Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Влияние пероральной и инъекционной нанопартикулированной лекарственных форм препарата "Фосфоглив" на индуцированную эндотелиальную дисфункцию в эксперименте



На правах рукописи

Полонская Ксения Вадимовна

ВЛИЯНИЕ ПЕРОРАЛЬНОЙ И ИНЪЕКЦИОННОЙ НАНОПАРТИКУЛИРОВАННОЙ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ

ПРЕПАРАТА "ФОСФОГЛИВ" НА ИНДУЦИРОВАННУЮ ЭНДОТЕЛИАЛЬНУЮ ДИСФУНКЦИЮ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

_ 9 ДЕК 20Ю

Старая Купавна -2010

004616542

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» и НИИ экологической медицины КГМУ Росздрава.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук,

профессор Покровский Михаил Владимирович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Утешев Даниил Борисович

доктор медицинских наук,

профессор Демидова Марина Александровна

Ведущая организация:

ГОУ ВПО "Московский государственный медико-стоматологический университет Росздрава"

Защита состоится 2010 г. в /^^ часов

на заседании диссертационного совета Д 217.004.01 при ВНЦ БАВ (142450, Московская область, г. Старая Купавна, ул. Кирова 23).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНЦ БАВ (142450, Московская область, г. Старая Купавна, ул. Кирова 23).

Автореферат разослан « ^ » 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Корольченко Л.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время заболевания сердечнососудистой системы являются одной из основных проблем государственных, медицинских и общественных организаций в индустриально развитых странах (Шалыюва С.А., 2006).

Одним из важных аспектов в патогенезе и клинике этих заболеваний, а также сахарного диабета, ожирения, гиперлипидемии и ряда распространенных патологических состояний считается нарушение структуры и функции эндотелия (Баранова Е.И., 2009; Марголис Л.Б., 1986; Сергиенко В.Б., 1999), сопровождающееся изменением соотношения между медиаторами, обеспечивающими в норме оптимальное течение эндотелийзависимых процессов. В норме в ответ на определенные виды стимуляции эндотелий реагирует усилением синтеза веществ, вызывающих расслабление гладкомышечных клеток сосудов, и в первую очередь оксида азота (N0) (Марков Х.М., 2000; Ito А., 1999; Vallance Р., 2004).

При большинстве метаболических нарушении в результате оксидативно-го стресса происходит накопление асимметричных метиларгинов, нарушающих синтез оксида азота за счет блокирования действия NO-синтазы (NOS) и ее разрушения (Stuhlinger М.С., 2001; Lin K.Y., 2002; Ito А., 1999). Наиболее распространенным в природе является асимметричный диметиларгинин (ADMA). Схожую с ним структуру и свойства имеет также и N-miTpo-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) (Vallance Р., 2004). В экспериментальных условиях введение животным L-NAME вызывает развитие эндотелиальной дисфункции. При этом заметные функциональные и морфологические изменения происходят уже через семь дней введения L-NAME (Покровский М.В., 2006). Модель L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота воспроизводит универсальные механизмы, лежащие в основе повреждения эндотелия. В то же время разработка новых моделей может предоставить возможность детального изучения отдельных метаболических нарушений, приводящих к развитию эндотелиальной дисфункции, и методов их коррекции.

Сравнительно недавно к потенциальным факторам риска сердечнососудистых заболеваний стали относить гипергомоцистеинемию. Гипергомо-цистеинемия может являться независимым фактором развития эндотелиальной дисфункции или усиливать уже имеющееся повреждение эндотелия (Zhou J., 2008; Weiss N., 2001; MacAllister R.J., 1996). Доказано, что гипергомоцистеи-немия оказывает неблагоприятное влияние на механизмы, участвующие в регуляции сосудистого тонуса, обмена липидов и коагуляционных процессов. Эти патогенетические изменения, по-видимому, обусловливают большую частоту сердечно-сосудистых заболеваний на фоне высокого уровня гомоцистеина (ГЦ) в плазме крови.

Предполагается, что эффекты гомоцистеина связаны с влиянием на NOS и со снижением биологической активности NO (Zhou J., 2008; Weiss N., 2001; MacAllister R.J., 1996). Причины, приводящие к повышению концентрации гомоцистеина, к настоящему моменту достаточно хорошо изучены, в то же время известных факторов коррекции гипергомоцистеинемии не так много. Поэтому

на данном этапе изучение гипергомоцистеинемии в первую очередь должно быть направлено на поиск путей коррекции нарушений, связанных с этим состоянием. Наиболее походящим для такого рода исследований является использование экспериментальных моделей.

Большинство из описанных ранее моделей гипергомоцистеинемии основывается на добавлении метионина или гомоцистеина в корм и питьевую воду животных, при этом достаточно сложно обеспечить получение животными в разных сериях одинаковых доз веществ. Поэтому особого внимания заслуживает разработка моделей, основанных на внутрижелудочном и инъекционном введении, так как такие модели благодаря точному дозированию обеспечивают возможность воспроизведения полученных результатов в дальнейшем. Использование этих моделей позволит более точно оценить развитие эндотелиальной дисфункции и изучить эндотелиопротективные эффекты лекарственных препаратов, а также отдельных химических и лекарственных веществ при гипергомоцистеинемии.

Для изучения эндотелиопротективной активности наше внимание привлек препарат "Фосфоглив". В его состав входит фосфатидилхолин (ФХ), являющийся основным структурным элементом мембран клеток. Фосфатидилхолин способен восстанавливать структуру и функции мембран при повреждении, оказывая цитопротекторное действие. Вторым компонентом является глицират, представляющий собой смесь глицирризиновой кислоты (ГК) и ее солей. Гли-цирризиновая кислота обладает иммуномодулирующим, противовоспалительным, антиоксидантным действием. Благодаря разработке оригинальной технологии производства инъекционной формы была получена нанопартикулиро-ванная система, обладающая высокой биодоступностыо. Интересным представляется изучение эндотелиопротективной активности пероралыюй и инъекционной нанопартикулированной форм препарата "Фосоглив" именно при ме-тионин-индуцированной гипергомоцистеинемии и Ь-ЫАМЕ-индуцировашюм дефиците оксида азота, так как защитное действие препарата "Фосфоглив" может проявиться именно при этих состояниях, в первую очередь благодаря антиоксидантному и мембранопротекторному влиянию.

Номер государственной регистрации темы - 01.2.009 50646.

Цель исследования. Сравнительное изучение эндотелио- и кардиопро-тективных свойств пероралыюй и инъекционной нанопартикулированной лекарственных форм препарата "Фосфоглив" при метионин- и Ь-ИАМЕ-индуцированной эндотелиальной дисфункции в эксперименте.

Задачи исследования.

1. Оценить развитие эндотелиальной дисфункции и нарушение функциональных возможностей миокарда при метионин-индуцированной модели эндотелиальной дисфункции в эксперименте с использованием результатов функциональных проб и биохимических исследований.

2. Оценить развитие эндотелиальной дисфункции и нарушение функциональных возможностей миокарда при Ь-ЫАМЕ-индуцированной модели дефицита N0 в эксперименте с использованием результатов функциональных проб, биохимических маркеров и результатов морфологических исследований.

