Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Сравнительное иммунобиологическое и иммуноморфологическое изучение грибковой сенсибилизации к дрожжеподобным и плесневым антигенам

о*

На правах рукописи

НЕФЕДОВ ОЛЕГ ВАЛЕРЬЕВИЧ

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОЕ И ИММУНОМОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ГРИБКОВОЙ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ К ДРОЖЖЕПОДОБНЫМ И ПЛЕСНЕВЫМ АНТИГЕНАМ

(экспериментальное исследование)

14.00.16 - Патологическая физиология 14.00.15 - Патологическая анатомия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Казань, 1996

Работа выполнена в Казанском государственном медицинском университете и Казанском научно-исследовательском институте эпидемиологии и микробиологии.

Научные руководители: заслуженный деятель науки РТ,

доктор медицинских наук, профессор М.М. Миннебаев,

заслуженный деятель науки РТ, доктор медицинских наук, профессор Н.Ш. Шамсутдинов.

Научный консультант: кандидат медицинских наук,

старший научный сотрудник В.М. Лукашков.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор P.C. Фассахов

доктор медицинских наук, профессор B.JI. Белянин.

Ведущее учреждение: НИИ Общей патологии и патологическое

физиологии РАМН, г. Москва.

Защита диссертации состоится " ^ " 1996 годг

в ^часов GO мин. на заседании диссертационного совета Д 084. 29.0; Казанского государственного медицинского университета по адресу 420012", г. Казань, ул. Бутлерова, д.49. |

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казанского го сударственного медицинского университета (420012, г. Казань, ул. Бут лерова, д.49, корп. "Б").

Автореферат разослан " 2 " 1996 г.

Ученый секретарь диссертационного совета —

доктор медицинских наук, профессор Р.Х. Хафизьянова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Грибы рода Кандида и Альтернария лужат не только причиной микозов различной локализации Н.Д.Шеклаков, М.В. Милич, 1970; O.K. Хмельницкий, 1973; B.JI. Бе-шнин и др., 1984; O.K. Хмельницкий и др., 1984), которые сопровождаются развитием сенсибилизации организма, но и являются важней-шши этиологическими факторами аллергических заболеваний П.Н. Кашкин, 1971; З.О.Караев, Г.Б.Федосеев и др., 1986: А.А.Лоди, ^.И. Мерзляков, 1987; Р.Х. Бурнашева и др., 1994; В.И. Шайхразиева, З.Ю. Дядькин, 1996; M.Hielmroos, 1988). Как известно, развитие мико-;ов сопровождается не только накоплением у больных антител, но и ¡ыраженной их аллергизацией, проявляющейся реакциями гиперчув-ггвительности немедленного (ГНТ) и замедленного (ГЗТ) типа (П.Н. Пашкин, К.П. Кашкин, 1971). Экспериментально доказано, что "andida albicans при иммунизации животных вызывает развитие ГЗТ, >бусловленной белковой фракцией гриба, и реакцию ГНТ, детермини-юванную маннаносодержащими фракциями аллергенов М.А.Кашкина, 1974). Повышенная чувствительность к грибам рода <андида выявлена не только у больных кандидозом, но также и здо-ювых людей - кандидоносителей (З.О. Караев и др., 1983; Е.А. Пазюк i др., 1987). Аллергеноактивные фракции из спор и мицелия Alternaria enuis, попадающие в респираторный тракт человека, формируют пре-шущественно гиперчувствительность немедленного типа (А.А.Лоди, 988; W.Grunt и др., 1983; G.Lumineau и др., 1986). ГЗТ на антигены У ternaria tenuis у здоровых людей встречается не более чем в 10-20% Н.И. Глушко, 1986).

Патофизиологические и патоморфологические аспекты процес-:ов микробной и немикробной сенсибилизации организма нашли ши-юкое отражение в работах 60-70-х годов (В.И. Пузик, 1966; В.П. Не-)едов, 1967; Л.Н. Фонталин, 1967; Р.В. Петров, 1974; Н.Д. Беклемишев, Г.С.Суходоева, 1979; Л.П. Царевский, 1980 и др.). Однако в лите-атуре мы не нашли материалов по морфомегрической оценке имму-оморфологических изменений в тимико-лимфатической системе при рибковой сенсибилизации.

Целью настоящей работы явилось изучение некоторых иммун< генных свойств новых аллергенных препаратов, полученных из грибе Candida albicans и Alternaría tenuis в лаборатории грибковых аллерг< нов Казанского НИИ эпидемиологии и микробиологии, а также ик муноморфологических изменений в тимико-лимфатической систем при грибковой сенсибилизации и специфической гипосенсибилизацик

Задачи исследования:

• оценить характер сенсибилизации подопытных животных при введении аллергена Candida albicans и сопоставить его влияние на им-мунокомпетентную систему с действием кандидозной вакцины;

• изучить характер сенсибилизации в эксперименте при введении аллергена Alternaría tenuis и определить степень соответствия его воздействия на организм с вакциной аналогичного гриба;

• дать морфометрическую оценку изменениям в тимико-лимфатической системе при грибковой сенсибилизации;

• определить на животных, иммунизированных соответствующими грибковыми вакцинами, возможность применения новых аллергенов Candida albicans и Alternaría tenuis в целях специфической гипо-сенсибилизирующей терапии.

