Автореферат и диссертация по медицине (14.00.23) на тему:Цитогистологический анализ последствий опистоорхозной инвазии, сопровождающейся персистенцией вируса Эпштейна-Барр

Не правах рукописи

•V* С?, ^ &

О 1 СЕН 1999

Плышских Екатерина Ннколаевна

ЦИТОПКТОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПОСЛЕДСТВИЙ ОПИСГОРХОЖОЙ ИНВАЗИИ, СОПРОВОЖДАЮЩЕЙСЯ ПЕРС ИСТЕНЦИЕЙ ВИРУСА ЭПШТЕЙНА-БАРР

14.00.23 - гистология, цитология, эмбриология 14.00.10 - инфекцноимые болезни

Авторе<{>ерат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Томск - 1999

Работа выполнена в Сибирском медицинском университете, г. Томск

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Логвинов C.B. доктор медицинских наук, профессор Лепехин A.B.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Суходоло И.В. доктор медицинских наук, профессор Белов Г.Ф.

Ведущая организация: Новосибирский медицинский институт

Защита состоится « tâ été _1999 г._ч. на заседании

диссертационного совета К 084.28.01 при Сибирском медицинском университете по адресу: 634050, г.Томск, Московский тракт, 2

С диссертацией можно ознакомиться в научно-медицинской библиотеке Сибирского медицинского университета (634050, г. Томск, пр. Ленина, 107).

А втореферат разослан « »___1999 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат медицинских наук, доцент

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Описторхоз - заболевание, вызываемое трематодой Opistorchis felineus, в ряде областей России приобрело значение краевой патологии. Показано, что описторхозная инвазия вызывает значительные изменения в гепатобилиарной системе и предрасполагает к развитию хронического панкреатита, гастрита, язвы желудка и двенадцатиперстной кишки, пилородуодекита (Озерецковская H.H. с соапт., 1971, 1972; Белобородова Э.И. с соапт., 1996), а также способствует развитию рака поджелудочной железы, большого дуоденального соска и печени (Белозеров Е.С., 1981; Лепехин A.B. с соавт., 1992). Кроме того, установлено, что описторхозная инвазия сопровождается значительным увеличением числа клеток с цитогенетическими нарушениями (Ильинских H.H. с соавт., 1981, 1984; Бычков В.Г.. 1992; Кудрявцев Д.П. 1992; Степанова Т.Ф., 1998). Поскольку описторхис не может непосредственно воздействовать на генетический аппарат клеток организма, возникает обоснованное предположение, что цитогенетические поражения, наблюдаемые при опис-торхозион инвазии, обусловлены опосредованными механизмами. Известно, что способностью индуцировать цитогенетические нарушения за счет непосредственных механизмов обладают вирусы. Имеются литературные данные, согласно которым описторхис может находиться в ассоциации с вирусом простого герпеса (Иванских В.И.-, Близнюк В.В., 1996). В связи с этим, обращают на себя* внимание результаты исследований • представленные В.Д. Подоплекиным (1939, 19913) и СЛО.Ильиным (1995), свидетельствующие о том,.что у жителей населенных пунктов в бассеинах рек Обь, Иртыш и Томь, где пораженность местного населения достигает- 86,5% (Генецинская Т.А., 1978), наблюдается усиление циркуляции потенциально онкогенного вируса Эпштейна-Барр (ЭБ), также относящегося к семейству герпесвирусов. Поэтому нельзя исключить, что.вирус ЭБ, возможно, играет определенную роль в патогенезе описторхозной инвазии. Результаты исследований в этом направлении, по-видимому, могут позволить внести некоторые коррективы в существующие представления о патогенезе опис-торхоза.

Цель и задачи исследования. Цель работы - изучить роль вируса ЭБ в цитогйсгологических и цитогенетических изменениях прн хроническом описгорхозе.

Для реализации этой цели был» поставлены следующие задачи;

I. Исследовать роль вируса ЭБ в цитогенетических последствиях при описторхозиой инвазии у человека и экспериментальных животных.

2. Изучить цитогенетичесхие последствия сочетанного воздействия вируса ЭБ и антигенов описторхисов в условиях культуры лимфоцитов человека, стимулированной к делению фитогемагглютшшном.

3. Изучить miro- и гистологические изменения печени людей, больных хроническим описторхозом и инвазироваиных маритами с инкорпорированным вирусом ЭБ, а также в печени экспериментально инвазироваиных животных, которых одновременно заражали вирусом ЭБ.

4. Изучить особенности Эпштейн-Барр внрусспецифнческого иммунного ответа у больных хроническим описторхозом.

Научная новизна работы. Впервые установлено, что у больных хроническим описторхозом наблюдается достоверное повышение уровня антител к антигенам вируса ЭБ по сравнению со здоровыми людьми. Особенно высокие титры антител к капсидному антигену вируса ЭБ отмечены у больных с суперинвазнонной формой описторхоза, с продолжительностью инвазии более 10 лет, а также с хроническими тонзиллитами и фарингитами. При этом у больных описторхозом с высокими титрами G-антител к капсидному антигену Вируса ЭБ с помощью метода непрямой реакции иммунофлюоресценции антигены вируса ЭБ были обнаружены в ядрах эпителиальных клеток ротоглотки. Кроме того, в вышеназванной группе больных выявлены наиболее значительные кариопатологические и цитогенетические изменения в эпителиоцитах ротоглотки и лимфоцитах периферической крови. Аналогичные нарушения были отмечены в культурах лимфоцитов, полученных от здоровых людей после заражения вирусом ЭБ и введения антигенов описторхисов. Специфическая иммунофлюоресценция капсидного антигена вируса ЭБ выявлена также в яйцах Opisthorchis felineus у людей с массивной интенсивностью инвазии. Морфологическое исследование печени людей больных описторхозом, инвазироваиных маритами с инкорпорированными антигенами вируса ЭБ, свидетельствуез о наличии характерного для этого заболевания холангита, морфологически проявляющегося в виде аденоматозного разрастания эпителия слизистой оболочки внутрипеченочных желчных протоков, десквамации эпителиальных клетох в местах контакта гельминта с их стенкой, а также воспалительной реакции и признаков склероза соединительной ткани по ходу желчных протоков.

Теоретическое и практическое значение. Полученные в настоящем исследовании данные о механизмах возникновения цитогенетических нарушений при описторхозиой инвазии вносят новые сведения в существующие

представления о патогенезе описторхоза и могут служить основанием для разработки новых, патогенетически обоснованных подходов к терапии данного заболевания. Роль вируса ЭБ в описторхозной инвазии должна учитываться специалистами при определении тактики лечения больных описторхозом, поскольку показана связь между уровнем антител к антигенам вируса ЭБ и кпнническим вариантом течения хронического описторхоза. Определение уровня антител к антигенам вируса ЭБ вместе с цитогене-тическими исследованиями (хромосомный анализ, микроядерный тест, исследование патологии митоза и ядра) у больных описторхозом могут использоваться в качестве дополнительных диагностических тестов для прогнозирования риска развития неопластической трансформации.

