Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Центральные эффекты полипренолсодержащих препаратов

На правах рукописи

ЛЕБЕДЕВ Виктор Андреевич

ЦЕНТРАЛЬНЫЕ ЭФФЕКТЫ ПОЛИПРЕНОЛСОДЕРЖАЩИХ ПРЕПАРАТОВ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

15 ПАЙ 2014

Санкт-Петербург 2014

005548090

005548090

Работа выполнена на кафедре фармакологии Федерального государственного бюджетного военного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова» Министерства обороны Российской Федерации

Научный руководитель: доктор медицинских наук профессор Петр Дмитриевич Шабанов

Официальные оппоненты:

Крауз Владислав Алексеевич, доктор медицинских наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации, профессор кафедры фармакологии и клинической фармакологии

Родичкин Павел Васильевич, доктор медицинских наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Санкт-Петербургский государственный педагогический университет им. А.И. Герцена» Министерства образования и науки Российской Федерации, профессор кафедры организации и методики физической культуры

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита диссертации состоится « 05 » июня 2014 года в 11 часов на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 001.022.03 при Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины» Северо-Западного отделения РАМН по адресу: 197376, г. Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, 12.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке и на веб-сайте при ФГБУ «НИИЭМ» СЗО РАМН по ссылке: htthp//www.iemrams.spb.ru/russian/diss/ds3/lebedev/d3Iebedev.pdf

Автореферат разослан « -¿3*» апреля 2014 года

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук

Хныченко Людмила Константиновна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования

Современная фармакология требует открытия и изучения новых ней-ропротекторов и средств защиты печени, в том числе растительного происхождения. К их числу может быть отнесен и ропрен, получаемый из нейтральной части хвои сосны и ели. И хотя ропрен зарегистрирован и позиционирован, прежде всего, как гепатопротектор, у него обнаружены нейропро-текторные свойства при ишемии и токсическом поражении головного мозга (Шабанов П.Д., Султанов В.С., 2012).

Ропрен представляет собой смесь полипренолов, природных линейных полимеров, содержащих 8-18 изопреновых единиц, и имеет следующую структурную формулу: СН3

Н - (СН2-С =СН-СН2)п-ОН,

где п - число изопреновых звеньев от 8 до 18.

Препарат разрешен к практическому применению (регистрационный номер ЛСР-001521/07), его получают по способу, описанному в патенте №2238291. Ропрен производства ОАО «Фармацевтическая фабрика», Санкт-Петербург, рассматривается как концентрат полипренолов (с содержанием суммы полипренолов 95%), он рекомендован в качестве гепатопротекторного средства растительного происхождения (Код АТХ05ВА). Показаниями к применению ропрена являются жировая дистрофия печени различной этиологии, гепатит, цирроз печени (в комплексном лечении), токсические поражения печени (алкогольные, наркотические, лекарственные).

Использование ропрена стимулирует репаративно-регенерационные процессы в печени, восстанавливает нарушенный гомеостаз, выводит токсины, способствует повышению активности антиоксидантной системы организма. Наряду с этим отмечено стимулирующее действие ропрена на уровень неспецифической резистентности организма (нейтрофильного и моноцитар-ного звена). В ходе лечения больных с патологией печени было установлено, что ропрен обладает еще иммуномодулирующим действием, оказывает нормализующее влияние на измененный статус организма, особенно на клеточное звено иммунитета, о чем свидетельствует повышение активных Т-лимфоцитов и индекса Тхелперы/ТсуПрессоры- Применение ропрена снижает уровень аллергической напряженности организма, что подтверждается снижением циркулирующих иммунных комплексов и эозинофилов крови (Свидер-ский В.Л. и др., 2006).

Вместе с тем, ропрен — это высококонцентрированный препарат полипренолов, применяемый как гепатопротектор в достаточно высоких дозах. Имеются сведения, что малые дозы полипренолов могут проявлять и нейро-протекторную активность, особенно при хронических ишемических повреждениях головного мозга (Свидерский В.Л. и др., 2007).

ч^

Степень разработанности темы

Центральные эффекты ропрена и вообще полипренолов изучены недостаточно. Более того, нет точных сведений о мишенях и интимных механизмах действия полипренолов на центральную нервную систему (ЦНС) и высшие функции мозга. Не изучено влияние полипренолов на нейромедиа-торные процессы в клетках головного мозга, по-видимому, во многом определяющих психоактивирующее действие препарата. Все указанное позволило сформулировать цель и задачи настоящей работы.

Цель и задачи исследования

Целью исследования было изучение поведенческих, антитоксических и нейропротекторных эффектов полипренолов у крыс.

Задачи исследования:

1) Исследовать влияние полипренолов на поведение крыс в тестах «открытое поле», приподнятый крестообразный лабиринт, «чужак-резидент», ротации, вынужденной беспомощности Порсолта, самостимуляции латерального гипоталамуса.

2) Исследовать поведение, состояние системы крови и морфологию печени крыс с экспериментальным гепатозом и токсической энцефалопатией, вызванной подострым введением четыреххлористого углерода.

3) Исследовать нейропротекторные эффекты полипренолов на модели подострого гепатоза и токсической энцефалопатии, вызванной четыреххло-ристым углеродом у крыс.

4) Исследовать влияние полипренолов на метаболизм моноаминов (дофамина, норадреналина и серотонина) в двигательных и эмоциогенных структурах головного мозга крыс.

Научная новизна

Отсутствие четких представлений о системных эффектах полипренол-содержащих препаратов и интимных механизмах их действия позволили автору сосредоточить основное внимание на изучении поведенческого спектра эффектов ропрена и выяснении его нейропротекторных свойств в модели экспериментального токсического поражения головного мозга. Показано, что полипренолы в широком диапазоне доз (2,2-4,3-11,6 мг/кг) обладают умеренными психоактивирующими свойствами, антидепрессантной активностью, способностью изменять подкрепляющие свойства головного мозга. Указанные особенности действия полипренолов на ЦНС связаны, по-видимому, с изменением обмена моноаминов, в частности дофамина, в головном мозге. В действии препарата можно выделить, по крайней мере, два направления: первое связано с эффектами на эмоциональную сферу (депрессивность, подкрепление), второе - с двигательными эффектами препарата (в основном, нормализация разных видов двигательной активности, сниженной вследствие токсических воздействий на мозг). Традиционно эти виды фармакологической активности связывают с влиянием на нейромедиаторные системы мозга. Действительно, полипренолы, применяемые в сравнительно низких дозах (2,2-4,3 мг/кг) повышают активность мезолимбической (прилежащее ядро) и нигростриатной (стриатум) дофаминергических систем у крыс с подострым

гепатозом и токсической энцефалопатией. Этот эффект не связан с гепато-протекторными свойствами полипренолов. Данное положение подтверждается фактом, что гепатопротектор адеметионин (гептрал) таким действием не обладает. Сказанное позволяет отнести полипренолы к перспективным современным средствам с выраженным центральным психоактивирующим действием и способностью защищать печень и другие внутренние органы от действия токсикантов типа четыреххлористого углерода.