Научная новизна

Впервые проведено иммуноморфологическое и морфометрическс исследование иммунокомпетентных органов при грибковой сенсиб] лизации; показаны отличия и сходство в характере и динамике сдвиге в тимико-лимфатической системе под влиянием антигенов Candic albicans и Alternaría tenuis. Установлено соответствие кожных алле] гических проб с характером иммуноморфологических процессов в с лезенке и лимфатических узлах; вместе с тем отмечена определен»; информативность ППН-теста при грибковой сенсибилизации в зав симости от дозы антигена. Впервые представлены патоморфологич ские изменения с морфометрическим анализом в центральном (тимус и периферических органах (селезенка и регионарные лимфатическ узлы) иммуногенеза при кандидозной и плесневой специфической г посенсибилизации.

Практическая значимость работы

Результаты исследования экспериментально обосновывают соот-гтствие иммуногенных свойств представленных аллергенов Candida Ibicans и Alternaría tenuis аналогичным вакцинам и возможность их рименения для постановки кожных проб в целях диагностики гриб-эвой сенсибилизации. Дано экспериментальное обоснование для роведения клинических испытаний нового аллергена Candida albicans качестве специфического гипосенсибилизирующего средства. Пока-ша необходимость дальнейшего экспериментального изучения ал-гргена Alternaría tenuis в связи с его выраженным сенсибилизирую-;им эффектом на организм морских свинок.

Основные положения, выносимые на защиту

1) Антигены Candida albicans и Alternaría tenuis, обладая аллер-:нными свойствами, вызывают при введении их животным смешан->ш по характеру иммунный ответ с преобладанием клеточной им-унной реакции при кандидозной сенсибилизации и гуморальной им-унной реакции при сенсибилизации антигенами Alternaría tenuis.

2) Отмечается корреляция между характером иммуноморфологи-:ских процессов в димфоидной ткани и степенью выраженности кож-»IX проб и ППН-теста.

3) Иммуноморфологический и морфометрический анализ имму-жомпетентных органов позволил уточнить характер прямых функ-юнальных связей в тимико-лимфатической системе и обратной связи гимико-эндокринном звене при грибковой сенсибилизации.

4) Показана эффективность ускоренной специфической гипосен-билизации аллергеном Candida albicans на вакцинированных жирных.

Апробация работы.

Результаты исследований доложены и обсуждены на 1 Междуна-'дном съезде союза ассоциаций патологоанатомов (Москва, 1995), на седании научного общества патологоанатомов с участием патофи-ологов (Казань, 1996), на рабочем совещании сотрудников лабора-рии грибковых аллергенов КНИИЭМ и кафедр патофизиологии и танатомии Казанского медицинского университета (1996 г.). Имеет-10 научных публикаций по теме диссертации.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введ ния, 3-х глав обзора литературы, 6 глав собственных исследовани заключения, выводов и указателя литературы. Работа изложена на I страницах компьютерного текста, включает 12 таблиц и 51 рисунс Список литературы содержит 270 работ, из них 162 отечественных а тора.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Опыты проведены на 15 кроликах и 165 морских свинках. Д определения иммуногенных свойств разработанных аллергенных щ паратов эффективность иммунизации соответствующими антигена! изучалась на кроликах по схеме, предложенной А.Н. Маянским (197 и оценивалась в реакции двойной иммунодиффузии в геле по OyxTt лони.

С целью изучения иммуноморфологического процесса в тимш лимфатической системе на введение антигенов дрожжеподобного rj ба Candida albicans и плесневого гриба Alternaría tenuis были прове; ны эксперименты на 135 морских свинках-самцах массой 350-450 г I них 118 опытных и 17 контрольных животных). 1-ой серии опытн морских свинок (32 животных) вводилась подкожно грибковая вам на Candida albicans по 0,5 мл в каждое бедро (концентрация вакци: — 500 миллионов и 2 миллиарда микробных тел в 1 мл). 2-ой сер опытных морских свинок (32 животных) вводился аллерген Candí albicans (его концентрация 10 мг\мл) по 0,5 мл в каждое бедро. 3-ей рии морских свинок (27 животных) вводилась вакцина Alternaría ten по 0,5 мл в каждое бедро из расчета 10 мг биомассы на 100 г живс веса свинки. 4-ой серии опытных морских свинок (27 животных) bj дился аллерген Alternaría tenuis по 0,3 мл в каждое бедро из расч! 0,06 мг белкового азота на 1 свинку (маточный раствор аллергена 0,3 мг\мл). Вакцины и аллергены вводились в смеси с неполным адт вантом Фрейнда (в соотношении 1:1). Контрольным животным 5-серии вводился подкожно по 0,5 мл в каждое бедро неполный адт вант Фрейнда. Животных умерщвляли под эфирным наркозом на 7, и 21 дни сенсибилизации.

