Автореферат и диссертация по медицине (14.00.02) на тему:Структура поврежденной печени и регионарного лимфатического узла на фоне применения геля рекомбинантного ангиогенина человека

На правах рукописи

РГБ ОД

2 7 АПР 2002

ИБРАИМОВ АЙБЕК СУЛТАНОВИЧ

СТРУКТУРА ПОВРЕЖДЕННОЙ ПЕЧЕНИ И РЕГИОНАРНОГО ЛИМФАТИЧЕСКОГО УЗЛА НА ФОНЕ ПРИМЕНЕНИЯ ГЕЛЯ РЕКОМБИНАНТНОГО АНГИОГЕНИНА ЧЕЛОВЕКА

14.00.02 - анатомия человека 14.00.15 - патологическая анатомия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Новосибирск — 2002

Работа выполнена в Кыргызской государственной медицинской академии и Кыргызском филиале научно-исследовательского института клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН, г.Бишкек

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор В.Х. Габитов Научный консультант:

кандидат медицинских наук

A.A. Бейсембаев

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор И.В. Майбородин кандидат медицинских наук, доцент Г.В. Томчик

Ведущая организация:

Алтайский государственный медицинский университет (г. Барнаул).

Защита диссертации состоится «_»_2002 г. в_часов

на заседании диссертационного совета Д 208.062.05 в Новосибирской государственной медицинской академии.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Новосибирской государственной медицинской академии (630091, г. Новосибирск, Красный проспект, 52).

Автореферат разослан «_»_2002 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

д.м.н., профессор A.B. Волков

J

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Аетуальность темы.

Повреждения печени характеризуются особой тяжестью, сложностью распознавания и лечения. Частота повреждений печени колеблется от 8,2 до 56% от всех травм брюшной полости и не имеет тенденции к снижению. В большинстве случаев пострадавшие с повреждением печени являются людьми молодого трудоспособного возраста. По данным литературы, в возрасте до 40 лет было 80,1 - 90,7% пострадавших, мужчин в 4 раза больше чем женщин (Шалимов A.A., 1993; Литвин A.A., 1994; Цыбуляк Г.Н., 1995; Шахназаров С.М., 1996; Гарбузенко Д.В., Попов Г.К., 2001; Lai H.S., Chen W.J., 1999).

Одним из уникальных свойств печени является ее способность регулировать свой собственный размер и рост. Это свойство определяется основной ролью печени в метаболической регуляции и ее значением в жизни. Для реализации этих функций ткань печени отвечает на воздействие извне организма и на сигналы, и на метаболические команды, переданные посредством гормонов, цитокинов, факторов роста и нервной регуляции. Сопоставление динамики заживления ран печени после ее обработки разными методами позволит выбрать оптимальный способ воздействия на регенераторные процессы, что и определяет актуальность данной работы (Гарбузенко Д.В., Попов Г.К., 2001; Чикотеев С.П. и соавт., 2001; Masson S., Devesau M., Hiron M. et al., 1999; Ogata T., Okuda K., Ueno T. et al., 1999).

В лимфатической системе лимфатические узлы являются важными гомеостатическими структурами для внутренней среды организма, и изучая характер морфофункционального реагирования лимфатических узлов на различные воздействия, можно получить информацию о механизмах адаптации организма к этим влияниям, о наличии и степени адаптивного процесса (Бородин Ю. И., Григорьев В. Н., 1986; Бородин Ю. И и соавт. 1995;2001; Saint-Marie G., Belisle С., Peng F. S., 1990; ; Slavin S. A., 1997).

В настоящее время существующие в арсенале медиков различные биологические вещества, способствующие ускорению регенераторных процессов оказались малоэффективными для печени вследствии особенности морфологии ее сосудистого строения. В этом отношении интересно было бы выяснить возможности препарата ангиогенина, отвечающего за рост кровеносных сосудов.

Цель исследования. Разработать способ ускорения регенерации печени после создания экспериментальной хирургической раны при применении геля рекомбинантного ангиогенина человека. Задачи исследования.

1. Изучение процессов регенерации в экспериментальной хирургической ране печени.

