Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Токсико-фармакологические свойства экстракта люцерны посевной

7? г •- п ~> »' I У и Л

3 О > ! П 1, ■

' и иь'и

На правах рукописи

КИРЕЕВА РАИСА МАСГУТОВНА

ТОКСИКО-ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ЭКСТРАКТА ЛЮЦЕРНЫ ПОСЕВНОЙ

14.00.25. - фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

УФА- 1996 г.

Работа выполнена в Башкирском государственном медицинском университете

Научный руководитель : доктор медицинских наук, профессор Х.М.Насыров Научный консультант: кандидат медицинских наук ,с.н.с. К.А.Лукманова

Официальные оппоненты: заслуженный деятель науки РФ д.м.н. профессор А.С.Саратиков д.м.н. профессор Ф.С.Зарудий Ведущая организация: Казанский государственный медицинский университет им. С.В.Курашова.

Защита диссертации состоится " _1996 г.в 'У часов

на заседании диссертационного совета К 084.35.02

при Башкирском государственном медицинском университете

(450000 г.Уфа улЛенина 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Башкирского государственного медицинского университета

Автореферат разослан

"Л6" СреЛр&ЛЛг 1996 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

профессор,

Э.Г.Давлетов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Одной из важнейших задач здравоохранения является всестороннее и полное удовлетворение потребностей населения в лекарственных средствах. В этом плане изыскание новых источников для получения эффективных лекарственных препаратов является актуальной проблемой для медицины.

С глубокой древности человек использовал естественные продукты флоры и фауны как источник облегчения своих недугов. Растения до сих пор остаются одним из немаловажных источников получения лекарственных препаратов различной направленности действия : сердечно-сосудистых, желчегонных, противоязвенных и других средств. Так , например, при лечении сердечно-сосудистых заболеваний препараты, получаемые из лекарственных растений составляют до 80 %, при лечении заболеваний печени и ЖКТ около 70 % (В.П.Георгиевский, 1990). Для изучения токсикологических свойств НПО "Иммунопрепарат " нам был предложен экстракт люцерны посевной (Medicago sativa L ), который был назван авторами "Эраконд". Способ получения экстракта люцерны запатентован (Патент № 1839621 и № 1839723). Люцерна посевная - одна из самых ценных высокобелковых многолетних культур. Она возделывается более чем в 80 странах всех континентов земного шара на площади, превышающей 35 млн. га (Б.Н.Вехов, 1978 ). Широкому распространению способствуют ее высокие кормовые достоинства. Люцерна посевная является ценнейшим сырьем для производства травяной муки, гранул, брикетов, сенажа, люцернового белкового концентрата. В зеленой массе люцерны посевной содержатся: белки, жиры, флавоноиды, клетчатка, безазотистые экстрактивные вещества, витамины (А, гр. В, С, Е, Д), минеральные вещества: кальций, фосфор, магний, железо, натрий, сера, хлор (Е.А.Мокеева, 1957 ). Кроме кормового значения велика агротехническая роль люцерны посевной. Она обогащает почву органическими веществами, усиливает жизнедеятельность микроорганизмов, закрепляет пахотный слой и защищает его от водной и ветровой эрозии (М.Ф.Лупашку, 1988). Однако влияние люцерны на организм мало изучено. Известны некоторые литературные данные о применении люцерны при ревматизме, рахите, при злокачественных новообразованиях, при гемералопии. Известны также ее диуретические, антидиабетические свойства и бактерицидная активность (О. Дабадаева, 1972; П.Д.Соколов, 1987).

Химический состав экстракта люцерны - эраконда представлен следующими биологически активными веществами: аминокислоты, уроновые кислоты, аминосаха-ра, углеводы, органические кислоты, флавоноиды, микроэлементы. В 10 % водном растворе эраконда аминокислоты составляют 11 мг/мл, рибоза 7,5 мг/мл; углеводы 60,8 мг/мл, аминосахара 3,7 мг/мл, уроновые кислоты 4 мг/мл, ионы 11 мг/мл, наибольшее количество составляют ионы натрия, кальция, калия (1; 2,5 ; 7 мг/мл соответственно).

Таким образом, биологически активные вещества, так широко представленные в этом растении, созданы природной лабораторией как бы исключительно для применения в медицинской практике. Учитывая вышеизложенное, мы занялись изучением токсико-фармакологических свойств экстракта люцерны, с целью экспериментального обоснования возможности применения его в медицине и ветеринарии.

Цель работы : Изучение токсико-фармакологических свойств экстракта люцерны посевной - эраконда.

В задачи исследования входило : 1.Изучение токсичности, безвредности, субстанции и лекарственных форм эраконда.

2.0пределение влияния эраконда на функциональное состояние печени.

3.Изучение влияния эраконда на процессы репаративной регенерации слизистой оболочки желудка и кожи.

4.Изучение некоторых механизмов действия эраконда.

Научная новизна и практическая значимость работы.

Впервые изучены токсико-фармакологические свойства эраконда - экстракта люцерны посевной. Установлено, что эраконд обладает гепатозащитной, противовоспалительной, ранозаживляющей, противоязвенной, анаболизирующей и иммунотропной активностью.

