Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Влияние человеческого рекомбинантного IL-1β (беталейкина) на цитохром Р450-зависимую монооксигеназную систему печени и почек

На правах рукописи

АХМАТОВ Альтаф Талипович

ВЛИЯНИЕ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО РЕКОМБИНАНТНОГО 1.-1 Р (БЕТАЛЕЙКИНА) НА ЦИТОХРОМ Р450-ЗАВИСИМУЮ МОИООКСИГЕНАЗНУЮ СИСТЕМУ ПЕЧЕНИ И ПОЧЕК (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

14 00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск - 2004

Работа выполнена в отделе клинической и экспериментальной иммунологии и иммунофармакологии Всероссийского центра глазной и пластической хирургии МЗ РФ.

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Сибиряк С.В.

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

Российский государственный медицинский университет

на заседании Диссертационного совета Д 208.117.03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Челябинская образовательная государственная медицинская академия Министерства Здравоохранения Российской Федерации» по адресу: 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Министерсства Здравоохранения Российской Федерации».

доктор медицинских наук Муфазалова H.A. доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ Теплова С.Н.

Защита диссертации состоится «

2004 года в

часов

Автореферат разослан « 43

Ученый секретарь Диссертационного Совета, доктор медицинских наук, профессор

Телешева Л.Ф.

2005-4

13053

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы

В последние годы все больше возрастает интерес к препаратам рекомбинантных цитокинов. Это обусловлено не только прогрессом в области получения и очистки препаратов индивидуальных цитокинов, но и высокой эффективностью цитокинотерапии, которая в ряде случаев является единственно возможным способом достичь реального клинического эффекта. В настоящее время применяются (или проходят клиническую апробацию) рекомбинантные IFN - а,- (3 и -у, рекомбинантные IL-1, IL -2, IL - 4, IL-10, IL -12, гематопоэтические факторы (IL-3, GM-CSF, эритропоэтин, тромбопоэтин). Цитокины применяются как средства пассивной иммунотерапии злокачественных опухолей, противовирусные средства, препараты иммунореставрирующей, иммунокорригирующей, либо иммунозаместительной терапии [Симбирцев, 2002; Rouveix, Giroud, 2000; Jonasch, Haluska, 2001]. Цитокины участвуют в сложной цепи нейро-иммунно-эндокринной регуляции и являются биологически-активными веществами с плейотропным действием на организм. Поэтому их введение, помимо основного иммунотропного фармакологического эффекта, неизбежно сопровождается побочным действием - изменением функциональной активности других систем организма - нервной, эндокринной, сердечно-сосудистой [Симбирцев, 2002; Черешнев и соавт., 2002; Turnbull, Rivier С., 1999; Jonasch, Haluska, 2001]. Большинство провоспалительных цитокинов угнетают цитохром Р450-зависимые монооксигеназы гепатоцитов - ключевой ферментной системы, участвующей в биотрансформации и детоксикации низкомолекулярных чужеродных химических соединений (ксенобиотиков), а также в биотрансформации эндогенных липофильных биорегуляторных молекул (стероидов, производных арахидоновой кислоты, ретиноидов). Это биологическое действие цитокинов является отражением их участия в сложной регуляции механизмов гомеостаза при активации иммунной системы - "иммунном стрессе" [Сибиряк, Сергеева, 1998; Сибиряк, 2003; Сибиряк и соавт., 2003; Morgan, 1997; 2001; Morgan et al., 1998]. Нарушение фармакометаболизирующей функции печени на фоне цитокинотерапии и иммуностимуляции существенно изменяет фармакокинетику и фармакодинамику совместно вводимых лекарственных препаратов [Сибиряк, Алехин, 1990; Сибиряк, Красилова, 1995; Hasler et al., 1999; Rouveix, Giroud, 2000]. Этот факт особенно важен в условиях комплексной химиотерапии рака. Не менее существенным представляется и то, что цитокины изменяют активность стероидогенных изоформ цитохрома Р450

[Herrmann et al., 2002].

Наибольшее число экспериментальных исследований и клинических наблюдений посвящено гепатотропным эффектам рекомбинантных интерферонов [Renton, Knickle, 1989; Moochhala, Lee, 1991; Craig et al., 1993; Okuno et al., 1993; Islam et al., 2002]. Убедительно аргументировано, что депрессия цитохром Р450-зависимых монооксигеназ при развитии инфекций, остром воспалении, введении бактериальных полисахаридов реализуется через провоспалительные цитокины - IL-1, TNF, IL-6. В то же время, влияние рекомбинантных цитокинов на монооксигеназную систему гепатоцитов изучено, в подавляющем большинстве работ, в системе in vitro. Исследования, оценивающие гепатотропные эффекты цитокинов при их непосредственном введении не столь многочисленны и есть сведения о неоднозначном влиянии цитокинов на разные изоформы цитохрома Р450 [Muntane-Relat et al., 1995; Barclay et al., 1999]. Практически отсутствуют исследования влияния рекомбинантных цитокинов на активность цитохром Р450-зависимых монооксигеназ в других тканях. В частности, это касается почек, вклад которых в системную биотрансформацию ксенобиотиков и эндобиотиков весьма существенен [Lohr et al., 1998]. Все изложенное выше и определило цель проводимой работы.

Цель исследования:

Оценить влияние человеческого рекомбинантного IL-ip (беталейкина, rIL-1 р) на цитохром Р450-зависимую монооксигеназную систему печени и почек в экспериментальных условиях.

Задачи исследования:

1. Изучить специфический гематопоэтический эффект беталейкина у крыс при его введении в различных дозах, определить среднеэффективную дозу препарата и его влияние на клеточный состав и пролиферативную активность спленоцитов и тимоцитов.

2. Изучить влияние беталейкина при его введении в различных дозах на гистологическую структуру печени.

3. Изучить влияние беталейкина (рекомбинантного IL-ip) на конституитивную активность цитохром Р450-зависимых монооксигеназ печени.

4. Изучить влияние беталейкина (рекомбинантного IL-ip) на конституитивную активность цитохром Р450-зависимых монооксигеназ почек.

5. Изучить влияние беталейкина (рекомбинантного IL-lp) на активность цитохром Р450-зависимых монооксигеназ печени и почек в условиях использования индукторов цитохром Р450-зависимых монооксигеназ.

Научная новизна

Впервые проведено изучение влияния отечественного препарата человеческого рекомбинантного 1Ь-1р - беталейкина на гистологическую структуру печени и цитохром Р450-зависимую монооксигеназную систему печени и почек во взаимосвязи со специфическим иммуно-гематотропным эффектом препарата в экспериментальных условиях у крыс.

