Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Определение фармакологической активности фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды

На правах рукописи

ТИТОВА ИРИНА НИКОЛАЕВНА

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ФИТОПРЕПАРАТОВ, СОДЕРЖАЩИХ ФЕНИЛПРОПАНОИДЫ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Самара - 2004

Работа выполнена на кафедре фармакологии Государственного учреждения высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук,

профессор Дубищев Алексей Владимирович

Научный консультант:

доктор фармацевтических наук, профессор

Официальные оппоненты:

Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор

Куркин Владимир Александрович

Алёхин Евгений Константинович

доктор медицинских наук,

профессор Ларионов Леонид Петрович

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации»

Защита состоится «_»_2004 года в_часов на заседании

диссертационного Совета Д - 208.006.03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации» по адресу 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3

С диссертацией можно ознакомится в научной медицинской библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации» по адресу: 450000 г. Уфа, ул. Ленина, 3

Автореферат разослан «_»_2004 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета, доктор медицинских наук

Мирсаева Г.Х.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы: Одной из важнейших задач современной фармакологии является расширение ассортимента растительных препаратов различных фармакологических групп с адаптогенной, тонизирующей, седативной, антидепрессивной активностью. Это обусловлено рядом факторов современного напряженного ритма жизни, особенно жителей промышленных мегаполисов, неблагоприятными экологическими

условиями среды. Не случайно предпочтение отдается средствам растительного происхождения, поскольку это обусловлено рядом положительных свойств фитопрепаратов. Растительные препараты обладают низкой токсичностью при достаточно высокой эффективности, широким спектром терапевтического действия, комплексным органопротекторным и гармонизирующим действием на организм больного, отличаются минимумом побочных эффектов, относительной дешевизной по сравнению с синтетическими препаратами.

Своевременный прием как адаптогенов, так и седативных средств (соответственно в утреннее, обеденное - адаптогенов и вечернее время -седативных) позволяет восстановить суточные биоритмы, снизить развитие соматической патологии, вызванной психогенными факторами, улучшить качество жизни, смягчить в условиях дезадаптации отрицательное воздействие на организм человека стрессовых ситуаций, а также неблагоприятных экологических и производственных факторов. Кроме того, в настоящее время на российском фармацевтическом рынке в основном доминируют дорогостоящие лекарственные средства зарубежного производства, подчас недоступные широким слоям населения. Следовательно, актуальной задачей остается расширение номенклатуры доступных по цене и эффективных отечественных растительных препаратов.

В этом плане одним из наиболее перспективных направлений поиска является изучение биологической активности лекарственного растительного сырья, содержащего фенилпропаноиды: родиолы розовой или золотого корня (Rhodiola rosea L.), элеутерококка колючего [Eleutherococcus senticosus (Rupr. et Maxim.) Maxim.], сирени обыкновенной' (Syringa vulgaris L.), ивы корзиночной (Salix viminalis L.), эхинацеи пурпурной [Echinaceapurpurea (L.) Moench.], лимонника китайского [Schizandra chinensis (Turcz.) Baill.], расторопши пятнистой [Stlyhum marianum (L.) Gaertn.], мелиссы лекарственной (Melissa cfficinalis L.)

Фенилпропаноиды широко распространены в лекарственных растениях. Они обладают разнообразными биологическими свойствами, что да&г основание для создания на их основе эффективных тонизирующих, иммуностимулирующих. гепатопротекторных, антибластомных,

РОС hAUH-MA.IiiliUS

С «.'«те^у^г Qfr Щ)1^61ГЪ

антимикробных, противовоспалительных препаратов. Это послужило основанием для выделения их в самостоятельную группу биологически активных соединений и нашло отражение в химической классификации лекарственных растений (В.А. Куркин, 1992). Однако имеющийся литературный материал не позволяет в полном объеме судить о характере нейротропной активности данной группы растений, поэтому требуется систематизация и восполнение данных. Не изучены многие аспекты нейротропного действия, не существует картины сравнительного анализа эффективности препаратов, полученных из сырья различных растений, в недостаточной степени освещен вопрос о связи фармакологической активности препаратов с химической структурой фенилпропаноидов.

Цель исследования:

Провести сравнительный анализ нейротропной активности фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды; индивидуальных веществ розавина, сирингина, триандрина, силибина, а также изучить механизм их действия.

Задачи исследовании:

1. Определить гипногенную и антигипногенную активность фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды и индивидуальных веществ -фенилпропаноидов.

2. Изучить ноотропное действие:

- влияние на физическую работоспособность и выносливость;

- влияние на организацию поведения животных в открытом пространстве;

- влияние на показатели обучения;

- влияние на формирование памяти.

3. Определить анксиолитические свойства.

4. Изучить антидепрессивную активность.

5. Выявить механизм нейротропной активности фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды, а также индивидуальных веществ — фенилпропаноидов.

Научная новизна: Впервые проведен целенаправленный анализ нейротропного действия экстрактов и настоек группы лекарственных растений, содержащих биологически активные соединения фенилпропаноиды, и действующих субстанций розавина, сирингина, триандрина, силибина.

Впервые показано, что наибольшим спектром влияния на центральную нервную систему обладает родиолы розовой экстракт и выделенный из данного растения циннамилгликозид розавин. Впервые показаны анксиолитический и антидепрессивный эффекты родиолы розовой экстракта и розавина. Розавин по показателям ноотропной активности сопоставим с эффектами пирацетама. Дано обоснование использования в качестве

тонизирующего средства родиолы розовой настойки, а не родиолы экстракта жидкого.

Впервые установлено наличие антигипногенной, актопротекторной, ноотропной, анксиолитической, антидепрессивной активности у сирени обыкновенной настойки. Установлен впервые анксиолитический и антидепрессивный эффекты у элеутерококка колючего экстракта и-циннамилгликозида сирингина.

Впервые показано наличие нейротропной активности у ивы корзиночной экстракта. Выявлено, что экстракт, как и триандрин, выделенный из данного растения, обладает антигипногенным, актопротекторным, церебропротективным действием.

Впервые показано наличие тонизирующих свойств у эхинацеи пурпурной настойки, установлены актопротекторные, церебропротективные, антидепрессивные свойства данного препарата. Разработаны рекомендации относительно оптимального времени приема эхинацеи настойки.

Показано наличие в спектре нейротропной активности лимонника настойки церебропротективного и антидепрессивного эффектов.

Изучены особенности седативного действия мелиссы настойки, выявлен механизм анксиолитического действия данного препарата - взаимодействие с бензодиазепиновыми рецепторами. Определена оптимальная широта терапевтических доз мелиссы настойки - 50 - 200 мг/кг. Выявлен седативный эффект расторопши экстракта жидкого.

Установлена возможность влияния препаратов на серотонинергические, адренергические, дофаминергические структуры мозга.

Практическая значимость: Экспериментальное изучение нейротропных свойств фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды, а также выделенных субстанций позволяет рекомендовать их для испытания в клинической практике в качестве тонизирующих, седативных, ноотропных, антидепрессивных средств.

Результаты предклинических исследований мелиссы настойки внесены в проект Изменения №1 ФС 42-3645-98 «Трава мелиссы лекарственной» (письмо №294 - 11/47 от 01.03.02) и ФСП «Мелиссы настойка» (письмо № 294 - 11/47 от 01.03.02), которые приняты к рассмотрению Департаментом Государственного контроля лекарственных средств и медицинской техники и находятся на экспертизе в Фармакопейном государственном комитете МЗ и социального развития РФ.

Данные о нейротропных свойствах фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды используются в научных изысканиях и включены в материалы лекций и практических занятий кафедры фармакологии, а также кафедры фармакогнозии с основами ботаники и фитотерапии ГУ ВПО СамГМУ МЗ РФ.

Основные положения, выдвигаемые на защиту:

1. Все исследуемые фитопрепараты, содержащие фенилпропаноиды, а также выделенные субстанции обладают нейротропной активностью, причем у фенилпропаноидов гликозидной структуры (производных коричных спиртов) выявлена стимулирующая активность.

2. Наиболее широким спектром нейротропного действия среди фитопрепаратов и фенилпропаноидов обладает родиолы розовой экстракт и розавин. Для розавина установлено дофаминомиметическое действие.

3. Сирени настойка, элеутерококка экстракт, сирингин обладают тонизирующей, актопротекторной, церебропротективной, анксиолитической, антидепрессивной активностью. Сирингин проявляет антагонизм в тесте с резерпином, что предполагает влияние на обмен биогенных моноаминов.

4. Ивы корзиночной экстракт и триандрин обладают антигипногенным, актопротекторным, церебропротективным действием.

