Автореферат и диссертация по медицине (14.00.23) на тему:Состояние В-клеток панкреатических островков в условиях действия некоторых лекарственных и химических соединений

«в ол

Т \«№ в®.

ДОи ы ОРДЕНА ДРУЖБЫ НАРОДОВ РОССИЙСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ДРУЖБЫ НАРОДОВ

УДК 616.379:612.014.46.

МЕЙРАМОВ Габит Габдуллович

СОСТОЯНИЕ В-КЛЕТОК ПАНКРЕАТИЧЕСКИХ ОСТРОВКОВ В УСЛОВИЯХ ДЕЙСТВИЯ НЕКОТОРЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ И ХИМИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ

14.00.23.-гистология, цитология, эмбриология 14.00.03,-эндокриноло гия

Диссертация

на соискание ученой степени

доктора медицинских наук в форме научного доклада

Москва—1993

Работа выполнена в Карагандинском педагогическом институте Министерства Образования Казахстана

научный консультант: доктор биологических наук,

профессор, член-корреспондент РАМН И.Г.Акмаеп

Официальные оппоненты:

Академик РАМН, доктор медицинских неук, профессор О.В.Волхова Доктор медицинских наук, профессор В.Н.Блткин Доктор медицинских наук, профессор В.В.Яглоп

Ведущая организация - Московски!'! медицинский стоматологический институт им.И.А.Семашко МЗ России

Защита состоится "__"_,___1993 г. на заседании специализированного совета Д 053.22.02. при Ордена Дружбы народов Российском Университете Дружбы народов по адресу:117198 г.Москва, ул.Миклухо-Маклая, 8, медицинский факультет. С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Университета Дружбы народов по адресу: 117198, г.Москва, ул. Миклухо-Маклая, 6.

ЛвтопегЬерат разослан "_" _1993 г.

Учёный секретарь специализированного совета, доктор медицинских наук,

профессор В.Э.Торбек

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Известно, что расстройства углеводного обмена, включал и те, что приводят к развитию сахарного диабета, могут вызываться действием на организм различных лекарственных веществ и химических соединений. Сегодня их количество исчисляется десятками. Ещё в 1943 г. Junn п сотр. сообщали, что аллоксан (уреид »»езоксалевой кислоты) вызывает у кролике-повреждение панкреатических островков и развитие сахарного диабета. В 1949 г. дяабетогенные свойства были впервые обнаружены у дитизопа КОка-woto, который получил дптизоновый .диабет у кроликов. В 1949 г. J. Patterson вперпно получил в опытах на крысах экспериментальный .диабет, вияч ваемый дегидроаскорбпновой кислотой, циабетогенные свойства которой вскоре были подтверждены A.Lasarow(I950) ,ie Bastian! (1953), S.Cimino (1954) и Ray Mahasaya (1955). M-Meglasson и R.Hazelwood в 1982 г. выявили спо собность аскорбиновой кислоты оказывать избирательное токсическое денс. твие на В-клетки островков Лангерганса. Диабетогенные свойства .цитнзид были впервые описаны J.Kadota в 1950 г., а в 1949 г-. K.Okamoto сообщил о получении экспериментального диабета с помощью 8-оксихинолина. Дальнейшие исследования, проведенные K.Okamoto позволили ему установить.к 1955 г., что 17 производных 8-оксихинолина и 8-оксихпнальднна вызывают .диабет. В 1975 г. H.Kusuzaki вызвал экспериментальный диабет у кроликов с помощью 8-окси-7-йодохинолина (хиноформ). Диабетогенные свойства были обнаружены у производных ппразолона (T.Uamada,I959; Я.А.Лаза-рис,1970). В опытах на беременных крысах А.И.Баркалая (1963,1967) впервые обнаружил способность антибиотика тетрациклина вызывать выраженные дегенеративные изменения в B-клетках, которые соответствовали изменениям, наблюдаемым при сахарном диабете. E.Jenshary (1977) и В.В.Полторак (1983) отмечали снижение секреции инсулина под влиянием этого антибиотика, а Т.Ф.Копия (1967) сообщалось о повышении уровня сахара крови у мышей под влиянием тетрациклина.

