Разработка состава, технологии и стандартизация суппозиториев с экстрактом люцерны густым "Эраконд"

Джангирянц, Алиса Витальевна

Диссертации по фармакологии → Технология лекарств и организация фармацевтического дела

Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Разработка состава, технологии и стандартизация суппозиториев с экстрактом люцерны густым "Эраконд"

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Джангирянц, Алиса Витальевна Пермь 2002 г.

Ученая степень: кандидата фармацевтических наук

ВАК РФ: 15.00.01

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Разработка состава, технологии и стандартизация суппозиториев с экстрактом люцерны густым "Эраконд"

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ПЕРМСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ

РАЗРАБОТКА СОСТАВА, ТЕХНОЛОГИИ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ СУППОЗИТОРИЕВ С ЭКСТРАКТОМ ЛЮЦЕРНЫ ГУСТЫМ «ЭРАКОНД»

15.00.01 - Технология лекарств и организация фармацевтического дела 15.00.02 - Фармацевтическая химия, фармакогнозия

11 ДПР ш

ДЖАНГИРЯНЦ Алиса Витальевна

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Пермь -2002

Диссертационная работа выполнена на базе Пермской государственной фармацевтической академии.

Научный руководитель:

Кандидат фармацевтических наук, доцент Решетникова М.Д. Научный консультант:

Доктор фармацевтических наук Мухамеджанова Д.М. Официальные оппоненты:

Доктор фармацевтических наук, профессор Красшок И.И. Доктор фармацевтических наук, профессор Ярыгина Т.Н.

Ведущая организация - Курский государственный медицинский университет

Защита состоится « 26» марта 2002 г. в «13» час. На заседании диссертационного совета Д 208.068.01 при Пермской государственной фармацевтической академии по адресу: г. Пермь, ул. Ленина, 48.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пермской государственной фармацевтической академии по адресу: г. Пермь, ул. Крупской, 46.

Автореферат разослан «26» февраля 2002 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, л

кандидат фармацевтических наук, доцент Метелева Е.В.

Р Z <?2 . r-rY^cjefi О

Pzfz.sz^o

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В последнее десятилетие по всем мире, особенно в экономически развитых странах, четко прослеживается тенденция неуклонного роста гинекологических и проктологических воспалительных заболеваний, что обусловлено целым рядом факторов, как социально-экономического, так и медицинского характера.

Удельный вес проктологических патологий в структуре болезней органов пищеварения составляет 13,6%. Воспалительные заболевания женских половых органов занимают первое место в структуре гинекологической заболеваемости.

* Лечение гинекологических и проктологических заболеваний, их профилактика предусматривает применение значительного ассортимента лекарств внутрь, подкожно, внутривенно или местно в виде, примочек, мазей, линиментов, присыпок, суппозиториев.

Ректальный путь введения лекарственных веществ является одним из оптимальных в медицинской практике, так как суппозитории обладают высокой биологической доступностью, удобством применения и безболезненностью. Однако их номенклатура весьма ограничена, многие из них не отвечают требованиям по эффективности и широте терапевтического действия.

В этой связи значительный интерес представляет расширение ассортимента лекарственных средств, применяющихся для местного лечения гинекологических и проктологических заболеваний.

Одной из перспективных в этом отношении является экстракт люцерны густой, разработанный сотрудниками НВП «АПТ-Экология», г. Екатеринбурга, обладающий ценными фармакологическими свойствами.

Все вышеизложенное свидетельствует об актуальности создания суппозиториев с Эракондом и их внедрения в фармацевтическую и медицинскую практику.

Цели и задачи исследования. Целью работы явилась разработка научно-обоснованного состава и технологии суппозиториев с Эракондом, обеспечивающих максимальную биологическую доступность и стабильность при хранении.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

- теоретически обосновать и экспериментально разработать методики стандартизации оригинального отечественного экстракта люцерны густого,

- разработать состав и осуществить технологические, биофармацевтические, фармакологические исследования суппозиториев с Эракондом,

- разработать методики идентификации и количественного определения действующих веществ в суппозиториях;

определить влияние суппозиторных основ на процессы высвобождения биологически активных веществ Эраконда in vitro;

- изучить токсическое и местнораздражающее действие полученных суппозиториев с Эракондом;

- установить оптимальные условия и сроки хранения суппозиториев; ■

- разработать проекты Фармакопейных статей предприятия (ФСП) на экстракт и суппозитории, Методические рекомендации по изготовлению и контролю качества суппозиториев с Эракондом в аптеке.

Научная новизна исследования.

На основании фитохимического анализа в качестве тестируемого компонента для определения подлинности и количественного определения экстракта люцерны густого предложены изофлавоноиды (ононин).

Разработаны методики качественного анализа изофлавоноидов экстракта люцерны густого с помощью бумажной хроматографии и количественного определения хроматоспектрофотометрическим методом, обеспечивающие единый методический подход к стандартизации на основе сквозного использования методов анализа в экстракте и суппозиториях на его основе.

На основании технологических, биофармацевтических и фармакологических исследований созданы эффективные суппозитории с Эракондом, рекомендуемые в качестве противовоспалительного и ранозаживляющего средства при лечении гинекологических и проктологических заболеваний воспалительного генеза.

Впервые предложено для проведения биофармацевтических исследований по определению биологической доступности и изучению кинетики высвобождения ЛВ из суппозиториев использовать метод кондуктометрии.

Практическая значимость и внедрение результатов исследования.

Разработаны стабильные суппозитории с экстрактом люцерны густым Эраконд, приготовленные на основах полиэтиленгликолей и твердых кондитерских жиров, удовлетворяющие требованиям НД.

В результате осуществления комплекса научных исследований разработаны:

проект ФСП на экстракт люцерны густой Эраконд;

проект ФСП на суппозитории с экстрактом люцерны густым;

Методические указания по изготовлению и контролю качества

суппозиториев с экстрактом люцерны густым Эраконд в аптеке;

Заявка на патент (приоритетная справка № 2001129777 от

06.11.2001г.).

Результаты исследования используются в учебном процессе:

- на кафедре фармацевтической технологии ПГФА на 4 и 5 курсе очного факультета, к интернатуре, на факультете дополнительного профессионального образования провизоров {акт внедрения от 29.10.01 г.).

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на III Международной конференции по восстановительной медицине в Москве в декабре 2000 г.; VII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство», 2001 г.; Научно-практической конференции ПГФА в октябре 2001 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ, подана заявка на патент.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертация выполнялась в соответствии с тематикой научных исследований Проблемной Комиссии АМН РФ «Фармация», секции «Фармацевтическая технология и биофармация», и планом научно-исследовательской работы ПГФА по проблеме 10.06 «Фармация» (номер государственной регистрации 01.91001873).

Положения, выдвигаемые на защиту;

- результаты фитохимического изучения, стандартизации и фармакологического исследования оригинального отечественного экстракта люцерны густого Эраконд;

- результаты комплекса технологических, биофармацевтических я фармакологических исследований суппозиториев с Эракондом.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 105 страницах машинописного текста, содержит таблиц и jj£ рисунков. Работа состоит из введения, обзора литературы, 3 глав экспериментальных исследований, выводов, списка литературы и приложения. Список литературы включает (fá источников, из них 5& на иностранных языках. В приложении даны материалы по внедрению.

Во введении сформулированы актуальность, цель и задачи исследования, показаны научная новизна и практическая значимость результатов исследований, объем и структура диссертации, положения, выносимые на защиту.

В обзоре литературы (Глава 1) представлены сведения о проблеме лечения гинекологических и проктологических заболеваний, о перспективах использования ректального пути введения, о состоянии исследований травы люцерны посевной.

Глава 2 посвящена характеристике объектов (лекарственных и вспомогательных веществ) и методов исследования.

В главе 3 изложены данные по фотохимическому анализу, стандартизации и фармакологическому исследованию экстракта люцерны густого Эраконд.

В главе 4 представлены результаты поиска состава, технологии, стандартизация и исследования безвредности суппозиториев с Эракондом.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Фотохимическое исследование экстракта люцерны густого -

Эраконд

Основным объектом исследования служили промышленные серии Эра-конда (ТУ 494К-А042-006-97) - экстракта растительного конденсированного из люцерны посевной Medicago sativa, семейства Fabaceae - бобовых.

Согласно литературным данным в люцерне посевной содержатся феноль-ные соединения, аминокислоты и др. биологически активные вещества (БАВ). В Рвязи с этим нами проведен фотохимический анализ экстракта.

Для идентификации фенольных соединений экстракта люцерны густого Эраконд использовали метод восходящей хроматографии на бумаге марки «С» в сравнении со стандартными образцами и с помощью качественных реакций.

С целью установления вида необходимого экстрагента для извлечения БАВ из экстракта Эраконд проводилась обработка навески экстракта водой очищенной и этанолом различной концентрации (40, 50, 60, 70, 80, 90 %) при нагревании на водной бане в течение 10 минут с последующей фильтрацией растворов. Установлено, что оптимальным экстрагентом, обеспечивающим максимальное количество идентифицируемых на хроматограммах веществ, являете« 70 % этанол.

