Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Влияние эпиталамина на иммунитет, гемостаз и стресс-гормоны при холодовой травме в эксперименте и клинике

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ЧИТИНСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ

На правах рукописи

СЕРЕБРЯКОВА ОЛЬГА ВЛАДИМИРОВНА

ОД

ОлТ Ш9

ВЛИЯНИЕ ЭПИТАЛАМИНА НА ИММУНИТЕТ, ГЕМОСТАЗ И СТРЕСС-ГОРМОНЫ ПРИ ХОЛОДОВОЙ ТРАВМЕ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ И КЛИНИКЕ

14.00.16. - Патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Чита - 1999

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ЧИТИНСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ

На правах рукописи

СЕРЕБРЯКОВА ОЛЬГА ВЛАДИМИРОВНА

ВЛИЯНИЕ ЭПИТАЛАМИНА НА ИММУНИТЕТ, ГЕМОСТАЗ И СТРЕСС-ГОРМОНЫ ПРИ ХОЛОДОВОЙ ТРАВМЕ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ И КЛИНИКЕ

14.00.16. - Патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Чита-1999

Работа выполнена в Читинской государственной медицинской академии

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Л.П. Малежик доктор медицинских наук, заслуженный врач РФ, профессор В.А. Сизоненко

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

заслуженный врач РФ, профессор Э.Д. Загородняя

доктор медицинских наук Патеюк В.Г.

Ведущая организация: Институт геронтологии и биорегуляции, г. Санкт-Петербург

Защита диссертации состоится 1999г. власов

на заседании диссертационного совета Д 84.74.01 при Читинской государственной медицинской академии по адресу: 672000, г. Чита, ул. Горького, 39-А.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Читинской государственной медицинской академии по адресу: г.Чита, ул. Горького,39-А

Автореферат разослан " 1999г.

Ученый секретарь диссертационного совета

к.б.н., с.н.с А.Н. Ложкина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Повреждения организма низкой температурой встречаются довольно часто.

Особенную значимость эта проблема приобретает во время стихийных бедствий: наводнений, землетрясений, ураганах, при резком похолодании. Во время этих экстремальных ситуаций возникают человеческие жертвы, резко увеличивается количество пострадавших от холода (Клинцевич Г.Н., 1973; Герасимов Л.И. с соавт.,1985 и др.).

Поражение холодом имеет огромное социальное значение, особенно для регионов Крайнего Севера и Сибири, которую М.Н. Райский (1907) назвал " Классической страной холода", где на человека длительно воздействует низкая температура (Шейнис В.П., 1963).

Степень воздействия холода может быть самой различной - от банального переохлаждения в морозный день до тяжелого отморожения в экстремальной ситуации. Патологические изменения при этом могут быть разной интенсивности: от функциональных обратимых до необратимых, с нарушением структуры пострадавшего органа, обусловленных прежде всего, расстройствами кровообращения и снижением резистентности организма (Арьев Т.Я., 1966; Скворцов Ю.Р., 1998).

Нет ни одного органа, ни одной системы, которые бы не подвергались изменениям под действием низких температур. Так известно, что холодовая травма снижает возбудимость в сердечной мышце (Вайль С.С.,1959; Борисова A.M., 1987). Развивался холодовойгломерулонефрит(ШульцевГ.П., 1958г.). Наступают изменения со стороны легких, с развитием "полярной одышки" (Авцын А.П.с соавт., 1985).

Серьезные нарушения формируются в нервной системе. От деструкции нервных элементов до развития декортикации коры головного мозга. (Шейнис В.Н.,1963).

Несмотря на то, что данному вопросу посвящено немало исследований, патогенез отморожений до конца не изучен, а посему результаты лечения оставляют желать лучшего. Выход на инвалидность пострадавших от холода составляет от 15% до 50% (Карпушин А.А.,1985; Степной П.С., 1985; Воинов А.И. с соавт., 1989; Пекарский Д.Е., Захарченко О.М., 1989).

Длительный период лечения у больного сохраняется стрессовая ситуация, причиной которой являются боли, незаживающие раны и ожидание возможной инвалидизации. Возникающие нейро-элдокринные нарушения поддерживают местные патогенетические механизмы развивающейся деструкции ткани.

Поэтому включение в комплексе лечения больных с отморожениями эндокринных регуляторов, способных выровнять общий нейро-гуморапьный

статус, является важным и необходимым условием нормализации общего гомеостаза.

Из всех возможных корректоров мы избрали гуморальные регуляторы, выделенные из эпифиза, так как он занимает ведущую роль в иерархической лестнице эндокринного управления и регулирует функцию гипоталамо-гипо-физарной системы, ответственную за формирование и течение адаптивных реакций.