5. У эхинацеи настойки и лимонника настойки выявлено антигипногенное, ноотропное, церебропротективное, антидепрессивное действие; у эхинацеи настойки - актопротекторное. Для этих препаратов установлена возможность взаимодействия с адренорецепторами.

6. Мелиссы настойка и расторопши экстракт жидкий обладают седативным действием, у мелиссы настойки выявлены анксиолитические свойства и механизм анксиолитического эффекта -взаимодействие с бензодиазепиповыми рецепторами.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ ГУ ВПО Самарского государственного университета МЗ РФ (№ Государственной регистрации 01200202301) и Республиканских программ: «Совершенствование лекарственного обеспечении населения и лечебно - профилактических учреждений в рыночных условиях» по теме: «Создание лекарственных средств природного происхождения антимикробного, адаптогенного и гепатопротекторного действия» (№ Государственной регистрации 01990005277).

Апробация работы и публикации: Материалы работы доложены и обсуждены на X, XI Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2003-2004); на VIII Всероссийском конгрессе «Экология и здоровье человека» (Самара, 2002); 2-м Съезде Российского Научного Общества Фармакологов (Москва, 2003); на юбилейной IX научно-практической конференции «Актуальные вопросы диагностики, лечения и реабилитации больных» Пензенского института усовершенствования врачей

МЗ РФ с участием регионов России (Пенза, 2002); 4-й Международной конференции молодых учёных и студентов Поволжской молодежной академии наук (Самара, 2003); Международной научно-практической конференции молодых ученых « Вчеш майбутнього» (Одесса, 2002).

Основное содержание работы опубликовано в 14 научных публикациях.

Апробация работы состоялась на заседании межкафедрального коллоквиума фармацевтического факультета ГУ ВПО СамГМУ МЗ РФ при участии кафедр фармакологии, фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии, фармацевтической технологии, фармацевтической химии, медицинской и биологической физики с курсом математики и информатики

Объем и структура работы: Диссертационная работа изложена на 158 страницах машинописного текста, содержит 27 таблиц, 13 рисунков. Диссертация состоит из введения, литературного обзора, описания объектов и методик исследования, главы, отражающей результаты собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов и списка литературы, включающего 212 источников, из которых 104 на иностранных языках.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования: Работа выполнена на белых беспородных крысах обоего пола с исходной массой 170-210 г, и белых беспородных мышах с исходной массой 18-22 г. Использованные в работе животные были получены из вивария СамГМУ. Животных размещали в стандартных пластиковых клетках и содержали на протяжении всего экспериментального периода в условиях вивария на стандартном лабораторном рационе при свободном доступе к воде в помещении с температурой воздуха 18-25 °С. Эксперименты выполняли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных».

Расторопши экстракт жидкий был получен методом модифицированной перколяции на 80% спирте; эхинацеи, родиолы, коры сирени настойки, ивы корзиночной экстракт - модифицированной мацерации на 40% спирте, семян лимонника настойка - на 70% спирте на кафедре фармакогнозии ГУ ВПО СамГМУ МЗ РФ доктором фарм. наук, профессором В.А. Куркиным, кандидатом фарм. наук Е.В. Авдеевой. Элеутерококка экстракт являлся промышленным образцом, (производитель ЗАО «Эвалар», г. Бийск), стандартизованный по сумме элеутерозидов В и Д. Родиолы розовой экстракт (производитель - «Самарская фармацевтическая фабрика») был стандартизован по содержанию розавина. Розавин, сирингин, триандрин и силибин получены по технологическим способам, защищенными патентами РФ на изобретение.

В качестве препаратов сравнения использовали эталонные препараты: ноотроп пирацетам в дозе 200 мг/кг, транквилизатор феназепам в дозе 2 мг/кг, антидепрессант амитриптилин в дозе 100 мг/кг.

Жидкие экстракты и настойки вводили внутрижелудочно через зонд, предварительно разбавив дистиллированной водой, в различных дозировках: 10, 25, 50, 100, 200, 500 мг/кг один раз в сутки от одного до 10 дней, за 30 минут до тестирования. Розавин, сирингин, триандрин, силибин вводили в дозе 10 мг/кг, предварительно растворив в дистиллированной воде, за 30 минут до исследования. Контрольные животные получали внутрижелудочно эквиобъемные количества 0,9% раствора ^О. Для каждой дозы препаратов был взяты контрольные группы животных, получавшие спирт в эквивалентных количествах, равных по массе дозе лекарственного средства.

Снотворные и антигипногенные свойства препаратов изучали на моделях тиопенталового и хлоралгидратного сна (Т.А. Воронина, СБ. Середенин, 2000). Продолжительность снотворного действия тиопентала-натрия (50 мг/кг внутрибрюшинно) и хлоралгидрата (350 мг/кг подкожно) оценивали по времени нахождения животных в боковом положении.

Актопротекторные_свойства (влияние на физическую

работоспособность и выносливость) исследовали в методике

принудительного плавания мышей (Т.А. Воронина, СБ. Середенин, 2000) с утяжеляющим грузом в 10 % от массы тела животного. Первое плавание животных (определение физической работоспособности) начиналось через 30 мин после введения фитопрепаратов или воды (контроль), животные плавали до первого полного погружения в воду. Для определения выносливости мышей через 1 ч отдыха снова заставляли плавать с тем же грузом, в тех же условиях.

Ориентировочно-исследовательскую реакцию изучали в условиях методики «открытое поле» (Я. Буреш, 1991, А.Л. Маркель, 1988). Подсчитывали перемещение с квадрата на квадрат (горизонтальная активность) - в 16 внешних и в 9 внутренних, количество вставаний на задние лапки (вертикальная активность), количество обследованных отверстий (исследовательская активность), количество умываний (груминг) и количество актов дефекации по количеству фекальных шариков (болюсов).

Для изучения влияния веществ на показатели обучаемости и памяти использовали методику выработки условной реакции пассивного избегания (УРПИ) на основе запоминания «опасного» отсека в экспериментальной установке (Ю.С Бородкин, 1986). Проверку сохранения УРПИ проводили через 60 минут и 24 часа.

Оценку церебропротективной активности веществ и фитопрепаратов производили с помощью методики амнезии, вызванной максимальным электросудорожным шоком (Т. А. Воронина, Р.У. Островская, 1998).

«Конфликтная ситуация» по Vogel (J. Vogel, 1971) осуществлялась путем столкновения 2-х рефлексов: питьевого условного рефлекса и безусловного рефлекса избегания электроболевого раздражения. Об анксиолитической активности судили по разнице взятий воды, несмотря на удар током (наказуемое взятие воды), в контрольной и опытной группах.

Методика приподнятого крестообразного лабиринта (ПКЛ) (S. Pellow, S. E. File, 1986) основана на навыке предпочтения грызунами темных нор, естественного страха нахождения в открытых площадках и падения с высоты. Анксиолитический эффект препаратов оценивался по увеличению времени нахождения в светлых рукавах ПКЛ и на его центральной площадке.

Антидепрессивную активность фитопрепаратов и фенилпропаноидов изучали с помощью теста «отчаяния» (Т.А. Воронина, СБ. Середенин, 2000). Стрессовое состояние вызывали у крыс форсированным плаванием. Антидепрессивную активность препаратов оценивали по времени характерной неподвижной позы, которую расценивали как проявление подавленности, «отчаяния».

Анализ механизма нейротропной активности изучаемых препаратов и субстанций проводился с использованием теста резерпиновой гипотермии, влияния на эффекты клофелина, L-дофа, а также блокатора бензодиазепиновых рецепторов флумазенила.

Полученные данные были обработаны методами дискриптивной статистики и представлены в виде средней арифметической и её стандартной ошибки (М±т). О достоверности различий судили с помощью критерия t Стьюдепта и U Манна-Уитни. При множественных сравнениях с контрольной группой использовали поправку Бонферони. В качестве показателя сопряжения использован непараметрический коэффициент ранговой корреляции Спирмена. Использование данного показателя было обусловлено разной степенью нормированности и ранжирования используемых показателей.

Проверка статистических гипотез проводилась при критическом уровне значимости рл0,05. Статистическая обработка результатов выполнялась с помощью пакета прикладных программ StatSoft Statistica v.6.0 и Exel 2000 (MS Office 2000, USA).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

В результате проведенных исследований было установлено, что изученные фитопрепараты и фенилпропаноиды обладают как тонизирующим, так и угнетающим влиянием на ЦНС. В таблице 1 представлены данные о влиянии фитопрепаратов на длительность тиопенталового сна.