В качестве систем изучены 1 - бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:2) и II -уксусная кислота- вода (15:85). При хроматеграфировании извлечения со стандартными образцами (руган, кверцетин, апигенин, кофейная кислота, изоско-полетин, бергаптен, кумарин, умбеллиферон, 4-метил-7-оксикумарин и ононин) обнаружено 4 пятна фенольной природы, имеющих в УФ свете при длине волны 360 нм: одно - сине-фиолетовую, два - коричневую, одно - голубую флуоресценцию.

Для повышения достоверности хроматограмдга обрабатывали хромоген-ными реактивами: 25 % раствором аммония гидрокенда, 2 % спиртовым раствором алюминия хлорида и диазореактивом Паули (диазотированная сульфа-ниловая кислота).

Качественные реакшш на изофлавоноиды проводили после элюирозания их с хроматограмм 70%-ным этанолом. Наблюдали желтое окрашивание при добавлении 10%-ного раствора аммиака, зеленовато-желтое с 2 %-ным раствором алюминия хлорида.

Исследование аминокислотного состава проводили на аминокислотном анализаторе Biotonic LС 5001 (Германия) с использованием внутреннего стандарта на кафедре биологии Курского медицинского университета.

Как следует из таблицы I, Эраконд содержит 15 аминокислот из которых 7 незаменимых. Суммарное содержание всех аминокислот (свободных и связанных) составило 7,53 %, незаменимых - 2,92 %.

Таблица I

Результаты определения аминокислотного состава экстракта люцерны __густого__

№№ Аминокислота Связанная, % Свободная, %

1. аспарагиновая 0,908 0,129

2. треонин* 0,501 0,021

3. серии 0,463 0,023

4. глютаминовая 0,777 0,007

5. глицин 0,239 0,004

6. алаяин 0,508 0,021

п / . валин* 0,516 0,037

8. метионин* 0,246 0,015

9. изолейцин* 0,131 0,091

10. лейцин* 0.271 0.082

П. тирозин 0,078 0,011

12. фенилалашн* 0,105 0,024

1 -> Ь. лизин* 0,843 0,039

14. гистидин 0,452 0,015

15. аргинин 0.942 0,026

Общая сумма аминокислот 6,980 0,545

Сумма незаменимых 2,613 0.308

* - незаменимые аминокислоты

Известно, что в экстракте люцерны посевной густом содержатся гумино-вые кислоты. Для их идентификации экстракт обрабатывали при нагревании 1 % раствором натрия гадроксила, затем 6н раствором кислоты хлористоводородной. Доказательством наличия гуминовых кислот являлось образование темно - коричневого хлопьевидного осадка.

Таким образом, в экстракте люцерны густого Эраконд подтверждено наличие фенольных соединений: оксикумаринов (умбеллиферон), гликозидов флавоноидов (рутин), производных флавона (апигенин), изофлавоноидов (оно-нин); аминокислот и гуминовых кислот.

Согласно ТУ «Биологически активная добавка Эраконд» количественное определение Эраконда проводилось по содержанию гуминовых кислот трудоемким и длительным гравиметрическим методом.

Нами изучена возможность применения спекгрофотометрического метода количественного определения изофлавоноидов, в силу того, что они доминируют на хроматограмме и хорошо идентифицируются без проявления по сине - фиолетовой флуоресенции.

Для выделения изофлавоноидов полученное с помощью 70% этанола извлечение из экстракта предварительно хроматографировали. Пятна изофлавоноидов идентифицировали в УФ-свете, вырезали и элюировали дробным экстрагированием 70% этанолом, элюаты объединяли.

Выбор аналитической длины волны проводили путем спектрофотометри-рования элюата в интервале от 220 до 400 нм с помощью спектрофотометра СФ-46 (рис. 1). Установлено наличие двух максимумов поглощения при 260 и 340 нм, более интенсивный пик наблюдался при 260 нм, что совпадает с максимумом поглощения ононина.

Содержание изофлавоноидов в экстракте люцерны густом Эраконд рассчитывали с использованием удельного показателя поглощения ононина (Н1%! см - 645). При расчетах, для получения достоверных результатов, вводили поправочный коэффициент на неполное элюирование изофлавоноидов с бумаги, определенный экспериментально рехрома-тографированием (Кп=1,15).

Таблица 2

Метрологическая характеристика определения суммы изофлавоноидов в

Рис 1. Спек-1?з.1кяташофтавоко>ио8 из экстракта люцерны пегого

400 НО

Днша волны, нм

I N 1 х х \ ^ 5 Бх 1

1 6 1 3,17 0,38 | 0,3322 0,3642 0,1487 ] ±4,68

Количество изофлавоноидов в экстракте люцерны густом - Эраконд составило 3,17 % (табл. 2). Относительная ошибка определения (е) 4,68 %, что свидетельствует о достоверности и воспроизводимости метода.

В связи с тем, что существующие ТУ «Биологически активная добавка Эраконд» не учитывают перспектив внедрения субстанции в медицинскую практику, необходимо разработать нормативную документацию, позволяющую использовать Эраконд для введения в лекарственные формы.

Стандартизацию экстракта люцерны густого Эраконд густого проводили согласно требованиям ГФ XI издания и приказа X« 82 от 29.02.2000 г. по показателям: внешний вид, подлинность, содержание изофлавоноидов, рН водного раствора, потеря в массе при высушивании, сухой остаток, содержание тя-гкелых металлов, массовая доля золы и микробиологическая чистота.

Таблица 3

Наименование | Норма показателя 1 Характеристика

1. Внешний вид : Твердая или пластическая мас-] са, монолитная или кусочками Соответствует

2. Цвет От коричневого до черного Соответствует

3. Вкус ! Горьковато-кофейный Соответствует

Продолжение таблицы 3

4. Запах Специфический, подобный черносливу Соответствует

5. Растворимость Растворяется в воде за 45 мин не менее 75%, мало растворим в 96% этиловом спирте Соответствует

6. Подлинность БХ в системе растворителей уксусная кислота-вода (15:85) Пятно с сине-фиолетовой флуоресценцией около 0.06

7. Содержание изо- ; флавоноидов, % 3,17 - 0,15

8. рН водного раствора 4,8-5,4 4,93±0,10

! 9. Потеря в массе при ; высушивании, % не более 20 18,4Ч),3 I

10. Сухой остаток, % не менее 80 92,б±0,2

■11. Тяжелые металлы, % не более 0.01 менее 0,01

12. Массовая доля зо- ; лы, % ! 15-27 21,6+0,5

13. Микробиологиче-екая чистота ; - Мезофильных аэробных и факуль- ; тативно -анаэробных < микроорганизмов, : КОЕ/г. - Дрожжевых и плесневых грибов. КОЕ/г. Бактерий группы ; кишечных палочек | (коли-формы), вОД г. | - Патогенных мик- 1 роорганизмов, в Т.Ч. ; сальмонелл, в 10 г. ! Не более 10' Не более 10' , ! | Не допускается | | Не допускается > 1 1 1 30 1 12 ! Не обнаружено Не обнаружено

Результаты определения, приведенные в таблице 3, свидетельствуют о доброкачественности экстракта и могут использоваться для подтверждения стандартности Эраконда.

Изучение биологической безвредности экстракта люцерны густого Эра-конд, проведенное в соответствии с методическими рекомендациями по изучению общетоксического действия фармакологических средств в лаборатории побочного действия лекарств НПО «ВИЛАР» под руководством к.м.н. Шка-

рчнкс-ва A.A., позволило отнести субстанцию к мало или практически нетоксичным при введении внутрь и накожной аппликации соединениям.

Экспериментально в опытах in vivo по стандартным методикам установлено наличие противовоспалительного и ранозаживлянннего действия экстракта в дозах 50 и 150 мг/кг соответственно.

Таким образом, установленные экспериментальные данные указывают на перспективность освоения широкого промышленного выпуска оригинального экстракта люцерны густого Эраконд по новым технологиям и создание на его основе лекарственных форм.

2. Разработка состава и технологии суппозиториев с Эракондом

Свыше 40% лекарственных средств, используемых в медицине, приходится на препараты растительного происхождения. Разработка препаратов из растительного сырья, обладающих малой токсичностью и не оказывающих побочного действия при длительном применении остается перспективным и в настоящее время.

Кроме того, в последние несколько лет, как за рубежом, так и в нашей стране отмечено значительное увеличение воспалительных гинекологических и проктологических заболеваний, что обуславливает актуальность создания суппозиториев на основе экстракта люцерны густого Эраконд, обладающего выраженным противовоспалительным и ранозаживляюшим действием.