Установлено, что беталейкин вызывает доза-зависимые изменения гистологической структуры печени воспалительно-дистрофического характера, не сопровождающиеся явлениями цитолиза, а в малых дозах индуцирует пролиферацию купферовских клеток и гепатоцитов.

Обнаружено, что беталейкин изменяет конституитивную активность цитохром Р450-зависимой монооксигеназной системы печени и почек. Характер влияния беталейкина на монооксигеназные активности, реализуемые изоформами цитохрома Р450 различных подсемейств (СУР1А, СУР2В, СУР2С, СУР2Е, СУРЗА) неодинаков, зависит от дозы и режима введения и характеризуется тканеспецифичностью. В зависимости от дозы и режима введения беталейкин угнетает, или не влияет на СУР1А-зависимую этоксирезоруфин-7-деэтилазную (ЭРОД) активность, (СУР1А, СУР2В, СУЗА)-зависимую бензилоксирезоруфин-7-дебензилазную (БРОД) активность, СУР2С-зависимую дибензилфлюоресцеин-дебензилазную (ДБФД) активность, СУР2Е1-зависимую р-нитрофенол-гидроксилазную (ПНФГ) активность, но при однократном введении способен вызвать индукцию СУРЗА-зависимой эритромицин-М-деметилазной (ЭРНД) активности в печени и в почках. Установлено, что трехкратное ежедневное введение беталейкина в среднеэффективной дозе нивелирует как иммунотропные эффекты препарата, так и его влияние на монооксигеназную систему.

Впервые изучена динамика изменения конституитивных активностей в печени и в почках после однократного введения беталейкина в сопоставлении с его иммунотропным и нейроэндокринным эффектом и обнаружено, что индукция СУРЗА-зависимой ЭРНД активности после введения 1Ь-1 может быть следствием усиления эмиссии глюкокортикоидов и отражает механизмы регуляции гомеостаза при иммунном стрессе.

Впервые изучено влияние беталейкина на уровень цитохрома Р450 и монооксигеназные активности на фоне индукции цитохром Р450-зависимых монооксигеназ соединениями с различным механизмом индукции -р-нафтофлавоном и пиридином. Обнаружено, что использумые соединения отличаются по спектру индуцируемых изоформ в печени и в почках. Установлено, что беталейкин при введении в среднеэффективной дозе способен снижать интенсивность индукции некоторых цитохром Р450-

зависимых монооксигеназ как на фоне Ь-нафтофлавона, так и на фоне пиридина, причем монооксигеназы печени более чувствительны к его депримирующему действию. Трехкратное введение беталейкина нивелирует его влияние на индуцируемые изоформы цитохрома Р450.

Научно-практическая значимость работы

Полученные данные способствуют расширению знаний о цитокиновой регуляции цитохром Р450-зависимых монооксигеназ и биотрансформации ксенобиотиков и метаболизирующихся цитохромом Р450 эндобиотиков, а также углубляют понимание механизмов регуляции гомеостаза при инфекции и "иммунном стрессе". Результаты работы свидетельствуют, что рекомбинантный 1Ь-1Р (беталейкин) характеризуется гепатотропным эффектом, в эффективных дозах изменяет морфо-функциональное состояние печени и фармакометаболизирующую функцию печени и почек. Это необходимо учитывать при проведении комплексной фармакотерапии, поскольку назначение различных лекарственных препаратов на фоне беталейкина может изменить их фармакокинетику и, как следствие, фармакодинамику и токсичность. Полученные сведения о влиянии беталейкина на те или иные изоформы цитохрома Р450 в печени и почках могут быть использованы для прогнозирования характера изменения биотрансформации лекарственных препаратов. Все это в комплексе позволяет оптимизировать комплексную фармакотерапию с использованием рекомбинантного 1Ь-1.

Внедрение результатов исследования

Материалы диссертационной работы внедрены в учебный процесс при чтении лекций и проведении практических занятий по фармакологии на кафедрах фармакологии Башкирского государственного медицинского университета (БГМУ), Челябинской государственной медицинской академии (ЧелГМА), разработанные автором методические подходы используются в работе отдела иммунологии и иммунофармакологии Всероссийского центра глазной и пластической хирургии МЗ РФ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Человеческий рекомбинантный 1Ь-1р (Беталейкин, г1Ь-1Р) у крыс проявляет выраженное иммуно-гематотропное действие, обеспечивая стимуляцию гранулоцитопоэза, модуляцию пролиферативной активности спленоцитов и тимоцитов и апоптоза тимоцитов, и проявляет системный нейро-эндокринный эффект, усиливая эмиссию кортикостерона. Среднеэффективная доза гематопоэтического эффекта беталейкина у крыс (ЕО50) составляет 6.5 х 105 ед./кг.

2. Беталейкин, при введении крысам вызывает доза-зависимые изменения гистологической структуры печени воспалительно-дистрофического характера

и нарушает фармакометаболизирующую функцию печени и почек, изменяя активность цитохром Р450-зависимой монооксигеназной системы, как у интактных крыс (конституитивные монооксигеназные активности), так и на фоне индукторов цитохром Р450-зависимых монооксигеназ.

3. Характер и направленность влияния беталейкина на конституитивные и индуцированные цитохром Р450-зависимые монооксигеназные активности, реализуемые различными подсемействами цитохрома Р450 (CYP1A, CYP2B, CYP2C, CYP2E и CYP3A), неоднозначны и зависят от дозы препарата, режима его введения, характера индуктора цитохром Р450-зависимых монооксигеназ и тканеспецифичны в печени и почках. Беталейкин при однократном введении способен вызвать как ингибицию, так и индукцию цитохром Р450-зависимых монооксигеназ.

Апробация работы

Основные результаты работы доложены на научных конференциях: "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге - 2003" (Спб., 2003), Ш-м съезде иммунологов Урала (Челябинск, 2003), XI Российский национальный конгресс «Человек и лекарство» (Москва, 2004); Объединенном иммунологическом Форуме (Екатеринбург, 2004).

Публикации

По материалам диссертационной работы опубликовано 7 работ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 169 страницах, иллюстрирована 26 таблицами и 26 рисунками. Она состоит из введения, обзора литературы, раздела, отражающего результаты собственных исследований и их обсуждения, выводов. Список литературы включает 370 источников (76 отечественных и 294 зарубежных).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Работа выполнена на 150 неинбредных половозрелых крысах - самцах массой 140 - 160 г. Животные содержались в пластиковых клетках в стандартных условиях вивария с 12-часовым световым циклом "день-ночь", получали стандартное питание и свободный доступ к воде. За 12 часов до умерщвления животных кормление прекращали. При работе с животными соблюдались Международные рекомендации по проведению медико-биологических исследований с использованием лабораторных животных (1989). Все болезненные манипуляции и умерщвление животных осуществляли под эфирным наркозом, по достижении животными "бокового положения".

