Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Сравнительное изучение центральных и кардиальных эффектов строфантина, дигоксина и их иммобилизованных аналогов

$3' - 1 э | ;

АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК СССР

ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ

На правах рукописи

МИХАЙЛОВ Игорь Борисович

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЦЕНТРАЛЬНЫХ И КАРДИАЛЬНЫХ ЭФФЕКТОВ СТРОФАНТИНА, ДИГОКСИНА И ИХ ИММОБИЛИЗОВАННЫХ АНАЛОГОВ

СПЕЦИАЛЬНОСТЬ 14.00.25 — ФАРМАКОЛОГИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ 1991

Работа выполнена на кафедре фармакологии Санкт-Петербургского ордена Трудового Красного Знамени педиатрического медицинского института МЗ РСФСР (ректор — проф. М. В. Неженцев).

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, академик АМН СССР С. Н. ГОЛИКОВ доктор медицинских наук, заслуженный деятель науки, профессор П. П. ДЕНИСЕНКО доктор медицинских наук, профессор С. С. АЗИЗОВА

Ведущее учреждение — Военно-медицинская ордена Ленина Краснознаменная академия им. С. М. Кирова, г. Санкт-Петербург.

Защита диссертации состоится « » ■Х/Ро'ёмуЛу 199 £ г.

в « 1 » час на заседании специализированного ученого совета (Д.001.23.01) по защите докторских диссертаций при ордена Трудового Красного Знамени НИИ экспериментальной медицины АМН СССР (197376, Санкт-Петербург, Кировский пр., д. 69/7,1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИЭМ АМН СССР.

Автореферат разослан « » 199 года.

Ученый секретарь специализированного совета доктор биологических наук

Л. В. ПУЧКОВА

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

х&ртащЯйрдечныо гликовиды (СГ) - основные препараты, применяемые

для предупреждения и устранения сердечной недостаточности, независимо от ее причин. Однако, применение СГ нередко сопровождается их передозировкой, в среднем ее признаки отмечают у 20-2Еft больных ( Yeager M., 1983; Moorman J.R., Pritchett E.L.C.,1985; steiness е.,1986 ). Ведущая причина столь частых интоксикаций -малая широта терапевтического действия этих препаратов (Сивков И.И. И соавт,, 1987; Chung Е.К.,1985; Johnston G.D. , Наг ron D.'i.G. ,1987 ; И МН.Др.).

При изучении механизма возникновения токсических эффектов СГ много внимания уделяется их влиянию на электролитный,белковый и энергетический обмен в миокарде (Азизова С.С. и соавт., 1982; Гацура В.В., Кудрин А.Н., 1983; Бударин Л.И. и соавт., 1985; Houatein к.о. , 1982; и др.), а роль нервной систеш до сих пор освещается крайне скромно. Между тем, в-ЦНС количество и сродство рецепторов (№а+,К+-АТФ-аза) к СГ больше, чем в сердце ( La Pella F.S. , 19Ч2; Akera T. et al., 19ц5 ; и Др.), И ГЛИК03ИДЫ, особенно липофильные, легко проникают через ГЭБ ( Matos l. et ai.,i9Ro(

Cook L.H. et al.,1984; Harik T.,1989 )" KP0M0 Т0Г0> введение микроколичеств СГ, как непосредственно в полость боковых желудочков ( Kuikarni ь.к. , Mehta а.к.,1983 ), так и в конкретные структуры мозга (задний гипоталамус, задвижку - ohe^ ( pousquet Р. et ai.,1984 ), вызывает выраженные нарушения в деятельности сердца. Перерезка спинного мозга, наоборот, снижает кардиотокси-ческое действие гликозидов, вызванное их системным или внутримоз-ГОВЫМ введением ( Somberer .т.Г. Jt al . Ъ: ristra Ч.Р. et al.

1981). Защитный эффект вызывают и вейротропные средства.изменяющие активность различных медиаторных систем (Генденштейн Э.И.,

- £ -

1988; Klaus w. et al.,1981). Хорошо известна способность СГ влиять на цроцессы освобождения и захвата нейромедиаторов, а Также фуНКЦИЮ НОйрОНОВ (Ewann А.С.,1985; Tan С.М. , Powis D.A.,

1985; Feinauer M.et al.,1986; Plunkett Ь.М., Tackett R.L. , 1987aи лн.др.). Допустимо, что гто связано с действием СГ на рецепторы для эндогенных дигиталисоподобных веществ (ЭДПВ) -ней-ропептидов, влияющих на функцию ЦНС и работу сердца ( salto т.

et al. ,1989).

Названные нейротропные эффекты СГ могут иметь значение для возникновения не только кардиотоксических, но и других центральных эффектов, например, при лечении заболеваний ЦНС, в основе которых лежат нарушения активности медиаторных систем. К таким заболеваниям относится эпилепсия, успехи в борьбе с которой, несмотря на интенсивное изучение ее патогенеза и лечения, явно недостаточны. Так, в 1Щ> случаях больные остаются резистентными ко всем имеющимся пока противоэпилептическим препаратам ( ziporyn т. ,j985).

Анализ нарушений деятельности сердца при воздействии СГ на ЦНС мозсет способствовать нашему пониманию роли нейротропных механизмов в интоксикации названными препаратами и созданию новых способов ее предупреждения.

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

Целями настоящей работы были: изучение роли центрального действия СГ в развитии их нейротропных и кардиотропныт эффектов; испытание противоэпилептической активности гликозидов; создание (совместно с Институтом высокомолекулярных соединений АН СССР) менее токсичных кардиотонических препаратов СГ с большей широтой терапевтического действия.

Для достижения поставленных целей было необходимо решить следующие главные задачи:

1. Изучить на разных моделях влияние СГ (строфантина и ди-гоксина) на ДНС.

2. Изучить влияние строфантина и дигоксина на активность первичных и зеркальных эпилептогоиных очагов (90) в гиппокампе лягушек и крыс, а также на электросудороги и судороги,вызванные коразолом или бемегридом, у крыс разного возраста и у мышей.

3. Выявить различия в кардиотоксичности строфантина, дигоксина и их иммобилизованных на сополимере (винилпирролидоне с ыа-леиновыы ангидридом) аналогов, используя разные модели.

4. Сравнить терапевтическую (кардиотоническую) активность строфантина, дигоксина и их иммобилизованных на сополимере аналогов- на разных экспериментальных моделях.

5. Изучить скорость диссоциации комплексов СГ-сополимер в крови (i» vivo), а также фармакокинетику (изменения концентрации в крови; способность проникать в клетки и ткани различных органов; скорость выведения с мочой; и т^д,) моченых радиоактивной моткой СГ и их аналогов иммобилизованных на сополимере.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Дигоксин приводит к угнетению функции экспериментальных 30, оказывает значительный противоэпилептический эффект на моделях генерализованных судорог. На этом основании он рекомендован нами к включению в комплексную терапию эпилептической болезни.

Полученные данные о противоэпидемическом действии сердечного гликозида - дигоксина могут служить основанием для поиска других эффективных препаратов, способных оказать лечебное действие при эпилепсии за счет воздействия на активность мембранной К+-АТФ-азы нейронов эпилоптoraиных очагов.

2. Иммобилизация СГ (строфантина или дигоксина) на сополимере (винилпирролидоне с иалеиновым ангидридом), не изменяя тера-

повтическую (кардиотоничаскую) активность препаратов, ограничивает их попадание в ДНС и связанную с воздействием на нее токсичность, а, следовательно, увеличивает широту терапевтического действия гликозидов.

Создан новый класс менее токсичных препаратов СГ, фиксированных на сополимере.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Новыми экспериментальными данными, полученными в работе, являются сведения о тормозящем влиянии дигоксина в условно терапевтических дозах на активность экспериментальных ЭО в гиплокампе лягушек и крыс и генерализованные судороги у крыс равного возраста и мышей (заявка на изобретение № 4429823/14-066580 от 27.04.88).

В експериыонтах на идентифицированных нейронах моллюска роговая катушка и кардиорегулирующих нейронах виноградной улитки (с одновременной регистрацией ЭКГ) показано разнонаправленное влияние малых и больших концентраций СГ (строфантина и дигоксина) на величину мембранного потенциала. Выявлено неодинаковое влияние разных доз дигоксина на уровень РНК в нейронах ромбовидного мозга крыс.

Получены новые данные о влиянии дигоксина на мозговой кровоток у кроликов с генерализованными судорогами.

Впервые изучены терапевтические и токсические эффекты иммобилизованных на сополимере строфантина и дигоксина - препаратов с большой широтой терапевтического действия. Показано, что увеличение широты терапевтического действия иммобилизованных СГ является следствием их ограниченного проникновения в ДНС через геыато-энце-фалический барьер (заявка на изобретение № 4700452/31-05(050358). Положительное решение от 18.01.90). Изучена фармакокинетика новых препаратов СГ.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ РАБОТЫ:

1. Полученные данные позволили рекомендовать дигоксин (Решение Президиума Фармакологического комитета МЗ СССР, Протокол № II от 13.06.90) для клинического применения у больных с тяжелыми формами эпилепсии, резистентными к лечению традиционными противоэпидемическими средствами. При этом, у 44$ больных данной группы получен хороший лечебный эффект.

2. Созданы новые препараты СГ-ов, иммобилизованные на сополимере, с большей широтой терапевтического действия, чем обычные гликозиды.