С целью изучения иммуноморфологических процессов при гипо-енсибилизирующей терапии опыты поставлены на 30 морских свин-:ах-самцах весом 350-500 г. 6-ой (8 животных) и 7-ой (8 животных) се-1иям морских свинок вводилась подкожно вакцина Candida albicans в меси с неполным адъювантом Фрейнда по 0,2 мл в каждое бедро концентрация вакцины — 2 миллиарда микробных тел в 1 мл). Через ; недели после вакцинации морским свинкам 7-ой серии начали вво-;ить подкожно аллерген Candida albicans в разведении 1:100, а затем :10 в возрастающей дозе от 0,1 до 1,0 мл с интервалами между инъек-;иями в 3-4 дня в течение 10 недель (концентрация маточного раство-а аллергена составила 10 мг\мл). Морским свинкам 8-ой серии (5 жи-отных) и 9-ой серии (9 животных) была введена подкожно биомасса лесневого гриба Alternaría tenuis с неполным адъювантом Фрейнда о 0,5 мл в каждое бедро из расчета 10 мг биомассы на 100 г живого еса. Через 17 дней после вакцинации животным 9-ой серии начали водить подкожно аллерген Alternaría tenuis по той же гипосенсибили-ирующей схеме, что и в 7 серии. 6-я и 8-я серии вакцинированных жи-отных использовались в качестве контроля. Убой животных прово-ился под эфирным наркозом на 87-90 дни опыта.

Аллергический статус животных оценивался на 21 и 90 дни опы-ов с помощью внутрикожных проб, постановкой реакции преципита-ии по Оухтерлони и ППН-теста по В.А. Фрадкину (1985).

У всех подопытных животных для исследования брали тимус, се-гзенку, регионарные лимфатические узлы (паховые и поясничные), адпочечники с фиксацией их в жидкости Карнуа. До фиксации орга-ы взвешивались на торсионных весах и определялся весовой индекс ЗИ) тимуса, селезенки и надпочечников (соотношение веса органа в г к весу животного в г). Парафиновые срезы органов окрашивались ;матоксилином + эозином, по Браше на РНК и по Мак Манусу ЦИК-реакция) на полисахариды (Г. А. Меркулов, 1961). Проводилось орфометрическое исследование тимуса, селезенки и лимфатических

узлов с помощью сетки Г.Г.Автандилова (1973), а измерение диамет] фолликулов и телец Гассаля осуществлялось окулярным микрометре MOB -1-15х. Результаты морфометрических исследований подвергн ты статистической обработке с помощью программного обеспечен! на компьютере IBM PCVAT с вычислением критерия Стьюдента и в личины Р (достоверность различий между контрольными и опытньи сериями). Микрофотосъемку гистологических препаратов проводи.! на пленку МФ-32, используя микроскоп с фотонасадкой и автомат зированной системой фирмы "Opton".

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ.

Изучение преципитирующих антител в реакции двойной иммун диффузии в геле по Оухтерлони на 21 день после однократной сенс билизации антигенами грибов дало отрицательные результаты во вс опытах. Однако, положительными оказались результаты по показа? лю повреждения нейтрофилов крови у сенсибилизированных живс ных: средний показатель повреждения нейтрофилов у сенсибилизир ванных вакциной Candida alb. равнялся соответственно 0,18 , а у ж вотных, сенсибилизированных антигенами Alternaria ten., средн уровни ППН-теста были 0,21 и 0,17 (при введении соответственно вг цины и аллергена). Лишь у животных, сенсибилизированных аллер] ном Candida alb., величина ППН-теста была низкой — 0,08 (рис. 1).

□ Вакцина С. alb ВАллерген C.alb В Вакцина Alt. ten. □Аллерген Alt. ten.

Рис. 1. Уровни ППН —теста у сенсибилизированных грибковыми антигенами животных

на 21 день опыта

Результаты внутрикожных проб на введение грибковых антигенов читывали через 20 минут, 2 часа, 24 и 48 часов. Положительная реак-;ия зафиксирована во всех опытных группах животных лишь через 4 часа, а через 48 часов она была затухающей. Так, средний диаметр ;робы был 10-12 мм через 24 часа у животных , сенсибилизированных акциной и аллергеном Candida alb., и 7,5-8 мм через 48 часов. У жи-отных, сенсибилизированных вакциной и аллергеном Alternaria ten., ожные пробы были положительными на ++ и +++, а средние показа-ели их через 24 часа равнялись 12 и 15 мм. Что касается проявления юложительных кожных проб через 24 часа после внутрикожного введения аллергенов с последующим их быстрым затуханием, то мы клонны рассматривать такой вариант как отсроченную немедленную юакцию, которая могла быть обусловлена базофильной кожной чув-твительностью или феноменом Джонса-Моута (Л. Йегер, 1983; ". Фримель,1987).