Теоретическая и практическая значимость В результате проведенных исследований получены новые данные о системных нейропротекторных, гепатопротекторных, антитоксических и эмоциогенных свойствах полипренолсодержащих препаратов, в частности, малых доз ропрена. В модельных опытах на крысах, у которых воспроизводили подострый гепатоз введением четыреххлористого углерода доказано, что полипренолы в дозах 2,2-4,3-11,6 мг/кг оказывает нормализующее действие на двигательную и исследовательскую активность, а также эмоциональность крыс, нарушенную СС14. Препарат сравнения адеметионин (гептрал 300 мг/кг) такого действия не оказывает. Полипренолы проявляют умеренное антиагрессивное действие, превышающее таковое для адеметионина, включая высокую степень защиты (защитного поведения) у экспериментальных животных. Полипренолы нормализуют показатели крови, нарушенные введением ССЦ. Гепатопротекторное действие полипренолов заключается в нормализации морфологического повреждения печени при экспериментальном гепатозе (белковой и жировой дистрофии), вызванном ССЦ. Максимальный гепатопротекторный эффект регистрируется при введении ропрена в дозе 11,6 мг/кг и гептрала в дозе 300 мг/кг (данные сопоставимы статистически). В противоположность адеметионину полипренолы в дозах 2,2-4,3-11,6 мг/кг оказывают умеренное психоактивирующее действие, в основе которого лежит их влияние на активность дофаминергических систем головного мозга: у крыс с подострым гепатозом и токсической энцефалопатией полипренолы повышают активность мезолимбической (прилежащее ядро) и нигростриат-ной (стриатум) дофаминергических систем, тогда как адеметионин таким действием не обладает. В целом продемонстрирована фармакологическая близость гепатопротекторных эффектов полипренолов (особенно в дозе 11,6 мг/кг) и адеметионина, но принципиальное отличие в их центральных эффектах. Изучение этих и родственных с ними вопросов во многом может приблизить нас к пониманию механизмов действия полипренолсодержащих препаратов и к разработке конкретных рекомендаций по их использованию в неврологической практике.

Методология и методы исследования Методология исследования состояла в изучении у крыс поведенческих эффектов полипренолов растительного происхождения в разных дозах (2,24,3-11,6-13,4 мг/кг), оцененных в батарее тестов («открытое поле», приподнятый крестообразный лабиринт, ротационный тест, «чужак-резидент», тест Порсолта, самостимуляция латерального гипоталамуса), моделировании по-дострого гепатоза с энцефалопатией введением ССЦ с последующей оценкой

гепато- и нейропротекторных эффектов полипренолов в сравнении с адеме-тионином на основании поведенческих тестов, биохимии крови, морфологических изменений в печени и нарушенеий обмена моноаминов (дофамина и серотонина) в головном мозге. Исследования выполнены с соблюдением всех правил доказательной медицины.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Полипренолы в дозах 4,3-8,6-13,4 мг/кг при их курсовом введении (5-7 дней) умеренно активируют двигательную активность, проявляют ан-ксиогенное действие, подавляют индивидуальное поведение и оказывают двухфазный эффект (подавление-активация) на поведение самостимуляции в камере Скиннера у интактных крыс.

2. В модели экспериментального подострого гепатоза с энцефалопатией, вызванного ССЦ, полипренолы в дозах 2,2-4,3-11,6 мг/кг нормализуют двигательную и исследовательскую активность, а также эмоциональность крыс, проявляют умеренное антиагрессивное действие, при этом препарат сравнения адеметионин 300 мг/кг такого действия не оказывает.

3. Полипренолы в дозах 2,2-4,3-11,6 мг/кг, так же как и препарат сравнения адеметионин, нормализуют показатели крови, нарушенные введением СС14, и восстанавливают нормальную морфологическую структуру печени при токсическом подостром гепатозе (антитоксическое действие). Эффекты полипренолов 11,6 мг/кг и адеметионина 300 мг/кг приблизительно равны.

4. Полипренолы в дозах 2,2-4,3-11,6 мг/кг оказывает центральное пси-хоактивирующее действие, в основе которого лежит его влияние на активность дофаминергических систем головного мозга. Это выявляется в модели подострого гепатоза с токсической энцефалопатией, когда полипренолы повышают активность мезолимбической (прилежащее ядро) и нигростриатной (стриатум) дофаминергических систем. Адеметионин таким действием не обладает.

Степень достоверности и апробация материалов исследования

Степень достоверности определяется большим количеством экспериментальных животных (306 крыс), рандомизацией и формированием групп сравнения и активного контроля, адекватными поведенческими, токсикологическими, морфологическими, биохимическими и фармакологическими методами исследования, длительными сроками наблюдения и корректными методами статистической обработки.

Реализация результатов. Материалы исследования используются в лекционном курсе кафедры фармакологии Военно-медицинской академии имени С.М.Кирова, кафедры терапии, нервных болезней и психиатрии Института медицинского образования Новгородского государственного университета им. Ярослава Мудрого. Работа выполнена в соответствии с плановыми научно-исследовательскими разработками Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова. Материал диссертации вошел в грантовые разработки Российского фонда фундаментальных исследований РАН (РФФИ №10-0400473).

Апробация результатов. Материалы, вошедшие в диссертацию, доложены на научной конференции Российской ассоциации психонейроэндокринологии (Санкт-Петербург, 2010), международных конференциях «Актуальные проблемы химии природных соединений» (Ташкент, 2010) и «Новые технологии в медицине и экспериментальной биологии» (Рио-де-Жанейро, 2011), 4-м съезде фармакологов России (Казань, 2012). По теме диссертации опубликованы 4 статьи (3 в журналах, рекомендованных ВАК РФ) и 4 тезиса. Апробация диссертации прошла на совместном заседании кафедры фармакологии и НИО обитаемости НИЦ Военно-медицинской академии им. С.М.Кирова.

Личный вклад автора. Личный вклад автора осуществлялся на всех этапах работы и состоял в планировании экспериментов, их непосредственном выполнении, обработке полученных результатов, обсуждении результатов, написании статей и тезисов, написании диссертации и автореферета. Участие автора в выполнении, сборе и анализе -95%, статистической обработке — 100%, в написании статей и тезисов — 90%, написании диссертации и автореферата - 95%.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, главы обзора литературы, материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований (включающей 7 разделов), обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций, списка литературы. Работа изложена на 142 страницах машинописного текста, иллюстрирована 32 рисунками и 9 таблицами. Библиографический указатель содержит 158 наименований, в том числе 62 отечественных и 96 иностранных.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Глава 1 представляет собой обзор литературы и описывает химию, биохимию и фармакологию полипренолов (изопреноидов). Глава 2 включает описание основных методических приемов, которые были использованы при выполнении диссертации.

Глава 3 объединяет результаты собственных исследований автора. Глава 4 представляет собой обсуждение полученных результатов. В заключении приведены выводы, научно-практические рекомендации и список использованных литературных источников.

Материалы и методы исследования

Опыты выполнены на 306 крысах Вистар массой 200-220 г, выращенных в группе по 5 особей в стандартных пластмассовых клетках в условиях вивария. Животных содержали в однополых группах в условиях вивария при свободном доступе к воде и пище в условиях инвертированного света 8.0020.00 при температуре 22±2°С. Все поведенческие опыты проводили на половозрелых животных в возрасте 90-100 дней в осенне-зимний период. После

проведения всех поведенческих опытов животных декапитировали, извлекали мозг и готовили гистологические препараты.

Оценку поведения проводили в «открытом поле» (двигательная и исследовательская активность), приподнятом крестообразном лабиринте (тревожность), тесте «чужак-резидент» (агрессивность), тесте Порсолта (антиде-прессантный эффект), ротационном тесте (асимметрия мозга, стереотипии), самостимуляции латерального гипоталамуса (подкрепление).

Свободную двигательную активность животных исследовали в тесте «открытого поля» (Михеев В.В., Шабанов П.Д., 2007), представляющего собой круглую площадку диаметром 80 см с 16 отверстиями (норками) диаметром 3 см каждая. Продолжительность одного опыта составляла 3 мин. Регистрировали ряд элементарных двигательных актов и поз: горизонтальную и вертикальную активность, груминг, заглядывание в норки, дефекацию, ури-нацию.

Исследование функциональной асимметрии мозга определяли с помощью метода ротации. Подсчитывали число ротаций в полусфере диаметром 30 см через 30 мин после введения фенамина (2,5 мг/кг) за два последовательных периода по 10 мин, используя для анализа средние значения (определяемые за 10 мин). Регистрировали число полных вращений на 360° отдельно вправо и влево, а также число неполных ротаций от 90° до 360°. В последние 10 с каждой минуты тестирования в ротометре определяли также показатель стереотипии по 6-бальной шкале (Лебедев A.A. и др., 1995).