С этой целью проведен комплекс исследований, включающий: выбор оп--имального состава суппозиториев на основании технологических, биофармацевтических и физико-химических показателей; разработку рационатьной технологии и оценку качества разработанных суппозиториев, согласно требованиям НД; установление сроков годности; изучение специфической активности и биологической безвредности суппозиториев с экстрактом люцерны густым Эраконд.

В качестве суппозиторных основ изучено 23 композиционных состава, представляющих собой сочетание гидрофобных основ (твердый кондитерский жир - ТКЖ, Витепсол W-35, Н-15, Суппорин М, Массупол-15, в сочетании с поверхностно - активными веществами (эмульгатор № 1, Т-2, моноглицериды дистиллированные - МГД, твин-80, димексид), а также гидрофильных основ (пол изтиленгд и коли ~ 4000, 1500. 400 - ПЭГ, желатино-глицериновая основа -ЖГО). Терапевтическая концентрация Эраконда выбрана в соответствии с результатами исследования противовоспалительной активности.

Получение с>ппозиториев проводили методом выливания в металлические разъемные формы массой 2,0 для гидрофобных и 2,5 для гидрофильных основ по технологической схеме, представленной на рис. 2.

По внешнему виду и времени полной деформации требованиям ГФ XI издания соответствовали 6 составов, используемых для дальнейших исследований.

ВР 1.1. Отвешивание суппози-торной основы

ВР 1.2. Отвешивание и растворение Эрахонда

ВР 1.3. Подготовка суппозитор-иой формы

ТП 2.1. Расплавление суппози-торной основы

, ТП 2.2. Растворение Эраконда в | ! воде очищенной

ТП 2.3. Смешивание раствора Эраконда с димексидом

торной основой

| ТП 2.5. Выливание суппозитор-| ной массы в формы

| ТП 2.6. Охлаждение в морозиль-; ной камере

■ ТП 2.4. Смешивание раствора : Эраконда и димексид с суппози- I

| ТП 2.7. Извлечение суппозитори- [ ^_ : ев из формы

УМО 3.2. Упаковка, маркировка ■ и оформление суппозиториев

Меха-

ниче- |

ские |

потери |

ТП 2. Приготовление суппозиториев

УМО 3. Упаковка, маркировка и оформление готовой продукции

Готовая продукция

Рис. 2. Технологическая схема получения суппозиториев с Эракондом

300 Время, мим

Рис. 3. Кинетические кривые высвобождения Эраконда нз суппозиториев в агаровый гель

Биофармацевтические и фармакокинетические исследования суппозиториев с

Эракондом

В настоящее время с целью оценки эффективности и качества суппозиториев уделяется большое внимание изучению процессов высвобождения, всасывания и биодоступности. Методы определения биофармацевтических показателей качества суппозиториев постоянно совершенствуются. Нами проведено изучение биологической доступности in vino методом диффузии в агаровый гель и методом диализа через полупроницаемую мембрану со спектрофотометри-ческим контролем высвобождения с целью выбора оптимальной композиции суппозиториев с Эракондом (рис. 3, 4).

По полученным данным установлено, что наибольшей степенью высвобождения обладают составы на ПЭГ, ТЮК, массупо-ле и суппорине. Определение высвобождения Эра-кенда из ЖГО с применением спектрофотометриче-ского метода представляется невозможным ввиду малых количеств препарата в диализате.

В связи с этим нами исследована возможность использования менее трудоемкого и более информативного кондуктометриче-ского метода. Применение кондуктометрии возможно для определения только проводников ионного типа диссоциирующих в воде с образованием ионов, каковым является Эраконд.

Удельную электропроводимость акцепторной фазы (вода) измеряли с помощью кондуктометра марки КЭЛ-1М и кондукгометрической ячейки (постоянная ячейки 0,1061), через определенные промежутки времени (60; 120; 180; 240 и 300 мин.). В ходе эксперимента система термостатировалась при температуре 37+2°С. Перед замером акцепторную фазу перемешивали.

Рис. 4. Кинетические кривые высвобождения Эраконда нз суппозиториев через полупроницаемую мембрану

!4 о 'sa Время, мин

жго

пэг ! ткж ; Массу пол; Вотспсоя | Суппорин.

Время, чин

Рис. 5. Кинетические кривые высвобождения Эраконлл ш суппозиториев с кондуктометрическ-нм контролем

Наибольшая степень высвобождения наблюдается из суппозиториев на гидрофильных основах: 91 % на ЖГО, 73 % на ПЭГ (рис. 5)., а также на основах ТКЖ (55 %) и массупол (50 %).

Таким образом, результаты изучения доступности Эраконда из суппозиториев коррелируют с данными, полученными ранее.

На основании проведенных исследований нами выбраны композиции на основе ТКЖ и ПЭГ. Жела-тино-глицеринозая основу рекомендуется использовать для приготовления суппозиториев в аптечной практике. Суппозитории на массуполе исключены нами ввиду

отсутствия основы для дальнейших исследований.

Количественный анализ факторов, определяющих кинетику растворения суппозиториев, является сложной и актуальной физико-химической задачей, решение которой осуществлено нами с помошью кондуктометрического метода на примере гидрофильных основ (ПЭГ и ЖГО).

При регистрации электрической проводимости раствора установлено, что при равных условиях проведения эксперимента с увеличением времени значение удельной электропроводимости зозрастает для обеих основ, однако высвобождение ЛВ происходит быстрее из суппозиториев на основе ПЭГ (они полностью растворяются через 30 мин), на желатино-глицериновой основе через 65

мин. На основании полученных результатов нами рассчитана скорость растворения суппозиториев, представленная на рис. 6. Для суппозиториев на ПЭГ основе она проходит через один максимум, резкое возрастание скорости наблюдается в начальный момент времени, снижение ее объясняется уменьшением количества БАВ в суппозитории и „ , > „ врем», .««и тормозящим влиянием уже рас-

Рие. 6. Зависимость скорости растворения г г

суппошторнеа с Эракондоч от времени ТБОреННЫХ ВеЩеСТВ.

Кривая скорости растворения желатино-глицериновой основы имеет несколько максиму мов. Это может быть объяснено тем, что сначала поверхностные слои основы набухают, а затем растворяются, высвобождая действующие вещества. Затем набухают и так же растворяются нижележащие слои основы и т.д. Константа скорости растворения: для ПЭГ основы составила 0,07 мин"1, для желатиноглийериновой основы - 0,03 мин"1.

При построении графика зависимости 1п С от времени наблюдалась прямая зависимость. Таким образом, экспериментальные данные показали, что высвобождение Эраконда из суппозиториев на гидрофильных основах относится к реакции первого порядка.

Стандартизация суппозиториев с экстрактом люцерны густьш-

Эраконд

Стандартизация проводилась для суппозиториев двух составов:

ТКЖ 62,5 ПЭГ 4000 63,0

МГД 8,3 ПЭГ 400 9,3

Димексид 6,6 Вода 0,67

Вода 15 Эракояд 7,5

Эраконд 7,5

В соответствии с требованиями ГФ XI изд., вып. 2 и приказа МЗ РФ № 82 от 29.02.2000 г. определены следующие показатели: внешний вид, однородность, подлинность, содержание изофлавоноидов, средняя масса, время полной деформации (время растворения), кислотное, йодное, перекисное числа, микробиологическая чистота (табл. 4).

Суппозитории с Эракондом имеют торпедообразную форму, светло - или темно-коричневый цвет и специфический запах, они однородны не срезе.

Подлинность суппозиториев подтверждали" метолом бумажной хроматографии в системе растворителей ледяная уксусная кислота-Бола (15:85) в присутствии свидетеля. В УФ - свете обнаружено пятно со значениями Rf =0,06, флуоресцирующие сине-фиолетовым светом.

Определение содержания изофлавоноидов проводили хроматоспекхро-фотометрическим методом по методике, разработанной нами ранее для экстракта люцерны густого Эраконд и адаптированной применительно к суппозиториям. Содержание изофлавоноидов в суппозиториях на основе ТКЖ и ПЭГ в пересчете на ононин составило 0,145 и 0,150 %, соответственно. Относительная ошибка определения ± 5,07 %.

Таким образом, разработанная нами методика хроматоспектрофотомет-рического определения изофлавоноидов в экстракте обеспечивает унифицированный системный подход «сырье - лекарство», дающий возможность объективно обосновывать качество, как экстракта, так и лекарственных форм на его основе.

Значение рН водного раствора суппозиториев позволяет судить об отсутствии раздражающего действия и о комфортности введения суппозиториев. Данные определения времени полной деформации и времени растворения ука-

J 5

зывают на способность суппозиториев расплавляться или растворяться в полости тела при температуре 37 °С и высвобождать БАВ. Опслонение в массе отдельных суппозиториев укладывается в нормы допустимых отклонений по приказу № 305 от 16.10.97 г. (±5%).

