Автореферат и диссертация по медицине (14.00.06) на тему:Роль гуморальных систем почек в формировании почечных эффектов сердечных гликозидов

министеротао здравоохранения и медицинской промышленности российской федерации оренбургская государственная медицинская академия

На правах рукописи

ТАРАСОВ Сергей Викторович

РОЛЬ ГУМОРАЛЬНЫХ СИСТЕМ ПОЧЕК В ФОРМИРОВАНИИ ПОЧЕЧНЫХ ЭФФЕКТОВ СЕРДЕЧНЫХ ГЛИКОЗИДОВ

14.00.06 - кардиология 14.00.25 - фармакология ,

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Оренбург - 1995

Работа выполнена е Оренбургской Государственной медицинской академии

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор О.Б.Кузьмин

Научный консультант.

доктор медицинских наук, профессор А.В.Рсгузин

Официальные оппоненты: '■'•'■':

доктор медицинских наук, профессор А.В.Дубищев кандидат медицинских наук, доцент А.Т.Гусев

Ведущее учреждение: Челябинский Государственный

¿¿едицияский инсягтут Защита состоится "/4 " У-е_ 1995 ^дд

® г—" часов на заседании диссертационного совета К.084.51.01 при Оренбургской Государственной медицинской академии (г.Оренбург. ул.Советская,Б)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института. Автореферат разослан "___"__________1995 г'

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук ИААлешин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА PAI5C-TU

Актуальность тени . Сердечные глнкозиды, посмотри на широкое применение препаратов негликозидной природы, занимают важное место в лекарственной терапии хронической сердечной недостаточности (В. Ю. Мареев,1991; Б.А.Сидоренко,Д.В.Преображенский, 1995). Экстракардиалыше эффекты, возникающие при этом в почках, имеют существенное значение для устранения отечного синдрома при этой патология. Наиболее важными из них является торможение транспорта натрия в нефроне, приводящее к достаточно выраженной диуретической реакции, и дилатация сосудов, способствующая улучшению крэсвоснабжения почек и их функционального состояния. Несмотря на разработку некоторых общих представлений об изменении функции почек под влиянием сердечных гликозидов (И. M. Сыч* ва, 1971 ; К .Б. Берхлш, Б. А. Пахмурннй,1971 ; И.М.Сычева,А.В.Виноградов,7977), многие стороны их почечной фармакодинамики остаются неясными'или совсем не исследовавши. В частности, недостаточно ясен вопрос о механизме канальцевого и сосудистого аффектов этих лекарственных веществ. Практически отсутствуют сведения об особенностях и механизме формирования вторичных модулирующих реакций, с помощью которых почки препятствуют при действии сердечных гликозидов избыточной потере натрия и вода из организма для сохранения водно-солевого го-меосгаза организма. Выяснение этих вопросов может иметь важное значение не только для углубления современных представлений о механизме-действия препаратов этого ряда, но и для разработки новых подходов к повышению эффективности гликозидотв-рзпив. В связи о ?тим мы исследовали взаимодействие сердечник гликозидов с калликреин-кинин^ьой ( ККС ) системой почек, почечными простаглапдинйми ( ПГ ) и системой р'Иин-ангиотеизин

-г-

( FAC ), которые играют ведущую роль ь регуляции почечной микроциркуляции и транспорта ионов и воды в нефроне (М.Дж.Данн, I984;V.J.Cogan,1990;C.P.Vio et al.,1992).

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работа явился фармакологический анализ роли почечных кининов, ПГ, РАС, и ионо; Са2+ в механизме действия сердечных гликозидов на транспорт натрия и кровоток в почках крыс. Для достижения поставленной цели решались следующие основные задачи:

1. Изучить влияние строфантина и дагоксина на кровоснабжение наружной и внутренней зон коры и мозгового слоя почек для оценки роли гемодинамических факторов в механизме торможения транспорта натрия в различных отделах нефрона.

2. Исследовать действие ингибиторов ККС, биосинтеза ПГ и РАС- на процесс формирования в почках канальцевого и сосудистого эффектов строфантина и дагоксина.

р,

3. Изучить влияние блокатора Са -каналов верапамила на реакцию почек ори действии строфантина и дагоксина.

Научная новизна. Впервые установлений, что прямое торможение сердечными гликозидэми транспорта натрии в канальцах почек крыс пе зависит от увеличения биосинтеза ПГ и изменения концентрации цитозольного Са10 в клетках нефрона. Почечные ККС и РАС выполняют при утом роль модуляторов, ослабляющих каналь-цевнй эффект сердечных гликозидов и препятствующих избыточной ■ потере почками натрия и воды для сохранения водно-солевого го-меостаза организма.

Впервые исследовано действие «мрдечннх гликозидов на кровоток в 4 различные зонах почечной ткани. Установлено, что строфантин и дигоксия вызывают б ночках крыс тотальную

ьазодилатацим с повьгеыем уроьнл кровоснабжения норы и мозгового слоя. Реализация сосудорасширяющего эффекта сердечных гликозидов связана с увеличением образования кишнов и ПГ. В механизме этой сосудистой реакции участвует снижение содержания цитозолъного Са2+ в клетка?, гладкой мускулатуры почечных сосудов.