В данной работе мы использовали комплекс полипептидов, выделенных из эпифиза и получивших название эпиталамин (Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., 1974). Кас интересовали не только его коррегирующие влияния на нейро-гумо-ральный статус, но и его регуляторные воздействия на системы иммунитета и гемостаза, которые существенно страдают при холодовой травме и являются патогенетическим звеном деструктивных процессов.

Исходя из выше изложенного, мы решили выяснить терапевтическую ценность эпиталамина в лечении холодовой травмы и выработать критерии оценки его коррегирующего эффекта.

Цель исследования:

Основной целью настоящего исследования являлось изучение роли полипептидного регулятора из эпифиза - эпиталамина на течение холодовой травмы в эксперименте и клинике.

Задачи исследования:

1. Изучить влияние эпиталамина на адаптацию к холодовой травме и ее течение у животных.

2. Исследовать влияние эпиталамина на показатели защитных систем организма (иммунитет и гемостаз) в опытах in vitro.

3. Выявить действие эпиталамина на иммунитет, гемостаз и динамику стресс - гормонов у больных с Холодовыми поражениями.

Научная новизна

Впервые установлено, что полипептидные регуляторы из эпифиза (эпиталамин) играют патогенетическую роль в развитии холодовой травмы. Их недостаток при эпифизэктомии снижает резистентность животных к холодовой травме и замедляет процесс регенерации.

Эпиталамин является мощным адаптогеном. Его применение совместно с нанесением холодовой травмы снижает летальность животных и купирует развитие местной патологии.

Включение эпиталамина в базисную терапию больных с отморожениями ускоряет репаративные процессы, способствует быстрейшей коррекции

гормонального фона, стимулирует защитные системы организма, что проявляется в нормализации показателей иммунитета и гемостаза.

Впервые предложено применение эпиталамина для лечения больных с холодовой травмой.

Практическая ценность работы

Выполненные исследования открывают новые возможности повышения эффективности лечения холодовой травмы и сокращения продолжительности пребывания больного в стационаре. Полученные результаты позволяют уточнить некоторые механизмы патогенеза, прогнозировать течение холодовой травмы, предвидеть развитие осложнений. Разработаны рекомендации по применению эпиталаминадля лечения больных с холодовой травмой. Патогенетически обоснованный метод терапии способствует предотвращению тяжелых последствий холодовой травмы. Результаты диссертационного исследования используются при лечении больных в межрегиональном центре термической травмы г.Чита, при чтении лекций и на практических занятиях на кафедре травматологии и ВПХ Читинской медицинской академии, на кафедрах нормальной и патологической физиологии ЧГМА. Разработан новый способ эпифизэктсмии у животных, снижающий смертность от кровопотери во время операции.

Положения, выносимые на защиту

1. Эпифиз играет патогенетическую роль в развитии стрессовой ситуации, повышая адаптогенные возможности организма.

2. Эпифизэктомия снижает резистентность животных к холодовой травме и замедляет регенерацию раневой поверхности.

3. Регуляторный полипептид из эпифиза (эпиталамин) является иммуностимулятором и изменяет показатели иммунитета и гемостаза в опытах in vitro.

4. Эпиталамин обладает адаптивным действием, изменяет уровень основных стресс-гормонов периферической крови, стимулирует систему иммунитета, уменьшает проявление тромбогеморрагического синдрома при холодовой травме, ускоряет репаративные процессы в ране и способствует улучшению результатов лечения больных с отморожениями.

Внедрение в практику

Полученные результаты используются в практическом здравоохранении при лечении больных с холодовой травмой в межрегиональном центре термической травмы г.Чита, при чтении лекций и на практических занятиях на кафедре травматологии и ВПХ Читинской медицинской академии, на кафедрах нормальной и патологической физиологии ЧГМА.

Апробация работы

Материалы исследования доложены на итоговой конференции студентов ЧГМА 1995,1996 года, на межвузовской конференции з 1997 году, на VI съезде травматологов - ортопедов России (Нижний Новгород, 1997год).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 работ, в которых были отражены основные положения диссертации.

Структура и объем работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы о материалах и методах исследований, трех глав собственных исследований и наблюдений, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, указаний литературы.

Текст изложен на 145 страницах машинописи, иллюстрирован 26 таблицами и 8 рисунками. Библиографических источников - 360, из них - 280 отечественных и 80 иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Наши наблюдения проведены на 35 здоровых людях и 120 больных с холодовой травмой различной степени тяжести. Все больные находились на лечении и обследовании в 1995-1999 годах в областном центре термической травмы, расположенном на базе городской клинической больницы №1 города Читы. Кроме того, поставлены опыты на 91 белой крысе весом 200-240 г.

Лабораторные животные содержались в соответствии с "Санитарными правилами по устройству, оборудованию и содержанию экспериментальных биологических клиник (вивариев)", утвержденными МЗ СССР 07.1973 года.

Объектами исследования служили: кровь, плазма, сыворотка здоровых людей, больных с холодовой травмой, а также ткани экспериментальных животных. Все подопытные крысы, исходя из поставленных задач, распределены на 6 экспериментальных групп (таблица 1).

