Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Изучение биологически активных веществ люцерны флоры Кабардино-Балкарской Республики

На правах рукописи

ЧЕЧЕНОВ ШАМИЛЬ ШАМИЛЕВИЧ

ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ЛЮЦЕРНЫ ФЛОРЫ КАБАРДИНО-БАЛКАРСКОЙ РЕСПУБЛИКИ

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Пятигорск - 2005

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор

Казаков Анатолий Леонидович

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор

Оганесян Эдуард Тоникович

доктор фармацевтических наук, профессор Молчанов Геннадий Иванович

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (г.Курск)

Защита состоится 2005 года в ЧЗСОВ на заседании

диссертационного совета Д.208.069.01 по защитам диссертаций при ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (357532, г.Пятигорск, Ставропольского края, пр. Калинина, 11)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (г. Пятигорск, пр. Калинина, 11)

Автореферат разослан 2005

Ученый секретарь диссертационного совета д.ф.н., профессор

г

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В последние годы достигнуты большие успехи в области химии и фармакологии природных флавоноидов и тритерпеновых сапонинов, широко распространенных в растительном мире.

Разнообразие химического строения и фармакологических свойств этих соединений представляет значительный интерес для дальнейшего поиска новых сырьевых источников указанных групп соединений. Этот интерес обусловлен их выраженным гипохолестеринемическим, антигипер-тензивным, гепатотропным, гипогликемическим, противовоспалительным, сосудоукрепляющим действием. В настоящее время достаточно остро стоит проблема укрепления отечественной сырьевой базы лекарственных растений. Это связано с резким ухудшением экологической обстановки в России, а также ограниченными возможностями использования естественных растительных ресурсов. Именно поэтому важная роль отводится культивируемым кормовым растениям, поскольку введение дикорастущих растений в культуру решает многие ресурсные проблемы.

Использование известных ценных сельскохозяйственных культур, особенно представителей семейства Бобовых, характеризующихся широким набором биологически активных веществ (БАВ), представляется актуальным для отечественной фармации, в первую очередь с позиций расширения сырьевой базы и производства фармацевтической продукции.

Растения семейства Бобовых (Fabaceae), в том числе и представители рода люцерна (Medicago L.), издавна используются в народной медицине. В научной медицине люцерна используется зарубежными производителями для создания биологически активных добавок (БАД) к пище. Так, компании "Пьювейс", "Виталайн", "Инрич" (США) выпускают БАД к пище "Люцерна" (Alfalfa), под названием "основа всех благ". Она рекомендована для профилактики и лечения атеросклероза, сердечных болей, артритов, ревматизма, аллергии, анемии, интоксикации печени, а также для нормализации водного обмена.

В Федеральном реестре БАД к пище (Москва, 2000) зарегистрирован "Эраконд" - жидкий и сухой экстракты люцерны, рекомендуемые как лечебно-профилактические средства при желудочно-кишечных, аллергических, гинекологических и других заболеваниях. Концентраты сиропообразный "Виолетта-3", "Виолетта-оригинальный" и "Виолетта-тонизирующий" (ТОО "Виолетта", г.Москва), в состав которых входит экстракт травы люцерны, обладают общеукрепляющим, мочегонным и успокаивающим действием.

Химические исследования видов рода люцерна, проведенные Бабас-киной Л.И., указывают на содержание в них некоторых групп флавоноидов, белков, аминокислот, минеральных веществ, липидов, стеринов, свободных жирных кислот, пигментов, восков, фосфолипидов, ди- и триацилглицидов. Разработаны и утверждены ТУ, проекты ФСП и ОПР на траву люцерны посевной и на экстракт люцерны жидкий. Предложена технология производства косметических средств: "Крем для рук" и "Крем для ног", обладающих ранозаживляющим и бактерицидным действием, бальзам "Противовоспалительный", "Шисейкан" и др. Однако промышленное производство этих средств пока еще не налажено.

Несмотря на определенные успехи в изучении биологически активных веществ люцерны и разработке лечебно-профилактических средств на ее основе, все же пока не решены задачи научно-обоснованного подхода к расширению сырьевой базы лекарственных растений за счет использования кормовых культур с учетом содержания основных групп БАВ и их фармакологического действия.

В этой связи исследование химии флавоноидов, тритерпеновых сапонинов, пектиновых веществ, витаминов и других БАВ, содержащихся в люцерне, является актуальным и позволит решить ряд задач научно-практической фармации.

Цель и задачи исследований. Цель настоящей работы - научное обоснование возможности расширения сырьевой базы лекарственных расте-

ний и разработка лечебно-профилактических средств на основе БАВ видов рода люцерна, произрастающих в некоторых районах Кабардино-Балкарской республики (КБР).

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- провести исследования распространения растений рода люцерна на территории КБР;

- выявить наиболее перспективные виды этих растений, как источников БАВ и сырьевых запасов;

- изучить химический состав наиболее значимых видов рода люцерна как лекарственного растительного сырья;

- провести фармакологический скрининг суммарных фракции травы люцерны с целью дальнейшего их использования для производства различных лечебно-профилактических средств.

Научная новизна. Проведены ресурсные исследования дикорастущих и культивируемых видов люцерны флоры КБР, составлена карта их ареала. Установлено, что в качестве лекарственного растительного сырья целесообразно использовать сельскохозяйственную кормовую культуру - люцерну посевную (Medikago sativa L.), сорт Славянская, с урожайностью 100-120 ц\га, культивируемую в предгорных экологически чистых районах КБР.

Изучены полифенольные соединения, содержащиеся в люцерне посевной, представленные флавонами, флавонолами, изофлавонами, куместа-нами и антоцианидинами.

Впервые из травы люцерны посевной выделены и идентифицированы тритерпеновые сапонины - медикагеновая кислота и ее глюкозид, хедерогенина-3-дигликозид; оксикоричные кислоты - паракумаровая, кофейная, феруловая; пектиновые вещества.

Проведен качественный и количественный анализ аминокислот, содержащихся в траве люцерны посевной, и витаминов в ее сублимационном

порошке, полученном методом высоковакуумной сушки.

Определено количественное содержание флавоноидных соединений, тритерпеновых сапонинов, антоцианидинов и пектиновых веществ в траве люцерны посевной.