Исследование тревожности проводили в приподнятом крестообразном лабиринте. Лабиринт состоял из двух открытых рукавов 50x10 см и двух закрытых рукавов 50x10 см с отрытым верхом, расположенных перпендикулярно относительно друг друга. Высота над полом 1 м. Животное помещали в центр лабиринта. Путем нажатия соответствующей клавиши этографа, связанного с компьютером, фиксировали время пребывания в закрытых и открытых рукавах, время свешивания в отрытых рукавах и выглядывания из закрытых рукавов. Продолжительность теста составляла 5 мин.

Агрессивность изучали у половозрелых крыс самцов в тесте «чужак-резидент» в соответствии с описанием этологического атласа (Михеев В.В., Шабанов П.Д., 2007). Смысл методики состоит в том, что к крупному самцу, находящемуся в клетке (резиденту), подсаживают более мелкое животное (чужака). Регистрировали число поведенческих проявлений агрессивности и защиты, а также общее число поведенческих актов, описывающих взаимоотношение двух особей крыс.

Исследование антидепрессантной активности осуществляли в тесте Порсолта. Плавательный тест «отчаяния» Порсолта (Porsolt R.D. et al., 1978) предусматривает оценку двигательной активности крыс, помещенных в стеклянный цилиндр диаметром 20 см и высотой 40 см, на 1/3 заполненный водой с температурой 27±1°С. Животное помещают в цилиндр на 6 мин, регистрируют время активного и пассивного плавания и время иммобилизации. Увеличение активного плавания и уменьшение времени иммобилизации рассматривают как антидепрессантный эффект.

Исследование реакции самостимуляции производили в камере Скиннера. Билатерально в латеральное гипоталамическое ядро вживляли электроды (König K.P., Klippel A.A., 1963). Через 10 дней после вживления электродов в мозг крыс обучали нажимать на педаль для получения электрического раздражения мозга (пороговые значения тока в режиме «фиксированных пачек»). Частоту и длительность нажатий регистрировали автоматически (Лебедев A.A., Шабанов П.Д., 1992) По окончании всех опытов производили морфологический контроль локализации кончиков электродов на серии фронтальных срезов мозга, которые окрашивали по методу Ниссля.

Экспериментальный подострый гепатоз (токсическое поражение печени) моделировали внутрибрюшинным введением крысам 50%-ного раствора СС14 в дозе 1000 мг/кг на 1-й и 4-й дни опыта. В связи с нарастающей гибелью экспериментальных животных (более 50%) дальнейшее введение ССЦ не производили. Каждая крыса получила 2000 мг/кг СС14 за опыт.

В соответствии с протоколом исследования все животные были разделены на 7 групп, каждая из которых включала 10-14 крыс: 1) получала внут-рибрюшинно (в/бр) физиологический 0,9%-ный раствор хлорида натрия; 2) получала в/бр раствор ССЦ + физиологический раствор 14 дней; 3) получала ССЦ + полипренолы 2,2 мг/кг в/бр ежедневно 14 дней; 4) получала СС14 + по-липренолы 4,3 мг/кг в/бр ежедневно 14 дней; 5) получала ССЦ + полипренолы 11,6 мг/кг в/бр ежедневно 14 дней; 6) получала ССЦ + гептрал раствор 300 мг/кг в/бр на основе лиофилизата ежедневно 14 дней; 7) получала ССЦ + гептрал раствор 300 мг/кг в/бр на основе таблеток ежедневно 14 дней.

Тестирование поведения начинали на 14-й день через 0,5-1 ч после последнего введения исследуемых веществ. Поведенческие тесты проводили в течение 2 последовательных дней.

Забой животных осуществляли на 16-й день опыта. После декапитации крыс производили взятие крови, печени и мозга (стриатум, прилежащее ядро и префронтальная кора). В сАучае выпадения животных из опыта (гибель вследствие токсического дейЬтвия ССЦ) группы дополняли новыми животными, опыт в этом случае смещался во времени, но его схема сохранялась.

Для биохимического анализа кровь всех животных забирали в сухие стерильные пробирки. Материал центрифугировали при 3000 об./мин. Сыворотку отбирали для дальнейшего биохимического анализа на общий белок, глюкозу, холестерол, креатинин, мочевину, а-амилазу, лактатдегидрогеназу, триглицериды, общий билирубин, аспартат-аминотрансферазу (ACT), ала-нин-аминотрансферазу (AJ1T), связанный билирубин, щелочную фосфатазу, мочевую кислоту, креатин-фосфокиназу (КФК), фосфор, липопротеиды низкой плотности и у-глютамилтрансферазу. Материал исследовали на биохимическом анализаторе Sapphire 400 (производства фирмы Sapphire, Япония) с использованием реактивов системы Randox (RANDOX Laboratories Ltd., United Kingdom).

Ткань печени крыс фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина в течение 24 ч, после чего материал проходил стандартную обработку в спиртах нарастающей концентрации (70-95%), ксилоле и парафине

для изготовления гистологических препаратов с толщиной серийных парафиновых срезов 3-5 мкм. Для микроскопического исследования срезы окрашивались гематоксилином и эозином. Морфологическое исследование гистологических препаратов проводили при помощи светооптического микроскопа Leica DM LS (Япония) в пяти полях зрения при увеличении 200. Микрофотографирование проводили при помощи цифровой фотокамеры Leica DC320 (Япония).

Масштаб патологических изменений в дольке, учитывая ее строение в виде шестигранника, оценивался как: поражение 1/3, 1/2, 2/3 и 3/4 дольки. Патогистологическую оценку изменений в печени проводили по трехбалльной системе: 1 балл — слабо выраженные изменения; 2 балла - умеренно выраженные изменения; 3 балла — выраженные изменения.

Биохимическое исследование мозга проводили после декапитации, структуры мозга извлекали на льду и замораживали в жидком азоте. Пробы гомогенизировали в 10 объемах 0,1 М НСЮ4 и центрифугировали при 15 000 g в течение 10 мин. Содержание моноаминов и их метаболитов определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с электрохимической детекцией (Ротенко A.A. и др., 2006). Надосадочную жидкость в количестве 20 мкл наносили на аналитическую колонку Zorbax С18. Стандартные исследуемые растворы медиаторов и их метаболитов (Sigma, США) приготовляли на основе бидистиллированной воды. Норадреналин (НА), дофамин (ДА), серотонин (СЕР), а также 3,4-диоксифенилуксусную (ДОФУК), гомованилиновую (ГВК), 5-гидроксииндолуксусную кислоты (5-ГИУК) разделяли с использованием в качестве подвижной фазы 0,1 молярного цитратно-фосфатного буфера, содержащего 0,3 ммоля октансульфоната натрия, 0,1 ммоля ЭДТА и 10% ацетонитрила (pH 3,2). Определение моноаминов и их метаболитов осуществляли на стеклоуглеродном электроде при потенциале +0,7 мВ против Ag/AgCl электрода сравнения. Скорость потока подвижной фазы составляла 0,8 мл/мин.

Для нейрофармакологического анализа использоли полипренолы в виде 25%-ного масляного раствора в дозах 2,2-4,3-8,6-11,6-13,4 мг/кг, непрямой адреномиметик фенамин (1-2,5 мг/кг) для инициации стереотипного поведения, гепатопротектор адеметионин (гептрал, или S-afleH03nn-L-метионин) в дозе 300 мг/кг. Выбор доз полипренолов основывался на рекомендациях разработчика и ранее полученных результатах исследований на грызунах (Андреева Н.И., 2002). Все вещества вводили внутрибрюшинно в виде курса в течение 5-7 дней (1-я серия) или 14 дней (2-я серия), каждая инъекция за 40-60 мин до начала опыта. В качестве контроля использовали введение 0,9%-ного раствора хлорида натрия.

