Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Иммунные реакции на антигены гриба ASPERGILLUS FLAVUS при экспериментальной микогенно-стафилококковой сенсибилизации

!2Э 0.6. S 2

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ КАЗАХСТАНА

КАЗАХСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭПИДЕМИОЛОГИИ, МИКРОБИОЛОГИИ И ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ МИНЗДРАВА КАЗАХСТАНА

На правах рукописи

ЮРИЙ ДАЛИЕВИЧ АЗИЗОВ

ИММУННЫЕ РЕАКЦИИ НА АНТИГЕНЫ ГРИБА ASPERGILLUS PLAVUS ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МИКОГЕННО — СТАФИЛОКОККОВОЙ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ

(14.00.36 — Аллергология и иммунология)

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Алма-Ата — 1992 г.

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии Андижанского государственного медицинского института

Научный руководитель: Доктор биологических наук,

профессор В. Г. БРЫСИН

Официальные оппоненты: Лауреат государственной премии Казахстана, доьстор медицинских наук, профессор Р. К. ЕРМЕКОВА

Доктор медицинских наук, профессор С. М. ПЛЕШКОВА

Ведущее учреждение: Московский научно-исследователь" . ский институт вакцин и сыворо-

ток имени И. И. МЕЧНИКОВА

Защита состоится « » 1992 г. в

часов на заседании специализированного Совета К.079.05.01 в Казахском НИИ эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней Министерства здравоохранения Казахстана (480002, г. Алма-Ата, ул. Мака-таева, 34).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казахского НИИ эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней МЗ Казахстана.

Автореферат разослан « » 1992 г.

Ученый секретарь специализированного Совета, кандидат медицинских наук

Н. М. НУРКИНА

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблема. Наряду о общим ростом числа заболеваемости различными яллергозоми наблюдается рост числа больных с поливалентно!! повышенной чувствительностью, При таких широко распространенных заболеваниях ¡сак поллинози, инфеюдаонно-яллопгичсскпя бронхиальная астма, риносвнусопатия, пищевая и леклпственпля аллергии, а также при хронических инфекционных заболеваниях, в патогено-зе которых тлеется аллергический компонент, редки случаи моносенсибилизации, значительно чаще наблюдается множественная повышенная чувствительность (О.А.Васильева с соавт., 1372; Е.О.Чернушеяко, 1973; Р.К.Ермокова, 1933; Г.В.Булава с соавт., 1907). Ввиду того, что при полисенсибплизаиии повышена чувствительность одновременно к нескольким аллергенам, среди которых встречаются родственные в антигенном отношении и гетерогенные аллергены.(И.С.Гущин о соавт., 19В2), эти наиболее тяжелые и сложные формы аллергических состояний трудно диагностировать, слолно лечить и предупреждать, так как они мало изучены в клинике и эксперименте. Для определения правильной тактики проведения специфической диагностики я специфической гипосенсибилясйрувдей терапии необходимо знать патогенез сложных сочотпчпнх форм аллергии, особенности взаимовлияния иммунологических переотроек организма на несколько антигенных стимулов, вызывающих в организме иммунологические реакции, опосредованные Т~ я В-системамд '• иммунитета. При сочетанных формах аллергии эти мехяниаш; изучены недостаточно. Для выяснения причин роста поллал-лергии, для разработки профилактических мероприятия по ее снижению и для решения многих практических вопросов по диагностике и специфической тпосенсибилиз.-чуи состояния поляаллергия необходимы экспериментальные ргяр;:бот:ш моделей сочетанных оенсиоилкзаций к различным аллергенам, гетерогенным по сиопй антигенной природе (Р.К.Ирмеков/!, 19ВЗ; Х.С.Нугманова, Д.С.Нугмановп, 1937; Б.З.Клген, 1С1: 9).

Экзогенные этиологические наборы аллергии могут сить различными. Нередко .причиной аллергических состояний могут явиться плесневые грибы и стафилококки (П.П.Кягтш, ¿.И.;,о-

Качалов, 19Г,3; В.ГЛрыиин, 1975; В.А.Фрадкин, 1978). По оу-щеотвувщей классифилцни оба вида микроорганизмов относятся к инфекционным аллергенам (А.Д.Адо, 1978); проникая в организм контактным, аэрогенным я пероральнш путем, онд могут обусловить клинические проявления заболеваний различного характера. Плесневые грибы а стафилококки обладают значительным набором опоцифичеоких антигенов, каидый из которых может обусловить изменение иммунного статуса организм ма..Сочетаяное же воздействие грибов и стафилококков модэт привести к конкурирующему, иигибирушцему или усиливающему воздействию (Г.Х.Мирзаяиц с сошзт., I&84). Иммунные механизмы ш!когешю-ста<1илококковой сенсибилизации изучены недостаточно. Принципы и методы лечошш больных с сочетанной кикогенно-стифилококковой сенсибилизацией пока не разработаны (Н.Д.Шеклаков с ооолт., 1986).

Цель работы: Изучить характер формирования иммунных реакций на антигены плесневого гриба Aspergilluo flavus при различных формах сочетание!! плеопево-стафило-кокковой сенсибилизации.

Задачи исследования:

1. Изучить количественные сдвиги Т-, В-лимФоцитов, Т-холпоров и Т-супрессоров в крови и лимфоидннх органах морских свинок н динамике грибковой сенсибилизации.