В результате фармакологического скрининга настоек люцерны посевной, полученных нами на 40% и 70% этаноле методом перколяции и молочнокислого продукта с БДД "Долюцар" (водный экстракт люцерны посевной), представленного НПФ ООО "Эраконд" г. Стерлитамак установлено, что:

- настойка люцерны посевной, приготовленная на 70% этаноле, обладает гипохолестеринемическим и гепатозащитным действием;

- настойки люцерны посевной, полученные на 40% и 70% этаноле, обладают кардиотропным действием;

- добавление водного экстракта люцерны "Долюцар" в молочнокислый продукт (кефир) повышает его антиоксидантные, иммуномодули-рующие и гепатозащитные свойства.

Практическая значимость работы и внедрение результатов в

практику

В результате проведенных исследований показана возможность расширения сырьевых источников БДВ за счет люцерны посевной (сорт Славянская), культивируемой в КБР, и использования ее для производства лечебно-профилактических средств. Нами разработаны и внедрены БДД к пище и продукты питания функционального назначения:

- хлебобулочные изделия - булочка "Луговая" (2,5% муки травы люцерны и 2,5% муки травы клевера) рекомендована как гипохолестерине-мический, витаминосодержащий продукт (акт внедрения от 10 октября 2000 г);

- молочнокислый продукт - кефир с БДД "Долюцар" рекомендован в качестве продукта питания общеукрепляющего действия и повышающего неспецифическую резистентность организма. Зарегистрирован в

Гос. Реестре БАД ТУ 9222-283-00419785-2002 (акт внедрения от 20 сентября 2002г );

- сублимационный порошок, полученный из травы люцерны посевной (сорт Славянская), рекомендован для производства фиточаев общеукрепляющего действия (акт внедрения от 01 ноября 2002 г);

- материалы исследований кардиотропного действия настоек люцерны посевной (сорт Славянская), приготовленных на 40% и 70% этаноле, используются в лекционном курсе на кафедре фармакологии ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (акт внедрения от 17 ноября 2004г.).

Положения, выдвигаемые на защиту:

- результаты исследований ареала растения рода люцерна на территории КБР и выявление перспективных видов, как сырьевых источников ценных биологически активных веществ;

- данные о результатах исследований химического состава и количественного содержания некоторых групп БАВ травы люцерны посевной (сорт Славянская);

- результаты фармакологического скрининга различных фракций из травы люцерны посевной и продуктов, полученных на их основе;

- обоснование использования люцерны посевной (сорт Славянская) в качестве сырья для производства различных лечебно-профилактических средств.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических

наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом НИР ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (№ гос. регистрации 01.20.0013406) и соответствует проблеме "Фармация" Ученого совета Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ, секция №38.

Апробация работы и публикации Основные фрагменты диссертационной работы изложены в материалах 53-й, 54-й, 58-й региональных конференций по фармации,

фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск 1998, 1999, 2001), V, VI, VIII Российских национальных конгрессов 'Человек и лекарство" (Москва, 1998, 1999, 2003); 5-й международной конференции "Биоантиоксидант" (Москва, 1998), международного симпозиума "Питание 21 века" (Владивосток, 1999), 7-го международного съезда "Фитофарм 2003" (Санкт - Петербург - Пушкин, 2003). По материалам диссертации опублиовано 11 научных работ.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на НО страницах компьютерного набора и состоит из введения; обзора литературы; 2 глав собственных исследований; общих выводов; списка литературы, включающего 143 источника, в том числе 38 иностранных; содержит 22 таблицы, 10 рисунков и приложения.

Основное содержание работы

1. Распространение растений рода люцерна в КБР и обоснование выбора объекта исследования

Для определения ареала видов рода люцерна, произрастающих на территории Кабардино-Балкарской республики (КБР), были обследованы (1997-1998 гг.) горные и предгорные районы. Составлена карта распространения люцерны, позволившая иметь четкую картину ареала дикорастущих видов.

Установлено, что на территории КБР достаточно широко распространены: л. серповидная (М. falcata L.); л. клейкая (М. glutinosa Bieb.); л. хмеле-видная (М. lupina L.); л. маленькая (М. minima Grufb); л. посевная (М. sativa L). Редко встречается: л. румынская (М. romanica Prod.); л. голубая (M.ceorulea Hess.).

Дикорастущие виды люцерны преимущественно произрастают на экологически чистых территориях КБР, но их сырьевые запасы незначительны. Распространены они в предгорных или горных районах, и это существенно затрудняет их промышленную заготовку для производства

лечебно-профилактических средств. Поэтому нами были обследованы и культивируемые виды люцерны, используемые в сельском хозяйстве в качестве кормовых культур для животноводства.

Люцерна посевная (сорт Славянская) выращивается в горных и предгорных районах без орошения (Эльбрусский район, Чегемский район, Баксанский район, Зольский район, Черекский район, Урванский район) и при орошении в Прохладненском и Майском районах Кабардино-Балкарской республики.

Известно, что в растениях семейства Бобовые содержатся флаво-ноидные соединения, в связи с чем нами для выбора объекта исследования был проведен предварительный, качественный сравнительный анализ их содержания в исследуемых видах люцерны.

Методом хроматографии на бумаге в системах растворителей 15% кислота уксусная и спирт н-бутиловый - кислота уксусная ледяная - вода (БУВ) 4:1:5 с последующим проявлением пятен на хроматограммах различными хромогенными реактивами было установлено, что во всех видах, в том числе и культивируемом, содержатся флавоноидные соединения.

В дикорастущих видах и культивируемой люцерне посевной флаво-ноиды представлены преимущественно флавонолами и изофлавонами. Дикорастущие виды непригодны для промышленной заготовки из-за малых запасов, поэтому наши дальнейшие исследования направлены на химическое изучение БАВ люцерны посевной (сорт Славянская).

Общие запасы люцерны посевной, по данным фермерских хозяйств КБР, составляют от 5 до 7 тыс. центнеров зеленой массы.