Наиболее выраженными стимулирующими свойствами обладала сирени настойка, сокращающая сон на 48,5%- 94,5% в зависимости от дозы 10-100

мг/кг. Активность родиолы розовой настойки в дозе 25 мг/кг по степени выраженности действия была сопоставима со стимулирующим эффектом родиолы экстракта жидкого в дозе 10 мг/кг и значительно выше стимулирующих свойств данного препарата в эквивалентной дозе (25 мг/кг), что свидетельствует о целесообразности использования в медицинской практике лекарственной формы - настойки. Эхинацеи настойка и элеутерококка экстракт и укорачивали сон в дозе 100 мг/кг соответственно на 84,9% и 79,5%, лимонника китайского настойка на 77%, ивы корзиночной экстракт на 44,6%.

Введение мелиссы настойки оказывало противоположное действие и в зависимости от дозы (50-200 мг/кг) увеличивало продолжительность сна на 54,6-108,4 %. Степень выраженности седативного эффекта расторопши экстракта жидкого в дозе 10 мг/кг была сопоставима с активностью мелиссы настойки в дозе 25 мг/кг (увеличение продолжительности тиопенталового сна в 1,3 раза).

В данном эксперименте дальнейшее увеличение дозы препаратов (500 мг/кг) приводило к равнозначному депримирующему действию, что, по-видимому, связано с угнетающим влиянием на центральную нервную систему экстрагента (спирт) в составе изучаемых настоек и экстрактов.

Результаты, полученные на модели хлоралгидратного сна, подтверждают данные в опытах с использованием тиопентала-натрия. Экспериментальные показатели, полученные в опытах на крысах, аналогичны значениям в опытах на мышах.

Изучение нейротропного действия фенилпропаноидов на модели хлоралгидратного сна показало, что наиболее выраженными стимулирующими свойствами обладал сирингин, длительность сна падала на 71,4% (рЛ0,05), триандрин также проявлял активность на этой модели - сон сокращался на 42,9% (р<0,05). На модели тиопенталового сна наиболее выраженные антигипногенные свойства показал триандрин, сокращавший продолжительность сна на 66% (р<0,05). Розавин на этой модели проявлял более низкую тонизирующую активность, соответственно уменьшая сон на 27,6% (р < 0,05). Введение сирингина и силибина пробуждающего и угнетающего действия не оказывало.

Исследование влияния фитопрепаратов и субстанций на физическую работоспособность и выносливость мышей показало, что все фитопрепараты в исследуемых дозах, за исключением родиолы настойки, элеутерококка экстракта и расторопши экстракта жидкого, повышали физическую работоспособность животных. Наибольшие значения в отношении физической работоспособности животных (увеличение длительности первого плавания на 50,6 %, р<0,05), отмечались для эхинацеи настойки. Далее влияние на данный фактор убывало в ряду: ивы корзиночной экстракт - 48,1% (р<0,05); сирени настойка-40,3 % (р<0,05).

Таблица 1

Влияние фитопрепаратов на продолжительность тиопенталового сна

у мышей ( М ± т)

Продолжительность

Число Доза тиопенталового сна у животных, мин

Фитопрепараты живот- (М±ш)

ных мг/кг Контрольная Эксперимен-

группа тальная группа

Родиолы розовой 15 10 56,3±8,0 19,3±14

настойка 15 25 6,6±0,5*

15 100 58,3±7,1 126,2±43

15 500 190,7±3,1*

Родиолы экстракт 15 10 4,5±0,4*

жидкий 15 25 55,1 ±8,5 10,1 ±0,7

15 100 88,0±13,1

15 500 187,0±5,3*

Сирени настойка 10 10 99,5±9,2 48,3±7,8*

10 100 5,4±0,3*

10 200 7,5±1,3*

10 500 101,4±8,9 104,2±103

Элеутерококка экстракт 10 100 94,6±7,8 19,4 ±3,4*

жидкий 10 200 146,2±13,2*

9 500 90,5±8,6 156,7±10,5

Эхинацеи 10 50 73,4±14,6 93,1±7,6

пурпурной настойка 10 100 11,1±0,9 *

10 200 126,0±9,9

10 500 184,4±2,6*

Мелиссы настойка 10 10 61,8 ±2,4 34,7±4,9

10 25 54,1±6,5

12 50 61,б±3,1 95,6± 14,7»

12 100 115,7±16,7*

12 200 128,8±10,4*

9 500 73,1 ±6,3 168,2±11,0*

Расторопши экстракт 20 10 78,2±12,9 1043 ±8,9*

жидкий 10 100 91,0±26,0

10 200 91,5±5Д

!0 500 126.3±7.9*

Лимоиника китайского 12 25 109,1±24,0 1Ю,5±22,2

настойка (ссмсна) 12 50 129,7± 26,6 81,9±4,6

12 100 143,3± 11,0 85,0±14,8*

10 500 143,3±11,0 150,8±6,4

Ивы корзиночной 10 10 54,0±17,0 40ДЫ0.5

экстракт(кора) 10 25 75,0±10,3 61,2±9,4

10 100 71,1±14,9 39,4±13,2*

Примечание : «р» -достоверность различий между опытом и контролем, * - р <0,05;

** - р 5 0,001

Несколько иную картину наблюдали при определении выносливости животных.

По данному показателю актопротекторной активности препаратом-лидером являлся элеутерококка экстракт, длительность второго плавания животных увеличивалась на 68,8% (р<0,05). Далее, по убыванию: эхинацеи пурпурной настойка - на 50,0% (р<0,05), ивы корзиночной экстракт - 49,6% (р< 0,05).

При исследовании влияния фенилпропаноидов на актопротекторные свойства у мышей (табл.2) наибольшее влияние на показатели работоспособности оказывал триандрин, - длительность первого плавания увеличивалась на 49,2% (р < 0,05), силибин наоборот, сокращал продолжительность плавания на 48,2%. На показатели выносливости в большей степени влиял розавин - 38,2% (р<0,05), чем триандрин - 35,4% (р<0,05).

Таблица 2

Влияние фенилпропаноидов на показатели физической работоспособности и выносливости мышей в тесте принудительного плавания (М±т).

Феншшропа-ноид 10мг/кг Число живот ных Длительность первого плавания Опыт/кон троль (%) Длительность второго плавания Опыт/кон троль (%)

Контроль 10 84,9±2,9 100 25,6+1,9 100

Розавин 9 119,4±8,9 140,6 35,4±4,5* 138,2

Контроль 10 70,5±5,9 100 30,5+4,4 100

Триандрин 10 105,2±10,6* 149,2 41,3±5,1* 135,4

Контроль 10 83,8+24,9 100 56,5±14,8 100

Сирингин 10 110,7±29,6 132,1 40,8±8,0 72,2

Контроль 10 101,6±26,5 100 49,8±14,2 100

Силибин 8 52,7±10,9* 51,8 38,8±6,8 77,9

Примечание: * - р£0,05

Результаты изучения ориентировочно -исследовательской реакции показали, что в наибольшей степени общая двигательная активность (сумма горизонтальной активности во внешних, внутренних квадратах и вертикальных стоек) увеличивалась у животных, которым был введен ивы корзиночной экстракт - на 71,3% (р<0,05), лимонника настойка - на 68,3% (р<0,05), элеутерококка экстракт - на 54,3% (р<0,05), эхинацеи настойка - на 14,8% (р< 0,05), в основном за счет горизонтального компонента. Розавин, сирингин и триандрин также увеличивали общий объем движений животных в «открытом поле» от 25,5% до 127,8% (р<0,05).

Ускоряли становление адаптации, способствовали снижению уровня эмоциональности и страха (выражающееся в увеличении числа выхода животных во внутренние квадраты, уменьшении числа болюсов) родиолы розовой экстракт и эхинацеи настойка, а также розавин.

Влияние на выработку условной реакции пассивного избегания ГУРПИ). Исследуя влияние препаратов на поведенческие реакции в камере для выработки УРПИ, регистрировали такие количественные показатели, как латентный период (время от момента помещения животного в светлый отсек камеры до момента полного перехода в тёмный отсек), общее время пребывания в темном и светлом отсеках камеры. Исследование эффективности запоминания «опасного» отсека лабиринта (который становился опасным после нанесения электроболевого раздражения) после выработки УРПИ показало, что введение родиолы розовой экстракта практически прекращало заходы животных в темный отсек, в этом случае оно составляло по сравнению с временем в контроле - 31,7%, 1,0% времени (р< 0,001). Из остальных фитопрепаратов достоверно влияли на сокращение периода пребывания в «опасном» отсеке лишь сирени настойка и элеутерококка экстракт - соответственно на 17,0% и 40,1% (р < 0,05). Одновременно, на фоне введения данных средств, значимо возрастали латентные периоды захода в темный отсек. Пирацетам не влиял на среднее время нахождения в темном отсеке, увеличивая в то же время латентный период с 82,5±7,0 сек до 125,5+2,8* сек.