3. Изучить эндотелиопротективные и кардиопротективные свойства пе-роральной и инъекционной нанопартикулированной лекарственных форм препарата "Фосфоглив" при метионин-индуцированной эндотелиальной дисфункции.

4. Изучить эндотелиопротективные и кардиопротективные свойства пе-роральной и инъекционной нанопартикулированной лекарственных форм препарата "Фосфоглив" при L-NAME-индуцированной модели дефицита NO в эксперименте.

5. Изучить эндотелиопротективные и кардиопротективные свойства липоида С80 и глицирата в эквивалентных по содержанию в препарате "Фосфоглив" (капсулы) дозах при L-NAME-индуцированной модели дефицита NO в эксперименте.

Научная новизна исследования. В работе впервые предложен способ моделирования метионин-индуцированной эндотелиальной дисфункции у крыс с помощью внутрижелудочного введения метионина в дозе 3 г/кг 1 раз в сутки в течение 7 дней. Впервые изучены эндотелио- и кардиопротективные эффекты препарата "Фосфоглив" и входящих в его состав липоида С80 и глицирата на моделях метионин- и L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции в эксперименте. Научная новизна подтверждается получением двух патентов РФ.

Практическая значимость. В работе обоснована эффективность применения препарата "Фосфоглив" для коррекции метионин- и L-NAME-индуцированной ЭД в эксперименте. Показано, что его использование позволяет нормализовать изменение соотношения сосудистых реакций на ацетилхолин (эндотелийзависимая вазодилатация) и нитропруссид (эндотелийнезависимая вазодилатация), предотвратить изменение биохимических показателей (концентрации гомоцистеина), а также добиться положительной динамики функциональных показателей сердечно-сосудистой системы (прирост давления при пробе на нагрузку сопротивлением, снижение адренореактивности).

Полученные данные позволяют рекомендовать целенаправленные клинические испытания препарата "Фосфоглив" при заболеваниях, сопровождающихся развитием эндотелиальной дисфункции.

Внедрение результатов научных исследований.

Материалы диссертационного исследования, касающиеся эндотелиопро-тективной активности препарата "Фосфоглив" производства ОАО «Фармстан-дарт-Лексредства» используются в лекционных курсах кафедры фармакологии Орловского государственного университета, Белгородского государственного университета, Курского государственного медицинского университета.

Апробация работы. Материалы исследования были представлены на 74-й итоговой межвузовской научной конференции студентов и молодых ученых «Молодежная наука и современность» (Курск, 2009), конференции «Молодежная наука: от фундаментальной идеи до инновационных проектов» (Курск, 2009), III Международной научной конференции молодых ученых-медиков (Курск, 2009), Всероссийской научно-практической конференции «Биомедицинская инженерия и биотехнология» (Курск, 2009), XVI Национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2009).

Апробация диссертации проведена на межкафедральной научно-практической конференции кафедр фармакологии, клинической фармакологии, акушерства и гинекологии ФПО, инфекционных болезней и эпидемиологии, внутренних болезней ФПО, анатомии, акушерства и гинекологии, фармацевтической технологии, фармацевтической, токсикологической и аналитической химии, мобилизационной подготовки здравоохранения и медицины катастроф-ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, кафедры фармхимии и фармакогнозии БелГУ, НИИ экологической медицины Курского государственного медицинского университета.

По материалам диссертации опубликовано 18 печатных работ, в том числе 4 в изданиях, рекомендуемых ВАК для публикации основных научных результатов диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук.

Положения, выносимые на защиту.

1. Внутрижелудочное введение метионина в дозе 3 г/кг 1 раз в сутки в течение 7 дней вызывает у крыс-самцов Wistar увеличение концентрации гомоци-стеина в 6,2 раза, сопровождающееся нарушением функции эндотелия сосудов, усилением адренореактивности и снижением резерва сократимости. Показатели САД и ДАД остаются при этом в пределах нормы. Длительное, в течение 7 суток, внутрибрюшинное введение Ь-нитро-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг характеризуется выраженным нарушением функции эндотелия, развитием выраженной артериальной гипертензии (191/145 мм рт.ст.), повышением адренореактивности и снижением резервов сократимости, снижением NO TOTAL и гипертрофией миокардиоцитов.

2. "Фосфоглив" (капсулы) в дозе 2,2 г/кг и "Фосфоглив" (лиофилизат) в дозе 0,5 мл/ кг, однократно в течение 7 суток, показали выраженное эндотелио-протективное и кардиопротективное действие на модели метионин-индуцированной эндотелиальной дисфункции, проявляющееся в нормализации соотношения эндотелийзависимой и эндотелийнезависимой вазодилатации, уменьшении адренореактивности, повышении резерва сократимости, снижении концентрации гомоцистеина. При этом инъекционная нанопартикулированная лекарственная форма препарата "Фосфоглив" (лиофилизат) проявляла сопоставимое кардио- и эндотелиопротективное действие в дозе на порядок меньшей, чем пероральная форма.

3. "Фосфоглив" (капсулы) в дозе 2,2 г/кг и "Фосфоглив" (лиофилизат) в дозе 0,5 мл/ кг, однократно в течение 7 суток, проявляли выраженное эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота, что выражалось в снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции. Результаты нагрузочных проб выявили предотвращение повышения адренореактивности и развития скрытой сердечной недостаточности на фоне повышения реакции на реоксигенацию. Инъекционная нанопартикулированная лекарственная форма "Фосфоглив" (лиофилизат) проявляла сопоставимое кардио-и эндотелиопротективное действие в дозе на порядок меньшей, чем пероральная форма.

4. Компоненты препарата "Фосфоглив" липоид С80 и глицират в эквивалентных дозах проявляли выраженное эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита N0, что выражалось в нормализации соотношения эндотелийзависимой и эндотелийнезависимой вазодилатации. При этом в комплексном препарате наблюдалась адциция эндотелиопротекгив-ной активности, что свидетельствует о целесообразности сочетаний компонентов с различной патогенетической направленностью действия.

Структура н объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов исследования, обсуждения полученных результатов, выводов и списка используемой литературы, включающего 253 источника, из них 95 отечественных и 154 зарубежных авторов. Диссертация изложена на 125 страницах машинописи, содержит 18 таблиц, 19 рисунков и 2 схемы.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Моделирование метионин-индуцнрованной гипергомоциетеинемии и определение уровня гомоцнстеина крови.

Эксперименты выполнены на белых крысах-самцах Wistar массой 180250 г.

С целью моделирования эндотелиальной дисфункции метионин (ООО «Полисинтез», г. Белгород) вводили по следующим схемам: 1) ежедневное, 2 раза в сутки, внутрижелудочное введение метионина в дозе 5 г/кг в течение 7 дней (п=10 животных); 2) ежедневное, 1 раз в сутки, внутрижелудочное введение метионина в дозе 5 г/кг в течение 14 дней (п=10 животных); 3) ежедневное, 1 раз в сутки, внутрижелудочное введение метионина в дозе 3 г/кг в течение 7 дней (п=10 животных); 4) ежедневное, 1 раз в сутки, в течение 7 дней внутрижелудочное введение 10% раствора ТВИН 80 в дозе 1 мл/кг (контроль, п=10 животных).

