Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Создание комплексного актопротекторного средства на основе лекарственного растительного сырья

г

На правах рукописи

ЧЕХАНИ НИНО РАМАЗОВНА

СОЗДАНИЕ КОМПЛЕКСНОГО АКТОПРОТЕКТОРНОГО СРЕДСТВА НА ОСНОВЕ ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ

14.04.01 - технология получения лекарств

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

ЯНЗ 2015

005558068 Москва-2015

005558068

Диссертационная работа выполнена в НИИ фармации ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Минздрава России.

Научный руководитель:

Павлова Людмила Анатольевна - кандидат фармацевтических наук, доцент.

Официальные оппоненты:

{Семенова Вера Александровна - доктор фармацевтических наук, профессор. Пенсионерка.

Суслина Светлана Николаевна - кандидат фармацевтических наук, доцент, заведующая кафедрой Общей фармацевтической и биомедицинской технологии ФГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов».

Ведущая организация:

ФГБУ науки Институт общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения РАН.

Защита состоится « 18 » марта 2015 г. в часов на заседании диссертационного совета Д 208.040.09 при ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Минздрава России по адресу: 119019, г. Москва, Никитский бульвар, д. 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Минздрава России по адресу: 117997, г. Москва, Нахимовский проспект, д.49 и на сайте ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова -www.mma.ru

Автореферат разослан « 1С» Ш. 2015г.

Ученый секретарь диссертационного совета Д 208.040.09

доктор фармацевтических наук,

профессор

Демина Наталья Борисовна

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы

В настоящее время лекарственные средства и биологически активные добавки группы актопротекторов стали все шире использоваться практически здоровыми людьми для повышения неспецифической сопротивляемости организма и адаптации его к неблагоприятным условиям среды. Особое значение в группе актопротекторных средств отводится препаратам на основе лекарственного растительного сырья, преимуществом которых является их относительная безопасность и низкая токсичность.

Доказано, что положительное действие на организм при неблагоприятных факторах окружающей среды оказывают вещества с антиоксидантным действием, такие как биофлавоноиды, витамины, минеральные вещества и ряд других, которые широко распространены в растительном сырье и кроме антиоксидантного оказывают актопротекторное, гепатопротекторное, ноотропное, антитоксическое действие и т.д. Исходя из данного положения, для создания комплексного средства с актопротекторной активностью, были выбраны следующие лекарственные растения: малина обыкновенная (Rubus idaeus L.), смородина черная (Ribes nigrum L.), таволга -лабазник вязолистный (Filipéndula ulmaria L.), иван-чай - кипрей узколистный (Chamaenerium angustifolium (L) Scop.), содержащие в своем составе богатый комплекс биологически активных веществ с доказанными антиоксидантными свойствами.

Степень разработанности темы исследования. Выбранное растительное сырье с давних пор и с большим успехом применяется в народной медицине. По данным литературы экстракты надземной части лабазника обладают спазмолитическим, капилляроукрепляющим, противодиабетическим, противомикробным действием (Горбачева А.В., 2001). Препараты листьев малины применяют для хронобиологической коррекции (Патент RU 2 317 822 С2). Ценность листьев черной смородины обусловлена содержанием проантоцианидинов, проявляющих противовоспалительную способность (Manach С., 2004). Химические соединения, содержащиеся в листьях кипрея обладают выраженным иммуномодулирующим эффектом (Полежаева И.В., 2005), антиоксидантной активностью, актопротекторным действием (Лавренов В.К., 1999). В литературе описаны исследования индивидуального растительного сырья, сочетание же данных лекарственных растений ранее нигде не встречалось, что свидетельствует о новизне и актуальности выбранного направления.

Целью настоящего исследования является разработка состава и технологии получения комплексного препарата в виде твердых желатиновых капсул, на основе гранулята сухих экстрактов из сбора растительного сырья, состоящего из листьев смородины черной, листьев малины обыкновенной, травы кипрея узколистного, травы таволги вязолистной (далее сбор СМИЛ) и исследование разработанного препарата на наличие актопротекторной активности.

Постановка задач и выбор средств для их решения. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Провести информационно-аналитическое исследование по выбранному растительному сырью, его химическому составу, применению, фармакологической активности; процессам экстракции из растительного сырья и процессам гранулирования сухих экстрактов.

2. Разработать ресурсосберегающую технологию выделения комплекса действующих веществ из выбранного растительного сырья (сбора СМИЛ), с целью получения сухих экстрактов.

3. Разработать состав и технологию получения комплексного лекарственного средства в виде твердых желатиновых капсул с гранулятом сухих экстрактов из сбора СМИЛ.

4. Определить показатели качества готового продукта, исследовать его стабильность, с целью определения сроков годности.

5. Изучить эффективность и безопасность полученного комплексного средства на экспериментальных животных моделях.

6. Разработать лабораторный регламент на лекарственную форму — твердые желатиновые капсулы, наполняемые гранулятом сухого экстракта из сбора СМИЛ.

Научная новизна

Впервые научно обоснован состав и разработана технология получения лекарственного средства, обладающего гепатопротекторным, гиполипидемическим, и актопротекторным действием. Приоритет проведенных исследований подчеркивается полученным патентом РФ № 2500418 от 30.08.2013г на изобретение «Сбор гепатопротекторного действия».

Разработана оригинальная ресурсосберегающая технология получения сухих экстрактов из сбора СМИЛ методом трехэтапной последовательной экстракцией со сменой экстрагента - спиртом этиловым 70%, 20% и водой горячей (95,0±2,0°С) с элементами циркуляции экстрагента на каждом этапе экстракции. Модифицирована методика экстракции водой в качестве экстрагента в условиях термостатирования с постепенным повышением температуры экстракционной системы от 20,0±1,0°С до 90,0±1,0°С в течение 14 часов и медленным охлаждением в течение 10 часов.

Разработана технология получения гранулятов сухих экстрактов (водного и спиртового) из сбора СМИЛ методом влагоактивизированной грануляции; оценено качество полученных гранулятов.

Разработана технология получения комплексного актопротекторного средства в виде твердых желатиновых капсул, определено его качество, определены сроки годности.

Изучена острая токсичность сухих экстрактов из сбора СМИЛ. ОЬ10 для сухого водного экстракта из сбора СМИЛ составила 38,06 г/кг, для сухого спиртового экстракта - 38,95 г/кг.

Теоретическая значимость работы. На модельной системе АБАП-люминол доказана антиоксидантная активность водных извлечений, как отдельных растений, так и суммарного извлечения из сбора СМИЛ in vitro-, на экспериментальных животных моделях (in vivo) выявлена и доказана антиоксидантная активность сбора СМИЛ.

Проведенные физико-химические и технологические исследования позволили установить оптимальные технологические параметры производственного процесса экстракции растительного сырья методами водной и спиртово-водной экстракции.