Таблица 1

Распределение по группам

№ Группы Количество

1 Контрольная с холодовой травмой 12

2 Леченная зшггаламином после травмы 15

3 Леченная эпиталамином до и после травмы 14

Продолжение таблицы 1

4 Ложнооперированные с холодовой травмой 12

5 Эпифизэктомированные 18

6 Эпифизэктомированные, леченные эпиталамином 20

Крыс вводили в наркоз внутрибрюшинной инъекцией 1 мл калипсола. Операционное поле обрабатывали раствором левосепта. По средней линии головы делали разрез длинной 2 см, обнажали кости черепа в теменно-затылочной области. По стандартной методике отделение костной пластинки часто сопровождается повреждением синусов и обильным кровотечением.

Для предупреждения кровотечения нами разработан способ перевязки сагиттального синуса в теменно-затылочной области через трефинационные отверстия диаметром 2 мм. После перевязки делали трепанацию бором диаметром 5 мм. Твердую мозговую оболочку рассекали глазным скальпелем параллельно перевязанному сагиттальному синусу. Отодвигали поперечный синус, и под лупой с увеличением в 10 раз хорошо был виден эпифиз, который удаляли вместе с поводком специальным глазным пинцетом. Рану послойно ушивали. Контроль достоверности удаленного эпифиза осуществляли посредством изучения тканей под микроскопом. Контрольную группу составляли животные, подвергшиеся ложной операции. При этом производили все этапы операции за исключением удаления эпифиза.

Наш способ эпифизэктомии позволяет избежать обильного кровотечения из синуса и операционная летальность сводится к нулю.

Моделирование холодовой травмы в эксперименте производили следующим образом: отступив на 3 см от основания, опрыскивали хвост хлорэ-тилом, до тех пор, пока он переставал сгибаться. Затем хвост помещали в смесь мелкотолченого льда с хлоридом натрия на 3 часа в плотном полиэтиленовом резервуаре. Через 2 суток кончик хвоста на протяжении 5-7см становился нежизнеспособным и постепенно чернел. Проксимальная часть его частично некротизировалась в виде отдельных участков в основном на боковых поверхностях хвоста. Отторжение конца хвоста происходило на 5-10 сутки. Рана хвоста заживала на 10-15 сутки. Для получения общего замерзания животные помещались в морозильную камеру при температуре минус 18 град. С до снижения температуры тела до плюс 29 град. С, которое наступало через 2 часа. После этого крыс вынимали из камеры и начинали интенсивное лечение.

Больные с холодовой травмой также были разделены на группы с учетом метода лечения, возраста, пола и степени отморожения. Данные о возрастном составе обследованных больных представлены в таблице 2.

Таблица 2

Возрастной состав больных

Возраст в годах Контрольная группа (кол-во больных) Группа, у которой исследована кровь при добавлении эпитал амина (in vitro) Группа, получавшая эпитал амин (кол-во больных) Всего

10-20 1 2 2 5

21-30 4 6 9 19

31-40 6 10 12 28

41-50 8 8 11 27

51-60 7 9 9 25

61-65 4 5 7 16

ИТОГО 30 40 50 120

Как следует из приведенных данных, основной контингент составляли пациенты наиболее трудоспособного возраста от 21 года до 50 лет. Возраст пациентов в обеих группах практически не отличался и в среднем составлял 43,1+3,4 года. Мужчин было 96, женщин 24. Обстоятельства получения тяжелой холодовой травмы разнообразны, но у 74% пострадавших отмечалось алкогольное опьянение.

По степени отморожения все больные распределялись следующим образом:

I-II - 5 % (6)

II-III-15% (18)

III-IV -80 % (96) .(>il.

Таким образом, наши наблюдения проведены на больных с тяжелой холодовой травмой, для лечения которых, необходимо изыскание новых методов и способов терапии.

Для оценки нейро-гуморального статуса больных изучено содержание в сыворотке гормонов тироксина (Т4) иммуноферментным методом и корти-зола на аппарате Мелихром-4 в лабораторном отделе диагностического центра. Кортизол определен методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с твердофазной экстракцией на картриджах „Диапак-С16",

с использованием дексаметазона в качестве внутреннего стандарта. Идентификацию после хроматографического разделения производили на УФ-детекторе при 240 ам („Jasco", Japan), а обработку результатов - с помощью компьютерной программы ChromSpec (версия 1.43 ) фирмы „Амперсапд" ( Москва).

При исследовании свертываемости крови и фибринолиза, нами использованы следующие методы.

1. Определение времени свертывания крови по Lee и White (1913).

2. Время рекальцификации плазмы (Bergenhof H.D., RokaL., 1954).

3. АЧТВ (активированное частичное тромбопластиновое время) способ M.J. Larrien, С. Weilard (1957) в модификации З.С. Баркагана (1975).