Статистическая обработка результатов. Выборка для каждой группы животных составила не менее 10-12 крыс. Результаты обрабатывали статистически с использованием t-критерия Стьюдента, непараметрического критерия U Вилкоксона-Манна-Уитни, дисперсионного анализа по методу ANOVA и однофакторного дисперсионного анализа с последующим Newman-Keuls post-hoc анализом.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Исследование поведенческих эффектов полипренолов

Первый раздел исследований предусматривал изучение влияния полипренолов в 3 дозах (4,3 мг/кг, 8,6 мг/кг и 13,4 мг/кг) при их курсовом введении (5-7 дней, 1 инъекция в сутки) на разные виды поведения крыс: поведение в открытом поле, в приподнятом крестообразном лабиринте, в тесте «чужак-резидент», в ротометре (стереотипное поведение), в тесте Порсолта, в тесте самостимуляции латерального гипоталамуса.

Исследование влияния курсового введения полипренолов (5 дней) на поведение крыс в «открытом поле» показало, что независимо от дозы (4,38,6-13,4 мг/кг) полипренолы умеренно активировали горизонтальную, не влияя на вертикальную двигательную активность. Полипренолы подавляли (в 3-4 раза) норковый рефлекс (исследовательская активность), умеренно снижали груминг (только в дозе 13,4 мг/кг) и общую эмоциональность животных (в дозах 4,3 и 13,4 мг/кг, но не 8,6 мг/кг), оцененную по болюсам дефекаций.

В дозе 8,6 мг/кг полипренолы повышали число болюсов дефекации, что указывает на умеренное повышение эмоциональности при использовании данной дозы препарата, Таким образом, в тесте «открытого поля» полипренолы не проявляет дозозависимого эффекта. В целом, полипренолы растормаживают (активирует) горизонтальную двигательную активность при умеренном снижении всех других поведенческих паттернов (прежде всего, исследовательской активности и эмоциональности).

Одним из наиболее типичных дофаминзависимых форм поведения является ротационное и стереотипное поведение. Непрямой дофаминомиметик фенамин (2,5 мг/кг) в среднем в 4 раза повышал число вращений как влево, так и вправо (р<0,01). Полипренолы (13,4 мг/кг) при курсовом введении в течение 5 дней умеренно подавляли вращение влево и не влияли на показатели вращения вправо. Во всех случаях полипренолы не вызывали стереотипного поведения, характерного для активации дофаминергической системы мозга.

Таким образом, в отличие от фенамина полипренолы (13,4 мг/кг) умеренно подавляют ротационное поведение крыс в ротометре и не вызывают стереотипий. Это указывает на возможное участие дофаминергической системы мозга (ее умеренное подавление) в эффектах полипренолов.

Приподнятый крестообразный лабиринт позволяет оценить анксиоли-тические (противотревожные) или анксиогенные (тревожные) свойства фармакологических препаратов, оцениваемые по времени пребывания в затемненных и освещенных рукавах лабиринта. Увеличение времени пребывания в освещенных рукавах лабиринта и повышение числа выглядываний и свеши-ваний с открытых площадок лабиринта квалифицируется как анксиолитиче-ский (противотревожный) эффект, а уменьшение этих показателей - как ан-ксиогенный (тревожный) эффект.

Исследование влияния полипренолов (4,3-8,6-13,4 мг/кг) при курсовом введении в течение 5 дней на поведение крыс в приподнятом крестообразном

лабиринте показало (табл. 1), что только в дозе 13,4 мг/кг полипренолы вдвое уменьшали время пребывания в освещенных рукавах лабиринта. Вместе с тем, зависимо от дозы полипренолы в 2-5 раз снижали число выглядываний из темных рукавов и в 2 раза снижали число свешиваний с открытых платформ лабиринта (в дозах 4,3 и 13,4 мг/кг, но не 8,6 мг/кг). В дозе 8,6 мг/кг полипренолы повышали число выглядываний га затемненных рукавов лабиринта, однако данный показатель не является основным, а рассматривается как вспомогательный при оценке анксиолитического или анксиогенного действия фармакологических веществ.

Таблица 1

Влияние полипренолов (4,3-8,6-13,4 мг/кг) на поведение крыс в приподнятом крестообразном лабиринте

Препараты Поведенческие акты

Время в открытых рукавах (мин) Время в закрытых рукавах (мин) Число выглядываний Число свешиваний

0,9% раствор №С1 (контроль) 0,4±0,1 4,6±0,2 10,2±1,3 6,2±0,8

Полипренолы 4,3 мг/кг 0,4±0,1 4,6±0,2 5,7±0,7* 3,7±0,5*

Полипренолы 8,6 мг/кг 0,5±0,1 4,5±0,2 3,2±0,4** 10,0±1,4*

Полипренолы 13,4 мг/кг 0,2±0,1 * 4,8±0,3 2,1±0,3** 3,3±0,4*

Примечание. *р<0,05, **р<0,01 в сравнении с соответствующим контролем.

Таким образом, полипренолы проявляют умеренную анксиогенную активность, которая наиболее стабильно воспроизводится при введении препарата в дозе 13,4 мг/кг.

Агрессивное поведение контролируется преимущественно холинерги-ческой и дофаминергической системами мозга. Влияние полипренолов при курсовом введении в течение 5 дней на показатели системы агрессия-защита в тесте «чужак-резидент» показало, что полипренолы вне зависимости от дозы существенно (в 3,5-7 раз) подавляли проявления общительности и паттерны индивидуального поведения. При этом в дозе 13,4 мг/кг полипренолы растормаживали систему агрессии и защиты. В последнем случае у контрольных животных практически не отмечено проявление агрессии, хотя после введения полипренолов в наибольшей изучаемой дозе показатели агрессии умеренно повышались (р<0,01). Параллельно этому активировалась и система защиты. Это закономерно, поскольку система защиты, как правило, активируется при повышении показателей агрессивности. В то же время существуют лекарственные средства, например, прямой дофаминомиметик апоморфин, которые избирательно повышают только систему агрессии, не влияя на систему защиты.

Таким образом, полипренолы в тесте «чужак-резидент» не оказывают дозозависимого эффекта, значимо подавляя индивидуальное поведение и

общительность (коммуникативность) животных. Видимого антиагрессивного действия полипренолы не оказывают. В дозах 4,3 и 8,6 мг/кг полипренолы не оказывают агрессивного/антиагрессивного действия, а в большой дозе (13,4 мг/кг) проявляют незначительное агрессивное действие с одновременной активацией системы защиты.

Тест Порсолта используется для оценки антидепрессантного действия лекарственных препаратов. В условиях наших экспериментов полипренолы при курсовом введении в течение 5 дней существенно (в 4-5 раз) увеличивали время иммобилизации животных, мало меняя показатели активного и пассивного плавания (табл. 2). Время иммобилизации является основным показателем, по которому оценивают антидепрессантное действие препарата. Увеличение этого показателя говорит о наличии депрессантных (подавляющих ЦНС) свойств, а уменьшение, напротив, - о проявлении антидепрессантных свойств.

Таблица 2

Влияние полипренолов (4,3-8,6-14,3 мг/кг) на поведение в тесте Порсолта у

крыс

Препараты Показатель, с

Активное плавание Пассивное плавание Иммобилизация

0,9% раствор ЫаС1 (контроль) 18,5±2,4 369,5±18,0 2,8±0,4

Полипренолы 4,3 мг/кг 15,3±2,0 262,7±47,2* 12,1±1,6**

Полипренолы 8,6 мг/кг 18,8±2,4 353,3±45,9 15,8±2,1**

Полипренолы 13,4 мг/кг 14,3±1,9* 346,2±45,0 17,1±2,2**

Примечание. *р<0,05, **р<0,01 в сравнении с соответствующим контролем.