2. Исследование структурных преобразований регионарного лимфатического узла при заживлении экспериментальной хирургической раны печени. ' '

3. Изучение регенераторных процессов экспериментальной раны печени при интраоперационном применении геля рекомбинантного ангиогенина человека.

4. Исследование структурных преобразований регионарных лимфатических узлов при экспериментальной хирургической ране печени и в условиях применения геля рекомбинантного ангиогенина человека.

5. Провести корреляционный анализ морфофункциональных преобразований в печени и регионарных лимфатических узлах при экспериментальной хирургической ране и в условиях применения ангиогенина.

Научная новизна.

Впервые изучены сочетанные морфофункциональные и структурные изменения при повреждении печени и регионарных лимфатических узлах.

Впервые изучено морфофункциональное состояние печени при её повреждении на фоне применения геля рекомбинантного ангиогенина человека.

Впервые изучена реакция регионарного лимфатического узла при стимуляции регенерации гелем рекомбинантного ангиогенина человека повреждения печени.

Впервые проведена комплексная оценка регенерации повреждения печени и реакции лимфатического узла на фоне применения геля рекомбинантного ангиогенина человека.

Теоретическая и практическая значимость

1. Изучена возможность применения геля рекомбинантного ангиогенина человека при повреждениях печени.

2. Показана возможность применения как маркера регионарного лимфатического узла при повреждении печени и его коррекции.

3. Разработан метод ускорения регенераторных процессов в печени с использованием геля рекомбинантного ангиогенина человека.

Положения, выносимые на защиту

1. При создании экспериментальной хирургической раны печени происходят выраженные морфофункциональные изменения в ее лимфатическом регионе.

2. Применение геля рекомбинантного ангиогенина человека вызывает ускорение регенераторных процессов в печени и восстановление структуры регионарного лимфатического узла.

3. Морфофункциональные преобразования в печени коррелируют с изменениями структурных параметров регионарного лимфатического узла при экспериментальной хирургической ране печени и в условиях применения геля рекомбинантного ангиогенина человека.

Апробация работы

Основные положения диссертации были доложены на V международном научном симпозиуме и VI Чуйской научно-практической конференции, г.Бишкек, 2001; конференции «Хирургия в период экономических реформ», г.Бишкек, 2001.

Публикации

Всего опубликовано 9 печатных работ, из них по теме диссертации 5 печатных работ.

Объем и структура диссертации

Содержание диссертации изложено на 120 страницах машинописного текста. Диссертация состоит из введения, включает обзор литературы, главу материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, практические рекомендации, список литературы. Работа иллюстрирована 20 рисунками, цифровой материал исследований представлен 7 таблицами, 3 графиками. Список литературы включает 180 источников, из них 92 отечественная литература и 88 иностранная литература.

Весь материал, представленный в диссертации, набран и обработан автором лично.

Работа выполнена в Кыргызской государственной медицинской академии и Кыргызском филиале научно-исследовательского института клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН, г.Бишкек. Данная работа является частью комплексного исследования, проводимого в Научно-исследовательском институте клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН и Кыргызском филиале научно-исследовательского института клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН, по теме 01.9.60. 001180 «Разработка новых способов диагностики, профилактики и лечения хирургической, терапевтической и гинекологической патологии с позиции современной лимфологии» под руководством академика РАМН, профессора Ю.И. Бородина.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Характеристика препарата — гель рекомбинантного ангногенина

человека.

Примененный в данной работе гель рекомбинантного ангиогенина человека (ангиогенин) впервые получен проф. Мертвецовым Н.П. в лаборатории генной инженерии НИИ молекулярной биологии СО РАМН.