Из лекарственных препаратов помимо антибиотиков и аскорбиновом кислоты на углеводный обмен влияют мочегонные средства. У некоторых здоровых лиц после лечения тиазидаш возникают признаки .диабета (Г.П.Щулъцев,1966; Э.Г.Московии, 1972;J.Kmocbn соавт.1265; J.M'tncu я соавт.,1966). Диабетогепное действие большинства салуретических препаратов было обнаружено в эксперименте. У большинства видов лабораторных животных хлортиазид и гидрохлоргиазиц способствуют гипергликемии, глюкозурии, а иногда и кетоацидозу (Г.Н.Бездетко,1965; Р.О Кушний, И.В.Плсаревскал, 1967). ДиабетогенноП активностью обладают некоторые

?

метаболиты триптофанового обмена. Y. Kotake , б. Jhada и S.Tani (1953,1954, 1957) удалось вызвать диабет у крыс при содержании их на богатой жиром циете или при недостатке витамина Bg в условиях воздействия ксан-туреновой кислоты.

Диабетогенной активностью обладает противотуберкулёзный препарач изониазиц, который в больших дозах способен вызывать гипергликемию, глюкозурию и кетонурию (A.TovarYS и Z.SiLer (1968).

Число лекарственных средств и химических веществ, вызывающих расстройства углеводного обмена посгояннно увеличивается. Неблагопри/ ное влияние на углеводный обмен оказывают противовоспалительные препараты индометацин и парацетамол, а один из наиболее эффективных им-муносупрессивнцх препаратов циклоспорин А оказывает токсическое влияние на B-клетки панкреатических островков (H.-J.Hahn ,1986; H.Eun еЫ.,1981; сопровождающиеся снижением синтеза и секреции инсулина.

Изучение характера и механизмов .диабетогенной активности вышена< ванных лекарственных и химических соединений уже внесло существенный вклад в понимание причин и механизмов развития этого заболевания у че ловека. В частности, выдвинутая К.Okamoto гипотеза, согласно которой решающее значение в механизме диабетогенного действия дитизона и рядг производных 8-оксихинол1ша имеет их способность образовывать в В-кле] ках токсичные хелатные соединения с содержащимся в их цитоплазме ионг ми цинка ("цинковая теория" патогенеза сахарного диабета) получила позднее многочисленные и серьёзные подтверждения (Я.А.Лазарис и соавт I97I-I975 г.г.; Мейрамов Г.Г., 1973-1976 г.г.).

Вместе с тем, механизмы диабетогенного действия некоторых из вышеперечисленных веществ остаются неясными до сегодняшнего дня. На нал взгляд, обстоятельством, в определённой степени препятствовавшим проведению результативных исследований в этом направлении, является го, что для прлучения экспериментального материала в большинстве случаев использовалась модель опытов ¡и vivo. Обладая рядом несомненных достоинств, эта модель имеет два существенных недостатка, а именно: I) вве димое в организм исследуемое вещество может вовлекаться в метаболичес raie процессы, в связи с чем нередко представляется затруднительным определить, связан ли получаемый эффект с прямым действием данного сс дпнения, или это опосредованный эффект, обусловленный влиянием метабс дигов; 2) в опытах ¡n vivo представляется сложим создание заведомо изве ной концентрации исследуемого вещества, которая действует непосредственно на В-кле тки островков Лангерганса.

Предложенная в 1367 г. P.Lacy и И.Kostianovsky методика изоляции панкреатических островков с помощью фермента коллагеназы' и последующего

их культивирования открыла принципиально ноше возможности проведения исследований с использованием опытной модели in vitro. В последние гогл эта модель достаточно широко и с успехом используется эесперименте, несмотря на то, что не всс "етодп, используемые в опытах in vivo адекватно адаптирован*-' к модели in vitro. Модель in vitro , предполагающая исследование реакции пзолированних панкреатических островкоп или отдел!,них В-клеток, лишена упомянутых выше недостатков модели

Все эти сообппленпя аргументировали целесообразность иного методического подхода, в основе которого леетт использование модели изолированных панкреатических островкоп в сочетании с функциональными и морфологическими методами, методами количественной гистохимии и ги~ стофункциональнмми тестами. По мнению автора, такой комплексный пол-ход создает благоприятные условия для исследовании, направленных к к изучению прямого действия тех или иных лекарственных поенаратпв и химических соединений и тем самым облегчить понимание механизма их действия на инсулиногенную активность панкреатических В-клеток.