2. Изучить характер формпрпгпнпл nr/a.iyiuiux реакций на антигены гриба Aspergillus tlavus при введении корпускулярного аллергена указанного гриба на фоне гиперчувотви-тельности замедленного типа к Staphylococcus epUormidio

3. Изучить характер нормирования иммунных реакций на антигены гриба Aspergillus flavue при одновременном введения корпускулярного аллергена указанного гриба и Staphylococcus epiderraidio,

Изучить характер формирования имыушппс реакций на антигены гриба Aspergillus riovuo при введении стафилококкового аллергена на фпчм гиперчув-твитапьности зомедден-нпго типа и в период высоты сенсибилизации к указанному грибу.

¡1 л у ч in л новизна:

I. Апорте изучпин количественные изменения оо стороны

. Т-, В-ллгя'сцитов, Т-хелперов я Т-супрессоров в динамике плесневой сенсибилизации.

2. Впервые изучено ВЛЙЯНЛе антигенов Staphylococcus epidermidis на процессы формирования й течения плесневой сенсибилизации в условиях различных вариантов сочетанного введения аллергенов: сенсибилизация плесневым грибом кз фоне сформированной гишрчувствительности замедленного типа

к стафилококку, одновременное введение стафилококка и плесневого гриба, введение стафилококка на фоне гиперчувст-вителыюсти замедленного типа .к плесневое грибу и введение стафилококка на фоне сформированной плесневой аллергии.

3. Впервые иммунологические исследования с кровью и лимфояднкш органагли животных, подвергнутых сочетанной сенсибилизации, проведены в динамике в течение одного месяца

с производством анализов на 3,- 5, 10, 15, 20 и 30-й дня после сенсибилизирующее, инъекции. грибкового аллергена. Такая периодичность.обследований позволила выязить некоторые закономерности, формирования и течения плесневой аллергии при различных формах ее сочетания.со стафилококковой сенсибилизацией .

Л и ч н ы й в.к л а д. Все- основные разделы диссерта-' циошюй работы выполнены лично автором.

Культура гриба Aspergillus fiavus для приготовления аллергенов1получена от доцента кафедры микробиологии, вирусологии «иммунологии АндГосШ! Хамядова А.Х. Культура staphylococcus epidermidis для. приготовления аллергенов получена от заведующей лабораторией Андимсапской СЭО Абдуллаз-вой Э.Б. Количество белка в аллергенах определено доцзитом ка<1едры биологической хишш АндГосМИ !.1убораково5 Л.Х. При производстве.реакции имлунофлюореспенцяя в качестве неспе-цифическоя шлыунной енворотхя использовали сыворотку крови кролика, сенсибилизированного бензилпенициллином натрия, полученную от доцента кафедры микробиология, вирусологии и К'.иунологпи ЛндГосНИ Улугходхаевой НЛ.

П р а к т и ч е с, к я я. ц е к н о с ,т ь. ..

.1. Разработана модель экспериментальной стафллококко- • плесневой сенсибилизации . Модель ••соче.тяттой стафилококко-плесневой сеисвб1Ш!Зйцип создает возможность для экопери-

ментальной разработки и научного обоснования оптимальных методов специфической иммунотерапии указанных состояний.

2. Изданы методические рекомендации "Иммунологические метода диагностики аллергии к плесневым грибам».Методические рекомендации разработаны в соавторстве о коллегам по кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии АндГосМИ и предназначены для практического здравоохранения.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Микогеннея сенсибилизация вызывает перераспределение в крови и лимфоидных органах морских свинок количественных параметров Е- и ЕАС-РОК и субпопуляций Т-лимфоцитов.

2. Сформированная гиперчувствителькость замедленного типа к стафилококку оказывает стимулирующее действие на" формирование и течение иммуноаллергическйх реакций на анти-г'ены плесневого гриба.

3. Антигены стафилококка оказывают стимулирующее влияние на течение плесневой сенсибилизации при их введении в организм животных одновременно с грибом или на фоне гиперчувствительности замедленного типа к грибу.

Апробация . работы. Материалы диссертация доложены на заседаниях кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ЛндГосМИ (1980-1992 г.г.), на заседаниях проблемной комиссии "Клиническая иммунология и аллергология" АндГосМИ (1980-1992 г.г.), на областных научных и научно-практических конференциях молодых ученых (1980-1986 г.г.) на конференциях ученых АндГосМИ (1980-1991 г.г.), на республиканских конференциях: по медицинской микологии (1983 г.); научной конференции, посвященной актуальным вопросам краевой аллергологии и патологии детей (1985 г.), конференции "Иммунодефициты и НьА-система" (1989 г.) и на' десятой Ленинградской микологической конференции.'(1982 г.).-

Публикации. По теме диссертация опубликовано 7 работ.