Ангиогенин - среднемолекулярный пептид, состоящий из 123 аминокислотных остатков, по структуре весьма похож на человеческий фермент рибонуклеазу. Однако сходство это чисто внешнее, так сказать, "портретное", а функционального "родства" нет: роль рибонуклеазы состоит в расщеплении РНК, ангиогенин же, как показали авторы открытия, этого не делает, а рибонуклеаза в свою очередь не обладает ангиогенной активностью. В частности, она не вызывает роста кровеносных сосудов в роговице глаза кролика. Дело в том, что в нормальных условиях роговица глаза кролика не содержит кровеносных сосудов, кроме лишь тех, что находятся в кайме глаза. При внесении ничтожно малых количеств ангиогенина в роговицу она довольно быстро покрывается сетыо мельчайших капилляров. Густота и скорость их возникновения может служить количественной мерой активности введенного препарата. Активность же ангиогенина просто поразительна. Как уже отмечалось, он вызывает образование кровеносных сосудов при крайне малых концентрациях: одна часть на квадриллион (1:101J) (Куприянов В. В. и соавт., 1993; Елисеева Л.С., Мертвецов Н.П., 1997; Folkman J., Haudenschild, 1980).

Автор выражает свою глубокую признательность профессору Н.П. Мертвецову за предоставление ангиогенина и оказание методической и консультативной помощи.

Характеристика групп животных в эксперименте.

Эксперимент проведен на 75-ти беспородных крысах обоего пола массой 160-180 гр. которых содержали в стандартных условиях вивария (18220 С). Животные получали режимное, сбалансированное по белкам и

углеводам питание, при свободном доступе к воде. Разделение животных на группы проводили следующим образом: I группа (п = 15) - интактная, животные здоровой группы, которым производилась «ложная» операция -лапаротомия, без моделирования раны печени; II группа (п = 30) -"контрольная"- Моделирование раны печени проводили под ингаляционным наркозом в стерильных условиях экспериментальной операционной. После лапаротомии, острым путем производили разрез печени, через всю её толщину, длиной 0,5 см и накладывали печеночный шов по Телкову. Лапаратомическую рану послойно ушивали. Дальнейшее заживление ушитой раны печени протекало без какого-либо дополнительного воздействия; III группа (п=30) - "опытная" - после проведения лапаротомии, моделированную раневую поверхность печени однократно интраоперационно обрабатывали гелем рекомбинантного ангиогенина человека (0,1 мл) и после этого производили ушивание раны.

Крысы выводились из эксперимента путем декапитации под эфирным наркозом на 1, 3, 7, 14 и 21 сутки после операции для забора органов на гистологические исследования и крови, для выявления биохимических показателей.

Методы гистологической обработки материала.

Во всех исследованиях органов и тканей образцы были взяты в одних и тех же топографически строго локализованных участках.

Материал фиксировали в растворе Лилли. Далее гистологический материал проводили по общепринятой методике. Органы заливали в парафиновые блоки с добавлением 5-6% чистого воска. На санном микротоме с помощью стального ножа готовили срезы толщиной 5-7 мкм. Серийные срезы с блоков делали вдоль их продольной оси. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином, азур И-эозином - для обзорных целей и пирофуксином по Ван-Гизон - для выявления соединительнотканных элементов (Волкова О. В., Елецкий Ю. К., 1982). Окрашенные препараты заключали в пихтовый бальзам и накрывали покровным стеклом.

Морфометрия тканевых структур проводилась при помощи окуляр-микрометра МОВ-1-15х на светооптических микроскопах "Люмам-1-2", МБИ-15 и МБС-10 в соответствии с общепринятыми требованиями (Катинас Г. С., Полонский Ю. 3., 1970; Автандилов Г. Г., 1981).

Характеристика морфофункционального состояния печени складывалась из суммарной оценки признаков, наблюдаемых при визуальном изучении гистологических препаратов и количественных методов исследования.

Исследование печени.

Для каждой серии животных определяли количество неизмененных, двуядерных, дегенеративных гепатоцитов в поле зрения, площадь (в мкм2)и диаметр гепатоцитов, их ядер (в мкм), площадь центральной вены, просветы синусоидов, среднее расстояние от центра ядра гепатоцита до центра синусоида (сосудисто-тканевое отношение) (Самойлов М.О., 1985; Орлова Е.В., 1995), в соответствии с общепринятыми границами

Исследование регионарных лимфатических узлов.

Подсчет площади среза и площади отдельных структур производили на микроскопе сравнения МБС-10 при увеличении от 8,21 до 57,5 крат.