На первом этапе проведен сравнительный иммуноморфологиче-кий и морфометрический анализ органов иммуногенеза в динамике енсибилизации вакциной и аллергеном гриба Кандида. По сравнению контрольными животными у вакцинированных морских свинок вы-влено снижение ВИ тимуса с тенденцией к уменьшению относитель-юй площади коркового слоя в дольках и снижению клеточности в шзговом слое. Тельца Гассаля мелкие, диаметром 30- 50 мкм, пиро-¡инофильные, и число их не превышало 5 в дольке вилочковой желе-ы. Увеличение ВИ селезенки на 15-18% на всех сроках сенсибилизации вакцинированных животных коррелирует с увеличением площади ¡елой пульпы на 18%. Характерно увеличение не только числа фолли-улов в поперечном срезе органа до 18-20, но и их диаметра; причем Головина фолликулов приобретает трехконтурный рисунок за счет по-вления реактивных центров. Отмечается повышение содержания РНК лимфоцитах как в Т-зависимой, так и в В-зависимой зонах фоллику-:ов. В красной пульпе селезенки на 7 день сенсибилизации обнаружена ктивация макрофагальной системы, снижение содержания лимфоци-ов и появление мелких колоний плазматических клеток (ПК), число оторых в дальнейшем не нарастает.

У всех опытных животных этой серии парааортальнь (поясничные) лимфатические узлы были крупнее, чем паховые. На все сроках эксперимента сохранялась высокая активность макрофагов синусах регионарных лимфоузлов наряду с гиперплазией фолликуле с крупными реактивными центрами. Повышенная пиронинофилия корковом слое и паракортикальной зоне на ранних сроках сенсибил] зации связана с появлением лимфобластов. В дальнейшем четко пр< слеживается преобладание клеточного типа иммунного ответа в р гионарных лимфоузлах, что выражалось увеличением относительно площади паракортикальной зоны, особенно заметным с 14 дня сенс! билизации. В мякотных шнурах лимфоузлов содержание ПК на высо: сенсибилизации колебалось от малого до умеренного.

ВИ и морфологическая структура вилочковой железы у опытнь животных на 7 день сенсибилизации аллергеном Candida alb. не пр терпела существенных изменений по сравнению с контрольной rpyi пой. На 14-21 дни сенсибилизации отмечено некоторое увеличение В тимуса до 0,64-0,65 (рис.2). Дольки тимуса крупные, граница меж;: корковым и мозговым веществом в дольках четкая, а соотношеш площади между тем и другим не изменилось по сравнению с контр< лем. Число телец Гассаля варьировало от 3-5 до 8-10, а диаметр их к< лебался от 40 до 60 мкм.

1,2 Т

0,3

0,6 --

0,4 •-

ОД

Контроль

ч

7 день

14 день

21 день

■ Тимус (вакцин —— Надпочечник (вакцина)

-Тимус (аллер/

---Надпочечник

(аллерген)

Рис. 2. Изменения ВИ тимуса и надпочечников при сенсибилизации антигенами Candida albicans

ВИ селезенки у морских свинок 2-ой серии статистическй достоверно увеличился на 14-21 дни сенсибилизации на 18-20%. Однако, число фолликулов и относительная площадь белой пульпы в селезенке начинает увеличиваться с 7 дня сенсибилизации. Так, число фолликулов (в поперечном срезе органа) увеличилось с 12-15 в контроле до 2025 на 7 день и до 25-30 фолликулов на 21 день опыта. Средний морфо-метрический показатель площади белой пульпы вырос с 13% в контроле до 23-24% на высоте сенсибилизации. Принимая площадь белой пульпы селезенки у контрольных животных за 100%, выявлено ее увеличение у опытных животных до 180% (рис.3).

На всех сроках эксперимента преобладали крупные двухконтур-ные фолликулы диаметром более 300 мкм с четкой гиперплазией В-зависимой зоны. В красной пульпе характерно нарастание числа пи-ронинофильных клеток, но ПК было мало. Иммуноморфологическая реакция в лимфоузлах свидетельствует о смешанном характере иммунного ответа. Наряду со значительной плазматизацией мякотных шнуров в паховых лимфоузлах нарастала гиперплазия паракортикальной зоны в поясничных лимфоузлах с активной макрофагальной реакцией и лимфоцитозом в синусах.

190 т

7 день

14 день

21 день

О Вакцина С. alb @ Аллерген С. alb ■ Вакцина Alt. ten. □ Аллерген Alt. ten.

Рис. 3. Увеличение площади белой пульпы селезенки (в%) при грибковой сенсибилизации по сравнению с контролем (контроль = 100%)

Морфометрические данные по этой опытной серии приводятся таблицах 1 и 2. Результаты морфометрических исследований орган oi лимфатических узлов по другим сериям опытов отражены в аналога ных таблицах, которые приведены в диссертации.

На втором этапе исследований проведен сравнительный иммуг морфологический и морфометрический анализ органов иммуногенс в динамике сенсибилизации вакциной и аллергеном из плеснево гриба Alternaria ten. При введении животным вакцины прослеживает статистически достоверная гиперплазия тимуса и селезенки с увели» нием их ВИ на 7 и 21 дни сенсибилизации. В крупных дольках вилс ковой железы характерно богатое содержание тимоцитов в обоих ci ях при сохранении четкой границы между ними. Вместе с тем мож отметить некоторое увеличение (на 7-17%) относительной площа коркового слоя. Тельца Гассаля в дольках разной величины, но noi вина из них были крупные (диаметром 80-90 мкм), кистозно Tpai формированные или с клеточным детритом (на 7 день сенсибили: ции), или с роговыми массами в их просвете (на 22 день сенсибили: ции).