Структура и объем- д и с с е р т а ц I

Диссертация состоит,из введения, обзора литературы, 5 глав собственных .исследований, -заключения.и- выводов

- 5 -

Общий объем диссертации 155 страниц, в том числе I рисунков, 44 таблицы. Литературный указатель включает 38 источников, из них 152 наименования.на русском языке

86 наименований на иностранных языках.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Нив от ныв. Для изучения вопросов, составивших ель настоящей работы, обследовали 529 беспородных полово-релых морских свинок массой 300-350 гри 320 половозрелых роликов породы "Шиншилла" массой 3,0-3,5 кг. Для ясследова-ия использовали от животных кровь, тимус, почку, селезенку, егхое, печень я паховый лимфоузел. Исследования проводили а 7 группах животных, которых распределили следующим обра-ом: I группа - 48 пнтактных морских свинок и 41 кролик; группа - 10 морских свинок и 10 кроликов, сенсибилизиро-энных аллергеном из Staphylococcus epidermidi3 ; группа - 103 морские свинки и 109 кроликов, сенсибилнзи-ованных взвесью клеток гриба Aspergillus fiavus ; 4 груп-э - 92 морские свинки и 40 кроликов, сенсибилизированных эибом на фоне ГЧЗТ к стафилококку; 5 группа - 92 морские зинки и 40 кроликов, сенсибилизированных одновременно гри-эм и стафилококком; 6 группа - 92 морские свишсл а 40 кро-зков, сенсибилизированных стафилококком на фоне ГЧЗТ к рибу; 7 группа - 92 морские свинки и 40 кроликов, еенсиби-13ированннх стафилококком в период высоты сенсибилизации грибу.

Аллергены. Взвесь клеток гриба Aspergillus Lavus для сенсибилизации животных готовили по методу .Г.Брнсйна (1975). Аллерген из гриба Aspergillus fiavus тя иммунологических исследований готовили путем экстрагиро-ания его клеток буро-фосфатным буфером по методу В.Г.Еры-ma (1975). Аллерген из убитой культуры Staphylococcus s.idermidia готовили с использованием методов А.Е.Взрши-зра (1971), Н.Д.Беклемишева и Г.С.Суходоевой (1979), .К.Ермековой (1980). Стафилококковый аллерген готовили в зух концентрациях: 20 млрд микробных тел в одном мл (ис-хльзовали для сенсибилизации животных) и 10 млрд микробных

тел в одном мл (использовали для постановки иммунологических реакций).

Методы сенсибилизации. 2,5%-ную взвесь клеток гриба Aspergillus flavua в неполном адыо-ванте Фрейнда вводили животным в область внутренней поверхности бедра левой лапки, морским свинкам в количестве 0,6 мл, кроликам - 1,5 мл. Данные способы сенсибилизации животных грибковым аллергеном разработаны В.Г.Брысиным (197.5).

Сенсибилизацию животных стафилококковым аллергеном проводили, используя методики Н.Д.Беклемишева и Г.С.Суходоевой (1979) и Р.К.Ермековой (I9bU;, разработанные ими душ воспроизведения модели ГЧ5Т к стафилококку у.морских свинок. Морским свинкам вводили однократно в подушечку задней правой лапки 4 млрд микробных тел стафилококка (,0,2 мл аллергена, предназначенного для сенсибилизация) в смеси с равным количеством адъюванта Фрейнда. Кроликам вводили однократно в подушечку задней правой лапки 8 млрд.микробных тел стафилококка (.0,4 мл аллергена, предназначенного для сенсибилизации) в смеси с равным объемом неполного адъюванта Фрейнда.

При воспроизведении различных вариантов сочетанной ми-когенно-стафилококковой сенсибилизации 4-й группе животных вводили стафилококковый аллерген за ,4 недели до сенсибилизации грибом, 5-й группе стафилококковый аллерген вводили одновременно с сенсибилизирующей инъекцией гриба, 6-й группе стафилококковый аллерген вводили на третий день после сенсибилизации грибом, 7-й'группе животных стафилококковый ал- • лерген вводили на 15-й день после сенсибилизации грибом.

В 3-й, 4-й, 5-й, 6-й и 7-й группах животных иммунологические исследования проводили на 3, 5,'10, 15, 20 и 30-й дни после сенсибилизирующей, инъекции взвеси клеток гриба. Во второй группе животных иммунологические исследования проводили с использованием стафилококкового аллергена, предназначенного для иммунологических исследований, однократно, на 30-е сутки после сенсибилизирующей инъекции стафилококковым аллергеном. - :

Методы исследования. Для выявления ГЧНТ к грибу Aspergillus fiavus применяли реакцию непря-

мой дегрануляции базофялов (.РДБ) (W. е. shel-ley , 1962). У морских свинок воспроизводили анафилактический шок. Для выявления ГЧЗТ к грибу Aspergillus fiavus ' использовали коя-ные пробы, которые ставили внутрикожно на боковой, предварительно депилированной поверхности грудной клетки животных, с оценкой результатов через 24 часа по И.Лишка '(,1963).

Для определения ГЧЗТ К Staphylococcus epidermidis использовали кокнке пробы и непрямой тест тормокения миграции лейкоцитов по Л.Н.Камардину с соавт. (.1974).

С целью изучения распределения в органах сенсибилизированных кроликов грибкового - аллергена (.АГСК) и противогрибковых иммуноглобулинов (ИГСК) использовали-'метод непрямой иммунофлюоресценцяи тканей по л. з.Соопз ; (1942, 1950) в модификации Д.Д.Заурова (1978). Для оценки количества иммунокомпетентных клеток:мы использовали определение количества Б- и ЕАС-РОК, 0-лимфоцитов в крови, тимусе,. селезенке и паховом лимфоузле морских свинок.с использованием метода Д.С.Нугмаповой 11978) с некоторыми наши™ изменениями; определение количества Т-хелперов и Т-супрессоров в крови, селезенке и.паховом лимфоузле морских свинок с использованием метода M.l.Ricardo (1980) и рекомендаций Ж.С.Нугмановой, Д.С.Нугмановой (1987). и Н.Д.Беклемишева и соавт. (1987).