Представленный в работе экспериментально-практический материал может служить теоретической базой для разработки схем экстракции из лекарственного растительного сырья, исследования полученных сухих экстрактов и создания готовых лекарственных форм, в частности, капсул, с гранулятами сухих экстрактов.

Данная разработка может быть использована в научной и аналитической практике, как способ выделения целевой фракции при трехэтапной последовательной экстракции различными экстрагентами.

Практическая значимость работы. Разработано комплексное актопротекторное средство на основе сухого экстракта из лекарственного растительного сырья, обладающее, в том числе, гепатопротекторной, гиполипидемической, антиоксидантной активностью.

Результаты исследования внедрены в научно-исследовательскую деятельность лаборатории биологически активных соединений НИИ фармации ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства Здравоохранения РФ (акт внедрения от 09.09.2014г); в учебный процесс курса фармацевтической технологии лекарств, кафедры организации фармацевтической деятельности фармацевтического факультета ГБОУ ВПО Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова Министерства Здравоохранения РФ (акт внедрения от 10.09.2014г.).

Разработан лабораторный регламент на лекарственную форму -твердые желатиновые капсулы, наполняемые гранулятом сухого экстракта из сбора СМИЛ.

Методология и методы исследования.

Теоретическую основу исследования составили труды советских (Тенцова А.И., Кондратьева Т.С., Ажгихин И.С., Зеликсон Ю.И., Арзамасцев А.П., Иванова Л.А., Головкин В.А. и др.) и российских ученых, а также зарубежных исследователей (Gray V., Shah V. et al.), развивающие биофармацевтический подход к созданию и стандартизации рациональных лекарственных препаратов; международная и российская нормативная документация по производству капсул и других лекарственных форм. Методология исследования заключалась в разработке технологии получения сухих экстрактов из сбора растительного сырья; в разработке технологии получения и сравнительном изучении гранулятов сухих экстрактов в

зависимости от используемых вспомогательных веществ и количества гранулирующей жидкости; выбором оптимальной технологии получения гранулятов и наполнения твердых желатиновых капсул; оценке качества готовой лекарственной формы и установлении сроков годности препарата; в выявлении фармакологических эффектов препарата. При выполнении работы были использованы методы сравнительного, документированного анализа; комплекс физико-химических, биологических методов, фармако-технологических испытаний; математические методы анализа и обработки результатов.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 27 научных работ, из них 9 в печатных изданиях, рекомендованных ВАК; в том числе, получен патент РФ № 2500418 от 30.08.2013г на изобретение «Сбор гепатопротекторного действия».

Степень достоверности результатов исследования. Для проведения экспериментальных работ использовано современное сертифицированное оборудование и методики исследования, адекватные целям и задачам. Данные, полученные автором, достоверны, обработаны с применением методов современной статистики. Научные положения, выводы и рекомендации, сформулированные в диссертационной работе, обоснованы, достоверны и логично вытекают из полученных автором данных. Статистическую обработку результатов исследования проводили методами вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента с применением статистической программы «Microsoft Office Excel».

Апробация диссертации. Основные положения и результаты исследования были представлены на:

- Научно-практическом семинаре «Использование этномедицинских практик народов Тувы в создании лекарственных препаратов и биологически активных добавок», Научно-исследовательский институт фармации, 6 декабря 2012г, г. Москва, Россия;

- Научно-практической конференции «Современные аспекты использования растительного сырья и сырья природного происхождения в медицине», 28 февраля 2013г, г. Москва, Россия;

-VIII Международной (XVII Всероссийской) Пироговской научной медицинской конференции студентов и молодых ученых, 21 марта 2013 года, г. Москва, Россия;

- Всеукраинской научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием: «Частные аспекты медицины и фармации - 2013», 16-17 мая 2013г, г. Запорожье, Украина;

- VI Съезде токсикологов России, 6-8 ноября 2013г. г. Москва, Россия;

- Всероссийском научном интердисциплинарном симпозиуме (с международным участием) «Медицинская антропология в России и за ее пределами», 3-5 июля 2013 г, г. Москва, Россия;

- Всероссийской научно-практической конференции «Вузовская наука - 2013», 5-6 декабря 2013г, Первый МГМУ имени И.М. Сеченова, г. Москва, Россия;

- Международной конференции «Наука и общество», 15 февраля 2014 г, г. Донецк, Украина;

- II научно-практической конференции «Современные аспекты использования растительного сырья и сырья природного происхождения в медицине», 27 февраля 2014 г, НИИ Фармации ГБОУ ВПО Первый МГМУ имени И.М. Сеченова, г. Москва, Россия;

- Научном совете НИИ фармации «Достижения и перспективы молодых ученых НИИФ», 18 марта 2014 г.;

- Научно-практической конференции «Актуальные проблемы оценки безопасности лекарственных средств», 20 марта 2014 г, ГБОУ ВПО Первый МГМУ имени И.М. Сеченова, г. Москва, Россия;

- X научно-практической конференции «Биомедицина и биомоделирование», 21-22 мая 2014 г, ФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий федерального медико-биологического агентства», Московская область - Светлые горы;

- Научно-практической конференции «Новые химико-фармацевтические технологии», 28 мая 2014 г, Российский химико-технологический университет им. Д.И. Менделеева, г. Москва, Россия.

Личный вклад автора. При непосредственном участии автора были определены цели и задачи работы, разработаны методические подходы к их выполнению; проведен поиск, обобщение и анализ литературных данных. Автору принадлежит ведущая роль в проведении экспериментальных исследований, статистической обработке и анализе полученных результатов, написании публикаций. Диссертация и автореферат написаны лично автором.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Научные положения диссертационной работы соответствуют формуле специальности 14.04.01 - технология получения лекарств. Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 1,3 и 4 паспорта технология получения лекарств.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтической науки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематикой и планом: «Развитие научных и научно-методических основ, базовых и инновационных подходов при разработке, внедрении и применении лекарственных средств», номер государственной регистрации 01201261653.

Основные положения, выносимые на защиту:

Разработка ресурсосберегающей технологии получения сухих экстрактов из сбора растительного сырья СМИЛ методом последовательной экстракции спиртом этиловым 70%, 20% и водой горячей (95,0±2,0°С) с циркуляцией экстрагента на каждом этапе экстракции.

Модификация метода водной экстракции в условиях термостатирования с постепенным повышением температуры экстракционной системы от 20,0±1,0°С до 90,0±1,0°С в течение 14 часов и медленным охлаждением в течение 10 часов.

Разработка состава и технологии получения гранулята комплексного лекарственного средства с сухими экстрактами с использованием метода влагоактивизированной грануляции.