В селезенке число фолликулов постепенно нарастает и достига 22-25 на 21 день сенсибилизации, увеличивается диаметр фолликуле и вместе с этим увеличивается относительная площадь белой пулы на 54%, но только 143 фолликулов имела реактивные центры. В крг ной пульпе рассеяны мелкие и средние по величине колонии ПК. В г ховых лимфоузлах на всех сроках сенсибилизации вакциной Alterna; ten. превалировала гиперплазия паракортикальной зоны при He6oj том содержании ПК в мякотных тяжах. В поясничных лимфоузла? динамике сенсибилизации нарастает содержание ПК в мякотных ■ жах и выявлен повышенный выход лимфоцитов в синусы мозговс слоя на 21 день сенсибилизации.

Табл. 1. Морфометрические показатели органов при введении аллергена С. albicans

ОРГАНЫ Объект исследования Контроль п=7 М±т 7 день сенсибилизации 14 день сенсибилизации 21 день сенсибилизации

п=4 М±т Р п=10 М±т Р п=8 М±т Р

ТИМУС Весовой индекс (ВИ) 0,53±0,02 0,55±0,03 ■ —■■ 0,65±0,01 <0,01 0,64±0,02 <0,01

Относительная площадь коркового слоя в %% 72,7±1,5 72,6±0,1 — 72,4+1,4 — 72,5±0,7 —

СЕЛЕЗЕНКА ВИ 1,37±0,05 1,54±0,08 >0,1 1,63±0,02 <0,01 1,71±0,09 <0,05

Относительная площадь белой пульпы в%% 13,1±0,6 18,3+0,2 <0,01 24,3±0,3 <0,01 23,0±0,8 <0,05

Диаметр фолликулов в мкм 257,0+9,8 309,0±9,5 <0,05 334,0±8,2 <0,01 305,0±17,3 <0,1

НАДПОЧЕЧНИКИ ВИ 0,48±0,03 0,51±0,02 — 0,47±0,02 — 0,48±0,01 —

Табл. 2. Морфометрические показатели лимфоузлов (в %) при введении аллергена С. albicans

Объект исследования Контроль п=6 М±т 7 день сенсибилизации 14 день С€ зац ¡нсибили-ии 21 день сенсибилизации

п=8 М±ш Р п=8 М±т Р п=6 М±т Р

1 Кортикальная зона с первичными фолликулами 28,7±2,0 24,9+5,7 — 24,9±2,0 — 20,9+4,5 —

Вторичные фолликулы 1,4± 0,5 4,5+1,6 >0,1 3,1±1,0 >0,1 1,1±1,1 >0,1

Паракортикальная зона 13,9± 2,2 23,4±3,2 <0,1 28,7+5,6 <0,1 30,5±2,1 <0,01

Мякотные тяжи 31,3± 2,3 22,7±4,1 — 29,2±4,8 — 20,3±5,6 >0,1

Синусы 24,7+ 5,5 24,5±5,6 — 14,1±3,2 >0,1 27,2+14,0 —

II Кортикальная зона с первичными фолликулами 27,0± 1,0 26,5±1,3 — 24,3±2,5 — 17,5±2,2 <0,05

Вторичные фолликулы 3.4± 0,9 4,1+1,5 >0,1 8,8±1,7 <0,01 4,9+2,6 >0,1

Паракортикальная зона 14,3±0,9 14,2±2,9 — 30,1+1,7 <0,01 26,5+1,1 <0,01

Мякотные тяжи 23,8±2,0 19,0+0,4 <0,01 24,7±2,6 >0,1 19,8±3,0 <0,05

Синусы 31,5±3,1 36,2+5,8 — 12,1±0,6 <0,1 31,3±4,8 —

Ппммриянмр' I — пяуппир nunrfimnnki' (I_ппагииииые nMMrhnv^m.1

IJ

На 7 и 21 дни сенсибилизации отмечено статистически достоверное 1еньшение ВИ надпочечников. При морфологическом изучении обнару-:но: атрофия клубочковой зоны, превалирование пучковой зоны над гчатой по ширине (в то время как у контрольных морских свинок сетча-я зона была всегда более широкой, чем пучковая).

У всех животных, сенсибилизированных аллергеном Alternaria ten., мечена выраженная гиперплазия вилочковой железы с увеличением от-сительной площади коркового слоя в дольках до 80% и гиперплазия се-зенки с увеличением относительной площади белой пульпы до 16%.

Абсолютный вес тимуса у многих животных на 14-21 дни сенсибили-ции превышал 500 мг, и ВИ его был увеличен в два с лишним раза тс. 4) , что позволило нам обозначить этот процесс как тимомегалия. За гт выраженной клеточности коркового и мозгового слоев граница меж-ними во многих дольках была стушевана. В дольках нарастает число упных телец Гассаля (диаметром 80-100 мкм) с "роговыми жемчужина-[". В селезенке нарастает число фолликулов до 20-25 в поперечном срезе гана; причем большинство из них двухконтурные с широкой пиронино-льной В-зоной. Небольшая часть фолликулов селезенки на 21 день сен-эилизации имела трехконтурный рисунок за счет реактивных центров и скоплений молодых пиронинофильных клеток (типа пролимфоцитов) иде полулуний. В красной пульпе выявляются небольшие гнезда ПК.