На основании полученных данных предложен новый гепатопротектор-эраконд, превосходящий эффект известного гепатозашитного средства силибора, обладающий противоязвенной и противовоспалительной активностью. Разработаны показания для таблеток и растворов эраконда при язвенной болезни желудка и 12 перстной кишки. Выявлена эффективность эраконда при ожоговой болезни, трофических язвах и пролежнях.

Внедрение результатов исследований

Материалы исследований представлены в ФК МЗМП Российской Федерации (1993 ). МЗ Республики Башкортостан утверждено временное наставление по применению препарата "Эраконд" на ограниченном контингенте больных при лечении язвенной болезни, трофических язв и ожогов (от 3/1X 93), управлением ветеринарии МСХ и продовольствия РБ утверждено временное наставление о применении эраконда в ветеринарии на территории Республики Башкортостан (от8/Х-93 ). Препарат апробирован на ограниченном контингенте больных, страдающих язвенной болезнью желудка, ожоговой болезнью и с трофическими язвами голени.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на Российской научной конференции "Создание лекарственных средств " (г.Москва, 1992 г.). Всероссийской научной конференции "Научная работа на кафедре как основа творческого роста преподавателя" (Волгоград, 1993 ), на проблемной комиссии БГМИ " Изыскание и изучение биологически активных веществ" (1993 ), на юбилейной научной конференции, посвященной 30-летию фармфакультета Тюменского медицинского института "Актуальные проблемы фармации" (Тюмень, 1994 ), на международном Симпозиуме "Роль иммунобиологических препаратов в современной медицине" (Уфа, 1995), на заседании Башкирского общества фармакологов (1996 ).

Публикации: По теме диссертации опубликовано 8 работ.

Структура и объем диссертации : Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания методов и материалов исследований, собственных исследований, заключения, выводов, списка использованной литературы, включающего источников 138 (из них 33 зарубежных). Диссертация иллюстрирована 27 таблицами, 8 рисунками, 3 фото. В приложении представлены в виде таблиц результаты изучения хронической токсичности эракон-да и его лекарственных форм на различных видах животных.

На защиту выносятся следующие положения диссертации : 1 .Эраконд обладает гепатозащитным действием.

2.Эраконд стимулирует репаративные процессы в коже и слизистой оболочке желудка.

3.Механизм гепатозащитного действия и стимуляции репаративной регенерации объясняется антиоксидантным, противовоспалительным анаболизирующим дейст-

вием, а также снижением активности ферментов цитолиза АдАТ, АсАТ и бета-галактоз идазы.

Материал и методы исследования

Изучена острая и хроническая токсичность, местнораздражающее, кожносенся-бшшзируюшее, эмбрио гоксическое и тератогенное действие, противовоспалительная и гепатозащитная активность, влияние на процессы репаративной регенерации и некоторые показатели иммунного ответа экстракта люцерны посевной -эраконда.

Эксперименты проводили на 640 белых мышах обоего пола массой 16,0 -20,0 и на 606 белых крысах массой 200,0 - 250,0, на 47 морских свинках, на 15 кроликах породы "Шиншилла" и на 9 беспородных собаках.

Острую токсичность субстанции эраконда изучали при введении внутрь и внут-рибрюшинно 51 мыши и 90 крысам. За животными вели наблюдение в течении 14 дней. Изучали также острую токсичность таблеток и 10 % мази на ланояино-вазелиновой основе. Результаты опытов обрабатывались по Литчфильду-Уилкоксону (М.Л.Беле-нький, 1963 ).

Хроническую токсичность субстанции и лекарственных форм эраконда изучали на 36 крысах линии "Вистар" в течении 60 дней, на 15 кроликах породы "Шиншилла", на 9 беспородных собаках при трехмесячной затравке препаратами в рамках требований ФКМЗ МП РФ.

Кожносенсибилизирующее действие изучали на морских свинках на модели внутрикожной сенсибилизации. Эраконд наносили в виде 10 % мази. Местнораздражающее действие изучали по конъюнктивальной пробе и по влиянию на кожу морских свинок 10 % мази эраконда при многократной аппликации.

Эмбриотоксическое и тератогенное действие эраконда изучали на крысах, разделенных на 4 группы по 4 самки и 1 самец в каждой. Наступление беременности определяли по выявлению сперматозоидов во влагалищном мазке. Для выявления эмбрио-токсического и тератогенного действия эраконда на 20 день беременных самок забивали под эфирным наркозом, извлекали матку, взвешивали матку с плодами, детское место. Определяли количество околоплодных вод, число плодов и количество рассосавшихся оплодотворенных яйцеклеток. Плоды рассматривали на предмет определения дефектов развития.

