Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Влияние беталейкина на клиническое течение и состояние иммунной системы больных вторичных сифилисом

11

1.4.1 I1

БИВАЛЬКЕВИЧ Екатерина Вячеславовна

ВЛИЯНИЕ БЕТАЛЕЙКИНА ИА КЛИНИЧЕСКОЕ ТЕЧЕНИЕ И СОСТОЯНИЕ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ БОЛЬНЫХ ВТОРИЧНЫМ СИФИЛИСОМ

14.00.36- аллергология и иммунология 14.00.11- кожные и венерические болезни

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск - 2002

Работа выполнена в научно-исследовательском институте иммунологии и на кафедре кожных и венерических болезней Челябинской государственной медицинской академии.

Научные руководители:

заслуженный деятель наук РФ, доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор

Долгушин И.И. Ковалев Ю.Н.

О.Л.Колесников Н.В.Кунгуров

Ведущее учреждение - Московская государственная медицинская академия им. И.М. Сеченова

л?

Защита состоится >25 _2002 года в часов

На заседании Диссертационного Совета Д-208.117.03 при Челябинской государственной медицинской академии по адресу: 454092, Челябинск, ул. Воровского, 64.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Челябинской-государственной медицинской академии.

Автореферат разослан " 2002 г.

Ученый секретарь р ^ , _ -- ___

Диссертационного Совета, / ^ ^ / ^ доктор медицинских наук,

профессор 1 А.В.Зурочка

Актуальность проблемы.

Сифилис до сих пор остается одной из актуальных медико-социальных проблем. За последние несколько лет в терапии сифилиса достигнут несомненный прогресс, что привело к сокращению сроков лечения, уменьшению суммарной дозы антибиотиков. Несмотря на это, результаты клинических наблюдений за последней вспышкой сифилиса, свидетельствуют о тенденции к более разнообразным клиническим проявлениям вторичного сифилиса, отсутствии в ряде случаев желаемого результата от лечения, замедленной негативацией серологических реакций. Лечение сифилиса в ранние сроки с момента инфицирования, как правило, не представляет особых проблем. Число неудач в лечении сифилиса, частота формирования после проведенной терапии серорезистентности, возрастает с увеличением давности заболевания. Это заставляет обратить внимание на раннюю диагностику, особенности течения на современном этапе, на разработку эффективных методов лечения и контроль излеченности вторичного сифилиса со сроками заболевания более 6-ти месяцев (Аковбян В.А. и соавт., 1995; Батка-ев Э.А., 1992; Беднова В.Н. и соавт., 1990; Борисенко К.К. и соавт., 1993; Борисенко К.К., Лосева O.K., 1988; Бухарович М.Н. и соавт., 1987; Кубанова A.A. и соавт., 1995; Луис М.И., 1996; Ролфс Р.Т., 1996; Чайка H.A., Смирнова Т.С., 1994; Rath P.M. et al., 1994; Taniguchi S. et al., 1995 и др.).

Патоморфоз и результативность терапии вторичного сифилиса, во многом зависят от состояния иммунной системы больных и эффективности иммунной реакции на возбудителя (Главинская Т.А. и соавт., 1987; Данилов С.И., 1996; Захаров В.К. и соавт., 1988; Ким Э.Г., 1992; Ляхов В.Ф. и соавт., 1990; Руева X., Няголова Д., 1986; Соколовский Е.В. и соавт., 1996; Соколовский Е.В., 1995; Сперанский H.H., Захаров И.Я., 1986; Цараиди Н.Ф., 1987; Abeyewickreme I., 1989; Bishop N.H., Miller J.N., 1983; Podwinska J., 1993; Radolf J.D.,1995).

Современные иммунологические методы позволяют более глубоко изучить клеточное и гуморальное звенья иммунитета, полно-

ценность иммунного ответа на внедрение в организм бледной тре-понемы, понять механизмы возникающей при данном заболевании дисфункции механизмов защиты, оценить влияние на иммунную реактивность лекарственных препаратов, применяемых для терапии вторичного сифилиса с длительностью заболевания свыше 6-ти месяцев.

В последнее время уделяется значительное внимание цитоки-новой регуляции иммунной системы. Одним из основных медиаторов воспалительной реакции, по мнению ряда авторов, является ИЛ- 1 р, биологические функции и структура которого изучены в эксперименте (Конусова В.Г. и соавт., 1992; Нестерова И.В. и со-авт., 1993; AlheimК., Bartfai Т., 1998; Banks W.A. et al, 1993; Banks W.A et al., 1991; Dejana T. et al., 1987; Del Rey A., Besedovsky H., 1989; Del Rey A. et al., 1998; Dinarello C.A., 1993; Dinarello C.A., SavageN., 1989; Gershenwald J.E. etal., 1990; GiulianD. etal., 1986; Kabiersch A. et al., 1998; Shibata M. et al., 1996; Van der Zee E. et al., 1998; Wang H. etal., 1999).