Беталейкин (ГНЦ РФ ГосНИИ особо чистых биопрепаратов, С.-Пб.) с удельной биологической активностью 108 ед./мг белка, разводили стерильным изотоническим раствором хлорида натрия и вводили внутрибрюшинно. Объем вводимой жидкости составлял 1 мл на 100 г массы животного. Контрольные группы получали эквивалентное по объему количество физиологического раствора хлорида натрия, содержащего инактивированный нагреванием (90°С, 1 час) беталейкин.

Р-Нафтофлавон (Fluka) разводили стерильным оливковым маслом и вводили внутрибрюшинно, трехкратно, ежедневно в дозе 50 мг/кг. Контрольная группа получала оливковое масло. Пиридин (Sigma) в виде водного раствора вводили в дозе 200 мг/кг внутрибрюшинно, трехкратно, ежедневно. Контрольная группа получала эквивалентное количество воды. Беталейкин вводили однократно через 3 часа после последнего введения индуктора, и тестирование животных осуществляли через 24 часа после введения цитокина.

Анализ гемограммы и клеточного состава селезенки осуществляли цитометрически, ориентируясь на параметры прямого (FSC) и бокового (SSC) светорассеяния на проточном цитофлюориметре FACSCalibur (BD). При подготовке клеток использованы коммерческие реагенты для обработки клеток (CellLyse, CellFix, CellWash). Клеточные взвеси получали стандартным методом. Анализ клеточного цикла и апоптоза спленоцитов и тимоцитов проводили методом метахроматического окрашивания акридиновым оранжевым [Darzynkiewicz, 1994]. Относительное содержание ДНК (FL2) и РНК (FL3) оценивали на проточном цитофлюориметре FACSCalibur в рамках программного обеспечения CellQuest. В некоторых опытах апоптоз тимоцитов оценивался также традиционным методом окрашивания йодистым пропидием, с последующим определением содержание гипохромных клеток (Ml-пик).

Для оценки гистологической структуры печени использовали обзорные препараты, окрашенные гематоксилин-эозином.

Для оценки монооксигеназных активностей использовалась субмитохондриальная фракция гомогенатов печени или почек - 12000 g-фракция гомогенатов (812-фракция), которую получали методом, описанным Pelkonen et al [1974]. Микросомы печени получали методом низкоскоростного центрифугирования в присутствии ионов Са+2 [Kamath, Rubin, 1972]. Содержание белка в 812-фракции и микросомах оценивали, используя метод Брэдфорда и стандартный набор для определения белка ProteinAssay Kit (BioRad).

Содержание цитохромов в суспензии микросом определяли традиционным методом [Omura, Sato, 1964] на спектрофотометре "Specord М40".

Монооксигеназные активности определяли по скорости биотрансформации проб-субстратов, метаболизирующихся различными изоформами цитохрома Р450. Дибензилфлюоресцеин-дебензилазную (ДБФД) активность, реализуемую у крыс, в основном, изоформами подсемейства CYP2C, определяли флюорометрическим методом [Stresser et al., 2000]. Определение CYP1A1/2-специфической 7-этоксирезоруфин-О-деэтилазной (ЭРОД) активности осуществляли флюорометрическим методом [Pohl, Fouts, 1980]. Оценку CYP2E1 -специфической р-нитрофенол-гидроксилазной (ПНФГ) и CYP3A-специфической эритромицин-А^-деметилазной (ЭРНД) активностей осуществляли колориметрически, используя при анализе ПНФГ активности метод [Forkert et al., 2001], а при анализе ЭРНД активности метод [Werringloer, 1978]. 7-бензилоксирезоруфин-О-дебензилазную (БРОД) активность (CYP1A, CYP2B, CYP3A) оценивали методом [Pohl, Fouts], 1980, аминопирин-N-деметилазную (АМД) активность (CYP2B, CYP3A) и анилин-р-гидроксилазную (АНГ) активность (CYP1A, CYP2E1) оценивали методом [Pelkonen et al., 1974]. При анализе монооксигеназных активностей использовали реактивы фирмы Sigma (St.Louis, Mo), GENTEST (BD). Флюорометрические исследования проведены на флюориметре VersaFluorl.3 (BioRad), колориметрические - на планшетном фотометре MultiskanPlus (Labsystems).

Уровень кортикостерона в сыворотке оценивали флюорометрическим микрометодом [Балашов, 1990].

Содержание общего билирубина в сыворотке (мкмоль/л) определяли по методу Иендрашика-Грофа, используя стандартный набор реагентов " БИЛИРУБИН-НОВО" (Вектор-Бест, г. Новосибирск).

Активность аланинаминотрансферазы (АЛТ) в сыворотке оценивали кинетическим методом при 25°Сна анализаторе Reflotron (Roche), используя стандартные тест-полоски REFLOTRON GPT ("сухая" химия).

Содержание малонового диальдегида (МДА) определяли биохимическим методом [Стальная, Гаришвили,1977].

Статистическую обработку результатов исследования проводили стандартными методами вариационной статистики, в рамках программного обеспечения Statistica для Windows, версия 5.5. Для отвержения "нулевой" гипотезы использовались, в зависимости от характера распределения, t-критерий Стьюдента для независимых признаков или непараметрические критерии различия. Различия между группами считались статистически значимы при Р < 0.05. При Р < 0.1 различия расценивались как тенденция к увеличению или снижению значений [Трахтенберг и соавт., 1991].

Результаты исследования и их обсуждение

В первой серии экспериментов было изучено влияние беталейкина при его однократном введении в различных дозах и режимах на иммуногематологические показатели, морфо-функциональное состояние печени и конституитивные монооксигеназные активности в печени и почках крыс.

При введении в максимальной дозе (6 х 10б ед./кг) беталейкин вызывал статистически значимый лейкоцитоз (содержание лейкоцитов увеличивалось на 65.5%) и изменение структуры гемограммы, что подтверждалось как данными проточной цитометрии, так и традиционным морфологическим методом анализа мазков крови (табл.1). В отличие от контрольной группы животных, у которых количественно преобладали лимфоциты, в группе животных, получивших беталейкин, содержание гранулоцитов, включая молодые формы, значимо нарастало, а содержание лимфоцитов снижалось. При введении в дозе 6 х 10' ед./кг беталейкин вызывал отчетливую тенденцию к лейкоцитозу, однако статистически значимых различий с контролем выявлено не было. В сравнении с контрольной группой крыс, содержание гранулоцитов также нарастало, а лимфоцитов снижалось, однако, значимые отличия были выявлены лишь при морфологическом анализе мазков крови.