В лимфатических узлах определяли его площадь, относительные площади коркового, мозгового вещества, капсулы, трабекул, мозговых синусов, количество и площадь лимфатических узелков с центром размножения и без. Расчитывали соотношение удельной площади коркового и мозгового вещества (индекс КУМ).

Функциональные методы исследования печени.

При определении количественного содержания билирубина в крови использовался наиболее широко применяемый в настоящее время способ 1епс1га5з1к-К1е£Ьогп, основанный на образовании комплексного соединения билирубина с диазосульфаниловой кислотой. В качестве растворителя свободного (непрямого) билирубина вместо этилового спирта (по Ван-ден-Бергу) применяли раствор кофеина, что устраняет ошибки, связанные с

осаждением белков. Метод дает возможность количественно определять содержание связанного, а по разности между общим и связанным -содержание свободного билирубина (Предтеченский В.Е., 1960).

Определение активности аминотрансфераз по методу Umbreit et al. (1957), в модификации Т.С. Пасхиной (1959), основано на реакции переаминирования между алаяином (для определения ACT) и а-кетоглутаровой кислотой. Образующаяся в результате этих реакций пировиноградная кислота определяется колориметрически с помощью 2,4-динитрофенилгидразина (Блюгер А.Ф., 1964).

Статистические методы обработки.

Статистическая обработка данных проводилась на ПК Pentium III с использованием электронных таблиц Excel - 2000 и статистического пакета SPSS for Windows 10.0.5. Графические иллюстрации построены при помощи компьютерных программных пакетов «Excel». Вычислялись средние арифметические величины (М) в- абсолютных и относительных единицах и их ошибки (т). Вероятность достоверности различий сравниваемых средних величин определяли, сопоставляя значение критерия достоверности (tj) со стандартными значениями критерия Стьюдента. При всех подсчетах достоверными считали различия при Р<0,05, учитывая характер распределения признаков, близких к нормальному (Лакин Г.Ф., 1990).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исходы лечения повреждений печени пока остаются недостаточно хорошими. Большинство исследователей полагают, что летальность при повреждениях печени составляет 50—60% (Петровский Б. В., 1972; Савельев В. С., 1975). Причиной этого является недостаточное знание врачами методов исследования и оперативной техники на этом органе, исторически сложившееся мнение о невозможности хирургического воздействия при ряде заболеваний печени. Поэтому сопоставление динамики заживления ран печени после ее обработки разными методами позволит выбрать

оптимальный способ воздействия на регенераторные процессы (Девятов В. Я., 1992; Захарова М. В., Шкурупий В. А., Грек О. Р., 1994; Литвин A.A., 1994; Литвин A.A., Цыбуляк Г.Н.. 2000; Гарбузенко Д.В., Попов Г.К., 2001; Чикотеев С.П. и соавт., 2001; Frago L.M., Gimmenez A., Rodriguez E.N. et al., 1998; Lai H.S., Chen W.J., 1999).

На месте ушитого экспериментального хирургического повреждения печени формируются фибриновые спайки, представленные на 7-е сутки, после воздействия, незрелой соединительной тканью, с сохранившимися местами некрозами. Количество и степень развития сосудов недостаточное, что и определяет состояние печеночной раны. Паренхима печени по периферии места разреза находится в состоянии токсической агрессии, что подтверждается её дистрофией, застойными явлениями в кровеносных сосудах и склерозировании желчных ходов.

К концу 2-й недели в области раны определяется начало формирования рубца из зрелой соединительной ткани. В единичных случаях в центре рубца обнаруживаются незначительные очагами деструкции, окруженные по периферии лимфолейкоцитарными инфильтратами. В окружающей ткани центральные вены и синусоиды вокруг них расширены, гепатоциты находятся в состоянии зернистой дистрофии.

На 21 сутки после создания модели травмы печени в области раны обнаруживается продолжается формирование соединительнотканного рубца. Очаги некроза, воспалительные явления отсутствуют. Прилежащая к рубцу ткань практически не изменена.