ИЛ-1 обладает местным и системным действием, вовлекая в процесс целый комплекс механизмов, направленных на ограничение распространения возбудителя инфекции, элиминацию микроорганизма, восстановление поврежденных тканей. ИЛ-1 обеспечивает взаимосвязь между эндокринной и иммунной системами по принципу обратной связи. При системном действии ИЛ-1 активизирует нейроэндокринную систему, усиливает синтез острофазовых белков в печени, стимулирует костномозговое кроветворение, ускоряет репаративные процессы (Симбирцев С.А. и соавт, 1993; Тотолян А.А., Фрейдлин И.С., 2000; Fibbe W.E. et al., 1990; Kovacs E.J., 1991; Hubner G. Et al., 1996). Обладая плейотропным характером действия, ИЛ-1 оказывает регулирующее влияние на течение воспалительной реакции и иммунного ответа.

В России применение ИЛ-ip в клинической практике стало возможным в результате клонирования генов ИЛ-1 и созданию генно-инженерного препарата - рекомбинантного человеческого ИЛ-1Р, под названием "Беталейкин". Препарат беталейкин синтезиро-

ван ГНЦ "НИИ особо чистых биопрепаратов". Беталейкин разрешен к клиническому применению приказом Министерства Здравоохранения от 18.02.1997 г., регистрационный номер 97/51/6.

В настоящее время беталейкин начал активно применяться при различных патологических состояниях. Анализ первых наблюдений показал хорошую клинико-иммунологическую эффективность препарата (Варюшина Е.А., 1998; Карпов И.А., 2001; Карпова М.И., 2000; Мезенцева Е.А., 2001; Новиков В.В., 1997; Петропавловская

0.Ю., 1999).

Целью работы явилось изучение влияния беталейкина на клиническое течение, состояние иммунной системы и динамику серо-негативации у больных вторичным сифилисом.

В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:

1. Оценить клиническую эффективность беталейкина у больных вторичным сифилисом.

2. Исследовать показатели клеточного, гуморального иммунитета, содержание в периферической крови провоспалительных цито-кинов у больных вторичным сифилисом до и после лечения бе-талейкином.

3. Выявить влияние беталейкина на динамику серологических реакций при вторичном сифилиса.

Научная новизна.

Проведено комплексное изучение у больных вторичным сифилисом (с давностью заболевания свыше 6-ти месяцев): клинических данных, иммунологических показателей периферической крови, в частности, числа лимфоцитов, несущих различные типы CD-рецепторов, количества и функциональной активности моноцитов и нейтрофилов, уровня иммуноглобулинов, провоспалительных цитокинов, динамики серологических реакций.

У больных установлены иммунологические сдвиги в гуморальном и клеточном звеньях иммунитета. Впервые исследовано влияние беталейкина на регресс вторичных сифилидов. Проанализирована иммунологическая и серологическая эффективность изучаемого препарата. Выявлено, что после введения препарата к 11-12

суткам от начала терапии нарастает по сравнению с больными, леченными по стандартной методике, содержание СОЗ+, СБ4+, СБ25+- лимфоцитов, прослеживается тенденция к нормализации иммунорегуляторного индекса, увеличивается функциональная активность моноцитов и нейтрофилов, уменьшение концентрации ^М, в значительно более ранние сроки наблюдается негативация серологических реакций у больных, получавших дополнительно беталейкин.

Теоретическая и практическая значимость.

Комплексное клинико-иммунологическое исследование расширило представление о патогенезе вторичного сифилиса со сроками заболевания свыше 6-ти месяцев с момента инфицирования, в частности о содержании провоспалительных цитокинов в периферической крови. Доказана клиническая, иммунологическая и серологическая эффективность беталейкина при лечении больных вторичным сифилисом. Результаты исследований позволяют рекомендовать данный препарат для использования в кожно-венерологи-ческих диспансерах с целью повышения качества лечения, имму-нокоррекции, снижению сроков сероконтроля, уменьшению процента серорезистентностных форм сифилиса.

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 5 работ.

Внедрение результатов работы.

Метод лечения больных вторичным сифилисом с использованием в комплексной терапии беталейкина внедрен в работу Челябинского городского кожно-венерологического диспансера №4 (КВД №4) и областного кожно-венерологического диспансера (ОКВД). Результаты работы используются в педагогическом процессе на кафедрах микробиологии, кожных и венерических болезней в Челябинской государственной медицинской академии.

Апробация работы.

Основные результаты диссертационной работы доложены на:

1) На VIII Всероссийском съезде дерматовенерологов (г. Москва, 2001);

2) Областной конференции с международным участием, посвященной 55-летию дерматовенерологической службы Челябинской области "Новые технологии в дерматовенерологии" (г. Челябинск, 2001);

3) На заседании областного общества дерматовенерологов (г. Челябинск, 2001).

Положения, выносимые на защиту.

1. У больных вторичным сифилисом до начала лечения имеется выраженная дисфункция клеточного (Т -, В-лимфоциты, моноциты и нейтрофилы) и гуморального (иммуноглобулинов А, М, G и цитокинов ИЛ-1а, ИЛ-1 (3, ИЛ-8, ФНО - а) звеньев иммунитета, которые нарастают к 11-12 дню специфической антибактериальной терапии.

2. Лечение беталейкином больных вторичным сифилисом ускоряет регресс клинической симптоматики.

3. Беталейкин обладает выраженным иммунотропным действием, оказывая нормализующее действие на клеточное и гуморальное звенья иммунитета, повышает функциональную активность моноцитов и нейтрофилов.