Степень развития гипергомоциетеинемии оценивали по содержанию гомоцнстеина в сыворотке крови экспериментальных животных. Концентрацию гомоцистеина определяли методом иммунотурбодиметрии с помощью набора фирмы Pliva-Lachema Diagnostika s.r.o.

Моделирование L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота.

Опыты проводились на белых крысах-самцах Wistar массой 180-250 г. N-нитро-Ь-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводился ежедневно один раз в сутки, внутрибрюшинно, в дозе 25 мг/кг в течение 7 дней.

Проведение функциональных проб о острых экспериментах на наркотизированных крысах.

По окончании моделирования дисфункции, на 15-е и 8-е сутки от начала эксперимента выживших животных наркотизировали (хлоралгидрат 300 мг/кг), вводили катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляли в бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряли непрерывно посредством датчика P23ID Gould (США) и компьютерной программы Bioshell.

Помимо измерения артериального давления (АД) проводили ряд функциональных тестов с последующей оценкой изменения параметров гемодинамики (САД, ДАД, ЧСС): эндотелийзависимая вазодилатация (ЭЗВД) в ответ на внутривенное введение раствора ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг из расчета 0,1 мл на 100 г массы тела животного, а также эндотелийнезависимая вазодилатация (ЭНВД) в ответ на внутривенное введение раствора нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг из расчета 0,1 мл на 100 г массы тела животного. Степень эндотелиальной дисфункции у экспериментальных животных оценивали по расчетному коэффициенту эндотелиальной дисфункции (КЭД), представляющему собой отношение площади треугольника над кривой восстановления АД в ответ на введение НП (ЭНВД) к площади треугольника над кривой восстановления АД в ответ на введение АХ (ЭЗВД) (Покровский М.В., 2006).

Исследование сократимости миокарда после моделирования патологии проводили у наркотизированных крыс, находящихся на управляемом дыхании. Полость левого желудочка зондировали иглой через верхушку сердца и посредством датчика P231D Gould, США, АЦП L-154 и компьютерной программы Bioshell регистрировали показатели кардиогемодинамики (левожелудочковое давление (ЛЖД), максимальную скорость сокращения (+dp/dt max), максимальную скорость расслабления (-dp/dt max), частоту сердечных сокращений (ЧСС) и интенсивность функционирования структур (ИФС) (произведение частоты сердечных сокращений и давления, развиваемого левым желудочком (мм рт.ст. х уд. мин) (Покровский М.В., 2006).

Для оценки функциональных возможностей миокарда у животных проводили нагрузочные пробы в представленной последовательности:

1. Проба на адренореактивность (внутривенное одномоментное введение раствора адреналина гидрохлорида 1*10'бмоль/л, из расчёта 0,1 мл на 100 г) (Покровский М.В., 2006).

2. Нагрузка сопротивлением (пережатие восходящей аорты на 30 сек) (Покровский М.В., 2006).

3. Трехминутная гипоксия с последующей реоксигенацией (Петрищев H.H., 2000)

Биохимические маркеры эндотелиальной дисфункции. Использована модификация метода определения стабильных метаболитов NO, позволяющая после депротеинизации сыворотки крови проводить одноэгапное количественное определение суммарных нитратов и нитритов (Метельская В.А., Туманова Н.Г., 2005). Принцип метода заключается в одновременном восстановлении нитратов в нитриты в присутствии хлористого ванадия и реакции диазотирова-ния с последующим развитием окраски.

Для морфологического подтверждения развития моделируемых патологических процессов и комплексной оценки эффективности препаратов проведено гистологическое исследование сердца (во всех сериях эксперимента). Материал фиксирован в 10% формалине с последующей заливкой в парафин. Использованы окраски гематоксилином Pero и эозином. Морфометрия сердца проводилась с использованием окулярмикрометра.

Обоснование доз и дизайн эксперимента. Дозу препаратов рассчитывали исходя из содержания фосфатидилхолина, так как добиться эквивалентной дозировки обоих компонентов невозможно ввиду их разного соотношения в разных лекарственных формах препарата "Фосфоглив". Доза препарата "Фос-фоглив" (капсулы) рассчитывалась исходя из содержания фосфатидилхолина в наиболее распространенных препаратах-аналогах препарата "Фосфоглив" при применении их в двойной терапевтической дозе.

Так как препарат "Фосфоглив" лиофилизат имеет значительные отличия в фармакокинетике, эндотелиопротективные свойства этого препарата изучались в более низкой дозе (по содержанию фосфатидилхолина). В соответствии с данными литературы (Kato Т., 2008) была выбрана наиболее оптимальная доза препарата "Фосфоглив" лиофилизат, достаточная для достижения необходимой концентрации действующих компонентов в крови и обеспечивающая наиболее оптимальное эндотелиопротективное действие. Доза препарата "Фосфоглив" в форме лиофилизата с учетом высокой биодоступности была снижена в десять раз по сравнению с дозой препарата "Фосфоглив" в форме капсул (по содержанию фосфатидилхолина). Липоид С80 и глицират вводились в эквивалентных дозах. Расчет дозы для введения крысам производился с помощью коэффициента межвидового пересчета доз Улановой.

Действие препарата "Фосфоглив" оценивали при метионин-индуцированной эндотелиальной дисфункции. "Фосфоглив" (капсулы) в дозе 2,2 г/кг вводили внутрижелудочно в течение 7 суток, "Фосфоглив" (лиофилизат) в дозе 0,5 мл/кг вводили внутрибрюшинно однократно на фоне введения метионина в течение 7 суток.

Исследование эндотелиопротективной активности компонентов препарата "Фосфоглив" (глицират и липоид) проводилось с использованием L-NAME-индуцированной модели эндотелиальной дисфункции, так как данная модель является более универсальной.

На фоне введения L-NAME различные группы животных получали "Фосфоглив" (капсулы) в дозе 2,2 г/кг, и входящие в его состав глицират в дозе 0,2 г/кг, липоид С80 в дозе 0,3 г/кг внутрижелудочно 1 раз в сутки в течение 7 суток, "Фосфоглив" (лиофилизат) в дозе 0,5 мл/кг внутрибрюшинно 1 раз в сутки в течение 7 суток.

Статистическая обработка результатов исследования.

Результаты подвергали статистической обработке путем расчета средней арифметической (М), ошибки средней арифметической (±ш) и вероятности возможной ошибки (Р) по таблицам Стьюдента. Различия оценивали как достоверные, начиная с р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Разработка комплекса методических подходов для количественной оценки развития эндотелиальной дисфункции при метионин-индуцированной эндотелиальной дисфункции в эксперименте.

Изучение возможности моделирования эндотелиальной дисфункции с помощью различных схем внутрижелудочного введения метионина показало, что ежедневное внутрижелудочное введение метионина в дозе 5 г/кг 1 или 2 раза в сутки в течение 14 или 7 дней соответственно вызывает гибель от 40 до 60% экспериментальных животных. В группах животных, получавших метио-нин в дозе 3 г/кг 1 раз в сутки в течение 7 дней или 10% раствор ТВИН 80 в дозе 1 мл/кг, гибели животных не отмечалось на протяжении всего периода введения,

У животных контрольной группы, получавших 10% ТВИН 80 в дозе 1 мл/кг, болюсное внутривенное введение ацетилхолина в течение 3-5 сек приводило к закономерному резкому падению систолического давления (САД) до 74,1 ± 2,9 мм рт.ст., диастолического давления (ДАД) - до 39,4 ±3,1 мм рт. ст. и среднего артериального давления (СрАД ) - до 50,1±3 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 сек развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту. Восстановление АД происходило в среднем за 59,4 ± 4,5 сек после нормализации сердечного ритма. Именно эта площадь треугольника нами рассматривалась как сосудистый компонент ЭЗВД на АХ, использовалась для дальнейших расчётов и составляла 1124,2±63,7 усл. ед. (табл. 1).