Создание капсулированной лекарственной формы с гранулятами сухих экстрактов из сбора растительного сырья. Определение показателей качества готового продукта, определение количественного содержания действующих веществ и исследование его стабильности с целью определения сроков годности.

Изучение эффективности и безопасности полученного комплексного актопротекторного средства на экспериментальных животных моделях.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 205 страницах машинописного текста, иллюстрирована 28 таблицами, 19 рисунками и состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания материалов и методов исследования (глава 2), результатов собственных исследований (главы 3-5), выводов, списка литературы, 9-ти приложений. Список использованной литературы включает 199 источников, в том числе 39 иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты и методы исследования

Объектом исследования служило растительное сырье, приобретенное в ООО "Беловодье", Россия. Образцы представляли собой измельченное высушенное сырье: листья малины обыкновенной (ТУ 9198-015-57345339-05, сертификат: № РОСС 1Ш АЮ65.Н01516); листья смородины черной (ТУ 9198-001-79413863-06, сертификат: № РОСС 1Ш АЮ85.В30422); трава таволги (лабазник вязолистный) (ТУ 9198-008-57345339-02, сертификат: № РОСС Ки.АЮ65.Н01522); трава кипрея узколистного (Иван-чай) (ТУ 9198015-57345339-05, сертификат: № РОСС 1Ш АЮ65.Н01516).

Отбор проб растительного сырья и сбора проводили в соответствии со стандартной методикой ГФ XI, вып. 1, с 267 - «Правила приемки лекарственного растительного сырья и методы отбора проб для анализа».

Определение подлинности, измельченное™ и содержания примесей в лекарственном растительном сырье проводили в соответствии со стандартной методикой ГФ XI, вып. 1, с 275.

Содержание суммы экстрактивных веществ определяли гравиметрическим методом в соответствии с фармакопейной методикой «Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье» ГФ XI, вып. 1, с 295.

Количественное определение суммы флавоноидов (в пересчете на рутин), количественное определение суммы гидроксикоричных кислот (в

пересчете на хлорогеновую кислоту) и дубильных веществ (в пересчете на галловую кислоту) в растительном сырье, сборе и сухих экстрактах из сбора СМИЛ проводили по модифицированным методикам методом прямой спектрофотометрии.

Идентификацию и количественное определение БАВ в сухих экстрактах из сбора СМИЛ проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на жидкостном хроматографе Waters Breeze с УФ-детектором 2487.

Изучение анатомо-диагностическимх признаков используемого растительного сырья Индивидуальное растительное сырье, а также сбор СМИЛ подвергали микроскопическому анализу в соответствии со статьей «Техника микроскопического и микрохимического исследования лекарственного растительного сырья» [ГФ XI, вып. 1]. Исследование выполнено на микроскопе Hirox Nuerique КН-7700, на микроскопе Celestron Deluxe с LCD экраном в проходящем и отраженном свете, при увеличении хЮО; х150; х200; х250; хЗОО; х350; х400.

Исследование технологических параметров растительного сырья, сбора СМИЛ, сухих экстрактов из сбора СМИЛ и гранулятов Определение влажности растительного сырья и сбора проводили в соответствии со стандартной методикой «Определение влажности лекарственного растительного сырья», описанной в ГФ XI, вып.1, с 285. Исследование проводили в сушильном шкафу-термостате Binder, Германия.

Экспресс-анализ влажности экстрактов/гранулятов проводили на анализаторе влажности OHAUS МВ-35. Температура - 105°С (точность измерения влажности - 0,01 %).

Насыпную и предельную насыпную плотности сухих экстрактов и гранулятов определяли на приборе SVM 121 Erweka, Германия.

Определение сыпучести и угла естественного откоса сухих экстрактов и гранулятов проводили на приборе Erweka GTB, Германия.

Гранулометрический (фракционный) состав гранулята определяли с помощью установки для ситового анализа Cisa - вибросито RT 200N.

Наполнение твердых желатиновых капсул Наполнение твердых желатиновых капсул проводили на ручной капсулонаполняющей машине ACG - Pam MF 30.

Оценка качества твердой лекарственной формы (капсулы) с гранулятом Показатели качества капсул определяли в соответствии с требованиями общей фармакопейной статьи «Капсулы» ГФ XI, вып. 2:

Определение стабильности твердых желатиновых капсул с гранулятом сухих экстрактов в естественных условиях проводили в соответствии с ОФС 42-0075-07 «Сроки годности лекарственных средств».

Методы статистической обработки результатов

Экспериментальные данные, полученные в ходе исследований, обработаны методами вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента. С вычислением граничных значений доверительного интервала среднего результата (М) и определением ошибки средней арифметической (т), при различных значениях числа результатов (п) с применением статистической программы «Microsoft Office Excel».

Вероятность ошибочного вывода не превышала 5% (р < 0,05).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Определение подлинности и показателей качества сбора СМИЛ

Для проведения входного контроля растительного сырья и сбора СМИЛ с целью дальнейшей разработки технологии комплексных экстрактов на его основе, определены характеристики подлинности и показатели качества растительного сырья и сбора в соответствии с ГФ XI, вып. 1.

При изучении внешних признаков были установлены следующие характеристики сбора СМИЛ. Сбор представлял собой кусочки листьев, а также стеблей, соцветий и отдельных цветков, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 7 мм, от светло-зеленого до темно-зеленого цвета, с вкраплениями розового (цветки иван-чая) и белого (цветки таволги) цвета. Запах ароматный. Вкус слегка вяжущий.

Изучение анатомических признаков сырья. В ходе проведенного микроскопического анализа сырья и сбора СМИЛ установлены особенности анатомического строения листьев смородины черной, листьев малины обыкновенной, травы кипрея узколистного, травы таволги вязолистной. Установлены основные микроскопические диагностические признаки сырья и сбора СМИЛ.

Фитохимический анализ растительного сырья и сбора

Фитохимическое исследование растительного сырья и сбора, составленного на его основе, подтвердило наличие ведущих групп БАВ в сырье и сборе СМИЛ с помощью качественных реакций, а также методом спектрофотометрии. В частности, в сборе СМИЛ, содержание полифенольных соединений, в пересчете на рутин, составило 2,91±0,03 %; органических кислот, в пересчете на хлорогеновую - 3,62±0,04 %; дубильных веществ, в пересчете на галловую кислоту - 6,86±0,07 %. Приведенные группы БАВ являются основными и во многом определяют фармакологическое действие комплексного сбора.

Для сбора СМИЛ были определены числовые показатели: сумма флавоноидов в пересчете на рутин; влажность; зола общая; зола, нерастворимая в 10% растворе хлористоводородной кислоты; частицы сырья, утратившие окраску (побуревшие, потемневшие, выцветшие); другие частицы сырья, не соответствующие установленному описанию; частицы, не проходящие сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм; частицы,

проходящие сквозь сито с отверстиями размером 2 мм; органическая примесь; минеральная примесь, в соответствии со стандартными методиками ГФ XI. Анализ результатов определения числовых показателей, позволяет сделать заключение о том, что растительное сырье, выбранное для исследования, отвечает требованиям нормативной документации (ГФ XI) по всем изученным показателям.