4. Беталейкин сокращает сроки негативации серологических реакций и способствует предотвращению развития серорезистен-тных форм сифилиса.

Структура н объем работы.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, четырех глав собственных исследований, заключения, практических рекомендаций, списка использованной литературы. Текст изложен на 143 листах машинописного текста, работа иллюстрирована 12 таблицами и 6 рисунками. Указатель литературы содержит 247 источников, из них 88 зарубежных.

Материалы и методы исследования.

За 2000-2001 гг. венерологических отделениях МУЗКВД №4 и ОКВД проведено клиническое, иммунологическое и серологическое обследование 153 больных вторичным сифилисом. Диагноз сифилиса ставился в соответствии с международной классификацией болезней 10. Изучался вторичный сифилис давностью заболевания более 6 месяцев от момента заражения. Диагностика осуществлялась при сопоставлении данных анамнеза, осмотра больных окулистом, отоларингологом, невропатологом, терапевтом, рентгенографии грудной клетки, клинических проявлений заболевания и положительных серологических реакций. В представленной группе больных, было 92 женщины и 61 мужчина в возрасте от 17до 60 лет. Больные были разделены на 2 группы: в первую группу (сравнения) вошли 73 человека (44 женщины и 29 мужчин), леченных новокаиновой солью пенициллина по 600000 ЕД 2 раза в день внутримышечно, в течении 20 дней, согласно методическим рекомендациям №98/273 "Лечение и профилактика сифилиса" (1999). Опытную группу составили 80 больных (48 женщин и 32 мужчин), которые дополнительно к специфической терапии, получали беталейкин. В наши исследования не включались больные с сопутствующей патологией и другими заболеваниями, передающимися половым путем. В качестве контроля были использованы показатели, полученные у 50 доноров.

Проводился ежедневный контроль регресса вторичных проявлений сифилиса с момента поступления больного в стационар до его выписки.

Для иммунологических исследований брали 5 мл венозной крови с добавлением 1 мл раствора гепарина (0,9 мл изотонического раствора хлорида натрия и 0,1 мл (500 ЕД.) гепарина). В камере Горяева подсчитывали количество лейкоцитов в крови. Для получения сыворотки с целью определения концентрации иммуноглобулинов, кровь забирали из локтевой вены в чистую сухую пробирку и центрифугировали. Количественное определение содержания лимфоцитов и их субпопуляций в периферической крови производилось по методике иммунофенотипирования лимфоцитов в моди-

фикации Сибиряк C.B. с соавт. (1997) с использованием монокло-нальных антител серии ИКО (НПЦ "Медиоспектр", Москва): анти-CD3, aiiTn-CD4, анти-С08, aimi-CDlô, amri-CD22, анти-С025, airrn-CD56, анти-С095, анти-CD-DR.

Для оценки функциональной активности нейтрофилов и моноцитов использовались следующие тесты: 1 ) прижизненное исследование интенсивности люминесценции лизосом в цитоплазме фагоцитов, окрашенных акридиновым оранжевым. Подсчет лизосом в нейтрофилах и моноцитах проводили в люминесцентном микроскопе (Фрейдлин И.С. с соавт., 1984); 2) НСТ - редуцирующая способность нейтрофилов и моноцитов оценивалась в спонтанном и индуцированном тестах. На основании полученных результатов рассчитывали функциональный резерв нейтрофилов (Park B.N. et al., 1968, в модификации Маянского А.Н. и Виксмана М.Е., 1979); 3) изучение фагоцитарной активности нейтрофилов и моноцитов крови проводили на модели поглощения частиц латекса (Фрейдлин И.С. с соавт., 1976).

Концентрацию иммуноглобулинов класса A, M и G в сыворотке крови определяли по общепринятой методике (Mancini G. et al., 1965) в модификации Тихомирова А.А. (1977). Определения содержания в периферической крови провоспалительных цитокинов (ИЛ-la, ИЛ-1р, ИЛ-8, ФНО -а) проводилось методом иммунофер-ментного анализа с использованием соответствующих тест-систем, произведенных ТОО "Цитокин" (г. Санкт-Петербург) по методикам, описанным Кетлинским С.А., Калининой Н.М. (1998).

Постановка комплекса серологических реакций (КСР) (включала реакцию связывания комплемента с кардиолипиновым, тре-понемным антигенами и микрореакцию на стекле с кардиолипиновым антигеном, с разведениями); реакция иммобилизация тре-понем (РИТ), реакции иммунофлюоресценции (РИФ) (модификации РИФ-200 при разведении сыворотки крови физиологическим раствором в 200 раз, РИФ-абс (с абсорбцией) осуществлялась по общепринятым методикам (приказ МЗ РФ №87 от 26.03.2001 «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса»).

Иммунологическое обследование проводили до начала терапии и на 11 -12 сутки от начала лечения. Данные, обработанные методами вариационной статистики, выражали в виде средней арифметической и ее стандартной ошибки (М±ш). О достоверности различий показателей между группами судили по критериям Стью-дента (t), точному критерию Фишера.

Результаты и обсуждение.