Внедрение результатов работы в практику. Результаты исследования используются в обучении студентов и клинических ордннаторов по разделу "Гельминтозы" на кафедре инфекционных болезней и эпидемиологии Сибирского медицинского университета.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. У больных хроническим описторхозом с высокими титрами антител к антигенам вируса Эпштейна-Барр повышено количество Т-лимфоцитов с цитогеиетичесхими нарушениями в периферической крови.

2. Хромосомные нарушения у больных описторхозом с высокими титрами антител к капсидному антигену вируса Эпштейна-Барр преимущественно локализуются в определенных зонах хромосом 2,3, б, 8, 14, и 22.

3. В условиях культуры лимфоцитов здоровых доноров введение вируса Эпштейна-Барр вместе с антигенами, описторхисов вызывает значительные кариопатологнческие и цитогенетические измекеиия клеток.

4. С помощью непрямой реакции иммунофлюоресценции выявлено специфическое свечение ка'псидиого:.антигена вируса Эпштейна-Барр в эпителиальных клетках ротоглотки у людей, имеющих высокие титры антител к этому вирусу, а также и яйцах Ор^ШогСМэ &1шеи$.

5. Морфологическое нсследование печени людей больных описторхозом, инвазированных маритами с инкорпорировани'ыми антигенами вируса ЭБ, свидетельствует о наличии характерного для 'этого заболевания холангита, морфологически проявляющегося в виде аденоматозного разрастания эпителия слизистой оболочки внутрипеченочных желчных протоков, десква-мации эпителиальных клеток в местах контакта гельминта с их стенкой, а также воспалительной реакции и признаков склероза соединительной тхани по ходу желчных протоков.

6. Наиболее высокий уровень антител к антигенам вируса Эпштейиа-Барр обнаружен у больных суперинвазионной формой хронического опи-сторхоза.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы докладывались на: 2-ой международной научно-практической конференции "Безопасность жизнедеятельности в Сибири и на крайнем Севере", Тюмень 1997; 13-ой российской научной конференции "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях", Челябинск, 1997 ; Всероссийской научно-практической конференции "Экологоэавйсимые заболевания (биохимия, фармакология, клиника)", Чита, 1997; Юбилейной конференции "Медико-биологические аспекты нейро-гуморальной регуляции", посвященной 35-летию ЦНИЛ, Томск, 1997; 2-ой республиканской научно-практической конференции, посвященной 75-летию инфекционной службы Удмуртии, Ижевск, 1998; Конференции, посвященной 50-летию кафедры детских инфекций СГМУ, Томск, 1998; 6-ой научно-практической конференции "Актуальные вопросы гастроэнтерологии и особенности заболеваний органов пищеварения в Сибирском регионе", Томск, 1998; Mutation Detection'97, The 4th International workshop, Bmo, Czech Republic, 1997; The Society of Environmental Toxicology and Chemistry (SETAC), 18th Annual Meeting, San Francisco, CA, 1997; The International Symposium on Environmental Epidemiology in Central and Eastern Europe: Critical Issues for Improving Health, Smolenice, Slovak Republic, 1997; Conference on Genetic aspects of autoimmune diseases, Noordwijkerhout, The Netherlands, 1998; The ISth Annual Meeting of the European Association for Cancer Research (EACR), Stockholm, Sweden, 1998; The 10th NCI-EORTC Symposium on New Drugs in Cancer Therapy, Amsterdam, 1998.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 19 работ.

Структура работы. Диссертация состоит из введения, четырёх глав, списка литературы из 236 наименований, из которых на- иностранных языках - 125, а также включает в себя 41 рисунок и 20 таблиц.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Обследован 61 больной хроническим описторхозом, имеющих средний возраст 37,7±3,6 лет, из них мужчин - 28, женщин - 33. В качестве контроля обследовали 63-х здоровых людей, имеющих сопоставимый с основной группой возраст и пол. У 43-х больных был диагностирован неотягощен-

ный хронический описторхоз, а у 18 больных - суперинвазионный хронический описторхоэ.

Для изучения цитогенетических и морфологических изменений при экспериментальном описторхозе у морских свинок использовалось три опытных группы по 20 животных в каждой и 20 контрольных животных. Первая опытная группа включала животных, экспериментально инвазированных О. felineus, вторая группа - зараженных вирусом ЭБ, а третья группа состояла из животных одновременно зараженных описторхисами и вирусом ЭБ. Описторхоз у морских свинок был воспроизведен посредством введения в глотку 30 метацеркариев О. felineus. Заражение животных вирусом ЭБ проводили одновременно с введением метацеркариев О. felineus путем внутри-брюшинной инъекции 2 мл (по 25 тыс. внруспродуцирующих клеток в 1 мл) суспензионной вируспродуцирующей линии PjHR-l, полученной из лаборатории онковирусологии НИИ онкологин ТНЦ СО РАМН. Через I месяц у морских свинок брали мазки крови и мазки-отпечатки печени для микроядерного анализа, а также кусочки печени для гистологического исследования.

Для эксперимента в условиях in vitro использовались культуры Т-лимфоцитов периферической крови, стимулированные к делению фитоге-магглютинином (ФГА), которые получали от б здоровых людей, серонега-тивных к вирусу ЭБ. Половину приготовленных для культивирования образцов предварительно заражали вирусом ЭБ путем введения в культуру Т-лимфоцитов суспензионной вируспродуцирующей линии PjHR-1 (25 тыс. клеток на I мл культуры). Через 24 часа после начала культивирования в питательную среду вводили антигены марит описторхисов, извлеченных из печени трупов людей, умерших от острого нарушения мозгового кровообращения. В эксперименте использовалось два антигена из марит описторхисов: соматический и яичный, полученные по методу изложенному в работе А.Т. Котелкина с соавт. (1997). В антигенах определяли содержание белка по методу И.О. Lowry et al. (1951) (0,5 мг/мл) и вносили в зараженные и неза'раженные вирусом ЭБ культуры лейкоцитов по 0,1 мл антигена на 2 мл культуральной среды (2,5»10-8 кг белка/мл). Через 72 часа после начала культивирования проводилось цитогенетическое и цитологическое изучение клеток культуры.