2. Химическое изучение биологически активных веществ люцерны посевной (сорт Славянская)

Выбранный объект исследования - люцерна посевная (сорт Славянская) содержит различные БАВ, совокупность которых обуславливает не только питательную (кормовую) ценность сырья, но и может быть

использована как сырьевой источник для получения лечебно-профилактических средств. Поэтому нами проведено химическое изучение основных групп биологически активных соединений, в том числе флавоноидов (флавоны, флавонолы, изофлавоны, куместролы, антоцианидины), оксикоричных кислот, тритерпеновых сапонинов, пектиновых веществ, витаминов, аминокислот.

Флавоноиды. Сумму флавоноидов получали путем экстрагирования воздушно-сухого сырья травы люцерны посевной (сорт Славянская) 70% этанолом. Далее вытяжку использовали для выделения индивидуальных флавоноидных соединений при помощи препаративной хроматографии на бумаге (БХ) и хроматографии на колонке с полиамидным сорбентом.

Идентификацию выделенных соединений осуществляли путем сравнения со стандартными образцами; по температурам плавления; величинам удельного вращения; по данным ИК- и УФ-спектрофотометрии. Углеводные заместители, после кислотного гидролиза гликозида, определяли БХ в присутствии стандартных образцов.

В результате проведенных исследований в траве люцерны посевной были идентифицированы 18 соединений, в том числе флавоны; флавонолы -кверцетин и ею 3-гликозиды; изофлавоны - дайдзеин, формононетин, генистеин и их 7-глюкозиды, биоханин Д; производные куместана и антоцианидина - цианидина-3-глюкозид и дельфинидина-3-глюкозид (таблица 1).

Определение содержания суммы флавоноидов в траве люцерны посевной проводили спектрофотометрически в пересчете на ГСО рутина с применением реакции комплексообразования с алюминия хлоридом. Установлено, что сумма флавоноидов составляет 0,73+0,06% на воздушно-сухое сырье.

Для количественного определения антоцианидинов в траве люцерны посевной нами использован метод УФ-спекгрофотометрии. Сумма антоциа-нидинов в сырье составляет 87+0,5 мг% в пересчете на цианидина хлорид.

Таблица 1 - Физико-химические характеристики флавоноидных

соединений выделенных из люцерны посевной (сорт Славянская)

№ п/ п Название эмпирическое Название рациональное т„„°с УФ-спектр, НМ г ,20 И/)

1 — 7,4'-диоксифлавон 316-317 329,253, 225 пл.

2 — 7,3',4'-триоксифлавон 319-321 340,310, 250,234

3 — 5,7,4'-триокси-3',5'-диметокси-флавон 270-272 342,272

4 Кверцетин 3,5,7,3',4'-пентаоксифлавои 310-312 372,256, 264 пл.

5 Гиперозид 5,7,3',4'- тетраокси -3-О-0- 0-галактопиранозид флавона 237-239 362,255, 265 пл. -36,4°

6 Рутин 5,7,3',4'-тетраокси-3-0-Р-ругино:!ид флавона 194-196 354,256, 264 пл. -31,5°

7 Дайдзеин 7,4'-диоксинзофлавон 318-319 302 пл., 250

8 Формононе-тин 7-окси-4'-метоксиизофлавон 255-257 311 пл., 250

9 Биоханин А 5,7-диокси-4'-метоксиизофлавон 212-214 327 пл., 263

¡0 Генжлеин 5,7,4'-фииксиизофлавон 290-291 325 пл. 262

11 Дайдзин 4'-окси -7-О-Р-О-глюкопиранозид изофлавона 235-236 313 пл., 258 -35,6°

12 Ононин 4'-метокси-7-0- Р-Б-глюкопиранозид изофлавона 210-212 301 пл., 260 -25,3°

13 Генистин 5,4'-диокси-7-0-р-0-глюкопиракозид изофлавона 255-256 330 пл., 263 -22,3°

14 Куместрол 7,12-диоксикуместан 383-386 343,303, 243

15 12-метокси-куместрол 7-окси-12-метоксику местан 330-333 342,302, 242

16 11-метокси-куместрол 7,12-диокси-11 -метоксикуместан 327-329 351,307, 248

17 Цианидина-3-глюкозид 5,7,3',4,-тстраокси-3-глюкозид антоцианидина 194-196 523,274

18 Дельфини- дина-3- глюкозид 5,7,3',4',5'-пе[ггаокси-3-глюкозид антоцианидина 182-184 534,276

Оксикоричные кислоты. Для их идентификации траву люцерны

обезжиривали (гексаном, затем хлороформом), экстрагировали горячей водой и обрабатывали диэтиловым эфиром. Растворитель удаляли, осадок растворяли в спирте и методом бумажной хроматографии с использованием цветных реакций, по значению ^ в присутствии стандартных образцов идентифицировали кофейную, феруловую и п-кумаровую кислоты.

Тритерпеновые сапонины. Для их выделения из травы люцерны

посевной, нами предложена технологическая схема экстракции и последую -щей очистки (рисунок 1). Сумма сапонинов составляет 2,55±0,05% в пересчете на воздушно-сухое сырье.

Рисунок 1 - Схема выделения суммы тритерпеновых сапонинов из люцерны посевной (сорт Славянская)

Для выделения и идентификации индивидуальных сапонинов использовали препаративную тонкослойную хроматографию в сочетании с другими физико-химическими и химическими методами исследования (кристаллизация, температура плавления, удельное вращение, кислотный гидролиз, проба смещения, УФ- и ИК-спектроскопия). Таким образом доказано наличие медикагеновой кислоты и ее 3-глюкозида, а также хедерагенина-3 -дигликозида.

Поскольку в настоящее время в качестве БАД под названием "Холестейд" (США) используется концентрированный экстракт сапонинов люцерны в качестве блокатора биосинтеза холестерина, то траву люцерны

посевной (сорт Славянская) можно предложить как дополнительный источник сапонинсодержащего сырья.

Пектиновые вещества из травы люцерны посевной извлекали путем осаждения пектовой кислоты (после гидролиза протопектина) в виде кальциевой соли (пектата кальция) и учета ее количества по массе. Для пересчета пектата кальция на пектовую кислоту использовали коэффициент 0,9235.

Установлено, что общее содержание пектина составляет 4,2±0,1%, в том числе протопектина 3,15±0,19% и растворимого пектина 1,05±0,018%, т.е. содержание протопектина в три раза превышает растворимый пектин.