Эндотелийнезависимая вазодилатация (ЭНВД) после введения нитро-пруссида (НП) в дозе 30 мкг/кг характеризовалась снижением САД до 67,2±5,1, ДАД до 42,9±5,4 и СрАД до 51,0±5,3 мм рт.ст. с последующим полным восстановлением в среднем в течение 44,4±1,9 сек. При этом площадь треугольника над кривой восстановления, используемая нами в дальнейших расчётах, составляла 1011,8±94,б усл. ед.

Длительное ежедневное, в течение 7 или 14 суток, внутрижелудочное введение метионина приводило к достоверному снижению площади над реакцией восстановления АД после введения АХ по сравнению с группой животных, получавших ТВИН. Напротив, ЭНВД, являющаяся отражением реакции на введение НП, увеличивалась у животных с метионин-индуцированной гипергомоци-стеинемией по сравнению с животными, получавшими ТВИН. Значения показателей гемодинамики (исходные и в момент максимального снижения АД при проведении сосудистых проб) представлены в табл. 1.

КЭД в группе животных, получавших 10% раствор ТВИН 80 в дозе 1 мл/кг (контроль), составил 0,9±0,2. Наибольшее значение КЭД 3,9±0,2 получили в группе животных с внутрижелудочным введением метионина в дозе 5 г/кг 1 раз в сутки в течение 14 дней. Внутрижелудочное введение метионина в дозе 5 г/кг 2 раза в сутки в течение 7 дней вызывает повышение коэффициента эндотелиальной дисфункции до 3,7±0,5 (табл. 1). Достоверное повышение коэффициента эндотелиальной дисфункции получили и в группе животных с

внутрижелудочным введением метионина в дозе 3 г/кг в течение 7 дней (КЭД равен 3,3±0,3) (рис. 1).

Таблица 1

Изменение показателей гемодинамики и значения коэффициента

эндотелиальной дисфункции при моделировании метнонин-нндуцированной эндотелиальной дисфункции (М±ш)

Группы животных Функциональная проба см, мм рт.ст. ДАД, мм рг.ст. чсс, УД./МШ1 S сосудистой реакции при проведении ЭЗВД с АХ и ЭНВД с НИ , усл. ед. кэд, усл. ед.

ТВИН 80 Контроль Исходные 129,2 ±4,3 82,4 ± 5,9 380±4,3 0,9±0,2

АХ 74,1 ±2,9 39,4 ±3,1 362±7,1 1124,2±63,7

НП 67,2 ±5,1 42,9 ± 5,4 364±5,4 1011,8±94,6

Метионин 5 г/кг 2 раза/сутки 7 дней Исходные 117,2 ±4,1 78,4 ±5,6 405±7,5 3,7±0,5*

АХ 77,6±6,1 45,4 ±4,1 392±7,2 794,3±54*

НП 65,4 ± 7,1 38,3± 3,4 398±6,9 2938,1±184*

Метионин 5 г/кг 1 раз/сутки 14 дней Исходные 121±4,2 79,6±2,4 410±8,7 3,9±0,2*

АХ 81,4±4,8 42,4±2,5 385±5,2 658,1±71,2*

НП 56,1±8,6 34,2±8,3 381±6,8 2566,6±181,4**

Метионин 3 г/кг 1 раз/сутки 7 дней Исходные 118,9±10,1 76,6±7,2 401±8,6 3,3±0,3*

АХ 80,1 ±2,9 41,4±2,3 382±4,2 854,6±61,4*

НП 72,3±6,7 45,9±4,3 387±7,5 2820,2±210,4*

Примечание. * -р<0,05 - в сравнении о группой ясивотных, получавших 10% ТВИН 80. САД - систолическое артериальное давление, ДАД - диастолическое артериальное давление, Б - площадь над кривой восстановления артериального давления при проведении фармакологических проб, КЭД - коэффициент эидотелиальной дисфункции.

и 10%ТВИН 80 (контроль) О Метионин 5 г/кг 2 раза в сутки 7 дней г Метоонин 5 г/кг 1 раз а сутки 14 дней в Метионин 3 г/кг1 раз в сутки 7 дней

Рис. 1. Значения коэффициента эндотелиальной дисфункции при моделировании метионин-индуцированной гипергомоцистеинемии. Примечание. * - р<0,05 - в сравнении с группой животных, получавших 10% ТВИН 80.

Проба на адренореактивность (внутривенное введение 1*10"6 М раствора адреналина гидрохлорида в дозе 0,1 мл/100 грамм массы) характеризовалась выраженной положительной инотропной реакцией, причем реакция была более выражена у животных с метионин-индуцированной гипергомоцистеинемией. Максимальное значение ЛЖД наблюдалось у животных, получавших метионин в дозе 5 г/кг 1 раз в сутки 14 дней.

Проведение пробы на нагрузку сопротивлением отражало двухфазную реакцию сердца. В течение первых секунд пережатия восходящей аорты резко увеличивалось развиваемое левым желудочком давление. Вторая фаза характеризовалась постепенным ослаблением инотропного ответа. Для оценки способности миокарда поддерживать максимально высокое ЛЖД на всем протяжении пробы прирост ЛЖД на 5-й секунде принимали за 100%, прирост ЛЖД на 25-й секунде выражался в процентах от величины ЛЖД на 5-й секунде, таким образом оценивался миокардиальный резерв (рис. 2).

100

90

а во

70 -

60

85,4±3,5%

71,2±2,8%* 69,8±3,1%* 65,9±3,7%*

5" 10" 15я 20" 25" '

- . 10%Т8ИН 80 (контроль)

- - Метионин 5 г/кг 2 раза в сутки 7 дней

- -*- - Метионин 5 г/кг 1 раз в сутки 14 дней —х— Метионин 3 г/кг1 раз в сутки 7 дней

Рис. 2. Показатели исчерпания миокардиального резерва при моделировании метионин-индуцированной гипергомоцистеинемии.

Примечание. * - р<0,05 - в сравнении с группой животных, получавших 10% ТВИН 80 (контроль).

Под влиянием метионина во всех используемых схемах введения наблюдалось снижение миокардиального резерва. Наиболее заметное снижение значения этого показателя наблюдалось при моделировании эндотелиальной дисфункции путем введения меионина в дозе 5 г/кг 1 раз в сутки в течение 14 дней. Миокардиальный резерв в этой группе животных составил 65,9±3,7%, что достоверно ниже, чем в контрольной группе животных, получавших ТВИН, в которой этот показатель составил 85,4±3,5%. Введение метионина в дозе 3 г/кг 1 раз в сутки в течение 7 дней также приводило к достоверному снижению миокардиального резерва до 69,8+3,1%, что свидетельствует о снижении способности миокарда адаптироваться к повышенной постнагрузке при метионин-индуцированной эндотелиальной дисфункции.