Влияние эраконда на функциональное состояние печени оценивали по снижению смертности мышей после подкожного введения средне-смертельной дозы ССЬ*. Средне

смертепьную дозу определяли предварительно у 18 мышей, сна составила 7,5 мл/кг 50 % раствора на растительном масле. Проведено 2 серии опытов на 280 мышах. В 1 серии опытов изучали влияние однократного введения внутрь препарата эраконда в дозе 1/10 от ЛД50 на смертность мышей от ССГ. 4. Во второй серии опытов изучали действие препаратов эраконда после их 10-ти дневного введения внутрь в той же дозе.

Желчесекреторную и желчевыделительную функции печени у животных оценивали по методике А.П.Скакуна и А.Н.Олейник (1967 ). О функциональном состоянии печени судили ло скорости секреции желчи (в мг/мин на 100,0 массы животного) и общему количеству выделенной желчи за каждый час и в сумме за 4 часа наблюдения.

Гепатопротекторное действие эраконда изучали на моделях тетрахлорметаново-го. алкогольного и тетрациклинового гепатита (С.М.Николаев, 1992 ). Для вызывания тетрахлорметанового гепатита 50 % масляный раствор гепатотоксина вводили подкожно 1 раз в сутки крысам в течение 4 дней из расчета 0,4 мл. в сутки на 100,0 массы тела. Тетрациклиновое поражение вызывали введением крысам в желудок тетрациклина в дозе 0,5 г/кг 1 раз в сутки в течение 5 дней. Алкогольный гепатит вызывали введением 48 % водного раствора этилового спирта в желудок 1 мл. на 100.0 массы 1 раз в сутки в течение 4 дней. Исследуемые препараты вводили начиная со 2-го дня дачи этилового спирта в течение 7 дней. Контрольные животные получали гепатотоксин и 1 % крахмальную слизь, интактные животные получали только 1 % крахмальную слизь.

В сыворотке крови спектрофотометрически определяли активность ферментов-маркеров цитолиза - АлАТ и АсАТ с помощью наборов "ЬасЬета". Билирубин и его фракции определяли диазометодом Йендрашика (Колб, Камышников, 1976). Активность лизосомального фермента бета-галактозидазы в гомогенате печени определяли по методу В.Ра1е1, А.Тарре! (1969). Гистологическое исследование печени проводили по общепринятой методике с окраской срезов гематоксилин - эозином, Суданом III, методом Ван-Гизон (Г.А.Меркулов. 1961). При микроскопическом исследовании учитывались следующие показатели: зернистая дистрофия гепатоцитов, степень склеротических изменений печеночной ткани, степень и распространенность жировой дистрофии, наличие лимфоидной инфильтрации, количество двухядерных гепатоцитов как косвенный признак регенерации.

Учитывая, что при токсическом гепатите активируются процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ), нами изучено влияние эраконда на ПОЛ, о чем судили по

изменению параметров хемилюминесценции гомогенатов печени и сыворотки крови (Ю.А.Владимиров, А.И.Арчаков, 1972) при С.СЬ4гепатите, по изменению уровня малонового диальдегида (МДА), активности супероксид- дисмутазы (СОД). МДА определяли по И.Д.Стальной и Г.Г.Гаршивили (1977). Активность СОД определяли но скорости изменения оптической плотности в ходе восстановления нитросинего тетразолия (НТС) в присутствии НАД В и феиазилметасульфата при длине волны 540 нм.

Противоязвенное действие изучали на модели перевязки пилоруса ("модель острых язв") и на модели язв желудка, вызванных внутрибрюшинным введением индо-метацина в дозе 20 мг/кг ("модель хронических язв").

Влияние зраконда на скорость регенерации кожи изучали на двух моделях: экспериментальная плоскостная рана и термический ожог у крыс. Об интенсивности ранозаживляющего действия судили по динамике уменьшения площади раневой поверхности (мм2) и величины сопротивления гранулирующей ткани. Величину сопротивления грануляционной ткани определяли с использованием прибора "Эпилар".

Анаболизирующее действие изучали на крысах по увеличению массы тела и m. levator ani, по изменению содержания белка в сыворотке крови и вышеуказанной мышце. Белок определяли по Lowri (1954 ).

Противовоспалительное действие субстанции и лекарственных форм эраконда изучали на модели каррагенинового отека лапок крыс и на модели вживления ватного тампона в подкожную клетчатку крыс (Ciroud J.P. et al. 1973; Meier R. et al. 1950 ).