Научная и практическая значимость. Получены новые сведения, которые расширят- и углубляют современные представления об особенностях и механизме формирования в почках канальцевого и сосудистого эффектов сердечных гликозидов. Выявлен характер и особенности взаимодействия сердечных гликозидов в почках с ингибиторами калликреин-кшшновой систем«, нестероидными про-

?4

тивовоспалительными средствами, блокаторами Са -каналов и ингибиторами конвертирующего фермунта, которые рекомендуются учитывать в клинике при сочетанием назначении этих груш лекарственных препаратов.

Внедрение результатов в практику. Результаты исследований включены в преподавание соответствующих разделов курса фармакологии в Алтайском,Самарском медицинских унмверситах, Ивановской и Оренбургской медицинских академиях и Чувашском государственном университете. Разработано и внедрено два рационализаторских предложения.

Апробация работы. Материал диссертации докладывались и обсуждались из областной научной конференции "Хроническая сердечная недостаточность" {г.Оренбург, IS88), VIII Всесоюзной конференции по Физиологии почек и водно-солевого обмена (г.Харьков,1989) и заседаниях Оренбургского научного общества Фармакологов (г. Оренбург, 1390, 1994).

Осноьше положении выносимые на защиту.

1. Тормозни« сердечными гликозидами транспорта натрии в нефроне почек крыс ш зависит от изменения биосинтеза ПГ и концентрации цитозольного Са2+ в клетках почечных канальцев. ККС почек и РАС ослабляют канальцеиий эффект этих препаратов, препятствуя избыточной потере почками натрия и вода.

2. Сурднчше гликозиды вызывают у крыс натрийуретическуи реакцию, которая сопровождается увеличением кровоснабжения коры и мозгового слоя почек. Сосудорасширяющее действие этих лекарственных средств связано с увеличением образования в почках киников, иростаглаидиноа и снижением содержания цитозольного Са2+ в клетках гладкой мускулатуры почечных сосудов.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 работ, из них 2 - в журналах.

06"еи и структура диссертации. Диссертация изложена на 115 страницах машинописного текста, иллюстрирована 20 рисунками и 17 таблицами. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, выводов и указателя цитированной литературы, в котором приБ«дено 117 источников, из них 35 отечественных и 87 зарубежных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Фармакологический анализ м-.-ханизмя действия сердечных гликозвдов на транспорт натрия и кровоток в почках выполнен с использованием рделични* методических подходов, которые позволили п« только оценить характер функциональна^ сдвигов в кровообращении и натрийур.'тической Функции ночек, но и

получить иредсгавл?!»« о роли почечной ККо, ИГ и ГАС в формировании канальцевого и сосудистого эффектов этих препаратов.

Опыты по иэучешх! нагрийуреткчецкой функции почек .Эксперимента проведены на белых беспородных крысах обоего ггола массой 150-200 г, наркотизированных тяоиентал-натрием(50 мг/кг внутриОрюшшто), с применением стандартных клиренсовых методик. В пробах мочи и крови определяли содержание инулина гштроновым методом (О.Шгг е1 а1.1955; А.К.Накшеев и др. ,1963) на электро-фотокалориметре ФЭК--56М. Концентрацию натрия и калия исследовали на пламенном фотометре 1НМ-МУ. По общепринятым формулам (Е.Б.Берхин,Ю.И.Иванов,Ю.В.Наточин,1974) рассчитывали показатели натрийуретической функции почек. Для более точной. оценки все показатели насчитывались на 100 I' массы тела животного. Всего поставлено 120 экспериментов (12 серий опытов).

Опыта по изучению локального кровотока в почке. Для изучения влияния сердечных гликозидов на динамику об"емной скорости локального кровотока в почках крыс были выполнены эксперименты ¡¡о определению величины клиренса водорода(Свод) в 4 зонах почечной ткани полярографическим методом Опыты выполнены на наркотизированных тиопентал-натрием животных массой 160-250 1'. С этой целый вводили электрода в 4 зоны почечной ткани: наружный корковый, внутренний корковый, наружный мозговой и вну.тр«шмй мозговой слои. Рабочие электроды изготовлялись из платины химической чистоты 99,99», диаметром 0.15 мм. Вся поверхность электрода изолировалась лаком за исключением кончика длиной 0,3 мм, заточенного на конус. Вспомогательным электродом служила серебряная пластина. Для ингаляции испо-

льзовался водород ЮОй концентрации, необхода*кч? количество которого вводилось б организм за 2-3 вдоха животного.Водород получали с помощью генератора водорода СГС-2 (И.Т.Демченко,С.В.Буров, 1971,И.Т.Демченко,1976 ). Напряженна водорода в различных слоях почечной ткани определяли с иомощыи полярографа ПУ-1 при поляризующем напряжении на рабочем электроде +0,3 вольта. Графическая регистрация кривых вымывания водорода осуществлялась на потенциометре КСП-4.Расчет осГемной скорости локального ио-

0,693

чвчвого кровотока производили но Формуле Г = ---- »100, гдо

Т\/2

Г-оО"емная скорость кровотока в мл/мин на 100 г ткани, ^1/2 ~ пеРиол полувиведзния водорода в минутах (К.Аик1апс1 е1 а1., 1967).Локализация электродов определялась по 3 критериям: глубине погружения при введении, характеру кривой вымывания в контрольных ингаляциях индикатора и визуально после окончания опыта. Всего выполнено 180 экспериментов (18 серий опытов).