Гистологические методы использовали при изучении печени интакт-ных и экспериментально инвазированных морских свинок и 10 умерших от острого нарушения мозгового кровообращения людей с диагностированным хроническим описторхозом, инвазированных маритами с инкорпорированным вирусом ЭБ. В качестве контроля использовался материал, по-

лученный от 10 умерших людей без признаков опиоторхоза на вскрытии. Вскрытие во всех случаях проводилось не позднее, чей через 12 часов после смерти. Кусочки левой и правой долей печени от животных и людей фиксировали в жидкости Карнуа. Депарафинированные срезы окрашивали гематоксилином н эозином. Гликоген и нейтральные гликопротеины в гепа-тоцнтах выявляли с помощью ШИК-реакции по Мак-Манусу. Для ультрамикроскопического анализа изменении в клетках печени животных материал фиксировали в 2% глютаральдегиде, забуфереьном на 0,2 М какоди-латном буфере (pH 7,2). Затем постфиксировали в 2% растворе четырехо-киси осмия, дегидратировали в спиртах возрастающей крепости и заливали в эпон. Ультратонкие срезы контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца и изучали в электронном микроскопе JEM-I00CX (Япония).

Определяли число эритроцитов с микроядрами в периферической крови людей и экспериментальных животных согласно W. Schmid (1975). Кроме того, у 58 больных и 63 здоровых людей проводился кариопатоло-гический анализ в эпителиоцитах задней стенки глотки. Мазки окрашивали азурИ-эозином. Подсчёт числа эритроцитов с микроядрами производили в 10000 клеток, числа клеток с кариопатологиеи - в 100 клетках.

Рутинный хромосомный анализ у 58 больных и 63 здоровых людей проводили согласно Р. Moorhead et al. (1960). Препараты окрашивали азурН-эозином. У каждого человека или варианта опыта в условиях in vitro анализировали не менее 100 метафаз. Дифференциальное окрашивания хромосом проводили у 25 больных хроническим описторхозом и у 52 здоровых доноров. Использовали технику G-бэндов согласно М. Seabright (1971).

В качестве тест-системы для выявления титров антител к антигенам вируса ЭБ использовали фиксированные препараты суспензионной клеточной вируспродуцирующей линии - РзНК-1. Уровни антител к антигенам вируса ЭБ определяли в непрямой реакции иммунофлюоресценции по модифицированному методу W. Heule и G. Henle (1979). Для определения содержания хапсидного антигена вируса ЭБ в маритах О. felineus и клетках эпителия задней стенки глотки у 20 больных описторхозом людей, а также в маритах описторхисов использовалась непрямая реакция иммунофлюоресценции. Для этого полученный материал фиксировали охлажденным ацетоном. В качестве специфической сыворотки применяли несколько вы-сокотитражных сывороток к капсидному антигену ЭБ. Дальнейшая методика не отличалась от метода, использованного для определения вирусспе-цифнческих антител. Для контроля на специфичность свечения использовали негативную тест-сыворотку, позитивную тест-сыворотку (только для

определения антител) и античеловеческий иммуноглобулин, меченный флюоресцеинизотиоционатом.

Определение уровня альфа-фетопротеина (АФП) проводили с использованием иммуиофсрментного теста фирмы "HofTman La Roche" согласно методическим рекомендациям Всесоюзного онкологического научного центра РАМН (1989).

Содержание малонового днальдегида определяли согласно методу Ю.А. Владимирова и А.И. Арчакова (1972), диеновые конъюгаты определяли по В.Б. Гаврилову и М.И, Мишкорудной (1983). Определение активности ка-талазы в сыворотке крови проводилось по методу М.А. Королюк и Л.И. Ивановой (1988). Антиокислительную активность липидов изучали согласно методу А.П. Левицкого и Л.М. Шафран (1983).

Все результаты исследования обрабатывали статистически с использованием t критерия Стыодента, %г и корреляционного анализа с использованием коэффициента корреляции рангов Спирмена, при этом руководствовались описгнием статистических методов, изложенных в пособиях В.Е. Монцевичюте-Эрингене (1964), Е.В. Гублера, A.A. Генкина (1973) и Г.Ф. Лакина (1980). Среднегеометрический титр антител к антигенам вируса Эпштейна-Барр определялся согласно И.П. Ашмарину и A.A. Воробьеву (1962).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Клинико-лабораторная характеристика больных хроническим опистор-

хозом. серопозитивкых к вирусу Эпштейна-Барр Полученные данные свидетельствуют, что все обследованные больные описторхозом имели антитела класса G к вирускапсидному антигену (BKA) вируса ЭБ в титре от 1:20 до 1:1280. Высокие титры антител (1:320 и более) не наблюдались у здоровых людей (контроль), в то время как, среди больных хроническим описторхозом они встречались у 41%. Из них у больных с явлениями холепатии выявляемость высоких титров G-антител к BKA не превышала 8,3%, у больных с гастродуоденопатическим вариантом - 16%. В то же время, у больных с панкреатопатией этот показатель составил 67%, а у больных с отягощенным течением (суперинвазией) достигал 89%.

Выявляемость А-антител к BKA и G-антител к комплексу ранних антигенов ЭБ у многих больных описторхозом также значительно возрастала (соответственно 34 и 57% при 3%-в. контроле), что вместе с повышением .титров G-антител к ВКА могло свидетельствовать о реактивации ЭБ-инфекции. Среднегеометрический титр G-антител к ВКА вируса ЭБ, у людей больных хроническим описторхозом (2,212±0,059, данные приводятся в

десятичных логарифмах) был достоверно выше, чем в контрольной груп-пе( 1,581 ±0,066; Р<0,001).

Среднегеометрические титры А-аитител к BKA вируса ЭБ (0,412±0,074), а также тнтры G-антител к комплексу ранних антигенов вируса ЭБ (0,650±0,082) у больных хроническим описторхозом были достоверно выше, чем в контрольной группе (соответственно 0,032±0,009 и 0,033+0,009; Р<0,001). Установлено, что выяаляемость высоких титров (1:320 и более) у больных с продолжительностью инвазии до 10 лет не превышала 30%, а у люден с продолжительностью инвазии более 10 лет составила 59%. Кроме того, среднегеометрический титр G-антител к BKA вируса ЭБ у больных с продолжительностью инвазии более 10 лет (2,412±0,099) был наибольшим и достоверно отличался не только от контроля (1,581±0,066; Р<0,001), но и от больных с продолжительностью инвазии до 10 лет (2,064±0,095; Р<0,05). В группе больных, у которых был выявлен хронический фарингит и тонзиллит, среднегеометрический титр антител к BKA вируса ЭБ был достоверно выше (2,292±0,080;Р<0,01), чем у больных без признаков воспаления со стороны миндалин и слизистой задней стенки глотки (2,028±0,084).