Выбор экстрагента С целью подбора оптимального экстрагента проведено исследование содержания экстрактивных веществ в сырье с использованием спирта этилового различных концентраций и воды. Число наблюдений для каждого вида сырья при экстрагировании каждым экстрагентом составило 6.

Полученные в ходе исследования данные, свидетельствуют о том, что наибольшей извлекающей способностью для сбора СМИЛ обладает спирт этиловый в концентрациях 70 и 40%, и вода (содержание экстрактивных веществ составило 43,1±0,4; 44,3±0,4 и 42,4±0,4, соответственно).

Разработка технологии получения сухих экстрактов из сбора растительного сырья

Технология получения сухого экстракта из сбора СМИЛ с использованием воды в качестве экстрагента Сбор СМИЛ в сухо-воздушном состоянии, предварительно измельченный до размера частиц 0,3-0,5 мм, смешанный и просеянный от пыли в количестве 100,0, помещали в керамический сосуд, вместимостью 2000 мл, заливали рассчитанным объемом воды (20,0±1,0°С) с учетом коэффициента поглощения сырья; нагревали сырье с постепенным повышением температуры от 20,0±1,0°С до 40,0±1,0°С в течение 2 часов (на 1°С, через каждые 6 мин) и выдерживали при температуре 40,0±1,0°С в течение часа; по истечении обозначенного времени, осуществляли последующее нагревание с постепенным повышением температуры до 90,0±1,0°С в течение 8 часов (на 1°С, через каждые 10 мин) и выдерживали при температуре 90,0±1,0СС в течение часа; охлаждали сосуд с растительным сырьем в течение 10 часов с постепенным снижением температуры от 90,0±1,0 °С до 20,0+1,0 °С в (на 1 °С каждые 9 минут).

Отделение водного экстракта от растительного сырья проводили с помощью стандартного нутч-фильтра. Вытяжку отстаивали при температуре 8,0±1,0°С в течение суток и повторно фильтровали через нутч-фильтр.

Полученное извлечение упаривали на вакуум-выпарном аппарате ВиСН1 (Германия), при температуре водяной бани - 60,0±1,0°С, разрежении 72 мбар, температуре холодильника - 15,0±1,0 °С.

Упаренную вытяжку разливали в кюветы по 15 мл и замораживали в морозильной камере при температуре -24,0±1,0 °С в течение 6-8 часов.

Технология получения сухого экстракта из сбора С МИЛ методом комбинированной спиртовой экстракции

Технологический процесс получения суммарного извлечения из сбора СМИЛ заключался в том, что сырье, измельченное и просеянное от пыли, загружали в экстрактор и экстрагировали спиртом этиловым и водой в три этапа по следующей схеме:

1-й этап - 100,0 измельченного сырья заливали 70% спиртом этиловым в количестве 560 мл в соотношении 1:1 (с учетом коэффициента поглощения) и настаивали в течение 24 часов. Готовую вытяжку сливали в количестве 1/3 от залитого объема - примерно 190 мл. В экстрактор добавляли порцию свежего экстрагента, в количестве, равном объему слитого готового продукта, и включали перистальтический насос, осуществляя циркуляцию экстрагента в течение 60 минут. Готовый продукт (ГП 1) в количестве 320 мл декантировали, отстаивали, фильтровали и направляли на упаривание;

2-й этап - сырье, оставшееся после первого этапа, заливали 560 мл 20% спирта и оставляли на 24 часа. По истечении данного периода, готовую вытяжку сливали, в объеме, примерно равном 1/3 от предполагаемого объема, ГП 2 - 190 мл и вновь восполняли разность объемов свежим экстрагентом. Проводили экстракцию с циркуляцией экстрагента 20% этанолом в течение 60 минут и сливали ГП 2 - 520 мл, с последующим отстаиванием, фильтрованием и упариванием;

3-й этап - сырье, оставшееся после первых двух этапов экстракции, заливали 560 мл воды с температурой 90-95°С и термостатировали в течение 2 часов при включенном перистальтическом насосе. Готовую водную вытяжку в объеме 480 мл сливали, отстаивали и направляли на упаривание.

Вытяжки, полученные на каждом из этапов экстракции отстаивали в течение суток при температуре 8° С, фильтровали с помощью нутч-фильтра и упаривали до 35 % объема на вакуум-выпарном аппарате BUCHI (Германия), при следующих условиях: температура водяной бани - 60,0±1,0°С, разрежение - 175 мбар (для спиртовых вытяжек) и 72 мбар (для водной вытяжки), температура холодильника - 15,0±1,0 °С.

Упаренные экстракты объединяли, разливали в кюветы по 15 мл и замораживали в морозильной камере при температуре -24,0±1,0°С в течение 6-8 часов.

По истечении указанного времени кюветы с замороженным извлечением (водным и спиртовым) извлекали из камеры холодильника, и переносили в помещение с лиофильной сушкой Heto Dry Winner. Кюветы размещали на полке сушилки, заранее выведенной на режим лиофильной сушки. Процесс лиофилизации проводили при остаточном давлении 0,1±0,03 мбар и комнатной температуре в течение 22-24 ч.

Идентификация и количественное определение основных БАВ сухих экстрактов, полученных из сбора СМИЛ Количественное определение суммарного содержания БАВ в сухих экстрактах (водном и спиртовом) из сбора СМИЛ проводили спектрофотометрическим методом на спектрофотометре «Genesis 5» в кювете с толщиной слоя 10 мм. Определяли сумму полифенольных соединений в пересчете на рутин (k=410 нм), сумму органических кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту (\=327 нм), сумму дубильных веществ в пересчете на галловую кислоту (fc=275 нм), в качестве раствора сравнения использовали спирт этиловый 95%. Результаты определений представлены в таблице 1.

Таблица 1

Определение количественного содержания основных групп БАВ (%) в сухих

экстрактах из сбора СМИЛ спектрофотометрическим методом, (М ± т)

Определяемые действующие вещества Сухой водный экстракт из сбора СМИЛ Сухой спиртовой экстракт из сбора СМИЛ

Сумма полифенольных соединений (в пересчете на рутин), в % 2,57 + 0,11 2,85 ±0,10

Сумма органических кислот (в пересчете на хлорогеновую кислоту), в % 9,95+0,20 10,63 ±0,12

Сумма дубильных веществ (в пересчете на галловую кислоту), в % 13,92 ± 0,23 14,44 ±0,21

Для подтверждения качественного и определения количественного содержания БАВ использовали метод ВЭЖХ. Результаты, полученные в ходе анализа, представлены в таблице 2.