Изучение антибактериатьной активности суппозиториев с Эракондом показало отсутствие действия в отношения исследуемых тест-микроорганизмов: St. aureus и Е. coli при данных условиях эксперимента. При исследовании микробиологической чистоты обнаружено наличие аэробных бактерий в количестве, не превышающем нормы обшей статьи ГФ XI издания «Микробиологические методы исследования», патогенные микроорганизмы не выявлены. Таким образом, инфицирование больных при лечении суппозиториями с Эракондом матовероятно.

Исследование стабильности суппозиториев с Эракондом, упакованных в поливинилхлоридную пленку по 10 штук, проводилось методом «ускоренного старения» и в условиях естественного хранения. Контроль проводился по наиболее значимым показателям через промежутки времени соответствующие 6 месяцам хранения. Установлено, что изучаемые суппозитории сохраняют стабильность в течение 2 лет (время наблюдения).

Острую токсичность суппозиториев с Эракондом определяли на 51 белой мыши и 90 крысах. При введении внутрь в дозах для мышей от 3 г/кг до 7,5 г/кг, гибели животных не наблюдалось, следовательно, определить LDjo не представляется возможным. По классификации Измерова Н.Д. с соавт. суппозитории отнесены к малотоксичным веществам iv класса.

Результаты проведенных исследований использованы при разработке проектов ФСП на экстракт люцерны густой Зраконд и суппозитории на его основе, Методических указаний по изготовлению и контролю качества суппозиториев в аптеке и заявки на патент.

Таблица 4

Результаты стандартизации и изучении стабильности суппозиториев с экстрактом люцерны густым-

VÍ /11 Наименование показателя Норма поНД Исходные данные для суппозиториев на основе Срок хранения суппозиториев, мес.

ТКЖ ПЭГ 6 12 18 24

ткж НЭГ ТКЖ ПЭГ ТКЖ ПЭГ ТКЖ ПЭГ

Внешний вид - Соогв. Соотв Соотв. Соотв. Соотв. Соотв Соотв. Соотв. Соотв. Соотв.

Подлинность - Соогв. Соотв Соотв. Соотв Соотв. Соотв Соотв. Соотв. Соотв. Соотв.

Содержание шофлавошшдов, % - 0,145.1. 0,04 S 0,150+ 0,042 0,1431 0,034 0,148+ 0,050 0,1441 0,031 0,149+ 0,043 0,142+ 0,051 0,148+ 0,027 0,143+ 0,035 0,147+ 0,041

Средняя масса, г - 2,54 И),01 2,53+0,02 2,50+ 0,02 2,551 0,02 2,5Ц 0,01 2,54+ 0,02 2,53+ 0,03 2,55 + 0,02 2,50+ 0,05 2,50+ 0,02

Время полной деформации (растворении), мин рН иодного и иы (раствора) 60 11,6М),У 5,75*10,(1(1 12,0+1,5 5,2б10~6| 16,0 1 1,0 5,65 + 0,04 13,0 f 0,8 5^20 ■! 0,06 18,0 1 1,3 5,4? 1 0,02 15,0 ( 0,5 5*1 К -I 0,03 23,0 + 0,8 5,36 Г 0,03 14,0 5,17 + 0,04 20,0 + ___ 5,24+0 ,02 14,0Ю А_ 5,1510 .03

Кислотное число Не более 0,8 0,40+0,05 - 0,48 + 0,03~ - 0,481 0,06 - 0,46+ 0,04 - 0,47+ 0,0

Йодное число 35-80 66,8711,21 - 65,43+ 1,45 - 67,121 1,13 - 66,74+ 1,34 - 65,63+ 1,52 -

Перекнсное число До 0,03 0,026V-0,003 - 0,024+ 0,002 - 0,025 + 0,002 - 0,024+ 0,001 - 0,024+ о.ооз" -

0 Микробиологическая чистота - Мгаофильных аэробных и факультативно -анаэробных мнкроорганнчмо», КО!:/г -Дрожжевых и плесненых грибов, КОЕ/т. - Бактерий группы кишечных палочек (коли-формы), в 0,1 г. -Патогенных микроорганизмов, в т.ч сальмонелл, в 10 г. 11с более )07 Не более 10' Не долускае тся 30 12 lie обнаружен о Не обнаружен о Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. 1 'оотв. Соотв. Соотв. С'оотв Сскп». Соотв Соотв. Соотв. Соотв. Соотв Соотв Соотв. Соотв Соотв. Соотв Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв. Соотв.

о\

Общие выводы:

1. На основании фотохимического анализа экстракта люцерны густого установлено наличие фенольных соединений: оксикумари-нов (умбеллиферон), гликозидов флавоноидов (рутин), производных флавона (алигенин), изофлавоноидов (ононин); гумино-вых кислот и аминокислот (суммарное содержание всех аминокислот составило 7,53 %, незаменимых - 2,92 %).

2. Предложена методика качественного анализа экстракта по изо-флавоноидам методом бумажной хроматографии в системе ледяная уксусная кислота - вода (15:85).

3. Разработана методика количественного определения изофлавоноидов в экстракте люцерны густом хроматоспектрофотометри-ческим методом. Количество изофлавоноидов в экстракте составило 3,17 %, относительная ошибка определения 4,68 %.

4. Проведена стандартизация экстракта люцерны густого Эраконд согласно требованиям ГФ XI издания и приказа № 82 от 29.02.2000 г. по показателям: внешний вид, подлинность, содержание изофлавоноидов, рН водного раствора, потеря в массе при высушивании, сухой остаток, содержание тяжелых металлов, массовая доля золы и микробиологическая чистота.

5. Установлено наличие выраженного противовоспалительного и ранозаживляющего действия экстракта люцерны густого, отсутствие токсичности при введении внутрь и накожной аппликации

6. На основании технологических я биофармацевтических исследований разработаны состав и технология суппозиториев с Эракон-дом.

7. Кондуктометрически исследована кинетика растворения суппозиториев на гидрофильных основах, построена кривая и рассчитана константа скорости их растворения. Установлено, что при равных условиях эксперимента наибольшая степень высвобождения наблюдается из суппозиториев на основах ПЭГ (73 %) и ТКЖ (55 %).

8. Предложены методики качественного и количественного анализа суппозиториев, проведена их стандартизация по показателям: внешний вид, однородность, подлинность, содержание изофлавоноидов, средняя масса, время полной деформации (время растворения), кислотное, йодное, перекисное числа, микробиологическая чистота. Установлено соответствие суппозиториев с Эра-кондом требованиям НД.

9. На основании изучения острой токсичности суппозитории отнесены к малотоксичным веществам IV класса.

10. Экспериментально обоснованный срок годности суппозиториев с Эракондом составил 2 года.

Список работ опубликованных по теме диссертации:

1. Блинова O.A., Джангирянц A.B., Олешко Л.Н., Мухамеджанова Д.М., Решетникова М.Д., Одегова Т.Ф. Исследования по стандартизации суппозиториев «Эраконд»// Человек и лекарство: Тез. докл . VII Росс, национал, конгр. -М., 2000.-С.548.

2. Джангирянц A.B., Олешко Л.Н., Блинова O.A., Мухамеджанова Д.М. Биофармацевтические аспекты исследования суппозиториев «Эраконд»// Человек и лекарство: Тез. докл . VII Росс, национал, конгр. -М„ 2000.-С. 560-561.

3. Джангирянц A.B., Олешко Л.Н., Блинова O.A., Назаренко П.В., Мухамеджанова Д.М., Решетникова М.Д. Исследования противовоспалительной активности экстракта Эраконд// Мат. III Международ. конф. по восстановительной медицине (реабилитоло-гии).-М., 2000.-С.297-298.

4. Джангирянц A.B., Рюмина Т.Е., Решетникова М.Д., Блинова O.A., Бисерова М.Е. Разработка методики количественного анализа и изучение кинетических закономерностей высвобождения биологически активных веществ из суппозиториев «Эраконд»// Мат. Межвузовской на\чно-практической конф., поев. 85-летию высшего образования на Урале,- Пермь, 2001.-С126-127.

5. Джангирянц A.B., .Олешко Л.Щ Блинова O.A., Решетникова М.Д., Рюмина Т.Е., Мухамеджанова Д.М. Создание и исследование суппозиториев «Эраконд» //Фармация.- 2001.- J&5. — С.12-13.

Оглавление диссертации Джангирянц, Алиса Витальевна :: 2002 :: Пермь

Введение

Глава I. Обзор литературы

1.1. Актуальность проблемы гинекологических и проктологических за- 10 болеваний.

1.3. Характеристика источника получения Эраконда - люцерны посев- 18 ной.

Обсуждение обзора литературы Экспериментальная часть

Глава II. Объекты и методы исследования

2.1. Объекты исследования

2.2. Методы исследования

Глава III. Фитохимическое исследование и стандартизация экстракта люцерны густого Эраконд.

3.1. Фитохимические исследование экстракта люцерны густого Эраконд

3.1.1. Изучение качественного состава экстракта люцерны густого Эра- 40 конд.