АПРОБАЦИЯ И ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ

Результаты работы доложены и обсуждены на У1 Всесоюзном, съезде фармакологов (Ташкент, 1988); Всесоюзных конференциях: "Актуальные проблемы профилактики, диагностики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний" (Москва, 1986), "Современная морфология - физической культуре и спорту" (Ленинград, 198?), П Всесоюзной конференции "Простые нервные системы и их значение для теории и практики" (Казань, 1988), П Всесоюзной научной конференции "Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока" (Томск,1989), Всесоюзной конференции, посвященной 225-летию основания I ММИ им.И.М.Сеченова (Москва, 1990), П Всесоюзной конференции "Фармакологическая коррекция гипоксических состояний" (Гродно, 1991); Республиканских конференциях: Межвузовская конференция г.Ленинграда, посвященная 70-й годовщине Октября (1987) и X юбилейная конференция, посвященная 190-летию BMA им.С.М.Кирова (Ленинград, 1988); Ленинградском фармакологическом обществе (1988, 1989) и Ленинградском обществе кардиологов (1988); на Научной конференции, посвященной 60-летию основания ЛПМИ (1985); на Научных заседаниях кафедры фармакологии ЛПМИ и Проблемной комиссии ЛПМИ,

а также на заседании бюро Проблемной комиссии "фармакология сердца и сосудов" Научного Совала по фармакологии и фармации Президиума АМН СССР (Москва, 1989).

Данные исследования были представлены на выставке Исполкома Ленсовета пИнтевсификация-90", включены в Методические разработки к фактический занятиям по фармакологии: Л., 1988. - ч.1. -С.29-36 (под ред.проф.И.В.Марковой, М.В.Неженцева.и доц.Н.В.Уско-вой), а также в лекционный курс на кафедрах фармакологии, клинической фармакологии, нервных болезней и терапии ЛПМИ.

По теме диссертационного исследования опубликовано 25 печатных работ (из них 7 обзоров литературы), 2 главы в Методических рекомендациях МЗ СССР (Москва, 1988) (совм*с проф.В.А.Гуселем), 2 заявки на изобретения, получено 10 удостоверений на рационализаторские предложения (из них 2 отраслевого значения).

Дигоксив рекомендован для лечения больных с тяжелыми формами эпилепсии (по "жизненным показаниям"), резистентными к традиционной противозпилептической терапии. Препарат успешно прошел клиническую апробацию, получено разрешение Президиума Фармакологического комитета МЗ СССР на его клиническое применение (Протокол № II от 13 июня 1990 г.).

По материалам диссертационной работы написаны и приняты к печати Сборник "Сердечные гликозиды" (изд-во МЗ РСФСР, ЛоТКЗПМИ, Ленинград, 1992, 40 с.) и монография "Сердечные гликозиды (карди-альные и внекардиалыше эффекты)" (изд-во "Медицина", Ташкент, 1992, 192 с.) (совм.с С.С.Азизовой, И.В.Марковой и З.А.Хуибахто-вой). .

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИЙ

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, четырех глав с описанием с об-

ственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы и приложений.

Текст излолган на 261 страницы машинописи, иллюстрирован 29 таблицами и 21 рисунком (фотографиями, микрофотографиями, графиками). Список литературы содержит 385 источников, из них 156 отечественных и 229 иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Работа выполнена на 74 взрослых кроликах-шиншилах (самцах), массой 2,5-3,5 кг; 782 белых беспородных крысах (самцах), массой 100-300 г; S48 белых мышах (самцах), массой 18-20 г; 482 травяных лягушках (Rana temporaria , самцах), массой 15-30 г, обитающих в зоне Санкт-Петербурга; 79 улитках - роговая катушка (Pianorbarius corncus ) и 170 моллюсках - виноградная улитка ( H^iíx poma ti о ). Опыты на лягушках и улитках проведены в осенне-зимнем сезоне.

Для выявления онтогенетических особенностей влияния СГ на функцию ЦНС были проведены эксперименты на 167 5-дневных и 63 21-дневных крысятах, массой Ю-12 и 30-35 г, соответственно, а также на 38 мышатах трехнедельного возраста, массой 3-5 г.

ХАРАКТЕРИСТИКА ИССЛЕДУЕМЫХ ВЕЩЕСТВ: I. Строфантин - гликозид, содержащийся в семенах строфанта Комбе ( bt,ro¡,r,4nUmira к ). Для опытов взяты К-строфантин-уЗ (ампулы 0,05% раствора по I мл) или K-строфантин—¿ , ММ 548,68 (в виде порошка). Порошок К-строфантин~«г , растворяли на бидистиллиро-

ванной воде. Этот препарат был использован в опытах на нейронах к

моллюсов, при регистрации амплитуды сокращения мышечных полосок из сердца лягушек и сократительной деятельности их сердец ín ai i r, а также при изучении фармакокинетики. Все остальные эксперименты выполнены с использованием 0,05% раствора К-строфантина-уЗ (см. табл.1). В дальнейшем для удобства изложения, говоря об этом про-

парато, мы будем называть его просто строфантин.

2. Дигоксин-гликозид, содержащийся в листьях наперстянки шерстистой ( Digitalis lanata Erth.). Для опытов взяты дигоксин в ампулах (по 2 мл, содержаще 0,5 мг) или его порошок, ММ 780,56, Порошок дигоксина также, как порошок строфантина, растворяли на бидисцитированной воде и использовали в тех же сериях экспериментов (см.табл.1).

Таблица I

Характеристика исследуемых сердечных гликозидов

Гликозид Фирма-изготовитель Агликон (цнкяо-лентанпергидро-фенантрен и лак-тоновое кольцо) функциональные группы и их положение Гликон

ОН снв нсо

К-стро-фантин- Львовский химфарм-завод, СССР Строфантидин 3,5,И 13 ю Цимароза и глюкоза

К-стро-фантин- Флюка, Швейцария Строфантидин 3,5,14 13 10 Цимароза

Дигоксин Годе он Рихтер А.О.,Буда- пешт-Венг- рия и Флюка, Швейцария Дигоксигенин 3412, 10, 13 3 диги-токсозы

3. Строфантин и дигоксин иммобилизованные на основе сополи-мера-винилпирролидона с малеиновой кислотой (ММ равна (10-12)х х10® д) были синтезированы в Институте высокомолекулярных соединений АН СССР к.х.н.В.Е.Байковым под руководством чл.-корр.АН ССС! Е.ф.Панарина.

Для фиксации сополимера использовали строфантин и дигоксин обеих фирм, в зависимости от того с СГ какой фирмы сравнивали

иммобилизованный препарат. Дозирование СГ в экспериментах осуществляли без учета массы сополимера. В опытах, в которых изучали фармакокинетику обычных и иммобилизованных СГ, гликозиды метили тритием.

Создание препаратов СГ, содержащих радиоизотопную метку,

осуществлено к.х.н.Л.А.Тимофеевой в НПО Государственного инсти-

о

тута прикладной химии г.Ленинграда. Экспериментальные образцы Н-q

строфантина и Н-дигоксина были получены с молекулярной активностью 1,9 мКи/моль каждый.

ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

I. Электроэнцефалографические исследования на лягушках и крысах.

ЭО в гиппокампе создавали однократно у лягушек и повторно у крыс. У крыс - первый раз на 6-7 день после вживления электрохи-миотрода, последующие 5-6 опытов выполняли (на каждом данном животном) с интервалом в 3 дня. ЭО создавали введением в гиппокамп через электрохимиотрод 0,0004 мл (1000 ЕД) раствора натриевой соли пенициллина у лягушек и 0,001 ыл (100 ЕД) - у крыс. Указанные минимальные дозы пенициллина вызывали БО у всех животных.

Активность ЭО в гиппокампе животных оценивали, подсчитывая число электрографических коррелятов эпилептиформного припадка (ЭКП) за каждые 10 минут опыта и количество единичных межприступ-ных эпилептифорыных разрядов (МЭР) за I минуту записи электроэнцефалограммы (ЭЭГ) в каждый 10-минутный интервал эксперимента в точение 120 минут от момента введения пенициллина в гиппокамп.

Для регистрации биоэлектрической активности мозга животных использовали 16-канальный чернильнопишущий электроэнцефалограф "ЭЭГУ-18-0,2" (СКТБ "Биофизприбор", Ленинград). Одновременно для подсчета числа ЭКП на протяжении всего опыта осуществляли визу-

альный контроль ЭЭГ на экране осциллоскопа, подключенного к выходным клеммам электроэнцефалографа.

Подопытным лягушкам за 10-15 минут до создания очага вводили в спинной лимфатический мешок раствор (I мл) исследуемого вещества, а контрольным (в том же объеме) дистиллированную воду. В опытах на крысах за 10-15 минут до создания ЭО под кожу спины и контрольных, и подопытных животных вводили дистиллированную воду в объеме I мл. Первый эксперимент на контрольных и подопытных крысах показывал, какова количественная характеристика ЭО именно у данного животного. Активность ЭО в этом первом опыте принимали за 100%, В последующих 4-5 опытах контрольным крысам перед эпилептизирую-щим веществом (пенициллином) по-преннему вводили подкожно воду, чтобы определить, как меняются количественные характеристики повторно создаваемого в одной и той же точке ЭО, а подопытным животным - исследуемые вещества, чтобы изучить их влияние на ЭО.

