Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Сравнительное исследование эндотелиопротективных и кардиопротективных эффектов мельдония и триметазидина при моделировании дефицита оксида азота в эксперименте

На правах рукописи

Артюшкова Екатерина Вячеславовна

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЭНДОТЕЛИОПРОТЕКТИВНЫХ И КАРДИОПРОТЕКТИВНЫХ ЭФФЕКТОВ МЕЛЬДОНИЯ И ТРИМЕТАЗИДИНА ПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ ДЕФИЦИТА ОКСИДА АЗОТА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

4841844

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Покровский Михаил Владимирович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Филиппенко Николай Григорьевич доктор медицинских наук, профессор Утешев Даниил Борисович

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов» (РУДН).

Защита состоится «/г » ¿Ъбг/;'£¿¿¿9 2011 г. в часов

на заседании диссертационного совегаД 208.039.03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КГМУ Минздравсоцразвития России.

Автореферат разослан « а » ¡¿.¿¿¿^у-^Л^- 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Пашин Е.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Результаты экспериментальных и клинических исследований последних лет подтвердили концепцию о важной причинно-следственной взаимосвязи между эндотелиальной дисфункцией и прогрессированием и/или развитием артериальной гипертонии, атеросклероза, хронической сердечной недостаточности, сахарного диабета, метаболического синдрома, хронической почечной недостаточности и их осложнений (Кузьминова Н.В., 2008; Коваленко В.Н., Гулая Н.М., Семикопная Т.В., 2002; Невзорова В.А., 2008; Ющук E.H., Васюк Ю.А., Хадзегова А.Б. и др., 2005).

Коррекция эндотелиальной дисфункции при сердечно-сосудистой патологии сегодня является одним из наиболее перспективных направлений, определяющих вероятность развития сосудистых осложнений и способствующих улучшению прогноза в целом (Шишкин А.Н., Лындина М.Л., 2008; Шишкин А.Н., 2008; Небиеридзе Д.В., 2005; Higashi Y., Noma К., Yoshizumi М. et al., 2009; Vanhoutte P.M., 2009).

Эндотелиальная дисфункция - достаточно многогранный процесс, основными проявлениями которого являются снижение синтеза вазодилатирующих субстанций, увеличение продукции и/или повышение чувствительности эндотелиальных клеток артериального русла к действию вазоконстрикторных субстанций, а также развитие резистентности к эндотелийзависимым вазодилататорам, в первую очередь к оксиду азота (Титов В.Н., 2008; Хлебодаров Ф.Е., Михин В.П., Забелина И.В., 2009; Небиеридзе Д.В., Шилова Е.В., Толпыгина С.Н., 2004).

В настоящее время опубликованы работы, свидетельствующие об эффективности цитопротекторов при лечении артериальной гипертонии. Интерес к такого рода исследованиям и перспективность применения цитопротекторов у таких больных обусловлены многочисленностью органов-мишеней при артериальной гипертонии (миокард, эндотелий сосудистого русла), ведущую роль в поражении которых играет нарушение энергетического внутриклеточного обмена и активация свободнорадикальных процессов, приводящие к развитию эндотелиальной дисфункции, ремоделированию левого желудочка с формированием систоло-диастолической дисфункции сердца и развитию сердечной недостаточности (Михин В.П., Дюмина Н.В., Колтунова Т.Ю. и др., 2008; Приходько В.Ю., 2009; Хлебодаров Ф.Е., Михин В.П., Горлова A.B., 2009). Учитывая, что цитопротекторы способны позитивно воздействовать на развитие указанных ключевых патологических механизмов, применение цитопротекторов при сердечно-сосудистых заболеваниях действительно представляется актуальным.

В этой связи для коррекции дисфункции сосудистого эндотелия и торможения процессов свободнорадикального окисления цитопротекторы метаболического действия могут служить препаратами выбора, так как, наряду с активацией митохондриапьного аэробного окисления глюкозы, они способны уменьшать негативное воздействие оксидативного стресса на эндотелий сосудистой стенки и индуцировать образование оксида азота (Михин В.П., Хлебодаров Ф.Е., 2010; Sjakste N. et al., 2004; BeJardinelli R. et ai., 2007).

Таким образом, результаты оценки эффективности использования цитопротекторов метаболического действия для фармакологической коррекции эндотелиальной дисфункции при моделировании дефицита N0 позволят раскрыть перспективу целенаправленного и патогенетически осмысленного изучения возможности их применения в качестве эндотелиотропных аддитивов к существующим методам лечения сердечно-сосудистых заболеваний.

Цель исследования: провести комплексное сравнительное изучение эндотелио- и кардиопротективного действия мельдония и триметазидина при Ь-ЫАМЕ-индуцированном дефиците оксида азота в эксперименте.

Задачи исследования.

1. Провести количественную оценку развития эндотелиальной дисфункции при Ь-ЫАМЕ-индуцированной модели дефицита оксида азота в эксперименте с использованием функциональных проб, биохимических маркеров и результатов морфологических исследований.

2. Изучить эндотелио- и кардиопротективную активность мельдония при моделировании дефицита оксида азота в эксперименте с использованием функциональных проб, биохимических маркеров и результатов морфологических исследований.

3. Изучить эндотелио- и кардиопротективную активность триметазидина при моделировании дефицита оксида азота в эксперименте с использованием функциональных проб, биохимических маркеров и результатов морфологических исследований.

4. Изучить эндотелио- и кардиопротективную активность комбинированного применения мельдония с донатором оксида азота Ь-аргинином при моделировании дефицита оксида азота в эксперименте с использованием функциональных проб, биохимических маркеров и результатов морфологических исследований.

5. Изучить эндотелио- и кардиопротективную активность комбинированного применения триметазидина с донатором оксида азота Ь-аргинином при моделировании дефицита оксида азота в эксперименте с использованием функциональных проб, биохимических маркеров и результатов морфологических исследований.

6. Провести интегральный векторный анализ для комплексной оценки функциональных характеристик сосудистой реактивности нитроксидергической системы, показателей сократимости и морфометрии миокарда с последующим расчетом вероятностного процента эндотелиопротекции на модели Ь-ИАМЕ-индуцированного дефицита N0.

Научная новизна. В работе решена актуальная задача фармакологии по доклинической оценке эндотелиотропной активности цитопротекторов метаболического действия с использованием коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД), проведения функциональных проб, определения биохимических маркеров и результатов морфологических исследований.

В качестве потенциального эндотелиопротектора экспериментально обосновано использование цитопротектора метаболического действия мельдония, который в дозе 80 мг/кг способствует преобладанию эндотелийзависимого расслабления сосудов, снижению КЭД до значения

1,3±0,1 усл. ед. по сравнению с группой животных, не получавших лечения, где данный показатель был на уровне 4,9±0,6 усл. ед, а также полному предупреждению снижения концентрации конечных стабильных метаболитов оксида азота (NOx). Морфологические исследования обнаружили предотвращение развития мембранозной гломерулопатии, гипертрофии кардиомиоцитов и их некроз, а также деструктивных изменений эндотелия сосудов и признаков гипертрофии их стенок в почках и миокарде.

В ходе проведенного исследования на модели L-NAME-индуцированного дефицита NO выявлена эндотелиопротективная активность цитопротектора метаболического действия - триметазидина, который в дозе б мг/кг снижал коэффициент эндотелиальной дисфункции до значений 4,2±0,6 усл. ед., но при этом не увеличивал NO-продуцирующую функцию эндотелия. Морфологические исследования выявили благоприятное влияние на капилляры клубочков почек, а также отсутствие некротических изменений в миокарде.

Впервые установлено выраженное эндотелиопротективное действие комбинированного применения мельдония 80 мг/кг и триметазидина б мг/кг с природным донатором оксида азота - L-аргинином 200 мг/кг. Комбинация мельдония и L-аргинина приводила к уменьшению КЭД до уровня интактных животных, не менее важным результатом явилось снижение данного показателя при использовании комбинации триметазидина с L-аргинином по сравнению с монотерапией триметазидином. Биохимические исследования выявили предотвращение снижения концентрации N Ох в обеих группах комбинаций цитопротекторов с L-аргинином. Подтверждением функционально-биохимических показателей, отражающих развитие L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции, явились результаты морфологического анализа: предотвращение развития мембранозной гломерулопатии, гипертрофии кардиомиоцитов и их некроза, а также деструктивных изменений эндотелия сосудов и признаков гипертрофии их стенок в почках и миокарде.

Практическая значимость. В работе обоснована эффективность фармакологической коррекции эндотелиальной дисфункции цитопротекторами метаболического действия при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота в эксперименте. Показано, что их использование позволяет нормализовать изменение соотношения сосудистых реакций на ацетилхолин (эндотелийзависимая вазодилатация) и нитропруссид (эндотелийнезависимая вазодилатация), что выражалось в преобладании эндотелийзависимого расслабления сосудов и снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции.

Одновременно результаты нагрузочных проб, биохимических и морфологических исследований свидетельствовали о положительной динамике морфофункциональных показателей сердечно-сосудистой системы (снижение адренореактивности, предотвращение исчерпания миокардиапьного резерва, нормализация структуры гломерулярных капилляров, отсутствие деструктивных изменений эндотелия сосудов и признаков гипертрофии их стенок, отсутствие гипертрофических изменений кардиомиоцитов) и о восстановлении активности NO-продуцирующей функции эндотелия (повышение концентрации NOx).

Полученные данные позволяют рекомендовать целенаправленные доклинические и клинические испытания исследуемых препаратов и их комбинаций с Ь-аргинином в качестве эндотелиотропных аддитивов при лечении патологических состояний, связанных с развитием эндотелиальной дисфункции.

Внедрение результатов научных исследований. Материалы диссертационного исследования, касающиеся эндотелиопротективной активности препарата мельдоний производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства» (ЛСР-000797/09), включены в состав документов, поданных на регистрацию в МЗ РФ.

Материалы диссертационного исследования, касающиеся эндотелиопротективной активности биологически активной добавки Ь-аргинин (свидетельство о государственной регистрации № 77.99.23.3.У.2795.3.05 от 18.03.05), включены в состав документов, поданных на регистрацию в ГУ НИИ питания РАМН. Результаты работы используются в работе кардиологического отделения МУЗ «Городская больница скорой медицинской помощи»; кардиологического отделения МУЗ «Городская больница № 1» г. Курска и в лекционных курсах кафедр фармакологии, клинической фармакологии ГОУ ВПО КГМУ Минздравсоцразвития России, кафедры фармакологии, клинической фармакологии и фармации ГОУ ВПО ОГУ, кафедры фармакологии и фармацевтических дисциплин ИПМО ГОУ ВПО БелГУ.

Положения, выносимые на защиту.

1. Мельдоний проявляет более выраженное эндотелиопротективное и кардиопротективное действие по сравнению с триметазидином на модели Ь-МАМЕ-индуцированного дефицита N0.

2. Комбинированное применение мельдония с Ь-аргинином и триметазидина с Ь-аргинином оказывает сопоставимое эндотелиопротективное и кардиопротективное действие на модели Ь-К'АМЕ-индуцированного дефицита N0.

3. Интегральный анализ совокупности гемодинамических, биохимических и морфологических показателей представляет эффективность фармакологического действия мельдония и триметазидина, а также их комбинаций с Ь-аргинином на фоне моделирования Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0 в следующей последовательности: мельдоний + Ь-аргинин > мельдоний > Ь-аргинин > триметазидин + Ь-аргинин > триметазидин.

Связь с планом НИР. Диссертация выполнена в соответствии с планом НИР ГОУ ВПО КГМУ Минздравсоцразвития России. Номер государственной регистрации темы - 01200961097.

Апробация работы. Материалы работы доложены на итоговых научных сессиях и конференциях молодых ученых КГМУ в 2007, 2008, 2009, 2010 гг., 75-й Всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежная наука и современность», Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Высокотехнологичные методы диагностики и лечения заболеваний сердца, крови и эндокринных органов», XVII Национальном конгрессе «Человек и лекарство», V Национальном конгрессе терапевтов.