При изучении средних уровнен АФП у больных хроническим описторхозом в зависимости от титра G-антител к BKA вируса ЭБ достоверные отличия от контрольной группы (1,8±0,3; Р<0,001) были выявлены только у больных с высокими титрами антител (2,6±0,57). Кроме того, уровень этого показателя в группе больных с высокими титрами антител был достоверно выше, чем в группе больных с низкими титрами (1,б±0,28;Р<0,05).

В общем анализе крови у больных хроническим неотягощенным описторхозом, имеющих высокие титры антител к BKA вируса ЭБ, отмечалось достоверное снижение содержания эритроцитов (3,9±0,1 у мужчин и 3,8±0,07»10"/л у женщин) по сравнению с группой больных с низкими титрами (соответственно 4,5±0,03 и 4,0±0,05«10'Ул; Р<0,01), а также по сравнению с контролем (соответственно 4,8±0,1 и 4,3±0,08»101г/л; Р<0,01). У больных с суперинвазней (с высокими титрами антител к BKA вируса ЭБ) наблюдалась эозинофилия (29,914,8%) и нейтропения (33,б±2,4%) в периферической крови;

Уровень антиоксидантной активности липндов (АОА) по а-токоферолу был достоверно снижен у больных хроническим описторхозом с высокими титрами антител к BKA вируса ЭБ (10,0±0,5 мкэкв/мин*мл) по сравнению с группой больных, имеющих низкие титры (12,0±0,2 мкэкв/мин*мл; Р<0,01), а также с серопозитивным и серонегатнвным контролями (соответственно 15,2±0,1 и 15.6±0,2 мкэкв/мин»мл; Р<0,01). Аналогичные изменения наблюдались в отношении каталазы. У больных хроническим описторхозом.

имеющих высокие титры антител, уровень этого показателя составил 16,1±0,5 мкат/л при 22,1+0,25 в серопозитивном и 22,0±0,6 мкат/л в сероне-гативном контролях (Р<0,01). Наиболее выражено ЛОА и кагалаза были снижены у больных с суперинвазией (соответственно 9,3+0,2 мкзкв/мин*мл и 14,6+0,4 мкит/л). Уровень малонового диальдегида достоверно повышался у больных хроническим описторхозом с высокими титрами антител (6,1±0,3) и у больных с суперкнваэиеи (7,1±0,2 мкмоль/л) по сравнению с серопозитивным (3,0±0,04; Р<0,01) и серонегативным (2,0+0,4 мкмоль/л; Р<0,01) контролями. Однако достоверных отличий между группами больных хроническим описторхозом с высокими и низкими титрами антител отмечено не было. Уровень диеновых конъюгатов был также достоверно повышен у всех групп больных описторхозом по сравнению с контролем •(Р<0,01). Кроме того, группа больных хроническим описторхозом, имеющая высокие титры антагел к вирусу ЭБ {2,Я±0,07 мкмоль/л) по этому показателю, достоверно отличалась от больных с низкими титрами (2,0±0,04 мкмоль/л; Р<0,01).

Морфологическое исследование печени при описторхозной инвазии у человека В гомогенатах описторхисов, полученных при патологоанатомнческих вскрытиях 10 людей больных описторхозом нами было проведено имму-нофлюоресцентное определение капсидного антигена вируса ЭБ в теле ма-рит гельминтов. Во всех случаях при люминесцентной микроскопии выявлено свечение яиц описторхисов(из них у 5 человек выявлено яркая флюоресценция на три - четыре креста), что свидетельствует о присутствии в описто-хисах, локализованных« желчных протоках человека, капсидного антигена вируса ЭБ.

Гистологическое исследование ткани печени свидетельствуют, что в местах локализации паразитов стенка желчных протоков полностью или на большей части поверхности лишена эпителия. Лишь на небольших участках протоков выявляются фрагменты однослойного цилиндрического эпителия, клетки которого характеризуются некробиотическими изменениями в виде гиперхромии, деформации ядра, нарушения тинктормальиых свойств цитоплазмы. По ходу желчных протоков отмечается пролиферация к склероз соединительной ткани. В стенке части крупных и средних протоков имеют место аденоматозные разрастания эпителия.

Часть гепатоцитов в печеночных дольках, особенно вблизи крупных внутрипеченочных желчных протоков, в просвете которых находятся опи-сторхисы, подвержена дистрофическим изменениям. Содержание гликогена в печеночных клетках при постановке ШИК - реакции во всех случаях

резко снижена. По ходу портальных трактов выявляются клеточные инфильтраты, преимущественно состоящие из лимфоцитов."

Кариоморфологический анализ эпителиоцитов ротоглотки у больных

описторхозом. серопозитивных к вирусу Эпштейна-Барр У 12 больных хроническим описторхозом ( из 20 обследованных) выявлена положительная реакция нмм; яофлюоресценции в виде специфического свечения в ядрах эпителиоцитов задней стенки глотки. Установлено, что все люди, у которых была выявлена внрусспецифическая флюоресценция в клетках имели хронический тонзиллит или фарингит и высокие титры G-антител к BKA вируса ЭБ (1:320 и выше).

Данные кариопатологического анализа свидетельствуют, что у больных хроническим описторхозом, имеющих титры G-антител к BKA вируса ЭБ 1:80 и более наблюдается, достоверное повышение числа эпителиоцитов ротоглотки с карнопатологнческнми изменениями (до 61,6+1,6% у людей с высокими титрами) по сравнению с серопозитивным (до 14,2+0,9%) и сероиегативным.контролями (11,3±1,4%; Р<0,01). Среди различных карио-патологий у людей с высокими титрами антител преобладают двухядер-ные клетки (до 14,1±1,0%, при 1,6±0,4% в серонегативном и 1,8+0,7% серо-позитивном контролях; Р<0,01), а также клетки с лонастовидными выростами ядра (до 12,0±0,9% при 1,3±0,5% в контроле; Р<0,01). До 4,3+0,3% эпителиоцитов были многоядерными (при 1,3±0,5% в серонегативном и 1,8+0,8% в серопознтивном контролях; Р<0,01). Кроме того, наблюдалось достоверное (Р<0,01) повышение клеток с кариорекснсом (8,3±0,5%), ка-риопикнозом (9,1 ±0,7%), кариолизисом (7,2+0,7%), а также с микроядрами (8,3±0,7%).