Влияние эраконда на иммунную систему оценивалось по влиянию на количество АОК в селезенке по методу N.K.Erne и A.A.Nordin (1963 ), в модификации A.V.Cunningham (1965 ), на модели гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) к эритроцитам барана по Р.Н. Lagrange et al. (1974 ), на активность перитонеальных макрофагов с помощью спонтанного и индуцированного НСТ тестов и по фагоцитарной активности макрофагов и нейтрофияов относительно Candida albicans (Е.У.Пастер и др. 1989 ). Результаты опытов обработаны статистически с помощью - t критерия Стыодента (М.А.Беленький, 1963) и по Генесу.(В.С.Генес 1964). Достоверной считали разницу при Р < 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Установлено, что ЛД50 субстанции эраконда при внутрибрюшинном введении на мышах составляет 2700 (1742 + 4185) мг/кг, у крыс 2600 (2070 + 3276) мг/кг. По классификации К.К.Сидорова (1973 ) эраконд при внутрибрюшинном введении относится к V классу - практически нетоксичным веществам. При введении субстанции эраконда внутрь в дозах 2,25-7,5 г/кг крысам и от 3,0 до 7,5 г/кг мышам гибели животных не наблюдалось. Дальнейшее увеличение дозы было невозможным из-за увеличения объема вводимой жидкости. Животные хорошо переносят дозу 7500 мг/кг. Нами также изучена острая токсичность таблеток и 10% мази эраконда на ланолино-вазелиновой основе. Таблетки вводили внутрь в виде суспензии в дозах 5,0, 6,0, 7,5 г/кг. Мазь наносили в дозах Юг/кг, 15г/кг, 20 г/кг. Симптомов отравления и гибели животных не наблюдалось как при введении внутрь таблеток эраконда, так и при нанесении на кожу 10 % мази.

Таким образом, эраконд при введении внутрь по классификации Н.Ф.Измерова и др. (1977 ) относится к малотоксичным (IV класс) веществам.

Хроническую токсичность субстанции и лекарственных форм эраконда изучали на крысах, кроликах и собаках.

Масса тела крыс, получавших эраконд, статистически достоверно увеличивалась (Р < 0,02). Масса кроликов существенно не изменялась и имеющаяся прибавка веса по сравнению с исходными показателями находится в пределах физиологического роста. В показателях периферической крови изменения не обнаружены. Эраконд в течение 30 дней не влияет на функциональное состояние ЦНС, а при более длительном применении (3 мес.) препараты вызывают некоторое угнетение ЦНС. Препараты эраконда не изменяют показатели ЭКГ. Изучение влияния мази эраконда на кожу животных в динамике показало, что препарат при длительных аппликациях не оказывает местнораздражающего и кожносенсибилизирующего действия.

Эмбриотоксическое и тератогенное действие эраконда изучали на 16 крысах и 4 крысах-самцах, разделенных на 4 группы по 4 самки и 1 самец. Животные 1ой и 2 ой групп с момента спаривания ежедневно внутрь получали эраконд в дозе 270 мг/кг. Установлено, что эраконд не обладает эмбриотоксичностыо и тератогенностью, о чем свидетельствует незначительное количество рассосавшихся плодов, отсутствие дефектов развития плодов и отсутствие разницы в количестве плодов, в массах плодов, матки, детского места п объема околоплодных вод между опытной и контрольной группой.

Таблица 1

Влияние препаратов эраконда на выживаемость мышей при отравлении <"СЬ.

Препарат Доза мг/кг Кратность введения Количество выживших животных /число живых в опыте Уровень достоверности

Суб. эраконда 270 однократно 10/20 -

Таб. эраконда 270 однократно 12/20 -

Суб. эраконда 270 10-ти кратно 17/20 Р, для х-0,01

Таб. эраконда 270 10-ти кратно (6/20 Рк для х3 0,01

Контроль - - 9/20 -

Таблица 2

Влияние субстанции эраконда на желчесекрсторную функцию интактных крыс при однократном введении (п=6).

Препарат Доза мг/кг Скорость секреции желчи мг/мин на 100 г 1ч 2 ч 3 ч 4 ч Средняя скорость желчесек- реции мг/мин

Эраконд 50 3,970+0,17х 3,83+0,16х 3,55+0,23х 2,88+0,19х 3,55+0,18х

Силибор 50 3,4+0,17х 3,1+0,12 2,8-0,12х 3,0±0,12х 3,0+0,13*

Контроль Диет вода 2,5+0,15 2,9+0,13 2,1+0,17 2,2+0,12 2,4+0,14

Примечание: знаком "х"обозначено статистически достоверные результаты (Р<0,05 - 0,001).

Таблица 3

Влияние эраконда на желчесекреторнуго функцию крыс при экспериментальных моделях гепатита (п=6).

Препарат Доза мг/кг Скорость секреции желчи в мг/мин на 100,0 Средняя Общий вес

скорость желчи

1 ч 2 ч Зч 4ч мг/мин на 100,0 за 4 ч, мг/100,0

Эраконд (гепатит) 50 СС!4 гепатит 2,47+0,13х 592.8+25,3

2,52+0,19 2,4+0,07 2,54+0,14 2,42+0,13

Силибор (гепатит) 50 2,4+0,2х 1,8+0,3 1,8+0,3 2,0+0,3 2,0+0,21 500,0+55,0

Контроль (гепатит) крахмальная слизь 1,7+0,2** 1,5+0,2хх 1,7+0,г5« 1,6+0,2х* 1,6+0,2« 450,0+33,0хх