С помощью копдуктометрического титрования определили некоторые аналитические характеристики пектина. Метод позволил установить содержание свободных и этерифицированных карбоксильных групп по точкам эквивалентности на кондуктометрических кривых (зависимость величины сопротивления от объема титранта), с последующими расчетами по формулам. На рисунке 2 представлена схема выделения и фракционирования пектинов люцерны посевной (сорт Славянская).

Результаты исследований аналитических показателей пектиновых веществ представлены в таблице 2.

Таким образом, по степени этерификации карбоксильных групп (Е=19,5% < 40%), пектины травы люцерны посевной (сорт Славянская) отнесены к низкоэтерифицированным, а высокое содержание свободных карбоксильных групп (14,8%), говорит об их комплексообразующей способности, и могут рекомендоваться как детоксиканты.

Аминокислоты в траве люцерны посевной (сорт Славянская) представлены 17 соединениями, из которых 7 являются незаменимыми аминокислотами, что определяет высокую ценность белка. Суммарное содержание их составляет 16,74% в пересчете на воздушно-сухое сырье. Анализ проведен в ГНИИ биосинтеза белковых веществ (г.Москва).

^ Пектиновый экстракт

Рисунок 2 - Получение пектиновых веществ травы люцерны посевной

Таблица 2 - Результаты исследований аналитических показателей пектиновых веществ

Аналитические характеристики

Содержание свободных карбоксильных групп (Кс), % 14,18

Содержание карбоксильных групп, нейтрализованных аммиаком (Кн), % 1,12

Содержание карбоксильных групп, этерифицирован-ных метанолом (Кэ), % 3,60

Общее содержание карбоксильных групп (Ко), % 18,90

Степень этерификации карбоксильных групп метанолом (Емет), % 19,05

3

Анализ витаминов был проведен в сублимационном порошке травы люцерны посевной (сорт Славянская), полученной методом высоковакуумной сушки (ООО "Биоритм" г. Москва), который показал следующий количественный состав (мг%):

Е—0,013; С-225,0; К-1,5-2,0; РР-3,9; каротин 10,0-20,0.

Анализ витаминов проведен в ГНИИ витаминов (г. Москва).

Для подтверждения сохранности витаминов в сублимационном порошке, фотоколориметрическим методом был проведен анализ количественного содержания каротина в воздушно-сухом сырье травы люцерны и установлено, что содержание в нем каротина (20±0,4 мг%) согласуется с его содержанием в сублимационном порошке.

3. Изучение фармакологического действия фракций, полученных из травы люцерны посевной

Исследования проводились на кафедре фармакологии Национальной фармацевтической академии Украины, под руководством заведующего кафедрой, профессора Дроговоз СМ.; на кафедре биологии, патологии и физиологии и на кафедре биологической химии и микробиологии ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава, под руководством заведующего кафедрой, доцента Доркиной Е.Г.

Объектом фармакологических исследований были: настойки люцерны посевной (сорт Славянская), полученные нами на 40% и 70% этаноле; молочнокислый продукт (кефир) с БАД "Долюцар" (водный экстракт люцерны).

Гипохолестеринемическое действие настойки люцерны посевной, приготовленной на 70% этаноле, изучали на белых крысах. Экспериментальную гиперлипидемию вызывали введением холестерина в дозе 0,5 г/кг и 30% насыщенных жиров. В качестве препарата сравнения использовали "Гемфиброзил". Оценку фармакологического действия проводили по способности нормализации нарушенного уровня общего холестерина (0-ХС), триглицеридов (ТГ), липопротеинов низкой и высокой

плотности (ЛПНП и ЛПВП).

Динамика изменения содержания липидов и липопротеидов в крови экспериментальных животных представлена в таблице 3.

Таблица 3 - Динамика изменения содержания липидов и липопротеидов в крови крыс под действием настойки травы люцерны посевной (сорт Славянская) (М±т^=10)

Группа животных Показателя в ммель/д

0-ХС ТГ ЛПНП ЛПВП

Контрольные, интакт 1,64±0,08 1,80±0,11 0,66±0,05 0,7б±0,12

Контроль, патология 3,60±0,10* 2,7±0,09* 2,31 ±0,09* 0,79±0,10

ХС диета + настойка травы люцерны 2,90±0,13 1,70±0,08** 1,91 ±0,05 0,70±0,08

ХС диета + гемфиброзил 2,05±0,Н* 1,61±0,14" 1,02±0,12** 0,81 ±0,15

* - по отношению к контролю интактные животные (Р<0,05)

** - по отношению к контролю патология (Р<0,05).

Как видно из таблицы 3, изучаемая настойка люцерны посевной проявляла тенденцию к нормализации таких показателей, как уровень 0-ХС и ЛПНП, в то время как препарат сравнения вызвал их достоверное снижение. Настойка люцерны посевной и гемфиброзил были примерно одинаковы по степени нормализации уровня ТГ в крови крыс (Р<0,05).

Таким образом, настойка люцерны не оказывает выраженного гипохолестеринемического действия, но обладает гипотриглицеридеми-ческим действием.

Гепатозащитное действие настойки люцерны посевной, приготовленной на 70% этаноле, изучали, используя модель хронического гепатита у крыс, вызванного введением 50% масляного раствора тетрахлорметана в

дозе 0,2 мл/100 г в течение 2-х месяцев. В крови животных определяли биохимические показатели, представленные в таблице 4. Таблица 4 - Показатели АлАТ, АсАТ, 0-ХС, О-билирубина и 0-белка в крови крыс в процессе моделирования хронического гепатита и лечения настойкой травы люцерны посевной (сорт Славянская) (М±m; N=10)

Группа ЖИВОТНЫХ Показатели

АлАТ Мкмоль/л/ч АсАТ мкмоль/л/ч 0-ХС мкмоль/л 0-билир. Мкмоль/л 0-белок г/л

Интактные 1,28±0,09 0,72±0,03 1,64±0,06 14,0±0,7 69,0±0,12

Патология 3,0±0,1* 4,53±0,21 * ЗД8±0,17* 44,8=10,8 ♦ 124,2±0,1*

Патология+ настойка травы люцерны 0,5 из±о,п ** 0,81 ±0,18 ** 2,6б±0,09 31,0*0,10 81,0±0,05 **

Патология+ силибор 0,02 1,39*0,06 *« 0,69±0,15 ** 1,84±0,06" 32,010,11 73.U0.I0 ♦♦

* - по отношению к интактным животным (Р<0,05);

** - по отношению к патологии (Р<0,05).

Как видно из таблицы 4, в крови у группы животных с патологией наблюдалось повышение уровня всех показателей по сравнению с интактны-ми животными. В качестве препарата сравнения использовали "Силибор".