На гистопрепаратах печени крыс, после моделирования экспериментальной травмы количество нормальных гепатоцитов было снижено во все сроки эксперимента, достигая минимального значения (меньше на 50%, по сравнению с интактным контролем) к 7-м суткам, и к концу наблюдения превышало сравниваемый показатель на 20% (Табл.1).

Пик снижения количества двуядерных клеток (в 3 раза) приходится на 1- е и 7-е сутки, во все остальные сроки показатели снижены в среднем на

30%. Принимая во внимание повышенное количество дегенерирующих гепатоцитов (Табл.1) можно отметить, что процесс регенерации в печени достаточно пассивен (Солопаев Б. П., 1980; Гарбузеико Д.В., Попов Г.К., 2001; Сох Е., Flancbaum L., Paulson R., 2000).

Данные биохимического анализа подтверждают повреждения паренхимы печени. Повышается активность трансаминаз: через 24 ч после травмы уровень АЛТ и ACT превышает базовый показатель на 130% и 75% соответственно, достигает пика к 3-м суткам и к 7-м суткам активность ферментов уменьшается, хотя показатели остаются выше контрольных величин. На 14 и 21 сутки показатели активности аминотрансфераз достоверно не отличаются от интактного контроля. Изменения в сыворотке крови общего билирубина незначительны.

Лимфатический узел представляет собой сложно организованный орган: с одной стороны, это важное звено путей лимфоциркуляции, а с другой - часть иммунной системы организма. Общепризнанным является факт активного участия лимфатических узлов в качестве эффекторного регуляторнога звена в цепи реакций иммунного ответа. Всё это определяет огромное внимание исследователей к лимфатическому узлу (Бородин Ю.И. и соавт., 1970; Шурина А. М., 1977; Сапин М. Р. и соавт., 1978; Бородин Ю. И., Григорьев В. Н., 1986; Бородин Ю. И и соавт., 1987; 1990; 1992; 1995; Выренков Ю. Е. и соавт., 1995; Луцевич Э. В., Чепеленко Г. В., 1995; Загуменников С. Ю., 1997; Старкова Е. В., 1997; Hunt Т. К., 1988; Belisle С., Sainte-Marie G., 1990; 1991; Tuboly S. et al., 1995; Slavin S. A., 1997).

Реакция регионарных лимфатических узлов подтверждает наличие патологического процесса, проявляющегося увеличением его абсолютной площади в 1,5 раза в 1-й срок наблюдения и сохраняющейся в течении всего эксперимента, повышением относительной площади мозгового вещества, мозговых синусов (Табл.2). В первичных узелках отмечалось снижение относительного количества и площади в первую неделю наблюдения, к 14 суткам данные показатели возрастали на 10% по сравнению с интактным

Таблица 1

Количественный анализ гепатоцитов в поле зрения на фоне травмы печени и __ применения ангиогенина (М±м)._

Серии Сутки Число нормальных гепатоцитов Число двуядерных гепатоцитов Отношение норм. гепатоцитов к дегенерирующим

Интактный контроль 14,7 ± 1,3 1,2 ±0,1 6,2 ± 0,5

Повреждение печени 1 6,7 ± 1,1* 0,4 ±0,03* 1,6 ±0,5*

-> j 5,4 ± 1,0* 0,6 ± 0,05* 1,3 ±0,2*

7 7,2 ±0,8* 0,45 ±0,1* 2,8 ±0,3*

14 10,6 ± 1,3* 0,7 ±0,3* 3,1 ±0,1*

21 11,2 ±2,3* 0,8 ± 0,07* 7,4 ± 2,0

Применение ангиогенина 1 16,7 ± 1,0 1,5 ±0,01* 5,2 ±0,3*

3 15,4 ±0,7 1,2 ±0,1 4,7 ±0,15*

7 19,2 ±0,5* 0,7 + 0,3* 6,8 ±0,1

14 16,6 ±0,7 1,1 ±0,02 7,3 ±0,1*

21 21,0 ± 1,3* 1,2 ±0,03 7,1 ± 1,2*

Примечание: * - показатели достоверны по сравнению с контролем и другими сроками наблюдения (р < 0,05).