4. Протромбиновое время (Quick A.J. 1966).

5. Тромбиновое время (Сирмаи Э.,1962).

6. Фибринолиз оценивался по скорости растворения эуглобулинового сгустка по методу M.Kovvarzyk, K.Buluk (1954).

7. Гравиметрический метод определения фибриногена по P.A. Рутберг (1961).

8. Определение антитромбина-III по Mensen, Loeliger (1963) в модификации K.M. Бышевского (1973).

Исследование иммунной системы осуществлено с помощью следующих методик:

1. Количество Т-и B-лимфоцитов методом розеткообразования (Bianko Е. et al 1970; Kerman В. et al 1976).

2. Содержание иммуноглобулинов A, M, G методом ракетного электрофореза (Laurell G.,1969, Будажабон Г.Б., Будажабон Н.Г., 1982).

Цитологическое исследование:

Цитологический анализ ран проводили по методу Покровской и Макарова (1964г): раневые отпечатки брали у пострадавших с III-IV степенью поражения, начиная с 10 дня после травмы и до заживления.

Полученные экспериментальные и клинические данные обработаны методом вариационной статистики с вычислением показателя достоверности различий (Р).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

В опытах in vitro установлено, что эпиталамин в физиологической концентрации 0,002 мг/мл не вызывает изменений в показателях гемостаза при внесении в кровь больных с отморожениями. Он не влияет на время рекальцификации плазмы, АЧТВ, протромбиновое и тромбиновое время. При исследовании более высокой концентрации препарата 0,01 мг/мл отмечается незначи-

тельное удлинение тромбинового и каолин-цефалинового времени. В то же время, физиологическая концентрация эпиталамина, будучи внесенной в эуг-лобулиновую фракцию, стимулирует фибринолиз. Время лизиса эуглобулинов, при добавлении эпиталамина в дозе 1 мг/мл, сокращалось с 132,85+0,53 мин. в контроле, до 125,6+0,37 в опыте. В концентрации 0,01 мг/мл до 119,57+0,25 минут. Следовательно, высокие дозы препарата оказывают более выраженное действие на растворение фибринового сгустка.

Внесение эпиталамина в периферическую кровь больных повышает количество Т-, Т-"активных" и В-лимфоцитов, соответственно с 25,3+0,28; 17,5+0,40; 20,2+0,27 % в контроле до 26,7+0,20; 20,4+0,25; 21,9+0,22 в опыте. При использовании полипептида в концентрации 0,02 мкг/мл это действие проявлялось более интенсивно (р<0,001).

Следующей нашей задачей явилось изучение действия эпиталамина на животных с экспериментальной холодовой травмой. С этой целью все животные были разделены на 5 групп: контрольная, ложнооперированная, эпифизэктомированная, эпифизэктомированная, получавшая эпиталамин после травмы и эпифизэктомированная, получавшая эпиталамин за сутки до эксперимента и после. Последние 2 группы животных получали эпиталамин по 3 мг в сутки.

Анализируя полученные данные, было выяснено, что абсолютное большинство животных с общим охлаждением погибало в первые сутки. Особенно высока смертность у эпифизэктомированных крыс. В группе эпифизэкто-мированных, леченных с добавлением эпиталамина, смертность была ниже, по сравнению с ложнооперированной группой (р<0,05). В группах контрольной и ложнооперированной процент летальности был одинаков, но наиболее низкой смертность была у крыс, которым до охлаждения и после вводили эпиталамин. Получено прямое доказательство участия эпифиза в процессах резистентности животных к холодовой травме.

ВЫЖИВАЕМОСТЬ КРЫС ПОД ВЛИЯНИЕМ ЭПИТАЛАМИНА

контроль

эпифизэктоми-рованные

получавшие эпиталамин после травмы

получавшие эпиталамин до и после травмы

- смертность крыс

Рис. 1

Из представленных данных видно, что под воздействием эпиталамина выживаемость крыс значительно увеличивается.

Выявлено, что средний срок отторжения некроза у эпифизэктомирован-ных крыс в среднем на 5 дней больше, чем у интактных и ложнооперирован-ных (р<0,01). Средний срок отторжения у эпифизэктомированных животных, леченных эпиталамином (по сравнению с не леченными) меньше на 3 дня (р<0,05), но он в свою очередь несколько больше, по сравнению с ложпоопе-рированными (р>0,05).

Таким образом, средний срок заживления ран, при введении эпиталамина, эпифизэктомированным крысам сокращается в среднем на 6 дней (р<0,05), хотя остается более высоким, по сравнению с интактными и ложноопериро-ванными животными.

Полученные данные позволяют предположить, что эпифиз является важным органом адаптогенеза, а его полипептид способствует повышению адаптационных способностей организма в условиях стресса.