После однократного сеанса обучения УРПИ мыши меньше времени находились в темном «опасном» отсеке лабиринта, чем в светлом, только под влиянием розавина. Он практически прекращал заходы животных в светлый отсек, - соответственно, сокращая время пребывания в нем до 0,75% (р<0,001). Латентный период захода в темный отсек возрастал в наибольшей степени под влиянием розавина (контроль 102,0+13,0 сек; розавин 176,9+8,0* сек). Препарат сравнения пирацетам проявил менее выраженное действие, в этом случае возрастал латентный период захода в темный отсек до обучения УРПИ: в контроле 17,6+3,7, в опыте 22,7+2,0*сек.

Антиамнестическое действие. Нанесение электрошокового воздействия (ЭШ) сразу после сеанса обучения УРПИ оказывало амнезирующее влияние на воспроизведение условной реакции пассивного избегания у контрольной группы животных. После амнезирующего электрошокового воздействия отсутствовали животные, способные воспроизводить УРПИ до критерия запоминания.

Отсроченное на 1 час воспроизведение условной реакции пассивного избегания было почти полным после введения родиолы розовой экстракта и сирени настойки. По сравнению с 200 сек - критерием запоминания опасного отсека, латентный период при введении экстракта родиолы розовой -192,4+17,6** сек составил 96,2%. В случае введения сирени настойки воспроизведение УРПИ составляло 90,0%, а время латентного периода захода в темный отсек 18О,О+3,0** сек.

Еще эффективнее действовал на восстановление условной реакции пассивного избегания пирацетам в дозе 200 мг/кг. На фоне его введения наблюдали 100% прекращение заходов в темный отсек, латентный период составил 200,0** сек. Все животные запоминали УРПИ до критерия. В меньшей степени (на 30,5-73,6%, р<0,05) восстанавливалось отсроченное

воспроизведение реакции пассивного избегания после введения препаратов элеутерококка, лимонника, ивы корзиночной, эхинацеи и мелиссы (рис. 1).

Розавин также в 100% случаев прекращал заходы животных в темный отсек через 60 минут после обучения и электрошока, УРПИ животные запоминали до критерия. Воспроизведение УРПИ при введении сирингина и триандрина составило соответственно 62,7% и 63,7% (р<0,05).

Латентный период запада втемкыйетсск, сек

ГЪрацетам, 200 Ивы корзиночной экстракт,100 Контрен.

Элеутерококка экстракт, 100 Контроль Эхинацеи настойка, 100 Контрагь FbcToponuM экстракт, 100 Контрогъ

йэдио/ы розовой экстракт, 25 Контроль Мэписсы настойка, 200 Контрсуъ Офени настойка.100 Контрогъ Лимонника настойка, 100 Коигро/ъ

LL; 4<(

*

» i ■5Н g» г к ••

iLL';

stp

ЕЛ'

Ш* 1 [ ? 1 -

50 100 150 200

250

I через 24 часа после обучения

□ через 60 мин.поспе обучения

I до обучения

Рис. 1. Влияние фитопрепаратов на латентный период захода мышей в темный «опасный» отсек лабиринта после воздействия ампезирующего фактора (*-p<0,05;**-p<0,001)

Динамика показателей запоминания условной реакции пассивного избегания при высадке животных через 1 сутки после обучения и ЭШ свидетельствует о способности пирацетама в дозе 200 мг/кг, розавина и родиолы розовой экстракта в наибольшей степени сохранять и воспроизводить реакцию пассивного избегания. Количество животных, воспроизводивших УРПИ до критерия, составляло на фоне пирацетама 69,6% (р<0,05), родиолы экстракта 68,6% (р<0,05), розавина - 62,2% (р<0,05). Подобная активность в отношении долгосрочного запоминания была отмечена при введении мышам ивы корзиночной экстракта и выделенного из нее триандрина. Воспроизведение УРПИ составляло соответственно 62,9% ф<0,05) и 49,0% (р<0,05) (в сравнении с критерием запоминания 200 сек). Остальные фитопрепараты и вещества

слабее влияли на восстановление пассивного избегания темного отсека. Воспроизведение УРПИ при введении эхинацеи, сирени настойки, элеутерококка экстракта, лимонника и мелиссы настойки составило соответственно 49%-16,8% (р<0,05).

Анксиолитическая активность. В условиях конфликтной ситуации отчетливое анксиолитическое действие, которое выражалось в уменьшении страха перед получением болевого раздражения и достоверном увеличении наказуемых взятий воды по сравнению с контролем (табл.3), проявили родиолы экстракт, мелиссы настойка и сирени настойка.

Таблица 3

Влияние фитопрепаратов на число наказуемых взятий воды из поилки (М±m)

Фитопрепарат мг/кг Количество живот Количество наказуемых взятий воды из поилки

Контроль, п=10 Опыт

Родиолы экстракт,25 10 10,8±1,8 63,0±17,8*

Сирени настойка, 100 9 10,8±1,5 16,4±1,2*

Лимошшка настойка, 100 8 11,2±3,2 16,1±7,3

Элеутерококка экстракт.ЮО 10 10,5±2,5 23,0±8,0

Эхинацеи настойка, 100 10 13,2±4,1 11,1±1,4

Мелиссы настойка, 200 10 10,7+2,3 25,7±3,8*

Ивы корзиночной экстракт.ЮО 8 11,2+3,2 9,7±4,0

Расторопши экстракт, 10 10 10,5±2,5 9,2±1,2

Розавин, 10 И 8,3±1,2 62,0+7,8*

Сирингин, 10 9 8,4±3,1 35,4+4,9*

Триандрин, 10 9 11,2±3,3 28,1±12,0

Силибин,10 10 10,5+2,7 8,0±1,1

Диазепам,10 10 12,8+1,8 97,1±15,0**

Примечание: *- р ¿0,05,** - р <0,001

Несмотря на получение болевых раздражений, крысы пытались взять воду, увеличивая этот показатель поведения по сравнению с данными в контроле соответственно на 583,3% (р<0,05), 240,1% (р<0,05), 151,8% (р<0,05). Аналогичный родиолы розовой экстракту эффект оказывал диазепам в дозе 2 мг/кг, - число наказуемых взятий воды из поилки повышалось на 653,0% (р< 0,001).

Близкий эффект к действию фитопрепаратов оказали и выделенные из экстракта родиолы и настойки сирени вещества - розавин увеличил число наказуемых взятий воды из поилки на 747,0% (р<0,05), сирингин на 421,4% (р< 0,05).

Влияние фитопрепаратов и веществ на поведение животных в тесте ненаказуемого поведения (приподнятого крестообразного лабиринта - ПКЛ)

основано на навыке предпочтения грызунами темных нор, естественного страха нахождения на открытых площадках и падения с высоты. В контроле интактные животные предпочитали большую часть времени проводить в закрытых, темных рукавах, чем в светлых (соответственно, 199,7+21,0* сек (65,6%) и 64,8+15,5* сек,-21,6% времени). Введение элеутерококка экстракта сдвигало это соотношение в сторону увеличения пребывания животных в открытых рукавах: соответственно в темных 45,0% и в светлых рукавах 39,4 % (р < 0,05) времени. На фоне введения родиолы розовой экстракта увеличивалось время пребывания в открытых рукавах на 28,5% (р<0,05), в то же время период нахождения в закрытых рукавах оставался неизменным. Как в случае введения препарата родиолы, так и элеутерококка увеличивалось число выходов животных в открытые рукава в 3,0 и 2,8 раза (р<0,05). Анксиолитический эффект мелиссы настойки проявился лишь при курсовом введении (10 дней 1 раз в сутки). В данном случае время пребывания в закрытых рукавах сократилось на 9,3% (р<0,05) по сравнению с контролем. Время пребывания на открытой площадке увеличилось на 230% (р<0,05). Сходный, но более выраженный с экстрактом элеутерококка, эффект, оказывал диазепам, который повышал время нахождения в открытых рукавах на 92,6% (р<0,05).

Введение сирингина увеличило время пребывания в открытых рукавах до 24,4% (р<0,001), время пребывания на открытой площадке увеличилось на 57,8% (р<0,05).

Тест «отчаяния». При форсированном плавании крыс, используемом для моделирования депрессивного состояния, в качестве его эквивалента учитывают длительность периодов неподвижности животного в воде (отказ от деятельности, «отчаяние»). В данном тесте большая часть фитопрепаратов, за исключением мелиссы настойки, расторопши экстракта и ивы корзиночной экстракта достоверно уменьшали время иммобилизации и затягивали период активного плавания, проявляя антидепрессивную активность, что отражено в таблице 4.