Объем проводенных исследований представлен в таблице if I.

. Таблица JS I ОБЪЕМ ПРОВЕШЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ .

\и/п ! Использованные тесты . \ «Йй™

1

2

3

4

5

6

7

8

ИммуносТшзсресценция . ! 10680

Дегрануляция базофилов ■ ! 390

Реакция торможения миграции лейкоцитов '40.

Кожине пробы . . ! 142

Анафилактический шок ! 15

Определение количества Е-РОК ! 616

Определение количества ЕАС-РОК . ! 616 Определение количества Т-хелцеров

I

и Т-супрессоров I 328

■ И т ого Т 12327

Статистическую обработку полученных результатов проводили методом вариационной статистики. На основании полученных данных высчитывали показатели существенной разницы ( г ) По таблице Стъюдента значений "Р" (И.А.Ойвшг, 1960) определяли вероятность различий (И.П.Ашмарин с соавт., 1975). За достоверные различия принимали значения не ниже Р/0,05.

■'.... РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Динамику изменений иммунологических показателей при . грибковой и различных сочетаниях микогенно-стафилококковой сенсибилизации изучали, сравнивая полученные результаты с показателями йнтактных животных (Р) или животных с грибково сенсибилизацией (Р-^). Сведения о результатах исследования; иммунологических показателей йнтактных животных приведены в таблице $ 2. '

Таблица № 2

ПОКАЗАТЕЛИ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ У ИНТАКТНЬК ЖИВОТНЬ

И ! п/п !

Показатель

М +

! Наименование ! аллергена.

1.

2.

3.

4.

5.

МОРСКИЕ СВИНКИ: ' .

Реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ), индекс торможения:

Кожные пробы, мм**: : \

Реакция дегрануляции базофилов 1РДБ), % :

Число Е-РОК ^

- в тимусе, %

- в крови . % :

абс. количество :

- в паховом лимфоузле,

- в селезенке, % :

Число ЕАС-РОК ;'

- в тимусо, % :

- в коози

V» .

абс. количество : .

- в паховом лямтоузле,^:

- в селезенке, й -:

1,01+0,05 '

О О

1,25+0,62

74,6+1,8

28,7+1,2 122670+80,0 22,3+174 17,811,4

0,4+0,1

12.7+0,6 -. 542,0+55,0 . 16,1+1,327,3+1,3. .

.ерШегт.

Аэр.Г1ауив ергйет.

Азр.£ 1а,Уиз

Продолжение таблицы $ 2

п/п тт ■ ' . Показатель { М + га Наименование аллергена

6. Число О-лямфоцитов, % - в крови : - в паховом лимфоузле: - в селезенке : 58,6+1,4 61,6+1,9 54,9+1,5

7. Число Т-супрессоров,$ - в крови : - в паховом лимфоузле: - в селезенке 11,2+0,9 7,8+0,1 17,7+0,49

8. 1 Число Т-хелперов, % - в крови : - в паховом лимфоузле: - в селезенке : 25,7+0,96 9,1+0,17 8,2+0,38

9. Соотношение Т-хелпе-ры/ Т-супрессоры - в крови : - в паховом лимфоузле: - в селезенке : КРОЛИКИ: 2,29+0,27 1,17+0,15 0,46+0,01

I. Кожные пробы, мм^: 0 0 Азр.ГХауиз Э^ергйепа.

2. РТМЛ, индекс тормож.: 1,01+0,01 З'к.ер1<1е:га.

3. РДБ, % : 1,56+0,34 Авр.ХХлуиа

4. 5. 1 Число клеток, содержащих грибковый аллерген (АГСК), ИИФ - в паховом лимфоузле: - в селезенке : - в легком : - в печени : - в почке : - в тимусе : Число клеток, содержащих иммуноглобулины к грибковому аллергену (ИГСК), ИИФ - в паховом лимфоузле: - в селезенке : - в легком : - в печени : - в почке : - в тимусе : ОООООО ОООООО 1 1

- 10 -

Показатели гиперчувствятельности у морских свинок, сенсибилизированных взвесью клеток гриба Aspergillus flavus, выглядели следующим образом (.таблица й 3):

Таблица tö 3

ПОКАЗАТЕЛИ ГИПЕРЧУВСТВИТЕЛЪНОСТИ У МОРСКИХ СВИНОК В ' ДИНАМИКЕ ГРИБКОВОЙ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ (М х и)

Дни

исследования

Результаты кожных проб, ММ2

Реакция дегрануляции базофилов, %

10 15 20 30

206,50+20,52°°° 313,67+26.82°°° 300 0+34,08 °°° I89,25+lä,II°°° 184,75+53,05°°° 181,50+58,38°°°

3,33+0,81 4,83+1,20° 7.08+0,81°° Й,8+0,81°°° 8, ¿0+0,95°° 5,50+0,48°°

Примечание: о - Р/0,05; оо - Р/0,01; . ооо - Р/0,001 по отношению к показателям интактных кивотных.

Из таблицы видно, что внутрикожные пробы становились положительными с 3-го дня исследования, достигали максимального уровня на 5-й день наблюдения, затем снижались, но интенсивность их держалась на высоком уровне до конца исследуемого срока.