3.1.2. Разработка методики количественного определения экстракта люцерны густого Эраконд

3.2. Стандартизация экстракта люцерны густого Эраконд

3.3. Фармакологическое изучение экстракта люцерны густого Эраконд 53 Выводы по главе

1.2. Преимущества ректального пути введения.

Глава IV. Исследования по созданию суппозиториев с экстрактом 62 люцерны густым Эракондом

4.1. Выбор оптимального состава и технологии суппозиториев с Эра- 62 кондом

4.2. Биофармацевтические и фармакокинетические исследования суп- 64 позиториев с Эракондом

4.2.1. Изучение кинетики растворения суппозиториев с Эракондом на гидрофильных основах

4.3. Стандартизация суппозиториев с Эракондом

4.4. Фармакологическое изучение суппозиториев с Эракондом 80 Выводы по главе 4 85 Обсуждение результатов 86 Общие выводы

Введение диссертации по теме "Технология лекарств и организация фармацевтического дела", Джангирянц, Алиса Витальевна, автореферат

Актуальность темы. В последнее десятилетие во всем мире, особенно в экономически развитых странах, четко прослеживается тенденция неуклонного роста гинекологических и проктологических воспалительных заболеваний, что обусловлено целым рядом факторов, как социально-экономического, так и медицинского характера.

Лечение гинекологических и проктологических заболеваний, их профилактика предусматривает применение значительного ассортимента лекарственных средств внутрь, подкожно, внутривенно или местно в виде, примочек, мазей, линиментов, присыпок, суппозиториев.

Ректальный путь введения JIB является одним из оптимальных в медицинской практике, так как суппозитории обладают высокой биологической доступностью, удобством применения и безболезненностью. Однако их номенклатура весьма ограничена, многие из них не отвечают требованиям по эффективности и широте терапевтического действия.

Перспективным в этом отношении является экстракт люцерны густой - Эраконд, разработанный сотрудниками НВП «АПТ-Экология», г. Екатеринбурга, обладающий ценными фармакологическими свойствами.

Цели и задачи исследования. Целью работы явилась разработка научно- обоснованного состава и технологии суппозиториев с экстрактом люцерны густым Эракондом, обеспечивающих высокую биологическую доступность и стабильность при хранении.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

- теоретически обосновать и экспериментально разработать методики стандартизации оригинального отечественного экстракта люцерны густого;

- разработать методики идентификации и количественного определения действующих веществ в суппозиториях;

-определить влияние суппозиторных основ на процессы высвобождения изофлавоноидов in vitro;

- изучить токсическое и местнораздражающее действие полученных суппозиториев с Эракондом;

- установить оптимальные условия и сроки хранения суппозиториев;

- разработать проекты Фармакопейных статей предприятия (ФСП) на экстракт люцерны густой и суппозитории «Эраконд», Методические рекомендации по изготовлению и контролю качества суппозиториев с Эракондом в аптеке.

Научная новизна исследования.

На основании технологических, биофармацевтических и фармакологических исследований созданы эффективные суппозитории с Эракондом., рекомендуемые в качестве противовоспалительного и ранозаживляющего средства при лечении гинекологических и проктологических заболеваний воспалительного генеза.

Впервые предложено использовать для проведения биофармацевтических исследований по изучению кинетики высвобождения JIB из суппозиториев метод кондуктометрии.

Практическая значимость и внедрение результатов исследования.

На основании проведенных исследований разработаны стабильные суппозитории с экстрактом люцерны густым Эраконд, приготовленные на основах полиэтиленгликолей и твердых кондитерских жиров, удовлетворяющих требованиям НД.

В результате осуществления комплекса научных исследований разработаны:

- проекты ФСП на экстракт люцерны густой Эраконд, суппозитории с экстрактом люцерны густым;

Методические указания по изготовлению и контролю качества суппозиториев с экстрактом люцерны густым Эраконд в аптеке;

- подана заявка на патент (приоритетная справка № 2001129777 от

06.11.2001 г.).

Результаты исследования используются в учебном процессе:

- на кафедре фармацевтической технологии ПГФА на 4 и 5 курсе очного факультета, в интернатуре, на факультете дополнительного профессионального образования провизоров (акт внедрения от 29.10.01 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ.

Положения, выносимые на защиту:

- результаты комплекса технологических, биофармацевтических и фармакологических исследований суппозиториев с Эракондом.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 105 страницах машинописного текста, содержит 18 таблиц и 14 рисунков. Работа состоит из введения, обзора литературы, 3 глав экспериментальных исследований, выводов, списка литературы и приложения. Список литературы включает 178 источников, из них 56 на иностранных языках. В приложении даны материалы по внедрению.

Заключение диссертационного исследования на тему "Разработка состава, технологии и стандартизация суппозиториев с экстрактом люцерны густым "Эраконд""

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ:

1. На основании фитохимического анализа экстракта люцерны густого установлено наличие фенольных соединений: оксику-маринов (умбеллиферон), гликозидов флавоноидов (рутин), производных флавона (апигенин), изофлавоноидов (ононин), гуминовых кислот и аминокислот (суммарное содержание всех аминокислот составило 7,53 %, незаменимых - 2,92 %).

2. Предложена методика качественного анализа экстракта по изофлавоноидам методом бумажной хроматографии в системе растворителей уксусная кислота-вода (15:85) со свидетелями и с помощью качественных реакций.

3. Разработана методика количественного определения изофлавоноидов в экстракте люцерны густом хроматоспектрофото-метрическим методом. Количество изофлавоноидов в экстракте составило 3,17%, относительная ошибка определения 4,68%.

4. Проведена стандартизацию экстракта люцерны густого Эраконд согласно требованиям ГФ XI издания и приказа № 82 от 29.02.2000 г. по показателям: внешний вид, подлинность, содержание изофлавоноидов, рН водного раствора, потеря в массе при высушивании, сухой остаток, содержание тяжелых металлов и микробиологическая чистота.

6. На основании технологических и биофармацевтических исследований разработаны состав и технология суппозиториев с Эракондом.

С помощью кондуктометрического метода анализа установлено, что при равных условиях эксперимента наибольшая степень высвобождения наблюдается из суппозиториев на ПЭГ (73%), а также на основе ТХЖ (55%). Кондуктометрически исследована кинетика растворения суппозиториев на гидрофильных основах, построена кривая и рассчитана константа скорости их растворения.

Предложены методики качественного и количественного анализа суппозиториев, проведена их стандартизация по показателям: внешний вид, однородность, подлинность, содержание изофлавоноидов, средняя масса, время полной деформации (время растворения), кислотное, йодное, перекисное числа, микробиологическая чистота. Установлено соответствие суппозиториев с Эракондом требованиям ГФ XI издания. На основании изучения острой токсичности суппозитории отнесены к малотоксичным веществам IV класса. Экспериментально обоснованный срок годности суппозиториев с Эракондом составил 2 года.

Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2002 года, Джангирянц, Алиса Витальевна

1. Абрамович Р.А. Создание.и исследование суппозиториев для детей с глицирамом, антрасеннином, экстрактом алоэ сухим: Автореф. дис.канд. фармац. наук.-М., 1995,- 25 с.

2. Ажгихин И.С. Технология лекарств. М.: Медицина, 1980. -440 с.

3. Ажгихин И.С. Определение твердости основ суппозиториев прибором Каминского // Аптечное дело. 1965. - №1. - С. 14-19.

4. Айвазов А.Б. Введение в хроматографию: Учеб. пособие по хим. спец. вузов. М.: Высш. шк., 1983. - 240 с.

5. Алексеев В.И. Количественный анализ. 4-е изд., перераб., - М.: Химия, 1973. - 72 с.

6. Алюшин М.Т. Современное состояние научных исследований по применению полимеров в фармации / Алюшин М.Т., Гриценко И.С. // Науч. тр. /ВНИИФ. М„ 1990. - Т. 28. - С. 5 - 7.

7. Алюшин М.Т. Синтетические полимеры в отечественной фармацевтической практике / Алюшин М.Т., Артемьев А.И., Тракман П.Г. М.: Медицина, 1974. - С. 45-57.

8. Аминев A.M. Учебное пособие по проктологии. М.: Медицина, 1977. - 192 с.

9. Андреев B.C. Кондуктометрические методы и приборы в биологии и медицине. М.: Медицина, 1973. - 504 с.

10. Ю.Антропов А.И. Теоретическая электрохимия. М.: Высш. шк., 1984. -С. 34-46.

11. Всесоюз. науч.-техн. конф. Харьков, 1989, - С.103.

12. Арзамасцев Е.В. Современные требования к доклиническому изучению безопасности новых лекарственных препаратов / Арзамасцев Е.В., Любимов Б.И. // Эксперим. и клин, фармакол. 1995. - № 3. - С.7-11.

13. А. с. №248590 (ЧССР) // Изобрет. за рубежом. 1987. -Вып. 15, № 19. -С. 5.

14. Ахназарова С.Л. Методы оптимизации эксперимента в химической технологии / Ахназарова С.Л., Кафаров В.В. -М., 1985. С. 205-211.

