных ионов кислорода па структуру фермента, его конформацнонную лабильность.

Для выяснения некоторых молекулярных основ стимулирующего действия аэроионов кислорода на активность супер-' оксиддисмутазы нами проведены модельные эксперименты с применением антиоксидантов.

Первый из них — карнозин, который является дипепти-дом с широким спектром антираднкалыюй активности и относится к водорастворимым антиоксидантам.

Нами' установлено, что стимуляция супероксиддисмутазы аэроиопами кислорода в присутствии 5 мМ карнозина дозой в 10 биологических единиц также приводит к увеличению активности фермента — на 35,23% (Р (0,05). При стимуляции аэроионамн кислорода дозой в 20 биологических единиц карнозин способствует дальнейшему росту каталитической деятельности супероксиддисмутазы. Активность ее превышает уровень контроля на 234,14 % (Р (0,001).

Очевидно, что в условиях нашей модели продолжительная стимуляция аэроионамн кислорода приводит к эффекту, насыщения раствора фермента продуктами неферментативного превращения ионизированного кислорода в растворе и перекиснымн соединениями, образующимися в результате каталитической деятельности супероксиддисмутазы. Антиок-

сидантное действие карнозина и ограничение окислительной модификации фермента, которая может иметь место при избыточном накоплении некоторых активированных форм кислорода, позволяют супероксиддисмутазе обнаруживать высокую активность.

Другой антиокендант — маннитол — отличается выраженной способностью ингибирования окислительных процессов за счет связывания ОН* —радикалов (Биленко, 1989). Поэтому его применение в модельных экспериментах позволило дифференцировать вклад ОН* -радикалов (в случае их образования при действии аэроионов кислорода) в модификацию супероксиддисмутазы.

Стимуляция аэроионами кислорода фермента дозой в 10 биологических единиц совместно с 5 мМ маниитола привела к понижению активности супероксиддисмутазы по отношению к контролю на 68,04 % (Р (0,001). При дозе в 20 биологических единиц отмечен рост каталитической деятельности фермента. В этом случае его активность превышает контрольные значения на 98,67% (Р (0,001).

Таким образом, применение маниитола, который, как известно, ограничивает развитие окислительных процессов, протекающих по свободнорадикальному механизму на уровне блокадыОИ* -радикалов, приводит, как и в случае действия карнозина, к увеличению активности фермента. В количественном же выражении прирост в каталитической деятельности фермента был меньшим. Очевидно, отмеченный факт характеризует важную роль ОН* -радикалов, как продуктов превращения ионизированного кислорода в запуске биологических реакций, инициируемых аэроионами кислорода.

В следующих модельных исследованиях нами изучено влияние аэроионов кислорода на конформационную лабильность супероксиддисмутазы. Для этих целей проводили определение количества свободных БН-групп фермента путем их титрования раствором хлормеркурпобензоата.

Нами установлено, что биологическое действие аэроионов кислорода дозой 10 биологических единиц проявилось на уровне белковой молекулы в виде увеличения числа свободных БН-групп более чем в три раза. Увеличение аэроннзации до дозы 20 биологических единиц дальнейшего роста числа свободных БН-групп не регистрировалось.

Следовательно, результаты исследований последних модельных экспериментов подчеркивают возможность реализа-

цни некоторых специфических эффектов биологического действия аэроионов кислорода на молекулярном уровне через изменение конформацпонпой лабильности белковых молекул, в нашем случае—> супероксиддисмутазы. Увеличение числа свободных 5Н-групп в молекуле фермента под влиянием аэроионов кислорода свидетельствует о том, что ионизированный кислород обладает мощным перестроечным действием относительно динамической структуры супероксиддисмутазы. Проявление этого эффекта совпадает с повышением активности исследуемого антноксидантного фермента. Следовательно, наши наблюдения с несомненностью указывают па то, что один из механизмов благотворного влияния аэроионов кислорода на супероксиддисмутазу проявляется через изменение ее конформацпонпой структуры.

Таким образом, интерпретируя результаты экспериментальных исследований и клинических наблюдений предоставляется возможность выделить нижеследующее.

Во-первых, достаточно убедительно показано, что одним из ведущих звеньев в патогенезе острого панкреатита является активизация перекисного окисления липидов и угнетение активности ферментной антиоксидантиой системы. Немаловажное значение для науки и практики имеет и то, что это состояние обнаруживается не только на уровне плазмы крови, но и на органном уровне.

Во-вторых, — и это самое главное — установлен факт положительного воздействия на перекнсное окисление липидов аэроионов кислорода па фоне традиционной терапии острого панкреатита. Ингпбнругощес влияние аэроионов кислорода на свободно-радикальные процессы окисления липидов реализуется отчасти посредством воздействия на белковые ферментные компоненты антиоксидантиой системы. Подтверждением обнаруженного факта является повышение под влиянием аэроионов кислорода активности супероксиддисмутазы и изменение ее конформацпонпой структуры. Это позволяет отнести аэрононы кислорода к фармакологическим препаратам, обладающим антиокендантным действием.

В-третьих, показано, что в аспекте исследуемого явления аэроионы кислорода характеризуются широким спектром биологического действия. Важным доказательством чему является проявление их антноксидантного эффекта во всех исследованных нами тканял. Это позволяет вести речь об организ-

меином уровне реализации благотворного воздействия аэроионотерапии на фоне традиционной терапии.