1,2 1 ■

0,8 -• 0,6 -0,4 --

•Тимус (вакцина) Надпочечник (вакцина) Тимус (аллерген)

- Надпочечник (аллерген)

0,2 -•

о -(-1-1-1

Сонтроль 7 день 14 день 21 день

Рис. 4. Изменения ВИ тимуса и надпочечников при сенсибилизации антигенами Alt. tenuis

В поясничных лимфоузлах в 75% случаев преобладал иммунный от по гуморальному типу с накоплением ПК в гиперплазированных мяк ных тяжах с 7 дня сенсибилизации, что коррелирует с увеличением от; сительной площади последних. В паховых лимфатических узлах имму морфологическая картина была неоднозначной: в половине случаев п обладала плазматизация мякотных шнуров, а в другой половине прева ровала гиперплазия кортикального плато с паракортикальной зоной, всех сроках сенсибилизации животных аллергеном Alternaría ten. хар терно было снижение ВИ надпочечников до 0,4 (рис.4), что можно обт нить атрофией сетчатой зоны.

Результаты исследований кандидозной гипосенсибилизации Внутрикожные пробы с аллергеном Candida alb. на 87-88 дни вакщ ции показали положительную реакцию гиперчувствительности на ^ (диаметр очага 16-19 мм) через сутки у 6 морских свинок, и у двух живот] эта реакция была положительной на +. У морских свинок 7-ой се (опытных) положительная внутрикожная проба была через сутки на + )Н половине случаев (диаметр очагов 10-13 мм) и в половине случаев она б; отрицательной. Показатели ППН-теста в обеих сериях также отличал средний уровень повреждения нейтрофилов в контрольной серии сосга 0,19, а в серии животных с гипосенсибилизацией — 0,13 (рис. 5). Причем, агностически значимые уровни ППН чаще совпадали с теми кожш тестами, где регистрировались проявления гиперчувствительности.

Ш Вакцина С. alb S Десенсибилизация

C.alb ■ Вакцина Alt. ten. □Десенсибилизация Alt. ten.

Рис. 5. Уровни ППН-теста у вакцинированных и десенсибилизированных животных на 90 день опыта

Активная иммуноморфологическая реакция сохраняется в селезенеке >егионарных лимфатических узлах через 3 месяца после введения канди-зного антигена (вакцины). В срезе селезенки число фолликулов варьиру-от 20 до 30; средний диаметр фолликулов был 227 мкм, а площадь белой гсьпы в среднем составила 16,2%; отмечена повышенная пиронинофилия гток реактивных центров и В-зоны фолликулов, но колонии ПК в крас-й пульпе были небольшие. В лимфоузлах фолликулы небольшие по ве-чине, но большинство из них с реактивными центрами. Характерно илие ПК в мякотных тяжах с наличием клазматоза в этих клетках.

Морфо-гистохимическое изучение иммунокомпетентных органов вы-1ло снижение активности иммуноморфологических реакций в регио-рных лимфоузлах и селезенке у животных, которым проводилась гипо-1сибилизирующая терапия. У опытных морских свинок 7-ой серии от-чено уменьшение числа фолликулов в селезенке (18-20 в срезе) и корко-м слое лимфоузлов; реактивные центры в них мелкие с бедным содер-нием РНК. Характерно выраженное снижение РНК и в В-зависимой зо-фолликулов селезенки, отсутствие ПК в красной пульпе и мякотных [урах паховых лимфоузлов. Мякотные тяжи в поясничных лимфоузлах 5ольшие и содержат умеренное количество ПК. В лимфоузлах сохраняя гиперплазия паракортикальной зоны, удельный вес площади -кото-й даже стал больше по сравнению с контролем. . .

Сравнительное изучение ВИ тимуса и надпочечников показало, что цественной разницы в контрольной и опытной сериях по данному пока-елю нет; не обнаружено видимых различий и в морфологической »уктуре этих органов. В структуре долек тимуса отмечается богатая кле-шость коркового и мозгового слоев с четкой границей между слоями; [ьца Гассаля в основном мелкие и число их не превышает 5-6 на дольку, я клеточные с небольшой гематоксилиновой зернистостью.

Следовательно, полученные данные свидетельствуют об определен-м угнетающем эффекте специфической гипосенсибилизации канди-(ным аллергеном.

Результаты исследований плесневой гипосенсибилизации

Оценивая уровень сенсибилизации в контрольной и опытной сер животных при помощи метода "in vitro" мы выявили в среднем невысо! но сходные показатели повреждения нейтрофилов — 0,17 в контроле и в опыте (рис.5). Однако, следует отметить, что в группе вакцинирован] морских свинок (8 серия) пробы ППН-теста были всегда положительнь и колебались от 0,11 до 0,21 в то время как в опытной 9-ой серии жш ных в 1\3 случаев ППН-тест был отрицательным, а в положительных ( чаях индекс повреждения нейтрофилов колебался от 0,11 до 0,24.