Число ЭКП и МЭР, подсчитанные у каждой контрольной крысы при повторных созданиях ЭО, сопоставляли с результатами первого опыта на данной крысе, выраная их в %% и составляя из них вариационный ряд контрольных данных. Точно также количество ЭКП и МБР, подсчитывали у каждой подопытной крысы при повторном создании 30, когда вместо воды вводили фармакологические вещества. Полученные результаты сопоставляли с итогом первого опыта на данной крысе, тоже выражая их в %% и составляя вариационные ряды данных о влиянии того или иного исследуемого вещества на активность 30.

После завершения опытов локализацию электрохимиотродов в гиппокампе контролировали гистологически, окрашивая парафиновые ере'!: по Нисслю.

2- Определение противосудорожиой активности дигсксина на моделях генерализованы« судорог.

Для моделирования судорог использовали а) электрошок или б) введение судорожных агентов (коразола, бемегрида).

а) Судороги вызывали при помощи электрического тока силой

50 мА, частотой 50 Гц и длительностью воздействия 0,2 сек. Металлические электроды накладывали на височную область головы крыс и мышей. Во время опыта регистрировали длительность тонической и клонической фаз'судорог, а также количество погибших животных после предварительного (за 10-15 минут) подкожного введения дигокси-на в опыте или в том же объеме воды - в контроле.

б) Судорожные агенты инъецировали под кожу спины. Крысам и крысятам вводили бемегрид в дозах 50 и 25 мкг/г, соответственно, а мышам - коразол в дозе 70 мкг/г. От этих доз возникали клонико-тонические судороги, которые в течение 2-х часов наблюдения приводили к гибели 80-100^ животных. Регистрировали время наступления судорог и количество погибших животных после предварительного подкожного (за 10-15 минут) введения дигоксина (опыт) или дистиллированной воды (контроль).

3. Регистрация величины мембранного потенциала (МП) изолированных идентифицированных нейронов брюхоногого моллюска (роговой катушки).

Опыты производили на пяти группах крупных идентифицированных нейронах, взятых из правого (ППед-I, ППед-8, ППед-9) и левого (ЛПед-8 и ЛПед-9) педальных ганглиев. Растворы строфантина и дигоксина подводили специальной микропипеткой непосредственно к изолированному нейрону при помощи суперфузии (Гапон С.А., 1983). Регистрацию изменений МП осуществляли на двухкоординатнои самописце ХУ-Рекордер-эндим 620.02.

Данная серия опытов выполнена в Лаборатории фармакологии биологически активных веществ (зав.- проф.А.Ф.Данилов) ИЗФ им.И.М.Се-

ченова АН СССР.

4. Уровень РНК в нейронах мозга крыс определяли после подкожного введения дигоксина либо один раз за 4 часа, либо в течение 6 дней до декапитации. Для определения уровня РНК блок мозговой ткани (5x5x10 мм) вырезали из ромбовидного мозга белых беспородных крыс, помещали на 2 часа в фиксатор Бродского и заливали парафином. Срезы толщиной Ю мм получали с помощью ротационного микроскопа "Точмедприбор" и окрашивали по Эйнарсону. Время окрашивания - 48 часов. Содержание РНК в нервных клетках определяли на однолучевом микроспектроцитофотометре МДФВ-1 с объективом х40

и диаметром оптического зонда I мкм, при длине волны 555 ни. Полученные результаты сопоставляли с контрольными группами животных, которым вводили дистиллированную воду в том же объеме и режиме, что и в эксперименте.

Этот раздел работы выполнен в ЦНИЛе (зав.- д.м.н.Б.А.Цин-зерлиш^ 1ПШ.

5. Определение объемной скорости локального мозгового кровотока у кроликов в лобной, височных и затылочной отделах коры осуществляли методом водородного клиренса по И.Т.Демченко (1983) и В.П.Безрсневу с соавт.(1989) с помощью нановольтамперметров и осциллографа Н145.

Параметры регистрировали либо I) до введения дигоксина или кораэола (5 мг/кт) (их принимали за 100% и они служили исходным уровнем для данного кролика) и после инъекции одного из названных препаратов через 5,10,20,30,40,50 и 60 минут, а затем через каждые 30 минут до окончания 3-часового наблюдения, либо 2) после введения коразола (исходный уровень для данного кролика, принимаемый за 100%), на фоне которого (через 10 минут) производили инъекцию дигоксина и определяли величину кровотока в те же временные

интервалы.

Этот раздел работы выполнен в Лаборатории сравнительной физиологии кровообращения (зав.- проф.Ю.Е.Москаленко) ИЗФ им.й.М.Се-ченова АК СССР.

6. Одновременная регистрация величины МП кардиорегулирующих нейронов и частоты сердечных сокращений у виноградной улитки.

На полуинтактном препарате улитки выполняли одновременную регистрацию биопотенциалов кардиорегулирующих (тормозных и возбуждающих) нейронов и сердца. Полуинтактный препарат состоял из подглоточного комплекса ганглиев и висцерального мошка (комплекса органов, где находилось и сердце), связь между которыми осуществлялась только с помощью интестинального нерва. Отведение биопотенциалов от нейронов производили двухканальными микроэлектродами, а от сердца - гибким присасывающимся электродом, заполненным изотоническим раствором KCl. для контакта с KCl использовали хлорированную серебряную проволоку. Гибкий злектрод для сердца создан по методике Р.Е.Бычкова и В.Л.ЗКуравлева (1987). Растворы исследуемых веществ подводили специальной микропипеткой непосредственно к нейрону методом суперфузии в течение 15-20 секунд. Регистрацию биопотенциалов кардиорегулирующих нейронов и сердца осуществляли на обычной многоканальной физиологической установке. Измерение параметров нейро- и кардиограмм производили с помощью двухканального осциллографа С1-83. Сигналы с выходов1 усилителей параллельно регвдтрировали на электрокардиографе ЗКЧМП--Н3050.

Данный раздел работы выполнен на кафедре физиологии человека и животных (зав.- проф.А.Д.Ноздрачев) ЛГУ.

7. Определение средней летальной дозы желедуемых препаратов выполнено по методу В.Б.Прозоровского с соаьт.(1978).

8. Регистрация со!фатительной деятельности сердца лягушек in situ осуществлена с помощью полупроводникового тенэодатчика, потенциометра КСПЕ-003, аккумулятора 8-ИВ "Агат" и усилителя "Топаз-4-01". Лягушек обездвиживали либо разрушением ЦНС, либо введением 50 мкг/г диплацина под кожу. Определяли минимальные дозы исследуемых веществ, вызывающих остановку сердца. Контрольным животным вводили дистиллированную воду.

9. ЭКГ у лягушек регистрировали на универсальном элекгроэнцефалографе "ЭЭГУ-16-0,2" с помощью стальных игл, вкалываемых под кожу конечностей. Сравнение трех стандартных отведений показало, что наиболее четкие зубцы ЭКГ регистрируются в третьем отведении (левая передняя и левая задняя лапы), поэтому запись осуществляли только в названном отведении.'Животные во время опытов находились в экранированной камере и их обездвиживали введением 15 мкг/г тубокурарина под коку. Для определения максимальной дозы, но вызывающей изменений на ЭКГ, характерных для гликозидной интоксикации, исследуемые вещества ийи дистиллированную воду в том же объеме (контроль), вводили подкокно,

10. Для регистрации амплитуды изометрического сокращения мышечного лоскута из сердца лягушек использовали приборы, перечисленные в п.8, а для электростимуляции - УЭИ-I (характеристика П-образного импульса: 50 мА, I Гц, 100 мсек). Исследуемые препараты или дистиллированную воду (контроль) добавляли в ванночку, где находился предварительно утомленный электростимуляцией мышечный лоскут.

11. Сердечную недостаточность у крыс моделировали с помощью миокардита, который создавали путем подкожного введения адреналина гидрохлорида в течение 4-х дней в дозе 0,1 иг на 150 г массы. Возникновение миокардита было подтверждено анатомо-гистологически

- 15 -

а!

и биохимически (определение ас пар таминотрансфе разы в сыворотке крови).

12. Выносливость крыс к физической нагрузке до и поело подкожного введения им исследуемых веществ, определяли путем регистрации продолжительности плавания животных в воде при температуре 28-33°С с грузом,равным 1% от массы тела,до полного утомления.

13. Определение активности сукцинатдегидрогеназы (СДГ), пакта тде гидр ого на зы (ЛДГ) и мембранной №а+,К+-АТФ-азы в кусочке из сердца крыс с адреналиновым миокардитом осуществляли общепринятыми методами (Лойда 3. и соавт., 1982).

Для выявления ферментов использовали тетразолиевый (определение СДГ'и ЛДГ) и кобальтовый (определение суммарной активности АТФ-аз) методы. Активность А'®+,К+-АГФ-азы определяли по разности между суммарной АТФ-азной активностью и активностью в присутствии 0,1 мМ строфантина в параллельных сериях опытов. Цитофотометрию препаратов выполняли на однолучевом цитофотомотре МЦФУ-2МП с объективом х40 и диаметром оптического зонда I мкм методом сканирования при длино волны 545 нм - для определения СДГ и ЛДГ и 520 нм - для определения АТФ-аз.

14. Определение гомодинамичоских показателей у крыс с адреналиновым миокардитом.