Хромосомный и микроядерный анализ клеток крови больных описторхозом, серопозитнвных к вирусу Эпштейна-Барр У больных хроническим описторхозом среди лимфоцитов со структурными аберрациями хромосом преобладали клетки с хроматидными одиночными разрывами хромосом (3,9+0,46%), а среди лимфоцитов с измененным числом хромосом превалировали клетки с гнпоплоидным (5,0±0,23%) и полиплоидным (1,8'Г>±0,23%) хромосомным набором. Кроме того, корреляционный анализ позволил выявить Достоверную прямопропорциональ-ную зависимость между количеством Т-лимфоцитов с цитогенетическими нарушениями и среднегеометрическим титром G-антител к BKA вируса ЭБ (г=0.Х5; Р<0,01).

Сравнение количества лимфоцитов с нарушениями в структуре и числе хромосом у больных описторхозом с титрами антител к BKA вируса ЭБ в пределах 1:80-1:160 и у здоровых доноров свидетельствует о наличии дос-

товерных различий (8,0+0,3%, при 3,б±0,7% в серопозитивном контроле; Р<0.01). При этом достоверное возрастание числа цитогенетнчески измененных клеток наблюдается, в основном, за счет гипоплоидных клеток (соответственно у больных - 5,2+0,2, а в контроле - 1,5±0,5%; Р<0,00|). Аналогичные, но еще более выраженные, изменения наблюдаются у больных с высокими титрами G-антител к BKA вируса ЭБ: средний уровень лимфоцитов с цнтогенетическнми нарушениями в целом составляет 20,0+1,6%. Среди клеток с изменениями структуры хромосом (11,8+0,9%) преобладают лимфоциты с хроматидными разрывами (6,9+0,5%). Среди лимфоцитов с изменениями числа хромосом (10,3+0,8%) наиболее часто встречаются клетки с гипоплоидией (5,3+1,1%), вместе с тем отмечается достоверное повышение количества клеток с полиплоидиым (3,2+1,1%) и гиперплондным (1,7±0,5%) наборами хромосом. Кроме того, у больных людей с высокими титрами антител наблюдается достоверное повышение числа лимфоцитов с микроядрамн (1,8+0, !"/«> при 0,2±0,1°/оо в серонегати-вном и 0,4±0,2%о контролях; Р<0,01).

Локализация структурных нарушений по отдельным хромосомам ка-риотипаТ-лимфоцитов в периферической крови у больных хроническим описторхозом. серопозитнвных к вирусу Эпштейна-Барр Наиболее близкие величины распределения структурных нарушений по отдельным хромосомам кариотипа Т-лимфоцитов относительно ожидаемого уровня (Фогель Ф., Мотульски А., 1989) наблюдались у здоровых доноров (контроль). Установлено, что повышенная ломкость хромосом наблюдается только у людей, имеющих высокие титры G-антител к BKA вируса ЭБ (г=+0,89; Р<0,01). При этом 32 разрыва хромосом пришлось на хромосому 2 (наблюдалось - 13,9; ожидалось- 8,02%; Р<0,05), хромосому 3 (наблюдалось - 12,7 ожидалось - 6,8%; Р<0,05), хромосому 6 (наблюдалось - 10,5; ожидалось - 5,9%; Р<0,01), хромосому 8 (наблюдалось - 11,0; ожидалось - 4,9%; Р<0,01), хромосому 14 (наблюдалось - 7,0; ожидалось - 3,6%; Р<0,01) и хромосому 22 (наблюдалось - 9,1; ожидалось - 3,6%; Р<0,05). У больных с суперинвазионной формой описторхоза, имеющих титр антител к BKA вируса ЭБ 1:64Q - 1:1280, - 25 разрывов пришлись на хромосому 8, 53 разрыва на хромосомы 2 и 14 н 11 разрывов на хромосому 22. При этом 16,3% всех структурных нарушений реализовались в виде транслокаций с 8 хромосомы на хромосомы 2, 14 н 22. Практически во всех случаях отмечен недостаток разрывов и мелких хромосомах генома (за исключением хромосомы 22).

Цигогенетнческие изменения в культурах Т-лимфоцитов здоровых доноров после заражения вирусом Эпштейна-Барр и введения аитигенов описторхисов

При введении в культуры Т-лимфоцитов соматического антигена О. ГеПпеиэ увеличивалось число клеток с гипоплоидным и гиперплоидным ка-риотипом соответственно 2,7±0,4 и 0,7±0.2% при 1,3+0,4 и 0,2+0,1% в контроле (в обоих случаях Р<0,05) без достоверного повышения клеток со структурными нарушениями хромосом. В то асе время антигены, полученные из яиц О. ГеИпеиБ, вызывали повышение числа клеток с изменением структуры и числа хромосом. При этом возрастает число клеток с разрывами (3,8±0,5) и обменами хромосом (2,8±0,6% при 0,8+0,3 и 0,2+0,1% соответственно в интакшом контроле; ¥<0,01), а также клеток с полиплоидией (2,3+0,4 при 0,2+0,1% п контроле; Р<0,01).

Введение в культуру только вируса ЭБ индуцировало достоверное увеличение клеток со структурными нарушениями хромосом (7,8±0,5, при 1,0+0,3% в контроле; Р<0,01), а также клеток с полиплоидным хромосомным набором (2,3±0,5%; Р<0,01). Заражение культуры лимфоцитов вирусом ЭБ с последующим введением соматического антигена О. Гейпеиз не изменяет настоящей картины. Однако, наряду с этим, отмечено достоверное повышение числа клеток с гипоплоидным (2,8+0,4%) и гиперплоидным (1,2+0,3%) кариотипом (соответственно Р<0,05 и Р<0,01). Наиболее существенные нарушения в структуре и числе хромосом Т-лимфоцитов крови отмечается после введения в культуру вируса ЭБ и антигенов яиц описторхисов (37,2±3,1%, при 2,7±0,4% в интактном контроле; Р<0,01). Среди структурных нарушений особенно часто наблюдались клетки с хроматид-ными аберрациями и обменами хромосом (соответственно 16,7±1,3% и 8,3+0,7%; Р<0,01), одновременно регистрировались клетки с гипо-(7,3±1,1%), гиперплоидным (3,7±0,9%) и полиплоидным (4,2±0,5%) хромосомными наборами (Р<0,01).

После введения в культуру только антигена из яиц описторхисов среди патологий митоза превалировали клетки с отставанием хромосом в ана- и телофазе (6,3±0,4% при 1,8±0,3% в контроле; Р<0,01), многогрупповыми метафаэамн (3,0±0,2% при 1,5±0,4% в контроле; Р<0,01), а также колхици-ноподобные метафазы (4,5±0,4% при 2,5±0,5% в контроле; Р<0,01).