показателем при тенденции к нормализации к 21 суткам. Анализ полученных данных выявил стадийность изменений анатомической конструкции лимфатического узла, вовлеченного в ответную реакцию на воспалительный процесс в области его лимфосбора. Эти изменения, по всей вероятности, объясняются реактивными преобразованиями в лимфатическом узле.

Хирургическое вмешательство при травмах печени является основным методом лечения. Оперативная активность при разных видах повреждений печени, по данным различных авторов, составляет 70-90% (Мариев А.И., Ревской А.К., 1993; Шалимов A.A., 1993). При обработке ран печени используют методы физического воздействия, биологические ткани и синтетические материалы, что обусловливает развитие комплекса структурно-функциональных изменений в органе и зоне раневого дефекта,

определяющих особенности течения репаративных процессов и сроки их заживления (Цыбуляк Г.Н., 1995;Соловьев Ю. Н., 1998; Бирюков О.В. и соавт., 1999; Литвин A.A., Цыбуляк Г.Н., 2000; Kitamura Y., Usami M.et al., 1998; Masson S„ Devesau M., Hiron M. et al., 1999; Ogata Т., Okuda K., Ueno Т. et al., 1999).

Морфологическая картина ушитой экспериментальной хирургической раны печени на фоне применения ангиогенина свидетельствует о стимуляции регенераторных процессов, что уже в ранние сроки проявляется в заметном уменьшении в 2 раза зоны некротического воспаления и в 2,3 раза лимфолейкоцитарного вала. Окружающая грануляционная ткань богата сосудистыми элементами, явления воспаления в ней выражены слабее, чем в контрольной группе. Через неделю после воздействия рубец представлен зрелой соединительной тканью, в которой не выражены явления воспаления. К 14-м суткам после создания экспериментальной травмы печени в области раны обнаруживается сформированный соединительнотканный рубец. Очаги деструкции и воспалительные явления отсутствуют. Сосудистая реакция менее выражена, чем в предыдущей группе. Прилежащая к рубцу паренхима печени практически не отличается от интактного контроля.

Одними из показателей состояния регенерации считается наличие гипертрофии гепатоцитов, количество двуядерных и дегенерирующих клеток, а также их гиперплазия (Саркисов Д.С. и соавт., 1987; Литвин A.A., Цыбуляк Г.Н., 2000)

В группе с применением ангиогенина, об активации репарации свидетельствует и ранняя реакция паренхимы печени в виде гипертрофии гепатоцитов, восстановления индекса сосудисто-тканевого взаимоотношения (Табл.3).

На гистопрепаратах печени крыс, получавших ангиогенин, во все сроки исследования содержание нормальных гепатоцитов в поле зрения было более высоким, чем у крыс не подвергавшихся стимулирующей терапии.

Таблица 2

Сравнительная динамика изменений относительной площади структур лимфатического узла при экспериментальной хирургической травме печени

Серии Сутки Капсула Корковое вещество Корковые синусы Мозговое вещество Мозговые синусы Площадь узла (мм2).