Острая гипоксия достигалась выключением аппарата искусственной вентиляции легких в условиях открытой грудной клетки. К 3-й минуте гипоксии

частота сердечных сокращений снижалась до 40-50 уд./мин, происходило снижении силы сердечных сокращений. Возобновление принудительной вентиляции приводило к возобновлению адекватной функции сердца с кратковременным (1-1,5 мин) постгипоксическим положительным инотропным эффектом. Максимум прироста сократимости в период реоксигенации принимали за величину постгипоксической реактивности миокарда. У животных контрольной группы прирост ЛЖД в ответ на реоксигенацию после 3-минутной гипоксии составил 98,2+5,1 мм рт.ст., на фоне введения метионина этот показатель значительно снижался. У животных, получавших метионин в дозе 3 г/кг, прирост ЛЖД был достоверно ниже и составлял 48,1±5,4 мм рт.ст.

Результаты определения концентрации гомоциетеина в сыворотке крови позволили установить достоверное повышение уровня гомоциетеина во всех группах экспериментальных животных. Значения концентрации гомоциетеина достоверно отличались от таковых в контрольной группе животных (рис. 3).

120

*

100 92,3

80 ■ ИВ

60 ШШЖ

40 - 1И11Р

20 • 8,6 ¡¡¡¡И

0

104,7

53,5

□ 10% ТВИН 60 (контроль) а Метионин 5г/кг 7 дней в Метионин 5г/кг 14 дней а Метионин Зг/кг 7 дней

Рис. 3. Концентрация гомоциетеина (мкмоль/л) в сыворотке крови экспериментальных животных при моделировании метионин-индуцированной эндоте-лиальной дисфункции

Примечание. * - р<0,05 - в сравнении с контролем.

Наибольшее повышение уровня гомоциетеина обнаружено в сыворотке крови животных, получавших метионин в дозе 5 г/кг в течение 14 дней (рис. 3).

2. Оценка развития эндотслиальной дисфункции при Ь^АМЕ-индуцированной модели дефицита оксида азота в эксперименте.

На 8-е сутки введения Ь-ЫАМЕ развивалась выраженная гипертензия и эндотелиальная дисфункция, сопровождающаяся повышением КЭД в 5 раз (рис. 4), гиперреактивность на адреналовую пробу, снижалась сократительная способность миокарда при пробе на нагрузку сопротивлением, резко уменьшался уровень нитрит-ионов. Морфологически обнаруживалась гипертрофия миокарда.

I о Ингактные самцы а 1-МАМе]

Рис. 4. Значения коэффициента эндотелиальной дисфункции при моделировании Ь-ЫАМЕ (25 мг/кг внутрибрюшинно однократно в течение 7 дней) -индуцированного дефицита N0. Примечание. * - при р<0,05 по сравнению с интактными.

Таким образом, вышеизложенное свидетельствует о том, что длительное, в течение 7 суток, внутрибрюшинное введение Ь-МАМЕ в дозе 25 мг/кг вызывает у лабораторных животных комплекс функциональных, биохимических и морфологических изменений, связанных с развитием дефицита N0.

3. Исследование эндотелиоиротективной активности препаратов "Фосфоглив" (капсулы), "Фосфоглив" (лиофилизат) при мстиошш-индуцированной эндотелиальной дисфункции.

Внутрижелудочное введение препарата "Фосфоглив" (капсулы) в дозе 2,2 г/кг и "Фосфоглив" (лиофилизат) в дозе 0,5 мл/кг вызывает достоверное снижение коэффициента эндотелиальной дисфункции до 1,7±0,2 и 1,5±0,1 соответственно. В группе животных с гипергомоцистеинемией, индуцированной введением метионина в дозе 3 г/кг в течение 7 дней, не получавших лечения,

□ 10% ТВИН 80 (контроль) И Метионин Зг/кг

□ Метионин Зг/кг+фосфоглив(капсулы) 2,2 г/кг И Мотионин Зг/кг + фосфоглив (лиофилизат) 0,5 мл/кг

Рис. 5. Влияние препаратов "Фосфоглив" (капсулы) и "Фосфоглив" (лиофилизат) на значение коэффициента эндотелиальной дисфункции, Примечание. * - р<0,05 - в сравнении с группой животных, получавших 10% ТВИН 80 (контроль); ** - р<0,05 - в сравнении с группой животных, получавших метионин.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют об эффективном снижении КЭД под влиянием исследуемых препаратов у животных с моделированием метионин-индуцированной эндотелиалыюй дисфункции.

При переводе животных на управляемое дыхание обнаружено, что исходные показатели сократимости левого желудочка у животных, получавших ме-тионин на фоне лечения препаратами "Фосфоглив" (капсулы) в дозе 2,2 г/кг и "Фосфоглив" (лиофилизат) в дозе 0,5 мл/кг, оказались достоверно меньше, чем в контрольной группе, не получавшей лечения. При проведении пробы на адре-нореактивность ЛЖД в группе животных, получавших "Фосфоглив" (капсулы) и "Фосфоглив" (лиофилизат), адренореактивность была значительно ниже.

При этом значения ЛЖД приближались к значениям ЛЖД животных, получавших ТВИН (рис. 6).

100 50 0

238.1 *

189,7 ¡¡§ШЁР #* »* 191,4 197

"Я |||||1щ

"■1 - яшИ ътуШк

1

ЙШШ1

[3 ТВИН

□ Метоонин Зг/кг+фосфоглив(капсулы) 2,2 г/кг

□ Метионин Зг/кг

а Метионин Зг/кг + фосфоглив (лиофилизат) 0,5 мл/кг

Рис. 6. Влияние препаратов "Фосфоглив" (капсулы) и "Фосфоглив" (лиофилизат) на величину ЛЖД при проведении пробы на адренореактивность на фоне моделирования метионин-индуцированной эндотелиальной дисфункции (п=10).

Примечание. * - р<0,05 - в сравнении с группой животных, получавших 10% ТВИН 80; ** - р<0,05 - в сравнении с группой животных, получавших метионин.

Препараты "Фосфоглив" (капсулы) и "Фосфоглив" (лиофилизат) проявили кардиопротективную активность в пробе с пережатием восходящей дуги аорты. Под влиянием исследуемых препаратов значительно возрастала способность поддерживать высокое ЛЖД при увеличении постнагрузки. В группах животных, получавших исследуемые препараты, миокардиальный резерв был достоверно выше, чем в группе животных, получавших только метионин, и приближался к значению миокардиалыгого резерва контрольной группы животных (рис. 7).

Прирост левожелудочкового давления в результате реоксигенации в пробе с трехминутной гипоксией был достоверно больше на фоне лечения препаратом "Фосфоглив" (капсулы), чем у животных, получавших только метионин, и составил 101,3±9,4, в группе нелеченых животных значение этого показателя составило 48,1±5,4 мм рт.ст. В контрольной группе животных, получавших

ТВИН, прирост рт.ст.