Детальному клиническому, иммунологическому и серологическому контролю подвергнуто 153 больных. При анализе заболеваемости установлено, что первый пик приходился на возраст от 17 до 30 лет- 99 (64,72%) человек, второй пик наблюдался в возрасте от 41 до 50 лет- 30 (19,6%) больных.

По нашим данным в возрасте от 17 до 20 лет среди заболевших преобладали женщины. С 21 до 30 лет количество заболевших мужчин и женщин было одинаковым. В остальных возрастных группах преобладали женщины. Возможно, это можно объяснить более легкой диагностикой первых проявлений сифилиса у мужчин, и их более ранним обращением к врачу. Так как более половины (60,7%) больных вторичным сифилисом приходилось на женщин фертиль-ного возраста, это может создать предпосылки для роста заболеваемости врожденным сифилисом.

Важно отметить, что заболеваемость вторичным сифилисом высока у лиц ведущих беспорядочную половую жизнь, так как в 72,55% случаев причиной заболевания явилась случайная половая связь. Наблюдалось практически полное отсутствие у обследованных больных знаний о клинических проявлениях венерических заболеваний. Только 53 (34,64%) больных обратились к врачу с различным жалобами, в остальных 100 (65,36) случаях заболевание выявлено с помощью КСР.

Для иммунокоррегирующей терапии нами был выбран реком-бинантный препарат человеческий ИЛ-1 ß- беталейкин. Выбор данного лекарственного препарата объясняется несколькими причинами: во-первых, высокой клинико-иммунологической эффективностью при различных патологических состояниях, сопровождающих-

ся иммунодефицитными состояниями, во-вторых, не изученностью его клинической, иммунологической и серологической эффективности при вторичном сифилисе. Использование данного лекарственного препарата разрешено приказом Минздрава РФ к клиническому применению в качестве иммуностимулятора и средства для восстановления костномозгового кроветворения.

Все обследованные были разделены на две группы: опытную и группу сравнения. Опытную группу составили 80 больных вторичным сифилисом, которые наряду с базисной терапией на 7-8 сутки от начала лечения получали беталейкин в виде 3-х ежедневных внутривенных капельных инфузий, из расчета 5-7 нг/кг массы тела в 200 мл изотонического раствора №С1 или 5% раствора глюкозы, время инфузии составляло 1,5-2 часа; группу сравнения составили 73 больных, получавших базисную терапию антибиотиками. В контрольную группу вошли 50 здоровых доноров.

У некоторых больных на фоне лечения беталейкином наблюдалась лихорадка - у 75 (93,75%), появление озноба-у 15 (18,75%), головной боли - у 13 (16,25%) больных. Данные явления проходили в течение 20-30 минут после прекращения инфузии препарата. Других побочных действий и осложнений применении препарата беталейкина не отмечено.

При обследовании нами отмечено преобладание в клинической картине папулезных элементов различной локализации. Так у больных, в основном преобладали папулы гениталий, они отмечены у 45,1 % пациентов, папулы ладоней - у 41,83%, папулы подошв - у 44,44%. При этом следует отметить, что папулы данной локализации в ряде случаев были единственным проявлением заболевания. У 15% больных наблюдался специфический сифилитический ларингит, который в 100% случаев сочетался со специфической ангиной. При обследовании ангина встречалась у 34% пациентов. У четверти больных проявлениями заболевания были розеолезные высыпания и алопеция. В наименьшем числе случаев встречались широкие кондиломы (7,19%) и лейкодерма (3,27%). Следует отметить, что полиаденит встречался у 37,9%.

Таким образом, в клинической картине вторичного сифилиса преобладали папулезные элементы с преимущественной локализацией на ладонях, подошвах, гениталиях. Нами отмечено снижения случаев проявления вторичного сифилиса в виде розеолезных высыпаний, по сравнению с данными других авторов (Писклакова Т.П. и соавт., 1998; Иванов В.Д., 1998).

У больных, получавших беталейкин, регресс клинической симптоматики наблюдался на 4-8,5 дней раньше, чем при лечении по стандартной схеме. Беталейкин способствовал разрешению широких кондилом аногенитальной области раньше на 4 дня, диффузной алопеции на 4,5 дня, папул гениталий и сифилитического ларингита на 5 дней, папул туловища, катаральной ангины и очаговой алопеции на 6 дней, полиаденита на 8,5 дней (табл.1).

После внутривенного введения рекомбинантного интерлейки-на-1Р особенно заметна положительная динамика астенического синдрома: уменьшилось количество жалоб астенического характера (общая слабость, утомляемость, раздражительность, снижение аппетита), отмечалась активизация больных, появление у них стремления к выздоровлению.

Для диагностики иммунологических расстройств у обследованных нами больных было изучено состояние клеточного и гуморального звеньев иммунитета, содержание моноцитов, нейтрофилов и их функциональная активность, уровень иммуноглобулинов и про-воспалительных цитокинов в периферической крови.