Апробация диссертации проведена на межкафедральной научной конференции кафедр фармакологии; клинической фармакологии; внутренних болезней № 2; инфекционных болезней и эпидемиологии; биоорганической химии, фармакогнозии и ботаники; анатомии человека; общей химии; фармацевтической, токсикологической и аналитической химии; управления и экономики фармации; фармации ФПО; травматологии, ортопедии и военно-полевой хирургии; мобилизационной подготовки здравоохранения и медицины катастроф; НИИ экологической медицины КГМУ (Курск, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 15 печатных работ, 5 из них - в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов экспериментальных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка используемой литературы, включающего 235 источников, из них 97 отечественных и 138 зарубежных авторов. Диссертация изложена на 197 страницах машинописи, содержит таблиц - 22, рисунков - 93, формул - 5.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Опыты проводили на белых крысах-самцах линии Wistar массой 180220 г. N-HiiTpo-L-apniHHH метиловый эфир (L-NAME) вводили ежедневно один раз в сутки внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг. Через 7 дней от начала эксперимента под наркозом (хлорал гидрат 300 мг/кг) вводили катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей; болюсное введение фармакологических агентов осуществляли в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряли непрерывно посредством датчика и компьютерной программы "Biopac Systems, Inc.". Эндотелийзависимая (ЭЗР) и эндотелийнезависимая (ЭНЗР) сосудистые реакции оценивались посредством проведения функциональных проб с внутривенным введением ацетилхолина (АХ) -40 мкг/кг (Laursen J.B., 1997) и нитропруссида натрия (НП) - 30 мкг/кг (Гала-ганМ.Е., 1991).

Исследование сократимости миокарда после моделирования патологии проводили у наркотизированных крыс, находящихся на управляемом дыхании. Полость левого желудочка зондировали иглой через верхушку сердца и посредством датчика RX104A "Biopac Systems, Inc." и компьютерной программы "Biopac Systems, Inc.", США, регистрировали показатели кардиогемодинамики (левожелудочковое давление (ЛЖД), максимальную скорость сокращения (+dp/dtmax), максимальную скорость расслабления (-dp/dtmax), частоту сердечных сокращений (ЧСС) и интенсивность функционирования структур (ИФС) (произведение частоты сердечных сокращений и давления, развиваемого левым желудочком (мм рт. ст. х уд. мин) (Пашин Е.Н., 1993).

Для оценки функциональных возможностей миокарда у животных проводили нагрузочные пробы в представленной последовательности:

1. Проба на адренореактивность (внутривенное одномоментное введение раствора адреналина гидрохлорида Г1(Г5моль/л, из расчёта 0,1 мл на 100 г) (Гладченко М.П., Покровский М.П., Артюшкова Е.Б. и др., 1999; Гурбанов К.К., Ковалев Г.В., Паперно A.A., 1991).

2. Нагрузка сопротивлением (пережатие восходящей аорты на 30 сек (Гладченко М.П., Покровский М.П., Артюшкова Е.Б. и др., 1999).

3. 3-минутная гипоксия [61, 64, 65] (Пашин E.H., 1993; Петрищев H.H., Власов Т.Д., 2000; Пичугин В.В., 1979).

Биохимические маркеры эндотелиальной дисфункции. Нами использована модификация метода определения стабильных метаболитов NO, позволяющая после депротеинизации сыворотки крови проводить одноэтапное количественное определение суммарных нитратов и нитритов (Метельс-кая В.А., 2004). Уровень метаболитов оксида азота (то есть суммарную концентрацию нитратов и нитритов, NOx) определяли колориметрическим методом по развитию окраски в реакции диазотирования нитритом сульфаниламида, входящим в состав реактива Грисса.

Уровень экспрессии эндотелиальной синтазы оксида азота (eNOS) определяли в клеточном лизате по методу R.J. Hendrickson (Метельская В.А., Туманова Н.Г., Литинская O.A. и др., 2004). Уровень экспрессии eNOS в аорте крыс измеряли с помощью поликлональных мышиных антител против eNOS (BD Transduction Labs) с последующим проявлением методом усиленной хемилюминесценции ECL. В качестве контроля использовали стандартно приготовленные образцы из 1 млн. культивируемых эндотелиальных клеток бычьей аорты (ВАЕС), интенсивность полос которых принимали за 100%.

Для морфологического подтверждения развития моделируемых патологических процессов кусочки органов фиксировали в 10% нейтральном формалине и заливали в парафин по общепринятым методикам (Меркулов Г.А., 1969). Парафиновые срезы толщиной 8-10 мкм окрашивали гематоксилином и эозином. В почках обращали внимание на состояние капилляров клубочков, толщину стенок артерий и артериол и их эндотелия. В сердце изучали общее состояние эндокарда и перикарда, кардиомиоцитов и стромы, оценивали состояние сосудов миокарда и их эндотелия. Кроме этого, в миокарде левого желудочка с помощью окуляр-микрометра измеряли толщину кардиомиоцитов.

Обоснование доз исследуемых препаратов. При моделировании L-NAME-индуцированного дефицита NO исследуемые вещества вводились в соответствующих дозах один раз в сутки в течение 7 дней через 30 минут после введения L-NAME. Принятая схема соответствует основной массе экспериментальных исследований, выполненных на крысах на данной модели патологии (Lopez R. et а!., 2004; Kataoka С. et al., 2002; Pechänovä О. et al„ 2004).

При выборе доз цитопротекторов метаболического действия мельдония и триметазидина исходили из максимальной терапевтической дозы препаратов с последующим межвидовым переносом доз с использованием коэффициента

пересчета доз для животных, в частности крыс (РгепеюЬ й а1., 1966; Уланова И.П. и др, 1968).

Максимальная суточная доза мельдония (Кардионат®, производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства», Россия) для человека массой 70 кг равна 1000 мг, в результате переноса доз с человека на крысу получили дозу 80 мг/кг, которую применяли при внутрижелудочном введении экспериментальным животным для оценки эндотелио- и кардиопротективной активности препарата.

При изучении эндотелио- и кардиопротективной активности триметазидина (Предуктал® МВ, производства «Фармацевтическое предприятие АНФАРМ А.О.», Польша), животные на фоне Ь-ЫАМЕ-индуцировэнного дефицита оксида азота внутрижелудочно получали препарат в дозе 6 мг/кг. Доза триметазидина рассчитывалась исходя из максимальной суточной дозы препарата для человека массой 70 кг, которая равна 70 мг.

Согласно данным литературы, кардиотропные эффекты донатора оксида азота Ь-аргинина в экспериментах на крысах обнаруживаются в диапазоне доз от 10 до 600 мг/кг (Созыкин А.В. и др., 2000; Ока 11.К. е1 а1., 2005; РаИоэЫ А. й а!., 2004). Эндотелиопротективная активность Ь-аргинина производства "А^поток) Со. 1МС" (Япония) исследовалась нами в дозе 200 мг/кг внугрибрюшинно в течение 7 дней через 30 минут после введения Ь-ЫАМЕ, что соответствует основной массе исследований на крысах (Эеп§ Ь.У. е1 а1., 1993).

Комбинированное использование метаболических цитопротекторов мельдония 80 мг/кг и триметазидина 6 мг/кг с Ь-аргинином 200 мг/кг проводилось по вышеописанному протоколу один раз в сутки в течение 7 дней на фоне введения Ь-ЫАМЕ.

Статистическая обработка результатов исследования. Достоверность наблюдавшихся при действии исследованных препаратов изменений параметров, как абсолютных, так и в процентах от исходного уровня, определяли путем расчета средней арифметической (М), ошибки средней арифметической (±т) и достоверности различий сравниваемых параметров между группами с использованием Мез! для групп с разными дисперсиями, достоверными считались различия сравниваемых параметров при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Исследование эндотелиоиротективных и кардиопротективных эффектов мельдония, триметазидина и Ь-аргинина при моделировании Ь-хХАМЕ-индуцировапного дефицита оксида азота.

Динамика функциональных, биохимических и морфологических показателей при моделировании Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0.

Длительное, в течение 7 суток, однократное внутрибрюшинное введение Ь^АМЕ в дозе 25 мг/кг привело к стойкому повышению АД (рис. 1 Ад).

Проведение функциональных проб с оценкой реакции на эндотелийзависимое и эндотелийнезависимое расслабление показало существенные отличия в группе с Ь-ИАМЕ-индуцированной патологией в сравнении с интактными животными. Реакция на введение ацетилхолина характеризуется резким падением АД и брадикардией (рис. 2). Треугольник над

кривой восстановления артериального давления принимался нами как площадь эндотелиальной реакции. При этом очевидно, что площадь эндотелийзависимой реакции при моделировании патологии в несколько раз меньше, чем у интактных животных.

Аналогично оценивали эндотелийнезависимую реакцию на нитропруссид. Обращает на себя внимание отсутствие принципиальной разницы в площадях эндотелийнезависимых реакций у интактной и контрольной групп, несмотря на более высокие цифры АД (рис. 3).

□ 1 - Интактные И 2 - Ь-ЫАМЕ

1

Рис. 1. Функциональные, биохимические и морфологические показатели при моделировании Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита оксида азота. Примечание. Здесь и везде далее: АД - артериальное давление, КЭД -коэффициент эндотелиальной дисфункции, АДр - адренореактивность, НС -нагрузка сопротивлением, еЫОБ - экспрессия ЫО-синтазы, ЫОх -концентрация конечных стабильных метаболитов оксида азота, ДКМЦ -диаметр кардиомиоцитов, ТСС - толщина сосудистой стенки.

х - при р<0,05 в сравнении с группой интактных животных

ДКМЦ и ТСС

30,0

"Л

т*

ИШ1И1Ш

а) интактные животные

б) животные с патологией

Рис. 2. Кривые САД, ДАД, ЧСС при проведении функциональной пробы на эндотелийзависимую вазодилатацию (внутривенное введение ацетилхолина 40 мкг/кг).

тнгвплтгэттзгтппш

а) интактные животные

б) животные с патологией

Рис. 3. Кривые САД, ДАД, ЧСС при проведении функциональной пробы на эндотелийзависимую вазодилатацию (внутривенное введение нитропруссида натрия 30 мкг\кг).

Математическое выражение описанного явления представлено нами в виде коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД), являющегося отношением площади среднего артериального давления на нитропруссид к площади среднего артериального давления на ацетилхолин.

В наших экспериментах КЭД в группе интактных животных составил 1,1±0,1 усл. ед., при Ь-МАМЕ-индуцированном дефиците оксида азота - почти в 5 раз больше, его значение составило 4,9±0,6 усл. ед. (рис. 1Кэд)-

Развитие патологии привело к увеличению абсолютных значений ЛЖД при проведении пробы на адренореактивность и снижению показателей сократимости миокарда в пробе с нагрузкой сопротивлением (рис. 1АДр, Нс)- У интактных животных ЛЖД к 25-й секунде снижалось до 83,6±4,6%, а у животных с Ь-МАМЕ-индуцированной патологией до значения - 66,0±2,5%.

Характерная динамика биохимических маркеров Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита оксида азота представлена на рисунке 1еж«,мох- Так, концентрация нитрит-ионов (К'Ох) у животных, получивших Ь-ЫАМЕ, составила 61,2±3,6 мкМоль, тогда как у интактных животных этот показатель был на уровне 114,1 ±4,1 мкМоль. Экспрессия эндотелиальной МО-синтазы

(еЫОБ) в группе интактных животных и животных с патологией составила соответственно 72,9±3,8% и 21,4±4,7%.

Подтверждением функционально-биохимических показателей,

отражающих развитие Ь-ЫАМЕ-индуцированной эндотелиальной дисфункции, явились результаты морфологических исследований (рис. 4-7). На фоне введения Ь-МАМЕ происходило утолщение базальных мембран капилляров клубочков, что придает им характерный вид «проволочных петель». При этом клубочки нередко приобретают фрагментированный, «лапчатый» вид, что свидетельствует о развившейся мембранозной гломерулопатии (рис. 5).