Морфо-гистохимическое изучение вакцинального процесса мере месяца после введения антигена Alternaría ten. показало, что активная муноморфологическая реакция сохраняется в селезенке и лимфатичес узлах. Весовой индекс селезенки вырос до 1,67. Количество фолликуле срезе селезенки варьирует в пределах 25-30, но половина из них имеют большую величину, а другая половина фолликулов имеют затухающие активные центры со слабой пиронинофильной окраской; в реактив] центрах преобладают пролимфоциты. Средний диаметр фолликулов í 318 мкм, а общая относительная площадь белой пульпы составила 18, В-зона фолликулов слабо окрашена пиронином, но отмечается яркая ронинофильная окраска клеток в красной пульпе, среди которых болы процент ПК.

Реактивная гиперплазия фолликулов выявлена как в поясничных, и в паховых лимфатических узлах. Наряду с гиперплазией паракортик: ной зоны в поясничных лимфоузлах встречаются скопления лимфоблас среди фолликулов в корковом плато; в краевых и мозговых синусах ь рофаги окружены кучками лимфоцитов (по 4-7 клеток). В паховых л фолузлах можно отметить появление вторичных фолликулов с пирощ фильными реактивными центрами в мозговом слое. Вместе с тем, плаз клеточная реакция в мякотных шнурах была небогатой, а сами мякот тяжи были узкими.

В 9-ой серии подопытных животных, которым проводилась гипосен-¡илизация аллергеном Alternaría ten., активность иммуноморфологиче-:х реакций в селезенке и лимфатических узлах не уменьшилась по срав-гию с контролем. Количество фолликулов в срезах селезенки варьиро-ю от 20 до 30, половина из них была с реактивными центрами. Диаметр гаикулов в среднем составил 298 мкм, а относительная площадь белой [ьпы в среднем была 16,5%. В связи с отмеченной морфологической тиной и ВИ селезенки в данной серии животных был увеличен (1,64). В :Сной пульпе органа рассеяны колонии ПК, наиболее крупные из кото-< располагались под капсулой и по ходу трабекул селезенки. Вторичные шикулы в поясничных и паховых лимфатических узлах небольшие по ичине с потухшими реактивными центрами, поэтому относительная |щадь вторичных фолликулов была меньше у опытных животных по внению с контролем. В поясничных лимфоузлах характерна выражен-

мультилокулярная гиперплазия паракортикальной зоны наряду со чительиой плазматизацией мякотных тяжей, особенно субкортикаль-i; в синусах умеренное содержание лимфоцитов. В паховых лимоузлах ®лена плазматизация мякотных тяжей в 4-х случаях, а в 5 случаях от-алась гиперплазия паракортикальной зоны при бедном содержании в мякотных тяжах.

ВИ тимуса у этих животных (как и у вакцинированных морских сви-) был меньше по сравнению с интактными животными. В 2\3 случаев обладали мелкие (простые) дольки, в которых отмечается некоторое ение коркового слоя, стушеванность границы между слоями за счет ошей клеточности мозгового слоя. В дольках количество телец Гассаля ебалось от 1-2 до 4-5, причем половина из них были кистозно-эвыми. ВИ надпочечных желез в серии животных, получивших десен-¡шизирующую терапию был значительно выше (0,68), чем в контроле 0,05). Это объясняется гиперплазией пучковой зоны и восстановлени-■лубочковой зоны в большинстве случаев.

Резюмируя, можно сделать основной вывод, что при введении г опытным животным антигенов грибов Кандида и Альтернария развив; ся иммунный ответ смешанного характера с включением гуморальнь: клеточных механизмов. Однако, имеются особенности иммуноморфс гических проявлений как в центральном органе иммуногенеза (тим) так и в периферических органах в зависимости от характера антиген его дозы. Наиболее демонстративно проявился тимус-зависимый ими ный клеточный ответ при введении аллергена Candida albicans. У жт ных, сенсибилизированных вакциной Кандида, развивался смешан] иммунный ответ на фоне акцидентальной гипоплазии тимуса. При вв нии антигенов Alternaría tenuis на фоне резкой гиперплазии тимуса и поплазии надпочечников со стороны периферийных органов иммуног за преобладала гуморальная реакция иммунного ответа. Апробация i дидозного аллергена по гипосенсибилизирующей схеме на вакциниро: ных животных дала положительные результаты, что выразилось в зн: тельном ослаблении внутрикожных проб, снижении уровня ППН-те угнетении иммуноморфологических процессов в лимфоидной ткани, ражающих гуморальный тип иммунной реакции. Аналогичного эфф| не получено при применении аллергена Alternaría tenuis в сходной ri сенсибилизирующей модели.

ВЫВОДЫ

1. Аллергены Candida albicans и Alternaría tenuis обладают bj женными иммуногенными свойствами, сходными с действием анало ных вакцин, и вызывают смешанный по характеру иммунный ответ, н значительными отличиями друг от друга.