ЛЖД

в

ответ на трехминутную гипоксию составил 98,2±5,1 мм

о

& 75-

95 -

85,4±3,2% 82,1 ±3,7%** 81,4±4,5%** 69,8±2,5%*

65

секунды

♦ 10% ТВИН 80 (контроль)

—в—-Метаонин Зг/кг

—ir— Метаонин Зг/кг+фосфоглив(капсулы) 2,2 г/кг

-X—.Метаонин Зг/кг + фосфоглив (лиофилизат) 0,5 мл/кг

Рис. 7. Влияние препаратов "Фосфоглив" (капсулы), "Фосфоглив" (лиофилизат) на величину миокардиалыюго резерва при проведении пробы с нагрузкой сопротивлением на фоне моделирования метионин-индуцированной эндотели-альной дисфункции (М±т в абсолютных значениях, п=10).

Примечание. * - р<0,05 - в сравнении с группой животных, получавших 10% ТВИН 80;

* * - р<0,05 - в сравнении с группой животных, получавших метионин.

Результаты определения концентрации гомоцистеина в сыворотке крови позволили установить достоверное повышение уровня гомоцистеина в группе экспериментальных животных, получавших метионин в дозе 3 г/кг.

Значение концентрации гомоцистеина в группе животных, получавших препараты "Фосфоглив" (капсулы) и "Фосфоглив" (лиофилизат), достоверно уменьшалось (табл. 2).

Возможно, снижение концентрации гомоцистеина связано с улучшением его метаболизма в печени под влиянием препарата "Фосфоглив". Снижение концентрации гомоцистеина может быть одним из механизмов, посредством которого препарат "Фосфоглив" реализует свое эндотелиопротективное действие на модели метионин-индуцированной эндотелиальной дисфункции.

4. Исследование эндотелиопротективной активности препаратов "Фосфоглив" (капсулы), "Фосфоглив" (лиофилизат) и входящих в их состав липоида С80 и глицирата при L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции.

Обнаружено, что все исследуемые препараты, а также входящие в их состав субстанции глицират и липоид С80 достоверно снижали КЭД по сравнению с группой животных, получавших L-NAME, не приводя цифры давления к заданному уровню (рис. 8). Это, с одной стороны, свидетельствует о том, что КЭД имеет самостоятельное значение, а с другой - о том, что L-NAME-индуцированная артериальная гипертензия на 7-е сутки вовлекает в патогенетический процесс не только нитроергическую систему, но и все элементы гуморального и нейрогенного контуров регуляции системы кровообращения.

Таблица 2

Влияние препарата "Фосфоглив" (капсулы) и " Фосфоглив" (лиофилизат) на концентрацию гомоцистеина при моделировании метионин-индуцированной эндотелнальной дисфункции

Группы животных 10% ТВИН 80 1 мл/кг Контроль Метнонин 3 г/кг 1 раз/сутки в течение 7 дней Метионин 3 г/кг + "Фосфоглив" (капсулы) 2,2 г/кг Метионин 3 г/кг + "Фосфоглив" (лиофилизат) 0,5 мл/кг

Концентрация гомоцистеина (мкмоль/л) 8,6±2,1 53,5±3,2* 39,4±3,1** 33,1±4,2**

Примечание. * - р<0,05 - в сравнении с группой животных, получавших 10% ТВИН 80; ** - р<0,05 - в сравнении с группой животных, получавших метнонин.

и Интактные а L-NAME а L-NAME +фосфолгив капсулы И L-NAME+ II в L-NAME +111 □ L-NAME + IV

Рнс. 8. Влияние препаратов "Фосфоглив" (капсулы), "Фосфоглив" (лиофили-зат), глицирата, липоида С80 на коэффициент эндотелнальной дисфункции при моделировании L-NAME (25 мг/кг внутрибрюшинно однократно в течение 7 дней) - индуцироваиного дефицита NO.

Примечание. I - "Фосфоглив" (капсулы) 2,2 г/кг, II - "Фосфоглив" (лиофилизат) 0,5 мл/кг, III - глицират 0,2 г/кг, IV - липоид С80 0,3 г/кг; * - р<0,05 - в сравнении с L-NAME, ** - р<0,05 - в сравнении о интактными.

При переводе животных на управляемое дыхание обнаружено, что исходные показатели сократимости левого желудочка у животных, получавших L-NAME на фоне лечения препаратом "Фосфоглив" (капсулы) в дозе 2,2 г/кг и липоидом С80 в дозе 0,3 г/кг, оказались достоверно меньше, чем в контрольной группе.

"Фосфоглив" (капсулы) в дозе 2,2 г/кг также предотвращал повышение адренореактивности, вызванное L-NAME-индуцированной патологией.

При проведении пробы на нагрузку сопротивлением "Фосфоглив" (капсулы), "Фосфоглив" (лиофилизат), липоид С80 и глицират предотвращали падение сократимости с 5-й на 25-ю секунду пережатия аорты (рис. 9). ЛЖД на 25-й секунде проведения пробы у интактных животных составило 83,6% от величины на 5-й секунде. В контрольной группе (Ь-ЫАМЕ-индуцированпый дефицит N0) - 66,0%. Тогда как результаты у животных, получавших "Фосфоглив" (капсулы), "Фосфоглив" (лиофилизат), липоид С80 и глицират, оказались в промежуточном положении. "Фосфоглив" (капсулы) в дозе 2,2 г/кг обладал наилучшей эффективностью.

5" 10" 15" 20" 25"

Рис. 9. Влияние препаратов "Фосфоглив" (капсулы), "Фосфоглив" (лиофилизат), глицирата и липоида С80 на показатели сократимости левого желудочка сердца крыс при проведении пробы на нагрузку сопротивлением на фоне моделирования дефицита оксида азота введением Ы-нитро-Ь-аргинин метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг внутрибрюшинно.

Примечание. 1 - "Фосфоглив" (капсулы) 2,2 г/кг; II - "Фосфоглив" (лиофилизат) 0,5 мл/кг; Ш- глицират 0,2 г/кг; IV - лигюид С80 0,3 г/кг; * - р<0,05 - в сравнении с интактными, ** - р<0,05 - в сравнении с L-NAME.

Во всех группах, принимавших исследуемые препараты, приросты давления в абсолютных значениях в ответ на реоксигенацию были достоверно выше, по сравнению с контрольной группой, не получавшей лечения.

Глицират и "Фосфоглив" (лиофилизат) вызывали максимальное увеличение ЛЖД (262,6+7,6 и 257,0+8,2 мм рт.ст. соответственно), "Фосфоглив" (капсулы) достоверно увеличивал значение ЛЖД до 245,8±8,3 мм рт.ст. по сравнению с контрольной группой, липоид С80 0,3 г/кг увеличивал значение ЛЖД до 239,2+10,8.

"Фосфоглив" (лиофилизат) в дозе 0,5 мл/кг обладал более выраженным эффектом, чем "Фосфоглив" (капсулы). Это может объясняться высокой биодоступность препарата "Фосфоглив" (лиофилизат), связанной с технологией получения инъекционной формы, позволившей создать фосфолипидную нано-систему эмульгированных мицелл и липосом.

95,0% ■

65,0%

68,8+4,1%* 66,0±2,7%*

83,6±4,2%** " ~ L-NAME + I

80,2±3,5%** —х—L-NAME+H

76,8±3,7%** '''" L-NAME +111 69,2+3 2%* о L-NAME + IV

Интакгныз L-NAME

Прирост показателей сократимости был максимальным на фоне приема глицирата. Результаты представлены на рис. 10.