Препараты. Функциональное состояние мочек крыс первоначально изучалось в-опытах со строфантином (0,1 мг/кг, в/в) и дигоксином (0,1 мг/кг, б/в), использовавшихся в дозах, которые у крыс, отличающихся от людей гораздо меньшей чувствительностью к сердечным гликозидам, вызывают типичную реакцию почек в виде дилятацни сосудов и значительного увеличения диуреза и выделения натрия и калия с мочой. Для анализа механизма действия сер-дачных гликозидо» в почках использовались коптрикал (5000 АТрЕ/ кг, п/к) и вераиамил (0,25 мг/кг,в/в), которые вводились за 30 мин до ин"екции препаратов, а также индометацин (3 мг/кг/сут-ки,5 дней) и каптоприл (тепзиомш, фирма "Згис", Венгрия 5 {10 мг/кг/сутки, € дней), назначавшиеся животным до постановки

ЭКСНврКМ-.-Н'П [.—r- OS h дзззх, яначит^льио и^ДЗШЫЯЦИХ в почкзх крыс соответственно биосинтез ¡1Г ¡G.Dagl^r.AiBlrbari ,1980) и активность РАС (I.Gardes et al.,1986).

Статистическая обработка. Статистическая обработка подученных данных проведена с использованием стандартных методов вариационной статистики с расчетом средней арифметической величины ( M ) и средней ошибки средней арифметической ( ш ).Достоверность результатов оценивалась с помощью критерия t Стыодеита ( р ).Значительный разброс величины показателей функционального состояния почек в клиренсовых опытах на наркотизированных животных привел к необходимости оценка достоверности результатов с помощью критерия ( Т ) Вилкоксона для связанных (парных) выборок ( Рт>.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЩОВАШ И ИХ ОБСУЭДКНИЕ

Исследования последнего временя позволяют полагать, что почечные киниш, ПГ и РАС могут непосредственно вовлекаться в механизм действия сердечных гликозидов на кроиоток и транспорт натрия в почках. Для выяснения этого вопроса был проведен фармакологический анализ кзхокизма формирования в ночках крыс каналь-цевого и сосудистого эф^зктав сердечных гликозидов с использованием специфических ингибиторов биосинтеза этих физиологически активных веществ. С ¿»той целый первоначально исследовалось влияние строфантина и дягоксичч на основны-- показателя натрийуре-wiecKvfl ф;чгьлйи и удоош» об'емндЯ скорости локального

кровотока в различных зонах почечной ткани, а затем с помощью специфических ингибиторов ККС, биосинтеза ПГ, РАС, и блокатора Са2+- каналов оценивалась роль этих систем и-Са2+ в механизме функционального сдвига, возникающего в почках под влиянием сер-

I .Влияние строфантина и ди'оксша на транспорт натрия и кровоток в почке крыс

Первоначальные сведения о влиянии сердечных гликозидов на транспорт натрия в ночках Сыли получены в опытах на наркотизированных крысах с использованием стандартной клирепсовой методики. Введение таким животным строфантина вызывало значительное увеличение мочеотделения, которое к 60 мин наблюдения достоверно возросло в 3,5 раза. Клиренс инулина, характеризующий скорость клуОочковой фильтрации изменялся при этом недостоверно, хотя и имел тенденцию к некоторому увеличению. Количество виде левого с мочой натрия, как и диурез, также возросло, но прирост был выражен в меньшей степени и составил 2,81' раза. Увеличение в этих условиях экскретируемой фракции натрия прямо указывает на то, что основной причиной натрийуретического эффекта строфантина явилось торможение реабеорбпии натрия в почечных канальцах (таблица I). Реакция ночек крыс на дигокеин весьма напоминала действие строфантина, но отличалась рядом особенностей. Прзаде всего обращает на себя внимание достоверное повышение клиренса инулина, указывающее на увеличение об"~ ема клубочковой Фильтрации. Несмотря на это, диуретический и нзтрийуретический офф?к?и пршэрятз били менее выраженными и достигали максимума к 90 мин эксперимента. По сравнению с контрольным уровнем моче'>?дел-?ни-.- и ьыделеиии натрия с мочой возросли к атому времени соответственно в 2,77 и 2,0 раза. Под влиянием дагоксина отмечено также достоверное увеличение экскре-тируемой фракций ширил, что говорит об участии и механизме натрийуретичоской реакции, возникающей при действии дшшеина,

да только приросга •¿■¡гямр.-яцщ, но и угжгения р?-

аОсорбции этого иона в почечных канальцах. Таким образом, результаты полученные нами в клиренсовых опытах на крысах, под-

Таблвда I

Влияние строфантина на натрийуретическую функцию почек крыс при действии контрикала, индометацина, верапамила и кантопридз (М±м)

п Клубочковая фильтрация мкл/мин на 100 г Диурез мл/мин на 100 г Экскреция натрия мкмоль/мин на 100 г . Экскретируемая фракция натрия %