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Основную цель настоящей работы мокно сформулировать как попытку изучения прямого действия па пнеулпногеннув активность изолированных raí' креатических островков четырёх разных агентов, а именно:

1. Лекарственных препаратов (гидрохлорид тетрациклина,циклоспорина f!

2. Токсических веществ (гоксахлорциклогексан).

3. Химических соединений, стгллулирундих мобилизацию депонированной-, инсулина из В-клеток (глюкоза, глибенкламид).

4. Диабетогенных химических соединений (дитлзон).

Необходимость уточнения действия лекарственных препаратов п токсических веществ была обусловлена тем, что в литературе накоплены факты, нередко противоречивые, которые свидетельствую!' о способноет/ а тих веществ нарушать функцию В-клеток п.тгм cva*t% огаочлать н еила-гоприлтнос влияние на углеводный обмен.

Дополнительно к вышеупомянутому предсолагалссь тш«п изумгь скорость восстановления депонированного в В-клетяах пяплирооант-х острой-кол инсулина поело предварительной его мобилизации с пргвОцып глкбеик-ламизе. п глпкогн, Пг.сдюлогплось тач~с, что отлиос;.1'^ результаты тг.у-оказаться полезными цжг разработки способа псстогрукнттонаяьнгп: «uwhxm состоянии инсултшпродуцирупдей функции В-клеточ.

Для реализации поставленной цели были намечены следулыис конкретные задачи:

- разработать метод гпстофункииоиальной оценки активности иксулико-

генной функции В-клегок изолированных островков поджелудочной железы;

- изучить с помощью высокоспецифичннх гистохимических и г.мму н огис тохи-мических методов, гистофункщюнального метода и сканнирукщей электронной микроскопии содержание инсулина в В-клетках, их функциональное состояние и состояние поверхности изолированных островков, подвергнутых воздействию гидрохлорица тетрациклина и циклоспорина А;

- исследовать состояние инсулиногенной функции В-клеток изолированных панкреатических островков и на модели in vivo в устогиях воздействия гексахлорциклогексана;

- изучить на модели in vitro л сопоставлении с результатами опытов на модели in vivo характер прямого влияния дитизонэ на изолированные панкреатические островки.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

1. Впервые с помощью модели in vitro изучено влияние гидрохлорица тетрациклина на состояние В-клеток изолированных островков. Показано, что прямое воздействие препарата сопровождается отчетливым снижением в цитоплазме В-клеток депонированного инсулина и снижением скорости восстановления последнего при продолжающемся культивировании. Действие антибиотика сопровождается появлением островков с очевидными признаками повреждения В-клеток.

2. Впервые установлено, что циклоспорин А вызывает достоверное снижение содержания депонированного инсулина в В-клетках островков, подвергавшихся прямому воздействию препарата; при этом, скорость последующего восстановления уровня содержания этого гормона при продолжающемся культивировании клеток не отличалась от контроля. Показано, что циклоспорин А не оказывает влияния на состояние поверхности [теток панкреатических островков. Принимая во внимание роль, которая отводится антигенам поверхностных клеток островков в механизмах аутоиммунного поражения В-клегок при сахарном диабете, получен шю нами данные могут оказаться полезными в дальнейшей разработке современных представлений о патогенезе сахарного диабета.

:¡. Впервые показано, что гексахлорциклогексан вызывает снижение соде> зкашш депонированного инсулина в В-клетках изолированных островков; одновременно обнаруживаются признаки гистологических изменений в структуре этих клеток, степень выраженности которых находится в зависимости от величины концентрации гексахлорциклогексана. Установлено, что при продолжающемся культивировании восстановление содержания инсулина в цитоплазме Н-клеток не происходит. 4. [¡первые предложен гисто(Т)ункциональный способ оценки активности

'В-клеток изолированных панкреатических островкоп.