Другим признаком повышенного артериального давления является гипертрофия стенок внутриорганных артерий почек и сердца, толщина которых достигала 27,5±2,3 мкм (по сравнению с толщиной стенок сосудов интактных животных 10,0±0,8 мкм). Нередко при этом эндотелий гипертрофированных сосудов претерпевал морфологические изменения, свидетельствующие о развитии эндотелиальной дисфункции: отек эндотелия и его пикноз (рис. б, рис. 7). В ходе выполнения эксперимента в сердцах животных контрольной группы были обнаружены гипертрофия кардиомиоцитов левого желудочка и увеличение размеров ядер по сравнению с интактными животными (рис. 1дкмц)- '

1ЙЩЩЩ тяяГм W3 ч

Рис. 4. Почка интактной крысы. Клубочек с полнокровными капиллярами, полнокровный сосуд среди извитых канальцев. Окраска гематоксилином и эозином (Г+Э). х 280. Рис. 5. Крыса с экспериментальной артериальной гипертензией: клубочки имеют «лапчатые» очертания: базальные мембраны капилляров утолщены («проволочные петли»). Окраска Г+Э. х 280.

Ущщ^Т Щ Щ Ktli '

Рис. 6. Миокард интактной крысы. Среди кардиомиоцитов мелкая полнокровная артерия с неповрежденным эндотелием. Гипертрофия стенок отсутствует. Окраска Г+Э. х 280. Рис. 7. Крыса с экспериментальной артериальной гипертензией: стенка интрамуральной артерии миокарда гипертрофирована, эндотелий местами отечный. Окраска Г+Э. х 280.

Также нами выявлены субэндокардиальные некротические изменения кардиомиоцитов (у четырех крыс из 10) и очаги формирующегося склероза на месте погибших кардиомиоцитов.

Таким образом, введение Ь-ЫАМЕ 25 мг/кг внутрибрюшинно вызывает развитие эндотелиальной дисфункции, характеризующейся резким увеличением КЭД, АД, повышением адренореактивности, исчерпанием миокардиального резерва, характерными биохимическими сдвигами и морфологической картиной.

Динамит функциональных, биохимических и морфологических показателей при монотерапии мельдонием, триметазидином и Ь-аргинином на фоне моделирования Ь-А'АМЕ-индуцированного дефицита NО.

Проведенные нами исследования показали, что среди цитопротекторов метаболического действия мельдоний 80 мг/кг по сравнению с триметазидином 6 мг/кг обладает наиболее выраженным эндотелиопротективным эффектом, сопоставимым с таковым у Ь-аргинина 200 мг/кг и выражающимся в преобладании эндотелийзависимого расслабления сосудов и снижением КЭД. Так, КЭД в группах животных, получавших мельдоний, составил 1,3±0,1 усл. ед., триметазидин - 4,2±0,6 усл. ед, Ь-аргинин -2,5±0,1 усл. ед. (рис. 8Кэд)-

Обнаружено, что мельдоний 80 мг/кг и триметазидин 6 мг/кг не предотвращали развития выраженной гипертензии и значения САД и ДАД были достоверно выше соответствующих значений интактных животных во всех сериях экспериментов. Максимальное снижение САД и ДАД наблюдалось лишь в группе с введением Ь-аргинина 200 мг/кг, однако целевой уровень АД при этом достигнут не был (рис. 8ад).

Для оценки функциональных возможностей миокарда у животных с Ь-ЫАМЕ-индуцированным дефицитом оксида азота проводились нагрузочные пробы. Проба на адренореактивность на фоне терапии мельдонием 80 мг/кг и Ь-аргинином 200 мг/кг показала снижение максимальных цифр ЛЖД до значений 221,4±6,7 мм рт.ст. и 201,6±11,2 мм рт.ст. соответственно. В то время как триметазидин 6 мг/кг не предотвращал повышения адренореактивности, вызванного Ь^АМЕ-индуцированной патологией (рис. 8Адр).

Дальнейшее сравнительное исследование кардиопротективных эффектов цитопротекторов метаболического действия при проведении пробы на нагрузку сопротивлением выявило способность всех препаратов предотвращать исчерпание миокардиального резерва. Сократимость левого желудочка на 25-й секунде проведения пробы у интактных животных составила 83,6±4,6% от величины 5-й секунды, принятой за 100%, у животных с Ь-ЫАМЕ патологией -б6,0±2,5%, в группах, получавших лечение мельдонием 80 мг/кг, триметазидином 6 мг/кг и Ь-аргинином 200 мг/кг, данный показатель был на уровне 79,6±3,4%, 94,0±4,2% и 84,3±3,4% соответственно (рис. 8НС)-

МО-продуцирующая функция эндотелия исследована нами на основании определения в сыворотке крови концентрации конечных стабильных метаболитов оксида азота (ЫОх). Концентрация Т\'Ох на фоне лечения мельдонием 80 мг/кг и Ь-аргинином 200 мг/кг, в отличие от триметазидина 6 мг/кг, увеличивалась и достоверно не отличалась от уровня конечных стабильных метаболитов оксида азота интактных животных (рис. 8К0*).

Ч> I! нгнктные -в- ЬЛАМЕ А [\лм К - мельдон X Ь-.\АМ Е + триметащдии —в—Ь-МАМЕ+ Ь-аргиннн

84,3%" 83,6%

79,6%'

ДКМЦи гсс

адкмц в тсс

О I - Интзктные

НЗ - !..-МАГ'ЛЕ-1 мельдоний 80 мг/кг 83 5 - Ь-ЫАМЕ+ Ь-аргинин 2.00 иг/кг

И 2 - !,-ХЛМ!-:

К 4 - Ь-ЫАМЕ + триметазидин 6 мг/кг

Рис. 8. Влияние мельдония 80 мг/кг, триметазидина 6 мг/кг и Ь-аргинина 200 мг/кг на функциональные, биохимические и морфологические показатели при моделировании Ь-КАМЕ-индуцированного дефицита N0. Примечание. х - при р<0,05 в сравнении с группой интактных животных, у- при р<0,05 в сравнении с группой животных, получавших Ь-ЫАМЕ.

Данные морфологических исследований показали, что введение мельдония 80 мг/кг, триметазидина б мг/кг и Ь-аргинина 200 мг/кг положительно повлияло на морфологические изменения почек и сердца крыс с экспериментальной артериальной гипертензией (рис. 8дкмц)' Так, после введения животным мельдония отмечается нормализация структуры гломерулярных капилляров, предотвращение развития гипертрофических изменений миокарда, отсутствуют деструктивные изменения эндотелия сосудов и признаков гипертрофии их стенок, толщина которых снижалась до 11,0±1,0 мкм.

На фоне введения триметазидина в почках почти полностью исчезли признаки мембранозной гломерулопатии и капилляры клубочков выглядели в большинстве случаев так же, как и у интактных крыс. Однако стенки мелких артерий, как правило, оказывались гипертрофированными (толщина стенок

21,5±1,9 мкм), а их эндотелий нередко был пикнотизирован и частично слущивался. Диаметр кардиомиоцитов левого желудочка был близок к таковому у крыс с артериальной гипертензией, что свидетельствует о сохранении гипертрофических изменений миокарда. В то же время важно отметить, что некротические изменения миокарда были выявлены лишь у одной крысы из 10, при этом они выражались в наличии единичных и очень небольших очажков репарируемого некроза.

При морфологическом исследовании почек и сердца обнаружен выраженный протекгивный эффект Ь-аргинина. Отмечается нормализация структуры гломерулярных капилляров в отсутствие деструктивных изменений эндотелия внутриорганных артерий почек и сердца, а также признаков гипертрофии их стенок, толщина которых составляла 11,0±0,9 мкм по сравнению с нелеченой группой животных. Препарат также препятствовал развитию гипертрофических изменений кардиомиоцитов.

Таким образом, анализ совокупности функциональных, биохимических, морфологических показателей свидетельствует о разной степени выраженности эндотелиопротективных и кардиопротективных эффектов мельдония 80 мг/кг и триметазидина 6 мг/кг при Ь^АМЕ-индуцированной модели дефицита оксида азота в эксперименте.

3. Исследование эндотелиопротективных и кардиопротективных эффектов комбинированного применения мельдония и триметазидина с Ь-аргинином при моделировании Ь^АМЕ-индуцированного дефицита оксида азота.

Комбинированное применение мельдония 80 мг/кг и триметазидина 6 мг/кг с Ь-аргинином 200 мг/кг продемонстрировало наличие выраженного эндотелиопротективного эффекта для двух исследованных композиций, что подтверждалось достоверным снижением КЭД до значений 1,4±0,1 усл. ед. и 2,5±0,2 усл. ед. соответственно, по сравнению с группой нелеченых животных 4,9±0,6 усл. ед. (рис. 9КЭД).

На фоне введения Ь-МАМЕ комбинированное применение мельдония 80 мг/кг и триметазидина 6 мг/кг с Ь-аргинином 200 мг/кг, в отличие от монотерапии, приводило к снижению АД, при этом наибольший гипотензивный эффект достигался при введении комбинации мельдония с Ь-аргинином, однако целевой уровень АД при этом достигнут не был (рис. 9Лд).

Проба на адренореактивность не выявила снижения значений максимального левожелудочкового давления у животных, получавших комбинированное лечение мельдонием 80 мг/кг и триметазидином б мг/кг с Ь-аргинином, несмотря на достоверное снижение данного показателя при монотерапии донатором оксида азота - Ь-аргинином (рис. 9ддр).

Нагрузка сопротивлением показала, что все исследуемые комбинации обладают кардиопротективным действием, выражающимся в способности повышать сократимость миокарда до уровня, сопоставимого с группой интактных животных: мельдоний 80 мг/кг+Ь-аргинин 200 мг/кг 75,4±3,8%, триметазидин б мг/кг+Ь-аргинин 200 мг/кг 84,2±6,4%, интактные животные 83,6±4,б%, Ь-ЫАМЕ 66,0±2,5% (рис. 9НС).

Рис, 9. Влияние комбинаций мельдония 80 мг/кг и триметазидина 6 мг/кг с Ь-аргинином 200 мг/кг на функциональные, биохимические и морфологические показатели при моделировании Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0. Примечание. * - при р<0,05 в сравнении с группой интактных животных, у- при р<0,05 в сравнении с группой животных, получавших Ь-ЫАМЕ.

Аналогичная тенденция получена при оценке МО-продуцирующей функции эндотелия. Концентрация 1\Юх при комбинированным лечении была также значительно выше, чем в группе животных, не получавших лечения. При этом суммарная концентрация нитрат- и нитрит-ионов (ТЧОх) на фоне применения комбинации мельдония 80 мг/кг с Ь-аргинином 200 мг/кг равнялась 118,5±9,1 мкМоль, триметазидина 6 мг/кг с Ь-аргинином 200 мг/кг - 110,9± 11,2 мкМоль, Ь-ЫАМЕ - 61,2±3,6 мкМоль (рис. 9Шх).

□ дкмц в тсс

П ] - Интактные ® 2 - Ь-ЫАМЕ Н 3 - Ь-ЫАМЕ+мельдоний 80 мг/кг И 4 ■ ЫММЕ+триметазидин 6 мг/кг Н 5 - Ь-ЫАМЕ+Ь-аргинин 200 мг/кг В 6 - Е-ЫАМЕ+мельдоний 80 мг/кгИ-аргинин 200 мг/кг ОР 7 - Ь-ЫАМЕ+триметазидин 6 мг/кг+Ь-аргинин 200 мг/кг_

250,0

ь

¿150,0 2 100,0 50,0 0,0

100,0% 90,0% 80,0%, 70,0%,

♦ Инткктные -Я- Ь-ХАМЕ —Л— ЫУАМЕ+мельдоний -Х- Ь-1МАМЕ+трнметазидин —О— А М Е+Ь-ярги ни н —I— АМЕ+мельдоний + Ь-яргинин -Х- Ь-№АМЕ+триметязидин+Ь-аргинин

ДКМЦ и ТСС

27,5 .................—..........................