15. Бабаскин B.C. Антигипертензивная активность флавоноидов некоторых представителей бобовых / Бабаскин B.C., Киселевский М.В., Бабаскина Л.И. // Человек и лекарство: Тез. докл. 4 Рос. нац. конгр., М., 1997,- С. 11.

16. Бабаскин B.C. Антиаритмические свойства флавоноидов некоторых представителей бобовых / Бабаскин B.C., Киселевский М.В., Бабаскина Л.И. // Человек и лекарство: Тез. докл. 4 Рос. нац. конгр., М., 1997. -497 с.

17. Бабаскина Л.И. Экстракт люцерны сухой / Бабаскина Л.И., Самылина И.А., Мухамеджанова Д.М. // ТУ 64-4-2.16-97.

18. Бабаскина Л.И. Экстракт травы люцерны / Бабаскина Л.И., Самылина И.А. //ТУ 64-4-1.22-97.

19. Бабаскина Л.И. Фармакогностическое исследование родов люцерна, люпин, вика семейства бобовых, перспектива их практического использования: Автореф. дис.д-ра фармац. наук.-М., 1998. 49 с.

20. Бабаскина Л.И. Исследование липидного комплекса семян люцерны // Дальневост. мед. журн. Хабаровск, 1997. - №4.-С. 75-76.

21. Бабаскина Л.И. Количественное определение суммы флавоноидов в сырье люцерны. // Формирование приоритетов лекарств, политики: Мат. докл. Рос. на- ч. конф. М., 1995. - С. 164.

22. Бабаскина Л.И. Эстрогеноподобное действие люцерны // Человек и лекарство: Тез. докл. 5 Рос. нац. конгр. М., 1998. - С. 367.

23. Бабаскина Л.И. Фармакотерапевтическая активность люцерны.// Практ. фитотерапия. 1999. - № 1. - С.4-8.

24. Бабаскина Л.И. Оценка конкурентоспособности сырья и лекарственных форм травы люцерны при разработке и выведении на фармацевтический рынок /Бабаскина Л.И., Васнецова О.А. // Лекарств, растения бо-тан. сада: Тез. докл. М., 1996. - С.38-39.

25. Бабаскина Л.И. Сегментация рынка новых фармацевтических товаров на примере экстракта люцерны /Бабаскина Л.И., Васнецова О.А. // Человек и лекарство: Тез. докл. 4 Рос. нац. конгр. М., 1997. - С. 308.

26. Бабаскина Л. И. Изучение цитотоксической активности экстракта люцерны посевной /Бабаскина Л.И., Киселевский М.В. // Человек и лекарство: Тез. докл. 5 Рос. нац конгр. -М., 1998. С. 345.

27. Бабаскина Л.И. Исследование модулирующего влияния экстракта люцерны на противоопухолевую активность мононуклеаров крови /Бабаскина Л.И., Киселевский М.В. // Человек и лекарство: Тез. докл. 4 Рос. нац. конгр., М., 1997. С. 246.

28. Бабаскина Л.И. Сбор лекарственных трав, обладающий общеукрепляющим и нормализующим гормональный статус в климактерическом периоде действием /Бабаскина Л.И., Косенко Н.В. // Положит, решение о выдаче патента по заявке №97105730 от 17.04.97.

29. Бабаскина Л.И. Выделение и исследование изофлавоноидов из представителей рода Medicago /Бабаскина Л.И., Косенко Н.В., Мухамеджа-нова Д.М. // Мат. 52-й регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров. Пятигорск, 1997. - С. 3-4.

30. Бандюкова В.А. Применение цветных реакций для обнаружения алаво-ноидов путем хроматографии на бумаге.// Раст. ресурсы. 1965,- Т.1, Вып.4,- С. 591-592.

31. Бандюкова В.А. Качественный анализ флавоноидов в растительном материале при помощи хроматографии на бумаге /Бандюкова В. А., Шин-каренко А.А.: Метод, указания. Пятигорск, 1972.-14 с.

32. Бандюкова В.А. Тонкослойная хроматография флавоноидов. /Бандюкова В.А., Шинкаренко А.А. // Химия природ, соединений,- 1973.-№1.- С. 20.

33. Бардовский В.Ф. Основы физико-химических методов анализа. М.: Высш. шк., 1983.-274 с.

34. Белова О.И. О приготовлении суппозиториев методом выливания /Белова О.И., Князева Н.Н., Бенезе М.Г. //Фармация.-1980.-№1.-С.44-46.

35. Биологически активные вещества люцерны посевной. /Ковалев В.Н., Богаевская Т.А., Васильченко Е.А.// Тез. докл. респ. научн. конф.-Харьков, 1986.-С. 219.

36. Биофармацевтические исследования детских суппозиториев с фосфотиамином /Т.С. Кондратьева, Н.Г. Преферанская, Г.П. Матюшина, О.Н. Кондратьева//Фармация,-1990.-№ 5.-С. 14-16.

37. Блажей А. Фенольные соединения растительного происхождения / Блажей А., Шутый Л. М.: Мир, 1997. - 239 с.

38. Ботанико-фармакогностический словарь./ Под ред. Блиновой К.Ф. и Яковлева Г.П.-М.: Высш. шк., 1990.-С. 63.

39. Ботанический атлас / Под ред. Б.К. Шишкина. M-JL, 1963.-С. 111.

40. Бузовакин А.Н. Разработка составов и технологии суппозиторных основ дифильного типа /Бузовакин А.Н., Казарян И.А. // Фармация. -1988.-С. 21.

41. Воробьев Г.И. Лекарственные средства в проктологии // Новые лекарственные препараты. 1995. - №2. - С. 11-24.45.ВТУ-3-70// Витепсол.

42. ВФС 42-1166-96 /УДимексид.47.ВФС 42-1242-96 //ПЭО-400.48.ВФС 42-173-98 //Суппорин.

43. ВФС 42-173-98 //Твердый жир.

44. Георгиевский В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений. Новосибирск, 1990. - 330 с.

45. Гейссман Т.А. Антоцианы, халконы, ауроны, флавоны и родственные им водорастворимые пигменты.// Биохимические методы анализа растений. -М., 1960.-С. 453.

46. Головкин В.А. Разработка и биофармацевтические исследования суппозиториев с мебетизолом.//Фармация. 1989. - №4. - С. 10-13.

47. Головкин В.А. Приготовление суппозиториев способом выливания в условиях аптеки //Методические рекомендации /ГАПУ МЗ УССР. -Киев, 1978.-17 с.

48. Головкин В.А. Методические рекомендации по определению биологической доступности лекарственных средств /Головкин В.А., Борзу-нов Е.Е., Грошовый Т.А. Киев, 1980.-12 с.

49. Головкин В.А. Технология, реология и фармакокинетика ректальных лекарственных форм: Автореф. дис.д-ра. фармац. наук,- М., 1981.48 с.

50. Головкин В.А. Исследование суппозиториев с натрия сукцинатом в опытах in vitro и in vivo. //Фармация,- 1992.-№ I.-С.63.

51. Государственный реестр лекарственных средств и изделий медицинского назначения. М.: Книжная палата, 1994.-567 с.

52. Государственная фармакопея СССР, Вып.1: Общие методы анализа. /МЗ СССР,- 11-е изд., доп.-М.: Медицина, 1989.-400 е., ил.

53. Грецкий В.М. Выбор носителя для суппозиториев с 13-цис-ретиноевой кислотой /Грецкий В.М., Коль И.Я. //Фармация,-1992.-№ 5,- С. 25.

54. Гусева А.Г. К методике определения флавоноидных веществ в растениях./ Гусева А.Г., Нестюк М.И. //Биохимия,- 1953.-Т. 18.- С. 480.

55. Изучение флавоноидного состава травы люцерны хмелевидной /Простодушева Т.В., Барабанов Е.И., Киселевский М.В.// Фармация. -1998. -№3,- С. 30-31.

56. Исследование аминокислотного состава сырья и экстракта люцерны посевной /Тришин А.В., Бабаскина Л.И., Самылина И.А., Киселевский М.В.// Фармац. наука и практика в новых соц.-эконом, условиях: На-учн. труды /НИИФ.-М., 1997.-T.XXXYI, Ч. II.-C.219-223.

57. Карбышев А.В. Химико-фармакологическое изучение гумата натрия из сапропеля: Дис. .канд. фармац. наук. Томск, 1999. - 147 с.

58. Клышев Л.К. Флавонои^ы растений. /Клышев Л.К., Бандюкова В.А., Алюхина Л.С. Алма-Ата: Наука, 1978.-С. 34-35.

59. Козлова Н.Г. Некоторые особенности создания лекарственных средств в форме суппозиториев /Клышев Л.К., Бандюкова В.А., Алюхина Л.С. // Фармация. 1992. - Т. 41, №6. - С. 80-83.

60. Козлова Н.Г. Высвобождение аминазина из суппозиториев in vitro

61. Козлова Н.Г., Драник Л.И., Зубачева И .Я. //Фармация.-1989.-№ 4.-С.55-57.