Интактные крахмальная слизь 2,5+0,2 2,9+0,1 2,1+0,1 2,2+0,1 2,2+0,12 790,0+80,0

Эраконд (гепатит) 50 Алкогольный гепатит 2,98+0,34х 717,0+46,73

3,43+0,52 2,93+0,2х 2,82+0,24х 2,74+0,34х

Силибор (гепатит) 50 3,1+0,3 2,2+0,2 2,2+0,3 1,6+0,2 2,3+0,2 535,0+30,0х*

Контроль (гепатит) крахмальная слизь 2,4+0,3 1,7+0,3« 1,4+0,Зхх 1,6+0,2« 1,8+0,2х* 438,0+45,0™

Интактные крахмальная слизь 3,8+0,9 3,4+0,6 2,8+0,2 3,2+0,2 3,3+0,2 787,0+110,0

Эраконд (гепатит) 50 Тетрациклчновый гепатит 3,8+0,41х 910,6+87,0х

3,8+0,51 3,7+0,35 3,96+0,33х 3,62+0,47х

Силпбор (гепатит) 50 3,7±0,3Х 4,9±0,6Х 4,3 ±0,4* 4,2±0,6* 4,3+0,4х 1022,0+48,0х

Контроль (гепатит) крахмальная слизь 2,6±0,4 2,7±0,4 2,2±0,1 2,0±0,3ХХ 2,3+0,2ХХ 651,0+80,0

Интактные крахмальная 3,82±0,86 3,95±0,68 2,77±0,2 3,2±0,4 3,3+0,3 787,0+110,0

слизь

Примечание: "х" обозначены статистически достоверные результаты по сравнению с контролем; знаком "хх" по сравнению с интактными животными.

-iu-

Влияние эраконда на функциональное состояние печени оценивали по снижению смертности мышей после подкожного введения средне-смертельной дозы CCL-t, что составляет 7,5 мл/кг 50 % раствора на растительном масле. Проведено 2 серии опытов. В первой серии опытов изучалось влияние однократного введения внутрь препаратов эраконда в дозе 1/10 от ЛД50 на смертность мышей при CCL4 гепатите. Во второй серии опытов изучалось влияние эраконда на указанный показатель после предварительного 10 - ти дневного введения его внутрь в той же дозе. Установлено, что однократное введение внутрь субстанции и таблеток эраконда не предотвращает гибели мышей от отравления CCL*. Десятидневное введение субстанции и таблеток эраконда статистически достоверно увеличивает выживаемость мышей от токсической дозы COL4 (Р для X2 < 0,01) (табл.1).

Далее изучали влияние субстанции эраконда на желчесекреторную функцию печени у ингактных животных с тетрахлорметановым, алкогольным и тетрациклиновым гепатитом по сравнению с известным гепатопротектором силибором. Установлено, что эраконд во все периоды наблюдения (4 часа) статистически достоверно увеличивает, дебит желчи у интактных крыс подобно силибору. (табл.2).

Изучение влияния эраконда при CCL 4 гепатите показало (табл.3), что при гепатите жеячевыделение подавляется во все сроки наблюдения (р < 0,05) Введение эраконда способствовало увеличению дебита желчи у крыс. Так, например, средняя скорость секреции желчи за 4 часа наблюдения при гепатите составило 1.6±0.2 мг/мин /100,0, после введения эраконда 2,47±0,13 мг/мин/- -/100,0 т.е. достигала уровня интактных крыс. При алкогольном и тетрациклиновом гепатите также уменьшается продукция желчи по сравнению с интактными животными. При введении эраконда наблюдается статистически достоверное увеличение скорости секреции желчи (табл.3), при алкогольном гепатите эффект эраконда оказался выше, чем у силибора.

Активность аминотрансффаз и уровень билирубина являются чувствительными индикаторами повреждения клеток печени, они повышаются при дисфункции печени, вызванной различными причинами (С.Д.Подымова, 1993 ).

Активность ферментов АлА'Г, АсАТ, содержание билирубина в сыворотке крови изучали при CCL4, алкогольной и тетрациклиновой моделях гепатита (табл.4). При всех моделях гепатита наблюдается выраженное повышение активности ферментов и содержания билирубина. Например, при ССЬ гепатите активность АлАТ увеличилась по сравнению с интактными крысами в 7 раз, АсАТ в 4.5 раза, содержание

Таблица 4

Изменения биохимических показателей в сыворотке крови крыс при экспериментальных моделях гепатита (п=6).

Препарат Доза мг/кг АлАТ АСАТ Общий билирубин

СС14 гепатит

1. Эраконд(гепатит) 50 0,34±0,01х'хх 0,13±0,05 3,83±1,59х

2. Силибор(гепатит) 50 0,19±0,02х 0,16±0,07х 6,20±2,57х

3. Контроль(генатит) Крахмальная слизь 1,33±0,07хх 1,68±0,12хх 18,83±1,95хх

4. Интактные Крахмальная слизь 0,19±0,04 0,37±0, ¡2 3,24±1,80

Алкогольный гепатит

1. Эраконд(геиатит) 50 0,64±0,02х'хх 8,0±3,22

2. Силибор(гепатит) 50 0,62±0Д0»< 0,64±0,02х'хх 8,2±2,6

3. Контроль(гепатиг) Крахмальная слизь 0,74±0,05хх 0,85±0,06х 13,5±2,0ХХ

4. Интактные Крахмальная слизь 0,19±0,04 0,37±0,12 3,24±1,8

Тетрациклиношй гепатит

I. Эраконд(гепатит) 50 0,44±0,08 0,76±0,08 5,33±0,35

2. Силибор(гепатит) 50 0,44±0,05 0,70±0,01 5,33±1,29

3. Контроль(гепатит) Крахмальная слизь 0,62±0,03хх 1,18±0,06хх 18,0±0,96хх

4. Интактные Крахмальная слизь 0,1910,44 0,37±0,12 3,24±1,8

Примечание: "хч обозначены статистически достоверные результаты по сравнению с контролем; знаком "хх" по сравнению с интактными животными.