В наибольшей степени уменьшался период иммобилизации при введении элеутерококка экстракта - на 56,4% (р<0,05). Причем степень выраженности эффекта при введении данного фитопрепарата была близка к антидепрессивным свойствам амитриптилина в дозе 100 мг/кг, в этом случае наблюдали сокращение периода неподвижности на 73,5% (р<0,05). Далее по убыванию антидепрессивной активности следуют родиолы экстракт, эхинацеи настойка, сирени настойка, лимонника настойка: соответственно, на 53,8%, 49,0%, 46,7% и 29,8% (во всех случаях р<0,05).

Таблица 4

Влияние фитопрепаратов на продолжительность цикла иммобилизации в тесте «отчаяния» (М±т)

Фитопрепараты мг/кг Число живо тных Число активных попыток Активное плавание Поза «отчаяния»

Лимонника настойка, 100 10 Контроль, п=9 Опыт Контроль, п=9 Опыт Контроль, п=9 Опыт

5,6±0,5 5,8±1,0 94,4±4,б 155,8±22,8* 205,б±4,6 144,2±22,8*

Эхинацеи настойка, 100 10 5,б±0,8 5,4±0,7 94,4±6,7 195,3±21,9* 205,6±6,7 104,7+21,9*

Сирени настойка, 100 10 6,1±1,1 5,9±0,6 95,0+4,2 190,8±20,2* 205,0±4,2 109,2*20,2*

Элеутерококка экстракт, 100 10 5,5±1,б 4,9±0,9 95,3±8,1 210,9±24,3* 204,7±8,1 89,1±24,3*

Мелиссы настойка, 200 10 5,2+1,7 5,0±1,0 110,3±9,5 114,1±10,0 189,7±9,5 185,9±10,0

Ивы корзиночной экстракт, 100 10 5,4±0,8 5,5¿A8 112,4±8,8 128,5±17,1 187,6±8,8 171,5±17,1

Родиолы розовой экстракт, 25 10 5,б±0,7 б,7±0,7 94,6±10,6 205,9±11,4* 205,4±10,6 94,8±11,4*

Расторопши экстракт, 10 10 5,2±0,7 5,4±0,6 99,2±12,2 101,5±10,0 200,8±12,2 198,5±10,0

Амитриптилин, 100 11 5,б±0,5 6,0±0,7 94,4±4,6 245,6±8,7* 205,6±4,6 54,4±8,7*

Примечание: * - р S 0,05, - р S 0,001.

Из выделенных веществ наибольшую эффективность проявляли сирингин и розавин, время иммобилизации сокращалось соответственно в 1,9 и 1,4 раза (р <0,05). Число активных попыток выбраться из воды в наибольшей степени возрастало также при введении сирингина и розавина - соответственно в 9,1 (р <0,001) и 3,8 (р<0,05) раз больше по сравнению с данными в контроле.

Анализ механизма нейротропной активности изучаемых фитопрепаратов и

фенилпропаноидов

Влияние исследуемых фитопрепаратов и веществ на эффекты резерпина. При исследовании действия препаратов на гипотермический эффект резерпина и блефароптоз были получены следующие результаты: наиболее отчётливо препятствовал развитию резерпиновой гипотермии сирингин, введение которого совместно с резерпином приводило к снижению температуры тела только до 33,4+0,5* °С по сравнению с 32,1+0,2 °С в контроле. Существенного влияния на блефароптоз изучаемые фитопрепараты и другие субстанции не оказывали. Из полученных данных можно сделать вывод, что сирингин проявляет антагонизм с резерпином, что, по-видимому, свидетельствует о его влиянии на обмен биогенных аминов и возможном моноаминопозитивном действии.

Влияние фитопрепаратов и веществ на депрессивные эффекты клофелина у крыс. Наиболее отчетливый антидепрессивный эффект в отношении действия клофелина проявляли препараты лимонника и эхинацеи. Двигательная активность на фоне введения лимонника настойки усиливалась в 4,3 раза (р< 0,05). Температура тела у мышей в контрольной группе после введения клофелина составляла 33,4+0,3 °С, а у животных данной группы 34,6+0,5* °С (на 3,6 % выше). Эхинацеи настойка также препятствовала гипотермическому действию клофелина, в той же степени, что и лимонника настойка, двигательная активность возрастала на 67,5% (р<0,05). Полученные данные свидетельствуют о реализации нейротропного эффекта лимонника и эхинацеи настоек путем взаимодействия с адренергическими структурами.

Влияние фитопрепаратов и веществ на эффекты Ь-дофа (1-3.4-диоксифенилаланина") у крыс.. Введение Ь-дофа в дозе 200 мг/кг вызывает депрессивное состояние, которое оценивают по угнетению поведения, гипотермии, уменьшению двигательной активности. Введение антидепрессантов оказывает противоположный эффект, вызывая у животных гипертермию, возбуждение, гиперкинез. Отчётливо препятствовал развитию гипотермии розавин. В контроле при введении Ь-дофа температура тела опускалась до 32,3+0,2 °С, а при совместном введении розавина и Ь-дофа не только понижалась, а даже повышалась до 37,0+0,27** °С (на 14,5%). Двигательная активность повышалась на 276,5% (р<0,05). Эхинацеи настойка также препятствовала развитию гипотермии, введение лимонника настойки повышало двигательную активность в 6,0 раз (р<0,05).

Таким образом, усиление стимулирующего действия L - дофа наблюдалось на фоне введения розавина, лимонника настойки и эхинацеи настойки, что свидетельствует об их дофаминпозитивном действии.

Исследование механизма анксиолитического эффекта фитопрепаратов и индивидуальных веществ на уровне IIHC. Для определения механизма анксиолитического эффекта мелиссы настойки исследовали влияние данного фитопрепарата на поведение крыс в «открытом поле» на фоне блокатора бензодиазепиновых рецепторов флумазенила. Анксиолитический эффект сирени настойки, элеутерококка экстракта, родиолы экстракта, розавина и сирингина на фоне флумазенила исследовали в методике конфликтной ситуации (Vogel) и приподнятого крестообразного лабиринта.

Введение флумазенила совместно с мелиссы настойкой устраняло её седативный и анксиолитический эффекты. В тестах с другими фитопрепаратами и фенилпропаноидами флумазенил не влиял на проявление анксиолитических свойств препаратов.

Исходя из полученных данных, можно предполагать, что взаимодействие с бензодиазепиновыми рецепторами является одним из компонентов влияния мелиссы на ЦНС, у остальных же фитопрепаратов и индивидуальных веществ существует иной механизм анксиолитического эффекта вследствие неоднозначности химического состава фитопрепаратов.

Острая токсичность исследуемых фитопрепаратов. Согласно ГОСТ 121007-76 (Государственный стандарт на вредные вещества), все исследуемые нами фитопрепараты можно отнести к IV классу токсичности: малотоксичные вещества.

В результате проведенного исследования группы фитопрепаратов растений, содержащих фенилпропаноиды, а также фенилпропаноидов розавина, сиринпша, триандрипа и силибина, выделенных из родиолы розовой, элеутерококка колючего, сирени обыкновенной, ивы корзиночной, расторопши пятнистой, обнаружено, что все они обладают нейротропными свойствами.

Пробуждающее действие на модели тиопенталового сна было более выражено у сирени настойки, далее по убыванию эффективности следуют родиолы экстракт, элеутерококка экстракт, эхинацеи настойка, лимонника настойка, ивы корзиночной экстракт. Оптимальными дозами для применения в клинической практике в качестве тонизирующих средств для элеутерококка экстракта, лимонника настойки, ивы корзиночной экстракта, сирени настойки, эхинацеи настойки является доза 100 мг/кг, для родиолы экстракта- 10 - мг/кг, родиолы настойки - 25 мг/кг, мелиссы настойки в качестве седативного средства - 50-200 мг/кг.

Интересно, что у родиолы розовой экстракта антигипиогенные свойства выражепы в большей степени (сокращение сна на 91,8%), чем у розавина (на 27%). Это может свидетельствовать в пользу суммарного препарата, содержащего весь комплекс действующих и сопутствующих веществ, обусловливающий уникальную биологическую активность данного растения. Кроме того, установлено, что тонизирующий эффект розавина, и

вероятно, экстракта, реализуется путем воздействия на субкортикальные структуры головного мозга, поскольку антигипногенный эффект его реализуется на модели тиопенталового сна. Тонизирующие эффекты сирингина и триандрина, в свою очередь, сопоставимы с эффектами элеутерококка экстракта и ивы корзиночной экстракта, что может говорить о доминирующем влиянии в данных препаратах выделенных фенилпропаноидов. Сирингин реализует свое антигипногенное действие путем воздействия на кору головного мозга, поскольку антигипногенный эффект реализуется на модели хлоралгидратного сна, а триандрин как на кору, так и ретикулярную формацию головного мозга.