21,5х

«г

и 5

11,0У 10,0* 13,оу

Морфологическое исследование почек и сердца на фоне введения комбинации мельдония 80 мг/кг и Ь-аргинина 200 мг/кг выявило отсутствие признаков мембранозной гломерулопатии и дегенеративных изменений эндотелия внутриорганных артерий. При морфометрии также не обнаруживались гипертрофические изменения стенок артерий, толщина их была на уровне 10,0±1,0 мкм. В сердце наблюдаюсь уменьшение диаметра кардиомиоцитов (рис. 9ДКМц)-

На фоне введения комбинации триметазидина б мг/кг и !,■-аргинина 200 мг/кг обнаружен протективный эффект, аналогичный описанному в группе с Ь-аргинином. Это выражалось в предотвращении развития мембранозной гломерулопатии, уменьшении гипертрофических изменений стенок сосудов почек и сердца до 13,0±1,2 мкм, а также уменьшении диаметра кардиомиоцитов (рис. 9дамц)-

Таким образом, анализ совокупности функциональных, биохимических, морфологических показателей свидетельствует о выраженных эндотелиопротективных и кардиопротективных эффектах комбинаций мельдония 80 мг/кг и триметазидина 6 мг/кг с Ь-аргинином 200 мг/кг при Ь^АМЕ-индуцированной модели дефицита оксида азота в эксперименте.

4. Интегральный векторный анализ гемодинамических, биохимических и морфологических показателей в комплексной оценке эндотелиопротективных и кардиопротективных эффектов мельдония и триметазидина и их комбинаций с Ь-аргинином.

Для оценки эндотелио- и кардиопротективного действия исследуемых препаратов нами был использован комплекс функциональных проб, биохимических маркеров и результатов морфологических исследований, позволяющий дать интегральную характеристику эндотелиальной и миокардиальной функции сердечно-сосудистой системы. С этой целью значения САД, ДАД, КЭД, диаметра кардиомиоцитов, ЫОх и значение исчерпания миокардиального резерва были представлены в процентном отношении от соответствующих значений группы интактных животных, принятых за 100%, с последующим расчетом площадей векторных диаграмм, которые выражались в условных единицах (усл. ед.) (рис. 10).

Сравнивая площади векторных диаграмм, мы получили выраженные различия между группой интактных животных и животных с эндотелиальной дисфункцией. Значение площади векторной диаграммы в группе с Ь-ЫАМЕ-индуцированньш дефицитом N0 оказалось увеличенным на 60% по сравнению с интактной группой, что соответствует симптомокомплексу выраженной АГ и эндотелиальной дисфункции (рис. 10).

Не менее важным результатом, полученным в ходе исследования, является сопоставимая площадь векторных диаграмм по совокупности эндотелио- и кардиопротективных эффектов комбинации мельдония с Ь-аргинином и монотерапии мельдонием, что выражалось в снижении площади векторной диаграммы соответственно на 33% и 31% и подтверждает их положительное равноценное фармакодинамическое действие на модели Ь-НАМЕ-индуцированного дефицита оксида азота (рис. 10).

Проанализировав площади векторных диаграмм, мы не получили выраженных различий между контрольной группой животных и группой, получавшей лечение триметазидином. Однако мы получили различия между группой животных с эндотелиальной дисфункцией и группой, получавшей комбинацию триметазидина и Ь-аргинина, при этом площадь векторной

диаграммы уменьшилась на 20% (рис. 10).

Дальнейший анализ векторных диаграмм привел к расчету дельты эндотелиопротекции (1) и ее вероятностного процента (2):

Аэя = Sl -NAME ^'препарата j

где (1)

ДЭп - дельта эндотелиальной дисфункции,

Sl-name- площадь фигуры при L-NAME гипертензии, Sпрепарата-- площадь фигуры при коррекции L-NAME исследуемым препаратом;

А эп

Рэп ~-х 100% , где РЭп - вероятностный пропент (2)

&L-NAME

ЛL-NAME ~~ SL-NAME ~ Sинтактчых

При проведении расчетов получили, что дельта L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота равна 3,31 (усл. ед.), данную величину принимали за 100% при последующих расчетах вероятностного процента эндотелиопротекции для каждого исследуемого препарата (рис. 11).

□ 1 - Интяктные □ 2 - L-NAME+триметязидин 6 иг/кг

П 3 - L-NAME+трнметазидин 6 иг/кг+Ь-аргннин 200 мг/кг В 4 - L-NAME+L-яргинин 200 мг/кг

И 5 - L-NAME+мельдоннй 80 мг/кг Н 6 - I.-N АМF^mе.и.лошм! 80 мг/кг+Ь-пргиннн 200 мг/кг

Рис. 11. Вероятностный процент эндотелиопротекции исследуемых препаратов при L-NAME-индуцированном дефиците NO.

Данный подход позволил упрощенно, но интегративно представить эффективность действия препаратов в соответствующих дозах при коррекции L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота и наглядно отобразить различия между исследуемыми препаратами, которые расположились в следующий ряд: мельдоний 80 мг/кг+Ь-аргинин 200 мг/кг > мельдоний 80 мг/кг > L-аргинин 200 мг/кг > триметазидин 6 мг/кг+Ь-аргинин 200 мг/кг > триметазидин 6 мг/кг.

Таким образом, в результате наших исследований впервые проведена сравнительная оценка эндотелиопротективных и кардиопротективных эффектов цитопротекторов метаболического действия мельдония и триметазидина при моделировании дефицита оксида азота в эксперименте, что раскрывает перспективу целенаправленного изучения возможностей их использования как существенного дополнения при лечении патологических состояний сердечно-сосудистой системы, связанных с развитием эндотелиальной дисфункции.

выводы

1. Эндотелиальная дисфункция, вызванная введением М-нитро-Ь-аргинин метилового эфира (Ь-КАМЕ) в дозе 25 мг/кг/сут в течение 7 суток лабораторным животным, характеризуется развитием артериальной гипертензии (169/131 мм рт. ст.), увеличением КЭД в 4,5 раза по сравнению с группой интактных животных, повышением адренореактивности, снижением сократимости миокарда до 66,0±2,5%, уменьшением в 3,4 раза концентрации конечных стабильных метаболитов оксида азота МОх и снижением в 1,9 раза экспрессии еКОБ, а также развитием мембранозной гломерулопатии, гипертрофии миокарда и стенок внутриорганных артерий почек и сердца, отеком эндотелия и его пикнозом, некрозом кардиомиоцитов в 40% случаев.

2. Мельдоний 80 мг/кг проявляет выраженное эндотелио- и кардиопротективное действие на модели Ь-ЫАМЕ-индупированлого дефицита N0, что выражается в снижении КЭД до 1,3±0,1 усл. ед., полном предупреждении снижения концентрации >Юх, предотвращении развития гиперадренореактивности, а также в повышении сократимости миокарда до 79,6±3,4% при проведении пробы на нагрузку сопротивлением. Морфологические исследования обнаружили предотвращение развития мембранозной гломерулопатии, гипертрофии кардиомиоцитов и их некроза, деструктивных изменений эндотелия сосудов и признаков гипертрофии их стенок в почках и миокарде.

3. Триметазидин 6 мг/кг проявляет менее выраженное эндотелиопротективное действие на модели Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0 по сравнению с мельдонием 80 мг/кг, что выражается в снижении КЭД до 4,2±0,6 усл. ед. и отсутствии влияния на ЫО-продуцирующую функцию эндотелия. Одновременно обнаружено значительное кардиопротективное действие препарата, проявляющееся в повышении сократимости миокарда до 94,0±4,2% при проведении пробы на нагрузку сопротивлением. Морфологические исследования обнаружили снижение утолщения базальных мембран клубочков и отсутствие некротических изменений в миокарде.

4. Комбинированное применение мельдония 80 мг/кг с Ь-аргинином 200 мг/кг оказывает выраженное эндотелио- и кардиопротективное действие на модели Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0, что выражается в снижении КЭД до 1,4±0,1 усл. ед., предотвращении снижения концентрации МОх, а также в повышении сократимости миокарда до 75,4±3,8% при проведении пробы на нагрузку сопротивлением. Морфологические исследования обнаружили предотвращение развития мембранозной гломерулопатии, гипертрофии кардиомиоцитов, деструктивных изменений эндотелия сосудов и признаков гипертрофии их стенок в почках и миокарде.

5. Комбинированное применение триметазидина 6 мг/кг с Ь-аргинином 200 мг/кг оказывает выраженное эндотелио- и кардиопротективное действие на модели Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0, что выражается в снижении КЭД до 2,5±0,2 усл. ед., предотвращении снижения концентрации МОх, а также в повышении сократимости миокарда до 84,2±6,4% при проведении пробы на нагрузку сопротивлением. Морфологические исследования обнаружили

предотвращение развития мембранозной гломерулопатип, гипертрофии кардиомиоцитов, деструктивных изменений эндотелия сосудов и признаков гипертрофии их стенок в почках и миокарде.

6. Интегральный анализ эффективности фармакологического действия мельдония и триметазидина показал, что наиболее выраженную эндотелио- и кардиопротективную активность оказывает мельдоний 80 мг/кг по сравнению с триметазидином 6 мг/кг. Комбинированное применение мельдония 80 мг/кг и триметазидина б мг/кг с L-аргинином 200 мг/кг проявляет положительное фармакодинамическое взаимодействие, что позволяет расположить исследуемые препараты в следующей последовательности: мельдоний 80 мг/кг + L-аргинин 200 мг/кг > мельдоний 80 мг/кг > L-аргинин 200 мг/кг > триметазидин б мг/кг + L-аргинин 200 мг/кг > триметазидин б мг/кг.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Исследование эндотелио- и кардиопротективных эффектов препарата «Кардионат» при моделировании L-NAME-индуцнрованного дефицита оксида азота / М.В. Корокин, Е.В. Артюшкова, М.В. Покровский н др. // Курский науч.-практ. вестн. «Человек и его здоровье». - 2007. - № 3. -С. 5-9.

2. Метаболическая и антиоксидантная терапия L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции / Е.Б. Артюшкова, М.В. Покровский, Е.В. Артюшкова и др. // Кубанский науч. мед. вестн. - 2008. - № 3-4 (102-103).-С. 73-78.

3. Исследование кардиопротективных эффектов 3-(2,2,2-триметилгидразиний) пропионата дигидрата при моделировании дефицита оксида азота с помощью специфической блокады индуцибельнои NO-синтазы / Е.В. Артюшкова, М.В. Корокин, М.В. Покровский и др. II Аллергология и иммунология. - 2008. - Т. 9,№ 1.-С. 157.

4. Исследование эндотелиопротективных эффектов 3-(2,2,2-триметилгидрази-ний) пропионата дигидрата при моделировании L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции / Е.Б. Артюшкова, М.В. Покровский, Е.В. Артюшкова и др. И Аллергология и иммунология. - 2008. - Т. 9, № 3. -С. 328-329.

5. Артюшкова, Е.В. Увеличение уровня гамма-бутиробетаина - фармакологическая мишень для коррекции эндотелиальной дисфункции / Е.В. Артюшкова // Кубанский науч. мед. вестн. - 2009. - № 4 (109). - С. 72-75.

6. Исследование эндотелиопротективных эффектов препарата «Кардионат» (мнн милдронат) на ADMA-подобной модели дефицита оксида азота при специфической блокаде NO-синтазы / Е.В. Артюшкова, М.В. Покровский, М.В. Корокин и др. // Междунар. жури, по иммунореабилитации. - 2009. -Т. 11, № 1. - С. 66-67.

7. Артюшкова, Е.В. Сравнительное исследование эндотелио- и кардиопротективных эффектов мельдония и триметазидина при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота в эксперименте / Е.В. Артюшкова // Кубанский науч. мед. вестн. - 2010. - № 1 (115). - С. 8-13.

8. Эндотелио- и кардиопротектнвные эффекты мельдония и триметазидина при L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции в эксперименте / Е.В. Артюшкова, М.В. Покровский, Е.Б. Артюшкова и др. // Курский науч.-практ. вести. «Человек и его здоровье». - 2010. - № 3. - С. 5-10.