62. Косман В.М. Информационное обеспечение для идентификации фе-нольных соединений растительного происхождения в обращенно фазовой ВЭЖХ /Косман В.М., Зенкевич И.Г. //Раст. ресурсы.-1997.-Т. 33, Вып. 2,- С. 14.

63. Краснов Е.А. Выделение и анализ природных биологически активных веществ./ Краснов Е.А., Березовская Т.П. /Под ред. Сироткиной Е.С.Томск, 1987,- 184 с.

64. Лекарственные растения в народной медицине/Под ред. Махлаюк В.М. -М: Нива России, 1992.-С. 212.

65. Лукманова К.А. Аминокислотный и минеральный состав фитопрепарата люцерон /Лукманова К.А., Рябчук В.А., Салихова Н.Х. //Фармация. -2000. -№2.-С. 25-27.

66. Лукманова К.А. Эраконд в качестве биологической добавки к пище как путь профилактики заболеваемости населения./ Лукманова К.А., Баталова Г.М.// Человек и лекарство: Тез. докл. V Рос. нац. конгр.-М., 1998.-С.382.

67. Лукманова К.А. Коррекция действия гепатотоксинов фитопрепаратом из люцерны /Лукманова К.А., Шангареева Р.Ф. //Эксперимент, и клин, фармакология.-2001-Т.64, № 5.-С. 53-55.

68. Машковский М.Д. Лекарственные средства Изд. 13-е., нов. - Харьков: Торгсин, 1997.-С. 11.

69. Меньшойкин Ю.Е. Сплошной геморрой // Здоровье. 2000. - №10. - С. 60.

70. Методы количественного определения флавоноидов в растениях сем. Бобовых: Метод, рекомендации для НИИ и вузов,- Пятигорск.- 1988.25 с.

71. Методические указания по химическому анализу лекарственного растительного сырья. Пермь, 1979.-С.86-102.

72. МРТУ 42-3920-70// ПЭО-1500.

73. Муравьева Д.А. Фармакогнозия. М.: Медицина, 1991. 560 с.

74. Основные лекарственные средства: Большой справочник. М.: ACT, 1999.-С.728.

75. Памазанов Г.В. Исследование химического состава мумие и мумиепо-добных веществ с помощью современного физико-химического анализа,- Пермь, 1996.-136 с.

76. Растительные ресурсы СССР. Цветковые растения, их химический состав, использование: сем. Hydrangeaceae Haloragaceae.- J1.: Наука, 1987.-С. 156.

77. Реестр лекарственных средств России: Энциклопедия /Под. ред. Крылова Ю.Ф.-М., 1999.-624 с.

78. Ресурсоведческое и фармакогностическое изучение лекарственной флоры СССР./ Науч. тр. /ВНИИФ,- М., 1987.-Т. XXV,- С.144.

79. РЛС-доктор,- Изд. 2-е / Под. ред. Крылова Ю.Ф. М., 1996.-538 с.

80. Сравнительное изучение влияния на гемодинамику экстрактов травы люцерны хмелевидной и посевной./ Простодушева Т. В., Бабаскина Л.И., Барабанов Е.Н. // Фармация. 1998. - №5. - С. 34-36.

81. Савельева Г.М. Справочник по акушерству и гинекологии. М.: Медицина, 1996.-С. 263-268.

82. Седова А.Б. Исследование некоторых растений рода фасоль в качестве источника биологически активных веществ: Автореф. дис. .канд. фармац. наук. Харьков, 1989.- 24 с.

83. Сергеев В.В. Получение и исследование новой жировой основы для суппозиториев: Автореф. дис.канд. фармац. наук.-Харьков, 1971.- 21с.

84. Современные методы анализа фармацевтических препаратов. -М„ 1988.-206 с.

85. Сологуб Л. Ректальные формы фитопрепаратов /Сологуб Л., Абрамович Р. // Фармац. вестник 1999,- №17. - С. 13.

86. Состав, технология, анализ и изучение стабильности суппозиториев ортофена /Л.А. Будукова, Т.С. Кондратьева, Урибе-Эггевария //Фармация,- 1989.-№ З.-С. 16-20.

87. Способ получения многослойных суппозиториев. Заявка 5673017 (Япония) /Хмэдзи Кацу // Химия: РЖ.-1984.-№ 13.-№130279 П.

88. Стандартизация фитопрепаратов. // Фармация. -1993.-№6- С. 68.

89. Тенцова А.И. Лекарственные формы и терапевтическая эффективность лекарств. Введение в биофармацию. /Тенцова А.И., Ажгихин И.С. -М„ 1974.-336 с.

90. Тенцова А.И. Биологическая доступность и методы ее определения. /Тенцова А.И., Киселева Г.С. // Фармация. 1989. - №2. -С. 10.

91. Тенцова А.И. Приборы и методы по оценке фармацевтической доступности лекарственных форм. /Тенцова А.И., Киселева Г.С. // Фармация. 1989. - №4. -С. 16.

92. Технология и стандартизация лекарств. / Под ред. Георгиевский В.П., Конев Ф.А. Харьков: Рирег, 1996. - 780 с.

93. Технология лекарственных форм: Учебн.: В 2 т. /Кондратьева Т.С., Иванова Л.А., Зеликсон Ю.И.; Под ред. Т.С. Кондратьевой- М.: Медицина, 1991.-Т. 1.-496 с.

94. Технология лекарственных форм: Учебн.: В 2 т. /Бобылев Р.В., Грядунова Г.П., Иванова Л.А.; Под ред. Л.А. Ивановой- М.: Медицина, 1991.-Т.2.-544 с.

95. Токсикологическое изучение фитопрепарата из экстракта люцерны посевной. /Лукманова К. А., Танирбергенов Т.Б., Насыров Х.М. // Эксперим. и клин, фармакология. 2000. - №1. - С. 62-65.

96. Тонкослойная хроматографйя./Под ред. Ахрем А.А., Кузнецовой А.И.- М.: Наука, 1964,- С.80-85.

97. Усманов У.Х. Технологические и биофармацевтические аспекты создания суппозиториев для детей с витаминами группы В.: Автореф. дис. .канд. фармац. наук.-М., 1991.-24 с.

98. Учебно-методическая разработка к практическому занятию по специализации для студентов фармац. факультета и слушателей ФПК. -М., 1997.-28 с.

99. Фитохимическое изучение люцерны посевной, культивируемой в башкортостане /Насыров Х.М., Батталова Г.М., Аюпова Г.В.// Фармац. наука в решении вопросов лекарств. Обеспечения: Научн. тр. /НИИФ,-М., 1998.-С.245-247.

100. Фито- и диетотерапия в проктологии. -Курск, 1993. 112 с.

101. Фитохимический анализ лекарственного растительного сырья. -СПб.: Изд-во СПФХА, 1998. 60 с.

102. Химический анализ лекарственных растений. М., 1983. - 176 с.

103. Худякова Т.А., Крешков A.JI. Кондуктометрический метод анализа. М.: Высш. шк., 1975. - 354 с.

104. Чуролинов П. Фитотерапия в дерматологии и косметологии.- София: Медицина и физкультура, 1979.-С.15.

105. Цагарешвили Г.В. Биофармацевические, фармакокинетические и технологические аспекты создания мягких лекарственных форм (ректальные препараты). /Цагарешвили Г.В., Головкин С.А. Тбилиси, 1992.-43 с.

106. Albrecht N., Wasilelewski // Ibid.- 1952,- № 2,- S. 448.

107. Aoni S.//Sel-i-kwej Med. Joum. 1931.-Vol. 50, №5.-P. 1-11.

108. Badzian- Kobos K. Zastosowania apilkatorow w kontaktowij profi-lactyce profnicy zebow /Badzian- Kobos K., Cicnowska D. // Czasop. sto-matol.-1987.- № 8,- S.533-539.

109. Binet L, Strumza M.V.// Le Sang.- 1936,- № 9,- S.5654.

110. Bryant E.T. A note of the Differention between Flavonoid, Glycosides and their Aglicones//Am.Pharm.Soc.-1950.-Vol.39, №9.-P.480-491.

111. Burgi E. // Schweiz. Med. Woschr.- 1942,- Vol.72, №8,- S.239.

112. Burgi E. //Zeitschr.f.d.gesamte experim. Med.-1942.- Bd.110.- S. 259.

113. Burgi E. //Schweiz. Med. Woschr.- 1947.-№77- S.ll.

114. Burgi E., Traezewski C.F. //Biochem. Zeit.- 1919,- Bd.98.- S.256.

115. Busciglio John А./ Пат. 4748022 (США) Tropical composition // Изобрет. за pyбежом. ■-19 88. -Вып. 15, № 13. -С. 32 -34.

116. D'Agostino О. Manell organismo animale di chlorofilla liposolubile etindrosolubile marcata C14 /D'Agostino O., Gandolfo'N. // Rend. 1st. super sanita,- 1963. -Vol. 26. № 12. - P. 988-999.