Только в дозе 13,4 мг/кг полипренолы умеренно уменьшали время активного плавания, в дозе 4,3 мг/кг — пассивного плавания, а в дозе 8,6 мг/кг - не меняли времени активного и пассивного плавания крыс.

Следовательно, полипренолы оказывают депрессантный эффект на поведение в тесте Порсолта. Степень выраженности депрессантного эффекта полипренолов может рассматриваться как умеренная.

Для изучения систем мозгового подкрепления обычно используют реакцию самостимуляции (показатель первично подкрепляющих свойств, или безусловного подкрепления. Реакция самораздражения латерального гипоталамуса представляет собой жестко детерминированную реакцию, легко воспроизводимую и трудно поддающуюся изменению. Лишь одна группа препаратов - психостимуляторы (фенилалкиламины, сиднонимины, в меньшей степени кофеин) - стабильно активируют реакцию самостимуляции. Все другие фармакологические средства либо не влияют на нее, либо угнетают (например, нейролептики, транквилизаторы и т.д.).

Самостимуляцию гипоталамуса регистрировали последовательно после каждого из 7 дней введения полипренолов в дозах 4,3-8,6-13,4 мг/кг. В первые 2 дня исследования (введения полипренолов) препарат полипренолов либо не влиял (13,4 мг/кг), либо умеренно (на 18-28%) угнетал реакцию самостимуляции в дозах 4,3-8,6 мг/кг. Начиная с 3-го дня введения полипрено-лы (8,6 и 13,4 мг/кг) на 27-39% увеличивали реакцию самостимуляции, оказывая типичный психоактивирующий эффект. Этот положительный эффект проявлялся и на 4-5 дни введения полипренолов в дозах 8,6 и 13,4 мг/кг с максимумом (+39%) на 3-й день. В то же время на 3-й день введения поли-пренолы в дозе 4,3 мг/кг выражено подавляли реакцию самостимуляции (34% против -11% в контроле); подавление данной реакции прослеживалось в течение всех пяти дней эксперимента, когда вводили полипренолы в данной дозе (то есть, на 3-й, 4-й и 5-й дни).

Следует отметить, что психоактивирующий эффект препарата полипренолов, проявляющийся после его введения в дозах 8,6 и 14,3 мг/кг, последовательно уменьшался (на 4-й день на 15%, на 5-й день - на 12-16%).

На 6-й и 7-й дни анализировали действие полипренолов на реакцию самостимуляции в камере Скиннера на фоне введения психостимулятора фенамина. Сам фенамин (1 мг/кг) дает четкую реакцию активации самостимуляции на 35-37%. На фоне введения полипренолов и независимо от их дозы фенамин сохранил свой психоактивирующий эффект, повышая число нажатий на педаль на 27-45%, то есть в том интервале, который характерен (типичен) для самого фенамина.

Таким образом, действие полипренолов на реакцию самостимуляции зависит от продолжительности его введения. В первые дни введения полипренолы, как правило, умеренно подавляют реакцию самостимуляции, затем эффект сменяется на умеренный психоактивирующий, который по мере введения препарата снижается. Кроме того, полипренолы не проявляют функционального антагонизма с психостимулятором фенамином, на фоне его введения фенамин в полной мере проявляет свой психоактивирующий эффект, активируя самостимуляцию на тот порядок, который характерен для введения самого фенамина.

Исследование поведенческих и нейрохимических эффектов полипренолов при подостром гепатозе

Исследование предусматривало изучение влияния полипренолов в 3 дозах (2,2- 4,3-11,6 мг/кг) при их курсовом введении (14 дней, 1 инъекция в сутки) на разные виды поведения крыс с подострым гепатозом: поведение в открытом поле, в приподнятом крестообразном лабиринте, в тесте «чужак-резидент», в тесте Порсолта, в тесте самостимуляции латерального гипоталамуса.

Характеристика экспериментальной модели. Двукратное внутри-брюшинное введение крысам 50%-ного раствора ССЦ (одно введение соответствовало 1000 мг/кг СС14) на 1-й и 4-й дни опыта приводило к развитию

явного токсического действия гепатотропного яда. Летальность крыс, не защищенных гепатопротекторами, после первого введения ССЦ составила около 40%, после второго введения - увеличилась до 50% (ЛД50). В связи с нарастающей гибелью экспериментальных животных дальнейшее введение ССЦ не производили. В целом, каждая крыса получила 2000 мг/кг ССЦ за опыт.

В крови крыс, забитых на 16-й день опыта, регистрировали признаки поражения внутренних органов: печени, миокарда, поджелудочной железы, почек. В частности, у крыс, получавший ССЦ, в 2 раза возрастала активность аспартатаминотрансферазы (с 123,1±14,4 до 248,6±10,4 МЕ/л), в 4 раза - лак-татдегидрогеназы (с 22,8±9,3 до 88,7±49,7 МЕ/л), умеренно повышалась активность а-амилазы (с 1708,8±40,9 до 1930,8±35,4 МЕ/л), снижалась активность у-глутамилтрансферазы (с 2,33±0,83 до 0,98±0,97 МЕ/л), общего и непрямого билирубина, мочевой кислоты, липопротеидов низкой плотности.

При гистологическом исследовании печени у крыс был выявлен экспериментальный гепатоз (дистрофия печени), который характеризовался развитием следующих гистологических проявлений: гиалиново-капельной белковой дистрофией; мелкокапельной жировой дистрофией; слабо выраженной лимфоцитарной инфильтрацией портальных трактов.

Гистологическая картина в группах лабораторных животных распределилась следующим образом. В группе 1 (крысы, получавшие физиологический раствор) печень имела нормальное гистологическое строение (рис. 1). В печеночных дольках радиальное расположение балок из гепатоцитов в виде радиально отходящих от центральной вены к портальным трактам тяжей, ге-патоциты с розовой цитоплазмой и синими ядрами, местами цитоплазма имела различную оптическую плотность, связанную со степенью накопления гликогена. Дистрофические и некротические изменения отсутствовали, наблюдалась незначительная лимфоидная инфильтрация портальных трактов, в которых имелись триады - артерия, вена и желчный проток, окруженные незначительным количеством соединительнотканной стромы. Синусоиды в дольках не расширены, наблюдалось полнокровие центральных вен.

В группе 2 (крысы, получавшие ССЦ + физиологический раствор) на фоне нарушения балочного строения на большем протяжении в печени имелась паренхиматозная дегенерация в виде белковой гиалиново-капельной дистрофии, которая поражала гепатоциты всех печеночных долек на 1/3 - 2/3 протяженности балок, местами захватывала дольки очагово в виде мелкокапельной жировой дистрофии, локализовалась перипортально (рис. 2). В трактах наблюдалась слабо выраженная мононуклеарная инфильтрация, некроз гепатоцитов отсутствовал. В соответствие с балльной оценкой степени пато-гистологических изменений можно было констатировать 2-3 бальное поражение печени крыс данной группы — гистологические изменения соответствовали картине умеренной и выраженной токсической паренхиматозной дистрофии печени (гепатозу).

Рис. 1. Печень крысы, получавшей физиологический раствор (слева) Нормальное гистологическое строение ткани. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение 200. Рис. 2. Печень крысы, получавшей ССЦ + физиологический раствор (справа) Дискомплексация балочного строения, умеренно выраженные и выраженные проявления дистрофии гепатоцитов (|). Окраска гематоксилином и эозином.

Увеличение 200.

Таким образом, двукратное введение СС14 в дозе 2000 мг/кг приводило к развитию подострого гепатоза (дистрофии печени), регистрирующегося при исследовании даже через 15 дней после первого введения гепатотропно-го яда. На данной модели можно адекватно оценивать действие гепатопро-текторных средств.