При анализе полученных данных был сделан вывод, что у больных вторичным сифилисом наблюдаются сдвиги во всех изучаемых звеньях иммунитета. До начала специфической терапии у больных обеих групп наблюдался лейкоцитоз и достоверное снижение относительного количества лимфоцитов, в сравнении со здоровыми. При изучении субпопуляционного состава лимфоцитов было выявлено достоверное снижение количества СЭЗ+, С04+ лимфоцитов, иммунорегуляторного индекса (табл.2). К 11-12 суткам у больных, получающих только стандартную схему лечения, отмечен дальнейший рост лейкоцитоза, восстановление относительно-

го уровня лимфоцитов до нормы, незначительное увеличение СБ4+, достоверный рост С08+ числа лимфоцитов. Динамики СЭЗ+, С025+ и иммунорегуляторного индекса у больных данной группы не отмечено. В группе больных, леченных беталейкином, отмечено недостоверное снижение лейкоцитоза, восстановление относительного числа лимфоцитов до нормы, рост показателей СОЗ+, СБ4+, С025+ и иммунорегуляторного индекса.

При изучении числа и функциональной активности нейтрофи-лов к началу терапии наблюдалось повышение абсолютного и относительного количества, увеличение активности фагоцитоза, без

Таблица 1

Сроки регресса клинических проявлений вторичного сифилиса у больных, леченных и не леченных беталейкином.

Клинические показатели Леченные беталейкином, дни п=80; М±ш Не леченные беталейкином, дни п=73; М±ш Р

Розеолезная сыпь 6,1±0,3 6,25±0,4 р>0,05

Папулы полости рта 10,87±0,63 15,0±0,94 р<0,01

Папулы анальной обл-ти 13,5±1,3 17,6±0,72 р<0,05

Папулы гениталий 13Д8±0,64 18,43±0,77 р<0,001

Папулы ладоней 15,66±1,45 21,92±2Д7 j)<0,05

Папулы подошв 15,65±],69 23,83±1,33 р<0,01

Папулы туловища 16,0±1,0 22,22±0,7 р<0,001

Катаральная ангина 10,0±0,48 16,2±0,92 р<0,001

Папулезная ангина 12,0±1,6 18±0,88 р<0,01

Сифилитический ларингит 11,81±0,86 17,0±0,7 р<0,001

Широкие кондиломы аногенитальной области 11,25±0,73 15,4±0,7 р<0,001

Очаговая алопеция 11,42±0,37 17,83±1,49 р< 0,001

Диффузная алопеция ]6,0±0,45 20,66±0,98 JKO001

Лейкодерма 30,0±1,0 37±1,7 р<0,01

Полиаденит 14,5±0,7 23,0±0,85 | р<0,001

Примечание: р- рассчитано по отношению к результатам больных, не леченных беталейкином.

Таблица 2

Содержание лейкоцитов, лимфоцитов и их субпопуляций в периферической крови у больных

вторичным сифилисом, леченных и не леченных беталейкином.

Показатели Статистические показатели Группы обследуемых

Леченные беталейкином Не леченные беталейкином Здоровые

До лечения 11-12 сутки До лечения 11-12 сутки

Лейкоциты х 107л M±m n P 7,42±0,22 80 р<0,01 pl>0,05 6,88±0,23 80 р<0,05 рЗ>0,05 6,8±0,25 73 р<0.05 pl<0,05 7,66±0,32 73 р<0,001 5,96±0,23 50

Лимфоциты % M±m n P 28,б4±1,6 80 р<0,05 pl<0,05 34,62±1,98 80 р>0,05 рЗ>0,05 25,09±1,26 73 р<0,001 pl<0,01 31,85±2,52 73 р>0,05 33,0±1,1 50

CD3+(%) M±m n P 21,06±1,34 80 р<0,001 pl<0,001 30,22±1,33 80 р>0,05 рЗ<0,001 17,66±1,66 73 р<0,001 pl>0,05 18,26±0,84 73 р<0,001 35,8±2,61 50

CD4+(%) M±m n P 16,42±1,24 80 р<0,001 pl<0,001 26,47±1,35 80 р>0,05 рЗ<0,001 13,7±1,05 73 р<0,001 pl<0,05 16,77±1,09 73 р<0,001 28,2±1,71 50

CD8+(%) M±m n P 16,29±1,12 80 р>0,05 pl>0,05 17,04±1,4 80 р>0,05 рЗ>0,05 13,89±1,04 70 р>0,05 pl<0,05 18,85±1,33 73 р<0,05 15,4±1,1 50

CD25+(%) M±m n P 14,13±1,65 80 р>0,05 pl<0,05 19,31±1,55 80 р<0,01 рЗ>0,05 14,18±1,09 73 р>0,05 pl>0,05 16,7±1,5 73 р<0,05 11,8±1,45 50

CD4+/CD8+ M±m n P 1,19±0,15 80 р<0,0! р1<0,05 1,74±0,18 80 р>0,05 рЗ<0,01 1,09±0,04 73 р<0.001 pl>0,05 •1,01±0,03 73 р<0,001 1,73±0.09 50

Примечание. В таблицах 2-4 р- достоверность различий с показателями здоровых, р1- достоверность различий между показателям до и после лечения в обеих группах, р2- достоверность различий показателей между группами. по лечения указана, если пазличия достоверны. пЗ- достоверность различий показателей между группами

изменения интенсивности, рост НСТ - редуцирующей активности в спонтанном тесте, снижение функционального резерва й лизосо-мальной активности нейтрофилов. К середине второй недели ан-тибиотикотерапии относительное число и лизосомальная активность нейтрофилов еще сильнее снизились, динамики остальных параметров не отмечено. В группе больных, получавших дополнительно беталейкин, отмечено достоверное снижение абсолютного и относительного числа нейтрофилов, уменьшение НСТ - редуцирующей активности в спонтанном тесте, рост функционального резерва и лизосомальной активности нейтрофилов (табл.3).