9. Эндотелиопротективные эффекты мельдония и триметазидина при экспериментальном дефиците оксида азота / Е.В. Артюшкова, М.В. Покровский, Е.Б. Артюшкова и др. // XVII Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство»: сб. материалов конгр.; тез. докл. (г. Москва, 12-16 апр. 2010). - М., 2010. -С. 571.

10. Кардиопротектнвные эффекты мельдония и триметазидина при экспериментальном дефиците оксида азота / Е.В. Артюшкова, М.В. Покровский, Е.Б. Артюшкова и др. // XVII Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство»: сб. материалов конгр.; тез. докл. (г. Москва, 12-16 апр. 2010). -М., 2010.-С. 571.

11. Фармакологическая коррекция морфологических изменений в сердце и почках при L-NAME-индуцированном дефиците NO / B.C. Барсуков, В.Т. Дудка, Е.В. Артюшкова и др. // XVII Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство»: сб. материалов конгр.; тез. докл. (г. Москва, 12-16 апр. 2010). -М, 2010.-С. 576.

12. Артюшкова, Е.В. Применение комбинаций метаболических цитопротекторов мельдония и триметазидина с L-аргинином с целью коррекции L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции / Е.В. Артюшкова, М.В. Корокин, О.С. Гудырев // Тез. Всерос. науч.-практ. конф. с междунар. участием «Высокотехнологичные методы диагностики и лечения заболеваний сердца, крови и эндокринных органов» (г. С.-Петербург, 20-22 мая 2010).- СПб, 2010. - № 2. - С. 11.

13. Артюшкова, Е.В. Исследование NO-продуцирующей функции эндотелия на фоне введения комбинаций мельдония и триметазидина с L-аргинином при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота / Е.В. Артюшкова, М.В. Корокин, О.С, Гудырев // Тез. Всерос. науч.-практ. конф. с междунар. участием «Высокотехнологичные методы диагностики и лечения заболеваний сердца, крови и эндокринных органов» (г. С.-Петербург, 20-22 мая 2010). - СПб, 2010. - № 2. - С. 11-12.

14. Эндотелиопротективные эффекты цитопротектора метаболического действия триметазидина и его комбинации с L-аргинином при экспериментальном моделировании дефицита оксида азота / Е.В. Артюшкова, М.В. Покровский, О.С. Гудырев и др. // Материалы V Нац. конгр. терапевтов (24-26 ноября, 2010 г.). - М.: ООО «Изд. дом «Бионика», 2010.-С. 11.

15. Морфологическая оценка влияния цитопротекторов метаболического действия и их комбинаций с L-аргинином при экспериментальном моделировании эндотелиальной дисфункции / Е.В. Артюшкова, М.В. Покровский, М.В. Корокин и др. // Материалы V Нац. конгр. Терапевтов (24-26 ноября, 2010 г.). - М.: ООО «Изд. дом «Бионика», 2010. - С. 11-12.

Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г. Сдано в набор 11.03.2011 г. Подписано в печать 12.03.2011 г. Формат 30x427g. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 151"А". Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.

Результаты экспериментальных и клинических исследований последних лет подтвердили концепцию о важной причинно-следственной взаимосвязи между эндотелиальной дисфункцией и прогрессированием и/или развитием артериальной гипертонии, атеросклероза, хронической сердечной недостаточности, сахарного диабета, метаболического синдрома, хронической почечной недостаточности и их осложнений.

Коррекция эндотелиальной дисфункции при сердечно-сосудистой патологии сегодня является одним из наиболее перспективных направлений, определяющих вероятность развития сосудистых осложнений и способствующих улучшению прогноза в целом [56, 57, 91, 95, 144, 150, 230].

Эндотелиальная дисфункция - системная патология, сопряженная с нарушением микроструктуры и секреторной функции эндотелиальных клеток, приводящая к снижению эндотелийзависимой вазодилатации, гиперкоагуляции, повышенному тромбообразованию, увеличению сосудистой проницаемости и миграции липопротеидов в интиму сосудов, пролиферации гладкомышечных клеток и ремоделированию сосудов [10, 13, 25, 40, 63].

Основным механизмом, лежащим в основе эндотелиальной дисфункции, является снижение образования и биодоступности оксида азота (N0) на фоне повышения продукции мощных вазоконстрикторов [34, 47, 81]. При этом основными причинами дефицита N0 в эндотелиальных клетках могут быть: сниженное содержание предшественника оксида азота — Ь-аргинина, снижение экспрессии или активности еЖ)8, недостаток кофакторов синтеза N0 (особенно тетрагидробиоптерина), повышение уровня эндогенных ингибиторов еЖ)8 асимметричного диметиларгинина (АДМА) и монометил-Ь-аргинина (ЫММА), повышенное образование реактивных форм кислорода (в частности, супероксид-аниона), а также липопротеидов низкой плотности (особенно их окисленных форм) [9, 45, 58, 150].

Молекулярные основы дисфункции сосудистого эндотелия — сложная и не до конца изученная проблема. В этой связи система: «эндотелиальная МЭ-синтаза-Ь-аргинин-ЫО» может, безусловно, претендовать в ближайшем будущем на роль ведущего звена фармакологической коррекции эндотелиальной<дисфункции [28, 49, 88].

В настоящее время известно, что многие лекарственные препараты с различным механизмом действия обладают выраженным в той или иной степени влиянием на функцию сосудистого эндотелия. Так, нитраты восстанавливают дефицит эндогенного N0, ингибиторы АПФ помимо снижения синтеза АТ II препятствуют разрушению кининов, статины улучшают барьерную функцию эндотелиоцитов в отношении окисленных ЛПНП, антагонисты кальция тормозят активность АТ II и эндотелина в гладких мышцах сосудов, усиливая вазодилататорный эффект N0, блокаторы ангиотензиновых рецепторов блокируют АТ]-рецепторы, способствуют накоплению N0, ингибиторы эндотелин-превращающего фермента и антагонисты рецепторов эндотелина-1 тормозят активность пептида [9, 12, 43, 62,91,96, 205].

Особого внимания заслуживает «специфическое» воздействие, направленное на улучшение синтеза N0, как например, заместительная терапия Ь-аргинином - субстратом еЫОЗ, а также тетрагидробиоптерином — кофактором еМОБ, определяющим активность данного фермента [10, 45].

Кроме того, известны научные факты, подтверждающие, что используемые в настоящее время цитопротекторы метаболического действия (триметазидин, мельдоний) не только блокируют бета-окисление жирных кислот в митохондриях и на альтернативной основе стимулируют окисление глюкозы, но и оказывают влияние на индукцию биосинтеза оксида азота за счет увеличения "количества гамма-бутиробетаина, а также способности противостоять окислительному стрессу [145, 224].

Таким образом, актуальными задачами современной экспериментальной фармакологии являются разработка новой технологии доклинической оценки эндотелиотропной активности лекарственных препаратов и поиск потенциальных эндотелиопротекторов, поскольку именно эндотелию сосудов отводится ведущая роль в развитии сердечно-сосудистых заболеваний.

Однако в настоящее время не существует препаратов для специфической коррекции эндотелиальной дисфункции, поэтому большую ценность представляют данные о влиянии сердечно-сосудистых лекарственных средств различных фармакологических групп на функциональные характеристики эндотелия. Большой практический интерес может представлять комплексное лечение эндотелиальной дисфункции при артериальной гипертензии, когда антигипертензивная терапия будет сочетаться с применением препаратов, которые оптимизируют клеточный энергообмен, уменьшают негативное воздействие оксидативного стресса на эндотелий сосудистой стенки и индуцируют образование оксида азота.

В связи с вышеизложенным явилось актуальным изучение эндотелиопротективных свойств цитопротекторов метаболического действия мельдония и триметазидина на модели Ь-ИАМЕ-индуцированного дефицита оксида азота в эксперименте.

Диссертация выполнена по инициативному плану, номер государственной регистрации темы диссертации 01 2009 61 097. Работа включена в программы «Изучение патологических состояний сердечнососудистой системы. Разработка современных медицинских технологий профилактики, диагностики и лечения болезней системы кровообращения» на 2006-2010 гг. (номер государственной регистрации темы - 01.2.006-04734) и «Разработка и совершенствование методов ранней диагностики, лечения и профилактики сердечно-сосудистых заболеваний с целью увеличения продолжительности и качества жизни» на 2008-2010 гг. (номер государственной" рёгистрацйитемы - 01.2.007-10379)!

Цель исследования: провести комплексное сравнительное изучение эндотелио- и кардиопротективного действия мельдония и триметазидина при Ь-ЫАМЕ-индуцированном дефиците оксида азота в эксперименте.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи исследования:

1. Провести количественную оценку развития эндотелиальной дисфункции при Ь-ЫАМЕ-индуцированной модели дефицита оксида азота в эксперименте с использованием функциональных проб, биохимических маркеров и результатов морфологических исследований.

2. Изучить эндотелио- и кардиопротективную активность мельдония при моделировании дефицита оксида азота в эксперименте с использованием функциональных проб, биохимических маркеров и результатов морфологических исследований.

3. Изучить эндотелио- и кардиопротективную активность триметазидина при моделировании дефицита оксида азота в эксперименте с использованием функциональных проб, биохимических маркеров и результатов морфологических исследований.

4. Изучить эндотелио- и кардиопротективную активность комбинированного применения мельдония с донатором оксида азота Ь-аргинином при моделировании дефицита оксида азота в эксперименте с использованием функциональных проб, биохимических маркеров и результатов морфологических исследований.

5. Изучить эндотелио- и кардиопротективную активность комбинированного применения триметазидина с донатором оксида азота Ь-аргинином при моделировании дефицита оксида азота в эксперименте с использованием функциональных проб, биохимических маркеров и результатов морфологических исследований.

6. Провести интегральный векторный анализ для комплексной оценки функциональных характеристик сосудистой реактивности нитроксйдергической системы, показателей сократимости и морфометрии миокарда с последующим расчетом вероятностного процента эндотелиопротекции на модели Ь-МАМЕ-индуцированного дефицита N0.

Научная новизна исследования. В работе решена актуальная задача фармакологии по доклинической оценке эндотелиотропной активности цитопротекторов метаболического действия с использованием коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД), проведения функциональных проб, определения биохимических маркеров и результатов морфологических исследований./

Для оценки плеотропных эндотелиопротективных свойств мельдония и триметазидина у экспериментальных животных моделировался Ь-ЫАМЕ-индуцированный дефицит оксида азота, сопряженный с развитием эндотелиальной дисфункции (ЭД). В результате настоящего исследования продемонстрировано, что эндотелиальная дисфункция характеризуется изменениями соотношений сосудистых реакций на ацетилхолин (эндотелийзависимая вазодилатация) и нитропруссид (эндотелийнезависимая вазодилитация) с увеличением КЭД в 4,5 раза, снижением концентрации конечных стабильных метаболитов оксида азота и экспрессии МО-синтазы, а также развитием структурных изменений в сердце и почках, выявляющихся »при морфологическом анализе (мембранозная гломерулопатия, гипертрофия миокарда и стенок внутриорганных артерий почек и сердца, отек эндотелия и его пикноз, некроз кардиомиоцитов).

В качестве потенциального эндотелиопротектора экспериментально обосновано использование цитопротектора метаболического действия мельдония, ингибирующего гамма-бутиробетаин гидроксилазу и вызывающего индукцию биосинтеза оксида азота. Мельдоний 80 мг/кг способствовал преобладанию эндотелийзависимого расслабления сосудов; снижению КЭД до значений 1,3±0,1 усл. ед. и полному предупреждению? снижения концентрации конечных стабильных метаболитов оксида азота (ИОх). Морфологические исследования обнаружили предотвращение развития мембранозной 'глЬмёрулопатйиГ'гипсртрофии кардиомиоцитов и их некроз, а также деструктивных изменений эндотелия сосудов и признаков гипертрофии их стенок в почках и миокарде.

В ходе проведенного исследования на модели Ь-ЫАМЕ-индуцировагшого дефицита оксида азота выявлена, эндотелиопротективная активность цитопротектора метаболического действия - триметазидина, который в дозе 6 мг/кг снижал КЭД до значений 4,2±0,6 усл. ед., но при этом не увеличивал ЫО-продуцирующую функцию эндотелия. Морфологические исследования выявили благоприятное влияние на капилляры клубочков почек, а также отсутствие некротических изменений в миокарде.