П Интактные ¡а L-NAME в L-NAME+I И L-NAME+II □ L-NAME+III □ L-NAME+IV |

Рис. 10. Влияние препаратов "Фосфоглив" (капсулы), "Фосфоглив" (лиофили-зат), глицирата и липоида С80 на величину приростов левожелудочкового давления в абсолютных значениях в ответ на реоксигенацию после трехминутной гипоксии на фоне моделирования дефицита оксида азота введением N-нитро-L-аргинии метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг внутрибрюшинно. Примечание. I - "Фосфоглив" (капсулы) 2,2 г/кг, II - "Фосфоглив" (лиофилизат) 0,5 мл/кг, III - глицират 0,2 г/кг, IV - липоид С80 0,3 г/кг; * *- р<0,05 - в сравнении с интактными, * - р<0,05 - в сравнении с L-NAME.

NO-продуцирующая функция эндотелия исследована на основании данных о содержании нитрит-ионов NOx. На модели L-NAME-индуцированного дефицита азота препаратов "Фосфоглив" (капсулы), "Фосфоглив" (лиофилизат) и входящие в их состав субстанции глицират и липоид С80 не предотвращали падения содержания концентации нитрит-ионов NOx, не оказывая тем самым влияния на NO-продуцирующую функцию эндотелия.

Результаты морфологического исследования не выявили выраженного протективного эффекта препаратов "Фосфоглива" (капсулы), "Фосфоглива" (лиофилизат) и входящих в их состав субстанции глицирата и липоида С80 в отношении снижения диаметра кардиомиоцитов.

ВЫВОДЫ

1. Моделирование метионин-индуцированной эндотелиальной дисфункции с помощью внутрижелудочного введения метионина в дозе 3 г/кг 1 раз в сутки в течение 7 дней вызывало увеличение концентрации гомоцистеина в 6,2 раза. При этом обнаружено увеличение коэффициента эндотелиальной дисфункции в 3,6 раза, усиление адренореактивности и снижение резерва сократимости. Значения артериального давления оставались в пределах нормы.

2. АДМА-подобная модель эндотелиальной дисфункции (длительное, в течение 7 суток, внутрибрюшинное введение L-нитро-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг) характеризовалась более выраженным увеличением коэффициента эндотелиальной дисфункции, развитием выраженной артериальной гипертензии (191/145 мм рт.ст.), повышением адренореактивности

и снижением резервов сократимости, снижением уровня стабильных метаболитов оксида азота и гипертрофией миокардиоцитов.

3. Препараты группы фосфолипидов на основе фосфотидилхолина и гли-цирата "Фосфоглив" (капсулы) (2,2 г/кг), "Фосфоглив" (лиофилизат) (0,5 мл/кг), однократно в течение 7 суток, показали выраженное эндотелиопротективное и кардиопротективное действие на модели метионин-индуцированной эндотели-альной дисфункции, проявляющееся в нормализации коэффициента эндотели-альной дисфункции, адренореакгивности, сократимости миокарда и снижении уровня гомоцистеина в сыворотке крови. При этом напопаргикулированная лекарственная форма "Фосфоглив" (лиофилизат) проявляла сопоставимое кардио-и эндотелиопротективное действие в дозе на порядок меньшей, чем перораль-ная форма.

4. Препараты "Фосфоглив" (капсулы) в дозе 2,2 г/кг и "Фосфоглив" (лиофилизат) в дозе 0,5 мл/ кг, однократно в течение 7 суток, проявляли выраженное эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита N0, что выражалось в снижении КЭД в 2 и 2,5 раза. Результаты нагрузочных проб выявили предотвращение повышения адренореактивности и снижения резерва сократимости на фоне повышения реакции на реоксигена-цию. Нанопартикулированная лекарственная форма "Фосфоглив" (лиофилизат) проявляла сопоставимое кардио- и эндотелиопротективное действие в дозе на порядок меньшей, чем пероральная форма.

5. Компоненты препарата "Фосфоглив" липоид С80 и глицират в эквивалентных по содержанию в препарате "Фосфоглив" (капсулы) дозах проявляли выраженное эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита NO, что выражалось в снижении коэффициента эн-дотелиалыюй дисфункции. При этом в комплексном препарате наблюдалась аддиция эндотелиопротективной активности, что свидетельствует о целесообразности сочетаний компонентов с различной патогенетической направленностью действия.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Эндотелиирогективные эффекты нового иммуномодулятора Фосфоглив форте, содержащего фосфатидилхолин и тринатриевую соль глицирризиновой кислоты / Е.Б. Артюшкова, М.В. Покровский, H.A. Кедровская, К.В, Полонская, H.A. Антонова // Аллергология и иммунология. - 2008. - Т. 9, № 1. - С. 153.

2. Использование L-аргинина в профилактике нарушении функции эндотелия в условиях ингибирования эндотелиалыюй и индуцированной NO-cinmJ / Т.Г. Покровская, В.И. Кочкаров, М.В. Покровский, Л.М. Данилснко, Е.Б. Артюшкова, М.В. Коро-кин, В.А. Мялыхии, A.C. Белоус, О.С. Гудырев, Ю.П. Клявс, А.И. Маяков, К.В. Полонская, В.В. Гуреев, H.H. Ершов, Е.В. Лучкина, В.Ю. Цепелев // Аллергология и иммунология. - 2008. - Т. 9, № 3. - С. 328.

3. Способы экспериментального моделирования эндотелиалыюй дисфункции / М.В. Корокин, М.В. Покровский, Е.Б. Артюшкова В.И. Кочкаров, Т.Г. Покровская, Л.В. Корокина, A.C. Белоус, О.С. Гудырев, Ю.П. Клявс, В.А. Малыхин, И.Н. Ершов, Е.В. Лучкина, К.В. Полонская, А.И. Маяков, В.Ю. Цепелев // Аллергология и иммунология. - 2008. - Т. 9, № 3. - С. 327.

4. Эндотелиопротективные эффекты комбинированных препаратов на основе фосфа-тидилхолина и глицирризиновой кислоты при L-NAME-индуцированной эндотелиальной

дисфункции / К.В. Полонская, М.В. Корокин, Е.Б. Артюшкова, В.Ю. Цепелев // Молодежная наука и современность: материалы 74-й межауз. итог. науч. конф. студентов и молодых ученых. - Курск, 2009. - Ч. II. - С. 204.

5. Применение комбинированных препаратов на основе фосфатидилхолина и гли-цирризиновой кислоты для коррекции L-NAME-индуцированной эндотелиаяытй дисфункции / К.В. Полонская, Е.Б. Артюшкова, М.В. Покровский [и др.] // Биотехнология. Биомедицинская инженерия технология современных социальных практик: сб. тр. Всерос. науч.-практ. копф. - Курск, 2009. - С. 142-144.