Нейтрофилы являются популяцией клеток, которые активно участвуют в процессе воспаления и первыми пребывают на место повреждения тканей. По степени изменения количества и функциональной активности нейтрофилов судят о качестве протекающего воспалительного процесса и реакции организма на него (Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001; Косицкий Г.И., 1985; Хаитов P.M. и соавт., 2000).

С помощью своих медиаторов нейтрофилы могут влиять на все этапы иммунного ответа. В раннюю фазу они выполняют роль хел-перов для макрофагов, в поздние периоды, действуя на Т - и В -лимфоциты, усиливают в основном гуморальный иммунных ответ. Нейтрофилы осуществляют свои эффекторные функции путем фагоцитоза и секреторной дегрануляции (Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001).

Повышение фагоцитоза в данном случае происходит экстенсивным путем за счет увеличения числа фагоцитирующих клеток. При этом снижение функционального резерва нейтрофилов отражает уменьшение их эффективного потенциала, это говорит от том, что система работает на пределе своих возможностей (Маянский А.Н., Пикуза О.И., 1993).

Изучение параметров моноцитов до лечения показало наличие абсолютного моноцитоза, повышение активности и интенсивности фагоцитоза, снижение лизосомальной активности. К 11-12 дню терапии, у больных леченных по общепринятой схеме не наблюда-

Таблица 3

Содержание и функциональная активность фагоцитов периферической крови больных вторичным сифилисом, леченных и не леченных беталейкином.

Стати- Группы обследуемых

Показатели стиче- Леченные бетапейкином Не леченные беталейкинэм

ские До До Здоровые

пога- лечения 11-12 сутки лечения 11-12 сутки

затели

Нентроф1шы Шм1 4,38±0,24 3,74±0,22 4,3±0,3б 4,2б±0,30 3,08=Ф,14

хЮ'к п 80 80 73 73 50

Р р<0,001 рЮ,05 р<0,05 р<0,01 р1>0,05 р<0,01

Ф^нкцкон-нык №ш 1,11±0,1 1,б8=Ш,2б 1,08±0,13 1,10±0Д1 2,24*0,18

резерв нейтро- и 80 80 73 73 50

фкпов, усл.ед. Р р<0,001 рЮ,05 рр>0,05 рЗ'0,05 р<0,001р1>0,05 р*0,01

Лизосомалькая Шгп 115,1*8,4 150,б9±10,87 114,0±9,2б 85,2б±8,5 141,7±9,3

актиЕ-ть нейт- п 80 80 73 • 73 50

рофнпов,усл.ед. Р р<0,05 рЮ,05 ^0,05 рЗОДИ _р<0,05 р1<0,05

Моноциты, Юля 0,62*0,05 0,57±0,08 0,б4±0,0б 0,б4±0,07 0,42±0,04

х10*Й1 п 80 80 73 73 50

Р рс0,01 р1>0,05 р>0,05 рЗ-0,05 р<ЦН р1=0 р<0,01

Лизосомапкная №К1 70,49±7,44 102,9±Ю,21 88,бб±7,33 63,61±8,61 121,0±14,4

активность мо по- п 30 80 73 73 50

питое, усл.ед Р р0,01 р!<0,05 р>0,05 рЗ<0,05 р<0,05 р1<0,05 р=0,01

о

лось изменения абсолютного количества моноцитов, отмечено уменьшение интенсивности фагоцитоза, без изменения его активности, лизосомальная активность еще больше снижалась. К середине второй недели, в группе больных, получавших беталейкин, не наблюдалось динамики количества моноцитов и активности фагоцитоза, при этом отмечено уменьшение интенсивности фагоцитоза и рост лизосомальной активности.

Моноциты, благодаря их основной функции- фагоцитозу и синтезу широкого спектра биологически активных веществ, играют роль в защите от внутриклеточных патогенов, в развитии иммунного воспаления, в формировании иммунного ответа, повышение неспецифической резистентности. Моноциты появляются в очаге воспаления после нейтрофилов и проявляют максимальную активность в кислой среде, в которой нейтрофилы теряют свою активность. Именно моноциты, активированные микробными продуктами, начинают продуцировать провоспалительные цитокины ИЛ-1Р, ИЛ-1а, ИЛ-8, ФНО - а (Ткаченко Б.И., 1998). В этой связи, по количеству и функциональной активности моноцитов можно судить о характере протекающего воспалительного процесса.

Изучение влияния беталейкина на гуморальное звено иммунитета больных вторичным сифилисом включало определение иммуноглобулинов А, М, в и провоспалительных цитокинов ИЛ-1а, ИЛ-1Р, ИЛ-8, ФНО - а в периферической крови (табл.4).