билирубина в 5,8 раза. При введении силибора и эракопда при всех видах гепатита наблюдается выраженное снижение активности указанных ферментов (Р <0,05-0,001), а содержание билирубина доходит до уровня интактных крыс.

Лизосомальный фермент бета-галактозидаза имеет огромное значение для нормального функционирования организма, он участвует в расщеплении потерявших функциональное значение внутриклеточных структур и биополимеров, в гидролизе чужеродных гликопротеинов и гликолипидов (А.А.Покровский и др. 1976). С целью выяснения влияния эраконда на проницаемость лизосомальных мембран нами определялась общая и свободная активность бета-галактозидазы и вычислялось их процентное соотношение. Установлено, что процентное соотношение свободной активности фермента к общей в группе животных с гепатитом равнялось 57 %, а у животных, получавших эраконд и силибор эти показатели равны 49,6% и 33,7% соответственно, а в группе интактных животных они равны 29,8 %, что свидетельствует о нормализации проницаемости лизосомальных мембран эра-кондом лобилизованных при ССЬ 4 гепатите.

Таким образом, эраконд нормализует показатели ферментов цитолиза и билирубина при всех моделях экспериментального гепатита.

Изучение влияния эраконда на морфологию печени при ССЬ4 гепатите показало, что гистоструктурные изменения в печени животных контрольной группы ССЬ< гепатитом соответствуют картине жирового гепатоза. При этом, эраконд, подобно си-либору оказывает гепатозащитное действие, на фоне его применения уменьшается жировая дистрофия, увеличивается количество двухядерных гепатоцитов, что свидетельствует о высокой регенерационной способности печени крыс, получивших эраконд.

Влияние эраконда на процессы перекисного окисления липидов изучено на 3 сериях опытов. В первой серии опытов изучено влияние эраконда на параметры хеми-люминесценции в гомогенатах печени и сыворотке крови у интактных животных.

Установлено, что сыворотка крови и гомогенаты печени обладают определенным уровнем свечения и в этих биологических жидкостях определяется конечный продукт ПОЛ - малоновый диальдегид. Указанное свидетельствует о наличии свободно-радикальных процессов в печени и в сыворотке крови.

Однократное введение эраконда крысам обнаруживает лишь тенденцию угнетения процессов ПОЛ в печени и в сыворотке крови, а при 7 дневном введении наблюда-

Таблица 5

Показатели хемилюминесценции и уровень МДА в гомогенатах печени и в сыворотке крови крыс при СС1< гепатите

Препарат

Доза мг/кг

50

Эраконд (гепатит) Контроль (гепатит) крахмальная слизь

Интактные крахмальная

слизь

Эраконд (гепатит) 50

Контроль (гепатит) крахмальная слизь

Интактные

Показатели хемилюминесценцнн

Сп А Пи S <а В гомогенатах печени

8,0±0,68 40,0±3,7Х 20,0±1,3Х 81,0±6,1Х 53,0±3,1х

8,0±0,54 62,0±5,2 10,0±0,9 136,0±9,7 75,013,2х*

9,0±0,72 46,0±3,1 21,0±1,б 96,0±5,5 6б,0±2,7

В сыворотке крови

5,0±0,54 22,0±1,3Х 7,0±0,72х 28,0±2,3Х 45,0±3,9Х

6,0±0,72 36,0±2,3 3,0±0,36 55,0±3,4 77,0±4,2

6,0±0,54 26,0±1,8 9,0±0,8 35,2±2,7 50,0±2,7 .

МДА им/мг белка

0,540±0,08х 1,300±0,14

0,500±0,06

0,420±0,05х 0,950±0,07

0,400±0,04

крахмальная слизь

Примечание: Сп- спонтанное свечение; А - амплитуда; Пи - период индукции; Б - площадь светосуммы свечения; <а - угол наклона.

ется статистически достоверное угнетение параметров ХЛ и уровня МДА (Р<0,05 -0,001).