6. Кардиопротективные эффекты комбинированных препаратов на основе фосфатидилхолина и глицирризиновой кислоты при L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции / Е.Б. Артюшкова, К.В. Полонская, М.В. Покровский [и др.] // Биотехнология. Биомедицинская инженерия технология современных социальных практик: сб. тр. Всерос. на-уч.-практ. конф, - Курск, 2009. - С. 102-104,

7. Кардиопротективные эффекты комплексных фосфолипидсодержащих препаратов при L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции / Е.Б. Артюшкова, К.В. Полонская, М.В. Корокин, В.Ю. Цепелев // Университетская наука и современность: теория, практика, инновации: сб. тр. 74-й науч. конф. КГМУ, сессии Центр.-Чернозем, науч. центра РАМН и отд-ния РАЕН. - Курск, 2009. - Т. П. - С. 294-297.

8. Эндотелипротективиые эффекты комплексных фосфолипидсодержащих препаратов при L-NAME-индуцироваиной эндотелиальной дисфункции / К.В. Полонская, Е.Б. Артюшкова, М.В. Корокин, В.Ю. Цепелев // Университетская наука и современность: теория, практика, инновации: сб. тр. 74-й науч. конф. КГМУ, сессии Центр.-Чернозем. науч. центра РАМН и отд-ния РАЕН. -Курск, 2009. - Т. II. - С. 310-313.

9. Возможности моделирования гомоцистеин-индуцированной эндотелиальной дисфункции у крыс / М.В. Корокин, К.В. Полонская, М.В. Покровский |и др.] // Кубан. науч. мед. вести. - 2009. - № 5 (110). - С. 43-48.

10. Гипергомоцистеинемия, вызванная внутрижелудопным введением аминокислоты метионин, как модель эндотелиальной дисфункции у крыс / М.В. Корокин, К.В. Полонская, М.В. Покровский [и др.] // Актуальные вопросы фармакологии и фармации: сб. тр. межвуз. науч. конф., посвящ. памяти проф. В.В. Пичугина и 75-летию КГМУ. - Курск, 2009. -С. 218-220.

11. Полонская, К.В. Влияние препаратов "Фосфоглив" и "Фосфоглив лиофилизат" на функцию эндотелия при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота / К.В. Полонская // Актуальные вопросы фармакологии и фармации: сб. тр. межвуз. науч. конф., посвящ. памяти проф. В.В. Пичугина и 75-летиго КГМУ. - Курск, 2009. - С. 290-292.

12. Кардиопротективное действие препаратов "Фосфоглив" капсулы при моделировании птергомоцитсеин-индуцированной эндотелиальной дисфункции / К.В. Полонская, М.В. Корокин, М.В. Покровский [и др.] // Актуальные вопросы фармакологии и фармации: сб. тр. межвуз. науч. конф., посвященной памяти проф. В.В. Пичугина и 75-летию КГМУ. -Курск, 2009. - С. 292-294.

13. Влияние "Фосфоглив-форте" па эндотелиальную дисфункцию /К.В. Полонская, Е.Б. Артюшкова, М.В. Покровский [и др.] // Сб. тезисов XVI Российского национального конгресса "Человек и лекарство" (6-10 апреля 2009 г.). - М., 2009.- С. 718-719.

14. Исследование кардиопротективного действия препарата "Фосфоглив" капсулы при моделировании гипергомоцистеин-иидуцированной эндотелиальной дисфункции / К.В. Полониская, М.В. Корокин, Л.В. Корокина (и др.] // Материалы 4 Междунар. конф. молодых ученых-медиков (Курск, 25-26 фев. 2010 г.). - Курск, 2010. - Т. 3. - С. 25-27,

15. Гипергомоцистеинемия как модель эндотелиальной дисфункции у крыс / М.В. Корокин, К.В. Полонская, Л.В. Корокина [и др.] // Материалы 4 Междунар. конф. молодых ученых-медиков (Курск, 25-26 фев. 2010 г.). - Курск, 2010. - Т. 2. - С. 117-119.

16. Кардиопротективные эффекты эссенциальиых фосфолшшдов / К.В. Полонская, М.В. Корокип, М.В. Покровский [и др.] // Сб. тезисов XVII Российского национального конгресса "Человек и лекарство" (12-16 апреля 2010 г.). - М., 2010. - С. 219.

17. Моделирование мстионин индуцированной экдотелиальной дисфункции / М.В. Корокин, М.В. Покровский, ОС. Гудырев, К.В. Полонская [и др.] // Сб. тезисов XVII Российского национального конгресса "Человек и лекарство" (12-16 апреля 2010 г.). - М., 2010,-С. 646-647.

18. Фармакологическая коррекция морфологических изменений в сердце и почках при L-NAME-индуцированном дефиците NO // B.C. Барсуков, В.Т. Дудка, Е.В. Артюшкова, К.В. Полонская [и др.] // Сб. тезисов XVII Российского национального конгресса "Человек и лекарство" (12-16 апреля 2010 г.). - М., 2010. - С. 576.

ПАТЕНТЫ

1. Пат. 2372079 Российская Федерация, МПК551 А61К 31/198, А61К 31/683, А61К 9/10. Способ коррекции эндотелиальной дисфункции препаратом фосфоглив лиофилизат при L-NAME индуцированном дефиците оксида азота / М.В. Покровский, Е.Б. Артюшкова, Т.Г. Покровская, В.И. Кочкаров, В.В. Гуре-ев, М.В. Корокин, М.П. Гладченко, Л.В. Корокина, Е.В. Артюшкова, A.C. Белоус, В.А. Малыхин, H.A. Кедровская, К.В. Полонская, И.А. Пашкова, В.Ю. Це-пелев, О.С. Гудырев; заявители и патентообладатели Покровский М.В., Артюшкова Е.Б., Покровская Т.Г., Кочкаров В.И. - № 2008110101; заявл. 13.03.08; опубл. 10.11.2010. Бюл. № 12.-3 е.: ил.

2. Пат. 2359668 Российская Федерация, МПК551 А61К 31/198, А61К 31/683, А61К 9/10. Способ коррекции эндотелиальной дисфункции препаратом фосфоглив при L-NAME индуцированном дефиците оксида азота / М.В. Покровский, Е.Б. Артюшкова, Т.Г. Покровская, В.И. Кочкаров, В.В. Гуреев, М.В. Корокин, М.П. Гладченко, Л.В. Корокина, Е.В. Артюшкова, A.C. Белоус, В.А. Малыхин, H.A. Кедровская, К.В. Полонская, И.А, Пашкова, В.Ю. Цепелев, О.С. Гудырев; заявители и патентообладатели Покровский М.В., Артюшкова Е.Б., Покровская Т.Г., Кочкаров В.И. - Ks 2008110102; заявл. 19.03.08; опубл. 27.07.2010. Бюл. №12.-3 е.: ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АХ - ацетилхолин

ГК - глицирризиновая кислота

кэд - коэффициент эндотелиальной дисфункции

лжд - левожелудочковое давление

ЧСС - частота сердечных сокращений

ФХ - фосфатидилхолин

эзвд - эндотеЛийзависимая вазодилатация

энвд - эндотелийнезависимая вазодилатация

+dp/dt - максимальная скорость увеличения левожелудочкового давления

- dp/dt - максимальная скорость снижения левожелудочкового давления

ADMA - асимметричный диметиларгинин

L-NAME - М-нигро-Ь-аргинин метиловый эфир

NO - оксид азота

NOS - N0 синтетаза

Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г. Сдано в набор 15.11.2010 г. Подписано в печать 16.11.2010 г. Формат 30х421/8. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 122А Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.