При введении настойки люцерны посевной происходила практически полная нормализация показателей АлАТ (аланинаминотрансфераза), АсАТ (аспирагинаминотрансфераза), 0-белка, показатели общего холестерина и общего билирубина имели тенденцию к нормализации.

Препарат сравнения показал следующие результаты: показатели АлАТ, АсАТ, 0-ХС, 0-белок соответствовали уровню интакгных животных, показатель О-билирубина имел тенденцию к нормализации.

Таким образом, в опытах на животных настойка люцерны оказывает положительное влияние на печень в условиях хронического гепатита (с тетра-хлорметаном) и по ряду показателей не уступает известному гепатопротек-тору "Силибор".

Кардиотропное действие настоек люцерны посевной (сорт Славянская), полученных нами на 40% и 70% этаноле, изучали на изолированном сердце крыс по методу Лангендорфа. Регистрацию сердечной деятельности производили с помощью прецизионного индуктивного датчика и отображали механокардиографом.

В результате установлено, что настойки люцерны (на 40% и 70% этаноле) достоверно снижают частоту сердечных сокращений на 48% и 36% соответственно, главным образом за счет удлинения диастолы. Под воздействием настойки, приготовленной на 70% этаноле, амплитуда сердечных сокращений несколько повышалась, а под влиянием настойки, приготовленной на 40% этаноле, несколько снижалась. Такое действие на амплитуду сердечных сокращений можно объяснить количественным и качественным содержанием БАВ в настойках, приготовленных на 40% и 70% этаноле.

Нами также было рассчитано изменение минутного объема сердца под воздействием исследуемых объектов (минутный объем рассчитывали как произведение показателей амплитуды и частоты сокращений сердца). Под влиянием настойки, приготовленной на 40% этаноле, минутный объем сердца достоверно снижался на 58%; настойка, приготовленная на 70% спирте, снижала минутный объем на 16%.

Полученные нами данные свидетельствуют о том, что настойки люцерны представляют интерес в качестве средств фармакотерапии сердечно-сосудистых заболеваний и предлагаются для дальнейшего, более глубокого изучения.

С целью разработки молочнокислого продукта (кефир) с добавкой водного экстракта люцерны - "Долюцар" и оценки его эффективности для профилактики здоровья проведен ряд биологических исследований.

Антиоксвдантное действие молочнокислого продукта (кефир) с добавлением водного экстракта люцерны посевной "Долюцар" изучали на белых крысах, используя модель стимулирования процесса перекисного окисления липидов (ПОЛ), вызванных введением 50% масляного раствора тетрахлорметана. Для оценки результатов в сыворотке крови и гомогенате печени определяли содержание ТБК-активных продуктов (суммарное содержание малонового диальдегида и гидроперекисей), которые являются одними из конечных продуктов ПОЛ и активность каталазы (антиоксидантный фермент).

Таблица 5 - Влияние профилактического применения кефира с БАД "Долюцар" на окислительно-антиокислительный статус организма экспериментальных животных

Группы животных, п =8-10 ТБК-активныс продукты печени, нмоль/мг ТБК-активные продукты крови, нмоль/мл Каталаза печени, % Каталаза Крови, %

Ингакшые Животные 0,067±0,08 1 Д±0,08 68±7,0 55±4,5

Кошроль (кефир -юод 0,13±0,02 +48%,Ри<0,001 1,6&±0,12 +24%,Ри<0,01 26±5,4 -62%,Ри<0,01 18±53 -67%,Ри<0,01

Опыт (кефир + БАД+ОСЦ 0,08±0,008 -38%,Рк>0,05 132^0,08 -21%, Рк<0,01 41±2£ +57%, Рк<0,05 Ри<0,01 45±5,0 +150%, Рк<0,01

Как видно из таблицы 5, профилактическое применение кефира с БАД "Долюцар" на фоне действия повреждающего фактора снизило в крови и печени содержание ТБК - активных продуктов соответственно на 21% и 38%, нормализовало активность каталазы в крови и печени (повысилась активность фермента на 150% и 57% соответственно).

Иммуномодулирующее действие кефира с БАД "Долюцар" оценивалось по воздействию его на клеточные и гуморальные факторы резистентности. Первый показатель - активность фермента лизоцим в сыворотке крови, который вызывает гибель бактерий и других клеток, способствуя фагоцитозу;

второй фактор - содержание р-лизинов в сыворотке крови; третий фактор -общая бактериальная активность сыворотки крови, как интегральный показатель состояния сывороточных гуморальных факторов зашиты. При введении кефира с БАД "Долюцар" по сравнению с контрольной группой животных напряжение лизоцимов в сыворотке крови снизилось на 14%, содержание р-лизинов увеличилось на 41 % и бактериальная активность повысилась на 127%.

Таким образом, способность молочнокислого продукта с БАД "Долюцар" усиливать неспецифические факторы резистентности является характерной чертой иммуномодуляторов.

Гепатозащитное действие кефира с БАД "Долюцар" изучали на крысах, используя модель острого токсического поражения печени, полученную введением 50% масляного раствора тетрахлорметана. Эффективность гепато-защитного действия оценивали по нормализации биохимических показателей функционального состояния печени: активности (АлАт) в сыворотке крови, щелочной фосфатазы (ЩФ) в сыворотке крови, содержанию общего билирубина в сыворотке крови, содержанию триглицеридов в гомогенате печени.

Применение кефира с БАД "Долюцар" привело к нормализации активности щелочной фосфатазы сыворотки крови, содержания триглицеридов печени, общего билирубина в сыворотке крови, а также снизила активность АлАт в сыворотке крови по сравнению с контрольной группой животных на 20%, что свидетельствует о выраженной гепатозащитной активности продукта.