Учитывая способность эракоида угнетать процессы ПОЛ, нами проведена вторая серия опытов. Установлено, что лри гепатите резко активируются процессы ПОЛ: введение эраконда в течение 10 дней в дозе 50 мг/кт статистически достоверно угнетает процессы ПОЛ, о чем свидетельствует уменьшение амплитуды, индукции, угла наклона (а), удлинение периода индукции, а также уменьшение уровня МДА, повышенного при ОСЫ гепатите (табл. 5). В третьей, серии опытов изучали влияние эраконда на активность СОД в сравнении с силибором, при этом установлено, что при ССЬ4 гепатите резко снижается активность СОД (Р < 0,01), а введение силибора и эраконда способствует статистически достоверному повышению активности СОД (Р<0,05) до уровня показателей интактных животных, что свидетельствует о нормализации процессов ПОЛ, повышенных при ССЬ 4 гепатите.

Таким образом, одним из механизмов гепатозащитного действия является угнетение эракондом процессов ПОЛ.

Изучение противоязвенных свойств субстанции и таблеток эраконда показали высокую противоязвенную активность как на модели "острых" так и на модели "хронических " язв желудка. Субстанция и таблетки эраконда при введении внутрь статистически достоверно защищают слизистую оболочку желудка крыс подобно карото-лину от повреждающего действия желудочного сока, о чем свидетельствует уменьшение количества мелких и крупных язв. Так, например, в группе животных получавших субстанцию эраконда количество язв составило 3,0±0,12, получавших каротолин - 4.0±0.3, а в контрольной труппе эти данные составляют 15,0±1,2 (Р < 0,001). Кроме того, у опытных групп отмечалось слабое проявление сосудистых повреждений со стороны слизистой желуд ка. На модели индометациновых язв получены аналогичные результаты (Р для Х2< 0,01).

Препараты эраконда ускоряют репаратавные процессы не только на слизистой оболочки желудка, но и кожи: они ускоряют заживление экспериментальных ран и термических поражений кожи как при введении внутрь, так и при местном применении. При экспериментальных ранах, заживление раны в группе животных, получивших эра-конд внутрь было более интенсивным, чем в других группах. Гак, через неделю площадь раны у крыс в первой группе уменьшалась на 50 %, а в группах получавших эра-конд и метилурацил наружно - на 27 % и 22 % соответственно. В группах животных, по-

лучавших эраконд, раневая поверхность была чистая, сухая, заживление шло первичным натяжением. При ожоговой травме кожи крыс получены аналогичные данные.

Одним из механизмов стимуляции репаративных процессов слизистых оболочек и кож^кидимо является анабодизирующее действие эраконда, Эраконд, подобно известному анаболизанту мегилурацилу статистически достоверно увеличивает массу т. levator ani 241.6±9.17 мг, уровень белка в крови 0,7710,025 г/л, а в контрольной труппе эти данные равны 175.8±26,2 мг и 0,6210,045 г/л соответственно (Р<0,05), при этом наблюдалось увеличение прироста массы тела крыс на 37.513.2 г в ipynne животных, получавших эраконд, на 22.513,7 г в контрольной группе (Р <0,001). Препараты эраконда оказывают противовоспалительное действие, о чем свидетельствует угнетение ими каррагенинового воспаления лапок крыс (табл.6). Этот эффект более выражен для субстанции эраконда. Так, в контрольной группе животных прирост объема лапок составил 0,710,14 мл., а в группе животных, получивших субстанцию 0,210,05 мл. Эраконд угнетает экссудапганую и пролиферативную фазы воспаления, что показано в опытах с вживлением в подкожную клетчатку ватного тампона. При этом установлено угнетение зкссудативной и пролиферативной фазы воспаления. Ilpe-дполагаегся, что противовоспалительное действие эраконда будет иметь существенное патогенетическое значение при гепатитах, язвенной болезни и ожоговой болезни, трофических язвах, пролежнях, так как при указанных состояниях присоединяющиеся воспалительные явления отягощают их течение.

Таблица 6.

Влияние препаратов эраконда на воспаление лап крыс, вызванное каррагеиином (п=6).

Препарат Доза Прирост объема лапки в мл. через

в мг/кг 3 ч. 6ч. 24ч. 48ч . 72ч.

Таблетки эраконда 50 Субстанция эраконда 50 Ортофен 10 Контроль -

0.710,1

0.710.1

■ 0.210.05" 0,310,08" 0,2+0,05* 0.410.07 * 0,710,14 0,710,1

0.410.05 0.210.05 х 0

0,2510,07 * 0,2+0,05" 0

0.2810.05х 0.1510.03х О

0,510,07 0.4+0,07 15+0,03

Нами также установлено влияние эраконда на иммунный статус организ-ма.Устаиовлено.что эраконд вызывает недозозависимую супрессию антитеяогенеза при введении в индуктивную фазу, угнетение ГЗТ имеет место в обеих схемах введе-ния.но оно более выражено на этапе уже сформированнных Т-эффекторов. Предположение об активации Т- супрессоров не нашло убедительного подтверждения в опытах с различной интенсивностью антигенного стимула. Возможно.что эраконд нарушает кооперативные взаимоотношения между Т и В лимфоцитами на ранних стадиях иммуногенеза. Подавление реакции ГЗТ может быть следствием, выявленной нами ранее противовоспалительной активности эраконда. Не оказывая влияния на фагоцитоз, эраконд вызвал снижение функционально-метаболической активности макрофагов и нейтрофилов в индуцированном Candida albicans НСТ-тесте при курсовом введении. Последнее может быть связано с активацией эндогенных антиоксидантов или обусловлено собственной антиоксидантной активностью эраконда, поскольку снижение образования активных форм кислорода тормозит активность фагоцитов.