Интактный контроль 10,0± 1,4 29,6 ±2,1 3,4 ±0,1 35,4 ±2,5 18,1 ±3,1 4,7 ± 0,2

1 9,5±1,1 32,5±3,5 5,9±0,2* 42,7±3,1* 22,7±1,4* 6,8±0,1*

О) и С 3 10,6±0,6 35,8±2,8* 4,3±0,1 * 42,1±3,5* 23,7±1,4* 6,4±0,1*

о 53 ЕС й 7 10,5±0,8 41,1±3.1* 3,6±0,3* 40,0±3,2 20,5±1,2 6,2±0,1

о О. со о с 14 9,8±1,1 31,5±3,2 6,1±0,2* 42,7±3,1* 20,3±1,5* 6,5±0,1*

21 ЮЛ ±1,4 28,6 ± 1,4 3,4 ±0,1 35,4 ±2,0 18,6 ±3,1 4,9 ± 0,2

1 12,4±1,3 32,8±3,4 5,7±0,1* 45,4±1,8* 20,6±1,6 6,4±0,2*

2 X <L> « я я « £ В X 3 12,3±0,1 37,1±1,4* 5,9±0,1* 34,2±1,3 19,7±2,4 5,9±0,1*

а г к о 2 С 15 ев X 7 11,1±0,2 31,2±1,4* 3,5±0,1* 36,6±1,2 18,3±1,1 4,8±0,1

14 12,1±1,1 30,8±3,4 4,7±0,1 34,9±1,5 20,6±1,6 5,1 ±0,2

21 11,9±1,3 28,7±3,4 5,2±0,2 35,2±1,3 18,6±1,4 4,4±0,3

Примечание:*- показатели достоверно отличаются от интактного контроля при Р<0.05

Число двуядерных клеток значительно превышало показатели предшествующей серии, при меньшем количестве дегенерирующих гепатоцитов (Табл. 1).

Данные биохимического анализа подтверждают лучшее сохранение паренхимы печени. Активность трансаминаз резко повышается через 24 ч после травмы и в дальнейшем имеет тенденцию к снижению, оставаясь при этом ниже, чем в предыдущих группах. Изменения в сыворотке крови общего билирубина незначительны.

Таким образом, морфофункциональная картина ушитого экспериментального повреждения печени на фоне применения ангиогенина свидетельствует о стимуляции регенераторных процессов, что уже в ранние сроки проявляется в заметном уменьшении зоны некротического воспаления и формированием к 14-м суткам рубца представленным зрелой соединительной тканью, в которой не выражены явления деструкции.

В лимфатической системе лимфатические узлы являются важными гомеостатическими структурами для внутренней среды организма, и изучая характер морфофункционального реагирования лимфатических узлов на различные воздействия, можно получить информацию о механизмах адаптации организма к этим влияниям, о наличии и степени адаптивного процесса (Бородин Ю. И., 1990; 1992; 1993; Спиженко Ю. П., 1990; ДжумабаевС. У., 1993).

Использование геля рекомбинантного ангиогенина человека для стимуляции заживления повреждений печени приводит к более выраженной реакции структуры лимфатического узла, чем в серии сравнения. Отмечается увеличение площади сечения узла за счет увеличения доли коркового вещества, наиболее выраженного после 3-х суток и имеющего тенденцию к нормализации в более поздние сроки. Происходит восстановление площади мозгового вещества к 3-м суткам (Табл.2). Через 24 часа происходит выраженное увеличение количества и площади вторичных лимфоидных узелков, в сравнении с интактным контролем и группой сравнения. В конце первой недели эксперимента наблюдается сохранение превышения относительно контроля площадей ряда зон лимфатического узла. К 14 и 21 суткам наблюдения все показатели не отличались от интактного контроля.

Таблица 3

Изменение морфометрических показателей гепатоцитов в области раны на _фоне травмы печени и применения ангиогенина (М±м)._

Серии Сутки Размер гепатоцитов (мкм) Площадь гепатоцитов (мкм2) Диаметр ядер гепатоцитов (мкм) Сосудисто-тканевое отношение (мкм)

Интактный контроль 15,8 ±2,6 194,2 ±37,1 6,2 ± 1,5 12,4 ±3,1

1 17,0 ± 1,8 314,7 ±47,3* 7,9 ±1,5 17,4 ±2,3*

о я 3 21,4 ± 1,2* 402,7 ±55,3* 8,5 ±1,4* 18,1 ± 1,4*

о» 2 ^ Р 1> о 7 23,2 ±2,8* 485,1 ±74,0* 12,8 ±2,1* 21,0 ± 3,1*

°< С ш ^ о С 14 20,2 ± 1,9* 320,7 ±42,3* 10,1 ± 1,3* 20,5 ± 2,5*

21 17,2 ±2,3 278,3 ±38,7* 7,4 ± 2,0 16,5 ±8,5*

1 20,8 ±1,4* 376,0 ± 26,5* 11,3 ± 1,6* 14,2 ±2,7

<и Й 3 18,8 ± 1,7 276,0 ±39,9* 8,1 ±2,0 14,6 ± 3,1

3 5 Я 11 и и 2 О 7 22,6 ±2,3* 370,1 ±43,6* 9,1 ±2,0 13,7 + 2,7

1 3 си £ С а 14 19,4 ± 1,8* 309,3 ± 48,2* 11,2 ±2,2* 13,5 ±1,1

21 15,4 ± 1,8 268,1 ±22,5* 8,4 ± 1,5 11,9 ± 1,4

Примечание: * - показатели достоверны по сравнению с контролем и другими сроками наблюдения (р < 0,05).