5.Показано, что дитияон оказывает прямое действие на В-клетки изолированных панкреатических островков, приводя к быстро-у развитию необратимых гистологических изменений па йоне л"чти полного исчезновения из их цитоплазмы депонированного инсулина; эти данные экспериментально аргументируют ранее подтверждён ¡roo в опытах положение, соглоспи которому в механизме диабетогенного действия дитизона решастцее значение принадлежит его прямому действию на В-клеткп.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

- Получены данные, которые расширили наши представления о характере влияния гидрохлорида тетрациклина; они свидетельптвуют о том, что препарат оказывает прямое влияние на В-клетки изолипованных островков. Эти данные в совокупности с результата!«! последних тпёх девятилетий, а таете тот факт, что тетрациклин обладает комплексобразу-идими свойствами, - всё это даёт основания предполагать натг-тие возможной связи между эффекта!® тетрациклина в отношение В-клеток

и его способностью к х<\яатообразованию, то есть, образованию телексов с ионами металлов. В этой связи по-видимому следовало бы обратить внимание на получение данные при определении показания и величины дозы назначаемого препарата.

- Результаты, полученные при исследование действия терапевтических доз циклоспорина А ца состояние В-клсток изолированных островков впепние показали, что снияение содержания депонированного инсулина в этих клетках не сопровождается сколько-нибудь достоверными их гистологическими изменениям:. Воздействие же токсических доз препарата сопровождается появлением значительного числа островков с очешти ншш признаками повреждения В-клеток, что, вероятно, следует читывать при определении величины дозы препарата в клинической практики

- Результаты исследования гексахлорциклогексана - одного из наиболее широко применягшихся на протяжении последних десятилетий инсектицидов, свидетельствуют о том, что прямое воздействие препарата л токсических дозах сопровождается значительным снижением содержания депонированного инсулина в В-клетках при одновременном развитии ¡тпнз-наков, свидетельствующих об их гибели.

- Материалы, полученные при исследовании прямого действия дитизона

па В-клеткп изолированных островков, подтверждают выдвигавшуюся нами ранее концепцию о прямом действии этого соединения па В-клегкн; тем самым дополнительно аргументируется цинковая теория патогенез? сахарного .диабета, в основе которой лекит способность дитизоно и

•некоторых других соединений образовывать токсичные комплексные соединения (хелаты) с ионами цинка в В-клеткзх.

- Разработки гисттТункциоиельный метод оценки состояния ¡шеулиногенпой Функции В~клеток изолированных панкреатических островков.

ОСНОВНЫЕ' ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

I

[. Гистофункциональный метод является достаточно эффективным способом оценки функциональной активности'В-клеток изолированных панкреатических островков.

2. Антибиотик тетрациклин оказывает в токсических дозах прямое влияние на 13-клетки изолированных островков, приводя к снижению содержания в них депонированного инсулина, а также к сшшеник скорости его восстановления при последующем культивировании; при этом увеличивается число островков с признаками повреждения В-клеток.

3. Циклоспорин А в терапевтических доза не вызывает повреждения В-клеток изолированных островков, не влияет на состояние их поверхности, однако, приводит к снижению содержания в них депонированного инсулина, но влияя при этом на скорость его последующего восстановления. Токсические дозы препарата сопровождаются появлением значительного числа островков с признаками повреждения В-клеток к к более резкому снижению количества депонированного в них инсулина, а также к снижению скорости его восстановления при послепущем культивировании.

4. Гексахлорциклогексан оказывает прямое повреждамуео действие на • В-клетки изолированных остроглюп, вызывая как изменения структуры, так к необратимое снижение уровня депонированного в них инсулина.

5. Дитизон оказывает прямое токсическое действие на В-клетки, сопровождающееся их необратимыми повреждениями в сочетании с практически полным исчезновением из их цитоплазмы депонированного инсулина.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ И ПУБЛИКАЦИИ

Основные результаты были доложены на 2-м Всесоюзном съезде патофизиологов (г.Ташкент,1976), на 4-м Съезде эндокринологов Украины (г.Львов,1987), на 4-й Всесоюзной конференции до патологии клетки (г.Москва,1987), на 13-м Конгрессе Международной Федерации Диабета (г.Сидней,1988), на 3-м Съезде эндокринологов СССР (г.Ташкент,1589), на 4-й Международной Конференции по фармакологии (г.г.Маннгейм, Гей-дельберг,1989), на 9-м, 10-м и 11-м международных симпозиумах Европейской Ассоциации по изучению диабета по теме "Системы искусственной доставки инсулина и пересадка поджелудочной железы и панкреатических островков" (г.Игле,1990;г.Амстердам,1991; г.Игле,1992), на

•14-м Конгресса Международной Федерации диабета (г.Вашиг{ТТ0Н,1Э91), на 1-м Немецко-Австрийском Конгрессе Диабетологов (г.Зальцбург,IG9I),.на 9-м Международном Конгрессе эндокринологов (г.Ницца, 1992), на 5-й Всемирно"! Конференции по фармакологии (г.Иокогама,1992). Результаты 1ртплецованин были тятее доложены на научных встречах со специалистами Департамента эндокринологии Университета Принца Уэльсского (г.Сидней,1992), Детского Госпиталя Принца Уэльсского (г.Сидней, 1992) и Депаптамента Медицины Сиднейского Университета (г.Сидней,IS92) Материалы такте обсуждались со специалистами Департамента эндокринологии Института Диабета (г.Карлсбупг,1988-1992).