Таблица 1

Показатели специфической активности беталейкина при его внутрибрюшинном введении крысам в различных дозах *

№ Группа животных Лейкоциты, Г/л Показатели гемограммы (по данным проточной цитометрии) Весовой коэффициент селезенки

Грануло-циты, % Моно-нуклеары, %

1 2 3 4 5 Контроль (п = 6) Беталейкин, 6х 106ед./кг(п = 6) Беталейкин, 6 х 105ед./кг (п = 6) Беталейкин, 3x105 ед./кг (п = 6) Беталейкин, 6х 104ед./кг(п = 6) 9.0±0.5 15.012.4 Р,.2= 0.034 10.910.8 Р,.з = 0.080 10.211.2 9.411.0 36.1 12.2 57.514.7 Р,.2= 0.001 47.316.1 4.214.8 29.012.2 57.513.3 38.214.2 Р,.2= 0.002 46.318.1 1.215.0 65.011.3 2.2410.07 3.1310.26 Р1.2= 0.007 3.0110.24 Р,.3 = 0.012 2.7710.21 Рм= 0.032 2.6210.31

* - Здесь и далее результаты представлены как М ± ш

В дозах Зх 10' ед./кг и 6 х 10" ед./кг беталейкин не вызывал достоверных изменений в содержании лейкоцитов и морфологическом составе крови.

Индукция гранулоцитопоэза, в том числе и в условиях иммуносупрессии, является основным эффектом, определяющим клиническое использование беталейкина [Гершанович и соавт., 2000; Михайлова и соавт, 2003]. Вызываемый IL-1 лейкоцитоз, который сопровождается повышением фагоцитарно-метаболической активности клеток, является наиболее "древней" защитной реакцией организма, обусловленной гомологией рецептора IL-1 с трансмембранной частью То11-рецепторов фагоцитов, играющих основную роль в неспецифическом "распознавании" микроорганизмов и обеспечивающих механизмы врожденного иммунитета [Vasselou, Detuers, 2002]. Именно из этих соображений рассчет среднеэффективной дозы беталейкина был осуществлен (метод Литчфилда и Уилкоксона) по его гематотропному эффекту. Среднеэффективная доза беталейкина, с учетом удельной активности препарата, составила (6 х 105 ед./кг или ~ 6.5 мкг/кг).

Анализ гистологических изменений в печени показал, что беталейкин вызывал доза-зависимые изменения в паренхиме печени, которые можно расценивать как изменения воспалительно-дистрофического характера. При введении беталейкина в диапазоне доз от 6 х 105 ед./кг до 6 х 106 ед./кг выявлялись участки вакуольной дистрофии гепатоцитов, явления нарушения внутрипеченочной гемоциркуляции (стаз крови, диапедез эритроцитов), перивазальная инфильтрация клетками гранулоцитарного ряда (рис.1). В диапазоне доз от 3 х 10' ед./кг до 6 х 10' ед./кг наблюдалась активация пролиферации Купферовских клеток, при введении в дозе 6 х 104 ед./кг - гепатоцитов. Учитывая механизмы иммунотропного эффекта IL-1, можно предполагать, что описанные изменения связаны как с прямым влиянием IL-1 (индукция в клетках транскрипции "провоспалительных генов", синтеза хемокинов и адгезивных молекул, способствующих экстравазальной миграции фагоцитов в паренхиму печени), так и с усилением эмиссии других цитокинов, в частности TNF. Обнаруженные гистологические изменения паренхимы печени при введении беталейкина соответствуют многочисленным наблюдениям, накопленным при клиническом использовании рекомбинантных цитокинов (IL-2, IFN), а также экспериментальным исследованиям. Следует, однако, отметить, что даже при введении высокой дозы беталейкина (6 х 106 ед./кг), несмотря на выраженнные дистрофические изменения, на гистологических препаратах отсутствовали очаги гепатоцеллюлярного некроза, а морфологические изменения в печени не сопровождались увеличением активности сывороточной аланинаминотрансферазы, явлениями холестаза и активацией перекисного окисления липидов, которые часто наблюдаются при воздействии рекомбинантного IL-2, рекомбинантных интерферонов и TNF [Thal et al., 1994; Bradham et al., 1998; Jonasch, Haluska, 2001].

Рисунок 1. Периваскулярная гранулоцитарная инфильтрация при введении беталейкина в дозе 6 х 105 ед./кг. Виден участок ткани печени с нарушением балочной структуры, гепатоциты с признаками вакуольной дистрофии. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение х 125.

При введении в высокой дозе (6 х 106 ед./кг (~ 60 мкг/кг)), беталейкин однонаправлено угнетал монооксигеназные активности в печени, что сопровождалось падением суммарного уровня цитохрома Р450 в микросомах (в "беталейкиновой" группе крыс - 0.62 ± 0.02 нмоль/мг белка, в контрольной - 0.70 ± 0.02 нмоль/мг белка, Р = 0.049). В 128-фракции гомогенатов печени беталейкин ингибировал CYP1 Al/2-зависимую ЭРОД активность, и БРОД активность, в меньшей степени каталитическую активность изоформ подсемейства CYP3A (ЭРНД активность) (тенденция к угнетению) и еще меньше CYP2E1-зависимую ПНФГ активность (рис. 2). Аналогичные закономерности были выявлены и в микросомах печени, где препарат ингибировал также СУР2С-зависимую ДБФД-активность (в "беталейкиновой" группе крыс - 0.82 ±0.19 нмоль/мин/мг белка, в контрольной - 2.85 ± 1.24 нмоль/мг белка, Р = 0.043) При введении беталейкина в диапазоне доз от 6 х 105 ед./кг до 3 х 10' ед./кг инигибирующий эффект на ЭРОД активность постепенно снижается, БРОД активность не изменяется и наблюдается индукция ЭРНД активности. ДБФД активность в микросомах, хотя и в меньшей степени, оставалась сниженной (0.94+0.07 нмоль/мин/мг,Р=0.021). В минимальной дозе (6 х 104 ед./кг) беталейкин взывал тенденцию к нарастанию ЭРОД-активности, что может быть связано с увеличением пролиферативной активности гепатоцитов, поскольку есть прямая позитивная корреляция между активацией транскрипции генов изоформ подсемейства CYP1А и митотической активностью клеток [Nebert et al., 2000].