контроль опыт контроль опыт контроль опыт контроль опыт

Условия опыта

10 235,8 247,9 г, 02 7,14 0,252 0,708 0,84 2,30

4- + + + ** ± * * 4- ± *

32,1 32,3 0~2Ь 2,85 0,056 0,306 0,25 0,98

10 333,8 483,8 2,68 18,41 0,347 2,169 0,83 4,70

+ +• * 1" ** ± ** ± ± *А

27,7 88,7 0,27 88,7 0,059 0,319 0,15 1,14

тин

Контри-кал + Строфантин

Индоме- 10 451,1 523,9 2,23 14,75 0,231 0,745 0,55 1,21 тацин + £ 1: t ******* ± **

Строфан- 62,0 90,9 0,20 5,07 0,092 0,151 0,16 0,30 тин

Верапа- 10 330,2 310,4 1,92 9.95 0,270 I,'103 0,57 5,48 МИЛ + t t i ******** * *-к

Строфан- 39,3 73,7 0,18 2,14 0,050 0,473 0,11 2,29 тин

15,8 0,178 1,073 0,48 1,92 ♦ ** | ± ** * * **

203,6 24-1,3 0.16 5,05 0.025 0,316 0,11 0,37

Кантон- Ю 467,3 707.6 I, рил +- £ 1 **

ьтрофан-тик

рт<0,05,

рт<0.01

твердали известило двшше о том, что сердечны'} гликхииды тормозят транспорт натрия в канальцах почек и вызывают достаточно выраженную диуротическуы реакцию, которая сонровоадается уве-

-ю-

лкчением вздел-л-ин натрия с мачоЯ.

Таблица 2

Влияние дигоксина на натрийуретическу» функцию почек крыс при действии контрикала, индомэтацииа, верапамила и кзптоприла (Mira)

Условия опыта

Клубочковая фильтрация икл/мин на 100 г Диурез мл/мин на 100 г • Экскреция натрия мкмоль/мин на 100 г Экскретиру-емая фракция натрия %

контроль опыт контроль опыт контроль опыт контроль опыт

Дигок- 10 син

Конт- 10 шкал + ± дагок-син

Индоме- 10 тацин + Дигок-син

Верапа- 10 мил + Дигок-

с1ш

Каптон- 10 рил ± Дигок-син

218,4 322,9 1,98

24.7 51,4 0^24

221,1 428,2 1,95 ± ** ± i

28,9 108.2 0,32

451,1 523,9 2,23

Z ±

62~0 90,9 ОГЗО

431,8 562,0 1,53

± i * t

56.6 0.104 0,17

416,1 957.0 2,00

i. i ** t

87.8 124,8 0,23

5,48 ■ ± *a 1,63

9,22 **

1,89

14,75 j- **

5,07

11,58

i *A

1,90

11,99 t ** 3,41

0,303 +

0,066 0,336 "0,066"

0,231 0,092

0,218 4-

O.fffr

0,274 0,077

0,606 1,06

± a i

0,134 0,22

1,442 1,25

•k-k t

0,200 0,26

0,745 0,55

Ii *+ *

0,151 0,16

1,821 0,44

± a* t 0,381 0,14

0,974 0,44

t AA t

0,212 0.03

1,86 t а 0,39

3,29

± AA

0,77

1,21 ± AA

0,30

2,85

± A* 0,60

0,67 ± *

0,10

*р.г<0,05, **рт'0,01

В формировании канальцевого эффекта сердечных гликозидов участвует также гомодшэмическяй сдииг, возникамций в корковом слое и других зонах ночечной ткани. Это связанно о тем, что почечная микроцмркуляцкя не только обеспечивает метаболические потребности почек, но и прямо контролирует процесс удаления реабсорбированной части ультрафильтрата а оказывает поэтому

' -11-

существегшсс Единиие т речбсо^щш натрия н различных, отделах нефрона ( 1.Н.51е1п,1984;Н.5оппепЬеге е! а1.,1990 ). Мекду тем вопрос о характере 1'биодинамического сдвига, развивающегося в почках при действии этих препаратов, остается во многом неясным. Известно, что сердечные гликозиды в терапевтическох дозах вызывают дилатащш сосудов коркового слоя, которая не зависит от их кардиотонического эффекта, хотя выражена в большей степени у больных с застойной сердечной недостаточностью (Е.С.Пищулина, ' Н.М.Петрова,1970) ила жэ у животных с моделью недостаточности кровообращения (Е.Б.Берхин,Б.А.Пахмурный,1971). Однако эти сведения были получены в основном с использованием или Сд в качестве показателей почечного кровотока, которые не позволяют судить об особенностях гемодинамического режима в разных зонах почечной ткани, а отражают лишь общий уровень кровоснабжения коркового слоя. В наших опытах мы использовали методику регистрации Сшд в 4-х функциональных зонах почечной ткали, которая позволяет достаточно точно оценить величину об"емной скорости локального кровотока в исследуемой зоне ночки (Г.Шэзепкогп е1 а1. ,1989).