Для мелиссы настойки и расторопши экстракта были обнаружены седативные эффекты, Этот результат не был неожиданным. Дело в том, что ранее (В.А. Куркин, 1996) при изучении нейротропной и двигательной активности была выявлена закономерность, в соответствии с которой агликоны, в отличие от соответствующих гликозидов, не оказывают существенного влияния на спонтанную двигательную активность животных и практически не обладают стимулирующим влиянием на ЦНС. Поскольку одним из действующих гепатопротекторных веществ плодов расторопши пятнистой является силибин, то, видимо, именно здесь присутствие агликона (кониферилового спирта) накладывает свой отпечаток на низкую нейротропную активность силибина и расторопши экстракта. В случае мелиссы настойки отсутствие тонизирующего эффекта может быть обусловлено комплексом действующих БАС, в том числе и эфирными маслами, поскольку и ранее для розмариновой кислоты не были описаны нейротропные свойства.

Анализ актопротекторного действия фитопрепаратов и веществ позволяет предположить с учетом проведенных ранее исследований (Крендаль Ф.П., 1991),что механизм защитного и антистрессорного действия фенилпропаноида розавина обусловлен антиадренергической активностью, стимуляцией эндогенной антиопиоидной системы, способностью тормозить перекисное окисление липидов и образование свободных радикалов. Стресспротективная активность экстракта элеутерококка подтверждается литературными данными (В.И. Фёдоров, 1999), причем отмечается, что механизмом подобного действия является предупреждение медиаторно-гормонального дисбаланса (адреналин/норадреналин, ГАМК/ глутамат + аспарагин) в центральных и периферических структурах. Поскольку отношения между норадренергической и серотонинергической системами являются реципроктными, то результат блокады адренорецепторов или адреномиметическое действие

препарата может привести к относительному преобладанию серотонинергической системы при воздействии комплекса БАС сирени и элеутерококка.

Как показали результаты наших экспериментов, многие вещества и препараты в разной степени, но достаточно эффективно, оптимизировали процессы памяти у интактных животных (за исключением расторопши экстракта, мелиссы настойки, ивы корзиночной экстракта).

В условиях амнезирующего воздействия на мозг электрошока практически все экстракты и настойки исследуемых растений, а также выделенный из экстракта родиолы розовой розавин осуществляли церебропротекцию. Выделенные субстанции сирингин и триандрин не влияли на обучение, стимулируя в то же время, процессы кратковременного (триандрин) и долговременного (сирингин, триандрин) запоминания и воспроизведения УРПИ. По-видимому, исследованные вещества неодинаково влияют на механизмы фиксации, хранение и воспроизведение памятного следа.

Нами обнаружена взаимосвязь между влиянием родиолы экстракта и розавина на исследовательскую активность и эмоциональность со стимуляцией дофаминергических структур. В тоже время другими исследователями отмечено соответствие между наличием в спектре действия пептидов дофаминостимулирующих свойств и их облегчающим влиянием на обучение. В наших исследованиях все препараты, показавшие в эксперименте дофаминомиметическое действие, одновременно улучшали обучение животных. В связи с этими данными мы можем предполагать наличие единого механизма ноотропного эффекта экстракта родиолы розовой, розавина и пептидов.

Наиболее выраженные анксиолитические свойства в тестах наказуемого и ненаказуемого поведения проявили родиолы экстракт, розавин, сирени настойка, элеутерококка экстракт, сирингин и мелиссы настойка. Отчетливое анксиолитическое действие и связь данного эффекта мелиссы настойки с бензодиазепиновыми рецепторами подтверждается в тесте с антагонистом бензодиазепиновых рецепторов флумазенилом. Блокатор рецепторов флумазенил устранял седативное действие мелиссы настойки в тесте «открытое поле». Совместное введение флумазенила с остальными вышеперечисленными фитопрепаратами и веществами не привело к устранению анксиолитического эффекта. В то же время при проведении межгруппового корреляционного анализа выявилась умеренная связь между анксиолитической активностью сирени настойки (&8=0,48, р=0,03) и её антидепрессивной активностью. В связи с этим можно предполагать, что в основе антидепрессивного эффекта сирени настойки может лежать анксиолитический эффект.

При изучении антидепрессивного эффекта полученные нами данные позволили сделать вывод о наличии данного компонента в спектре нейротропной активности у пяти из изучаемых фитопрепаратов (элеутерококка и родиолы экстрактов, сирени, лимонника, эхинацеи настоек) и у двух выделенных веществ (розавина и сирингина). Интересно, что при проведении межгруппового корреляционного анализа была установлена умеренно тесная связь между временем активного плавания в тесте "отчаяния" и физической работоспособностью в случае ивы корзиночной экстракта (^=0,51, р=0,05) и элеутерококка экстракта (&8=0,49, р=0,04). Таким образом, можно предполагать, что увеличение физической работоспособности и антидепрессивная активность фитопрепаратов имеют единый механизм

развития эффектов, в частности, это путь увеличения выброса норадреналина и серотонина.

Полученные нами данные о нейротропных свойствах фенилпропаноидов подтверждают высказанную ранее мысль (Куркин В.А., 1996), что гликозиды данных БАС (розавин, сирингин, триандрин) активнее их агликонов (силибин). Отмечено, что тонизирующие свойства характерны именно для гликозидов коричных спиртов, в то время как для производных коричных кислот (цикориевая, розмариновая кислоты) нейротропной активности не выявлено.

Высокая тонизирующая, актопротекторная, ноотропная, анксиолитическая, антидепрессивная активность индивидуальных гликозидов родиолы, сирени, элеутерококка и ивы корзиночной свидетельствует о том, что именно они являются основными действующими веществами экстрактов и настоек этих растений.

Таким образом, широкий спектр фармакологической активности обусловлен в исследуемых препаратах комплексом биологически активных веществ. Можно предполагать, что важное значение в реализации фармакотерапевтического действия принадлежит сочетанному влиянию фенилпропаноидов и комплексу других присутствующих БАС.

Полученные данные свидетельствуют о перспективности исследования и изучения в качестве тонизирующих средств сырья ивы корзиночной, сирени обыкновенной, эхинацеи пурпурной и расширения показаний к применению препаратов родиолы розовой, лимонника китайского, элеутерококка колючего, мелиссы обыкновенной.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что все исследуемые фитопрепараты и выделенные фенилпропаноиды обладают нейротропной активностью; фенилпропаноиды гликозидной структуры (производные коричных спиртов) обладают стимулирующими свойствами.

2. Среди изучаемых объектов наиболее широким спектром нейротропной активности обладает родиолы розовой экстракт и циннамилгликозид розавин. Розавин имеет преимущества перед известным ноотропом пирацетамом. Для розавина установлен дофаминомиметический механизм действия.

3. Сирени настойка наряду с элеутерококка экстрактом, а также сирингин проявляют тонизирующую, актопротекторную, анксиолитическую, антидепрессивную активность, влияют на формирование условных рефлексов и краткосрочное запоминание. Сирингин в тесте с резерпином проявляет антагонизм, что свидетельствует о его влиянии на обмен биогенных моноаминов.

4. Показано, что эхинацеи настойка и лимонника настойка обладают тонизирущим, антидепрессивным действием, влияют на формирование условных рефлексов и краткосрочное запоминание, эхинацеи настойка обладает актопротекторным эффектом. У этих препаратов обнаружено влияние на адренергические структуры.

5. Установлено, что ивы корзиночной экстракт обладает анти-гипногенным, актопротекторным, корригирующим влиянием на амнезирующее воздействие электрошока, увеличивает объем движений животных в открытом пространстве. Триандрин, выделенный из ивы корзиночной, коррелирует с данным экстрактом по спектру нейротропной активности, проявляя актопротекторное, антигипногенное, церебропротективное действие.

6. У мелиссы настойки и расторопши экстракта выявлены седативные

свойства, для мелиссы обнаружена анксиолитическая активность и установлен механизм данного эффекта - взаимодействие с бешодиазепиновыми рецепторами.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Болтабекова З.В. Активность лекарственного средства «Мелиссы настойка» / З.В. Болтабекова, И.Н. Титова // М1жнародна наукова-практична конференшя молодих вчених «Вчеш ма1бутнього»: Тези доповщей.- Одесса. -2002.- С.43-44.

2. Болтабекова З.В. Перспективы использования лекарственных средств на основе травы мелиссы лекарственной для коррекции иммунодефицитных состояний // З.В. Болтабекова, В.А. Куркин, ЮЛ. Осипов, А.В. Дубищев, Г.А. Маковецкая, Н.В. Русакова, Н.Н. Осипова, Е.В. Авдеева, И.Н. Титова. // Экология и здоровье человека: Труды VIII Всероссийского контр. - Самара. -2002.- С.21-24.