В этой дозе беталейкин практически не изменял БРОД и ЭРНД активности, но вызывал значимую депрессию CYP2E1-зависимого гидроксилирования р-нитрофенола. В почках, как и в печени, беталейкин оказывал отчетливое, депримирующее действие на каталитическую активность изоформ CYP1А1/2. БРОД активность при введении беталейкина в высокой дозе также значимо снижалась. При введении препарата в дозе 6 х 105 ед./кг, значимого снижения не было, а при дальнейшем снижении дозы вновь наблюдалась ингибиция. Такой характер изменения активности сложно объясним, поскольку БРОД активность является результирующей монооксигенирования различными изоформами. Ингибиторный эффект IL-1 в отношении конституитивных изоформ подсемейства CYP3A и изоформы CYP2E1 избирательно проявляется лишь при введении препарата в дозе 3 х 10' ед./кг; в диапазоне доз от 6 х 106 ед./кг до 6 х 105 ед./кг беталейкин не изменял ПНФГ активность и вызывал тенденцию к увеличению ЭРНД активности в почках, а в минимальной дозе не изменял этих активностей. Различную чувствительность изоформ цитохрома Р450 к ингибиторному влиянию TL-1 в культурах гепатоцитов и при введении цитокина in vivo отмечали и другие авторы [Ferrari et al.,1993;Clark et al., 1995; Sindhu et al, 1996; Calleja et al., 1997; 1998]. Неоднозначное, зависящее от дозы и тканеспецифическое влияние беталейкина на конституитивные монооксигеназы печени и почек неудивительно. Изоформы цитохрома Р450 различных подсемейств имеют неодинаковые механизмы регуляции транскрипции генов, а влияние IL-1 на экспрессирующие цитохромы Р450 клетки многогранно, и включает как прямое воздействие на транскрипционные механизмы [Сибиряк, 2003; Nikolova-Karakashian et al., 1997; Pan et al., 2003; Hakkola et al., 2003], так и воздействия, опосредованные через нейроэндокринные эффекты этого цитокина [Morgan, 2000].

Однократное введение беталейкина в дозе, равной ED50 (6.5 х 105 ед./кг) сопровождалось нейтрофильным лейкоцитозом (содержание лейкоцитов возрастало на 44%, Р=0.045), тенденцией к нарастанию массы селезенки (на 18%, Р=0.06) и изменением соотношения клеточных популяций в периферической крови и селезенке (рис.3). Цитофлюорометрический анализ клеточного цикла выявил снижение пролиферативной активности спленоцитов - содержание клеток, находящихся в Gl-фазе клеточного цикла имело отчетливую тенденцию к снижению (14.7 ± 0.8%, против 18.8 ± 2.5% в контрольной группе), а клеток, находящихся в 802М-фазах клеточного цикла значимо снижалось (0.8 ± 0.1%, против 1.3 ± 0.1% в контрольной группе (Р=0.004)); интенсивность апоптоза спленоцитов не изменялась. В тимусе, несмотря на отсутствие статистически достоверной депрессии пролиферативной активности тимоцитов, наблюдалось значимое увеличение интенсивности

1

2 3 4

Рисунок 2. Влияние беталейкина на монооксигеназные активности в 812-фракции гомогенатов печени (верхняя диаграмма) и почек (нижняя диаграмма) крыс.

По оси ординат: ферментативная активность в % от значений в контрольной группе животных (100%); По оси абсцисс: 1-беталейкин 6 х 106 ед./кг; 2- беталейкин 6 х 105 ед./кг; 3-беталейкин 3 х 105 ед./кг; 4-беталейкин 6 х 104 ед./кг.

Здесь и далее результаты представлены как М ± т, * - различия с контрольной группой статистически значимы (Р<0.05)

Здесь и далее: белые столбики - ЭРОД-активность; серые столбики - БРОД-активность; черные столбики - ПНФГ-активность; косая штриховка - ЭРНД-активность.

| Контроль

| Беталейкин Е050 х 1

| Беталейкин Е050 х 3

| Беталейкин 1/10Е050 х 3

200

ЙДИт

ЛПК ГрПК ЛфС

ЛфПК ГрС МфС

I ' ' ' '260' ' 400 ' 'ьбо' по' ' 1000 РКА ооп(агх

в*

001

гЬо *Ьо ьЬо оЬо юоо

(Ч|ЧА сотвп!

00?

2М 40С 6М МА сонат

8:

V,

■ £ ( Сй / ■¡1\/..

ТсГ

о гоо чбо ббо вбо 1000

ЯМА сот«п(

Рисунок 3. Диафамма, иилюстрирующая влияние беталейкина на клеточный состав периферической крови и селезенки (по данным проточной цитометрии) и цитофлюорограммы клеточного цикла

спленоцитов (верхний ряд) и тимоцитов (нижний ряд).

«

На диаграмме: по оси ординат - показатели в % от значений контроля; по оси абсцисс - ЛПК-лейкоциты, ЛфПК-лимфоциты ПК, ГрПК-гранулоциты ПК, ГрС-гранулоциты селезенки, ЛфС-лимфоциты селезенки, МфС-макрофаги-моноциты селезенки. Цитофлюорограммы: слева -контроль; справа - беталейкин 6.5 х 105 ед./кг, однократно.

апоптоза (1.6 ± 0.4% в "беталейкиновой" группе и 0.5 ± 0.1% в контрольной, Р=0.001). Апоптоз тимоцнтов регистрировался через 6 часов после введения беталейкина, достигал "пика" через 12 часов и возвращался к исходному уровню через 48 часов. Трехкратное ежедневное введение беталейкина нивелировало его гематотропный эффект и влияние на пролиферативную активность и апоптоз клеток в лимфоидных органах.