Крысам под наркозом (оксибутират натрия I г/кг, внутрибрю-шинно) в левую сонную артерию вживляли кате тер-датчик для измерения величины сердечного выброса (в мл/мин/г.10~2) методом термо-волюмометрии на оригинальном приборе, собранным в ЛенНМ кардиологии к.м.н.М.Г.Плиссом и К.Е.Гавриковым (1987). Катетер-датчик представляет из себя полиэтиленовую трубку (наружный диаметр 1-1,5 мм), которая заканчивается точечным терморезистором МТ-54. Кроме того, вкивляли еще 2 катетера. Один в левую яремную вену для

введения исследуемых веществ (строфантина, дигоксина, их иммобилизованных аналогов или дистиллированной воды), а другой в левую бедренную артерию - для измерения а) величины артериального давления (в ш рт.ст.) с немощью датчика давления на пьезоэлементе и б) частоты сердечных сокращений« Последнюю определяли по межсис-тольному интервалу (в ыс), который регистрировали измерителем интервалов гфи анализе кривой артериального давления. Запись результатов опытов осуществляли на чернильно-пишущеы самописце Н338-8. Регистрацию изучаемых параметров производили до введения исследуемых веществ (полученные данные принимали за 100% и они служили исходным уровней для данной крысы) и посла инъекции названных препаратов в момент максимального изменения показателей.

Данная и предыдущая серии экспериментов выполнены в Отделе экспериментальной кардиологии (зав.- проф.В.А.Цырлин) Ленинградского НИИ кардиологии.

15. Определение показателей фармакокинетики меченых тритием СГ или их иммобилизованных аналогов выполнено на крысах и кроликах. В опытах изучены: концентрации исследуемых веществ в сыворотке крови, на основе которых были рассчитаны их фармакокинетические параметры, а также степень диссоциации фиксированных на сополимере строфантина и дигоксина в организме животных; распределение препаратов в тканях и скорость их экскреции. Радиоактивность сыворотки крови и ее пятен на силуфоловой пластине, лизатов тканей и мочи измеряли на сцинтилляционном спектрометре эь 1-20 фирмы тпЪег-technik (франция) в импульсах в минуту.

Эта серия опытов выполнена в Лаборатории фармакологии (зав.-д.м.н.В.В.Елисеев) ВНИТМФ.

Экспериментальные данные обрабатывали по Стьюденту, а также непараметрическими методами: Фишера и Вилкоксона-Манна-Уитни

(Гублер Е.В., 1978), с использованием специальных программ для ЭВМ "Искра-ЮЗО" и "МЕРА-660".

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА I. ИЗУЧЕНИЕ ЦЕНТРАЛЬНЫХ ЭФФЕКТОВ СЕРДЕЧНЫХ ГЛИК03ИД0В

1. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ГИППОКАМПОВАЯ ЭПИЛЕПСИЯ У ЛЯГУШЕК И КРЫС. На пенициллиновой гиппокамповой модели эпилепсии у лягушек и крыс были получены характерные для данного заболевания электроэнцефалографические и "клинические" проявления, что свидетельствует об адекватности использованной нами модели моделируемому заболеванию.

2. ВЛИЯНИЕ СТРОФАНТИНА И ДИГОКСИНА НА Э1ШЕПТИФОРМНУЮ АКТИВНОСТЬ В ГЙППОКАМПЕ ЛЯГУШЕК И КРЬС. С давних времен известно, что СГ являются эффективными успокаивающими средствами (Крам-ник А., 1875; Блюменау М.Б., 1888; Карасик В.М., 1931; Аничков C.B., 1955; Асратян С.Н., 1959; и др.). В работах последних лет получены сведения о способности СГ, конкурируя с ЗДПВ за их места связывания, взаимодействовать с мембранной №а+,К+-АТФ-азой на поверхности нейронов и окончаний их аксонов ( t>e pover д., 19*4)), При этом, характер влияния гликозидов зависит от их дозы. Так, в малых (условно терапевтических) концентрациях названные препараты повышают активность фермента ( Oodfraind Т., 19М; Bernahei н., 1985; И др.), а В больших - понижают (Brown L. , Erdmann Е.,19^; Lee с.0., 1985; и др.). Тем самым СГ воздействуют на транспорт ионов, а в связи с этим на функцию нейронов и процессы освобождения и захвата нейромедиаторов пресинаптическими окончаниями

( Tan С.И., Powis D.A..19P5; Keinauer M. et al., 19R6: Plunkett L.M., Tac ice tt ч.ь., 19*7; и мн.др.). Кроме того, известно, что СГ изменяют мозговое кровообращение (Чань Т.К., Гаевый М.Д., 1982;

Миллер Л.Г., 1983), оказывают антиоюидантный эффект (Лукьянова Л.О. и соавт., 1982; Горчакова H.A. и соавт., 1984; Гудивок Я.С. и соавт., 1988; Николай С.Л., 1988) и влияют на обменные и энер-гообеспечивающие процессы (Черкес А.И., 1976; Полякова И.ф. и соавт., 1988; французова С.Б., 1988).

Исходя ив всего сказанного, допустимо, что СГ могут оказать выраженное воздействие на ЦНС цри ряде заболеваний, в основе которых лежат нарушения синаптической передачи импульсов и/или появление автоматически функционирующих нейронов в головном мозге. К числу таких заболеваний относится эпилепсия.

Нами изучено влияние строфантина и дигоксина в условно терапевтической и субтоксической дозах на активность экспериментальных 30 в гиппокампе лягушек и крыс.

Данные о влиянии СГ на активность 30 у лягушек и крыс приведены в табл. 2. и 3.

Таблица 2

Изменение активности 30 в гиппокампе лягушек при предварительном (за 10-15 минут) введении СГ в спинной лимфатический мешок

Вводимое вещество и его доза (мкг/г) Количество опытов МЭР (среднее число за I минуту записи ЗЭГ от 0 до 120-й минуты опыта) ЗКП (среднее число за 20 мин.наблюдения от 0 до 120-й минуты опыта)

Контроль 18 12,5+2,1 1,8+0,1

Строфантин 0,18 6 14,5+2,2 3,4+0,3**

0,018х 6 14,0+2,7 2,9+0,3

Дигоксин 1,2 6 4,2+0, б33

0,12х 6 9,3+1,3 и+о.от*** ...... .... ...

Примечание. х) Дозы, меньше указанных, испытанные нами в предварительно выполненных опытах, не сказывали существенного влияния на активность 30. хх) Р < 0,05. ххх) Р< 0,01.

Таблица 3

Изменение активности 30 в гиппокампе крыс при подкожном введении им СГ (за 10-15 минут до создания очага)

Вводимое вещество и его доза (мкг/г) Количество опытов Интенсивность МЭР при 2-6-ом создании очага в одной и той же точке гиппокампа Интенсивность ЭКП на ЭЭГ при 2-6-ом создании очага в одной и той же точке гиппокампа

в %% по отношению к результатам 1-го контрольного введения пенициллина в гиппокамп

Контроль 24 90,3+38,5 253,2+66,7

Строфан- 20,0 9 170,0+60,8 683,1+192,3ХХ

тин 2,0х 5 129,9+56,7 350,0+127,2

Дигоксин 6,0 9 154,1+53,4' 910,7+326,6х*

0,6х 5 169 , 5+59 ,6 71,5+37,5хх

Примечание, х) - и хх) - см.табл.2.

Как следует из таблиц в больших (субтоксических) дозах СГ существенно провоцируют патологическую активность, а в малых (1/10 от субтоксической) - строфантин оказывает незначительное провоцирующее влияние, дигоксин же резко подавляет ЭО.

Представленные опыты свидетельствуют, с одной стороны, об опасности передозировки СГ у больных эпилепсией, а, с другой стороны, о возможности применения малых индивидуально подобранных доз для подавления припадков и лечения данного заболевания.

3- ВЛИЯНИЕ ДИГОКСИНА НА СУДОРОГИ, ВЫЗВАННЫЕ ЭЛЕКТРИЧЕСКИМ ШОКОМ, КОРАЗОЛОМ И БЕМЕГРИДОМ У МЫШЕЙ, КРЫС И КРЫСЯТ РАЗНОГО ВОЗРАСТА. Эти исследования были предприняты с цель» определения противосудброжного эффекта малых дов дигоксина на обычных моделях генерализованных судорог.

Для разных групп животных дозы дигоксина составляли 1/10 и 1/2 от ЛД50. Соответственно взрослым крысам вводили - 0,89 и 4,45 мкг/г; крысятам 5-дневного возраста - 1,12 и 5,6 мкг/г; крысятам 3-недельного возраста - 0,87 и 4,35 мкг/г; а взрослым мышам - 0,81 и 4,05 мкг/г.

Введение обеих доз дигоксина достоверно подавляет генерализованные судороги, вызванные электрошоком или судорожными агентами как у крыс разного возраста, так и у мышей, что свидетельствует о наличии у него нейротролной активности. Результаты этих опытов утвердили нас во мнении о целесообразности использования дигоксина для лечения эпилепсии.

К настоящему времени к.м.н.В.И.Гузева успешно провела апробацию дигоксина на кафедре нервных болезней Ленинградского ордена Трудового Красного Знамени педиатрического медицинского института (зав.каф.- проф.А.М.Коровин, зав.клиникой - Т.В.Круганова) при лечении ?5 больных с тяжело текущим заболеванием, полностью резистентных к терапии традиционными противоэпидемическими средствами. Дозированче препарата осуществлялось под контролем ^/^-коэффициента в их эритроцитах. Применение дигоксина приводило к лечебному эффекту (снижение числа припадков на 50% и солее), по данным клинического и электроэнцефалографического наблюдения, у 4Щ> больных.