В культурах, зараженных только вирусом Эпштейна-Барр, число клеток с кариопатологией достигало более 17,7±0,7%, при этом в контроле таких клеток было не более 8,3±0,7%. Появлялись клетки с кариорексисом, кари-опикнозом и кариолизисом (10,5±0.8% при 1,5+0,3% в контроле; Р<0,01),

двухадерные клетки (10,3±1,3% при 2,010,4% в контроле; Р<0,01), а также клетки с лопастными ядрами (2,5±0,3% при 1,2±0,1% в контроле; Р<0,01). Введение в зараженную вирусом ЭБ культуру антигенов яиц марит описто-рхисов индуцировало, наряду с вышеупомянутыми кариопатологиями, появление таких патологий деления клетки как анафазы и телофазы с мостами (4,5±0,5%) и отставшими хромосомами (6,5±0,5%, соответственно при 0,3±0,2 и 1,8±0,3% в контроле; Р<0,01). Кроме того, наблюдалось достоверное увеличение числа многополюсных митозов (3,3±0,2% при 2,2±0,3% в контроле; Р<0,()1) и клеток с микроядрами (3,2+0,5% при 0,7±0,2 в контроле; Р<0,01).

Морфологическое исследование печени морских свинок при экспериментальной нивазни Ор1511югс1т ГеПпеш При гистологическом исследовании печени морских свинок через 1 месяц после заражения одновременно метацеркариямн О. Гейпеия и вирусом ЭБ или только О. ГеИпеш существенных отличий не выявлено. Отмечена выраженная пролиферативная реакция клеток стромы и разрастание кол-лагеновых волокон по ходу портальных трактов, десквамация эпителия внутрипеченочных желчных протоков. В печеночных дольках наблюдаются дистрофические изменения, а также единичные мелкие фокусы некроза. В подавляющем большинстве печеночных клеток содержание гликогена снижено. Ультраструктурные изменения гепатоцитов и клеток Купфера характеризуются разрушением внутренней мембраны митохондрий, расширением и фрагментацией цистерн эвдоплазматической сети.

Изучение числа микроядер в эритроцитах и гепаточитах морских свинок. экспериментально зараженных Ор&Н1огсЫ8 ГеПпеш и вирусом Эпштейна-Барр

Подсчёт числа эритроцитов и гепатоцитов с микроядрами у морских свинок, инвазированных метацеркариямн описторхисов (а также в группе морских свинок, зараженных О. ГеПпеш н вирусом ЭБ), выявил достоверное увеличение их содержания (соответственно 0,55±0,1"/ов и 0,7±0,1%, при 0,25±0,08°/оо и 0,4±0,1% в контроле; Р<0,01). В группе животных, зараженных только вирусом ЭБ, достоверного увеличения числа указанных клеток с цитогенетическими нарушениями по сравнению с контролем не наблюдалось. Вирус ЭБ не усугублял гисто- и цитопатологию в печени, что вполне объяснимо, поскольку морские свинки обладают видовым иммунитетом и являются резистентными к этому вирусу.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ Полученные данные свидетельствуют, что у больных хроническим опи-сторхозом наблюдается персистеицня, а у многих больных и реактивация

ЭБ-инфекшш. Известно, что реактивация вируса ЭБ может происходить под влиянием разнообразных как эндогенных, так и экзогенных факторов и обнаружена при многих заболеваниях - лимфоме Беркигта, назофаринге-альнои карциноме, алейкемнческой форме болезни Ходжкина, саркоидозе (Arrand J.R., 1992).

Кроме того, в литературе имеются данные, что активация вируса ЭБ наблюдается на фоне таких паразитарных заболеваний как малярия и шн-стозомоз (Burkitt D., 1970; Araujo I, et al., 1996). Оба агента являются слабыми мутагенами и также, как и описторхис, способны вызвать подавление системы клеточного и гуморального иммунитета, что способствует беспрепятственному размножению вируса в организме человека.

Согласно полученным нами данным, антиген из яиц описторхисов обладает выраженной способностью индуцировать цитогенггические нарушения в культурах Т-лимфоцитов, полученных от здорового донора. Микроскопическое исследование иммунофлюоресценции антигенов вируса ЭБ позволяет предположить наличие антигена вируса ЭБ в яйцах описторхисов. Показано, что антигены яиц шистозом и олисторхид способны вызвать стимуляцию размножения вируса ЭБ в человеческих лимфобластомных культурах клеток (Ishii A. et al., I9S9). Не исключено, что здесь имеет место эволюционное приобретение, своеобразный симбиоз двух паразитических агентов - гельминта и вируса.

Полученные данные свидетельствуют, что при высоких титрах G-аитител к капсидному антигену вируса ЭБ у больных описторхозом резко увеличивается число клеток с обменами хромосом. Известно, что при большинстве заболеваний, вызванных вирусом ЭБ, например при лимфоме Беркитта, назофарингеальной карциноме и инфекционном мононуклеозе отмечается перемещение фрагмента, в основном, 8 хромосомы на другие хромосомы кариотипа (Klein G. et al., 1991). Согласно полученным нами данным, наблюдается четко выраженная фрагментация концевого участка длинного плеча хромосомы 8 и транслокация этого участка на 14, 2 и 22 хромосомы.

Полученные в настоящей работе данные свидетельствуют, что цитологические и цитогенетические изменения наблюдаются как в эпителиальных клетках задней стенки глотки, так и в культуре Т-лимфоцитов, зараженных вирусом ЭБ, Известно, что при первичном инфицировании происходит репликация вируса ЭБ в эпителиальных клетках ротоглотки, а затем в В-лимфоцитах (Pagano I.S., 1984; Rickinson А., 1984). Репродукция вируса ЭБ может происходить и в Т-лимфоцитах (Stevenson M. et al., 1986).

Сам механизм мутагенного сочетанного действия гельминта и вируса не вполне ясен. Данные настоящей работы показывают, что у больных суперинвазионной формой описторхоза, у подавляющего большинства которых отмечались высокие титры G-антител к BKA вируса ЭБ, в периферической крови наблюдается эозинофилия. Имеются данные, свидетельствующие о том, что эозинофилы могут генерировать активные формы кислорода, способные вызывать повреждение гельминтов и их личинки (Саргоп М., Саргоп А., 1987), а таюке ядерные структуры клеток организма (АуэрбахШ., 1978).