Влияние полипренолов и адеметионина на выживаемость крыс, подвергнутых воздействию СС14. Полипренолы в дозах 2,2-4,3-11,6 мг/кг достоверно не снижали гибель крыс, подвергнутых воздействию ССЦ. Процент погибших животных в этих группах составлял 42-50%. Гибель крыс приходилась на второй день после инъекции ССЦ, то есть на 2-й и 5-й день опыта. Адеметионин 300 мг/кг, приготовленный на основе лиофилизата для инъекций, также не снижал процента гибели животных.

Влияние полипренолов и адеметионина на поведение крыс, подвергнутых воздействию ССЦ. Двукратное введение ССЦ (2000 мг/кг) с оценкой поведения через 15 дней после первого введения токсиканта приводило к существенному нарушению поведения крыс в «открытом поле». Так, в группе крыс, получавшей ССЦ, регистрировали снижение горизонтальной (в 3 раза) и исследовательской (в 2,5 раза) активности, практически подавление груминговых реакций (снижение более чем в 5 раз) и повышение эмоциональности (увеличение болюсов дефекации в 2 раза). Вертикальная активность при этом существенно не менялась.

Полипренолы при курсовом введении (14 дней) в целом нормализовали поведение крыс, при этом максимальные их эффекты отмечены при введении препарата в дозах 2,2 и 4,3 мг/кг, но не 11,6 мг/кг. Именно в этих дозах полипренолы восстанавливали горизонтальную двигательную (пересечение квадратов) и исследовательскую (норковый рефлекс) активность, нормализовали

эмоциональность животных. На груминговые реакции полипренолы не влияли. Адеметионин 300 мг/кг практически не менял ни одного из исследованных показателей.

Таким образом, полипренолы, в отличие от адеметионина, оказывают восстанавливающее (нормализующее) действие на поведение в открытом поле крыс, подвергнутых воздействию СС14. При этом максимальный эффект оказывали малые (2,2 мг/кг) и средние (4,3 мг/кг) дозы полипренолов.

СС14 (2000 мг/кг) нарушал поведение крыс в приподнятом крестообразном лабиринте через 14 дней после первого введения токсиканта. У крыс, получавших СС14, время пребывания в освещенных (открытых) рукавах лабиринта снижалось в 2,5 раза, число выглядываний из закрытых рукавов — в 4 раза, а число свешиваний с открытых рукавов платформы - в 10 раз. Это указывает на мощное анксиогенное действие токсиканта. В данном тесте ни полипренолы (2,2-4,3-11,6 мг/кг), ни адеметионин в исследуемых дозах не проявляли значимого анксиолитического (противотревожного) действия.

Следующим поведенческим тестом было изучение агрессии в тесте «чужак-резидент» у крыс. Двукратное введение СС14 (2000 мг/кг) с оценкой поведения через 15 дней после первого введения токсиканта вдвое снижало общительность крыс с умеренным растормаживанием системы «агрессия-защита» в тесте «чужак-резидент». Индивидуальное поведение животных при этом не менялось. Полипренолы (2,2-4,3-11,6 мг/кг) при курсовом введении в течение 14 дней нормализовали показатели коммуникативности и индивидуального поведения, а также снижали повышенную агрессивность с компенсацией системы защиты. Адеметионин также восстанавливал общительность, умеренно снижал агрессивность и полностью подавлял систему защиты. Следовательно, ропрен и адеметионин в тесте «чужак-резидент» проявляют умеренное антиагрессивное действие, при этом полипренолы по эффективности превышают адеметионин, включая высокую степень защиты (защитного поведения), а адеметионин подавлял этот показатель поведения.

Последним поведенческим тестом был плавательный тест Порсолта. Двукратное введение СС14 (2000 мг/кг) с оценкой поведения через 14 дней после первого введения токсиканта в 4 раза подавляло активное поведение, умеренно снижало пассивное поведение и вдвое повышало иммобилизацию крыс. Последний показатель (обездвиженность, или иммобилизация) является основным показателем теста и в данном случае указывает на появление у отравленных крыс типичного депрессантного поведения. Полипренолы во всех исследованных дозах (2,2-4,3-11,6 мг/кг) практически не меняли активного и пассивного плавания крыс, но восстанавливали иммобилизационное поведение вплоть до контрольного уровня. Адеметионин 300 мг/кг усиливал обездвиживающее действие СС14, не влияя на другие показатели теста Порсолта. Следовательно, полипренолы в дозах 2,2-4,3-11,6 мг/кг проявляют определенный антагонизм по отношению к СС14 в плавательном тесте Порсолта. Адеметионин подобным действием не обладает, усиливая действие четыреххлористого углерода в тесте Порсолта.

Влияние полипренолов и адеметионина на биохимические показатели крови крыс, подвергнутых воздействию ССЦ. Результаты биохимических тестов показали, что по таким показателям как холестерин, креатинин и мочевина исследованные группы крыс не отличались, что указывает на отсутствие влияния ССЦ и исследованных соединений (полипренолов и адеметионина) на метаболизм данных биологических субстратов. При этом выявлено умеренное снижение среднего показателя по общему белку в группе животных, которые подвергались воздействию ССЦ и получали полипренолы в дозе 2,2 мг/кг (р < 0,05). По-видимому, полипренолы в этой дозе на фоне действия CCI4 усиливали метаболизм белка в данной группе животных.

Достоверное повышение уровня глюкозы в группе животных, которые получали физиологический раствор и ССЦ, свидетельствует о неспецифическом влиянии ССЦ на метаболизм полисахаридов, либо за счёт нарушения функции печеночной паренхимы, либо вследствие функциональных нарушений со стороны поджелудочной железы, о чём свидетельствует достоверное повышение уровня а-амилазы в данной группе крыс (р < 0,05).

Значительное повышение уровня лактатдегидрогеназы у крыс, которые получали полипренолы и адеметионин, свидетельствует об индукции синтеза данного фермента в печёночной паренхиме указанными препаратами (возможно, не только в печени, но и других внутренних органах и мышцах). Снижение уровня билирубина в группах животных, подвергшихся воздействию ССЦ, может указывать на изменение уровня хилезности сыворотки или степени эмульгации предшественников билирубина под влиянием ССЦ. Значительное повышение уровня аспартатаминотрансферазы (ACT) в эксперименте свидетельствует о повреждающем влиянии ССЦ на печеночную паренхиму, однако, уровень аспартатаминотрансферазы в группе животных с максимально полученной дозой полипренолов (11,6 мг/кг), который не отличался от контрольных величин (интактный контроль), свидетельствует о выраженных гепатопротекторных свойствах данного вещества.

Кроме того, отмечено нормализующее действие полипренолов (2,2-4,3 мг/кг) и адеметионина (300 мг/кг) на активность у-глутамилтрансферазы, одного из основных маркеров поражения печени. Под влиянием адеметионина более чем в 3 раза возрастал уровень непрямого билирубина, что может указывать на нарушение им эвакуационной функции желчевыводящей системы.

Таким образом, полученные результаты биохимического анализа указывают, что полипренолы во всех дозах, но особенно в дозе 11,6 мг/кг и адеметионин в дозе 300 мг/кг обладают выраженными гепатопротекторными свойствами.

Влияние полипренолов и адеметионина на морфологическую картину печени на модели подострого гепатоза, вызванного ССЦ у крыс.