ВЫВОДЫ

1. При остром панкреатите липиды поджелудочной железы, печени, кишечника и плазмы крови активно вовлекаются в процесс перекисного окисления. В органах и плазме крови интенсивно накапливаются начальные (диеновые и трие-новые коньюгаты) и конечные (ТБК-реагирующне) продукты липопереокнсления. Очевидно, что наблюдаемое явление отражает комплексные изменения активности клеточных и органных систем организма, связанные с нарушением физиологической активности поджелудочной железы, печени при рассмотренной патологии.

2. Для острого панкреатита характерна депрессия антиок-сндантных энзимов поджелудочной железы, печени, кишечника и плазмы крови. Активность супероксиддисмутазы и ката-лазы уменьшается в 1,7-2,3 раза. При панкреонекрозе эти явления становятся более выраженными. Активность супероксиддисмутазы ослабевает в 5,8-11,7, а каталазы — в 2,8-4,8 раза. Следовательно, пшерактивация перекисного окисления и нарушения в системе антираднкальной защиты тканевых липи-дов — важнейшее звено в развитии панкреатита, что установлено намн в экспериментальных исследованиях и клинических наблюдениях.

3. На фоне традиционной фармакотерапии аэроионы кислорода приводят к пнгибированию перекисного окисления липидов в исследованных тканях. Наиболее выраженный положительный эффект прослежен в отношении уровня малонового диальдегида — снижение по отношению к контролю в 1,4-1,9 раза. Содержание диенов и триенов уменьшалось в 1,2-1,7 раза. При панкреонекрозе антноксидантный эффект аэроионотерапии проявлялся в меньшей степени, особенно в поджелудочной железе и печени.

4. Анткокислнтельньш эффект аэроионизации в исследуемых тканях сопряжен с повышением активности супероксиддисмутазы и каталазы в 1,5-1,8 раза. При панкреонекрозе аэроионотерашш в комплексе с традиционным лечением не обеспечивает значимое повышение активности антиоксидант-

н-Ых органных ферментов, особенно в печени,- что свидетельствует о некоррегируемом уровне метаболической Дезадаптации этого органа.

5. Включение аэроиопов кислорода в комплекс терапевтических мероприятии острого панкреатита в клиническое практике позволяет повысить эффективность лечения, проявлением чего является сокращение пребывания больных е стационаре на 0,6 койко-дней.

6. Механизм лнгибирующего влияния аэрононов кислорода на иерекпсное окисление липидов реализуется отчасти посредством воздействия на белковые ферментные компонен ты антпокендантной системы, выявленное in vivo. Подтверждением обнаруженного факта является повышение под влиянием аэроиоиов кислорода активности суперокенддисмутазь и изменение ее конформациопной структуры, регистрируемо( по росту свободных SH-rpynn, установленных в модельны> опытах in vitro.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Характер расстройств в системе антиоксидантной тка невой защиты иоджс-лудочной железы и печени может был оценен по активности супероксиддисмугазы и каталазь плазмы крови.

2. Аэроиопотерапия дозой в 20 биологических единиц п( А. Л. Чижевскому в комплексе с традиционным лечением острого панкреатита позволяет повысить антиоксидантньп : потенциал тканей поджелудочной железы, печени, кишечни

ка и плазмы крови. Это находит отражение на важном звеш в патогенезе панкреатита — перекисном окислении липидов что позволяет отнести аэрононотерапшо к патогенетически методам лечения острого панкреатита и рекомендовать е< .для практического применения.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Перспективы применения аэроионов в терапии расстройств функций клеток при некоторых заболеваниях //Тезисы докладов XXIV Огаревских чтений. Саранск, 1996. С.52-53. (Соавт. Р. С. Аширов, А. II. Власов, В. А. Трофимов,

B. Н. Подеров).

2. Влияние аэроиоиов на гемостаз кишки при ишемии //Тезисы докладов XXIV Огаревских чтений. Саранск, 1996.

C. 42-43. (Соавт. С. В. Аксенова, И. Г. Румянцев, С. П. Грачев).

3. Интенсивная терапия острого холецистита //Актуальные вопросы комбустиологии, реаниматологии и экстремальной медицины. Саранск, 1996. С. 213-214. (Соавт. Р. 3. Аширов, А. П. Власов, В. А. Трофимов, В. Н. Подеров).

4. Перекнсное окисление липидов при действии аэроионов I // Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы. М., 1996. С. 123-123. (Соавт. А. П. Власов, В. А. Трофимов, В. И. Подеров, О. Ю. Рубцов)

5. Перекнсное окисление лнпопротеидов крови при остром панкреатите //Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы. М., 1996. С. 202-202. (Соавт. В. А. Трофимов, В. О. Слесарев, А. П. Власов, В. И. Подеров).

6. Определение ферментов антноксндантиой системы //Методические рекомендации. Саранск, 1996. 24 с. (Соавт. В. А. Троф]!мов, А. П. Власов).

7. Аэроионотерапня в комплексном лечении острого деструктивного панкреатита //Анналы хирургической гепатолопш. Тула, 1595. Т. 1. С. 131-131. (Соавт. Р. 3. Аширов, А. П. Власов, В. А. Трофимов, О. Ю. Рубцов).

8. Функциональное состояние тромбоцитов и перекнсное окисление липидов крови больных острым деструктивным панкреатитом //Реаниматология на рубеже XXI века. М., 1996. С.