Впервые установлено выраженное эндотелиопротективное действие комбинированного применения мельдония 80 мг/кг и триметазидина 6 мг/кг с природным донатором оксида азота - Ь-аргинином 200 мг/кг при проведении интегрального векторного анализа по совокупности функциональных, биохимических и морфологических показателей. Комбинация мельдония с Ь-аргинином приводила к уменьшению КЭД до уровня интактных животных, не менее важным результатом явилось снижение данного показателя при использовании комбинации триметазидина с Ь-аргинином по сравнению с монотерапией триметазидином. Биохимические исследования выявили предотвращение снижения концентрации конечных стабильных метаболитов оксида азота в обеих группах комбинаций цитопротекторов с Ь-аргинином. Подтверждением функционально-биохимических показателей, отражающих развитие Ь-МАМЕ-индуцированной эндотелиальной дисфункции, явились результаты морфологического анализа: предотвращение развития мембранозной гломерулопатии, гипертрофии кардиомиоцитов и их некроза, а также деструктивных изменений эндотелия сосудов и признаков гипертрофии их стенок в почках и миокарде.

Практическая значимость. В работе обоснована эффективность фармакологической коррекции эндотелиальной дисфункции цитопротекторами метаболического действия при Ь-МАМЕ-индуцированном дефиците оксида азота в эксперименте. Показано, что их использование позволяет нормализовать изменение соотношения сосудистых реакций на ацетилхолин (эндотелийзависимая вазодилатация) и нитропруссид (эндотелийнезависимая вазодилатация), что выражалось в преобладании эндотелийзависимого расслабления сосудов и снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции.

Одновременно результаты нагрузочных проб, биохимических и морфологических исследований свидетельствовали о положительной динамике морфофункциональных показателей сердечно-сосудистой системы (снижение адренореактивности, предотвращение исчерпания миокардиального резерва, нормализация структуры гломерулярных капилляров, отсутствие деструктивных изменений эндотелия сосудов и признаков гипертрофии их стенок, отсутствие гипертрофических изменений кардиомиоцитов) и о восстановлении активности ЫО-продуцирующей функции эндотелия (повышение концентрации конечных стабильных метаболитов оксида азота).

Полученные данные позволяют рекомендовать целенаправленные доклинические и клинические испытания исследуемых препаратов и их комбинаций с Ь-аргинином в качестве эндотелиотропных аддитивов при лечении патологических состояний, связанных с развитием эндотелиальной дисфункции.

Внедрение результатов научных исследований. Материалы 4 диссертационного исследования, касающиеся эндотелиопротективной активности препарата мельдоний производства ОАО «Фармстандарт-УфаВИТА» (РУ ЛСР-006481/08) включены в состав документов, поданных на регистрацию в МЗ РФ.

Материалы диссертационного исследования, касающиеся эндотелиопротективной активности биологически-активной добавки Ь-аргинин (свидетельство о государственной регистрации № 77.99.23.3.У.2795.3.05 от 18.03.05), включены в состав документов, поданных на регистрацию в ГУ НИИ питания РАМН. Результаты работы используются в работе кардиологического отделения МУЗ «Городская больница скорой медицинской помощи», кардиологического отделения МУЗ «Городская больница № 1» г. Курска и в лекционных курсах кафедры фармакологии, клинической фармакологии КГМУ, кафедры фармакологии Орловского государственного университета и кафедры фармацевтической химии и фармакогнозии Белгородского государственного университета.

Связь с планом НИР. Диссертация выполнена в соответствии с планом НИР ГОУ ВПО КГМУ Минздравсоцразвития России. Номер государственной регистрации темы - 01200961097.

Апробация работы. Материалы работы доложены на итоговых научных сессиях и конференциях молодых ученых КГМУ в 2007, 2008, 2009, 2010 гг., 75-й Всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежная наука и современность», Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Высокотехнологичные методы диагностики и лечения заболеваний сердца, крови и эндокринных органов», XVII Национальном конгрессе "Человек и лекарство", V Национальном конгрессе терапевтов.

Апробация диссертации проведена на межкафедральной научной конференции кафедр фармакологии; клинической фармакологии; внутренних болезней №2; инфекционных болезней и эпидемиологии; биоорганической химии, фармакогнозии и ботаники; анатомии человека; общей химии; фармацевтической, токсикологической и аналитической химии; управления и экономики фармации; фармации ФПО; травматологии, ортопедии и военно-полевой хирургии; мобилизационной подготовки здравоохранения и медицины катастроф; НИИ экологической медицины КГМУ (Курск, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 15 печатных работ, 5 из них - в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ.

Положения, выносимые на защиту.

1. Мельдоний проявляет более выраженное эндотелиопротективное и кардиопротективное действие по сравнению с триметазидином на модели Ь-МАМЕ-индуцированного дефицита N0.

2. Комбинированное применение мельдония с Ь-аргинином и триметазидина с Ь-аргинином оказывает сопоставимое эндотелиопротективное и кардиопротективное действие на модели Ь-КАМЕ-индуцированного дефицита N0.

3. Интегральный анализ совокупности гемодинамических, биохимических и морфологических показателей представляет эффективность фармакологического действия мельдония и триметазидина, а также их комбинаций с Ь-аргинином на фоне моделирования Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0 в следующей последовательности: мельдоний + Ь-аргинин > мельдоний > Ь-аргинин > триметазидин + Ь-аргинин > триметазидин.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов экспериментальных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка используемой литературы, включающего 235 источников, из них 97 отечественных и 138 зарубежных авторов. Диссертация изложена на 197 страницах машинописи, содержит таблиц - 22, рисунков - 93, формул - 5.

170 ВЫВОДЫ

1. Эндотелиальная дисфункция, вызванная введением И-нитро-Ь-аргинин метилового эфира (Ь-ИАМЕ) в дозе 25 мг/кг/сут в течение 7 суток лабораторным животным, характеризуется развитием артериальной гипертензии (169/131 мм рт. ст.), увеличением КЭД в 4,5 раза по сравнению с группой интактных животных, повышением адренореактивности, снижением сократимости миокарда до 66,0±2,5%, уменьшением в 3,4 раза концентрации конечных стабильных метаболитов оксида азота 1чЮх и снижением в 1,9 раза экспрессии еЫОЭ, а также развитием мембранозной гломерулопатии, гипертрофии миокарда и стенок внутриорганных артерий почек и сердца, отеком эндотелия и его пикнозом, некрозом кардиомиоцитов в 40% случаев.

2. Мельдоний 80 мг/кг проявляет выраженное эндотелио- и кардиопротективное действие на модели Ь-МАМЕ-индуцированного дефицита N0, что выражается в снижении КЭД до 1,3±0,1 усл.ед., полном предупреждении снижения концентрации >Юх, предотвращении развития гиперадренореактивности, а также в повышении сократимости миокарда до 79,6±3,4% при проведении пробы на нагрузку сопротивлением. Морфологические исследования обнаружили предотвращение развития мембранозной гломерулопатии, гипертрофии кардиомиоцитов и их некроза, деструктивных изменений эндотелия сосудов и признаков гипертрофии их стенок в почках и миокарде.

3. Триметазидин 6 мг/кг проявляет менее выраженное эндотелиопротективное действие на модели Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0 по сравнению с мельдонием 80 мг/кг, что выражается в снижении КЭД до 4,2±0,6 усл.ед. и отсутствии влияния на ЬЮ-продуцирующую функцию эндотелия. Одновременно обнаружено значительное кардиопротективное действие препарата, проявляющееся в повышении сократимости миокарда до 94,0±4,2% при проведении пробы на нагрузку сопротивлением. Морфологические исследования обнаружили снижение утолщения базальных мембран клубочков и отсутствие некротических изменений в миокарде.

4. Комбинированное применение мельдония 80 мг/кг с Ь-аргинином 200 мг/кг оказывает выраженное эндотелио- и кардиопротективное действие на модели Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0, что выражается в снижении КЭД до 1,4+0,1 усл.ед., предотвращении снижения концентрации ЫОх, а также в повышении сократимости миокарда до 75,4±3,8% при проведении пробы на нагрузку сопротивлением. Морфологические исследования обнаружили предотвращение развития мембранозной гломерулопатии, гипертрофии кардиомиоцитов, деструктивных изменений эндотелия сосудов и признаков гипертрофии их стенок в почках и миокарде.

5. Комбинированное применение триметазидина 6 мг/кг с Ь-аргинином 200 мг/кг оказывает выраженное эндотелио- и кардиопротективное действие на модели Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0, что выражается в снижении КЭД до 2,5±0,2 усл.ед., предотвращении снижения концентрации 1чГОх, а также в повышении сократимости миокарда до 84,2±6,4% при проведении пробы на нагрузку сопротивлением. Морфологические исследования обнаружили предотвращение развития мембранозной гломерулопатии, гипертрофии кардиомиоцитов, деструктивных изменений эндотелия сосудов и признаков гипертрофии их стенок в почках и миокарде.

6. Интегральный анализ эффективности фармакологического действия мельдония и триметазидина показал, что наиболее выраженную эндотелио- и кардиопротективную активность оказывает мельдоний 80 мг/кг по сравнению с триметазидином 6 мг/кг. Комбинированное применение мельдония 80 мг/кг и триметазидина 6 мг/кг с Ь-аргинином 200 мг/кг проявляет положительное фармакодинамическое взаимодействие, что позволяет расположить исследуемые препараты в следующей последовательности: мельдоний 80 мг/кг + Ь-аргинин 200 мг/кг > мельдоний 80 мг/кг > Ь-аргинин 200 мг/кг > триметазидин 6 мг/кг + Ь-аргинин 200 мг/кг > триметазидин 6 мг/кг.

172

ГЛАВА 4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В свете учения о сердечно-сосудистом континууме эндотелиальная дисфункция играет ключевую роль в развитии атеросклероза, формировании ишемической болезни сердца и артериальной гипертензии. При этом результаты экспериментальных и клинических исследований открывают перспективу более широкого применения цитопротекторов, метаболизм которых связан с блокадой транспорта и окисления жирных кислот в митохондриях и стимуляцией процессов гликолиза, снижением активности процессов свободнорадикального окисления, индукцией высвобождения оксида азота и восстановлением нормальной функции эндотелия сосудистой стенки.

Сегодня параметры эндотелиальной дисфункции рассматриваются не только как чувствительный критерий выраженности эндотелиальных нарушений, но и как важный предиктор интенсивности прогрессирования сердечно-сосудистых заболеваний, эффективности терапии и вторичной профилактики [20, 26].

Таким образом, большой практический интерес представляют исследования, направленные на поиск наиболее оптимальных фармакологических агентов в качестве потенциальных эндотелиотропных аддитивов, способных уменьшать выраженность и, по возможности, приводить к обратному развитию эндотелиальной дисфункции.

В связи с вышеизложенным, сравнительное исследование эндотелиопротективных и кардиопротективных эффектов мельдония и триметазидина при моделировании дефицита оксида азота в эксперименте явилось целью нашего исследования.

Для реализации указанной цели был разработан комплекс методических подходов для оценки степени выраженности эндотелиальной дисфункции при моделировании дефицита оксида азота с использованием результатов функциональных проб, биохимических маркеров и результатов морфологических исследований.

Моделирование ЭД проводилось на белых крысах-самцах линии Wistar путем введения неселективного блокатора Ж)-синтазы - И-нитро-Ь-аргинин метилового эфира (Ь-ИАМЕ) ежедневно один раз в сутки, внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг. Механизм ингибирования выработки N0 в случае введения Ь-ИАМЕ заключался в конкурентном ингибировании фермента еЖ)8*аналогом Ь-аргинина - Ь->ЛМА. Дефицит сосудистого N0 вызывал снижение эффектов эндотелийзависимых вазодилататоров и повышение вазоконстрикторных влияний, рост АД, пролиферацию и миграцию гладкомышечных клеток с образованием неоинтимы, синтез внеклеточного матрикса, нарушения системной и региональной гемодинамики, функций сердца, снижение коронарного кровотока и сужение эпикардиальных коронарных артерий, увеличение экспрессии адгезивных молекул эндотелия, агрегации тромбоцитов; прилипание их и лейкоцитов к сосудистой стенке и др. [28, 233].