В настоящей работе было"установлено, что у больных опнсторхозом, имеющих высокие титры антител к капснду вируса ЭБ, наблюдается усиление лроцессоп перекисного окисления липндов с параллельным снижением активности антиоксидантной системы, в частности - фермента каталазы, обладающего антимутагенным действием (Agabeiü R.A., Melikova N.K.., 1982). Т. Takeuchi и К.. Morimoto (1993) было показано, что заражение культур клеток лимфоцитов периферической крови вирусом ЭБ ведет к существенному уменьшению концентрации антиокислительных энзимов, в том числе, и каталазы и сопровождается активацией респираторных энзимов митохондрий, продуцирующих перекисные соединения (Kapp А. et al„ 1987; Bourgeron Т. et al„ 1992). Ультраструктурные исследования, проведенные в настоящей работе, свидетельствуют о существенных изменениях в архитектонике крист внутренней мембраны митохондрий гепатоцитов при описторхозной инвазии, что может быть связано с активацией перекисного окисления липндов (ПОЛ). По-видимому, перекисные соединения на фоне сниженном активности антиокислительных ферментов способны резко активизировать свое мутагенное действие, чем, возможно, и объясняется повышение количества цитогенетически измененных клеток у больных опнсторхозом, имеющих высокие титры антител к BICA вируса ЭБ. По-видимому. с активизацией ПОЛ может быть также связано и снижение содержания гликогена в клетках печени, наблюдаемое нами у больных хронической формой описторхоза (Маянский ДМ. с соавт., 1992). Кроме того, вследствие ишемии, наблюдаемой при воспалении, происходит мобилизация анаэробного гликолиза и истощение запаса гликогена и гепатоцн-тах (Струков А.П. с соавт., 1990).

Полученные нами данные свидетельствуют о том, что введение вируса ЭБ и антигенов марит описторхисов, по-видимому, способно вызвать сим-пластообразование с формированием двух- и многоядерных клеток. Не исключено, что некоторая часть двухядерных клеток представляет результат задержки цитотомии в процессе деления клеток. Об этом же, по-видимому,

свидетельствует то, что ядра в двухядерных клетках имеют сходные размеры и структуру. Известно, что одним из избирательных мест продукции вируса ЭБ являются гигантские многоядерные клетки (Парнес В.А., 1986).

Обращает на себя внимание специфичность поражения определенных хромосом кариотипа у больных описторхозом. Особенно повышена "ломкость" хромосомы 3 в области онкогена raf-1 у тех доноров, которые имеют высокие титры G-антител к вирусу ЭБ. У больных описторхозом также часто нарушается структура хромосомы 6 в области онкогена myb. Такого рода нарушения описаны при карциномах яичников, злокачественной меланоме и остром нелимфоцитарном лейкозе (Сьяксте Т.Г., Эренп-рейс Я.Г., 1987; Sandberget al„ 1984). Кроме того, показано, что нарушения в этой хромосоме характереиы для трансформации лимфоидных клеток, вызванных вирусом ЭБ .

При описторхозной инвазии п сочетании с персистенцией вируса ЭБ наблюдается также поражение хромосомы 2 и 8 вблизи локусов генов N-myc и с-тус. Известно, что экспрессия с-тус гена достаточна для индукции апоптоза при условиях, ограничивающих рост (Klein G., 1991). Следует отметить, что сверхэкспрессия гена с-тус связана с рекомбинацией и амплификацией и вызывает генетическую нестабильность (Green D.R., Cotter T.G., 1992), что зачастую сопровождается фрагментацией и перестройками хромосом.

У больных описторхозом на фоне высоких титров антител к капсидно-му антигену вируса ЭБ наблюдается снижение числа эритроцитов. При этом происходит увеличение количества эритроцитов с микроядрами. Имеется мнение, что эритроциты с микроядрами способны устраняться при участии иммунной системы организма (Ильинских H.H. ссоавт., 1984). Существуют данные свидетельствующие, что при реактивации ЭБ-инфекции наблюдается снижение числа эритроцитов и уровня гемоглобина в крови, что объясняется исследователями появлением под влиянием вирусной инфекции антител к эритробластам и эритроцитам крови (Miles D.K. et al., 1996). Другая группа ученых объясняет дефицит эритроцитов при инфекциях, вызванных вирусом ЭБ, возникновением мутаций затрагивающих мембрану эритроцитов, что приводит к их разрушению и гемолизу (Muroi К. et al., 1994; Le Couedic J.P. et al., 1996). Эксперименты проведенные группой японских ученых свидетельствуют, что многократное заражение золотистых хомяков метацеркариями описторхисов, хотя и увеличивает пролиферативную активность эпителия желчных протоков, однако, не вызывает раковой трансформации ткани. Авторы считают, что для этого необходим дополнительный фактор, роль которого могут играть и он-

ковирусы (Thamavit W. et al., 1996). Наши данные позволяют согласиться с этим выводом. Поскольку заражение морских свинок метацеркариями О. felineus не вызывает структурных нарушений хромосом, а, как известно, раковая трансформация связана с нарушениями в структуре хромосом и их транслокациями (Сьяксте Т.Г., Эренпрейс Я.Г., 1987). Возможно предположить, что холангнокарцинома развивается только в случае сочетанного воздействия описторхиса и вируса ЭБ.

ВЫВОДЫ

1. Анализ кариотипа Т-лимфоцитов периферической крови у больных хроническим описторхозом; имеющих высокие титры антител к капсидно-му антигену вируса ЭБ, свидетельствует о повышении числа клеток со структурными нарушениями хромосом, а также с анеуплоидиым и полиплоидным хромосомными наборами.

2 . Хромосомные нарушения у больных описторхозом с высокими титрами антител к капсидному антигену вируса Эпштейна-Барр локализуются в определенных участках хромосом 2, 3, 6, 8, 14 и 22 вблизи известных онкогенов.

3. У больных хроническим описторхозом с высокими титрами антител к капсидному антигену вируса Эпштейна-Барр достоверно увеличено число эпителиальных клеток ротоглотки с цито- и карнопатологическими изменениями.

4. Вирус Эпштейна-Барр не вызывает цитогенетических нарушений в клетках крови и печени у зараженных морских свинок (организме резистентном к этой инфекции). Заражение морских свинок метацеркариями Opisu.urchis felineus индуцирует повышение числа эритроцитов и гепато-цитов с микроядрами у экспериментальных животных, при этом гистологическое исследование свидетельствует о наличии признаков описторхоз-ного холангиогепатита..

5. "ведение в культуры Т-лимфоцитов, полученных от здоровых доноров, антигена из яиц Opisthorchis felineus и вируса Эпштейна-Барр вызывает более существенные цитопатологические и цитогенетические изменения, чем воздействие на культуру одного из данных факторов. /

6. С помощью иммунофлюоресцентной микроскопии установлено присутствие антигенов вируса Эпштейна-Барр в яйцах Opisthorchis felineus и в ядрах эпителиальных клеток ротоглотки больных описторхозом с высокими титрами антител к капсидному антигену вируса Эпштейна-Барр.