Учитывая все вышеприведенные факты, мы решили включить эпитала-мин в состав комплексной терапии у больных с холодовой травмой.

Всем больным, поступившим в стационар, проводилось лечение общепринятыми группами препаратов.

Очевидно, что холодовая травма, как интенсивное воздействие, вызывающее системные реакции организма, не может не сопровождаться существенными изменениями функциональной активности желез внутренней секреции.

Необходимо было выяснить, как изменяются функции надпочечников и щитовидной железы, несущих основную ответственность за поддержание гомеостаза и обеспечение адаптации и реактивности организма при отморожениях.

Нами проведены исследования содержания тироксина у 65 больных в разные периоды холодовой травмы. Из них 20 больных (1 группа) лечились по традиционной методике и 45 больных (2 группа) получали дополнительно по 10 мг эпиталамина в течение 10 дней, двумя курсами. Первый курс начинали с 1-2 суток после холодовой травмы, а второй с 25-27-ш дня Полученные результаты сравнивали с данными, выявленными у 10 практически здоровых людей. Установлено, что в 1-2 сутки отмечается резкое увеличение уровня тироксина в обеих группах больных - 170'нмоль/л в 1 группе и 160 нмоль/л во 2 группе, при уровне в контроле - 90 нмоль/л.

На 10-14 сутки уровень тироксина снизился в 1-ой и 2-ой группе до 140 нмоль/л и 120 нмоль/л соответственно, но оставался выше нормы.

На 25-27 день содержание Т4 в группе с традиционным лечением упало ниже нормы, до 70 нмоль/л, когда как у больных, получавших эпиталамин, практически достигло нормы.

Через 45-50 дней в 1-ой группе уровень тироксина сохранялся па низких цифрах - 72 нмоль/л, что свидетельствует о недостаточности функций щитовидной железы, а во 2-ой группе концентрация Т4 находилась в пределах

нормальных показателей - 96 нмоль/л, по сравнению с контролем (р>0,05). Таким образом, эпиталамин к 25-27 дню лечения больных с отморожениями восстанавливает функцию щитовидной железы и тироксиновую ось нейро-гуморальной регуляции.

О состоянии гипофизарно-надпочечниковой системы мы судили по динамике уровня кортизола.

Сразу после травмы, содержание кортизола увеличивалось в обеих группах больных. Перед началом лечения эпиталамином содержание кортизола было практически равным - 380 нг/л в 1 -ой группе и 385 нг/л во 2-ой группе, при уровне в контроле - 140 нг/л.

На 10-14 сутки концентрация кортизола в обеих группах оставалось повышенной (р<0,05), особенно у больных, получавших эпиталамин.

На 25-27 сутки содержание кортизола падало в группе, получавшей традиционное лечение, значительно ниже нормы (р<0,01), а у получавших эпиталамин снижалось незначительно.

На 45-50 сутки, несмотря на то, что к этому сроку стихает воспаление и большинство ран эпителизируется, концентрация кортизола в 1-ой группе сохранялось ниже нормы (р<0,05). После второго курса лечения эпиталамином уровень гормона у 2-ой группы колебался в допустимых отклонениях от средних цифр, установленных для здоровых людей.

Таким образом, эпиталамин оказывает стимулирующее влияние на выработку глюкокортикоидов, что может быть связано с воздействием на гипофиз или непосредственно на надпочечники.

Колебания в содержании кортизола зависели от локализации и тяжести поражения (таблица 3).

Таблица 3

Содержание кортизола (нг/л) в 1-2 сугки в зависимости от тяжести поражения (М+м)

Стат. Контроль Уровень распространения отморожения

пок-ли п-10 Пальцы п-32 • Кисти Стопы п-21 Предплечья Голени п-12

М+м 140+8 285+15 490+24 650+40

Р <,0,001 <0,001 <0,001

р- Достоверность различий с контролем

Холодовая травма характеризуется вторичным иммунодефицитом, а ряд препаратов, применяемых при лечении отморожений, таких как гепарин и глюкокортикоиды, оказывают иммуносупрессивный эффект. Больным с холодо-вой травмой, получавшим традиционную терапию и дополнительно эпиталамин, проводилось исследование клеточного и гуморального иммунитета. Полученные результаты показали незначительное увеличение количества лейкоцитов и Т-"активных" лимфоцитов и, одновременно, уменьшение соотношения Т-хел-перов/Т-супрессоров в первые сутки после травмы. Показатели иммунитета в этот период в обеих группах больных практически не отличались.

Отклонение в содержании иммуноглобулинов от нормы у больных первой и второй групп, в первые сутки травмы не выявлено.

Полученные данные объясняются тем, что для развития иммунного ответа на термическую травму требуется больший промежуток времени.