117. Drzeniek R. Photodynamic inactivation of lipid containing RNA viruses by chlorophyllin /Drzeniek R., Rott R., Eggers H.Y. // Boll. Chim. Farm. -1971. S.110.-№ 1.-P.20-23.

118. El-Naceeb M.A. Anrimicrobial Activity of Sodium Copper Chlorophyllin /El-Naceeb M.A., Yousef R.T. // Pharmazie.-1974.- №1,- P. 48-49.

119. Frediani D. Prospettivedi utilizzazione della propoli, prodotto secon-dario dell'apicoltura// Agr. Ital.-1976.-N5-6.-P.353-360.

120. Grimberg M. Noes Verfahren zur herstellung von Kupfer Chlorophyllin - Natrium// Riechstoffe und Aromen. - 1963.- 13.- № 10,- S.305.

121. Harbome I.R. Comprative Biochemistry of the Flavonoids.- London, New York: Academic Press, 1967.-341 p.

122. Harbome I.R. The Flavonoids./ Harbome I.R., Mabry Т., Mabry H. -London: Charm an and Hall. -1975.-1204p.

123. Hase Manfred/. Verfahren zur Gewi-mung der antimykotish und anti-bakteriell wirksamen Hars fraktion von Propolis /Hase Manfred, Eilhauer Horst, Borbach Ulrich //Пат. ГДР, кл 30 h 2/04, (A 61 К 17/00), №104429, опубл. 12.03.74.

124. Hashimoto Shuyi. On the influence of chlorophylline upon metabolism in liver // Acta med. Univ. Kagoshimaensis. 1962. - Vol. 4, № 1. - P. 1-30.

125. Hemander Riehter H.Y. Nouere Vortellungen zur Theorie der Wundheilung /Hemander - Riehter H.Y., Struck U. // Hippokrates.- 1971,-Bd. 42, №3.-S. 332-345.

126. HygnesJ.H., Lather A.Z.//Jour. Physiol.- 1936.-V. 86.-P.388,

127. Inhibition of intestinal mobility and secretion by flavonoids in mice and rats: Structure activiti relationships / Carlo G. Di, Autore G, Izzo A. A. //J.Pharm. andBiolog.-1993.-Vol. 45, №12.-P.1054-1059.

128. Jorga Т. Tratament cu propolis in casul unor afectiuni bucale /Jorga Т., Comanici R., Jorga L. // Apicult. Rom.- 1979,- №7,- P. 21-22.

129. Kasugai N. J. //Pharmacog. Soc.Jap.- 1964,- V.84.- P. 1152.

130. Krivanek Frantisek. Konzervacni roztok na umelecke a historicke predmety. /Krivanek Frantisek, Bacijek Jaromir. //Авт.св. ЧССР, юг. C09 К 1/02, С 09 К 3/100, № 175651, заявл.7.08.73, №5596-73 опубл. 15.12.78.

131. Krowczynski L. The application of polimers in dosage forms formulation // Chen. Stosow. -1990. -V.34.- № 1-2. P.3 -10.

132. Lisa Milena. Beitrag zur fimgistatischen Wirkung von Propolis /Lisa Milena, Ueieertova Jrena, Balloun Jan // Folia phann. Univ Саго1те.-1989.-№ 13.-С.29-44. ■

133. Maciejewicz Wieslawa. Gas chromatography-mass spectrometry investigation of propolis. Analysis of steroids /Maciejewicz Wieslawa, Daniewski Marek, Mielaniczuk Zbigniew //Acta pol. Pharm.-1983.- № 2.-P.250-252.

134. Maciejewicz Wieslawa. Gas chromatography-mass spectrometry investigation of propolis, analysis of sequiterpenes /Maciejewicz Wieslawa, Scheller Stanislaw, Daniewski Marek // Acta pol. Pharm.-1983.- № 2.-P.251-253.

135. Melder L.B. Electron microscope study ul tlic vincidc properties of sodium magnesium chlorophyllin /Melder L.B., Bychovsky A.F., Krikun B.L. // Nature (Engl.).- 1969,- Vol. 222, № 5193.-P. 574-575.

136. Nagy M. Constituens of propolis Czechoslovak origin. V./ Nagy M., Suchy V., Uhrin D. //Chem.Pap.-1988.-Vol. 42, № 5.-P.691-696.

137. Obregon Fuentes Ana Margarita. / Accion antimicrobiana d. los ex-tractas alcoholicos de propuleo /Obregon Fuentes Ana Margarita, Rojas Hemandes Nidia // Rev.cub.farm.-1990.-Vol. 24, № 1 .-P.34-44.

138. Peacock E., Van Winkle W./AVound Repair. Philadelphia,1. Sannders.-l976.-699 p.

139. Putter Sigurd. Verwendung eines casein enthalfen den Propolis Ex-traktes: Medice Chem-Pharm. Fabrik Putter CmbH und Co КО /Putter Sigurd, Krauskopf Jobst, Eistner Erich //Пат. №43203159. - опубл. 22.12.94.

140. Radu A. Actiunea cicatrizanta a sarii hidrosolubile de clorofila /Radu A., Pop S., Rub-Saidas Viorica. //Cluj ul med. Rev. med. si farmac. 1968. -Vol. 41, №2.-P. 197-205.

141. Reinitzer F./ /Arch.d.Pharm, 1914.-P.252, 341.

142. Saito H. Influence of solid fat index in triglyceride suppository bases on drug release /Saito H., Kitamura K., Higashi T. //Chem. and Pharm. Bull.-1994.-Vol.42, № 7.-P.1501-1505.

143. Sandblom Ph. Determination of the tensile strength of heating wound as a clinical test /Sandblom Ph., Peterson P., Muren A. // Acta Chir. Scand. -1953.-Vol. 105.-P. 252.

144. Schnetdevind E.M., Metzner J., Zschunke A. // Pharmazie, 1979.-№ 34.-P.103.

145. Seiiert Michael. Uber die Inhaltsstoffe der Propolis.I Seiiert Michael, Ilaslinger Ernst // Licbigs Ann. СЬет.-1989.-№ 11.-P. 1123-1126.

146. Sena Bonvehi Josep. Estudio de los acidos organicos de lajaleareal// Rev agroquimv tecnoi. Alim.-1991.- Vol. 31, № 2.-P.236-250.

147. Shinoda I. Uwer die bei der Reduc'ion von Pflanzenfarbstoffe entschenenden Farbenreaktion//J. Pharm.Soc.Japan.-1928.-Vol.48, №1.-P.35-36.

148. Stella L. Bleeding time in laboratory animals, I. Aspirin does not prolong bleeding time in rats /Stella L., Donati M.B., de Gaetano G. // Thromb. Res.-1975.-Vol.2, № 5.-P.709-716.

149. Studium obsahovych latok pro-polisu ceskoslovenskej proveniencie. VI, Derivaty kvercetinu /Nagy M., Suchy V., Ubik K. et al. // Cs.farm.-1969,-№ 1.-P.23-25.

150. Tuha M. Niekotore vlastnosti bielkovin z propolisu rozpustnych vo vode /Tuha M., Simuth J. //Farm.obz.-1991.- Vol. XII.-P.539-542.

151. Verfaren zur Herstellung von Clorophyllverbindungen Standart-Heilstoff G.M.B.H.// Патент 1064518 ФРГ/ Thies Karl (ФРГ). 5 с.

152. Willstatter R. Untersuchung uber Chlorophyll. /Willstatter R, Stoll A. -Berlin, 1913. -S. 312.

153. Woodward R.B. // Angew. Chem,- 1960. P. 651.

154. Yoshida Maumi. Physiologically active substance // Пат. 5276177 (США). /Yoshida Maumi, Saito Yutaka, Matsumo Tetsuya. //Изобрет. за рубежом,-1994,- №3.-C. 25-28.

155. Zawadski Jerzy. Probi leczenia propolisem stanorapanyc pochwy i szyjk macicy /Zawadski Jerzy, Suchy Henryk, Scheller Stsnislaw. // Prz. lek.-1973.- Vol. 30, №7.-P.620-623.

156. Pharma.--1992.-№ 4.-P. 277-279.

157. Gtienke Peter 0. Verfahren zum Herstellen eines Propolis-Extraktes: Fa Peter 0. Glienke+Partner Industrieberatung GmbH: Пат. №P3210272.0 // Изобрет. за рубежом.-1993.-Вып.23, №6.-С.12.

158. Busciglio John A. Tropical composition for the treatment of mucocutaneous lesions: Пат. 1320909 (Канада) // Изобрет. за рубежом.-1993,-Вып.23, №6.-С.7.

159. Method for the separation of chlorophyl /Okada Akira, Iriyama Keiyi, Shiraki Masam (Япония). //Пат. № 4028217, МКИЗ 260-314, (С 07 Д487/22), Япония.- 7 с.