Таблица 2

Определение количественного содержания рутина, кверцетина, хлорогеновой кислоты (мг/г) в сухих экстрактах из сбора СМИЛ методом ВЭЖХ, (М ± т)

Определяемые действующие вещества Сухой водный экстракт из сбора СМИЛ Сухой спиртовой экстракт из сбора СМИЛ

Хлорогеновая кислота 6,21 ±0,05* 2,40 ±0,03

Кверцетин 2,23 ± 0,04 2,33+0,03

Рутин 6,91 ±0,03 19,71 ±0,05**

* - достоверное различие с соответствующим показателем, полученным для сухого спиртового экстракта из сбора СМИЛ (р < 0,05); ** - достоверное различие с соответствующим показателем, полученным для сухого водного экстракта из сбора СМИЛ (р < 0,05).

Результаты исследования свидетельствуют о том, что при спиртовой экстракции вытяжка в большей степени обогащается рутином - 19,7±0,05 мг/г, в то время, как при использовании воды в качестве экстрагента, содержание рутина в экстракте составляет только 6,9±0,03 мг/г от суммы флавоноидных соединений (р <0,05). Органические кислоты извлекаются в большей степени при водной экстракции. Так, содержание хлорогеновой кислоты в сухом водном экстракте составляет 6,2±0,05 мг/г, в то время как в спиртовом -

2,4±0,03 мг/г (р <0,05). Кверцетина в водном и спиртовом экстракте содержится примерно в равном количестве - 2,2±0,04 мг/г и 2,3±0,03 мг/г, соответственно.

Исследование сухих экстрактов из сбора СМИПметодом микроскопии

Поскольку форма и размер частиц в сухих экстрактах обусловливают их технологические характеристики, такие как - сыпучесть, насыпная масса, удельная поверхность и ряд других, было проведено исследование сухих экстрактов (водного и этанольного) из сбора СМИЛ с помощью микроскопа Hirox Nuerique КН-7700, при следующих условиях: Lens MX (G) - 5040 Z; Normal: x200.

Рисунок 1. а - сухой спиртовой экстракт из сбора СМИЛ (х200); б - сухой водный экстракт из сбора СМИЛ (х200)

На фотографиях, приведенных на рисунке 1 видно, что частицы экстрактов представляют собой кристаллы неправильной формы. В отраженном свете поверхность частиц шероховатая, блестящая (на фотографиях видна в виде светлых бликов). Частицы экстрактов полидисперсны, размер их составляет: в водном экстракте - 500-4500 мкм, в спиртовом - 300-3000 мкм, средний размер частиц - 600-800 мкм. Подобный характер кристаллической структуры может обусловливать неудовлетворительные технологические свойства сухих экстрактов.

Изучение технологических характеристик сухих экстрактов Технологические и физико-химические характеристики сухих экстрактов имеют важное значения при разработке и изготовлении твердых лекарственных форм, в частности капсул, и в значительной степени определяют выбор технологии и качество готового продукта.

Технологические характеристики спиртового и водного экстрактов из сбора СМИЛ приведены в таблице 3.

Таблица 3

Органолептические и технологические свойства сухих экстрактов из сбора СМИЛ

№ п/п Оцениваемые показатели Сбор СМИЛ (спиртовой экстракт) Сбор СМИЛ (водный экстракт)

1. Цвет желтовато-коричневый светло-коричневый

2. Запах характерный характерный

3. Внешний вид тонкодисперсный, аморфный порошок мелкокристаллический порошок

4. Влажность, % 4,65±0,03 4,80±0,02

5. Насыпная плотность, г/см"* 0,49±0,05 0,66±0,04

6. Насыпная плотность после уплотнения, г/см3 0,67±0,04 0,84±0,03

7. Сыпучесть, г/с 3,0+0,06 5,6±0,08

8. Угол естественного откоса, ° 47,3±0,02 43,3±0,02

Оба экстракта имеют неудовлетворительную сыпучесть: спиртовой -3,0±0,06 г/с, водный - 5,6±0,08 г/с, определенную на приборе Епуека СГВ, Германия. О недостаточной сыпучести экстрактов также свидетельствует угол естественного откоса - 47,3±0,02° для спиртового экстракта и 43,3±0,02° для водного.

Определение гигроскопичности сухих экстрактов из сбора СМИЛ

Важной характеристикой для сухих экстрактов из растительного сырья является содержание в них влаги. Влажность их, в соответствии с требованиями ГФ XI, не должна превышать 5 %. В ходе исследования установлено, что влажность сухих экстрактов из сбора СМИЛ составляет 4,65±0,03 для спиртового экстракта и 4,80±0,02 для водного, что соответствует требованиям ГФ XI.

Для определения гигроскопичности сухих экстрактов (водного и спиртового) из сбора СМИЛ была установлена степень поглощения ими влаги (влагопоглощение) в динамике. Сухие экстракты оставляли в климатической камере ТЬегтойгоп Б (США), в течение 8 часов при температуре 20,0±1,0°С и относительной влажности 65,0±1,0 %. Показатели регистрировали ежечасно. С целью проведения экспресс-анализа, влажность сухих экстрактов определяли на анализаторе влажности ОНАШ МВ-35 при температуре 105°С (точность измерения- 0,01 %). Результаты исследования гигроскопичности сухих экстрактов из сбора СМИЛ (водного и спиртового) представлены на рисунках 2 и 3.

Рисунок 2. Динамика влагопоглощения сухого экстракта из сбора СМИЛ, полученного с применением воды в качестве экстрагента, во времени при температуре 20,0±1,0°С и относительной влажности 65,0±1,0 %

Рисунок 3. Динамика влагопоглощения сухого экстракта из сбора СМИЛ, полученного с применением спирта этилового и воды в качестве экстрагента, во времени при температуре 20,0±1,0°С и относительной влажности 65,0+1,0 %

Результаты проведенного исследования позволяют сделать вывод о том, что сухие экстракты (водный и спиртовой) из сбора СМИЛ являются гигроскопичными и перестают удовлетворять требованиям ГФ XI через 3 часа экспозиции на открытом воздухе в стандартных условиях. В связи с высокой скоростью адсорбции влаги данными экстрактами при производстве лекарственных форм на их основе, необходимо оптимизировать микроклиматические условия производственных помещений, снижать длительность технологического процесса, уменьшать количество гранулирующей жидкости и использовать щадящие условия сушки гранулята.