При определении уровня иммуноглобулинов до лечения, нами отмечено повышение концентрации только ^М. К 11-12 дню терапии, у больных, получавших только базисную терапию, данный показатель оставался без динамики, но отмечен рост уровня ^А. После применения беталейкина в опытной группе уровни IgA и не менялись, тогда, как концентрация ^М снижалась, что говорит о более эффективной элиминации возбудителя из организма больных.

Определение цитокинового статуса до лечения показало значительное снижение концентрации ИЛ-1а и значительное повышение уровней ИЛ-1 (3, ИЛ-8, ФНО -а. К середине второй недели тера-

Таблица 4

Содержание иммуноглобулинов (г/л) и цитокинов (нг/мл) в периферической крови больных вторичным сифилисом, леченных и не леченных беталейкином.

Показатели Статистические показатели Группы обследуемых

Леченные беталейкином Не лечвнные бетагойкнном Здоровые

До лечения 11-12 сутки До лечения 11-12 сутки

%м Шзп п Р 4,93±0,47 80 р<0,001 pl <0,001 2,4±0,32 80 р0,01 рЗ>0,001 3,6340,48 73 _рОД)1 pl>0,05 3,62±0,29 73 р0,001 1,15±0,05 50

ИЛ-1а п Р 0,039±0,0GS 80 р<0,001 pl>0,05 0,048±0,009 80 р<0,001 рЗ>0,05 0,035±0,009 73 р0,001 pl>0,05 0,033±0,007 73 р0,001 0,098±0,003 50

ИЛ-lß М±т п . Р 0,227±0,052 80 р^0,001 pl <0,001 0,330±0,072 80 р<0,001 рЗ<0,01 0,363±0,098 73 p0,001pl<0,001 0,649±0,043 73 р<0,001 0,060^0,014 50

ИЛ 8 М±т и Р 0,056±0,00б SO р=0,001 pl<0,001 0,0 91 ±0,002 80 р<0,001 рЗ<0,001 0,038±0,001 73 р<0,05 р1<0,001 0,051±0,002 73 р<0,001 0,018±0,007 50

ФНО-а М±ю п Р 0,060^0,003 80 р<0,001 pl>0,05 0,063±0,004 80 р<0,001 рЗ<!,05 0,054±0,003 73 р<0,001 pl >0,05 0,052±0,002 73 р<0,001 0,037±0,003 50

Со

пии по стандартной методике концентрации ИЛ-1а и ФНО -а не изменялись, при этом наблюдался рост уровня ИЛ-1р и И Л-8. У больных получавших дополнительно беталейкин отмечен недостоверный рост уровня ИЛ-1а. Отмечен рост концентрации ИЛ-8, уровень ИЛ-1 р увеличивался, но менее значительно, чем в группе сравнения. Показатель ФНО - а не менялся в процессе терапии.

Уменьшенной содержание ИЛ-1 а в периферической крови больных вторичным сифилисом можно объяснить тем, что он, являясь аутокринной формой ИЛ-1, потребляется местно и его действие направлено на регуляцию локального воспаления. По-видимому, уменьшение уровня ИЛ-1 а, связано с возрастающим запросом этого цитокина, в связи с чем его поступление в кровь снижается. Повышенные до лечения уровни ИЛ-1Р и ИЛ-8 к середине второй недели продолжали расти.

В опытной группе после терапии беталейкином отмечен достоверный рост эндогенного ИЛ-1р, но менее значительное, чем в контрольной группе. По-видимому, это можно объяснить тем, что в данном случае воспалительная реакция протекает быстрее и полноценнее. Введение экзогенного ИЛ-1 [3, помогает компенсировать, возникший в организме дефицит ИЛ-1.

При оценке серологических реакций у больных вторичным сифилисом прослеживается длительная негативация КСР, в особенности специфических РИТ и РИФ, а также развитие серорезистен-тных форм заболевания (рис.1).

Негативация КСР после лечения беталейкином началась на 3 месяца раньше, чем в группе сравнения и 100% негативация наблюдалась к окончанию 15 месяца наблюдения. В то же время в группе сравнения к окончанию второго года наблюдения негативация наблюдалась у 93,15%, а у 6,85% больных выставлен диагноз серорезистентности. Средний срок негативации КСР в опытной группе составил 6,57±0,43 месяца, в контрольной группе-13,35±0,8 месяцев. РИТ стала отрицательной у больных, леченных беталейкином к окончанию 18 месяцев наблюдения, а РИФ-абс и РИФ-200- к окончанию 21 месяца. В группе сравнения к окончанию вто-

Рис. 1. Сроки негативации КСР.

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

..............—ч......................................

.........................................Г\".................................................

\ ................................................

Nr........................................................................

до до 3 мес 3-6 мес 6-9 мес 9-12 мес 12-15 лечения мес

15-18 мес

18-24 мес

- Базисная терапия

--■«--■ Леченные беталейкином

*р<0,05

poro года наблюдения РИТ стала отрицательной у 78%, РИФ-абс л РИФ-200- у 64% и 68% соответственно. Средний срок негативации РИТ в опытной группе составил 12,5±1,2 месяца, в группе сравнения- 16,0±1,47 месяцев.