На основании полученных данных можно сделать заключение, что гель рекомбинантного ангиогенина человека приводит к биостимуляции лимфоидной ткани в лимфатических узлах, который проявляется в виде увеличения и сохранении доли коркового вещества, количества и размеров лимфоидных узелков.

Следовательно, вышеизложенное позволяет считать, что применение геля рекомбинантного ангиогенина человека оказывает не только стимулирующее действие на процессы регенерации ткани печени,

активизируя ангиогенез, но и улучшая микроциркуляцию снижает развитие воспалительных процессов после нанесения хирургической травмы.

ВЫВОДЫ

1. Регенерация раны печени на 21 сутки без какой-либо стимуляции приводит к формированию незрелого соединительнотканного рубца с сохранившимися в нем участками деструкции.

2. В регионарных лимфатических узлах печени после создания экспериментальной раны печени возникают морфологические признаки увеличения их дренажной функции.

3. Применение геля рекомбинантного ангиогенина человека приводит к формированию рубца раны печени, представленного незрелой соединительной тканью на 7-е сутки эксперимента.

4. Применение геля рекомбинантного ангиогенина человека при экспериментальной хирургической ране печени вызывает значительное увеличение синусной' системы регионарных лимфатических узлов, что является признаком усиления дренажно-детоксикационной функции.

5. При создании хирургической раны печени в эксперименте, наблюдается прямая коррелятивная связь между морфофункциональными изменениями в этом органе и дренажно-детоксикационной функции регионарных лимфатических узлов.

6. Эффективность предложенной методики ускорения репаративных процессов с помощью геля рекомбинантного ангиогенина человека позволит применять ее при различных видах оперативных вмешательств на печени.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Аппликационное применение ангиогенина рекомендуется использовать в экспериментальных исследованиях, связанных с травматическими ранами.

2. Гель рекомбинантного ангиогенина человека следует рекомендовать в качестве материала-заполнителя при ушивании раны печени.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Ибраимов A.C., Бейсембаев A.A., Давыдов В.Т., Омурбеков Т.О. Влияние ангиогенина на репаративные процессы при экспериментальной асептической ране печени. //Морфология и хирургия. - Выпуск 3. -г.Новосибирск - 2002 - С. 61-62.

2. Ибраимов A.C. Возможность ускорения репаративных процессов в печени на фоне применения ангиогенина. // Хирургия в период экономических реформ.-сборник научных трудов.- г.Бишкек - 2001. - С. 138.

3. Ибраимов A.C., Бейсембаев A.A. Морфологическая характеристика паренхимы печени при ушивании ее экспериментальной хирургической раны. // Хирургия в период экономических реформ. - сборник научных трудов.- г.Бишкек - 2001. - С. 183.

4. Ибраимов A.C., Габитов В.Х., Бейсембаев A.A. Реакция паренхимы печени на фоне интраоперационного применения геля рекомбинантного ангиогенина человека. // Хирургия в период экономических реформ. -сборник научных трудов.- г.Бишкек - 2001. - С. 184.

5. Ибраимов A.C., Бейсембаев A.A. Морфофункциональное состояние лимфатических узлов региона печени на фоне применения ангиогенина. // Хирургия в период экономических реформ. - сборник научных трудов,-г.Бишкек — 2001. — С. 185-186.

Печ. л. 1 Тираж 100

Подписано в печать 14.03.02 Формат 60x84 1/16 Заказ №65_Бумага офсетная, 80гр/м~

Отпечатано в типографском центре КГМА, 720002 Бишкек, ул. Ахунбаева 92