3. Дубищев А.В. Антигипногенная и ноотропная активность фитопрепаратов - адаптогенов, содержащих фенилпропаноиды // А.В. Дубищев, И.Н. Титова, В.А Куркин, Г.Г. Запесочная, В.Б. Браславский, Е.С. Петрова, И.Ю. Климова // Материалы 58-й межрегиональной конференции по фармации и фармакологии: «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции», Пятигорск, 2003.- С.290-292.

4. Дубищев А.В. Определение нейротропной активности фитопрепаратов-адаптогенов, содержащих фенилпропаноиды // А.В. Дубищев, В.А. Куркин, Г.Г.

Запесочная, И.Н.Титова, В.Б. Браславский, Е.С. Петрова, И.Ю. Климова // Экология и здоровье человека: Труды VIII Всероссийского конгр. - Самара. -

2002.- С.75-77.

5. Дубищев А.В. Определение нейротропной активности некоторых фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды / А.В. Дубищев, В.А. Куркин, И.Н. Титова, Е.В. Авдеева, З.В. Болтабекова, И.Ю. Климова // Сборник работ 68-й итоговой научной сессии КГМУ и отделения медико-биологических наук Центрально - Черноземного научного центра РАМН. В 2-х частях. Часть Н.Курск, 2002.- С.28-29.

6. Дубищев А.В. Нейрофармакология растительных препаратов, содержащих фенилпропаноиды / А.В. Дубищев, И.Н. Титова // Человек и лекарство: Тезисы докладов X Российского национального конгресса. - М.,

2003.-С.671.

7. Куркин В.А. Нейротрогшые свойства некоторых фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды / В.А. Куркин, А.В. Дубищев, И.Н. Титова, А.В. Волоцуева, Е.С. Петрова, И.Ю Климова // Растительные ресурсы. - 2003.- Т. 39, №3.-С. 115-121.

8. Куркин В.А. Нейротропная активность фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды / В.А. Куркин, А.В. Дубищев, И.Н. Титова, А.В. Волоцуева, З.В. Болтабекова, И.Ю. Климова // Фармация. - 2003.- №6.- С.30-31.

9. Куркин В.А. Исследование нейротропной активности некоторых фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды // В.А.Куркин, А.В. Дубищев, И.Н. Титова, Е.В. Авдеева, З.В. Болтабекова, Е.С. Петрова // Актуальные вопросы диагностики, лечения и реабилитации больных: Материалы юбилейной IX научно-практической конференции Пензенского института усовершенствования врачей МЗ РФ с участием регионов России: Сб. статей в 2 томах, т.2. Пенза, 2002. - С.246-249.

Ю.Титова И.Н. Сравнительное исследование нейротропных свойств фенилпропаноидов // И.Н. Титова, А.В. Дубищев, В.А. Куркин // Фундаментальные проблемы фармакологии. Сборник тезисов 2-го Съезда Российского Научного Общества фармакологов. Часть II. М., 2003.- С.224.

П.Титова И.Н. Экспериментальная оценка нейротропной активности фитопрепаратов - адаптогенов, содержащих фенилпропаноиды / И.Н. Титова // Аспирантские чтения - 2003: Сборник тез. докл. Всероссийской конференции «Молодые учёные-медицине» - Самара: СамГМУ, 2003. - С.283-284.

12.Титова И.Н. Определение нейротропной' активности растительных препаратов, содержащих фенилпропаноиды / И.Н. Титова // Аспирантские чтения -2002: Сборник тез. докл. межрегион, конференции молодых исследователей - Самара: СамГМУ, 2002.-С. 172.

1 З.Титова И.Н. Изучение рецепторного механизма нейротропного эффекта мелиссы настойки / И.Н. Титова // Человек и лекарство: Тезисы докладов XI Российского национального конгресса. - М., 2004.- С.840.

14.Титова И.Н. Оценка нейротропной активности фитопрепаратов -адаптогенов, содержащих фенилпропаноиды / И.Н. Титова, А.В. Дубищев, В.А. Куркин // Актуальные проблемы современной науки. Естественные науки. 4.26. Фармация. Труды 4-й Международной конференции молодых учёных и студентов. - Самара, 2003. - С.36-39.

15.Титова И.Н. Определение фармакологической активности некоторых фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды / И.Н. Титова // Аспирантский вестник Поволжья. - 2002. - №2 - С.59-60.

Подписано в печать 06.09.2004. Формат 60x84/16. Бумага офсетная. Печать оперативная. Тираж 100. Заказ 708.

Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии ООО «Офорт» 443068, г. Самара, ул. Межевая, 7 Лицензия ПД 7-0050 от 30.08.2000 г.

* 1 6 06 ?

Актуальность темы

Одной из важнейших задач современной фармакологии является расширение ассортимента растительных препаратов различных фармакологических групп с адаптогенной, тонизирующей, седативной, антидепрессивной активностью. Это обусловлено рядом факторов современного напряженного ритма жизни, особенно жителей промышленных мегаполисов, неблагоприятными экологическими условиями среды. Не случайно предпочтение отдается средствам растительного происхождения, поскольку это обусловлено рядом положительных свойств фитопрепаратов. Растительные препараты обладают низкой токсичностью при достаточно высокой эффективности, широким спектром терапевтического действия, комплексным органопротекторным и гармонизирующим действием на организм больного, минимумом побочных эффектов, относительной дешевизной по сравнению с синтетическими препаратами.

Своевременный прием как адаптогенов, так и седативных средств (соответственно в утреннее, обеденное - адаптогенов и вечернее время -седативных) позволяет восстановить суточные биоритмы, снизить развитие соматической патологии, вызванной психогенными факторами, улучшить качество жизни, смягчить в условиях дезадаптации отрицательное воздействие на организм человека стрессовых ситуаций, а также неблагоприятных экологических и производственных факторов. Кроме того, в настоящее время на российском фармацевтическом рынке в основном доминируют дорогостоящие лекарственные средства зарубежного производства, подчас недоступные широким слоям населения. Следовательно, актуальной задачей остается расширение номенклатуры доступных по цене и эффективных отечественных растительных препаратов.

В этом плане одним из наиболее перспективных направлений поиска является изучение биологической активности лекарственного растительного сырья, содержащего фенилпропаноиды: родиолы розовой или золотого корня {Rhodiola rosea L.), элеутерококка колючего [.Eleutherococcus senticosus (Rupr. et Maxim.) Maxim.], сирени обыкновенной (Syringa vulgaris L.), ивы корзиночной {Salix viminalis L.), эхинацеи пурпурной [.Echinacea purpurea (L.) Moench.], лимонника китайского [Schizandra chinensis (Turcz.) Baill.], расторопши пятнистой [Silybum marianum (L.) Gaertn.], мелиссы лекарственной {Melissa officinalis L.)

Фенилпропаноиды широко распространены в лекарственных растениях. Они обладают разнообразными биологическими свойствами, что даёт основание для создания на их основе эффективных тонизирующих, иммуностимулирующих, гепатопротекторных, антибластомных, антимикробных, противовоспалительных препаратов. Это послужило основанием для выделения их в самостоятельную группу биологически активных соединений и нашло отражение в химической классификации лекарственных растений [56]. Совместными исследованиями учёных Самарского государственного медицинского университета (СамГМУ) и Всероссийского института лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) выделены действующие субстанции родиолы розовой, элеутерококка колючего, ивы корзиночной - соответственно циннамилгликозиды салидрозид и розавин, сирингин, триандрин. К настоящему времени изучена их биодоступность, иммуностимулирующая активность, влияние на некоторые функции центральной нервной системы, обмен веществ, а также токсичность [28, 38, 85].

Однако, имеющийся литературный материал не позволяет в полном объеме судить о характере нейротропной активности данной группы растений, поэтому требуется систематизация и восполнение данных. Не изучены многие аспекты психотропной активности, не существует картины сравнительного анализа эффективности препаратов, полученных из сырья различных растений, в недостаточной степени освещен вопрос о связи активности препаратов с химической структурой фенилпропаноидов.

Цель исследования

Целью настоящего исследования является проведение сравнительного анализа нейротропной активности фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды; индивидуальных веществ розавина, сирингина, триандрина, силибина, а также изучение механизма их действия.

Задачи исследования Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Определить гипногенную и антигипногенную активность фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды и индивидуальных веществ -фенилпропаноидов.

2. Изучить ноотропную активность:

- влияние на физическую работоспособность и выносливость;

- влияние на организацию поведения животных в открытом пространстве;

- влияние на показатели обучения;

- влияние на формирование памяти.

3. Определить анксиолитические свойства. ч

4. Изучить антидепрессивную активность.