У морских свинок, сенсибилизированных грибковым аллергеном, с 5-го дня наблюдения повышался процент дегранулиро-ванных под воздействием специфического грибкового аллергена базофилов; показатели РДБ плавно повышались, достигая максимальных значений на 15-й день исследования, затем снижались, не достигая уровня показателей интактных животных.

При внутривенном введении морским свинкам в 15-й день исследования 2,0 мл специфического грибкового аллергена у них развивался анафилактический шок (анафилактический индекс был равен 3,3).

У кроликов, сенсибилизированных взвесью клеток гриба Aspergillus flavue ' , динамика показателей ГЧЗТ (кожные пробы) и ГЧПТ (РДБ) полностью повторяли динамику аналогичных показателей у морских свинок с грибковой сенсибилизацией. Это дало нам основание полагать, что закономерности формирования и течения плесневой сенсибилизации (при прочих рав-

- ii -

ных условиях) не зависят от вида животного.

Выявленная нами динамика развития ГЧЗТ я ГЧНТ при грибковой сенсибилизации согласуется с более ранними аналогичными исследованиями и соответствует общим закономерностям развития аллергических реакций при искусственной сенсибилизации ответных полноценными антигенами, вводимыми в средних дозах со стимулятором Фрейнда (Г.А.Легкоева, 1974; В.Г.Ерысин, 1975; Д.Д.Зауров, 1984).

Формирование плесневой сенсибилизации сопровождалось появлением в яммунокомпетентннх органах кроликов аитягенсо-держащих и иммуноглобулинеодержащих клеток (АГСК и ИГСК).

АГиК выявлялись в паховом лимфоузле, селезенке, легком, печени я почке только з 3 и 5-й дни наблюдения, причем в 3-й день их количество (значения ИИф) было выше во всех органах. Максимальное количество АГСК в 3-й день исследования выявлялось в паховом лимфоузле (М=0,036+0,002, Р/0,001), что, по-видимому, связано с их ролью в захвате и переработке антигена (R.H.Kelley , 1975; R,G.White et all.,1975; /.cho, P.н.Bniyn , 198I), в обеспечении эффективных межклеточных взаимодействий ( D.R.ïriger , 1976; V/.M.Steven, Г980), в дифференцировке пула рециркулируюпшх лимфоцитов ( D.s.Kumararathc , 1981), з формировании иммунологической тамяти ( м.м.Ponzio ot all. , 1980); почке (М=0,039+0,0015, '¿О,001), что, видимо, связано с их выделительной функцией ; H.Msti-Ser , 1979) и в печени (М=0,028+0,002; Р/0,001), jto связано, видимо, с функцией гепатоцитов по переработке ¡ужеродного материала вирусного, бактериального или грибкового происхождения ( d.r,Trlgor . 1976). в остальных ¡рганах АГСК выявлялись в меньших количествах, в тимусе не . шявлялись совсем.

ИГСК выявлялись в легком, паховом лимфоузле, селезенке, ючке и печени. Наиболее значительные их количества мы обнашивали в селезенке и паховом лимфоузле с максимальным знанием ИКФ в отих органах на 15-й день исследования (соответственно МрО.О'ШО.ООб; Р/,0,001 и М2=0,032+0,002, ¿0,001). Динамика выявления ZTCK в селезенке и паховом лдм-оузле совпадала по времени с динамикой интенсивности пока-ателей непрямой РДЕ, что может свидетельствовать об активом участии гэтих органов в антитологенезе при грибковой

сенсибилизации.

При количественном определения Т- и В-лимфоцитов, субпопуляций Т-лимфоцитов мы использовали тесты розеткообразо-вания, поскольку они характеризуют функциональное состояние лимфоцитов (Г.В.Порядин с соавт., 1984; А.Н.Чередеев, Л.В. Ковальчук, 1988). Динамика содержания их в крови и органах морских свинок в процессе грибковой сенсибилизации была неоднозначной, что, вероятно, обусловлено гетерогенностью их функций в процессе иммуногенеза.-

В паховом лимфоузле изменение количественных соотношений иммунокомпетентных клеток мы наблюдали в 3, 5 и 10-й дни исследования, они характеризовались увеличением количества Е-, EAC-F0K и,Т-хелперов и уменьшением числа Т-супрессоров и О-лимфоцитов. Максимально большое число E-F0K обнаруживалось на 3-й день iM=32,4+I,4; Р/0,01), ЕАС-РОК - на 5-й день (1,1=22,9+0,7; Р/0,01;, Т-хелперов - на 5-й день исследования (М=13,4+0,3; Р/0,01); минимальное количество Т-супрессоров выявляли на 5-й день иЛ-6,0+0,33; Р^0,05) и О-лимфоцитов -на 5-й день исследования (,М=46,5+1,2; Р^О,001). Примерно в эти ке сроки, особенно на 3-й день исследования мы отмечали высокую концентрацию клеток, содержащих грибковый антиген в паховом лимфоузле, что в совокупности может свидетельствовать о том, что при подкаяном введении корпускулярного аллергена гриба Aspergillus fiavus, поверхностные антигены которого являются полноценными антигенами ^В.Г.Брысш, 1975;, в паховом лимфоузле, как.органе, где первоначально локализуются антигены, начинает реализовываться иммунный ответ. В нем, при содействии Т-хелперов, приншают непосредственное участие Т- и В-лимфоциты,.что проявляется в их кооперации с макрофагами в лимфоузле и продукцией новых антигенчувстви-тельных лимфоцитов, выходящих в.рециркуляцию, их участием в гуморальном иммунном ответе (, D.A.Eawley et all. ,1972). Дефицит Т-супрессоров, в том числе и на уровне лимфоузлов, может служить признаком развития аллергических реакций и.Н.Чередеев, Л.В.Ковальчук, 1991).