Опыты показали, что натрийуреткчсской реакции, возникающей при действии строфантина, соответствует умеренное, но достоверное увеличение Свод в обеих исследованных зонах корн и наружном мозговом слое. Максимальным прирост кровотока был отмечен спустя 60 мин после шГекции препарата и в наибольшей степени был выражен в наружной"зоне мозгового вещества, где кровоснабжение возросло на 16,312,43» (Р'.0,00[) по сравнению с контрольным уровнем. Длительность вазодилатации не превышала 90 мин. Кровоток во внутренней зоне мозгового слоя существенно не изменился, хотя и

Таблица 3

Влияние срофанмша на динамику локального кровотока в различных зонах почек крыс (М±ш)

Зона почки п Кровоток, мл/мш на 100 г ткани

контроль 30 мин 60 мин 90 мин

Корковый слой: наружная внутренняя

10 439,3iI5,3 473,5±20,3** 49I,4±2I,7** 431,6*7,94 10 407,6+13,9 438,4+18,8** 461,4+20,0** 4I7,0±I2,I

Мозговой слой: наружная внутренняя

10 10

333,5*13,7 365,5sI7,5** 387,8±I7,8** 382,1±15,3

300,9iI2,9 317,2±8,8

327,2iI0,0 331,6*13.7

* рт<0,0Б , ** рт<0,0Х

ямед тенденцию к некоторому увеличении (таблица 3). Введение каютным дигоксина приводило к менее быстрой, но более заметной сосудорасширяющей реакции во всех зонах почечной ткани с максимальным эффектом на I2Q мин наблюдения. Наибольший прирост кровотока выявлялся при этом со внутренней зоне мозгового вещества и составил 23,3±5,3& (р<0,001). Эти данные позволяют считать, что сердечные гликозиды вызывают тотальную дилатацию сосудов коры и мозгового слоя почек крыс с увеличением кровотока в этих зонах почечной ткани.

2.Влияние ингибитора калликреил-кюшновой системы контрикала на транспорт натрия и кровоток в почке крыс при действии строфантина и дшчжсина

Образующиеся в почках кишлш обладают широким спектром биологической активности. Ряд данных, полученных в последнее время, позволяет рассматривать их, в частности, в качестве специфических эндогенных регуляторов канальцевого транспорта натрия в клетках дисталышх отделов нефрона с недостаточно пока ясной направленностью действия (K.Tomita et al. Л98б;Н.Тои1уа-ma et al.,1989). Кроме того, физиологически активные концентрации брадикининз вызывают в почках четкий сосудорасширяхкий зффект, который обусловлен стимуляцией В?~кининовых рецепторов мембран гладкой мускулатуры почечных сосудов (F.J.Penoy.R.J. Roman, 1992). Данные ряда авторов свидетельствуют1 о том, что образующиеся в почках кшшш непосредственно участвуют в.реализации специфического действия петлевых и осмотических диуретиков , играя роль модуляторов, ослабляющих их угнетающий эффект на систему канальцевого транспорта натрия (0.Б.Кузьмин .П.В.МихаЯленко, 19SO:0.Б.Кузьмин, 1993). Действие сердечных

Таблица 4

Влияние дигоксина на динамику локального кровотока в различных зонах почек крыс ( М ± т )

Зона почки п Кровоток, мл/мин на 100 г ткани

контроль 30 МИН 60 мин 90 мин 120 мин

Корковый слой: наружная 10 внутренняя 10

521,7+28,8 542,5133,2 553,9*35,7* 551,6±3в,7* 561,9+34,3* 426,4*18,8 459,1*29,0 475,1*25,7* 513,1*34,5** 520,2137,8*

Мозговой слоя: наружная 10 внутренняя 10

306,6*29,1 315,8*33,5 335,7*34,0** 356,1±23,4** 371,0*20,9** 267,1*11,7 295,6+26,6 308,1*13,0** 325,2*25,6** 329,6*17,5**

* рт<0,05 , ** рт<0,01

гликозилоь Н'з почешу» ККС неясно, но, учнтиьал сходный характер функционального сдвига, возникающего в почках под влияниим зтпх

Таблица 5

Влияние индометащша, контрикала и кантоприла на кровоток во внутренней зоне коркового и наружной зоне мозгового слоя ночек крыс при действии строфантина (М-Мп)

Кровоток, мл/мин на 100 г ткани

Препараты п Внутреняя зона коркового слоя Наружная зона мозгового слоя

контроль ошт контроль опыт

Строфантин 10 407,6+13,9 4о1,4±20,0* 333,5±13,7 а* 387,8±17,8

Контрикал + 10 Строфантин 382,7+12,7 ЗЭ5,3±И,1 336,6±16,0 345,8±14,9

йвдометацши- 10 '137,7+11,6 Строфантин Верапэмил + 10 434,819,2 Строфантин 443,8ьГ0,4 ** 455,8±5,6 364,7+15,2 338,41:11,0 375,0±12,7 ** 414,8+12,0

Каптоприл+ Строфантин 10 443,01:14,5 459,4+11,3 351,4И6,8 399,14 13,9

рт-,0,01

лекарственных веществ, следовало ожидать, что она может вовлекаться в механизм действия сердечных гликозидов на транспорт натрия и кровоснабжения почек. Эксперименты с контржалом показали, что введение ингибитора калликреина в дозе, не влияющей на функцию почек крыс, резко изменяет их реакций на оба исследованных препарата. При комбинации строфантина а контрикалом об"ем выделеной мочк по сравнении с контролем возрос в 1,93 раза, а экскреция натрия увеличилась в 2,22 раза (таблица I). Предварительное подавление активности почечной ККС согтрововда-