7. Гистологическое исследование печени людей, больных описторхозом, инвазированных маритами с инкорпорированными антигенами вируса Эпштейна-Барр свидетельствует о наличии характерного для данного за-

болевания холангита, морфологически проявляющегося в виде аденома-тозного разрастания эпителия слизистой оболочки внутрипеченочных желчных протоков, десквамациеи эпителиальных клеток в местах контакта гельминта с их стенкой, а также воспалительной реакции и признаков склероза соединительной ткани по ходу желчных протоков.

8. Наиболее высокий уровень антител к капсидному антигену вируса Эпштейна-Барр выявлен у больных суперинвазионной формой хронического описторхоза, больных с продолжительностью инвазии более десяти лет, а также с хроническим тонзиллитом и фарингитом.

9. У больных хроническим описторхоэсм с высокими титрами антител к капсидному антигену вируса Эпштейна-Барр снижены показатели антиок-сидантной активности и число эритроцитов, лейкоцитов и моноцитов в периферической крови, при этом в сыворотке крови установлено повышение уровня альфа-фетопротеина и показателей перекисного окисления ли-пидов.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Mutagenic and carcinogenic properties of one of the trcmatodes -Opistorchis felineus// Journal of the Balkan Union of Oncology ( BUON). -1997. - №4. - P.367-372. (et al. Logvinov S.V., Rodicheva N.S., Lepekhin A.V., Ilyinskikh N.N.)

2. Estimation of the mutagenic potential of the trematode Opistorchis felineus in experimentally infected guinea pigs // Parasitology Research. - 1998. - vol.84. - №7. - P.570-572. (et al. Lepyekhin A.V., Logvinov S.V., Ilyinskikh N.N.)

3. Mechanisms of genome instability in infection with Opisthorchis felineus II Mutation Detectioin'97: 4th International workshop. - Brno, Czech Republic. -1997. - P.22. (et al. Lepyekhin A.V.)

4. Biotransformation of Mutagensin Liver Affected by Helminth, Opisthorchis felineus and Oncogenesis in Residents of Siberia II The Society of Environmental Toxicology and Chemistry (SETAC): 18th Annual Meeting. -San Francisco, CA. - 1997. - P. 280

5. Mutagenic and oncogenic potency of helminth of Opisthrochis felineus // The Internationa) Symposium on Environmental Epidemiology in Central and Eastern Europe: Critical Issues for Improving Health. - Smolenice, Slovak Republic.-1997.-P. 132.

6. Mutagenic potential of glandular tissue derivatives of Opisthorchis felineus tested in experimentally treated guinea pigs // The International Symposium on Environmental Epidemiology in Central and Eastern Europe: Critical Issues for

Improving Health. - Smolenice, Slovak Republic. - 1997. - P.I31. (et al. Lepekhin A.V.)

7. Anti-DNA antibodies and chromosome aberrations in patients with Opistorchis felineus infection И Conference on Genetic aspects of autoimmune diseases.,- Noordwijkerhout, The Netherlands. - 1998. - P. 17.

8. Biotransformation of mutagens in liver affected by helminth, Opistorchis felineus and oncogenesis in residents of Siberia II the 15th Annual Meeting of the European Association for Cancer Research (EACR). - Stockholm, Sweden. - 1998.-P.35.

9. Opistorchis felineus as a promoter of oncogenesis and a proof of the role of praziquntel in decreasing the risk of cancer development // The 10th NCI-EORTC Symposium on New Drugs ;n Cancer Therapy. - Amsterdam, The Netherlands. - 1998. - P.26.

10. Генетические последствия описторхозной инвазии на организм человека и экспериментальных животных II Безопасность жизнедеятельности в Сибири и на крайнем Севере: Тезисы докладов 2-ой международной научно-практической конференции. - Тюмень. - 1997. - С.59. (с соавт. Лепехин А.В.)

11. Цитогенетическая нестабильность у людей с высоким уровнем опухолевых маркеров, проживающих в районах Сибири с повышенной пора-женностью населения гельминтами Opistorchis felineus. // Безопасность жизнедеятельности в Сибири и на крайнем Севере: Тезисы докладов 2-ой международной научно-практической конференции. - Тюмень. - 1997. -С.58. (с соавт. Лепехнн А.В., Васильева Т.Н.)

12. Механизмы цитогенетической нестабильности при инвазии гельминтами Opistorchis felineus // Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и паталогических состояниях: Тезисы докладов 13-ой российской научной конференции. - Челябинск. - 1997. -

' С.60-61. (с соавт. Лепехин А.В.)

13. Генетические последствия влияния описторхозной инвазии на организм человека и экспериментальных животных // Экологозависимые заболевания (биохимия, фармакология, клиника): Тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции. - Чита. - 1997. - С. 84-85. (с соавт. Лепехин А.В.)

14. Патоморфологические изменения ткани печени и внутрипеченочиых протоков при описторхозной инвазии у человека // Медико-биологические аспекты нейро-гуморальной регуляции: Материалы юбилейной конференции, посвященной 35-летию ЦНИЛ. - Томск - 1997. - С.54-55. (с соавт. Логвинов С.В., Родичева Н.С., Будков С.Р.)

15. Анализ мутагенной активности эндотоксинов выделенных из марит описюрхов // Медико-биологические аспекты нейро-гуморальной регуляции: Материалы юбилейной конференции, посвященной 35-летию ЦНИЛ. - Томск. - 1997. - С. 285-286. (с соапт. Логвинов С.В., Родичева Н.С., Лепехин A.B.)

16. Изменения в мнкросомах печени и цитогенетнческая нестабильность при описторхозной инвазии // Медико-биологические аспекты нейро-гуморальной регуляции: Материалы юбилейной конференции, посвящен-, ной 35-летию ЦНИЛ. - Томск. - 1997. - С. 287-288. (с соавт. Кудрявцев Д.П.)

17. Нестабильность генома в области онкогенов при описторхозе н раке желудка // Конференция, посвященная 50 летию кафедры детских инфекций СГМУ. - Томск. - 1998. - 49 . (с соавт. Лепехин A.B.).

18. Ломкость хромосом в области онкогенов при описторхозе и раке желудка И Сибирский журнал гастроэнтерологии и гепатологии: Материалы 6-й научно-практической коиференцни"Актуальные вопросы гастроэнтерологии и особенности заболеваний органов пищеварения п Сибирском регионе". - Томск. - 1998.-том I.-J66-7. - С.343. (с соавт. Лепехин A.B.)

19. Влияние инвазии Opisthorchis felineus на генетический аппарат и ци-тотоксическую активность лимфоидных клеток периферической крови человека // Экологозависимые состояния (биохимия, фармакология, клиника): Тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции. -Чита. - 1998. - С.10-11. (с соавт. Лепехин A.B.)