Наши результаты хорошо согласуются с данными, полученными при введении беталейкина мышам (от 0.1 до 100 мкг/кг), у которых наблюдалось доза-зависимое снижение клеточности тимуса и пролиферативной активности тимоцитов [Симбирцев и соавт., 1993]. Индуцируемый введением rIL-lß апоптоз тимоцитов является следствием индукции выброса глюкокортикостероидов, а прямой эффект цитокина на тимоциты носит противополжную направленность - в системе in vitro IL-1 "защищает" иммунокомпетентные клетки от "апоптогенного" действия глюкокортикоидов и обладает комитогенным действием [Симбирцев и соавт., 1993]. Нейроэндокринный эффект IL-1 хорошо известен и является одним из основных компонентов его системного действия - IL-1 активирует паравентрикулярные ядра гипоталамической области и усиливает выработку рилизинг-фактора, непосредственно стимулирует выброс АКТГ в гипофизе, усиливает активность медуллярных катехоламинергических нейронов, активирует выброс глюкокортикоидов в надпочечниках [Turnbull, Rivier, 1999]. Этот факт был подтвержден и в проведенном исследовании - уровень кортикостерона в плазме крыс после однократного введения беталейкина значительно увеличивался через 6 часов после введения препарата и затем постепенно снижался к 24 часу наблюдения. Наиболее интересным в наблюдении было то, что трехкратное, ежедневное введение беталейкина в дозе 6.5 х 10s ед./кг практически полностью нивелировало иммунотропный эффект препарата. Объснением этому факту может быть только то, что введение довольно высокой фармакологической дозы IL-1 приводит к индукции выработки антагонистического цитокина -рецепторного антагониста IL-1 (IL-lRa), блокирующего практически все гемато-и иммунотропные и нейроэндокринные эффекты IL-1 [Edwin et al., 2003; Coshen et al., 2003], включая "стероидогенный" эффект и апоптоз тимоцитов [Islam, Perska, 2003].

Характер влияния беталейкина, при его однократном введении в среднеэффективной дозе, на цитохром Р450-зависмую монооксигеназную систему был, в целом, сходен с таковым при введении в дозе 6x10' ед./кг (рис.4). Препарат вызывал отчетливую тенденцию к снижению уровня цитохрома Р450 в микросомах печени, -уровень цитохрома составил 0.64 ± 0.03 нмоль/мг против 0.70 ± 0.02 нмоль/мг в контрольной группе. CYP1 AI/2-зависимая ЭРОД

активность значимо снижалась и в печени, и в почках. Значимых изменений БРОД активности - не было. Наблюдалось существенное угнетение CYP2C-зависимого и CYP2E1-зависимого гидроксилирования в печени. В отличие от печени, беталейкин статистически значимо не изменял СУР2С-зависимого и CYP2E1 -зависимого монооксигенирования в почках. При оценке CYP3A-зависимого деметилирования эритромицина был выявлена индукция цитохромов Р450 этого подсемейства при однократном введении беталейкина в дозе 6.5 х 105 ед./кг как в печени, так и в почках. ЭРНД активность увеличивалась незначительно (на 20% в печени и на 14% в почках), но статистически значимо. Индукция этого подсемейства цитохромов Р450 была подтверждена и при использовании другого субстрата - амидопирина, окислительный метаболизм которого также осуществляется в основном изоформами этого подсемейства. Как и в случае иммунотропного эффекта, трехкратное введение беталейкина в этой дозе нивелировало его влияние на цитохром Р450-зависимые монооксигеназы. При трехкратном введении в низкой дозе препарат селективно ингибировал СУР2С-зависимое монооксигенирование в печени и гидроксилирование нитрофенола в почках.

Интересно, что динамика изменения монооксигеназных активностей в печени и почках после однократного введения беталейкина в среднеэффективной дозе для различных изоформ цитохрома Р450 была неодинакова, что закономерно отражает различные механизмы влияния цитокина на триггерные механизмы регуляции транскрипции генов изоформ. Так, максимальная депрессия ЭРОД активности в печени и почках, ДБФД активности в печени регистрировались через 24 часа, ПНФГ активности в печени - через 72 часа, а индукция CYP3 А-зависимого монооксигенирования в печени и почках прослеживалась уже через 6 часов после введения цитокина. Обнаруженный факт индукции изоформ подсемейства CYP3 А при однократном введении беталейкина весьма интересен. Разнонаправленное, зависимое от дозы влияние IL-1 (подкожное введение в дозах от 0.2 до 20 мкг/кг) на изоформы подсемейства CYP3 А у крыс с адъювантным артритом отмечено в единичных работах [Ferrari et al,l 993], - низкие дозы rIL-1 увеличивали экспрессию белка CYP3A в гепатоцитах, а высокие, напротив, снижали ее. CYP3 А подсемейство цитохрома Р450 (у крыс - изоформы CYP3 А1/ 2), основное подсемейство, осуществляющее "терминальную" биотрансформацию кортикостероидов (бР-гидроксилирование) [Quttrochi, Guzelian, 2001]. Стероиды (дексаметазон, прегненолон-а-карбоксинитрил) являются наиболее мощными индукторами этих изоформ. Таким образом, наблюдаемая индукция CYP3A свидетельствует о "включении" механизма саморегуляции - увеличение содержания кортикостероидов ускоряет их метаболизм. Это особенно наглядно прослеживалось при анализе динамики изменения конституитивных монооксигеназ в печени и почках после

150

100

50

0 200

150

100

50

0

Рисунок 4. Влияние беталейкина на монооксигеназные активности в 812-фракции гомогенатов печени (верхняя диаграмма) и почек (нижняя диаграмма) крыс.

По оси ординат: ферментативная активность в % от значений в контрольной группе животных (100%); По оси абсцисс: 1-беталейкин 6.5х105ед./кг; однократно; 2- беталейкин 6.5х105ед./кг; трехкратно 3-беталейкин 6 х 104 ед./кг; трехкратно.

Вертикальная штриховка - АМД активность; горизонтальная штриховка -ДБФД активность.

однократного введения беталейкина в среднеэффективной дозе. Судя по имеющимся литературным данным и полученным результатам, конечный эффект rIL-1 на изоформы подсемейства CYP3A при введении цитокина in vivo является результирующим нескольких механизмов: 1) прямого действия IL-1 на рецепторные структуры CYP3A и механизмы транскрипции CYP3A; 2) опосредованного через нейроэндокринный эффект и эмиссию кортикостероидов действия.