л.-еь также мощной диуретический реакцией с гораздо более значительным приростом выделения натрия с мочой и в опытах с ди-

Таблица б

Влияние индометацина, контрикала и каитоприла на кровоток во внутренней зоне коркового и наружной зоне мозгового слоя почек крыс при действии дигоксина (Мш)

Кровоток, мл/мин на 100 г ткани

Препараты п Внутреняя зона коркового слоя Наружная зона мозгового слоя

контроль опыт контроль опыт

Дигоксин 10 426,4±18,8 А* 520,2г37,8 306,6*29,1 * 371,0±20,9

Контрикал ^ 10 Дигоксин 552,7130,3 572,6+-40,7 403,5±27,3 423,6±46,4

Индометацин+ 10 523,8±27,5 Дигоксин Верапамил + 10 517,8±17,5 Дигоксин 567,8±43,0 ** 6ÍO,9i76,I 399,4±24,7 32Э,Б±32,3 446,5±25,8 * 379,2±35,6

Каптоприл+ 10 640,5±42,5 885,4+46,1 399,6±38,3 520,0±48,7

*рт<0,05, ** рт<0,01 токсином, где прирост этих показателей составил соответственно

1,71 и 2,14 раза (таблица 2). Выяснилось также, что к 60 и 120 мин наблюдения контрикал практически полностью устраняет сосудорасширяющее действие строфантина и дигоксина и связанное с ним увеличение крошгока ь ¿ оонивнах функциональных зонах почек - внутренней зон« кори и наружном мозговом слои (таблица 5 и С). Эти данные столпе согласуются о представлении о кинипах как о стимуляторах переноса натрия в нефроне (Е.S.Marks,Н.R.Reiser, 1983) и прямо указывают на то, что почечная ККС выполняет

ФУЧг.цгг.; ......•>■-":•!';> Í'I Л-íí ."i Г-L-:■!!.■: Ь'.'Щ-СТВ

избыточной потере нзчрм u ьоды и;-, органигмэ. Результата опытов предполагают также, что образующиеся и ночках кикины, являются медиаторами, опосредующими ь почках крыс сосудорасширяющий эффект сердечных гликозилов.

3.Влияние ингибитора биосинтеза простагландияов индометацина на транспорт натрия и кровоток в ночке крыс при действии строфантина и дигоксина

Весьма заметную роль в регуляции Функции почек играет и система почечных ИГ. Предполагается, что ПГЕ2, продуцируемый клетками дистальных сегментов почечных канальцев и интерстици-альными клетками мозгового слоя, являются андогашыми ингибиторами реаОсорбции натрия в восходящем отделе петель Г'енле, кортикальных и, особенно, медуллярных собирательных трубках. ПГЕр не контролирует однако базалышй транспорт натрил, а включается в регуляции этого процесса при сдвигах в функциональном состоянии почечной ИГ-систсмы (С.Patrono,M.J.Durm, 1987). UTIg образующийся в эндотелии почечных сосудов, и ПГЕ3 выделяемый клетками почечных сосудов, обладает выраженным сосудорасширяющими свойствами и функционируют в почках как местные вазодиля-таторы, поддерживании? необходимый уровень фильтрации и микроциркуляции в различных зонах почечной ткани (H.J.Kramer et al., 1985;L.S.Rump,P.Soho]lrntíyei\ 1989). Физиологические свойства образу^дихся в почках Г!РБ0 11 ПИ, предполагают поэтому, что они могут выполнять функцию медиаторов, опосредующих, fio крайней мере, частично канзльцееия и сосудоряеашрямаий эф!'-*™ се {щечных гликозидов. Б связи с; этим мы изучили в:^!Модейст5«и в почках крыс строфантина и дигоксина с ингибитором циклооксигензза ин-

дометашшом, что позволило получить представлении об их роли в механизме действии исследований препаратов.

Опыты с индометацином показали, что предварительное назначение его животным в дозе, угнетающей биосинтез почечных ИГ, оказывает существенное влияние лишь на формирование в почках сосудорасширяющего действия сердечных гликозидов. На фоне подавления активности почечной ПГ-систеш у строфантина и дигоксина полностью сохранялась способность тормозить реабсорбцию натрия в канальцах ночек и вызывать выраженные диуретическую и натрий-уретическую реакции. В то же время ивдометацин практически полностью предотвращал увеличение Сшд , наблюдавшееся на 60 мин посла введения строфантина во внутренней зоне коры и наружном мозговом слое. Угнетение в почках биосинтеза ПГ сопровождалось также значительным ослаблением к 120 мин наблюдения сосудорас-ашрящего действия дигоксина в исследованых зонах почечной ткани. Имеются поэтому основания полагать , что синтезируемые в почках крыс ПГ не участвуют в формировании канальцевого эффекта сердечных гликозидов, связанного с торможением транспорта натрия в нефроне, но играют роль медиаторов, реализующих сосудис-" тый эффект этой группы препаратов в коре и, возможно, наружной зоне мозгового слоя.

о .

4.Влиянии блокатора Са -каналов верапамила на транспорт натрия и кровоток в почке крыс при действии строфантина и ди!чжеина

Как известно, кардиотошческий и некоторые другие эффекты сердечных гликозидов в значительной мере определяются увеличением концентрации питозольного Са2+ в клетках и ослабляются при сочетании с антагонистами Са?'+. Дилатация сосудов, воз-

- !