5. Выявить механизм нейротропной активности фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды, а также индивидуальных веществ - фенилпропаноидов.

Научная новизна работы Впервые проведен целенаправленный анализ нейротропного действия экстрактов и настоек группы лекарственных растений, содержащих биологически активные соединения фенилпропаноиды и действующих субстанций.

Впервые показано, что наибольшим спектром влияния на центральную нервную систему обладает родиолы розовой экстракт и выделенный из данного растения циннамилгликозид розавин. Установлено, что розавин увеличивает выносливость животных, родиолы розовой экстракт и розавин стимулируют приобретение условной реакции пассивного избегания, оказывают церебропротективное действие при поражениях познавательной деятельности, вызванной электрошоком. Впервые показаны анксиолитический и антидепрессивный эффекты родиолы розовой экстракта и розавина. Розавин по показателям ноотропной активности сопоставим с эффектами пирацетама. Выявлена зависимость выраженности тонизирующего эффекта от лекарственной формы и дано обоснование использования в качестве тонизирующего средства родиолы розовой настойки, а не родиолы экстракта жидкого.

Впервые установлена антигипногенная, актопротекторная, ноотропная, анксиолитическая, антидепрессивная активность для сирени обыкновенной настойки. Установлен впервые анксиолитический и антидепрессивный эффект для элеутерококка колючего экстракта и циннамилгликозида сирингина. По антидепрессивной активности элеутерококка экстракт близок к трициклическому антидепрессанту амитриптилину.

Впервые показано наличие нейротропной активности у ивы корзиночной экстракта. Выявлено, что экстракт, наряду с триандрином, выделенным из данного растения, обладает антигипногенным, актопротекторным, церебропротективным действием.

Впервые показано наличие тонизирующих свойств у эхинацеи пурпурной настойки, установлены актопротекторные, церебропротективные, антидепрессивные свойства данного препарата. Разработаны рекомендации относительно оптимального времени приема эхинацеи настойки (в утреннее и дневное время, исключая вечернее).

Показано наличие в спектре нейротропной активности семян лимонника (в дальнейшем - лимонника настойки) настойки церебропротективного и антидепрессивного эффектов.

Изучены особенности седативного действия мелиссы настойки, выявлен механизм анксиолитического действия данного препарата — взаимодействие с бензодиазепиновыми рецепторами. Определена оптимальная широта терапевтических доз мелиссы настойки - 50 - 200 мг/кг.

Установлена возможность влияния препаратов на серотонинергические, адренергические, дофаминергические структуры мозга.

Практическое значение работы

Выполненные исследования свидетельствуют о перспективности изыскания новых препаратов с тонизирующими, адаптогенными, ноотропными, анксиолитическими, антидепрессивными свойствами среди растений, содержащих фенилпропаноиды, культивируемых в Самарской области.

На основании сравнительного исследования фитопрепаратов выявлены нейротропные свойства новых, ранее не изученных в обсуждаемом аспекте лекарственных средств - сирени обыкновенной настойки, эхинацеи настойки, ивы корзиночной экстракта, расторопши экстракта. Установлены особенности нейротропной активности родиолы розовой экстракта, элеутерококка экстракта, лимонника настойки, мелиссы настойки в сравнении с пирацетамом, диазепамом, амитриптилином.

Показаны преимущества ноотропной активности (ввиду сопоставимости по выраженности данного свойства и отсутствию характерных побочных эффектов) родиолы розовой экстракта и розавина перед пирацетамом и остальными фитопрепаратами данной группы.

Кроме того, отмечена более выраженная тонизирующая и церебропротективная активность сирени обыкновенной настойки по сравнению с элеутерококка экстрактом.

Экспериментальное изучение нейротропных свойств фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды, а также выделенных субстанций позволяет рекомендовать их для испытания в клинической практике в качестве тонизирующих, седативных, ноотропных, антидепрессивных средств.

Результаты предклинических исследований мелиссы настойки внесены в проект Изменения №1 ФС 42-3645-98 «Трава мелиссы лекарственной» (письмо №294 - 11/47 от 01.03.02) и ФСП «Мелиссы настойка» (письмо № 294 - 11/47 от 01.03.02), которые приняты к рассмотрению Департаментом

Государственного контроля лекарственных средств и медицинской техники и находятся на экспертизе в Фармакопейном государственном комитете МЗ РФ.

Данные о нейротропных свойствах фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды используются в научных изысканиях и включены в материалы лекций и практических занятий кафедры фармакологии, а также кафедры фармакогнозии с основами ботаники и фитотерапии СамГМУ.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Все исследуемые фитопрепараты, содержащие фенилпропаноиды, а также выделенные субстанции розавин, сирингин, триандрин, силибин обладают нейротропной активностью, причем у фенилпропаноидов гликозидной структуры (производных коричных спиртов) выявлены стимулирующие свойства.

2. Наиболее широким спектром нейротропного действия среди фитопрепаратов и фенилпропаноидов обладает родиолы розовой экстракт и розавин. Для них выявлены антигипногенная, актопротекторная, ноотропная, анксиолитическая, антидепрессивная активность. Для розавина установлено дофаминомиметическое действие.

3. Сирени настойка, элеутерококка экстракт, сирингин обладают тонизирующей, актопротекторной, церебропротективной, анксиолитической, антидепрессивной активностью. Сирингин проявляет антагонизм в тесте с резерпином, что предполагает влияние на обмен биогенных аминов.

4. Ивы корзиночной экстракт и триандрин обладают антигипногенным, актопротекторным, церебропротективным действием.

5. У эхинацеи настойки и лимонника настойки выявлено антигипногенное, ноотропное, церебропротективное, антидепрессивное действие; у эхинацеи настойки - актопротекторное. Для этих препаратов установлена возможность взаимодействия с адренорецепторами.

6. Мелиссы настойка и расторопши экстракт жидкий обладают седативным действием, у мелиссы настойки выявлены анксиолитические свойства и механизм анксиолитического эффекта - взаимодействие с бензодиазепиновыми рецепторами.

Апробация работы и публикации Основные результаты работы доложены на X, XI Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2003-2004); на VIII Всероссийском конгрессе «Экология и здоровье человека» (Самара, 2002); 2-м Съезде Российского Научного Общества Фармакологов (Москва, 2003); на юбилейной IX научно-практической конференции «Актуальные вопросы диагностики, лечения и реабилитации больных» Пензенского института усовершенствования врачей МЗ РФ с участием регионов России (Пенза, 2002); 4-й Международной конференции молодых учёных и студентов Поволжской молодежной академии наук (Самара, 2003); Международной научно-практической конференции молодых ученых « Вчеш майбутнього» (Одесса,2002).

Основное содержание работы опубликовано в 14 научных работах.

Объём и структура работы Диссертационная работа изложена на 158 страницах машинописного текста, содержит 27 таблиц, 13 рисунков. Диссертация состоит из введения, литературного обзора, описания объектов и методик исследования, главы, отражающей результаты собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов и списка литературы, включающего 212 источников, из которых 104 на иностранных языках.

Глава 5. ВЫВОДЫ

1. Установлено, что все исследуемые фитопрепараты и фенилпропаноиды обладают нейротропной активностью; фенилпропаноиды гликозидной структуры (производные коричных спиртов) обладают стимулирующей активностью.

2. Среди изучаемых объектов наиболее широким спектром нейротропной активности обладает родиолы розовой экстракт и циннамилгликозид розавин. Розавин имеет преимущества перед известным ноотропом пирацетамом. Для розавина установлен дофаминомиметический механизм действия. ^ >

3. Сирени настойка наряду с элеутерококка экстрактом, а также сирингин, выделенный из данных препаратов, проявляют тонизирующую, актопротекторную, анксиолитическую, антидепрессивную активность, влияют на формирование условных рефлексов и краткосрочное запоминание. Сирингин в тесте с резерпином проявляет антагонизм, что свидетельствует о влиянии на обмен биогенных аминов.

4. Показано, что эхинацеи настойка и лимонника настойка обладают тонизирущим, антидепрессивным действием, влияют на формирование условных рефлексов и краткосрочное запоминание, для эхинацеи настойки характерен актопротекторный эффект. У препаратов эхинацеи и лимонника обнаружено адреномиметическое действие.

5. Установлено, что ивы корзиночной экстракт обладает антигипногенным, актопротекторным, корригирующим влиянием на амнезирующее воздействие электрошока, увеличивает объем движений животных в открытом пространстве. Триандрин, выделенный из ивы корзиночной, коррелирует с данным экстрактом по спектру нейротропной активности.

6. У мелиссы настойки и расторопши экстракта выявлены седативные эффекты, для мелиссы обнаружены анксиолитические свойства и установлен механизм данного эффекта - взаимодействие с бензодиазепиновыми рецепторами.