4. ВЛИЯНИЕ СТРОФАНТЙНА И ДИГОКСИНА НА ВЕЛИЧИНУ МЕМБРАННОГО ПОТЕНЦИАЛА ИЗОЛИРОВАННЫХ ИДЕНТИФИЦИРОВАННЫХ НЕЙРОНОВ ЬРЮХСНОГОГО

МОЛЛЮСКА РОГОВОЙ КАТУШКИ. Для анализа полученных выше результатов о разном влиянии больших и малых доз СГ на интенсивность МЭР и ЭКП, нами были выполнены опыты с прямым влиянием разных концентраций строфантина и дигоксина на величину МП пяти групп нейронов названной улитки.

СГ использовали в концентрациях от I нМ до I мМ в зависимости от чувствительности нейронов. Аппликации строфантина в низких концентрациях (1-100 нМ) приводили к небольшой гиперполяризации мембран в среднем равной 6,7+2,5 мВ ( п = 16). Аппликации же ого в высоких концентрациях приводили к деполяризации в среднем равной 7,2+2,8 мВ ( п = 17). Дигоксин так же, как строфантин, в малых концентрациях вызывал гиперполяризацию мембран нейронов, -а в больших концентрациях - их деполяризацию. Среднее значение гиперполяризационного сдвига МП равнялось 2,1+0,9 мВ ( п = 10), а депо-ляризационного - 4,5+1,7 мВ ( п = 16). Названные выше изменения величины МП, то есть активация или торможение, возникающие под влиянием разных концентраций одного и того же гликозида (строфантина или дигоксина), выявлены на всех пяти функционально различных группах нейронов.

Результаты экспериментов на изолированных нейронах могут быть использованы для объяснения разного влияния условно терапевтических и субтоксических доз этих препаратов на активность экспериментальных 30. Изменяя величину МП, СГ вмешиваются в базисный механизм проницаемости клеточных мембран, возникновения и проведения возбуждения.

5. ВЛИЯНИЕ ДиГОКСйНА НА УРОВЕНЬ РНК В НЕЙРОНАХ УОЗГА КРЫС. Известно, что нарушение энергетического и белкозо-эзотистого обменов в нейронах и клетка: глки во >лного1.: определяет патогенез эпилепсии. Кроье того, биохимические изменения сопряжены со сдвигами

модиаторного обмена в структурах мозга животных (Погодаев К.И., 1986).

Результаты опытов представлены в табл.4.

Таблица 4

Влияние дигоксина на уровень РНК в нейронах ромбовидного мозга крыс

Препарат Доза мкг/г Число икъок- цийх Количество опытов Содержание РНК3® (в ед.оптической плотности)

Контроль - I 6 10 10 0,256+0,062 (100%) 0,219+0,040 (100%)

Дигоксин 0,89 I 6 20 20 0,261+0,05? (10256) 0,350+0,044 (^де)***

Дигоксин 4,4 I 6 20 20 0,302+0,075 (1Щ) 0,142+0,026 (64%)ххх

Примечание, х) Одна инъекция в день.

хх) В каждом опыте содержание РНК измеряли в 10 произвольных точках в цитоплазме нейронов, после чего определяли среднюю величину.

ххх) Р< 0,05.

Представленные данные свидетельствуют о том, что дигоксин в "терапевтической" (1/10 ЛД50) и субтоксической (1/2 ЛД50) дозах по-разному изменяет уровень РНК в нейронах мозга крыс: увеличивая (на 50$) или снижая (на 36%) последний, соответственно.

Поскольку для биосинтеза нуклеиновых кислот и их функционирования необходима энергия в форме АТФ (Бударин Л.И. и соавт.,1985; Каешшегег К., ПеЪгтагш М.^Ч^Ь ), ТО ПО уровню РНК В клетках можно судить о влиянии гликоаидов на энергетический обмен. Обнаруженное увеличение РНК в нейронах, после введения "терапевтической" дозы дигоксина, косвенно свидетельствует о том, что в них возрас-

тает и содержание АТФ.

Кроме того, по уровню РНК косвенно можно судить и об изменениях в синтезе внутриклеточных белков, в том числе мембранных протеинов, регулирующих ионную проницаемость, а, следовательно, процессы возбудимости и проводимости клеточных мембран (в частности, нейронов). Эти белки непрерывно разрушаются и требуется их быстрое восстановление. Например,период полужизни мембранного фермента - №а+,К+-АТФ-азы около 9 часов ( Kurobane т. et al.,1989.

Известно, что уровень РНК в цитоплазме эпилептизированных нейронов значительно снижается (Погодаев К.И., 1986). Поэтому, увеличение синтеза РНК, позволяет отчасти объяснить противоэпи-лептическое действие "терапевтической" дозы дигоксина и разнона-правленность влияния больших и малых доз этого препарата на активность экспериментальных 30 у лягушек и крыс.

6. ВЛИЯНИЕ ДИГОКСИНА НА МОЗГОВОЙ КРОВОТОК У КРОЛИКОВ С ГЕНЕРАЛИЗОВАННЫМИ СУДОРОГАМИ, ВЫЗВАННЫМИ КОРАЗОЛОМ. В работах многих авторов (Габашвили В.М. и соавт., 1986; Шулешова Н.В., 1989; Яхин Ф.А. и соавт., I9S0j и др.) показано, что нарушение кровообращения в мозге играет важную роль в возникновении и прогрессиро-вании эпилепсии.

Нами обнаружено, что инъекции дигоксина кроликам, предварительно получившим коразол, достоверно уменьшают объемную скорость мозгового кровотока в разных отделах коры в среднем на 10-20%.До-пустимо, что это может изменить активность нервных клеток (в том числе в 30) и быть одним из механизмов, объясняющих противозпилеп-тический эффект данного препарата.

ГЛАВА П. ТОКСИЧНОСТЬ СТРОФАНТИНА, ДИГОКСИНА И ИХ ИММОБИЛИЗОВАННЫХ АНАЛОГОВ

Известно, что в механизме токсических внекардиальных и кар-

диальных эффектов СГ важное место занимает их влияние на функцию ЦНС (см.АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ).

Нами были выполнены опыты для подтверждения посредничества ЦНС в механизме токсического влияния СГ на сердце.

ВЛИЯНИЕ СТРОФАНТИНА И ДИГОКСИНА НА ВЕЛИЧИНУ МЕМБРАННОГО ПОТЕНЦИАЛА КАРДИОРЕГУЛИРУЮЩИХ НЕЙРОНОВ И ЧАСТОТУ СЕРДЕЧНЫХ СОКРАЩЕНИЙ У ВИНОГРАДНОЙ УЛИТКИ.В опытах изучено прямое влияние СГ на активирующие и тормозные кардиорегулируювде нейроны, с одновременной регистрацией их биопотенциалов,а также биопотенциалов сердца. Результаты опытов представлены в табл.5.

Таблица 5

Влияние разных концентраций строфантина и дигоксина на изменение величины мембранного потенциала (МП) активирующих и тормозных кардиорегулирующих нейронов и частоту сокращений сердца (предсердия и желудочка) виноградной улитки

Препарат Количество опытов Тип нейрона Лсследуемые концентрации Средняя величина максимального сдвига МП нейрона от ИСХОДНОГО уровня(в мВ) Средняя частота сердечных сокращений (число ударов в минуту)

предсердия желудочка

Исходная запись биопотенциалов 6 Акти- ви- РУЮ- щий - - 2,6+0,3 2,6+0,3

Строфантин 6 6 6 6 Ю-6 10~5 Ю"4' ю-3 0 -4,3+0,4 -3,6+0,3 +6,2+0,9 2,6+0,3 1,2+0,2хх 1,2+0,Зхх 5,3±1,0*х 2,5+0,5 0,6+0,1хх 0,5+0,1хх 7,8+1,4хх

Исходная запись биопотен- Дигоксин 12 - - 2,8+0,2 2,8+0,3

12 12 12 12 ю~6 ю~5 Ю-4 10~3 0 -2,6+0,2 -1,8+0,3 +4,5+1,1 2,8+0,2 2,1+0,Iх 2,3+0,3 4,1+0,6х 2,8+0,2 1,9+0,2х 2,0+0,4 4,9+0,6х

Продолжение табл.5

Препарат Количество опытов Тип нейрона Исследуемые конце н-тра-ции Средняя величина максимального сдвига МП нейрона от исходного уровня(в мВ) Средняя частота сердечных сокращений (число ударов в минуту)

предсердия желудочка

Исходная запись биопотенциалов 6 Тормозной - - 2,7+0,4 2,7+0,4

Строфантин 6 6 6 6 Ю-6 10~5 Ю"4 Ю"3 0 -2,6+0,4 0 +3,5+0,7 2,7+0,3 3,5+0,8 2,9+0,4 1,7+0,4х 2,7+0,5 5,7+0,Эх 2,8+0,2 2,1+0,3

Исходная запись биопотенциалов 10 - - 2,8+0,5 2,8+0,3

Дигоксин Ю 10 10 1 10 ю-6 10~5 иг4 ю-3 0 -3,3+0,3 +1,2+0,4 +3,9+0,6 2,8+0,8 4,1+0,6х 2,4+0,5 1,3+0,Iх 2,8+0,7 4,5+0,7х 2,7+0,4 1,5+0,3х

Примечание, х) Р < 0,05; хх) Р< 0,01 (по отношению к Исходной записи биопотенциалов).