Введение полипренолов зависимо от дозы (2,2-4,3-11,6 мг/кг) защищало печень от токсического действия гепатотропного яда ССЦ. Так, в группе крыс, получавших ССЦ + полипренолы 2,2 мг/кг (группа 3), в печени на фоне нарушения балочного строения имелась паренхиматозная дистрофия в виде

белковой гиалиново-капельной формы, которая поражала гепатоциты всех печеночных долек на 2/3 их протяженности балок, местами захватывала дольки очагово в виде мелкокапельной жировой дистрофии, локализовалась перипортально, некроз гепатоцитов не наблюдался. В трактах определялась слабо выраженная мононуклеарная инфильтрация. В соответствие с балльной оценкой степени патогистологических изменений можно было констатировать 3-бальное поражение печени крыс данной группы - гистологические изменения соответствовали картине выраженной токсической паренхиматозной дистрофии печени. В группе крыс, получавших СС14 + полипренолы 4,3 мг/кг в печени еще не наблюдалось долек, имевших нормальное гистологическое строение. Дискомплексация балочного строения, сопровождавшаяся дистрофическими изменениями в виде белковой гиалиново-капельной и мелкокапельной жировой дистрофии, захватывала 1/2 - 3/4 протяженности гепатоцитов в дольках. Некроз гепатоцитов отсутствовал, лимфоидная инфильтрация портальных трактов носила слабо выраженный характер. Эти изменения соответствовали 2-3 бальному поражению печени и картине умеренной и выраженной паренхиматозной токсической дистрофии печени. В группе крыс, получавших СС14 + полипренолы 11,6 мг/кг, в печени также не наблюдалось долек, имевших нормальное гистологическое строение. Дискомплексация балочного строения, сопровождавшаяся белковой гиалиново-капельной и мелкокапельной жировой дистрофией, захватывала 1/3 — 1/2 протяженности гепатоцитов в дольках. Некроз гепатоцитов отсутствовал, лимфоидная инфильтрация портальных трактов носила слабо выраженный характер. Эти изменения соответствовали 2-бальному поражению печени и картине умеренно выраженной паренхиматозной токсической дистрофии печени (рис. 3).

Рис. 3. Печень крысы, получавшей СС14 + полипренолы 11,6 мг/кг (слева) Дискомплексация балочного строения, умеренные проявления дистрофии гепатоцитов. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение 200. Рис. 4. Печень крысы, получавшей СС14 + адеметионин 300 мг/кг (справа) Дискомплексация балочного строения, слабо выраженные проявления дистрофии гепатоцитов. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение 200.

И, наконец, в группе крыс, получавших СС14 + адеметионин 300 мг/кг, в печени регистрировали слабо выраженное поражение долек. В дольках наблюдалась дискомплексация балочного строения, сопровождавшаяся белковой гиалиново-капельной дистрофией на 1/3 протяженности гепатоцитов балок, в одном случае на 2/3 протяженности. Некроз гепатоцитов отсутствовал, лимфоидная инфильтрация портальных трактов носила слабо выраженный характер. Эти изменения соответствовали слабо выраженной паренхиматозной токсической дистрофии печени и преимущественно 1-бальному поражению печени (рис. 4).

Таким образом, после двукратного введения СС14 (2000 мг/кг) в печени крыс наблюдали морфологическую картину умеренной и выраженной белковой и жировой паренхиматозной дистрофии печени (гепатоза). В группе крыс, подвергшихся введению гепатопротекторов (полипренолов и адеме-тионина), морфологическая картина умеренной и выраженной белковой и жировой паренхиматозной дистрофии печени уменьшалась (улучшалась). При этом наименьшие проявления паренхиматозной дистрофии выявлены в группе крыс, подвергшихся введению адеметионина и полипренолов в дозе 11,6 мг/кг, что указывает на их гепатопротекторный эффект.

Влияние полипренолов и адеметионина на обмен моноаминов в структурах мозга крыс, подвергнутых воздействию СС14. Посылкой настоящего исследования явилось допущение, что при экспериментальном по-достром гепатозе, вызванном СС14, может развиваться токсическая энцефалопатия, приводящая к изменению обмена биогенных аминов в головном мозге. С этой целью с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с электрохимической детекцией анализировали обмен моноаминов в 3 структурах мозга, имеющих самое непосредственное отношение к двигательной (стриатум), эмоциональной (прилежащее ядро) и когнитивной (кора головного мозга) активности.

Схема метаболизма дофамина: дофамин (ДА) —> 3-метокситриптамин (3-МТ) —» 3,4-дигидроксифенилуксусная кислота (ДОФУК) —> гомованили-новая кислота (ГВК).

Схема метаболизма серотонина: серотонин (СЕР) —* 5-гидрокси-З-индолуксусная кислота (5-ГИУК).

Анализ показал, что введение СС14 и исследуемых препаратов (полипренолов и адеметионина) существенно не влияло на уровень медиаторов норадреналина, серотонина, а также 5-гидроксиуксусной кислоты (5-ГИУК) в прилежащем ядре, стриатуме и фронтальной коре, но меняло их обмен (метаболизм). В частности, однофакторный дисперсионный анализ показал различия в уровне гомованилиновой кислоты (ГВК) и отношения ГВК/ДА в прилежащем ядре между экспериментальными группами (группы 3 и 4, р=0,0009 и р=0,0457, соответственно). Так, введение СС14 умеренно снижало уровень ГВК. Полипренолы в дозах 2,2 и 4,3 мг/кг достоверно (приблизительно в 2 раза) увеличивали содержание ГВК в прилежащем ядре по сравнению с обеими контрольными группами (то есть, между группами 3 и 4 и

группой 1, р < 0,01, а также группой 2, р < 0,05 соответственно). Более наглядно это представлено на рис. 5.

Однофакторный дисперсионный анализ показал также различия в уровне ДОФУК и отношении ГВК/ДА в стриатуме между экспериментальными группами (группы 3 и 4 и группами 1 и 2, р=0,0412 и р=0,0390, соответственно). Полипренолы в дозах 2,2 и 4,3 мг/кг снижали содержание ДОФУК в стриатуме по сравнению с контрольной группой (р < 0,05).

РА АС В

ООРАС НУА

Рис. 5. Показатели обмена дофамина в прилежащем ядре крыс По оси ординат - уровень медиатора или метаболита (нмоль/г ткани); по оси абсцисс (латинскими буквами) - номер экспериментальной группы

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о разнонаправленном влиянии полипренолов на уровень ГВК и ДОФУК в прилежащем ядре и стриатуме соответственно, что в свою очередь может указывать на активацию мезолимбической дофаминергической системы (ответственна за подкрепление) и снижение активности нигростриатной дофаминергической системы (ответственна за двигательную активность). Однако, учитывая общую тенденцию к снижению отношения ДОФУК/ДА и увеличению отношения ГВК/ДА в обеих исследованных структурах можно думать об ускоренном обмене ДА в мозге под влиянием полипренолов, поскольку ДОФУК является промежуточным метаболитом ДА по отношению к ГВК, и/или смещению метаболизма ДА в сторону КОМТ-зависимого пути. Таким действи-

ем обладают некоторые нейролептики (включая атипичные), проявляющие свойства антагонистов рецепторов дофамина.

В то же время следует отметить, что адеметионин никаким образом не влиял на обмен ДА и норадреналина в головном мозге, но несколько ускорял обмен серотонина во фронтальной коре, умеренно повышая в ней уровень 5-ГИУК. Прежде всего, с помощью однофакторного дисперсионного анализа были найдены различия в индексе активности серотонинергической системы 5-ГИУК/СЕР во фронтальной коре между экспериментальными группами (группами 6 и 2, р=0,0157). При этом адеметионин достоверно (р < 0,05) увеличивал соотношение 5-ГИУК/СЕР по сравнению с группами, получавшими СС14, а полипренолы в исследуемых дозах лишь проявили тенденцию к повышению данного соотношения. Это может свидетельствовать о нормализующем влиянии обоих исследованных препаратов (адеметионина и поли-пренолов) на активность серотонинергической системы во фронтальной коре. Подобный эффект отмечен и в работе (Ротенко A.A. и др., 2006), когда при хроническом гепатозе, вызванном СС14, авторы регистрировали повышение уровня серотонина в целом мозге крыс.

Следовательно, можно заключить, что полипренолы помимо гепатопротекторных свойств, обладает выраженным центральным действием, которое заключается в умеренной психоактивации, главным образом за счет изменения активности дофаминергических систем мозга.