Проведенные исследования позволяют отнести эраконд к соединениям, обладающим иммуномодулирующей активностью.

Полученный нами иммуномодулирующий эффект препаратов эраконда будет существенно дополнять терапевтический эффект эраконда- как гепатопротектор-ного, противоязвенного, раиозаживляющего средства, ибо при указанных патологических состояниях наблюдаются серьезные сдвиги в иммунологическом статусе организма.

Выводы:

1. Эраконд - экстракт люцерны посевной при введении внутрь и внутрибрюшинно относится к малотоксичным вешесгвамЛекарственные формы эраконда (таблетки и мазь) относятся к практически нетоксичным веществам.

2. Субстанция и лекарственные формы эраконда при хроническом введении хорошо переносятся экспериментальными животными и не оказывают отрицательного влияния на организм.

3. Эраконд не обладает местнораздражающим, кожносенсибилизирующим, тератогенным, эмбриотоксическим действием.

4. Специфическая активность эраконда включает в себя противовоспалительный, анаболизирующий, иммуномодулирующий и антиоксидантный эффекты.

5.Лекарствепиые формы эраконца стимулируютрепаративные процессы слизистой оболочке желудка и кожи, что объясняется анаболизирующим, противовоспалительным и антиоксидантным эффектами.

6. Субстанция и табпетаи эраконда оказывают гепатозащитное действие, о чем свидетельствуют умемьшение смертности животных при остром отравлении CCL4. стимуляция жеячеобразоватеяьной функции гепатоцитов, нормализация активности ферментов АлАТ. АсАТ, бета-галактозидазы, билирубина и угнетение процессов ПОЛ, повышенных при CCL4, алкогольном и тетрациюпшовом гепатитах.

7. Гепатозащитное действие эраконда не уступает эффекту силибора.

Списокработ, опубликованных по теме диссертации. 1 .Изучение токсико-фармакологических свойств эраконда //Тезисы докл. Российской научной конф. "Создание лекарственных средств" М., 1992 с.236-237 / совместно с Х.М.Насыровым, Ю.Д.Давиденко, Р.А.Галимовой, С.М.Фридман, Н.И.Шигаевым, Р.М.Кондратенко/.

2.Изучение специфической активности субстанции и лекарственных форм триазола и эраконда //Научная работа на кафедре как основа творческого роста преподавания :Тез,докп.Всероссиской конф.-Волгоград, 1993.-C.85-86/совместно с С.М.Фридман, Х.М.Насыровым, Р.А.Галимовой. Ю.Д.Давиденко, Н.И.Шигаевым/.

3.Доклиническое изучение препарата эраконд //Проблемы фармации и фармакологии, подготовка и использование провиз.кадров : В матер, республ. научной конференции -Пятигорск, 1993,-с 58/совместно с Х.М.Насыровым, Г.Р.Иксановой, С.М.Фридман, Ю.Д.Давиденко, Р.А.Галимовой/.

4.Изучение гепатопротекторных желчегонных свойста среди синтетических л природных соединений //Межвузовская научно-практическая конф. Тез. Пермь, 1993 с.106 /совместно с Х.М.Насыровым, Н.В.Кудашкиной/.

5.Изучение гепатопротекторных свойств конденсированного растительного экстракта из люцерны //Сборник научных трудов, посвященных 30-летию фарм. факул. Тюменского мед. инст. -Тюмень, 1994 / совместно с Х.М.Насыровым, Т.Г.Нигматуллиным. 6-Study of immunotropic activity of plant origin substances /International Journal of immunoreabilitation on abstracts of the I international congress on immunoreabilitation 1994 Number 1 pi 15.

7.Клинико-экспериментальные исследования противоязвенного эффекта эраконда //Роль иммунобиологических препаратов в современной медицине: В кн., Матер. Меж-

-1Й-

дународного Симпозиума - г. Уфа, 1995/ совместно с К.А.Лукмановой, Х.М.Насыровым, С.М.Фридман, Г.Р.Иксановой, Н.М.Новиковым. Т.Г.Нигматуллиным, М.Х.Мухамадеевым, Д.М.Дмитриевым/. 8.Изыскание новых биологически активных веществ среди природных и синтетических соединений //Человек и лекарство.Конгресс, 10-15 апреля 1995. -Москва с.ЗЗ /совместно с Х.М.Насыровым, Л.С.Громаковой, С.М.Фридман, Г.Р.Иксановой, Г.Г.Мингазовым, Г.М.Латыповой, Ю.Д.Давиденко, Р.А.Галимовой/.

Подписано к печати 14.02.93. г. Формат 50x84 1/16. Уч.-иг.л. I. Тираж 100 зкэ. Заказ № 10 Ротапринт БГ?;У