£

Как следует из табл.5, СГ в концентрации 10~° М не изменяли ни величину МП нейронов, ни частоту сердечных сокращений. При увеличении же концентрации препаратов (от Ю-® до Ю-4 М), они вызывали гиперполяризацию мембран нейронов, а максимальная концентрация (10 М) - ее деполяризацию. При этом, изменялась частота сокращений предсердия и желудочка: при гиперполяризации активирующего нейрона - она уменьшалась, а при его деполяризации - увеличивалась; при гиперполяризации тормозного нейрона - она возрастала, а при деполяризации - уменьшалась.

Другими словами, представленные результаты свидетельствуют,

что СГ могут влиять на работу сердца посредством их нейротропного действия. Это подтверждают данные литературы о важной роли ЦНС в реализации кардиотропного эффекта этих препаратов.

Существуют разные подходы к предупреждению осложнений, пиа-никающих при использовании СГ (мониторное наблюдение за концентрацией препаратов в крови, слюне, моче или нерадиоактивного рубидия, Ха+/К+-коэффициента в эритроцитах крови или поглощения 86В.ё отмытыми эритроцитами и т.п.). К сожалению, все они не решают полностью эту трудную задачу.

Учитывая выраженную нейротропную активность СГ и большую значимость их влияния на ЦНС в механизме интоксикации этими препаратами, одним из интересных подходов, на наш взгляд, является использование нейротропных иредств для предупреждения интоксикации гликозидами (Генденштейн Э.И., 1988; Tlaus et al., 1981; и др.). Но прием этих препаратов но безразличен для организма, а порой просто невозможен. Кроме того, в ряде случаев (введение резерпина, бета-адреноблокаторов) отмечается снижение положительного инотропного действия СГ (Гацура В.В., Кудрин А.Н., 1983), что крайне нежелательно для больных с сердечной недостаточностью.

В связи с вышесказанным, нами предложен принципиально новый путь уменьшения токсичности СГ, за счет ограничения их проникновения через ГЭБ в мозг.

С этой целью строфантин и дигоксин были иммобилизованы кова-лентно связанным сополимером (винилпирролидоном с малеиновым ан-

о

гидридом) с молекулярной массой (Ю-12)хЮ д. Идея создания таких препаратов принадлежит моему учителю профессору И.в.Марковой.

В экспериментах на животных разных видов мы сравнили токсичность строфантина и дигоксина с их иммобилизованными на сополимере аналогами,а затем и их кардиотоническую активность(см.главу И).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СРЕДНЕЙ ЛЕТАЛЬНОЙ ДОЗЫ (1ДБ0) ИССЛЕДУЕМЫ! ВЕЩЕСТВ НА ЛЯГУШКАХ, МЫШАХ И КРЫСАХ. Результаты опытов представлены в табл.6.

Из представленных в таблице результатов следует, что токсичность строфантина и дигонсина, фиксированных на сополимере,у всех трех видов животных в 9-15 раз меньше, чем токсичность обычных СГ. Нужно подчеркнуть, что действие не иммобилизованных гликоэи-дов характеризовалось развитием выраженной заторможенности, адинамии, гипнотического эффекта у большинства животных.. При введении же СГ, фиксированных на сополимере, только у отдельных животных отмечалась незначительная заторможенность.

Кроме того, нами были выполнены опыты, в которых сопоставлено специфическое кардиотоксическое действие СГ и их иммобилизованных аналогов. Токсическое влияние исследуемых веществ определено по их влиянию на а) сократительную деятельность сердца и б)ЭКГ лягушек. При этом обнаружено, что переносимость иммобилизованных препаратов была в 3-12 раз выше, чем обычных.

ГЛАВА Ш. КАРДИОТОНЙЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ СТРОФАНТИНА, ДИГОКСИНА И ИХ ИММОБИЛИЗОВАННЫХ АНАЛОГОВ

Для решения вопроса о широте терапевтического действия иммобилизованных на сополимере СГ необходимо было сравнить их кардио-тоническую активность и лечебный эффект с таковым обычных препаратов. Нами были выполнены опыты, в которых определяли влияние исследуемых веществ на: а) амплитуду сокращения мышечного лоскута из сердца лягушек; б) продолжительность плавания крыс с адреналиновым миокардитом до полного утомления; в) активность сукцинат-, лактаодегидрогеназ.и мембранной Ка+,К+-АТФ~азы в кусочке из сердца крыс; и на г) геыодинамические показатели у наркотизированных крыс с миокардитом, результаты этих экспериментов показали, что кардио-

Таблица 6

Средние летальные дозы строфантина, дягоксина и их иммобилизованных на сополимере

(влшшшрролицон с малеиновым ангидридом) аналогов

1яботнкэ Путь введения препаратов Количество живот ных .Щд (мкг/г) Время-наступления смерти (час) Количество живот ных ДИзд (мкг/г) Время наступления смерти (час)

строфантин строфантин на сополя- мере х дягоксин дягоксин на сопо-лимерех

Лягушки Подкояаю 64 0,89+ 8,15+ 6-12 64 2,24± 19,4± 6-12

0,07 0,65 6.7П(9)

Шпщ Подкожно 64 1,29+ 19,4+- 1-2 64 8.2± 122,2+ 1-2

0,31 8,2ХХ(15) 3,9 38 .Б^Ск:

Крысы Поцк.ошю 48 : 27,4+ 301,4^ 6-12 48 80,1+ 6-12

1 1 1 312 87,5ХХ(И) 3,6 24,4ХХ(9)

Примечание. х) В скобках указано во сколько раз токсичность гликозидов, иммобилизованных на сополимере, меньше, чем токсичность обычных препаратов.

хх) Р< 0,01.

тоническая активность и лечебный эффект иммобилизованных СГ, практически не отличаются от таковых, вызванных обычными препаратами гликозидов. Это согласуется с наблюдениями о том, что иммобилизация не только не нарушает взаимодействие препаратов стероидной структуры (к которым относятся и СГ) с рецепторами (Сергеев П.В. и соавт., 1986; Калинин Г.В., 1987), но и повышает активность некоторых лекарственных средств (Панарин Е.Ф.и соавт., 1978; Наджиыутдинов Ш. и соавт., 1981; Петров Р.В. и соавт.,1985; и др.).

Таюш ооразом, иммобилизованные строфантин и дигоксин менее токсичны и полностью сохраняют свою специфическую кардиотоничес-кую активность и лечебный эффект. Иммобилизация СГ сополимерами -реальный и перспективный путь создания препаратов СГ с большой широтой терапевтического действия (заявка на изобретение № 4700452/31-05/050358. Положительное решение от 18.01.90. Соавторы: Е.Ф. Панарин, В.Е.Байков,И. В. Маркова,Р. Р.Сухов, А. В.Баранове кий).

Для объяснения результатов опытов, полученных в главах П и Ш, а также для окончательной характеристики фиксированных на сополимере СГ, необходимо было сравнить их фармакокинетику с таковой у обычных СГ. Этому и была посвящена глава 1У.

ГЛАВА ГУ. ФАРМАКОКИНЕЗИКА СТРОФАНТИНА, ДИГОКСИНА И ИХ ;

ИММОБИЛИЗОВАННЫХ АНАЛОГОВ

I. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФАРМАКОКИНЕТИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ ИССЛЕДУЕМЫХ ВЕЩЕСТВ. Меченые тритием СГ вводили однократно в вену уха кроликов. Строфантин и его иммобилизованный аналог - в дозе 0,05мг/кг, с удельной радиоактивностью 30 мкКи/кг; а дигоксин и его иммобили-' зованный аналог - в дозе 0,1 мг/кг, с удельной радиоактивностью 16,5 ыкКи/кг. Кровь (I мл) из ушной вены собирали через 0,03; 0,08; 0,25; 0,5; I; 2; 3; 4; 5; 6 и 24 часа после введения препа-

рата.

Распределение строфантина, дигоксина и его иммобилизованного аналога формализовали с помощью двухчастевой модели, а иммобилизованного препарата строфантина описывали простейшим вариантом линейной, одночастевой модели. Коэффициент уравнений определяли методом наименьших квадратов с использованием программы для ЭВМ "Искра-МЗО".

В соответствии с полученными данными фармакокинетикфстрофантина (I) и ого иммобилизованного аналога (2), дигоксина (3) и его иммобилизованного аналога (4) описывается соответственно уравнениями:

1) С ( 1;) = 2110,2 е45'21 + 5623,3 е-2'3 * ;

2) С ( 1;) = 23035 е"1'7 Ъ ;

3) С ( г) = Ю09 4 е-5'99* +"2542,6 е-0'02* ;

4) С ( = 24928 е"4'741; + 2340 е-0'03 ь ;

где С (имп.х мин-1) - концентрация препарата в I мл сыворотки крови за время ъ (час).

После внутривенного введения концентрации исследуемых веществ в крови снижались в течение первого часа с одинаковой скоростью, оставаясь затем на постоянном уровне весь период наблюдения (24 часа). Концентрации иммобилизованных гликозидов при этом были выше, чем их обычных препаратов.

Параметры фармакокинотики исследуемых веществ, рассчитанные на основании выше приведенных моделей, представлены в табл.7. Как следует из нее, иммобилизация СГ (строфантина и дигоксина) сополимером изменяет кинетику их распределения в организме, ускоряет выведение, ограничивает проникновение в клетки и повышает концентрацию препаратов в крови.