Заключение

Изучение влияния разных концентраций полипренолов на поведение интактных крыс показало, что они зависимо от дозы (4,3-8,6-13,4 мг/кг) при курсовом введении (5-7 дней) активируют горизонтальную двигательную активность при умеренном снижении всех других поведенческих паттернов (прежде всего, исследовательской активности и эмоциональности), не вызывают стереотипии, проявляют умеренную анксиогенную (тревожную) активность, подавляют индивидуальное поведение и общительность (коммуникативность) крыс, не оказывают антиагрессивного действия и вызывают умере-ный депрессантный эффект в тесте Порсолта. На системы внутримозгового подкрепления полипренолы действуют двухфазно, на первом этапе подавляя их и активируя при последующих введениях, что указывает на вовлечение дофаминергической системы мозга в эффекты полипренолов.

При оценке гепатопротекторного и нейропротекторного действия полипренолов в модели подострого гепатоза, вызванного СС14 у крыс, полипренолы (2,2-4,3-11,6 мг/кг, 15 дней) восстанавливали нарушенное токсикантом поведение, нормализовали биохимические показатели крови, морфологию печени и обмен моноаминов в головном мозге. Препарат сравнения адеметионин совпадал с действием полипренолов лишь в части эффектов.

Таким образом, сделан вывод, что полипренолы могут быть отнесены к перспективным современным средствам с выраженным центральным психо-активирующим действием и способностью защищать печень и другие внутренние органы от действия токсикантов типа четыреххлористого углерода.

ВЫВОДЫ

1. Полипренолы в дозах 4,3-8,6-13,4 мг/кг при их курсовом введении (5-7 дней) активируют горизонтальную двигательную активность при умеренном снижении всех других поведенческих паттернов (прежде всего, исследовательской активности и эмоциональности), мало влияют на тревожность, подавляют индивидуальное поведение и общительность (коммуникативность) животных, не выявляют антиагрессивного действия и оказывают умеренный депрессантный эффект на поведение.

2. Действие полипренолов на реакцию самостимуляции в камере Скин-нера зависит от продолжительности их введения. В первые дни введения они умеренно подавляют реакцию самостимуляции, затем эффект сменяется на умеренный психоактивирующий, который по мере введения препарата снижается. Кроме того, полипренолы не проявляют функционального антагонизма с психостимулятором фенамином, и на фоне их введения фенамин в полной мере развертывал свой психоактивирующий эффект.

3. Экспериментальный под острый гепатоз, вызванный ССЦ, является удобной моделью для оценки как гепатопротекторных, так и нейропротек-торных свойств, поскольку СС14 поражает печень и вызывает экспериментальную энцефалопатию у крыс.

4. В поведенческих тестах ропрен в дозах 2,2-4,3-11,6 мг/кг оказывает нормализующее действие на двигательную и исследовательскую активность, а также эмоциональность крыс, нарушенную ССЦ. Адеметионин 300 мг/кг такого действия не оказывает.

5. Полипренолы и адеметионин проявляют умеренное антиагрессивное действие, при этом полипренолы по эффективности превышают адеметионин, включая высокую степень защиты (защитного поведения), в то время как адеметионин подавляет этот показатель поведения.

6. Полипренолы в дозах 2,2-4,3-11,6 мг/кг нормализуют большинство показателей крови, нарушенных введением токсиканта СС14. Адеметионин умеренно нарушает эвакуаторную функцию печени, о чем свидетельствует повышение в крови непрямого билирубина.

7. Гепатопротекторное действие полипренолов 2,2-4,3-11,6 мг/кг и адеметионина 300 мг/кг заключается в нормализации морфологического повреждения печени при экспериментальном' гепатозе (белковой и жировой дистрофии), вызванном ССЦ. Максимальный гепатопротекторный эффект регистрируется при введении полипренолов в дозе 11,6 мг/кг и адеметионина в дозе 300 мг/кг.

8. Полипренолы в дозах 2,2-4,3-11,6 мг/кг оказывают выраженный нейропротекторный эффект, в основе которого лежит их способность повышать активность мезолимбической (прилежащее ядро) и нигростриатной (стриатум) дофаминергических систем в модели подострого гепатоза и токсической энцефалопатии у крыс. Адеметионин таким действием не обладает.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные данные позволяют использовать полипренолсодержащие препараты (ропрен) не только в качестве гепатопротекторов, но и для защиты других внутренних органов (поджелудочная железа, миокард, почки) от действия токсикантов.

В малых дозах (2,2-4,3 мг/кг) полипренолы обладают выраженным нейропротекторным действием, что не свойственно другим гепатопротекторам, например, адеметионину или препаратам расторопши.

Способность полипренолов нормализовать обмен моноаминов (дофамина и серотонина) в головном мозге может лежать в основе других их центральных эффектов, прежде всего, антидепрессантной активности.

Список основных работ по теме диссертации

1. Шабанов П.Д. Нейрохимическая организация подкрепляющих систем мозга / П.Д.Шабанов, А.Д.Ноздрачев, А.АЛебедев, В.АЛебедев // Рос. физиол. жури, им. И.М. Сеченова. - 2000. - Т.86, №8. - С.935-945.

2. Шабанов П.Д. Токсический подострый гепатоз с энцефалопатией у крыс: оценка защитных эффектов ропрена / П.Д.Шабанов, В.С.Султанов, В.И.Рощин,

B.А.Лебедев // Обз. по клин, фармакол. и лек. терапии. - 2010. - Т.8, №1. - С.78.

3. Шабанов П.Д. Эффекты полипренолыюго препарата ропрен при токсическом поражении печени и головного мозга у крыс: изучение функционального состояния печени, поведения и метаболизма моноаминов в мозге 1 П.Д.Шабанов, В.С.Султанов, В.АЛебедев и др. // Обз. по клин, фармакол. и лек. терапии. - 2010. - Т.8, №3. - С.8-31.

4. Шабанов П.Д. Эффекты полипренолов (ропрена) при токсическом гепатите и энцефалопатии / П.Д.Шабанов, В.С.Султанов, В.А.Лебедев, А.А.Байрамов // Актуальные проблемы химии природных соединений. Сб. тез. - Ташкент, 2010. -

C.81.

5. Шабанов П.Д. Влияние полипренольного препарата ропрена на дофамин-зависимые формы поведения крыс / П.Д.Шабанов, В.С.Султанов, В.АЛебедев,

A.АЛебедев // Обз. по клин, фармакол. и лек. терапии. - 2010. - Т.8, №4. -С.15-ЭЗ.

6. Shabanov P.D. Ropren, a polyprenol-containing drug, defends the liver and the brain in a rat model of subacute hepatosis with encephalopathy / P.D.Shabanov, V.S.Soultanov, V.A.Lebedev // New technologies in medicine and experimental biology. Int. Sei. Pract. Interdiscipl. Workshop. - Rio-de-Janeiro, Brazil, 2011. - P.39-40.

7. Шабанов П.Д. Оценка анксиолитических и антидепрессантных эффектов полипренолов после витального психогенного стресса у крыс / П.Д.Шабанов,

B.С.Султанов, В.А.Лебедев и др. // Инновации в современной фармакологии. Матер. IV съезда фармакологов России. - Казань; М.: Фолиум, 2012. - С.198-199.

8. Шабанов П.Д. Поведенческие и морфологические эффекты полипренолов в модели посттравматического стрессового расстройства у крыс / П.Д.Шабанов, Н.С.Бакунина, В.А.Лебедев и др. // Экология здоровья: Сб. тр., поев. 90-летию H.A. Држевецкой. - Ставрополь, 2013. - С.57-60.

Тираж 100 экз. Подписано в печать 15.04.2014 г. Формат 60x84'/i6 Объем 1,25 п.л., Заказ № 14/04. Типография «Фалкон Принт» (197101, г. Санкт-Петербург, ул. Большая Пушкарская, д. 54, офис 2)