кикаедэи прк нозоуад--^гл ¡^-кишыоьыч рецепторок и рецепторов чувствительных к 11Г, напротив, связана с подиш!снием активности Са2+-механязма, регулирукхцего тонус гладкой мускулатуры почечных и других сосудов (Б.И.Ткаченко и др.,1989). Для выяснения роли Са2* в механизме действия сердечных гликозидов на

транспорт натрия и кровоснабжение почек мы исследовали взаимо-

2+

действие строфантина и дигоксина с блокатором Са^ -каналов во-рапамилом, который нарушает кинетику входа Са в клетки мишени.

Как показали проведенные опиты, ин"екция крысам иеранамила сопровождается диуретической реакцией с почти 3-кратным приростом экскреции натрия с мочой. Этот функциональный сдвиг является следствием торможении реабсорбции натрия, которое определяется снижением содержания в клетках нефрона (О.А.К1аегке,Р.Ь. ,1ог7£епзм1,1988). Если предположить, что канальце вый эффект сердечных гликозидов зависит от накопления Са'+ в клетках почечных канальцев, то при их комбинации с блокаторюм Са~+-каналов следовало ожидать ослабления этого эффекта и связанного с ним увеличения экскрвции почками натрия и воды, однако на фоне действия верапакмла у обоих препаратов почти полностью сохранялась способность дополнительно увеличивать экскретируемую фракшиа натрия и выделения этого иона с мочой. В связи с этим можно

думать, что реализация ннгибирущого действия.сердечных глико-

2+

зидов но связана с изменением внутриклеточной концентрации Са , а определяется-прямым угнетенном активности На+--К*-ЛТФ-ззц ба-золаторальных мембран канальцевнх клеток.

Одновременно с натрийуретичоской реакцией у крыс под влиянием вераиамила наблюдалась характерная дилатация почечных

сосудов с увеличением кровоснабжении кн>трепней зоны кори и наружного мозгового слон. Этот гемодинамический сдвиг, обусловленный снижением концентрации Са в гладкомышечных клетках почечных сосудов, весьма напоминает сосудистую реакцию, возникающую в почках при действии сердечных гликозидов, и связанную с увеличением образования киямюв и ИТ. Поэтому при изучении взаямо-действия этих препаратов с антагонистом Са можно было опадать, что в зависимости от сходства или .различия в механизме их сосудорасширяющего действия будет наблюдаться ослабление, суммация или даже потенцирование возникающих эффектов. В результате оказалось, что на фоне действия верапаммла у дигоксина и, особенно, строфантина соответственно к 90 и 60 мин после введения препаратов в значительной степени ослаблялся их сосудорасширяющий эффект и способность дополнительно увеличивать Сшд_ в исследованых зонах почечной ткани. Эти данные говорят о том, что блокатор Са2+-каналои веранамил препятствует в почке крыс формированию сосудистого эффекта сердечных гликозидов, что косвенно указывает на участие снижения £щтозольного Са^+ в клетках гладкой мускулатуры пачечных сосудов в механизме сосудорасширяющего эффекта этих лекарственны*, веществ.

5.Влияние ингибитора конвертирующего фермента каптоп-рила на транспорт натрия и кровоток в почке крыс при действии строфантина и дигоксина

РАС является основным компонентом иейро-гуморального механизма, регулирующего водно-соленой гомеостаз организма. В последнее время установлено, что аш'иотоизин II, образующийся под влиянием конвертирующего фермента в некоторых органах и тканях, не только стимулирует выделена« вазшрчеииа задней долгй гаю-

Физа или биосинтез минералкоргикои.д'.'-в ь коре надпочечников, но и непосредс гьештс контролирует транспорт натрия и гемодинами-ческий режим в почках. Возбуждая АТррецецторы базолатеральных мембран клеток проксимальных канальцев, активный пептид оказывает прямое стимулируетее влияние на транстубулярный перенос этого иона и способствует сохранению его в организме (M.J.Cogan, 1990). Предпологается также, что ангиотензин II, взаимодействуя с ATg-роцептораш гладкой мускулатуры почечных сосудов, участвует, в частности, в регуляции кровоснабжения тех сегментов нефрона, которые локализовании во внутрешшй зоне коры и, возможно, мозговом слое (P.Hansell et al.,1988). Не исключено поэтому, что РАС может непосредственно вовлекаться в механизм формирования в почках канальцевого и сосудистого эффекта сердечных гликозидов. Для выяснения этого вопроса ш изучили взаимодействие строфантина и дигоксияа с ингибитором конвертирующего фермента каптоприлом в дозе, значительно угнетающей активность этого энзима и образование в почках ангиотензина II (I.Gardes et al.,1986).