Таблица 7

Фармакокинетические параметры СГ и их иммобилизованных аналогов у кроликов при внутривенном введении

Параме тры Величина

строфантин строфантин на с ополи-мерех дигок-син дигоксин на сополимере

Комплексный параметс («6-фаза), Л, , час-1 0,2+ 0,0? - 5,99+ 0,9 " 4,74+ 0,6 "

Комплексный парамете (/-фаза),^ , час-1 2,3+ о\г - 0,02+ 0,003" 0,03+ 0,005

_т К21, час 0,6+ 0,05 - 1,2+ 0,2~ 0,4+ o'.i-

час-* 1,1+ 0,0? - 4,7+ 0,9- 4,0+ 0,6"

Кажущаяся начальная концентрация; Со, т имп.х мин.-1 х мл 6833.5+ 236,6 _ 23035,0+ 816,7 - 12637+ 637,7" 27268+ 1016 _

Период полураспределения, , час 0,3+ 0,0? - 0,1+ о;оз" 0,1+ 0,0?

Период полувыведения, Т^ , час 3,4+ 0,2" 0,4+ 0,05 37,9+ 2,4" 20,1+ 2, Г

Площадь под кривой концентрация-время, (АИС), имп.х мин-* х час 8462,7+ 521,1 ~ 13392,4+ 788,9 ~ 73401+ 8112 " 140609+ II304 -

Примечание, х) Отсутствие ряда показателей в таблице связано с невозможностью описания этих данных с помощью двухчастевой модели;

В каждую серию опытов было взято по 6 животных (всего 24 кролика).

2. СКОРОСТЬ ДИССОЦИАЦИИ КОМПЛЕКСА СЕРДЕЧНЫЙ ГЛИКОЗИД - СОПОЛИМЕР В КРОВИ КРОЛИКОВ. В сухом виде комплекс СГ-сополиыор не диссоциирует, а в растворе буфера (рН-7,4) гидролиз идет со скоростью I% препарата в сутки.

Диссоциацию иммобилизованных СГ в крови исследовали с помощью тонкослойной хроматографии. У кроликов, поело введения им в вену уха меченых тритием и фиксированных на сополимере строфантина или дигоксина, брали кровь через 0,25; 0,5 и I час, то есть на фоне максимальных концентраций в крови. Обнаружено, что иммобилизованные сополимером строфантин и дигоксин после введения их в организм сохраняются в виде комплекса в течение I часа на 87% и 91%, соответственно.

3. ПРОНИКНОВЕНИЕ ИССЛЕДУЕМЫХ ВЕЩЕСТВ В ТКАНИ РАЗНЫХ ОРГАНОВ У КРЫС. СГ вводили крысам однократно, под кожу в дозах: строфантин и его иммобилизованный аналог 2,74 мкг/г, с удельной радиоактивностью 14 мкК^кг; дигоксин и его иммобилизованный аналог 0,89 мкг/г, с удельной радиоактивностью 3 мкКи/кг. Животных дека-питировали через 0,25; Г и 2 часа.

Результаты опытов представлены в табл.8 и 9. Как следует из таблиц самый высокий уровень удельной радиоактивности строфантина, дигоксина и их иммобилизованных аналогов отмечается в ткани надпочечников, печени и почек, а самый низкий - в тканях мозга. Приблизительно та же закономерность распределения дигоксина была отмечена ,т.г;оЬегЧу (1978) на собаках и Г.Ф.Архиповой с соавг.(1988) на людях при аутопсии. СГ, фиксированные на сополимере, хуже, чем их обычные аналоги проникают в разные ткани, особенно в структуры мозга.

4. СКОРОСТЬ ВЫВЕДЕНИЯ ИССЛЕДУЕМЫХ ВЕЩЕСТВ С МОЧОЙ У КРОЛИКОВ. Моченые СГ вводили в ушную вену кроликов в тех же дозах, что и при определении их фармакокинетических параметров. Сбор мочи у животных осуществляли за 5 минут через 5, 15, 30 и 60 минут.

Обнаружено, что все препараты СГ и особенно их иммобилизованные аналоги, статистически достоверно увеличивают объем мечи по

Таблица 8

Распределение стросТантлиа я его иммобилизованного аналога в организме крыс

Радиоактивность, имя. х мин~^/Ю0 г ткани

Органы — - - - ... . — ------------------- --------—

час 1 час г час

строфантин строфантин строфантин строфантин строфантин строфантин

на сопо- на сополи- на сополи-

лимере мере мере

Кора головного мозга 18&ь63 157^58 296+48 205+85 75±2б 53+21

Гиппокаш 187±62 160±47 301±44 186138х 78±18 62+17

Гипоталамус 13Э±53 111^1 285^38 168±33х 77±12 70+9

Продолговатый шзг 190±71 И2±64 327^61 251±72 79±15 68113

Сердце (левый желу- 193±28

дочек) 333+29 308±58 564±77 503±78 205+34

Почки Б47±34 4ЭТ±63 847±153 705^94 392+28 311±73

Печень 601^58 48^93 859±166 636^1 367^81 267+79

Надпочечники ?22±172 534^97 923±182 801±101 402+75 354*67

Скелетные мьпщн _ _____ _____ _ 293±80 208^65 355±83 303±79 293+93 159+87

Примечание. х) Р < 0,05;

В каждую серию опытов было взято по 10 животных (всего 60 крыс).

Таблица 9

Распределение дигоксяна и его иммобилизованного аналога в организме крыс

Радиоактивность, имп х шн_1/Ю0 г ткани

Органы

0,25 час I -час 2 час

дигоксин дигоксин дигоксин дигоксин дигоксин дигоксин

на сопо- на сопо- на сопо-

лимере лимере лимере

Кора головного мозга 120+56 4819х 123+38 49+Пх 75*26 4^20

Вшлокамп 130*48 45*12х 137*67 43*8 х 72+30 39+Т8

Гипоталамус 58 ±26 49±7Х 99+29 47*8 х 65*23 46*12

Продолговатый мозг 201±49 102*2Iх 199*58 Ю7*24х 79±29 4^19

| Сердце 460*66 408+72 478482 410+71 208*93 182*74

1 Почки 847+273 503±138 790+203 632+175 303±87 345*83

1 Печень 1002*322 609+1® 894*266 644*209 375+118 28^91

., Надпочечники ! 1101*376 653*211 1302*607 691+328 467+79 401*101

' Скелетные мышцы > 402±188 203+103 444*193 215+94 285+67 203+58

Примечание. х) Р < 0,05.

В каждую серию опытов было взято по 10 животных (всего 60 крыс).

сравнению с контролем. Кроме того, фиксация строфантина и дигоксина на сополимере усиливает выведение этих гликозидов с мочой через 5, 15, 30 и 60 минут на 59%, 55%, 20% и 3($, 109%, 140%, 125%, соответственно. Кстати, это согласуется с укорочением периода полувыведения иммобилизованных СГ, полученных нами на кроликах ранее.

Итак, есть основание отнести иммобилизованные формы строфантина и дигоксина либо к новым лекарственным средствам, либо к пролекарствам (прекурсорам), по классификации С.Н.Голикова с со-авт.(1989), так как они обладают рядом фармакокинетических особенностей, менее токсичны и полностью сохраняют специфическое кардио-тоническое действие, характерное для препаратов данной группы.

Нами запланировано представление сведений в фармакологический комитет МЗ СССР для рассмотрения вопроса о рекомендации иммобилизованных СГ на технологически доступном сополимере (винил-пирролидоне с малеиновым ангидридом) к промышленному выпуску и медицинскому применению (согласно приказа МЗ СССР № 1509 от 30Л2.83)

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Данная работа была предпринята с целью показать роль нейро-тропных эффектов СГ в их фарманодинашкм. Полученные результаты убедительно свидетельствуют о существенном значении центрального действия СГ. На этом основании нами предложены: а) новый подход к лечению резистентных форм эпилепсии и б) новый, перспективный путь увеличения ойроты терапевтического действия СГ, с помощью фиксации этих препаратов на сополимера (винилпирролидоне с малеиновым ангидридом). Допустимо, что меньшая токсичность иммобилизованных препаратов СГ - результат не только частичного снивения их центрального воздействия на кардиорегулирующие структуры, но и след-

ствие влияния сополимера на механизм взаимодействия гликозидов с рецептором на поверхности клеток, ограничения их попадания внутрь кардиомиоцитов и ускорения выведения новых препаратов из организма.

ВЫВОДЫ

1. Строфантин и дигоксин в субтоксических дозах (0,18 и

1,2 мкг/г - для лягушек, 2,0 и 6,0 мкг/г - для крыс, соответственно) существенно повышают интенсивность межприступных эпилептиформ-ных разрядов и электрографических коррелятов припадков у животных с экспериментальными эпилептогенными счагами в гиппокампе. В условно терапевтических дозах (1/10 от субтоксических) дигоксин подавляет активнос-ть экспериментальных эпилептогенных очагов в гиппокампе лягушек и крыс, а строфантин оказывает незначительное провоцирующее влияние.

2. Дигоксин, подавляет генерализованные судороги у мшей,крыс и крысят разного возраста, вызванные электрошоком, бемегридом или кора зад ом.

3. Строфантин и дигоксин в концентрациях от I до 100 нМ вызывают гиперполяризацию, а в концентрациях от I до 100 мкМ - деполяризацию мембран всех пяти г'рупп идентифицированных изолированных нейронов брюхоногого моллюска роговой катушки, обладающих разной функциональной активностью.