Таблица 4

Показатели иммунограммы на 10-14 сутки холодовой травмы (М+м)

Показатели Контроль п-15 I группа п-40 2 Группа п-50

Лейкоциты в 1 мкл 6450+80 10800+150* 9100+110***

Лимфоциты в 1 мкл 1810+52 1900+80* 2200+70* **

Лимфоциты в % 28+1,1 17+1,1* 23+1,4* **

Т-лимфоциты в 1 мкл 940+61 920+45 1210+52* **

Т-лимфоциты в % 51+1,4 48±2,0 55+0,9* **

Т-"активные" лимфоциты в 1 мкл 384+38 280+22* 605+36***

Т-"акгивные" лимфоциты в % 32+0,9 25+1,5*- 34+1,3 **

Т-хелперы в 1 мкл 790+46 410+45* 720+30 **

Т-супрессоры в 1 мкл 445+9 490+15* 440+10**

Тх/.Тс 1,8±0,1 0,8+0,15* 1,6+0,1 **

В-лимфоциты в 1 мкл 680+32 700±22 760+25* **

В-лимфоциты в % 35+1,5 37+1,8 34+1,2 **

* - Достоверность различий с контролем

** - Достоверность различий между леченными эпиталамином и не леченными

эпиталамином.

При анализе показателей иммунитета в динамике видно, что на 10-14 сутки травмы отмечается увеличение лейкоцитоза, особенно в первой группе. Обращает на себя внимание резко выраженная лимфопения - 17% в группе с традиционным лечением, в то время как во второй группе этот показатель был значительно выше (р<0,001). Сохраняется тенденция к уменьшению количества Т-"активных", Т-хелперов, но под влиянием эпиталамина во второй группе этот показатель в 1,7 раза больше, чем в первой группе. Было выявлено незначительное повышение содержания иммуноглобулина в (р>0,05) в группе с применением эпиталамина. Содержание иммуноглобулина А повышалось в обеих группах, но более высоких цифр достигало у больных, получавших дополнительно эпиталамин.

Таким образом, на 10- 14 сутки после воздействия холода наблюдается выраженный дефицит клеточного звена иммунитета. Особенно резко снижаются Т-"активные" и Т-хелперы. Повышение содержания иммуноглобулинов М, возможно, связано с появлением холодовых агглютининов и прогемагглютини-нов. Больные, получавшие в процессе лечения эпиталамин, имеют достоверно (р 1 <0,05 - 0,001) менее выраженный иммунодефицит.

Для определения продолжительности действия эпиталамина на показатели иммунитета были проведены исследования на 25-27 сутки после травмы.

В этот период увеличивается количество Т-"активных" лимфоцитов и увеличивается индекс Т-хелперов/ Т-супрессоров. Повышается содержание иммуноглобулинов в и М, с незначительным различием в первой и второй группах (р>0,05). Динамика иммуноглобулина А имеет тенденцию к нарастанию, но менее выражена в группе ранее леченных эпиталамином (р<0,05). Таким образом, на 25-27 сутки иммунодефицит сохраняется, но менее значителен, по сравнению с контрольной группой.

Второй курс лечения, проведенный на 25-27 день от начала заболевания, вызвал существенную нормализацию показателей иммунитета, которые исследовались через 13-15 дней от начала повторного применения эпиталамина (таблица 5).

Таблица 5

Показатели иммунограммы на 45-50 сутки холодовой травмы (М+м)

Показатели Контроль п -15 1 группа п-32 2 группа п-43

Лейкоциты в 1 мкл 6450+80 7200+60* 6650+70 **

Лимфоциты в 1 мкл 1810+52 1850+55* 2090+40* **

Лимфоциты в % 28+1,1 25+1,0* 30+0,08 **

Продолжение Таблицы 5

Т-лимфоциты в 1 мкл 940+61 980+45 1130+45* **

Т-лимфоциты в % 51+1,4 52+1,5 53+1,6

Т-"активные" лимфоциты в 1 мкл 384+38 470+30 620+25* ** '

Т-"активные" лимфоциты в % 32+0,9 26+0,8* 31 + !,0 **

Т-хелперы в 1 мкл 790+46 560+22* 780+30 **

Т-супрессоры в 1 мкл 445+9 480+10* 450+3 **

Тх/Тс 1,8+0,1 1,0+0,09* 1,7+0,08 **

В-лимфоциты в 1 мкл 680+32 760+25* 950+30* **

В-лнмфоциты в % 35+1,5 42+1,6 45 ±1,8*

*- достоверность различий с контролем

** — достоверность различий между леченными эпиталамином и не леченными эпиталамином.

В группе больных, после проведенного второго курса лечения эпиталамином, лейкоцитоз уменьшился и достоверно не отличался от контроля (р>0,05). В группе леченных без эпиталамина лейкоцитоз сохранялся (р<0,02), но на меньших цифрах, по сравнению с первым месяцем. Количество лимфоцитов увеличилось в обеих группах. В группе, леченных без эпиталамина, процентное соотношение лимфоцитов достоверно (р<0,05) ниже нормы. Количество Т-лимфоцигов у больных, получавших второй курс эпиталамина, достоверно выше, по сравнению с контролем и леченными без эпиталамина. Динамика количества Т-"активных" лимфоцитов представлена на графике.