Подтверждением данных результатов явились наши исследования на наркотизированных животных. Установлено, что внутрибрюшинное введение в течение 7 дней крысам-самцам блокатора Ж)-синтазы - Ь-ИАМЕ приводит к выраженной АГ и эндотелиальной дисфункции. Так значения АД у интактных животных составляли соответственно САД - 137,7+3,7 мм рт. ст., ДАД -101,9+4,3 мм рт. ст., тогда как у животных с патологией САД -169,4±6,3 мм рт. ст., ДАД - 131,4±5,0 мм рт. ст.

Для оценки степени развития эндотелиальной дисфункции у экспериментальных животных и ее коррекции исследуемыми препаратами производили расчет коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД), показателя объективно учитывающего с одной стороны снижение вазодилатационного ответа на ацетилхолин, а с другой увеличение вазодилатационного ответа на нитропруссид на фоне высоких значений артериального давления. Моделирование эндотелиальной дисфункции приводило к достоверному снижению площади над реакцией восстановления АД при проведении ЭЗВД до 984±78,0 мм рт. ст. х сек. по сравнению с интактной группой" животных 1268,0±74,8 мм рт. ст. х сек. Напротив, ЭНВД увеличивалась у животных с блокадой NO-синтазы до 4801,2±278,1 мм рт. ст. х сек. по сравнению с интактной группой 1375,3±93,7 мм рт. ст. х сек.

Степень развития эндотелиальной дисфункции, выявленная с помощью КЭД, показала увеличение данного показателя у животных с L-NAME-индуцированной артериальной гипертензией - 4,9±0,6 усл. ед., по сравнению с интактными животными - 1,1 ±0,1 усл. ед.

Для оценки функциональных возможностей миокарда во всех экспериментальных сериях животных проводились нагрузочные пробы. L-NAME-индуцированный дефицит оксида азота характеризовался гипердинамическими сдвигами кардиогемодинамики. Значения ЛЖД, +dp.dt, -dp/dt были достоверно выше соответствующих значений интактной группы, так как вероятно обусловлены развившейся гипертрофией миокарда левого желудочка. Кроме того наши исследования показали, что дефицит оксида азота способствовал проявлению и гиперреактивности в ответ на адреналовую пробу, а также приводил к снижению миокардиального резерва при проведении пробы на нагрузку сопротивлением, что также согласуется с результатами сосудистых функциональных проб у животных с моделированием артериальной гипертензии.

Характерная динамика биохимических маркеров L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота подтвердила результаты физиологических методов исследования. Так NO-продуцирующая функция эндотелия, исследованная на основании данных увеличения экспрессии eNOS (в процентах от контроля) и концентрации конечных стабильных метаболитов оксида азота (NOx) продемонстрировала резкое снижение биохимических показателей, на фоне развившейся патологии.

Результаты морфологических исследований показали, что L-NAME-индуцированный дефицит оксида азота приводил к гипертрофии кардиомиоцитов (12,0±0,6 мкм против 8,3±0,4 мкм у интактных животных), утолщению базальных мембран капилляров клубочков почек, гипертрофии стенок внутриорганных артерий почек и сердца (27,5±2,3 мкм против

10,0±0,8 мкм в интактной группе), отеку эндотелия и его пикнозу. Также были выявлены субэндокардиальные некротические изменения и очаги формирующегося склероза на месте погибших кардиомиоцитов.

Таким образом, комплекс методических подходов, использованный нами с применением функциональных, биохимических и морфологических методов, позволил объективно оценить состояние функции эндотелия и кардиогемодинамики при моделировании Ь-КАМЕ-индуцированной артериальной гипертензии с последующей ее коррекцией в эксперименте.

Сравнительное комплексное изучение потенциальных эндотелиотропных аддитивов: мельдония и триметазидина, а также их комбинаций с Ь-аргинином выявило в разной степени эндотелио- и кардиопротективные эффекты данных исследованных препаратов.

Мельдоний 80 мг/кг, комбинация мельдония 80 мг/кг с Ь-аргинином 200 мг/кг проявляли выраженное эндотелиопротективное действие на модели Ь-КАМЕ-индуцированного дефицита оксида азота, что выражалось в преобладании эндотелийзависимого расслабления сосудов и снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции до уровня 1,3±0,1 усл. ед. и 1,4±0,1 усл. ед., соответственно, тогда как в группе животных, получавших Ь-ИАМЕ, он составлял 4,9±0,6 усл. ед. Снижение КЭД на фоне введения триметазидина 6 мг/кг было выражено в меньшей степени 4,2±0,6 усл. ед. по сравнению с другими исследуемыми группами животных, при этом обращает на себя внимание восстановление данного показателя на фоне комбинированной терапии с Ь-аргинином 200 мг/кг до значения 2,5±0,2 усл. ед.

ИО-продуцирующая активность эндотелия также подтверждалась данными наших исследований, проведенных на экспериментальных животных с моделированием дефицита оксида азота, где было показано, что концентрация конечных стабильных метаболитов N0 заметно увеличивалась при введении мельдония (105,4±8,9 мкМоль), комбинаций мельдония и триметазидина с Ь-аргинином (118,5±9,1 мкМоль и 110,9±11,2 мкМоль, соответственно) по сравнению с группой животных, не получавших лечения (61,2±3,6 мкМоль).

Достоверных отличий в повышении суммарной концентрации нитрат и нитрит-ионов на фоне лечения триметазидином не наблюдалось (67,3±7,8 мкМоль).

Таким образом, монотерапия мельдонием 80 мг/кг и комбинированная терапия триметазидином 6 мг/кг с Ь-аргинином 200 мг/кг оказывала выраженное эндотелиопротективное действие на модели Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита оксида азота в эксперименте, что выражалось в преобладании эндотелийзависимого расслабления сосудов, снижении КЭД и предупреждении снижения концентрации конечных стабильных метаболитов оксида азота.

Одновременно результаты нагрузочных проб выявили предотвращение повышения адренореактивности при введении мельдония 80 мг/кг и Ь-аргинина 200 мг/кг, а также развития скрытой сердечной недостаточности на фоне повышения реакции на реоксигенацию во всех исследуемых группах. Проведение пробы с нагрузкой сопротивлением показала, что все изучаемые препараты и их комбинации с Ь-аргинином предотвращали исчерпание миокардиального резерва по сравнению с контрольной группой (66,0±2,5%), при этом триметазидин 6 мг/кг (94,0±4,2%) и его комбинация с Ь-аргинином 200 мг/кг (84,2±6,4%) демонстрировали наилучшие значения.

Учитывая, что проба на нагрузку сопротивлением направлена на выявление инотропного резерва, анализ полученных результатов проводился в сопоставлении с данными морфологических исследований. На фоне введения триметазидина 6 мг/кг в почках почти полностью исчезли признаки мембранозной гломерулопатии и капилляры клубочков выглядели в большинстве случаев также, как и у интактных крыс. Однако стенки мелких артерий, как правило, оказывались гипертрофированными (толщина стенок 21,5±1,9 мкм), а их эндотелий нередко был пикнотизирован и частично слущивался. Диаметр кардиомиоцитов левого желудочка был близок к таковому у крыс с артериальной гипертензией и составлял 11,1±0,5 мкм, что свидетельствует о сохранении гипертрофических изменений миокарда. Важно отметить, что некротические изменения миокарда были выявлены лишь у одной крысы из 10, при этом они выражались в наличии единичных и очень небольших очажках репарируемого некроза.

В то же время проведенные морфологические исследования показали, что мельдоний 80 мг/кг оказывал более широкий спектр протективных эффектов, а именно нормализацию структуры гломерулярных капилляров, отсутствие деструктивных изменений эндотелия сосудов и признаков гипертрофии их стенок (11,0±1,0 мкм), отсутствие гипертрофических изменений кардиомиоцитов (9,4±0,3 мкм).

Дальнейшие исследования также продемонстрировали преимущества комбинаций мельдония 80 мг/кг и триметазидина 6 мг/кг с Ь-аргинином 200 мг/кг при моделировании дефицита оксида азота по сравнению с контрольной группой животных, что выражалось в предотвращении развития мембранозной гломерулопатии, отсутствии негативных изменений эндотелия внутриорганных артерий в виде отека и пикноза эндотелиоцитов. Одновременно под влиянием комбинированного лечения обнаруживалось уменьшение гипертрофических изменений стенок сосудов (10,0±1,0 мкм на фоне лечения комбинацией мельдония с Ь-аргинином, 13,0±1,2 мкм — комбинацией триметазидина с Ь-аргинином) и уменьшения диаметра кардиомиоцитов (9,0±0,4 мкм и 10,3±0,4 мкм, соответственно).

Таким образом, при морфологической оценке изменений, вызванных моделированием эндотелиальной дисфункции, было установлено благоприятное влияние на структурные изменения в сердце и почках экспериментальных животных во всех группах фармакологической коррекции.

Механизм реализации фармакологических эффектов мельдония и триметазидина при сердечно-сосудистой патологии связан с оптимизацией энергетического обмена клеток, в том числе клеток эндотелия сосудистой стенки, за счет блокады р-окисления жирных кислот в митохондриях, что способствует индукции гликолиза и уменьшению потребности клетки в кислороде (рис. 4.1).

ЛАКТАТ

ГЛЮКОЗА

ЖИРНЫЕ КИСЛОТЫ

Ацетм-Каривтич

Ация-КрА

Карниш Пцруват" ^ АцатилКоА | Пкруваг)

Карнигин

Ацетил Карнитии Ацил-Кариитн ^

-окисление

ЛАКТАТ

ГЛЮКОЗА

ЖИРНЫЕ КИСЛОТЫ

Рисунок 4.1. Влияние цитопротекторов метаболического действия на основные пути энергетического обмена в клетках (Асташкин Е.И., Глезер М.Г., 2006 [6])

В ходе опытов на изолированных органах и экспериментов, имеющих целью уменьшить размеры инфаркта миокарда и развившуюся в результате этого сердечную недостаточность, была подтверждена гипотеза о том, что можно, тормозя транспорт жирных кислот и, следовательно, их окисление, адаптировать клетки сердечной мышцы и мозга к кислородной недостаточности [33]. Было показано, что Милдронат уже после 10-дневного приема эффективно защищает ишемизированную зону миокарда от гибели как в условиях острой ишемии, так и после восстановления кровообращения, то есть обладает цитопротективным действием в случае вызванных адреналином и норадреналином поражений миокарда [162]. Последнее казалось невозможным: ведь коронарный кровоток под влиянием Милдроната повышается только незначительно, а сердечная мышца для производства энергии использует преимущественно жирные кислоты, транспорт которых Милдронат ограничивает. Однако в результате исследования феномена прекондиционирования установлено, что стресс в небольших дозах тренирует те ферментные системы клетки, которые для выработки энергии используют сахара. Это связано с тем, что окисление глюкозы, по сравнению со сжиганием жирных кислот, позволяет сэкономить около 12% кислорода, то есть сердечная мышца всю дополнительную энергию получает от окисления Сахаров. Таким образом, те, у кого эти ферментные системы более тренированы, переносят, соответственно, и более высокие нагрузки [33]. Возможно, именно этим можно объяснить результаты экспериментальных наблюдений, полученные электронно-микроскопическим методом, свидетельствующие о том, что в миокарде в результате фармакологических тренировочных нагрузок под влиянием Милдроната увеличивается количество функционирующих капилляров (в 2-3 раза), количество и размеры митохондрий (гиперплазия и гипертрофия), число крист в них (на 180%), а также количество рибосом и полисом, что указывает на способность Милдроната активировать синтез белков (ферментов), а также повышать дыхательную емкость миокарда. Последующие исследования показали, что Милдронат индуцирует биосинтез и активность Са -АТФазы, гексокиназы и пируватдегидрогеназы саркоплазматического ретикулума [33, 180].