Таким образом, в результате проведенных исследований дана клиническая, иммунологическая и серологическая характеристика больных вторичным сифилисом, леченных и не леченных беталейкином. Обоснована целесообразность применения цитокина у этих пациентов, отработана схема введения беталейкина, доказана его клиническая, иммунологическая и серологическая эффективность при лечении больных вторичным сифилисом.

Выводы.

1. У больных вторичным сифилисом до начала терапии развиваются выраженные нарушения в иммунной системе, которые проявляются: уменьшением числа CD3+, CD4+, CD22+ субпопуляций лимфоцитов, уменьшением иммунорегуляторного индекса, возрастанием активности фагоцитоза нейтрофилов и моноци-

тов, снижением функционального резерва и лизосомальной активности, дисиммуноглобулинемией.

2. У больных вторичным сифилисом к 11-12 дню антибиотикоте-рапии явления дисфункции иммунной системы усиливаются (возрастает лейкоцитоз, появление эозинофилии, продолжает снижаться функциональный резерв нейтрофилов, снижается лизосомальная активность моноцитов, нейтрофилов и иммуно-регуляторный индекс, нарастает количество CD8+ лимфоцитов).

3. Использование беталейкина в комплексной терапии больных вторичным сифилисом ускоряет регресс клинической симптоматики заболевания.

4. Беталейкин положительно влияет на иммунный статус больных вторичным сифилисом, что проявляется в увеличении CD3+, CD4+, CD25+- лимфоцитов и иммунорегуляторного индекса, уменьшении концентрации IgM, повышении функционального резерва нейтрофилов и лизосомальной активности нейтрофилов и моноцитов.

5. Применение беталейкина в комплексной терапии вторичного сифилиса сокращает сроки негативации серологических реакций, предотвращает развитие серорезистентных форм.

Практические рекомендации.

Беталейкин рекомендуется применять при лечении больных вторичным сифилисом. Терапию необходимо осуществлять под контролем иммунологических показателей периферической крови. Беталейкин следует вводить, начиная с 7-8 сутки от начала специфической терапии. Курс лечения состоит из 3 ежедневных внутривенных капельных инфузий в дозе 5-7 нг/кг массы тела, препарат разводят на 200 мл изотонического раствора хлорида натрия или 5% растворе глюкозы. Инфузия осуществляется медленно, в течение 1,5-2 часов. На введение препарата возможно развитие пиро-генного эффекта. Подъем температуры не превышает 37,8°С и прекращается через 20-20 минут после прекращения инфузии. Также возможен озноб и головная боль, которые также проходят самостоятельно через 20-30 минут после прекращения введения препара-

та. При выраженном ознобе следует использовать антипиретики

парацетамол перорально или анальгин 50% 2,0 мл и димедрол 0,1 °/<

1,0 мл внутримышечно.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Бивалькевич Е.В., Бивалькевич В.Г., Ковалев Ю.Н. Причинь формирования вторичного рецидивного сифилиса в г. Челябин ске // Тезисы научных работ VIII Всероссийского съезда дерма товенерологов,- М., 2001. -Ч.1.- С. 12.

2. Бивалькевич Е.В. Динамика некоторых клинических показателей больных вторичным рецидивным сифилисом в г. Челябинске // Новые технологии в дерм.: Сб. науч. тр., посвящ. 55-летик дерматовенер. службы Челяб. обл. / Под ред. Ю.Н. Ковалева. -Челябинск: Из-во ЧелГМА, 2001. - С.48.

3. Бивалькевич Е.В. Уровень иммуноглобулинов при вторично!^ рецидивном сифилисе // Новые технологии в дерм.: Сб. науч тр., посвящ. 55-летию дерматовенер. службы Челяб. обл. / По; ред. Ю.Н. Ковалева. - Челябинск: Из-во ЧелГМА, 2001. - С.49

4. Бивалькевич Е.В. Некоторые показатели клеточно-опосредован ного иммунитета у больных вторичным рецидивным сифили сом // Новые технологии в дерм.: Сб. науч. тр., посвящ. 55-ле тию дерматовенер. службы Челяб. обл. / Под ред. Ю.Н. Ковале ва. - Челябинск: Из-во ЧелГМА, 2001. - С.50-51.

5. Бивалькевич Е.В. Содержание некоторых цитокинов в перифе рической крови больных вторичным рецидивным сифилисом / Новые технологии в дерм.: Сб. науч. тр., посвящ. 55-летию дер матовенер. службы Челяб. обл. / Под ред. Ю.Н. Ковалева. - Че лябинск: Из-во ЧелГМА, 2001. - С.52-53.

БИВАЛЬКЕВИЧ Екатерина Вячеславовна

ВЛИЯНИЕ БЕТАЛЕЙКИНА НА КЛИНИЧЕСКОЕ ТЕЧЕНИЕ И СОСТОЯНИЕ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ БОЛЬНЫХ ВТОРИЧНЫМ СИФИЛИСОМ

14.00.36-аллергология и иммунология 14.00.11- кожные и венерические болезни

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск - 2002

Отпечатано в издательстве "Челябинская государственная медицинская академия". Лицензия № 01906. Подписано в печать 19.03.02г. Объем 1 п.л. Формат 64x84. Гарнитура "Times New Roman суг". Бумага для офисной техники, 80 мг/ м2. Тираж 100 экз.