Явление индукции - нарастание содержания и ферментативной активности той или иной изоформы цитохрома Р450 в присутствии субстрата - важнейшее свойство данной ферментной системы. Это имеет глубокий биологический смысл, поскольку направлено на ускорение элиминации ксенобиотика из организма [Щербаков, Тихонов, 1994, Сибиряк и соавт., 2003; Lin, Lu, 1998; Xie, Evans., 2001]. С практической точки зрения важно, что любое химическое соединение (лекарственный препарат) может вызвать индукцию цитохрома Р450, что определяется дозой, режимом введения и скоростью биотрансформации [ Щербаков, Тихонов, 1994]. Следовательно, назначение беталейкина может изменить биотрансформацию лекарства и в условиях вызываемой последним индукции. Во второй серии экспериментов использовались соединения, различающиеся по механизму индукции цитохрома Р450, хотя и не являющихся строго селективными индукторами, поскольку их молекулы содержат сайты связывания, стерически доступные для разных изоформ цитохрома. На фоне введения Ah-рецептор-зависимого индуктора цитохрома Р450 ß-нафтофлавона (рис.5) наблюдалось закономерное увеличение уровня цитохрома Р450 в микросомах и нарастание CYP1A-зависимой ЭРОД активности в печени, БРОД и ДБФД активностей, тенденция к нарастанию СУРЗА-зависимой ЭРНД активности. ПНФГ активность не изменялась, а АНГ активность (CYP1A + CYP2E1) имела тенденцию к повышению. Наблюдавшийся спектр индуцируемых изоформ согласуется с данными других авторов [Shou et al., 1994; Runge et al., 2000]. Факт индукции БРОД активности не противоречив, поскольку в последние годы показано, что в биотрансформации 7-бензилоксирезоруфина, который ранее считали селективным СУР2В-зависимым субстратом, принимают участие также изоформы подсемейств CYP1А и CYP3 A [Shou et al., 1994]. Что касается CYP2C-зависимой ДБФД активности, то полученные данные свидетельствуют о том, что эти изоформы также индуцируются нафтофлавоном или (и) в биотрансформации дибензилфлюоресцеина у крыс принимает участие цитохром Р450 1А. В доступной литературе подобные сведения отсутствовали. Как и в печени, в почках ß-нафтофлавон вызывал мощную индукцию CYP1A, выраженную индукцию CYP2C и мощную индукцию CYP3A. Таким образом,

и в печени, и в почках изменения активностей, реализуемых этими изоформами, имели однонаправленный характер, но различались по интенсивности, что косвенно свидетельствует о разной чувствительности механизмов транскрипционной активации изоформ. Различна была и чувствительность цитохромов к беталейкину. В печени беталейкин снижал, или вызывал тенденцию к снижению активностей индуцированных изоформ, а в почках индуцированные монооксигеназные активности были более устойчивы к ингибиторному влиянию. Интересно, что и в печени, и в почках беталейкин не вызывал наблюдаемой при анализе конституитивной экспрессии индукции CYP3A и, более того, снижал ее. Этот факт подтверждает наличие прямых и опосредованных влияний беталейкина на CYP3 А цитохромы. В исследовании Sachdeva et al [2003] так же выявлено различное влияние септического воспаления и ЛПС на конституитивную и индуцированную экспрессию прегнан-Х-рецептора и белка CYP3A.

Индукция цитохромов Р450 высокой дозой пиридина (200 мг/кг) вызывала в печени мощное увеличение CYP2E1-зависимых монооксигеназных активностей, но также сопровождалась и нарастанием интенсивности CYP1 А-зависимого и СУРЗА-зависимого монооксигенирования, что согласуется с данными других авторов [Kim et al., 2003]. При этом беталейкин практически не изменял активностей индуцированных пиридином CYP1A и CYP3A, но вызывал резкое уменьшение CYP2E1 -индуцированных активностей. Неожиданным является то, что в почках пиридин вызывал почти селективную индукцию ЭРОД активности, а остальные изоформы не индуцировались при воздействии ксенобиотика. Возможно, что пиридин быстро метаболизируется в печени и наблюдаемый эффект связан с биотрансформацией его метаболита. Беталейкин угнетал индукцию ЭРОД активности и не изменял остальных активностей в почках.

Суммируя результаты этих экспериментов, можно отметить различную чувствительность конституитивных и индуцированных цитохромов Р450 печени и почек к депримирующему влиянию rIL-1 р.

Таким образом, в проведенной работе показано, что в экспериментальных условиях рекомбинантный IL-ip - беталейкин в эффективных дозах обладает выраженным влиянием на механизмы биотрансформации ксенобиотиков как в печени, так и в почках, и существенно изменяет активность цитохром Р450-зависимой монооксигеназной системы в этих органах. Гепатотропный эффект беталейкина не ограничивается изменением фармакометаболизирующей функции печени, беталейкин вызывает реактивные, доза-зависимые изменения гистологической структуры печени, которые носят воспалительно-дистрофический характер. Полученные экпериментальные

ЦхР450 ЭРОД БРОД ДБФД ПНФГ АНГ ЭРНД

Рисунок 5. Влияние рекомбинантного 1Ь-1 р (беталейкина) на уровень цитохрома Р450 и монооксигеназные активности в микросомах печени и 812 - фракции гомогенатов почек (нижняя диаграмма) крыс на фоне индукции цитохром Р450-зависимых монооксигеназ Р-нафтофлавоном (50 мг/кг).

По оси ординат: показатели в % от значений в контрольной группе животных (100%).

По оси абсцисс: Содержание цитохрома Р450 и монооксигеназные активности.

* - различия с контрольной группой статистически значимы (Р<0.05); # - различия статистически значимы в сравнении с группой животных, получавших индуктор цитохрома Р450.

пг Контроль □ Пиридин

ИД Г1иридин+г1ЫЬ

#

ll.ll!

ЭРОД БРОД ДБФД ПНФГ АНГ ЭРНД

Рисунок 6. Влияние рекомбинантного 1Ь-1 (3 (беталейкина) на уровень цитохрома Р450 и монооксигеназные активности в микросомах печени и Б12 - фракции гомогенатов почек (нижняя диаграмма) крыс на фоне индукции цитохром Р450-зависимых монооксигеназ пиридином (200 мг/кг).

По оси ординат: показатели в % от значений в контрольной группе животных (100%).

По оси абсцисс: Содержание цитохрома Р450 и монооксигеназные активности.

* - различия с контрольной группой статистически значимы (Р<0.05); # - различия статистически значимы в сравнении с группой животных, получавших индуктор цитохрома Р450.

200 100

данные правомерно экстраполировать в реальные клинические условия, поскольку большинство изоформ цитохрома Р450 у крыс и человека чрезвычайно сходны по субстратной специфичности и каталитической активности [Weaver et al., 1994; Nedelcheva , Gut, 1994; Eagling et al., 1998]. Действие беталейкина необходимо учитывать при проведении комплексной фармакотерапии. Так, характер влияния беталейкина на конституитивные активности важно принимать во внимание тогда, когда лекарственный препарат будет назначаться после цитокинотерапии, тогда как характер влияния беталейкина на индуцированные активности важен при назначении цитокинотерапии уже на фоне введения других лекарственных препаратов. И в том, и в другом случае беталейкин способен изменить фармакокинетику, а следовательно фармакодинамику совместно назначаемых лекарств. К сожалению, этот аспект побочного действия беталейкина малоизвестен практическим врачам. Важно, что изменение биотрансформации лекарств на фоне цитокинотерапии может привести и к желательной модуляции специфической активности - увеличить и пролонгировать специфическую активность препаратов без существенного изменения их токсичности. Дальнейшие исследования в этом направлении имеют не только прикладное, но и теоретическое значение, поскольку позволяют углубить понимание механизмов регуляции гомеостаза в условиях инфекционного процесса.