Таким образом, проведенные исследования по изучению физико-химических и технологических свойств сухих экстрактов (водного и

спиртового) из сбора СМИЛ показывают, что они не обладают удовлетворительными технологическими характеристиками. Об этом свидетельствуют угол естественного откоса, низкая сыпучесть экстрактов, высокая степень влагопоглощения, кристаллическая форма частиц. Все это обусловливает необходимость использования эффективных вспомогательных веществ, улучшающих технологические характеристики экстрактов и введение в технологическую схему стадии гранулирования.

Разработка состава и технологии капсул с гранулятом сухих экстрактов

С целью подбора оптимального наполнителя, к числу которых относятся: Starlac USP (Roquette, Франция), лактоза гранулированная USP (DFE Pharma), Vivapur 103 (JRS, Германия), лактоза USP (DFE Pharma, Германия), лактоза USP Panreac (Испания), крахмал кукурузный (Россия), была изучена возможность получения гранулята сухих экстрактов удовлетворительного качества с применением каждого из перечисленных вспомогательных веществ.

Кроме наполнителей, в состав гранулируемой смеси вводили Aeroperl 300 pharma (Evonik Industries, Германия) - коллоидный диоксид кремния, в количестве 1% от общей массы смеси. В качестве вспомогательной жидкости использовали спирт этиловый 96%, спиртовой раствор поливинилпирролидона 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, спиртово-водные растворы 2070%. Составы порошковых смесей для гранулирования представлены в таблице 4.

Таблица 4

Составы смесей для грануляции_

№ Состав смеси для грануляции

Экстракт СМИЛ (водный) Экстракт СМИЛ (спиртовой)

1 2 3

1. Экстракт СМИЛ (водный) - 66% Starlac (Франция) - 33% Экстракт СМИЛ (спиртовой) - 66% Starlac (Франция) - 33%

2. Экстракт СМИЛ (водный) - 66% Лактоза гранулированная - 33% Экстракт СМИЛ (спиртовой) - 66% Лактоза гранулированная - 33%

3. Экстракт СМИЛ (водный) - 66% Vivapur 103 (JRS, Германия)- 33% Экстракт СМИЛ (спиртовой) - 66% Vivapur 103 (JRS, Германия)-33%

4. Экстракт СМИЛ (водный) - 66% Клептоза (Beta cyclodextrine) - 2% Starlac-31% Экстракт СМИЛ (спиртовой) - 66% Клептоза (Beta cyclodextrine) - 2% Starlac-31%

5. Экстракт СМИЛ (водный) - 66% Клептоза (Beta cyclodextrine) - 2% Лактоза (USP, Германия) - 10% Крахмал кукурузный (Россия) - 21% Экстракт СМИЛ (спиртовой) - 66% Клептоза (Beta cyclodextrine) - 2% Лактоза (USP, Германия) - 10% Крахмал кукурузный (Россия) - 21%

6. Экстракт СМИЛ (водный) - 66% Лактоза (Рапгеас, Испания) - 5% Крахмал кукурузный (Россия) - 28% Экстракт СМИЛ (спиртовой) - 66% Лактоза (Рапгеас, Испания) - 5% Крахмал кукурузный (Россия) - 28%

Результаты исследования технологических характеристик полученных гранулятов по показателям: внешний вид, сыпучесть, содержание целевой фракции (частиц 200 - 300 мкм) показали, что удовлетворительным размером гранул и наилучшей сыпучестью обладали грануляты № 6 (из спиртового и водного экстрактов), полученные с использованием лактозы Рапгеас и крахмала кукурузного, а в качестве увлажняющего агента 2 % раствора поливинилпирролидона (ПВП) в 96 % этиловом спирте. Данные грануляты обладали лучшими технологическими характеристиками по сравнению с пятью другими составами и были исследованы более детально (табл. 5).

Таблица 5

Технологические характеристики гранулятов №6 из водного и спиртового экстрактов, полученных методом влагоактивизированной грануляции, (М±т)

№ п/п Оцениваемый параметр Экстракт СМИЛ (водный) Экстракт СМИЛ (спиртовой)

Результаты определений

1. Сыпучесть, г/с 17,7±0,03 23,0±0,02

2. Угол естественного откоса, ° 35,3+0,04 33,3±0,03

3. Насыпная плотность, г/см3 0,41 ±0,03 0,47±0,02

4. Предельная насыпная плотность, г/см3 0,59±0,02 0,61+0,01

5. Содержание пылевой фракции (частиц, проходящих сквозь сито 100 мкм), % 9,6±0,02 6,2±0,02

6. Влажность, % 3,9±0,03 3,07±0,02

В результате проведенной сравнительной оценки технологических характеристик гранулятов №6 из сухих экстрактов, полученных с использованием воды и спирта этилового в качестве экстрагентов, сделано заключение о целесообразности использования гранулятя сухого спиртового экстракта, полученного методом влагоактивизированной грануляции, поскольку он обладал лучшими технологическими свойствами, целесообразными для использования данного состава с целью получения твердой лекарственной формы - капсулы с гранулятом экстракта из сбора СМИЛ.

Технология получения твердых желатиновых капсул с гранулятами

экстрактов

В качестве готовой лекарственной формы были выбраны твердые желатиновые капсулы № 0, наполняемые гранулятом сухих экстрактов из сбора СМИЛ (средняя масса содержимого капсул составила 0,409 ±0,013 г, отклонение от средней массы каждой из 20 капсул, взятых на анализ, не превышало ± 10 %).

Наполнение твердых желатиновых капсул проводили в ручной капсулонаполняющей машине АСв - Рат МИ 30.

Упаковка твердых желатиновых капсул

Упаковку полученных капсул с гранулятом осуществляли на машине ручной блистерной Maxi-Pake в блистерную ячейковую упаковку из поливинилхлорида и алюминиевой фольги, обеспечивающую сохранность капсул от воздействия влаги воздуха и стабильность действующих веществ в течение установленного срока годности.

Оценку качества твердых желатиновых капсул с гранулятом проводили в соответствии с требованиями общей фармакопейной статьи «Капсулы» ГФ XI, вып. 2 по показателям: определение средней массы невскрытых капсул (0,516 ± 0,031 г) и их содержимого (0,409 ± 0,013 г), распадаемость (9-11 минут), определение подлинности (максимум в области 410-417 нм), количественное определение действующих веществ (сумма фенольных соединений в пересчете на рутин — 2,8±5%).

Определение стабильности твердых желатиновых капсул, наполненных гранулятом сухого спиртового экстракта из сбора СМИЛ, и упакованных в блистерную ячейковую упаковку из поливинилхлорида и алюминиевой фольги проводили при хранении при температуре 18-22°С и влажности воздуха 65±1 %. Установлено, что при хранении в естественных условиях показатели качества твердых желатиновых капсул остаются неизменными в течении всего срока наблюдения - 18 месяцев.

Величина показателя распадаемости, свидетельствует о рациональной технологии и оптимальном подборе вспомогательных веществ при получении капсул, наполняемых гранулятом сухих экстрактов (водного и спиртового) из сбора СМИЛ.