Предварительное назначение крысам кэнтоприла, ослабляющего стинулируещее влияние РАС на перенос натрия в проксимальном и дастальном отделах нефрона, существенно изменяло реакцию канальцев почек на оба исследованных препарата. У таких животных строфантин вызывал гораздо более выраженный диуретический аффект с соответствующим увеличением натрийурезэ, который более чей в 2 раза превышал аналогичный эффект, возникавший у контрольных животных. Аналогичные результаты были получены и в экспериментах с комбинацией каптонрилэ и дигокси-на, в которых прирост этих показателей по сравнению с контролем

доставил 2,16 I! 1,?'/ рза (таблицы I и 2). Слелсшзтсчяьио предварительное угнетение активности РАС потенцирует диуретическое и натрийуретическое действие сердечных гликозидов, что, скорее всего, является следствием их фармакодинамического взаимодействия на уровне нефрона. При изучении влияния -каитоирила на процесс формирования сосудистого эффекта атих препаратов выяснилось, что сосуды почек крыс, получавших ингибитор конвертирующего фермента в опытах со строфантином, оказались к нему мало чувствительными, что не позволило получить достаточно четкие сведения о характере взаимодействия этих лекарственных средств. В другой группе тавотных на фоне подавления активности РАС дагоксин вызывал более выраженную и длительную сосудорасширяющую реакцию во внутренней зоне коры но сравнению с данными контрольных экспериментов. В наружном мозговом слое величина Свдд имела при этом тенденцию к превышению соответствующих показателей контрольных опытов, но различие не было достоверным. Результаты этих опытов пЪзволяют считать, что РАС прямо вовлекается в формирование канальце вого эффекта сердечных гликозидов в почках крыс, выполняя функцию модулятора, ослаблящего их штибируемео влияние на транспорт натрия в нефроне. Следует также думать, что ангиотензин И, образующийся в почках при активации РАС. препятствует сосудорасширяющему действию сердечных гликозидов во внутренней зоне коркового слоя.

ЫйЮЛН

I. Строфантин и дигоксин вызывают у крыс диуретическую реакцию с увеличением пыделшшя натрия с мочой, которая сопровождается повышением уровня кровоснабжения наружной и внутренней зон коры и мозгового слоя почек.

-232. Контрикал устраняет jKHiï.-iift' кровотока во внутренней

зоне коры и наружной зоне мозгового слоя почек крыс при

действии строфантина и дагоксина и значительно усиливает их

диуретический и натрийуретический эффекты.

3. Индомвтацин препятствует гемодинамическому сдвигу, возникающему во внутренней зоне коры и наружной зоне мозгового слоя почек крыс под влиянием строфантина и дагоксина, но не изменяет характер их диуретического и натрнйуретического действия.

4. Верапамил ослабляет прирост кровотока во внутренней зоне коры и наружном мозговом слое почек крыс -при действии строфантина и дагоксина, но не препятствует увеличению диуреза и натрийуреза под влиянием этих препаратов.

5. Каотоприл не влияет на прирост кровотока в наружном мозговом слое почек крыс, но вызывает более выраженную сосудорасширяющую реакцию во внутренней зоне коры и значительно усиливает диуретический и натркйуретический эффекты строфантина и дагоксина.

По теме диссертации опубликованы следующие работы

I.Кузьмин О.Б..Тарасов C.B. Влияние индометацина,ПГЕ2 и кэптонрилз на иосудорасшаря.издй 'эффект строфантина в различных зонах почки крысы //Хроническая сердечная недостаточность.Тез. докл.обл.науч. конф.-Оренбург.-J988.-C.2I.

2.Кузьмин О.Б.,Тарасов C.B. Роль киняяов.простаглавдинов и системы ренин" ангиотензии в формировании сосудистого и кана-льцевого эффектов сердечных гликозидов в почке // VIII Всес. конф. по физиологии почек и водно-солевого обмена.Тез.докл.-Харьков.-1989.-С.98-99.

3.Тарасов C.B. Взаимодействие сердечних гликозидов с кал-ликреин-кимшовой, простагландашвой и ротш-ангиотеизинной системами почел //Роль внутренних и внешних факторов в происхождении болезней человека.Тез.докл.-Оренбург.-1989.-С.34.

4.Тарасов C.B. Влияние сердечных гликозидов на кровоток в различных зонах почки крысы //Теоретические и практические вопросы нефрологии. Те з. докл .мекрегион. конф. -Барнаул. -1989. -С. 68-70.

Б.Кузьмин О.Б..Тарасов C.B. Взаимодействие сердечных гликозидов с блокаторами Са2+-каналов в почке крысы // Фармакология почек,Тез.докл.III Всеросийской научн. конф;-Барнаул.-1990. -С.58-60.

6.Кузьмин О.Б..Тарасов C.B. Влияние ингибиторов биосинтеза кининов, просгагландинов и аягиотензина II «а сосудистый и ка-нальцевый эф^кта строфантина в почке крысы //Фармакол. и токси-КОЛ.-1990.-Т.53,* 6.-С.24-26.

7.Кузьмин О.Б..Тарасов C.B. Взаимодействие блокатора Са2+-каналов верапамила с сердечными гликозидами в почке крысы // Экспер. и клин, фармакол^.-1992.-Т. 55,*'2.-С.30-32.

Рационализаторские предложения

1.Тарасов С.В.,Кузьмин О.Б. Устройство для введения электродов при исследовании кровотока в почке у экспериментальных животных ( № 1058 10.11.86 г. Оренбургский мед. институт).

2.Тарасов C.B. .Косарев А.Н. Устройств':) для ингаляции водорода в условиях эксперимента ( £ 1081 от 10.02.87 г. Оренбургский мед. институт).