Материалы диссертации изложены в 35 печатных работах, опубликованных в виде статей и тезисов. Получено 13 удостоверений на рацпредложение.

СТРУКТУРА И ОБЪЁМ РАБОТЫ

Диссертация представляется к защите в форме научного доклада на 30 страницах машинописного текста. Результаты внедрены в практику лаборатории тканевых культур Киевского НИИ эндокринологии и обмена renin-стп, а также биологического факультета Карагандинского Государственного Унпэеоситета.

СОДЕРЗКАШЕ РАБОТЫ

Материалы диссертации оформлены на основании проведенных экспериментальных исследований на моделях in vivo и in vitro с использованием высокоспецпфичннх гистохимических и га.муногистохимических методов ннлг-ления инсулина, методов количественной и функциональной гистохимии, биохимических методов и метода сканнирующей электронной микроскопии. На копленный материал явился' результатом девятнадцатилетней работы.

В опытах использованоМ5рлых крыс, 1858 крысят IO-14-дневного возраста и 64 кролика. Исследование уровня глюкозы крови проводили с помощью стандартных наборов фирмы " Br Wringer Mannheim "('"'РГ, Австрия); для таллукогястсхшичоского и иммуноошуоресцентного методов применялись, стандартные насори антпсывороток фирмы "JAKO "(Дания), ангпсыьо-ротки Берлинского Института впкшн и сывороток и реактивы фирмы "Janssen Churl íes " (Бельгия). Для окраски псевдоизоциатшсп и пльдсгилФукспном попользовали реактивы Фярмн "SERVA "(<т>РГ), а для окраски методом "Вкк-гория Блэу" - реактив производства фирм "МЕ1?СК"(ФРГ) и " FERAK "('ИТ). ГТля культивирования .панкреатических островков применялись питательные зрелы фирмы "SERVA" - РГШ-1640 и 199. Для микрофотографии использовались фотоматериалы производства фирм "FUJI1,1 "KODAK" и "ORWO V

работка которых производилась в государственных службах фотоссрвиса и в фотостудии "T.MURAUER "(г.Иннсбрук, Австрия). Количественная оценка результатов окраски псевдонзоцианином и иммуноф^уоресиентным методом осуществлялась в лаборатоии гистохимии эндокринной ткани поджелудочной железы (г.Караганда), а результатов окраски «шмуногистохимичес-ким методом - в Департаменте эндокринологии Гронингенского Университета (Нидерланды). Компьютерный отбор литературы проводился в библиотеке Гронингенского Университета и в фармакологическом отделе фирмы " HOECHST"(ФРГ).

Изучение влияние гидрохлорида тетрациклина проведено на 112 взрос лых крысах и 540 крысятах. В опытах in vivo изучалось влияние препарата на динамику уровня глюкозы крови. В экспериментах на крысятах исследовался характер прямого влияния тетрациклина (ТГ) на B-клетки изолированных панкреатических островков. Для этих опытов применялся ТГ с содержанием 907 мг чистого ТГ на I г. препарата.

В опытах, проводившихся с целью изучения влияния циклоспорина А, использован' циклоспорин, изготовленный фирмой "SANDOZ "(Швейцария) .для исследований на культуре ткани. В экспериментах на 430 крысятах изучался характер прямого влияния различных доз препарата на гистологическую структуру изолированных островков, содержание в В-клегках депонированного инсулина, на скорость его восстановления, а также влияние препарата на состояние поверхности изолированных островков.