В селезенке отмечалось умеренное увеличение числа . Е-РОК и Т-хелперов (Р/0,05) в 5, 10 и 15-й дни исследования; с 5-го дня наблюдения увеличивалось число EAC-POK (,P/0,0Ij,

- 13 - ,

количество их нарастало, достигая максимальных значений на 15-й день iM=36,4+1,1;- ?¿O,0I), затем снижалось до фоновых данных в 30-й день сенсибилизации. В эти же сроки исследования в селезенке было снижено число Т-супрессоров с наименьшим значением показателя в 15-й день наблюдения (М=14,2+0,21, P/O.Oi;. Указанные изменения со стороны Т- и В-лимфоцитов совпадали по времени с динамикой количественных изменений ИГСК в селезенке, что, на наш взгляд, связано с участием этих клеток в основной,-присущей селезенке, функцией антите-лообразования и обусловленными этой функцией процессами: избирательным накоплением антигена (v.L.Pord , IS72) и, связанной с этим, иммиграцией в селезенку В-лимфоцитов, принимающих участие в антителогенезё (К.А.Лебедев, 1971) и формировании клеток памяти, а также Т-лимфоцитов, лимитирующих иммунный ответ в селезенке (.Р.М.Хаитов, 1972; Р.В.Петров с соавт., 198IJ. Увеличение Т-хелперов, вероятно, объясняется их участием во включении ' В-лимфоцитов в процессы пролиферации и дифференцировки, обеспечивающие накопление соответствующего .клона зрелых плазматических клеток при индукции иммунного ответа, дефицит же Т-супрессоров способствует повышению продукция иммуноглобулина Е антителопродудентами (Р.В.Петров, I976;A.Oehling, С.D.Crisci , 1979; R.S.Geha 197У; I.M.Katona et all. , 1981).

В тимусе.число Е-РОК. в процессе грибковой сенсибилизации было равномерно сниженным (Р£0,05 - Р/0,01) при практически неизмененном числе ЕАС-РОК. Факт уменьшения числа Т-лимфоцитов в тимусе в сочетании с увеличением их числа в периферических лимфоидных органах и крови может свидетельствовать о перераспределении иммунокомпетентных клеток в процессе грибковой сенсибилизации, я выходе.Т-лимфоцитов из тимуса, .что было выявлено.при других видах антигенного воздействия (Ж.'С.Нугманова, Д.С.Нугмансва, 1987).

Вероятно з связи с тем,, что транспортную роль в рециркуляции иммунокомпетентных клеток осуществляет кровь (Р.В.Петров с соавт., 1983), сдвиги количественных показателей Т- и В-лимфоцитов, субпопуляшй Т-лимфоцитов соответ-ст^орапп тлкозым в лпжоидаых органах. Число Е-РОК было равномерно у#*личеиннм .с.3 по 15-й дни (Р/0,05), ЕАС-РОК - с

- 14 -

3 по 20-й дни (Р/0,05), Т-хелперов - с 5 по 15-й дни исследования (.Р/10,05), а число Т-супрессоров снижалось с 3 по 10-й дни 1Р/0,05), число о-лим^оцитов - с 3 по 15-й дни исследования ^¿0,05).

У животных, которым грибковый аллерген вводили на фоне развившейся гиперчувствктельности к стафилококку, наблюдались различия в динамике и интенсивности показателей ГЧНТ и ГЧЗТ к плесневому грибу, а также количественных изменений со стороны иммунокомпетентных клеток в сравнении с аналогичными показателями животных с грибковой сенсибилизацией. Абсолютные значения показателей ГЧНТ и ГЧЗТ были выше во все исследуемые сроки. Кроме того, отмечалось-более раннее проявление ГЧЗТ к грибу в виде максимально высоких результатов в 3-й день исследования кожных проб (М=349,50+29,12; Р^0,05). Процент дегранулированных базофилов под действием специфического грибкового аллергена также увеличивался с. 3-го дня наблюдения.1М=5,91+0,81; Р£0,01; Р^0,05) и с этого момента до конца исследуемого срока был.выше, чем при грибковой сенсибилизации (Р]/0,05).

У данной'группы .животных.на,'5-й день исследования количество клеток, содержащих грибковый антиген, было выше чем при грибковой сенсибилизации, практически во всех исследуемых органах (Р^0,05) , максимально большое их количество обнаруживалось в почке (М=0,039+0,001; Р^О.Об), лимфоузле (М=С,032+0,0004; Р^О.ОЬ), чуть меньше - в печени (М=0,031+0,0004; Р-^0,05) и селезенке (М=0,026+0,0002; . Рр/0,01). Количество ИГСК было большим, чем при грибковой сенсибилизации в селезенке о 5-го дня и до конца срока наблюдения (Р^О.ОЬ) с максимально высоким значением ИИФ на 15-й день сенсибилизации (М=0,060+0,005; Р^0,05), а в лимфоузле - в 10-й день исследования (М-0,036+0,002; Р^О,05).