Изучение актопротекторной активности и сбора СМИЛ и сухих экстрактов из него

Эффективность разработанного препарата была оценена на наличие актопротекторного действия на модели повторного плавания у мышей с грузом, равным 7% от массы тела. Результаты исследования представлены в таблице 10.

В ходе эксперимента установлено, что после восстановительного периода у животных контрольной группы не наблюдалось полного восстановления физической работоспособности. Об этом свидетельствует тот факт, что продолжительность их повторного плавания составила 67,5% от продолжительности первичного плавания (р < 0,05). В то же время, у животных, получавших водное извлечение и экстракты из сбора СМИЛ, при повторном плавании был зарегистрирован практически тот же результат, что и при первичном плавании, и даже некоторая тенденция к его увеличению. При этом важно отметить, что длительность повторного плавания у мышей первой, второй и третьей опытных групп была выше, чем у мышей контрольной группы в 1,6, в 1,8 и в 1,7 раз соответственно (р < 0,05).

Таблица 10

Влияние курсового применения сбора СМИЛ и сухих экстрактов из него на показатели физической работоспособности в тесте повторного _плавания у мышей, (М ± т)_

Показатель Группы животных (п = 24) Продолжительност ь первичного плавания, мин Продолжительность повторного плавания

мин в процентах от первичного плавания

Контрольная 15,4 ±0,4 10,4* ± 0,7 67,5 ±4,6

Опытная 1 Комплексное водное извлечение из сбора СМИЛ 16,0 ±0,4 17,2** ± 1,1 109,6** ±7,9

Опытная 2 Раствор сухого водного экстракта из сбора СМИЛ 15,6 ±0,6 18,3** ± 1,2 118,6** ± 7,1

Опытная 3 Раствор сухого спиртового экстракта из сбора СМИЛ 14,7 ± 0,5 16,9** ±1,0 117,4** ±6,3

Примечание: * - достоверное различие с показателем первичного плавания животных той же группы (р <0,05); ** — достоверное различие с соответствующим показателем контрольной группы (р <0,001).

выводы

1. Проведено информационно-аналитическое исследование по выбранному растительному сырью. Установлено, что предложенный состав сбора раннее нигде не встречался и является перспективным для создания лекарственных препаратов.

2. Разработана ресурсосберегающая технология получения сухих экстрактов из сбора СМИЛ методом трехэтапной последовательной экстракцией со сменой экстрагента - спиртом этиловым 70%, 20% и водой горячей (95,0±2,0°С) с элементами циркуляции экстрагента на каждом этапе экстракции. Модифицирована методика экстракции водой в качестве экстрагента в условиях термостатирования с постепенным повышением температуры экстракционной системы от 20,0±1,0°С до 90,0±1,0°С в течение 14 часов и медленным охлаждением в течение 10 часов; получены сухие экстракты (водный и спиртовой) из сбора СМИЛ.

3. Разработан состав и технология получения комплексного актопротекторного средства в виде твердых желатиновых капсул, наполняемых гранулятом сухого экстракта из сбора СМИЛ. Гранулят получен методом влагоактивизированной грануляции и имеет следующий состав: экстракт СМИЛ - 66%, лактоза (Испания) - 5%, крахмал кукурузный (Россия) - 28%, Aeroperl 300 pharma (Германия) - 1%, в качестве увлажняющего агента - 2 % раствор поливинилпирролидона (ПВП) (Германия) в 96 % этиловом спирте (Россия) - до 10% гранулируемой массы.

4. Полученный готовый продукт - твердые желатиновые капсулы с гранулятом сухого экстракта из сбора СМИЛ, стандартизован по ряду показателей: средняя масса невскрытых капсул и их содержимого, подлинность, количественное определение, распадаемость. Исследована стабильность готовой лекарственной формы, установлен срок годности препарата - 18 месяцев.

5. Изучена эффективность и безопасность полученного комплексного средства на экспериментальных животных моделях (тетрахлорметановый гепатит, индуцированная гиперлипидемия, тест повторного плавания). Установлено наличие актопротекторного действия, а также наличие гепатопротекторной, гиполипидемической, антиоксидантной активности водных извлечений из сбора СМИЛ и сухих экстрактов из него. Определены дозы LD50 для сухих экстрактов, которые составили - 38,06 г/кг и 38,95 г/кг для сухого водного и сухого спиртового экстракта соответственно, что позволяет отнести полученные экстракты к VI классу токсичности (по Hodge и Sterner) - относительно безвредным лекарственным веществам.

6. Разработан лабораторный регламент на технологию получения препарата актопротекторного действия, представляющего собой твердые желатиновые капсулы, наполняемые гранулятом сухого экстракта из сбора СМИЛ - лабораторный регламент на производство препарата актопротекторного действия в твердых желатиновых капсулах.

ПЕРЕЧЕНЬ ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Чехани, Н.Р. Разработка сырьесберегающего способа экстрагирования сырья малины обыкновенной и смородины черной / Н.Р. Чехани, C.B. Козин, В .А. Черников, С.И. Кисиль, A.A. Штайнмец // Новые химико-фармацевтические технологии: сборник научных трудов. - М. - 2012. - выпуск 184. - С. 192-197.

2. Чехани, Н.Р. Определение содержания экстрактивных веществ в листьях смородины черной и малины обыкновенной / Н.Р. Чехани // Сборник научных работ студентов и молодых ученых Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, посвященной 70-летию профессора A.A. Чумакова. - Ярославль. - 2012. — С. 329.

3. Чехани, Н.Р. Изучение гиполипидемических свойств экстрактов малины обыкновенной и смородины черной / Н.Р. Чехани, Л.А. Павлова, C.B. Козин // Традиционная медицина. - 2012. - С. 318-321.

4. Чехани, Н.Р. Антиоксидантная активность растений, используемых в этномедицине Тувы / Н.Р. Чехани, Ю.О. Теселкин, Л.А. Павлова, C.B. Козин, О.Б. Любицкий // Вестник РГМУ. - М. - 2012. - №6. - С. 66-69.

5. Чехани, Н.Р. Листья малины обыкновенной и листья смородины черной в качестве перспективных источников биологически активных соединений флавоноидного ряда с гиполипидэмической активностью / Н.Р. Чехани, Л.А. Павлова, C.B. Козин // Бутлеровские сообщения. - 2012. -№11.-Том 32.-С. 105-107.

6. Сбор гепатопротекторного действия: пат. 2500418 Россия, Чехани Н.Р., Павлова Л.А., Козин C.B., Лузин A.B., Черников В.А.; заявитель и патентообладатель ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (RU) // Бюллетень № 34 от 10.12.2013.