При исследовании влияния гексахлорциклогексана (ГХ) применялся высокоочищенный препарат линдан, содержащий 89% гамма-изомере гексахлорциклогексана. В опытах на 122 крысах изучалось его влияние на ди-нашку уровня глюкозы крови и на характер сахарных кривых, а также на содержание депонированного инсулина в В-клетках. 13 опытах на модели in vitro , проведенных на 468 крысятах, исследовалось состояние В-кле-ток изолированных островков и содержание в них депонированного инсулина в условиях воздействия различных доз ГХ.

Влияние дитизона изучалось на моделях in vivo и in vitro. В опытах использовано 64 кролика и 195 крысят. На модели in vivo исследовались гистологическая структура, содержание депонированного инсулина и ионов шшка в П-клетках осгровковой ткани. Изучалось превентивное влияние мобилизации из B-клеток депонированного инсулина и цинка применительно к последующему действию дитизона. В экспериментах на крысятах исследовалось прямое влияние дитизона на В-клетки изолированных островков. В частности, были изучены гистологическая структура и содержание в Ü-клетках депонированного инсулина и цинга. Исследовалось пря

'мое деистие цитизона на инсулярную ткань после предпаритольной мобилизации депонированного инсулина и щита из В-клеток. Влияние стимулирующих мобилизацию из В-клеток депонированного инсулина и цинка препарата глибенклампда и глюкозы исследовалось с целью получения ин-ф^омации о скорости о'»°станоьления уровня инсулина в В-клетках изоли-рованннх островков после прекращения действия глибепкламида и глюкозы в условиях продолжающегося культивирования. Эти результаты последили основой для разработки функционального гистохимического теста оценки состояния инсулиногенной функции В-клаток изолированных островков. 13 опытах использовано 22В крысят.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ РАБОТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Состояние В-клеток панкреатических островков в условиях воздействия гидрохлорида тетрациклина.

В литературе тлеются многочисленные данные, свидетельствуйте о том, что антибиптик тетрациклин оказывает влияние на состояние углеводного обмена. В терапевтических и токсических дозах ТГ вызывал у мышей и «роликов попле 6 и ^О-дневного применения повышение уровня гликемии натощак (Т.Ф.Клшик,1967; У.Ве1оуа и соавт^.1975), а семидневное введение антибиотика крыса»» сопровождалось длительным сохранением у них алиментарной гипергликеши Ш.Г.Сторожук, В.В.Шамсутдинова.,1976). Снижение толерантности к глюкозе отмечалось после 10-дневного введения ТТ обезьянам в дозах 10-50 мг/кг (¿.Вапедее е1а1.,1966). При изучении особенностей обмена углеводов у новорожденных,' матери которых заняты на производстве тетрациклина, установлено наличие у них повышенной гликемии натощак, снижение толерантности к глюкозе,.изменение всасывания и утилизации углеволов (В.Т.Манчук,1973). Снижение всасывания глюкозы изолированными сегментами тонкого кишечника наблюдалось у крыс, которым препарат вво.млся в желудок (Е.Я.Скляров,1973).

Выдвинуто несколько гипотез относительно механизмов влияния тетрациклина на углеводный обмен.

1. Нарушения углеводного обмена; развивающиеся в результате действия ТГ, связаны с торможением всасывания глюкозы в кишечнике (П.Г.Сто-рояук,1976; В.Т.Канчук, 1973; С.Су6»19уб55| еЬ а1 .,1972). Следует, однако, отметить, что снижение толерантности к углеводам наблюдалось и при внутривенном введении ТГ (П.Г.Сторожук,1976).

2. Изменения углеводного обмена в большей степени обусловлены действием ТТ на печень, следствием чего является обеднение её гликогеном и мировое перерождение (В.И.Ярошевский,1976; Л".Е.Голъдберг,1959;

Ла1.,1967; Б.А.Надирова,196Э).