Выявлено резкое снижение числа Т-лшлфбцптов в тимусе во Есе сроки исследования (с 3 по 20-й дни сенсибилизации . Р-^/О.О!; на 30-й день Рр£0,05). В паховом лимфоузле количественные показателя.Е-РОК в 5 и 10-й дни наблюдения (Р-^0,05), ЕАС-РОК - в 3-й день (Р-^0,05), Т-хелперов - с 3 по 15-й дни наблюдения (Р^0,0Ь)'превышали аналогичные по-

- 15 -

сазателл животных с грибковой сенсибилизацией, а число Г-сулрессоров с 3 по 15-й дни (Р^0,05) и число 0-лимфоцитов з 3 по 10-й'дни наблюдения (Р^0,01) были ниже- показателей при грибковой сенсибилизации. В селезенке во все исследуемые зроки количественные показатели Е-РОК (?^0,01), ЕАС-РОК (Рр£0,05), Т-хелперов (Р^0,05) были выше, а показателя Т-супрессоров (РрЛ),05) и О-лимфоцитов (РрЛЗ,0Э1) были ниже, чем при грибковой сенсибилизации, при резком смещений показателя Т-хелперы/Т-супрессоры (Р-^0,01) в сторону увеличения числа Т-хелперов. В крови с 5-го дня до конца исследуемого зрока наблюдали аналогичные изменения со стороны Т- и В-лим-^оцитов, О-лимфоцитов. Количество Т-хелперов превнпало данный показатель животных с грибковой сенсибилизацией в 10, 20 л 30-й дни наблюдения (Р-^0,01). Соотношение Т-хелперы/Т-суп-зессоры было смещено в сторону увеличения Т-хелперов ео все юследуекые сроки (Р^0,05).

Указанные особенности позволили нам сделать заключение, 1то аллергический фон, создаваемый антигенами стафилококка, жазывает стимулирующий эффект, ускоряя формирование плесне-зой аллергии, вызывая более глубокие изменения Т- и В-систе-ш иммунитета и пролонгируя во времени состояние гиперчувст-штельности к плесневому грибу. Указанный феномен можно (бъяснить биологическими свойства?,ад стафилококка стимулировать »азвитие сенсибилизация на все последующие аллергены Нее,1ко Р.З. , А.О.С-гох , 1973).

При одновременно!"« введении стафилококкового и грибково-'о аллергенов мы не обнаружили существенной разницы в пока-ателях данной группы животных и животных с грибковой сенси-илизацией в ранние сроки наблюдения я в период высоты сен- • ибилизации 1С 3 по 15-й дня исследования). Изменения выяв-ены в последние сроки наблюдения при изучении практически сех показателей (кроме результатов кожных проб, где сущест-енной разницы не обнаруживали).

Введение стафилококков на фоне ГЧЗТ к плесневому грибу ызывало изменения практически аналогичные изменениям, зыз-гшным одновременным введением стафилококка л гриба. Лктиге-ы стафилококка не оказывали существенного влияния на фор-крование плесневой сенсибилизации, но влияли на ее течение,

- 16 -

вызывая пролонгацию изменений, обусловленных грибом, что проявлялось на 30-й день сенсибилизации в сравнительно высоких показателях РДБ (1.1=8,1+0,9; Pj/0,05).

Вышеизложенные результаты исследований позволили нам сделать заключение, что введение стафилококка.одновременно с плесневым грибом или на фоне ГЧЗТ к грибу не влияет на формирование плесневой сенсибилизации, но оказывает стимулирующий эффект на ее течение, что выражается в пролонгдро-' вании специфических иммунологических изменений, вызываемых грибом. Указанный эффект можно объяснить,- вероятно, адью-вантными свойствами стафилококка, которые были обнаружены при изучении антигенных СВОЙСТВ Staphylococcus epiderraidis А.К.Акатовым, В.С.Зуевой (1983).

Введение стафилококка нивотным на высоте сенсибилизации к плесневому грибу не оказывало влияния на течение • плесневой сенсибилизации. Все специфические иммунологические показатели были аналогичны таковым у яивотных с грибковой сенсибилизацией, что дало нам возможность сделать заключение о проявлении неспецифических стимулирующих свойств . стафилококка по отношению к грибковому аллергену лишь в индуктивной фазе развития плесневой'сенсибилизации, что доказано при других видах сочетанной аллергии (И.Г.Цой, Р.К.Ер-мекова, 1975; Н.Д.Беклемишев, Г.С.Суходоева, 1979; Р.К.Ер-мекова, Н.Д.Бекаемишев, 1933).

При одновременном введении стафилококка и гриба, при введении стафилококка на фоне ГЧЗТ или в период высоты сенсибилизации л. грибу мы отмечали практически однозначные по времени проявления и количественным параметрам'изменения-со стороны Т- и В-систем иммунитета, которые проявлялись на 30-й день исследования. Число E-P0K в тимусе било низким (Рр/0,01), число Е-РОК и ЕАС-РОК в селезенке и число E-P0K и Т-хелперов в крови - выше, чем у животных с грибковой сенсибилизацией, причем при введении стафилококка в период высоты сенсибилизации к-плесневому грибу эти изменения . были менее выражены. Учитывая функциональные особенности Т - и В-лимфоцитов, субпопуляций -Т~лимфоцитов универсально реагировать на все попадающие в организм аллергены, в данном случае трудно однозначно оценить эти изменения как

- 17 -

реакцию только на грибковые антигены.