ВЫВОДЫ

1. Человеческий рекомбинантный IL-lp (беталейкин) у крыс проявляет гематопоэтический эффект, стимулируя гранулоцитопоэз; среднеэффективная доза беталейкина (EDJ0) составляет 6.5 х 105 ед/кг.

2. При однократном введении в среднеэффективной дозе беталейкин, наряду со стимуляцией гранулоцитопоэза изменяет пролиферативную активность спленоцитов и тимоцитов, индуцирует апоптоз тимоцитов и проявляет системное нейроэндокринное действие, индуцируя эмиссию глюкокортикостероидов. Специфический эффект беталейкина нивелируется при трехкратном ежеденевном введении препарата в среднеэффективной дозе.

3. Беталейкин при однократном введении вызывает доза-зависимые изменения гистологической структуры печени дистрофического и воспалительного характера, которые не сопровождаются явлениями гепатоцеллюлярного некроза, цитолиза и холестаза.

4. Беталейкин изменяет содержание цитохрома Р450, конституитивную и индуцированную активность цитохром Р450-зависимых монооксигеназ в печени и в почках. Влияние беталейкина на изоформы цитохрома Р450 различных подсемейств неоднозначно, характеризуется тканеспецифичностью, зависит дозы и режима введения препарата.

5. В высокой дозе (6 х 106 ед./кг) беталейкин однонаправленно ингибирует конституитивные монооксигеназные активности в печени и почках (CYP1А1/ 2-, СУР2С-зависимые активности), или значимо не изменяет их (CYP2E1- и СУРЗА-зависимые активности).

6. В диапазоне доз от 6 до 6.5 х 105 ед./кг беталейкин угнетает CYP1А-, CYP2C-, СYP2E1-зависимые конституитивные монооксигеназные активности в печени, угнетает CYP1 А-зависимое и не изменяет С YP2C-, С YP2E1 -зависимое монооксигенирование в почках, но индуцирует СУРЗА-зависимые монооксигеназные активности в печени и в почках, причем трехкратное введение беталейкина нивелирует его эффект.

7. Беталейкин при однократном введении в дозе 3x10' ед./кг мало влияет на конституитивные монооксигеназы печени, но ингибирует активности цитохром Р450-зависимых монооксигеназ в почках. При однократном введении в дозе 6 х 104 ед./кг беталейкин селективно ингибирует гидроксилирование р-нитрофенола в печени и дебензилирование бензилоксирезоруфина в почках; при трехкратном введении в низкой дозе препарат селективно ингибирует СУР2С-зависимое монооксигенирование в печени и CYP2E1-зависимое монооксигенирование в почках.

8. На фоне ß-нафтофлавона беталейкин при однократном введении в среднеэффективной дозе однонаправлено ингибирует индуцируемые CYP1A-, CYP2C- и СУРЗА-зависимые монооксигеназные активности в печени, но мало влияет на индуцированные монооксигеназы в почках. На фоне пиридина беталейкин уменьшает индукцию CYP2E1 -зависимого монооксигенирования и не изменяет индуцированного CYP1A1/2- и СУРЗА-зависимого монооксигенирования в печени, а в почках снижает индукцию CYP1A1/2-зависимого монооксигенирования. Трехкратное введение беталейкина нивелирует его влияние на индуцированные монооксигеназы печени и почек.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ахматов А.Т. Рекомбинантный ИЛ-lb (беталейкин) ингибирует цитохром Р450-зависимые монооксигеназные активности в печени / Ахматов А.Т., Сибиряк C.B., Симбирцев A.C. // Иммунология Урала. - 2003. - Т.З, № 1. - С. 4 - 5.

2. Ахматов А.Т. Влияние рекомбинантного ИЛ-lb (беталейкина) на цитохром Р450-зависимые монооксигеназы печени крыс / Ахматов А.Т., Сибиряк C.B., Симбирцев A.C. //Медицинская иммунология - 2003. -Т.5, № 3. - С. 426.

3. Ахматов А.Т. Изменение фармакометаболизирующей функции печени при введении рекомбинантных цитокинов / Ахматов А.Т., Сибиряк Д.С., Шамова E.H. // В сб.: Актуальные вопросы инфекционной патологии человека, клинической и прикладной иммунологии" (Мат. Всерос. научно-практ. конф.

молодых ученых 27 февраля 2004 г.) - Уфа, 2004. - С. 85 - 86.

4. Ахматов А.Т. Влияние рекомбинантного ИЛ-lb (rIL-lb, беталейкина) на цитохром Р450-завимые монооксигеназы печени и почек. Взаимосвязь со специфическим и нейроэндокринным эффектами / Ахматов А.Т., Сибиряк С.В., Симбирцев А.С. // Цитокины и воспаление. - 2004. - Т.З, № 1. - С. 32 - 37.

5. Ахматов А.Т. Влияние рекомбинантного ИЛ-1 b (rIL-1 b, беталейкина) на цитохром Р450-завимые монооксигеназы печени и почек у крыс / Ахматов А.Т., Сибиряк С.В., Симбирцев А.С., Ахматова Н.К. // Тез. XI Рос. Нац. Конгресса "Человек и лекарство" - М., 2004. - С. 758.

6. Sibiryak S.The effects of human recombinant IL-lb on the rat hepatic and renal cytochrome P450-mediated monooxygenase activities / Sibiryak S., Simbirtsev A., Akhmatov A. // European Journal of Inflammation -2004. - Vol.3 - P. 1727-1731.

7. Ахматов А.Т. Рекомбинантный IL-lb (беталейкин) - влияние на гистологическую структуру печени и ферменты биотрансформации ксенобиотиков в печени и почках / Ахматов А.Т., Сибиряк С.В., Симбирцев А.С., Ахматова Н.К. // Тез. докл. Объединенного иммунологического Форума. Екатеринбург, 31 мая - 4 июня 2004 года. - Russian J. Immunol. - 2004. - vol. 9, Suppl. 1 - p.51.

Отпечатано в дизайн-отделе ГУ Всероссийский центр глазной и пластической хирургии МЗ и СР РФ. Подписано к печати 20.07.2004г., 450075, г. Уфы ул. Р.Зорге 67/1 (3472) 32-99-42

Тираж 100 экз.

119395

РНБ Русский фонд

2005-4 13053

»