4. Дигоксин в дозах 0,89 мкг/г и 4,4 мкг/г (при подкожном введении крысам в течение 6 дней) оказывает диаметрально противоположное влияние на уровень РНК в нейронах: увеличивая (на 50%) или снижая (на 3^) последний, соответственно.

5. Дигоксин (0,1 мг/кг, внутривенно) уменьшает па 10-20% объемную скорость локального мозгового кровотока в разных отделах

коры у кроликов с генерализованными судорогами, вызванными кора-

зол ом.

6. Дигоксин рекомендован для применения в клинике у больных с резистентными формами эпилепсии, под контролем уровня №а+Д+-коэффициента в их эритроцитах.

7. Строфантин и дигоксин в малых дозах (10-100 мкМ) вызывают гиперполяризацию, а в больших (I мМ) - деполяризацию мембран кар-диорегулирующих нейронов виноградных улиток. В зависимости от функции этих нейронов (активирующих или тормозных) одновременно наблюдали соответствующие изменения ритма сокращений сердца: то есть при гиперполяризации активирующего нейрона частота сокращений сердца уменьшалась, а при его деполяризации - увеличивалась. Аналогичные изменения величины мембранного потенциала тормозного нейрона противоположным образом изменяли частоту сердечных сокращений.

8. Иммобилизованные на сополимере (винилплрролидоне с малеи-новым ангидридом) строфантин и дигоксин вызывают практически одинаковый лечебный эффект in vitro и in vivo в тех не концентрациях и дозах, что к обычные их аналоги. В то ао время иммобилизованные гликозиды у лягушек, мышей и крыс в 9-15 раз менее токсичны, чем их обычные препараты. Иными словами, новые препараты характеризуются большей терапевтической широтой действия.

9. После внутривенного введения концентрации строфантина,ди-гоксина и их иммобилизованных аналогов в крови с одинаковой скоростью снижаются в течение I часа, оставаясь затем на постоянном уровне весь период наблюдения (24 часа). Концентрации иммобилизованных гликозидов при этом выше, чем их обычных препаратов. Целостность комплекса иммобилизованных сополимером строфантина и дигоксина сохраняется в организме в течение I часа на 87% и 91%, соответственно.

Строфантин и дигоксин, фиксированные на сополимере, меньше проникают в ткани и клетки, скорее выводятся с мочой и более значимо повышают диурез, чем обычные препараты.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Михайлов И.Б. Отравления сердечными гликозвдами в детском возрасте (обзор литературы) // В с б."Лекарственные и ядовитые растения и их значение в педиатрии". - Л., Eí',G. - С.50-57.

2. Михайлов И.Б. Роль ЦНС в реализации токсического влияния строфантина на сердце // В сб."Актуальные проблемы профилактики, диагностики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний". - М., 1986. - С.67.

3. Михайлов й.Б. Роль центрального действия сердечных глико-зидов в реализации их токсических эффектов (обзор литературы) // Ред.ж."Фарм.и токе.". - !,1., 198'?. -ЮС. - Библ.37 назв.- Рук. деп.в ВИНИТИ fi; I5I4-B87 от 37.02.87.

4. Михайлов И.Б. Влияние строфантина и дигоксина на активность экспериментального эпилептогенного очага в гиппокампе лягушек // Бш.эксп.биол.- 1987. - № II. - С.586-588.

5. Михайлов И.Б., Титова Г.Н. Морфологические изменения в сердце крыс после физической перегрузки плаванием или введения адреналина // Матер.конф., посвящ.150-летию со дня рокд.П.Ф.Лес-гафта. -Л., 1987. - С.42.

6. Михайлов И.Б. Ноьое в лечении отравлений сердечными глико-эидами (обзор литературы) // Врачебное дело. - I£h8. - fc 5.

- С.39-41.

7. Михайлов И.Б. Яа+,К+-АТФ-аза.как рецептор зкзогенных и эндогенных сердечных гликозидов (обзор литераторы) // Фарм.п токе.

- 1988. - № 3. - С.116-118.

8. Михайлов И.Б., Сухов P.P. Влияние строфантина и дигоксина на активность экспериментального эпилептогенного очага в гиппо-кампе крыс // Ред.ж.пфарм.и токе.". - М., 1988. - 9 С. - Библ.

16 назв.- Рук.деп.в ВИНИТИ № 3322-В88 от 03.05.88.

9. Маркова И.В., Михайлов И.Б., Барановский A.B., Сухов Р.Р. Иммобилизация сердечных гликозидов сополимерами - способ снижения их токсичности у животных разного возраста // Матер.У1 Взееоюзно-го съезда фармакологов. - Ташкент, 1988. - С.£40.

10. Гапон С.А., Михайлов И.Б., Начман А.Н., Фрдлова Е.В. Влияние разных концентраций строфантина и дигоксина на идентифицированные нейроны роговой катушки // Матер.П Всесоюзной конф. "Простые нервные системы". - Казань, 1988. - С.59-62.

11. Гусоль В.А., Михайлов И.Б. Некоторые методические приемы изучения нейротропных средств // Методические рекомендации МЗ СССР. "Фармакологическое изучение возрастных особенностей в действии лекарственных средств". - М., 1988. - С.47-52.

12. Гусель В.А., Михайлов Й.Б. Миокард и сердечные гликози-ды // там же. - С.47-52.

13. Михайлов И.Б. Пути предупреждения токсических эффектов сердечных гликозидов (обзор литературы) // Ред.ж."Фарм.и токе!1 - М., 1988. - 10 С. - Библ.37 назв.- Рук.деп.в ВИНИМИ № Д-18012 от 04.07.89.

14. Михайлов И.Б., Галустьян Г.Э., Титова Г.Н., Барановский A.B. Сопоставление токсического и лечебных эффектов строфантина и его иммобилизованной формы в экспериментах на лягушках и крысах // В сб."Новые биологически активные полимеры и Иммобилизованные ими стероиды". - Л., 1989. - С.89-92.

15. Галустьян Г.Э., Михайлов И.Б. Влияние строфантина и дигоксина на активность сукцинат-, лактатдегидрогеназ и мембранной

)йа+,К+-АТФ-азы в сердце крыс с экспериментальный миокардитом // Бюл.эксп.бисеь- 1969. - Jfe 4. - С.442-444.

16. Михайлов И.Б. Влияние нетоксических доз сердечных глико-зидов на центральную нервную систему // В сб.научн.тр., посвящ. 190-летию BMA им.С.М.Кирова. - Л., 1989. - С.92.

17. Гапон С.А., Михайлов И.Б., Качман А.Н., Фролова Б.В. Изменение мембранного потенциала нейронов роговой катушки при действии сердечных гликозидов // Ж.эвол.биох.и физиол.- 1989.

- № 5. - С.672-674.

18. Михайлов И.Б., Сухов Р.Р. Дигоксиновая стереотипия у мышат и крысят Ц Я.эволю.биох.и физиол.- 1990. - И» 6.- С.844-845.

19. Маркова И.В., Михайлов И.Б., Барановский A.B.,Сухов Р.Р. Сравнительное изучение токсического и лечебного эффектов дигокси-на и его иммобилизованной формы // фарм.и токе.- 1990. - № 5.

- С.37-89.

20. Михайлов И.Б. Эндогенные дигиталисоподобные вещества и сердечные гликозиды: факты и гипотезы (обзор литературы) // Фарм. и тоюз. — 1990. - № 5. - С.75-78.

21. Михайлов И.Б., Сухов Р.Р. Влияние сердечных гликозидов на содержание РНК в кардиорегулируюших структурах ромбовидного мозга // Бюл.энсп.биол.- I9S0. - № I. - С.49-50.

22. Панарин Е.Ф., Байков В.Е., Маркова И.В., Михайлов И.Б., Сухов Р.Р., Барановский A.B.- Водорастворимые полимерные производные строфантина и дигоксина и способ их получения // Зарегистрировано 10.07.87 - по заявке № 4700452/31-05 (050358). - Положительное решение от 18.01.90.

23. Маркова И.В., Михайлов И.Б. К вопросу о механизме ино-тропного действия сердечных гликозидов (обзор литературы) // Ред.ж. "Фарм.и токе." - М., 1991. - 15 С.- Библ.ПО назв.- Рук.деп.в

ВИНИМ № 62I-B от 07.02.91.

24. Прокопенко В.М., Слободская В.В., Шапот Е.В., Михайлов И.Б., Байков В.Е., Панарин Е.Ф. Сравнительная фармакокинетика строфантина и его иммобилизованного производного // Хим.-фарм.ж.

- 199I. - № 2.- С.8-10.

25. Михайлов И.Б., Журавлев В.!., Бычков Р.Е., Сафонова Т.А. Влияние разных концентраций строфантина на кардиорегулирующие нейроны виноградной улитки // Вестник ЛГУ. - 199I. - Серия 3 (биология). - вып.1. - № 3. - С.68-72.

26. Михайлов И.Б., Сухов P.P. Противосудорожная активность дигоксина у крыс разного возраста и мышей // Зврм.и токе.- 1991.

- № 4. - C.IH3.

27. Максимук В.Ф., Михайлов И.Б. Центральный эффект дигоксина // Е.эвол.биох.и физиол.- 1991. - №3. - С.403-404.

28. Маркова И.В., Михайлов И.Б., Гузева В.И. Дигоксин - активное противоэпилептическое средство // Фарм.и того.- 199I.

- № 5. - С.52-54.