3. А.И.Баркалая (1963,1967), наблюдавший резкую гипертрофию В-клеток, сочетавшуюся с помутнением цитоплазмы, явлениями зернистого распада плазмерекспса, кариолкзиса, дистрофии и гидропической дегенерации, деструкции и гибели многих клеток у беременных крыс, получавших токсические дозы ТГ (500 мг/кг), полагает, что бесспорно влияние антибиотика но В-клетки, не указывал при этом, связано ли данное влияние с его прямым действием, либо это результат опосредованного влияния. Жировая инфильтрация, по мнению А.И.Баркалая, связана в в значительной мере "с повреждением В-клеток, что подтверждалось в олнт.ах с введением животным инсулина, предупреждавшим инфильтрацию печени. По мнению С.Г.Генес (1963), изменения со стороны В-клеток являются вторичными, развившимися в результате гиперактивностп надпочечников, тогда как В.В.Полторак (1983) придерживается мнения о том, что действие ТГ на В-клетки первично и связано с ингибирова-нием секреции инсулина в результате повышения в В-клетках концентрации ионов Са++ под влиянием ТТ. Имеются, однако, данные, противоречащие вышеприведенным сведениям, касшшдася неблагоприятного влияния ТГ на углеводный обмен. В.А.Кудрявцева (1958) ДВанег^се а1. (1967) обнаружили, в отличие от других авторов, что базальный уровень гликемии после 7-14-дневного применения ТГ не изменялся или даже снижался. Понижение уровня глюкозы крови у больных .диабетом, принимавших ТГ, обнаружили С.Бе ЬоШг е1а1.(1954) и Н.Не'юк (1974). Аналогичные данные были получены в опытах на больных аллоксановым диабетом крысах (А.СоИеп е1а1.,1953; Н.ШаМ е1 а1., 1966,1970). Это позволило авторам предположить, что тетрациклин не обладает токсическим действием в отношение В-клеток.

Таким образом, приведенные игле, нередко противоречивые данные свидетельствуют о том, что ТГ оказывает разностороннее влияние на углеводный обмен. Большинство нарушений при этом сходны с наблюдаемыми при сахарном диабете. Вероятно многообразием нарушений объясняется тот факт, что столь же многообразными как по возможным механизмам действия, так и по точкам его приложения, являются предположения относительно механизмов влияния ТГ на углеводный обмен.

На наш взгляд, вышеприведенные данные являются убедительными лишь в отношение того, что касается точек приложения действия ТГ, а именно: печень и В-клетки панкреатических островков. Однако, остаются практически открытыми наиболее важные, по нашему мнению, вопроси, а именно: является ли действие ТГ на В-клетки прямым или

'это опосредованный эффект?;Каков механизм действия ТГ на В-клетки? Необходимо при этом отметить, что донные о влиянии ТГ на В-клетки являются немногочисленными и недостаточно полными.

Известно. (Э.Альберт,1971), что тетрациклин является комплекс-образующим соединением, формиругацшл сосбенно лег*о хелатные комплексы с нонами двухпалентных металлов, в частности, с ионами цинка, содержащимися в цитоплазме В-клеток и принимающими согласно современ-ннм представлениям участие в депонировании инсулина (Н./Лазке,1955, 1957;.С.>/01^ ,1959; б.^гоНо ,1964; Н.Ка^/атзЫ ,1966; В.И.Корчин,198$). Интепес к изучению влияния ТГ на В-клетки ещё боле^ возрастает в связи со следующим обстоятельством. Ня сегодня существуют ряд убедительных подтвепждений того, что в патогенезе экспериментального .диабета, вызываемого комплексобпязущими даабетэгенными соединениями, решающее значение принадлежит их способности образовывать в цитоплазме В-клеток токсичнее комплексы с ионами цинка, оказывающими в течение первых 15 мин. прямое необратимое повреждение этих клеток (К.Окат<^о, 1955; Я.А.Лазарис и спавт.,1971-1976; Я.А.Лазарис, Г.г.Мейрамов,1974; Г.Г.МеАрамов, Н.И.Труханов, 1975-1976; Г.Г.Мейрвмов, 1975).

Пытаясь получить более полную информацию о действии ТГ, прежде всего изучали влияние препарата на динамите уровня глюкозы крови. ТГ вводился в дозе-50 мг/кг шестикратно на протяжении месяца, в течение которого, а также двух последующих, меояцевдваждн в неделю у животных определяли уровень глюкозы коови.

В период введения ТГ достоверное повышения уровня глюкозы отмечалось у двух из четырёх опытных групп животных через I сутки после Т-го и 3-го введения. Уровень глюкозы повышался до 137±13,6 мг/ЮО мл по сравнению с 92,7±10,8 мг/ЮО мл у контрольных крыс. Наблюдалось также повышение уровня гликемии после 4-го и 5-го введений. В начале и середине второго месяца отмечалось некоторое повышение уровня глюкозы крови, однако эти изменения оказались недостоверными. К концу опыта у четырёх животных было выявлено достоверное повышение уровня гликемии, достигавшее 14б±15 мг/ЮО мл по сравнению с 93,2^±14,3 мг/ЮО мл.