7. Чехани, Н.Р. Исследование антиоксидантной активности водных извлечений из сырья малины обыкновенной и лабазника вязолистного / Н.Р. Чехани // VIII Международная (XVII Всероссийская) Пироговская научная медицинская конференция студентов и молодых ученых. Вестник РГМУ. Специальный выпуск. - М. - 2013. - №1. - С. 157.

8. Чехани, Н.Р. Гепатопротекторная активность сбора из растительного сырья / Н.Р. Чехани, C.B. Козин, Ю.О. Теселкин, М.Д. Гусейнов // Сборник материалов I Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Инновации в здоровье нации»,«National Healthcare Innovations». - 2013. - С. 260-261.

9. Чехани, Н.Р. Антитоксическое действие сбора из лекарственного растительного сырья при отравлении четыреххлористым углеродом / Н.Р. Чехани, Л.А. Павлова, C.B. Козин, Ю.О. Теселкин, М.Д. Гусейнов // Сборник трудов VI Съезда токсикологов России. - М. - 2013. - С. 544-546.

10. Чехани, Н.Р. Антиоксидантная активность отдельных компонентов препарата актопротекторного действия / Н.Р. Чехани // Актуальные вопросы питания, фармацевтической и медицинской науки и практики. Украина. -Запорожье. - №2. - 2013. - С. 41.

11. Чехани, Н.Р. Растительное сырье тувинской народной медицины в качестве перспективных источников средств с антиоксидантной активностью / Н.Р. Чехани, Ю.О. Теселкин, Л.А. Павлова, C.B. Козин // Сеченовский Вестник. - М. - 2013. - №1 (11). - С. 86.

12. Чехани, Н.Р. Определение суммы экстрактивных веществ в сырье малины обыкновенной и таволги вязолистной / Н.Р. Чехани, JI.A. Павлова // Сборник тезисов научно-практической конференции «Аспирантские и докторантские чтения: моделирование научного исследования - форсайт -технологии». - М. - 2013. - С. 24-25.

13. Чехани, Н.Р. Гепатопротекторная и антиоксидантная активность сбора из лекарственного растительного сырья при экспериментальном токсическом гепатите / Н.Р. Чехани, Л.А. Павлова, C.B. Козин, Ю.О. Теселкин // Вестник Башкирского государственного медицинского университета. - 2014. - №1. - С. 119-124.

14. Чехани, Н.Р. Влияние природных полифенольных соединений на физическую выносливость и процессы восстановления у мышей / Н.Р. Чехани, Л.А. Павлова, C.B. Козин, Ю.О. Теселкин // Вестник РГМУ. - М.-2014.-№1,-С. 61-63.

15. Чехани, Н.Р. Влияние сбора из растительного сырья на физическую выносливость и процессы восстановления у мышей / Н.Р. Чехани, Л.А. Павлова, C.B. Козин, Ю.О. Теселкин // «Сеченовский вестник». - М. - 2014. -№1 (15). - С. 143.

16. Чехани, Н.Р. Исследование актопротекторной активности сбора из растительного сырья / Н.Р. Чехани, Л.А. Павлова, C.B. Козин, Ю.О. Теселкин // Сборник тезисов научно - практической конференции «Новые химико-фармацевтические технологии». - М. - 2014. - Выпуск 1. - С. 154156.

17. Чехани, Н.Р. Гепатопротекторное действие нового сбора из растительного сырья в сравнении с препаратом карсил / Н.Р. Чехани, Л.А. Павлова, C.B. Козин, Ю.О. Теселкин, М.Д. Гусейнов // Сборник тезисов научно - практической конференции «Новые химико-фармацевтические технологии». - М. - 2014. - Выпуск 1. - С. 157-159.

18. Чехани, Н.Р. Актопротекторная активность сбора из растительного сырья / Н.Р. Чехани // Сборник докладов Международной конференции «Наука и общество» часть 3. Украина. - Донецк. - 2014. - С. 129-132.

19. Чехани, Н.Р. С МИЛ - новый безопасный и эффективный гепатопротекторный препарат растительного происхождения / Н.Р. Чехани, Л.А. Павлова, C.B. Козин // «Сеченовский вестник. - М. - 2014. - № 2 (16). -С. 117.

20. Чехани, Н.Р. Изучение фармакологической активности сбора из растительного сырья на модели острого токсического гепатита у крыс / Н.Р. Чехани // Сборник материалов конференции «Молодая фармация -потенциал будущего». Фармация. Специальный выпуск. - 2014. - С. 592594.

21. Чехани, Н.Р. Оценка химического состава и специфического фармакологического действия нового актопротекторного средства / Н.Р. Чехани, JI.A. Павлова, C.B. Козин, Ю.О. Теселкин // Бутлеровские сообщения. - 2014. - Т.38. - №4. - С. 58-62.

22. Чехани, Н.Р. Гепатопротекторное действие нового сбора из растительного сырья в сравнении с препаратом «карсил» (экспериментальное исследование) / Н.Р. Чехани, JÏ.A. Павлова, C.B. Козин, Ю.О. Теселкин, М.Д. Гусейнов // Бутлеровские сообщения. - 2014. - Т.38. - №4. - С. 63-66.

23. Чехани, Н.Р. Результаты исследования фармакологической активности комплексного водного извлечения из сбора растительного сырья / Н.Р. Чехани // «Сеченовский вестник». - М. - 2014. - № 2 (16). - С. 96.

24. Павлов, В.М. Технология получения гранулятов сухих экстрактов методом влагоактивизированной грануляции с применением клептозы, в качестве вспомогательного вещества / В.М. Павлов, Н.Р. Чехани, JI.A. Павлова // Современные проблемы науки и образования. - 2014. - №5. http://www.science-education.ni/l 19-14642.

25. Чехани, Н.Р. Разработка технологии получения сухого экстракта из сбора растительного сырья методом водной экстракции / Н.Р. Чехани, Л.А. Павлова, В.М. Павлов, // Современные проблемы науки и образования. -2014. - №5. http://www.science-education.ni/l 19-14617.

26. Чехани, Н.Р. Технология получения гранулятов сухих экстрактов из сбора растительного сырья / Н.Р. Чехани, Л.А. Павлова // Евразийский Союз Ученых (ЕСУ). Ежемесячный научный журнал. Фармацевтические науки. - 2014. - №4. - С. 56-59.

27. Чехани, Н.Р. Разработка состава и технологии получения комплексного актопротекторного средства на основе растительного сырья / Н.Р. Чехани, Л.А. Павлова, В.М. Павлов // Разработка и регистрация лекарственных средств. - 2014. - №4 (9). - С. 36-45.

Подписано в печать: 08.12.2014 Тираж: 100 экз. Заказ № 1309 Отпечатано в типографии «Реглет» г. Москва, Леншпрадский проспект д.74 (495)790-47-77 www.reglet.ru