Общие выводы

1. Проведена ресурсная оценка растений видов рода люцерна в Кабардино-Балкарской республике, составлена карта их ареала. Установлено, что сырьевые запасы всех семи видов дикорастущей люцерны, произрастающих в КБР, ограничены. В качестве сырьевого источника БАВ предложена сельскохозяйственная культура — люцерна посевная (сорт Славянская), выращиваемая в КБР.

2. Проведено изучение химического состава травы люцерны посевной

(сорт Славянская), установлено наличие 25 соединений различных групп БАВ, которые представлены флавоноидами, фенолокислотами, три-терпеновыми сапонинами, пектиновыми веществами, витаминами, аминокислотами.

3. Проведен количественный анализ некоторых БАВ, установлено, что в траве люцерны посевной (сорт Славянская) содержится (в пересчете на воздушно-сухое сырье): флавоноидных соединений 0,73+0,06%, антоцианидинов 87+0,5 мг%, выход тритерпеновых сапонинов составил 2,55+0,05%, что говорит о возможности использования люцерны в качестве дополнительного источника сапонинсодержащего сырья.

4. Впервые определено содержание пектиновых веществ в траве люцерны посевной (сорт Славянская) и исследованы их аналитические характеристики. Установлено, что в траве люцерны посевной содержится: общего пектина - 4,2%, протопектина - 3,15% и растворимого пектина - 1,05%. Общее содержание карбоксильных групп в структуре пектина составляет 18,9%, общая степень их этерификации - 19,05%, что говорит о низкой степени этерификации (Е<40%) и высокой комплексообразующей способности пектиновых веществ. Благодаря этому пектиновые вещества люцерны посевной могут использоваться как детоксиканты.

5. В результате фармакологических исследований на животных различных суммарных фракций люцерны посевной установлено гипохолестерин-емическое, гепатозащитное и кардиотропное действие.

6. На основании результатов химических и биологических исследований травы люцерны посевной разработан и внедрен в производство продукт питания функционального назначения - булочка "Луговая", рекомендованный для профилактики атеросклероза и авитаминозов.

7. По результатам медико-биологических исследований разработан и внедрен молочнокислый продукт функционального назначения (кефир) с БАД "Долюцар" (водный экстракт люцерны), обладающий антиокси-дантыми, иммуномодулирующими, гепатозащитными, антитоксическими свойствами.

8. Впервые из воздушно-сухого сырья травы люцерны посевной на базе НПП ООО "Биоритм" (г. Москва) методом высоковакуумной сушки получен сублимационный порошок. Установлено, что суммарное содержание витаминов в полученном порошке составило 250 мг%, что позволяет использовать его для производства фиточаев и фитосборов общеукрепляющего действия.

Список опубликованных работ

1. Разработка оздоровительных пищевых растительных биодобавок. // Регион. конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (53; 1998; Пятигорск): Материалы ... - Пятигорск, 1998. - С.101-102 (соавт. А.Л. Казаков, В.А. Компанцев, Б.Х. Хацуков и др.)

2. Люцерна - перспективный источник лечебно-профилактических средств. / Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (53; 1998; Пятигорск): Материалы ... - Пятигорск, 1998. - С. 16-17. (соавт. А.Л. Казаков)

3. Разработка биологически активных пищевых добавок. / Человек и лекарство: Тез. докл. V Рос. нац. конгр. 21-25 апр. 1998. - М., 1998. -С. 374-375. (соавт. В.А. Компанцев, А.Л. Казаков, И.И. Самокиш и

др.)

4. Разработка биодобавок с антиоксидантными свойствами для профилактики атеросклероза. // V Международная конф. Био-антиоксидант 18-20 ноября 1998.-М., С 217-218. (соавт. А.Л. Казаков, В.А. Компанцев, И.И. Самокиш и др.)

5. Разработка парафармацевтических средств для профилактики экологически обусловленных заболеваний. / Человек и лекарство: Тез. докл. VI Рос. нац. конгр. 19-23 апр. 1999. - М., 1999. - С. 297-298. (соавт. А.Л. Казаков, В.А. Компанцев, И.И. Самокиш и др.)

6. Экологически обусловленные заболевания и пути их профилактики через биодобавки к пище./ Питание XXI века. Международный

симпозиум. Медико-биологические аспекты, пути оптимизации.

Владивосток. Тезисы докладов 1999, - С.128-129. (соавт. Э.Ф. Степанова, А.Л. Казаков, МА Огай и др.)

7. Поиск растительного сырья адаптогенного действия к гипоксии в условиях высокогорья. / Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (54; 1999; Пятигорск): Материалы ... - Пятигорск, 1999. - С. 18-19 (соавт. А.Л. Казаков, ВА Компанцев, МА Газаев, и др.)

8. Корреляция некоторых морфологических и химических показателей трех видов люцерны. / Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (54; 1999; Пятигорск): Материалы ... - Пятигорск, 1999. - С. 19.-20 (соавт. А.Л. Казаков, Л.Е. Назарова, Т.П. Куликова и др.)

9. Перспективы использования лекарственных и пищевых растений для разработки лечебно-профилактических средств. / Человек и лекарство: Тез. докл. VIII Рос. нац. конгр. 2-6 апр. 2001. - М., 2001. -С. 572. (соавт. А.Л. Казаков, Л.И. Бабаскина, B.C. Бабаскин и др.)

10. Разработка функциональных продуктов питания для реабилитации населения Российской Федерации, проживающего в экологически неблагоприятных территориях. // Регион, конф. по фармации и фармакологии (58; 2003; Пятигорск): Материалы ... - Пятигорск, 2003. - С. 540-542 ( соавт. А.Л. Казаков, Л.И. Бабаскина, Б.Х Хацуков).

11. Медико-биологические исследования по оценке эффективности использования БАД "Долюцар" в производстве пищевых продуктов., VII международный съезд, фитофарм 2003, материалы съезда, Санкт-Петербург-Пушкин, 3-5 июля 2003 г. (соавт. Е.Г. Доркина, АЛ. Казаков, А.В. Царьков и др.)

ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ЛЮЦЕРНЫ ФЛОРЫ КАБАРДИНО-БАЛКАРСКОЙ РЕСПУБЛИКИ

ЧЕЧЕНОВ ШАМИЛЬ ШАМИЛЕВИЧ

Автореферат на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

15.00.02 - Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Подписано к печати "_"_2005г., формат 60 х 84 1/16

Бумага книжно-журнальная. Печать - ротапринтная. Усл. Печат.л. 1,0 Тираж 80 экз. Заказ № 9

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального

образования "Пятигорская государственная фармацевтическая академия

Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"

357532, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11. Ротапринт ГОУ ВПО Пятигорская ГФА Росздрава

г

696

В последние годы достигнуты большие успехи в области химии и фармакологии природных флавоноидов и тритерпеновых сапонинов, широко распространенных в растительном мире.

Разнообразие химического строения и фармакологических свойств этих соединений представляет значительный интерес с точки зрения дальнейшего поиска новых сырьевых источников указанных групп соединений. Этот интерес обусловлен их выраженным гипохолестеринемическим, антигипертензивным, гипогликемическим, гепатотропным, противовоспалительным, сосудоукрепля-ющим действием. [9, 10]

В настоящее время достаточно остро стоит проблема укрепления отечественной сырьевой базы лекарственных растений. Это связано с резким ухудшением экологической обстановки в России, а также ограниченными возможностями использования естественных растительных ресурсов. Именно поэтому важная роль отводится культивируемым кормовым растениям, поскольку введение дикорастущих растений в культуру решает многие ресурсные проблемы.

Использование известных ценных сельскохозяйственных культур, особенно представителей семейства Бобовых, характеризующихся репрезентативным набором биологически активных соединений, представляется актуальным для отечественной фармации, в первую очередь с позиций расширения сырьевой базы для производства фармацевтической продукции.

Растения семейства бобовых, в том числе и представители рода люцерна издавна испоьзуются в народной медицине.

В научной медицине некоторые виды люцерны применяют для создания биологически активных добавок (БАД) к пище. Так, компании «Ныовейс», «Виталайн», «Инрич» (США) выпускают БАД к пище «Люцерна» (Alfalfa), под названием «Основа всех благ». Она рекомендована для профилактики и лечения атеросклероза, сердечных болей, артритов, ревматизма, аллергии, анемии, интоксикации печени, а также для нормализации водного обмена.

В Федеральном реестре БАД к пище (Москва, 2000) зарегистрированы

Эраконд»-жидкий и сухой экстракты люцерны посевной, рекомедованные как лечебно-профилактические средства при желудочно-кишечных, простудных, аллергических, гинекологических и других заболеваниях. Концентрат сиропообразный «Виолетта -3», «Виолетта-оригинальный» и «Виолетта-тонизирующий» (ТОО «Виолетта», Москва), в состав которых входит трава люцерны, обладают общеукрепляющим, мочегонным, успокаивающим действием.

Химические исследования видов рода люцерна, проведенные Бабаскиной Л.И., указывают на наличие в них некоторых групп флавоноидов, белков, аминокислот, минеральных веществ, липидов, стеринов, свободных жирных кислот, пигментов, восков, фосфолипидов, ди- и триацилглицидов. Разработаны и утверждены ТУ, проекты ФСП и ОПР на траву люцерны посевной и на экстракт люцерны жидкий. Предложена технология производства косметических средств, таких как «Крем для рук» и «Крем для ног», обладающих ранозажив-ляющим и бактерицидным действием, бальзам «Противовоспалительный», «Шисейкан» и др. Однако промышленное производство этих средств пока еще не налажено.

Несмотря на определенные успехи в изучении биологически активных веществ люцерны и разработке лечебно-профилактических средств на ее основе, все же пока не решены задачи научно-обоснованного подхода к расширению сырьевой базы лекарственных растений за счет использования кормовых культур с учетом содержания основных групп БАВ и их фармакологического действия.

В этой связи исследование химии флавоноидов, тритерпеновых сапонинов, пектиновых веществ, витаминов и других БАВ содержащихся в люцерне, является актуальным и позволит решить ряд задач научно-практической фармации.

Цель н задачи исследований. Цель настоящей работы - научное обоснование возможности расширения сырьевой базы лекарственных растений и раз-роботка лечебно-профилактических средств на основе БАВ видах рода люцерна, произрастающих в Кабардино-Балкарской Республике (КБР).

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи: провести исследования распространения растений рода люцерна на территории КБР; выявить наиболее перспективные виды этих растений, как источников БАВ и сырьевых запасов; изучить химический состав наиболее значимых видов рода люцерна как лекарственного растительного сырья; провести фармакологический скрининг суммарных фракций травы люцерны с целью дальнейшего их использования для производства различных лечебно-профилактических средств.

Научная новизна. Проведены ресурсные исследования дикорастущих и культивируемых видов люцерны флоры КБР, составлена карта их ареала. Установлено, что в качестве лекарственного сырья для разработки лечебно-профилактических средств, целесообразно рекомендовать сельскохозяйственную кормовую культуру - люцерну посевную (Medikago sativa L.), сорт Славянская, с урожайностью 100-120 ц\га, культивируемую в предгорных экологически чистых районах КБР.

Изучены полифенольные соединения, содержащиеся в люцерне посевной, представленные флавонами, флавонолами, изофлавонами, куместанами и ан-тоцианидинами.

Впервые из травы люцерны посевной (сорт Славянская) выделены и идентифицированы тритерпеновые сапонины - медикагеновая кислота и ее глюко-зид, хедерогенина-3-дигликозид; оксикоричные кислоты - паракумаровая, кофейная, феруловая; пектиновые вещества.

Проведен качественный и количественный анализ аминокислот, содержащихся в траве люцерны посевной (сорт Славянская), и витаминов в ее сублимационном порошке, полученном методом высоковакуумной сушки.

Определено количественное содержание флавоноидных соединений, три-терпеновых сапонинов, антоцианидинов и пектиновых веществ в траве люцерны посевной.