2/ Сенсибилизация аллергеном и вакциной Candida albicans харг ризуется развитием преимущественно клеточного типа иммунного от с адекватной физиологической реакцией тимуса.

3. Сенсибилизация аллергеном и вакциной Alternaría tenuis вед формированию преимущественно гуморальной иммунной реакции на не развития тимомегалии и гипоплазии надпочечных желез.

4. Комплексный количественный морфометрический анализ тим лимфатического аппарата позволил уточнить характер прямых функ

[ьных связей в иммунной сети и обратной связи в тимико-эндокринном не при грибковой сенсибилизации.

5. Сенсибилизация морских свинок антигенами грибов Candida icans и Alternaría tenuis ведет к формированию кожной гиперчувстви-ьности, которая находит отражение в развитии феномена Джонса-'ута.

6. Сенсибилизация животных антигенами грибов Candida albicans и ernaria tenuis сопровождается появлением диагностически значимых шней ППН-теста, чаще совпадающих с кожными реакциями гиперчув-ительности, характерными для преимущественно гуморальной иммун-í реакции.

7. Получен положительный эффект при специфической гипосенсиби-ации аллергеном Candida albicans у вакцинированных животных, ме-;изм которой связан с угнетением рибонуклеопротеидного обмена в исунокомпетентных клетках.

8. При специфической гипосенсибилизации аллергеном Alternaría lxís активность иммуноморфологических реакций в селезенке и регио-1ных лимфатических узлах не уменьшилась, а уровни ППН-теста осга-ись повышенными.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Основные положения диссертации используются в учебном процес-на кафедрах патанатомии и патофизиологии КГМУ при изложении ы: "Патогенез и иммуноморфология аллергических процессов".

2. Отдельные фрагменты работы вошли в отчеты НИР лаборатории разработке грибковых аллергенов Казанского НИИ эпидемиологии и сробиологии.

3. Полученные данные свидетельствуют об определенном угне->щем эффекте специфической гипосенсибилизации кандидозным аллер-ом, в связи с чем данный аллерген может быть использован в клиникой практике для лечения аллергических заболеваний, обусловленных бом Candida albicans.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Нефедов В.П., Лукашков В.М., Бушеев О.И., Нефедов О.В. Изучение нической токсичности и иммуногенности аллергена Кандида альбиканс.\\ фекционная аллергия и иммунитетД Научные труды, Казань, 1986, с. 42-44.

2. Нефедов В.П., Лукашков В.М., Нефедов О.В.Иммуноморфология ка дозной сенсибилизации.Юкспериментально-клиническая иммунопатолог аллергология\Межвузовский сборник научных трудов.Чебоксары, 1988,с.70-

3. Нефедов В.П., Лукашков В.М., Ефимова Л.Е., Нефедов О.В. Морфол органов иммуногенеза при кандидозной десенсибилизации. \\ Нарушение s низмов регуляции и их коррекция. \ IV Всесоюзный съезд патофизиол< Москва- Кишинев, 1989, т.1, с.349.

4. Нефедов В.П., Нефедов О.В. И м м у н о - м ор ф о л о г и ч еская оценка кандидо сенсибилизации в эксперименте. \\ I Всесоюзный иммунологический с (Сочи, 15-17 ноября 1989 г.).Тезисы докладов, Москва, 1989, т.1, с. 236.

5. Нефедов В.П., Лукашков В.М., Сайфутдинов Ф.Г., Нефедов O.B. Mo; ция вторичного иммунодефицита при антигенной нагрузке. \\ VIII Всесою. съезд патологоанатомов (тезисы докладов). Москва, 1989, с.223- 224.

6. Нефедов В.П., Лукашков В.М., Нефедов О.В., Ефимова Л.Е. Иммуно фология кандидозной сенсибилизации и десенсибилизации. \\ Совершенен ние профилактики, диагностики, лечения и реабилитации в практическом : воохранении. \ Тезисы докладов конференции ГИДУВа. Казань, 1990, с. 148

7. Нефедов В.П., Глушко Н.И., Нефедов О.В. Иммуноморфология плес: грибковой сенсибилизации в эксперименте. \\ Новые методы диагностики чения. \ Материалы Республиканской научно-практической конференции зань - Нижнекамск, 1994, с. 221- 222.

8. Нефедов В.П., Глушко Н.И., Нефедов О.В., Лукашков В.М. Изученш муногениых свойств плесневого гриба Альтернария тенуис. \\ Казанский л цинский журнал, Í994, №6, с. 449- 453.

9. Нефедов В.П., Глушко Н.И., Нефедов О.В. Иммуноморфология плеа грибковой десенсибилизации. \\ Новые методы диагностйки и лечения. \ Те докладов Республиканской научно-практической конференции. Казань, N цина, 1995, с. 355- 357.

10. Нефедов В.П., Нефедов О.В., Глушко Н.И., Лукашков В.М. \\ Иммунс фологическая оценка сенсибилизации плеснево-грибковым и кандидозньп агностическими аллергенами. \\ Сборник тезисов I съезда Международног юза ассоциаций патологоанатомов. \ Москва, 1995, с. i 12.