Под влиянием эпиталамина увеличивается соотношение Тх/Тс и практически достигает контроля, в то время как у не леченных эпиталамином этот индекс приблизился только к единице.

Абсолютное и относительное количество В-лимфоцитов выше (р<0,05) контроля в обеих группах. Под влиянием эпиталамина это повышение достоверно (р<0,05), более значимо.

Содержание иммуноглобулинов в обеих группах остается повышенным,

Динамика Т-"активных" лимфоцитов.

— — «—■ — _ контроль

-—"■ — ■■ — ■ - леченные без эпиталамнна

________ - леченные с эпиталамином

Рис. 2.

но в группе получавших дополнительно эпиталамин количество иммуноглобулина А приближалось к норме.

Анализ результатов лечения с использованием эпиталамина показал его выраженное иммуностимулирующее действие на оба звена иммунитета.

Изучая систему иммунитета у больных с холодовой травмой, мы обратили внимание на состояние гемостаза, так как эти две системы функционально сопряжены и изменения в них являются пгпхмснетическими звеньями развития патологии. Наши исследования показали, что уже на 1-2 сутки после получения отморожения развивается выраженная гиперкоагуляция: сокращается время кровотечения, рекальцификация плазмы, АЧТВ, протромбиновое и тромбнновое время. У всех больных повышается фибриноген, снижается антитромбин 111 и угнетается фибринолиз. При сравнении изучаемых показателей обеих групп, в начале заболевания различий не наблюдается.

На 10-14 сутки после травмы у больных, получавших эпиталамин, время рекальцификации плазмы имеет тенденцию к удлинению, а АЧТВ, протромбиновое и тромбнновое время приближается к норме, что не отмечалось в контрольной группе.

У больных опытной группы значительно снизилась концентрация фибриногена, содержание антитромбина-Ш, лизис фибринового сгустка приблизился к показателям здоровых людей, отмечается уменьшение концентрации ПДФ, по сравнению с больными, не получавшими эпиталамин. Процент содержание ан-титромбина-III ниже, чем в контроле (р>0,05), и выше (р<0,001) по сравнению с группой, леченной традиционным способом.

Повторный анализ проведен после прекращения инъекций эпиталамина, через 10-15 дней,т.е. на25-27 день послетравмы. Выявлено, что во второй группе показатели, характеризующие общую коагуляционную активность крови (время свертываемости крови и рекальцификации плазмы, АЧТВ), а также протром-биновое время, характеризующее внешний путь образования протромбиназы, сохраняются на том же уровне. Между тем, появилась тенденция к сокращению тромбинового времени, повышению уровня фибриногена, снижению содержания антитромбина-III и торможению фибринолиза. В группе больных, леченных традиционным методом изучаемые показатели системы гемостаза, по сравнению с предыдущими периодами исследования не изменились.

Проведенный второй курс лечения эпиталамином нормализовал на 45-50 день показатели системы свертывания крови и фибринолиза у больных 2 группы. У больных 1 группы сохранялись явления гиперкоагуляции, сопровождающиеся гиперфибриногенемией и торможением фибринолиза.

Полученные результаты свидетельствуют в пользу применения эпиталамина у больных с холодовой травмой, так как он способствует нормализации процессов свертывания крови и фибринолиза, что в свою очередь ведет к более быстрой ликвидации патологического процесса.

Цитологические исследования раневого экссудата, характеризующие морфологические изменения в ране и неспецифическую иммунобиологическую реактивность организма проводили на 10-14 и 19-23 сутки после холодовой травмы.

На 10-14 сутки у больных, леченных эпиталамином, отмечалось уменьшение числа дегенеративных нейтрофилов, а количество фагоцитирующих нейтрофилов и полибластов слегка увеличивалось, по сравнению с пострадавшими 1-ой группы. Однако, цитограмма в обеих группах носит дегенеративно-воспалительный характер, что связано с началом отторжения некроти-зированных тканей.

При исследовании на 19-23 день, когда большая часть некротических тканей удалена, цитологическая картина в обеих группах резко изменяется: снижается количество нейтрофилов, особенно дегенеративных, приблизительно в 10 раз увеличивается число полибластов, в отпечатках появляются фиб-робласты. Цитограмма после предпринятой терапии приобрела черты регенеративной. В группе больных, леченных эпиталамином, регенеративная форма (р<0,05 -0,001) оказалась более выраженной, о чем свидетельствует увеличение числа полибластов, способных дифференцироваться в макрофаги и про-фибробласты (Кузина М.И., Костюченок Е.М., 1981). Исходя из полученных данных, можно сделать вывод, что эпиталамин способствует более успешно-

му очищению ран от некротических тканей и смене воспалительного типа цитограммы на регенеративный.