Проведены исследования на животных, фармакологического действия настоек люцерны посевной (сорт Славянская), полученной нами на 40% и 70% этаноле методом перколяции и молочнокислого продукта с БАД «Долюцар» (водный экстракт люцерны посевной), представленного НПФ ООО «Эраконд» г. Стерлитамак установлено, что: настойка люцерны посевной, полученная на 70% этаноле обладает гипохо-лестеринемическим и гепатозащитным действием; настойки люцерны посевной, полученные на 40% и 70% этаноле обладают кардиотропным действием; добавление водного экстракта люцерны «Долюцар» в молочнокислый продукт (кефир) повышает его антиоксидантные, иммуномодулирующие и ге-патозащитные свойства.

Практическая значимость работы и внедрение результатов в практику

В результате проведенных исследований показана возможность расширения сырьевых источников БАВ за счет люцерны посевной (сорт Славянская) культивируемой в КБР, и использования ее для производства лечебно-профилактических средств. Нами разработаны и внедрены БАД к пище и продукты питания функционального назначения: хлебобулочные изделия - булочка «Луговая» (2,5% муки травы люцерны и 2,5% муки травы клевера), рекомендована как гипохолестеринемический, витаминосодержащий продукт (акт внедрения от 10 октября 2000г.); молочнокислый продукт - кефир с БАД «Долюцар» рекомендован в качестве продукта питания общеукрепляющего действия и повышающего неспецифическую резистентность организма. Зарегистрирован в Гос. Реестр

Б АД к пище ТУ 9222-283-00419785-2002 (акт внедрения от 20 сентября 2002г.); сублимационный порошок, полученный из травы люцерны посевной (сорт Славянская), рекомендован для производства фиточаев общеукрепляющего действия (акт внедрения от 01 ноября 2002г.); материалы исследований кардиотропного действия настоек люцерны посевной (сорт Славянская), приготовленных на 40% и 70% этаноле, используются в лекционном курсе на кафедре фармакологии ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (акт внедрения от 17 ноября 2004 г.).

Положения, выдвигаемые на защиту: результаты исследований ареала растений рода люцерна на территории КБР и выявление перспективных видов, как сырьевых источников ценных биологически активных веществ; данные о результатах исследований химического состава и количественного содержания некоторых групп БАВ травы люцерны посевной (сорт Славянская); результаты фармакологического скрининга различных фракций из травы люцерны посевной и продуктов на их основе; обоснование использования люцерны посевной (сорт Славянская), в качестве сырья производства различных лечебно-профилактических средств.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом НИР ГОУ

ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (№ гос. регистрации 01.20.0013406) и соответствует проблеме «Фармация» Ученого совета Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ, секция №38.

Апробация работы и публикации

Основные фрагменты диссертациооной работы изложены в материалах 53-й, 54-й, 58-й региональных конференций по фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск, 1998, 1999, 2001), V, VI, VIII Российских национальных конгрессов «Человек и лекарство» (Москва, 1998, 1999, 2003); 5 -ой международной конференции «Биоантиоксидант» (Москва, 1998), международного симпозиума «Питание 21 века» (Владивосток, 1999), 7-го международного съезда «Фитофарм 2003» (Санкт - Петербург - Пушкин, 2003). По материалам диссертации опубликовано 11 научных работ.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 110 страницах компьютерного набора и состоит из введения; обзора литературы; 2-х глав собственных исследований; общих выводов, списка литературы, включающего 143 источника, в том числе 38 иностранных; содержит 22 таблицы, 10 рисунков и приложения.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Проведена ресурсная оценка растений рода люцерна в Кабардино-Балкарской республике, составлена карта ареала видов этого рода. Установлено что сырьевые запасы всех семи видов дикорастущей люцерны ограниченны. В качестве сырьевого источника БАВ предложена сельскохозяйственная культура - люцерна посевная, сорт Славянская.

2. Проведено изучение химического состава травы люцерны посевной, установлено 25 соединений различных групп БАВ, которые представлены флавоноидами, фенолокислотами, тритерпеновыми сапонинами, пектиновыми веществами, витаминами, аминокислотами.

3. Проведен количественный анализ некоторых групп БАВ, установлено, что в траве люцерны посевной содержится (на воздушно-сухое сырье): флаво-ноидных соединений 0,73±0,06%, антоцианидинов 87мг%, выход тритер-пеновых сапонинов составил 2,55%, что говорит о возможности использования люцерны в качестве дополнительного источника сапонинсодержа-щего сырья.

4. Впервые определено содержание пектиновых веществ и исследованы их аналитические характеристики. Установлено, что в траве люцерны посевной содержится общего пектина 4,2%, протопектина - 3,15% и растворимого пектина - 1,05%. Общее содержание карбоксильных групп составляет 18,9%, общая степень этерификации 19,05%, что говорит о низкой степени этерификации (Е<40%) и высокой комплексообразующей способности пектиновых веществ, которые могут использоваться как детоксиканты.

5. В опытах на белых крысах изучена гиполипидемическая активность настойки люцерны посевной полученной на 70% этаноле и установлено, что она обладает выраженным гипотриглицеридемическим действием, что сопоставимо с препаратом «Гемфиброзил»;

- изучено гепатозащитное действие и установлено, что настойка оказывает положительное влияние на общее состояние печени в условиях острого токсического ССЦ-гепатоза и по ряду показателей согласуется с действием препарата гепатопротектора «Силибор»; выявлено кардиотропное действие настоек люцерны приготовленных на 40% и 70% этаноле, которое проявляется в снижении частоты сердечных сокращений при незначительном изменении их амплитуды и уменьшении минутного объема сердца;

Впервые из травы люцерны на базе НПП ООО «Биоритм» (г. Москва) получен сублимационный порошок методом высоковакуумной сушки. В нем установлено высокое содержание витаминов (250 мг%), что позволяет использовать его для производства фиточаев и фитосборов общеукрепляющего действия.

По результатам медико-биологических исследований, разработан и внедрен молочнокислый продукт на основе кефира, содержащий водный экстракт люцерны посевной - БАД «Долюцар». Продукт способен поддерживать в физиологических пределах функциональную активность многих органов и систем и может быть рекомендован в качестве профилактического общеукрепляющего, иммуномоделирующего, антиоксидантного средства. На основании химических и биологических исследований разработан и внедрен продукт питания функционального назначения на основе травы (муки) люцерны посевной хлебобулочные изделия — булочка «Луговая» и рекомендована для профилактики атеросклероза и авитаминозов.