Вышеизложенное объясняет, почему цитопротекторы метаболического действия эффективны в лечении ишемических состояний: они вызывают в клетках эффект прекондиционирования, стимулируя экспрессию необходимых для окисления Сахаров ферментов и их активность, то есть помогают клеткам подготовиться к ишемии [7, 33, 121, 193].

Триметазидин тормозит в митохондриях бета-окисление всех жирных кислот — и длинноцепочечных, и короткоцепочечных, блокируя последнюю реакцию 4-стадийного процесса окисления жирных кислот (3-кетоацил-КоА-тиолазу), что не мешает накоплению активированных жирных кислот в митохондриях [6, 17]. Милдронат действует иначе — ограничивает транспорт через мембраны митохондрий только длинноцепочечных жирных кислот, в то время как короткоцепочечные могут свободно проникать в митохондрии и окисляться там. Кроме того, Милдронат, уменьшая проникновение жирных кислот в митохондрии, восстанавливает транспорт АТФ (не только в миокарде, но и в мышечной ткани и других клетках) и помогает клеткам выжить, а ведь именно активированные жирные кислоты, накапливаясь в митохондриях, блокируют транспорт АТФ и одновременно действуют как поверхностно-активные вещества, травмирующие клеточные мембраны и вызывающие их разрушение [6, 33] (рис. 4.1).

В то же время триметазидин не способен задержать поток жирных кислот в митохондрии и, следовательно, не может предотвратить накопления в митохондриях их активированных форм — ацил-КоА и ацилкарнитина, а также вредного влияния этих метаболитов на транспорт АТФ и клеточные мембраны. Но уменьшение скорости окисления жирных кислот положительно влияет на обмен веществ в ишемизированном миокарде, так как включается альтернативная система производства энергии — окисление глюкозы, что определяет цитопротективное действие триметазидина на ишемизированные клетки [33] (рис. 4.1).

В настоящее время можно считать установленным фактом участие процессов свободнорадикального окисления липидов в ишемическом повреждении миокарда. При многих сердечно-сосудистых заболеваниях, связанных с повышением активности перекисного окисления липидов, первопричиной возникающих нарушений является гипоксия [80]. Известно, что некоторые продукты перекисного окисления липидов вызывают сокращение гладкой мускулатуры, нарушение проницаемости сосудов и способны провоцировать спазм коронарных сосудов [60]. Реактивные формы кислорода (РФК) могут повреждать эндотелий сосудов и снижать секрецию оксида азота, что ведет к усугублению дисфункции эндотелия, проявляющейся усиленной вазоконстрикцией, гиперкоагуляцией и пролиферацией гладких мышечных клеток. Кроме того, свободные радикалы повреждают кардиомиоциты и способствуют структурной модификации их липидного бислоя с последующим ремоделированием миокарда, что приводит к ухудшению его сократительной функции [59, 141].

Исследования клинической эффективности цитопротекторов метаболического действия показали, что оба препарата обладают умеренными антиоксидантными свойствами, позволяющими использовать их для улучшения энергетического метаболизма в клетках эндотелия и коррекции последствий оксидативного стресса, ведущего к ускоренному распаду оксида азота [33, 73, 86].

По данным Гордеева И.Г. и соавт. (2005), у пациентов со стабильной стенокардией и высоким риском развития ишемических осложнений, получавших в дополнение к стандартной терапии ИБС Милдронат или триметазидин, происходило достоверное снижение в крови продуктов ПОЛ (МДА) за счет активации защитных антиоксидантных ферментов, так как в обеих группах происходило достоверное повышение уровня супероксиддисмутазы (СОД) и глутатионпероксидазы (ГП) [60]. Однако в группе, получавшей триметазидин, активность ГП была наиболее высока по сравнению с группой пациентов, получавших Милдронат, а так как ГП относится к ферментам, обладающим более выраженной антиоксидантной активностью, то можно говорить о том, что антиоксидантное действие наиболее выражено у триметазидина [60]. Известно, что глутатионпероксидаза является наиболее эффективным природным антиоксидантом плазмы крови, участвующим в защите ЛПНП от атерогенной окислительной модификации [30]. Поэтому можно предположить, что данный фермент оказывает именно непрямой антиоксидантный эффект, воздействуя на активность защитных ферментов. Триметазидин не является прямым антиоксидантом, так как не взаимодействует напрямую со свободными радикалами, он действует опосредованно, за счет активации антиоксидантных ферментов наибольшей степени - повышения уровня глутатионпероксидазы [30, 60] (рис. 4.2).

Рисунок 4.2. Механизмы действия цитопротекторов метаболического действия на эндотелий сосудов

В другом исследовании, проведенном ЫароН и соавт. (2007), на изолированных сердцах крыс, подвергшихся ишемии-реперфузионному повреждению, было продемонстрировано, что применение триметазидина способствует значительному усилению экспрессии гена е>Ю8 и увеличению уровней белков еИ08 по сравнению с контролем. Для подтверждения вовлеченности именно оксида азота в кардиопротективные эффекты триметазидина использовался специфический ингибитор ЫО-синтазы -М-нитро-Ь-аргинин метиловый эфир, который значительно снижал влияние триметазидина на сократительную способность, продукцию креатинкиназы и проницаемость микрососудов. Таким образом, в изолированных сердцах крыс триметазидин проявлял значимую, ЫО-зависимую, кардиопротекцию против повреждения, вызванного ишемией-реперфузией, и защищал эндотелиальный барьер коронарного кровообращения [225] (рис. 4.2).

Han W. и соавт. (2008) исследовали влияние триметазидина на нарушенный энергетический метаболизм кардиомиоцитов, вызванный постоянной формой фибрилляции предсердий, у собак. Было установлено, что в результате длительного (6 недель) лечения триметазидином, значительно усиливалась экспрессия eNOS в предсердиях, увеличивалась концентрация нитрат- и нитрит-ионов (NOx) в плазме и снижался плазменный уровень фактора фон Виллебранда, что благоприятно влияло на энергетический метаболизм клеток и улучшение эндотелиальной функции за счет NO-зависимого механизма [132] (рис. 4.2).

Положительное влияние триметазидина на эндотелиальную функцию у больных ИБС с дисфункцией левого желудочка было продемонстрировано в исследовании Belardinelli R. (2008). Триметазидин сокращал инактивацию NO через снижение перекисного окисления липидов (снижение LOONO-) и образования РФК, что подтверждалось сниженными уровнями эндотелина-1 и системных маркеров оксидативного стресса в плазме, таких как малоновый диальдегид и гидропероксиды. Непрямой эффект триметазидина на эндотелиальную функцию зависит от его антиишемических свойств: в условиях дисфункционального, но жизнеспособного миокарда, триметазидин, как регулятор метаболизма, улучшал сократительную функцию левого желудочка и эффективность работы сердечно-сосудистой системы за счет переключения баланса между эндотелийзависимой вазодилатацией и содержанием вазоконстрикторных веществ в пользу первого [108].

Еще один механизм улучшения эндотелиальной функции был описан Tselepis А. и соавт. (2001) в исследовании, посвященном триметазидину и его способности предупреждать окисление ЛПНП и повреждение ДНК культуральных клеток, подвергшихся перекисному окислению Н2Ог. Предполагается, что триметазидин может оказывать прямое действие на эндотелиальные клетки, выполняя роль хелатора переходных металлов, которые способны проникать через липидный барьер клеток, и, таким образом, защищать эндотелий от воздействия свободных радикалов [227] (рис. 4.2).

В опытах in vitro и у больных с сосудистыми заболеваниями головного мозга также продемонстрировано наличие антиоксидантной активности у другого цитопротектора метаболического действия - Милдроната, которое выражалось в повышении резистентности липопротеидов к ПОЛ, вызванному ионами двухвалентного железа [2].

Особый интерес представляют данные о том, что Милдронат, сам не обладающий свойствами антиоксиданта, повышает в организме концентрацию гамма-бутиробетаина (ГББ), так как под влиянием Милдроната он медленнее окисляется до карнитина. В свою очередь, ГББ способен индуцировать образование NO, который действует как один из наиболее эффективных природных агентов, связывающих свободные радикалы в организме, что обусловливает такие эффекты Милдроната, как снижение периферического сопротивления сосудов, уменьшение вызванных норадреналином или ангиотензином спазмов кровеносных сосудов, торможение агрегации тромбоцитов и увеличение эластичности мембран эритроцитов. Таким образом, Милдронат, повышая концентрацию ГББ, защищает клетки и от влияния свободных радикалов, но механизм его действия полностью отличается от такового для триметазидина, ибо реализуется через индукцию биосинтеза NO. В результате этого Милдронат оказывает селективное действие именно на ишемизированную зону различных тканей, в том числе и миокарда, практически не влияя на незатронутые ишемией участки (противодействие эффекту обкрадывания) [33, 109] (рис. 4.2).

Милдронат, являющийся конкурентным ингибитором гамма-бутиробетаин гидроксилазы, при комбинированной терапии с эналаприлом способствует более быстрой и выраженной коррекции показателей ПОЛ, нормализации функций эндотелия сосудистой стенки, следствием чего явилось эффективное снижение показателей суточного профиля АД, улучшение систолической и диастолической функциям миокарда левого желудочка и его деремоделирование. При этом Милдронат реализует свои эффекты путем изменения жирового баланса клетки, что может повлиять на уровень недоокисленных жирных кислот, являющихся субстратом свободнорадикального окисления [86].

В открытом контролируемом исследовании изучалось влияние цитопротектора Милдроната (Гриндекс, Латвия) на окислительные процессы и эндотелиальную функцию у пожилых больных ишемической болезнью сердца [18]. Были выявлены благоприятные изменения в виде снижения уровня продуктов ПОЛ (малонового диальдегида) в ЛПНП, повышении устойчивости ЛПНП к окислению и повышение в крови метаболитов N0. Такой потенциально антиатерогенный эффект препарата на окислительную модификацию ЛПНП теоретически можно объяснить двумя причинами, в частности, способностью Милдроната потенцировать: а) ингибирование процесса окисления ненасыщенных жирных кислот в ЛПНП и/или б) снижать в ЛПНП уровень ненасыщенных жирных кислот — основных субстратов процесса ПОЛ. Ассоциированый с торможением окислительных процессов в ЛПНП, потенциально антиатерогенный эффект Милдроната в виде нормализации функции эндотелия за счет повышения образования/секреции N0 также положительно характеризует этот препарат и является основанием для дополнительных рекомендаций к его назначению [18].

Способность контролировать скорость окисления жирных кислот "в ишемизированном миокарде имеет и Милдронат, и триметазидин. Доказано, что оба препарата хорошо комбинируются с различными антиангинальными средствами, при этом доза последних может быть уменьшена. Однако вследствие блокирующего влияния триметазидина на окисление всех жирных кислот, его следует применять в меньших дозах, чаще и дольше (3 таблетки по 20 мг/сут, минимум в течение 6 месяцев), чем Милдронат, терапевтический эффект которого из-за большей допустимой дозы (2-4 капсулы по 250 мг/сут) проявляется быстрее, и курс лечения обычно не превышает 6 недель. Благодаря своему физиологическому, регулирующему и тренирующему воздействию на организм Милдронат также разрешен для применения здоровыми людьми и спортсменами с целью повышения физической и умственной работоспособности [33].

Использование интегрального анализа по совокупности гемодинамических, биохимических и морфологических показателей позволило дать комплексную визуальную характеристику функции эндотелия и сократимости миокарда, а также представить эффективность действия исследуемых препаратов мельдония, триметазидина и их комбинаций с Ь-аргинином в интегральном контексте на фоне моделирования Ь-ИАМЕ-индуцированного дефицита оксида азота.

Так, анализируя площади векторных диаграмм, характеризующих морфофункциональное состояние сердечно-сосудистой системы, исследуемые препараты можно расположить в порядке возрастания активности фармакологической коррекции метаболического пути Ь-аргинин/Г\Ю в следующей последовательности (табл. 4.1).