У больных, получавших эпиталамин, отмечено уменьшение отделяемого из ран, о котором мы судили по времени промокания повязок. В этой группе раньше появлялись мелкозернистые, розовые грануляции и наступала более ранняя краевая эпителизация. Значительно реже у таких больных наблюдалась парараневая экзема. Как правило, она связана с обильной экссудацией и аллергической реакцией на длительное применение антисептических растворов и мазей. Влияние эпиталамином проявляется и на конечном результате.

Сроки пребывания больных в стационаре при использовании эпитала-мина значительно сокращались, в среднем на 15 дней и составили 53+4 дня. В группе, леченной традиционным методом, - 68+5 дней.

Полученные нами результаты позволяют рекомендовать эпиталамин для лечения холодовой травмы.

ВЫВОДЫ

1. В условиях in vitro эпиталамин в физиологических концентрациях, воздействуя на кровь больных с холодовой травмой, ускоряет фибринолиз и оказывает незначительное влияние на показатели свертывания крови.

2. Эгшфизэктомия ведет к увеличению летальности крыс от холодовой травмы, угнетает процесс регенерации ран, увеличивая сроки заживления.

3. Проведенное лечение эпиталамином снижает летальность от холодовой травмы, нормализует регенеративные процессы, сокращает сроки заживления ран.

4. В результате действия низких температур возникает длительно сохраняющееся стрессовое состояние, которое отражается на всех системах организма. Стимулируется тироксиновая и гипофизарно-надпочечниковая оси нейро-гуморапьной регуляции, которые вызывают динамику кортизола и тироксина. Возникает гиперкоагуляция, тормозится фибринолиз, что ведет к развитию ДВС-синдрома. Одновременно развивается вторичный иммунодефицит, который проявляется снижением количества лимфоцитов, особенно Т-"активных", уменьшением коэффициента Тх/Тс в 2 раза.

5. Эпиталамин, обладая адаптивным действием, на фоне проводимого традиционного лечения больных с холодовой травмой, нормализует выделение стресс-гормонов, устраняет иммунодефицит и явления гиперкоагуляции. Положительное действие эпиталамина прекращается через 10-14 дней после последнего введения. Второй курс эпиталамина способствует стабилизации положительного эффекта.

6. Включение эпиталамина в состав комплексного лечения пострадавших от холодовой травмы способствует нормализации процесса регенерации ран, стимулирует их заживление и сокращает сроки лечения больных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для проведения эпифизэктомии у лабораторных животных предлагаем делать трефинационные отверстия и каудально перевязывать саггитальный синус. Данный способ позволяет избежать массивного кровотечения и гибели животных при операции.

2. Лечение холодовой травмы с применением эпиталамина наиболее полно отвечает принципам патогенетической терапии, нормализуя выделение стресс-гормонов, снижая вторичный иммунодефицит и гиперкоагуляцию.

3. По уровню стресс-гормонов, клеточному иммунодефициту, уровню антитромбина III и скорости фибринолиза, возможно прогнозировать тяжесть травмы и достаточность проводимой терапии.

4. Знания практическими врачами изменений, происходящих в эндокринной, иммунной и системе гемостаза под воздействием низких температур, помогут понять пусковой механизм обострения многих заболеваний, возникающих после переохлаждения, оценить состояние здоровья при допуске к работе, связанной с возможным охлаждением организма при ее выполнении.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Влияние эпифизэкктомии на течение холодовой травмы в эксперименте на животных.//Цитомедины: Сб. научных работ,-Чита, 1996.-С. 18. (Соавтор: Л.П. Малежик).

2. Действие эпиталамина на систему гемостаза и клеточного иммунитета у доноров и у больных с холодовой травмой. // Цитомедины: Сб. научных работ- Чита, 1996.- С.41-42. (Соавтор: Л.П. Малежик).

3. Пептиды эпифиза и тимуса в лечении холодовой травмы.// Цитомедины: Сб. научных работ - Чита, 1996. - С.52-53. (Соавтор: В.А. Сизоненко).

4. Пептиды мозгового эпифиза и тимуса в лечении термической травмы. //Сб. матер. VI съезда травматологов и ортопедов России. - Нижний Новгород. 1997,- С. 119. (Соавторы: В.А. Сизоненко; В.Л. Цепелев).

5. Влияние эпиталамина на течение холодовой травмы.// Молодежь и современный мир. - Чита. 1997.-С.52-53.

6. Влияние эпиталамина на тромбоз при холодовой травме. // Экологозависимые состояния.- Чита. 1998.- С.148-149.

7. Холодовая травма и ее особенности в Забайкалье. //Вестник международной академии наук экологии и безопасности жизнедеятельности. - Санкт-Петербург. 1998,- №8,- С.119-124. (Соавтор: В.А. Сизоненко).