Тагам образом, в результате проведенных экспериментальных исследований установлено, что плесневая сенсибилизация вызывает количественные изменения со стороны Т-, В-лим-фоцитов, Т-хелперов и Т-супрессоров з крови и лимфоидщах органах морских свинок. В ранние сроки наблюдения характерные изменения выявлялись в паховом лимфоузле, они проявлялись в увеличения количества Т-хелперов, Е-РОК и ЕАС-РОК и снижении числа О-лимфоцитов и Т-супрессоров. С 5-го дня сенсибилизации подобные изменения выявляли в селезенке, максимальные сдвиги в этом органе ш наблюдали на высоте плесневой сенсибилизации, что соответствовало 15-му дню наблюдения. В крови также отмечали увеличение количества Е-РОК и ЕАС-РОК, Т-хелперов и снижение Т-супрессоров.

Сенсибилизация корпускулярным аллергеном плесневого гриба вызывала в организме морских свинок и кроликов развитие ГЧЗТ я ГЧНТ и появление в икмунокомпетентных органах кроликов антигенсодержащих а кммуноглобулинсодержащях клеток.. '

- Антигены стафилококка оказывали стимулирующее влияние на формирование и течение плесневой аллергии, если их введение было упреждающим, и только на течение плесневой сенсибилизации, если стафилококковый аллерген вводили одновременно с грибом пли на фоне гиперчувствительности 'замедленного типа к грибу.

ВЬЮ ОДЫ:

I. Впервые в эксперименте получена.модель сочетанной стафилококко-плесневой сенсибилизации.

' 2. Плесневая сенсибилизация характеризовалась увеличением, числа Е-РОК, ЕАС-РОК и Т-хелперов, уменьшением количества О-лимфоцитов.и Т-супрессоров в лимфоузле, селезенке и крови и снижением числа Е-РОК в тимусе, а также развитием гипёрчувствительности немедленного я замедленного типов- и появлением в иммунокомпетентннх органах антигенсодержащих и йшуноглобулинсодерг^ащлх клеток.

• 3^ Введение клеток тряба Азре^хИиа Пауиз живог-.ным на фоне гйперчувствительности замедленного типа к.

стафилококку вызывало ускоренное формирование плесневой сенсибилизации с более интенсивными проявлениями показателей замедленной и немедленной гиперчувствительности и показателей Т- и B-систем иммунитета.

4. Введение стафилококкового аллергена одновременно с грибом Aspergillus flavus или на фоне гиперчувствительности замедленного типа к грибу не влияло на сроки формирования плесневой сенсибилизации, но оказывало стимулирующий эффект на ее течение, что проявлялось в пролонгации изменений, вызванных антигенами гриба.

5. Введение стафилококкового аллергена в период высоты сенсибилизации к грибу Aspergillus flavue не оказывало существенного влияния.на течение плесневой сенсибилизации.

РАБОТЫ, ОПУБЛИКОВАННЫЕ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ '

1. Количество Т- и B-клеток у морских свинок при грибковой сенсибилизации ^П.Т.Лаптев) - В сб.: "Достижения науки, внедренные в практику здравоохранения", Андижан, 198I, с.2-3.

2. Динамика количественных соотношений. Т- и В-лимфоцитов и реакция торможения миграции лейкоцитов при грибково-стафилококксвой сенсибилизации (А.Х.Хамидов) - в сб.: Актуальные вопросы иммунологии при патологических состояниях", Ташкент, 1983, с.3-5.

3. Уровень Т- и Ф-лимфоцитов в динамике грибковой . сенсибилизации (П.Т.Лашпев) -.Тез. докладов областной научно-практической конференции молодых ученых и специа-. листов, Андижан, 1983, с.67-68.

.4. Показатели иммуноклеточных реакций при стафилококко' во-плесневой сенсибилизации у морских свинок.- В сб.: "Использование иммунологических'и токсикологических методов , при изучении патологических состояний", Ташкент,".1983, с.28-29. ' .

5. Динамика иммунологических показателей'у.морских свинок при различных сочетаниях плесневой, и стафилококковой сенсибилизации (.А.Х.Хямидов). Тез. докладов ХХУП-й итоговой

- 19 -

копфоранцяя уитих АндГосМИ, посвященной 30-летию образования АпдГосМИ, Андижан, 1985, с.38-39.

6. Течение анафилактического сока у мороких овшгок пря грибковой сепоибилизация. - Тез. докладов II-ft областнЪИ научно-практической конференции молодых ученых и специалистов, посвященной ХХУП-му съезду КПСС, -Андижан, 1986, 0.142.

7. Сравнительная характеристика иммунологических реакций у кроликов и морских свинок при грибкового-отофшткок-ковой сенсибилизации (Щутлеева Н.) - Тез. докладов 1-й научно- практической конференции молодых ученых-медиков

а молодых врачей Андижанской области, посвященной 70-летшэ Ионинского комсомола, Андижан, 1988, о.153-154.

8. Иммунологические методы диагностики аллергии к тлеоневым грибам. Методические рэкомондацил. (Хамидов Л.Х., Иегкоево Г.А., Улугходааева Н.Х.) - Андижан, 1992, 52 о.

Аид.В Ц. Ь'вро КШ1. эок 137. тир100.-52г.