При изучении прямого действия ТГ на клетки изолированных островков препарат вводился дважды в дозе 50 мкг/мл с продолжительностью действия питательной среды, содержавшей препарат, равной 60 мин. Содержание депонированного инсулина л ионов цинка в В-клеткэх изучали методом количественной гистохимии через 2, 24, 48 и 72 часа культивирования в новой порции питательной среда, не содержавшей антибио-

тика. Содержание ионов цинка исследовали с помощью внсокоспецпфичной гистохимической реакции на цинк с толуолсульфониламинохинолином (Е.А.Божевольнов, Г.В.Серебрякова,1964), синтезированный в Институте чистых реактивов (ИРЕА). Результаты этих исследований показали отчётливое снижение интенсивности флуоресценции B-клеток через 2 часа после окончания действия антибиотика до 34,6-9,2 o.e. по сравнению с контролем (100^16,3 o.e.). В последующем степень положительности реакции достигала 51,2*5,7 o.e. через 24 часа, 65,2±П,2 о.е.-через 48 часов и 72,6*6,3 o.e. через 72 часа, что свидетельствовало об увеличении в цитоплазме В-клегок содержания ионов цинка. Исследование содержания депонированного инсулина продемонстрировало наличие сниженной реакции на инсулин через 48 и 72 часа после прекращения действия препарата и, наоборот, по сравнению с реакцией на цинк, через 2 часа после окончания действия ТГ снижение содержания инсулина в B-клетках было незначительным. Необходимо отметить, что при снижении интенсивности реакции на цинк до 85,3*7,5 o.e. через 48 часов и 68,6*6,3 o.e. через 72 часа, обнаруживалось от 5 до 8$ островков с резко сниженной степенью положительности реакции на инсулин, не превышавшей 35,6*7,9 o.e. по сравнению со 100*14,8 o.e. в контроле.

Подсчёт числа островков с признаками повревдения B-клеток дал следующие результаты: через 2 часа после окончания действия ТГ их личество в культуре не превышало 18,4*4,6$ от общего числа (20,2* ¿3,3$ в контроле), через 24 часа - 17,6*4,93 (18,2*4,4$ в контроле), через 48 часов - 23,6*3,8^ (в контроле - 20,7*4,и через 72 часа - 36,6*5,1$ (в контроле - 19,2*3,2$).

Результаты этих опытов наводят на мысль о том, что ТГ связн-вает, по-ви.цимоыу, островковый цинк вскоре после добавления его в питательную среду, что сопровождается резким снижением степени положительности реакции на цинк, тогда как содержание инсулина при этсм практически не меняется. Между тем, ранее было убедительно доказано (Я.А.Лазарис и сотр.,1971-1974; Г.Г.Мейралюв,1991 ; В.И.Корчин,1982), что действие глибенклашда, равно как и действие других веществ, мобилизующих инсулин из B-клеток, сопровождается в равной степени как снижением содержания депонированного в B-клетках инсулина, так и ионов цинка. Одновременно эти данные свидетельствуют о том, что ТГ оказывает прямое повреждающее действие на островковые В-клетки.

Для того, чтобы выяснить, действительно ли присутствие ионов цинка оказывает влияние на действие ТГн были поставлены опыты с пред-

зарительной мобилизацией ионов этого металла из В-клеток.

С этой целью в другой серии опытов ТГ вво.дился в питательную сроду после предварительной мобютизоти из B-клеток цин^а и инсулина о помощью глибенкламида, kothduh вводился в питательную сроду на 2 часа в концентрации 25 мг/кг. В срезах островковой ткани, фиксированной папле предварительного воздействия глибенкламида (ГБ), интенсивность флуоресценции B-клеток, окрашеиншс на инсулин и икнк снижалась соответственно до 21,6±2,8 o.e. по сравнению со 100^18,4 с.е. в коктполе и до 25,3^4,6 o.e. (в контроле - 100±9,6 o.e.). Это свидетельствовало о почти полной мобилизации из B-клеток депонированного инсулина и цинка.

В дальнейшем, к концу третьих суток культивиоованкя, степень интенсивности реакции на цинк устанавливалась на уровне 58,5±5,7 o.e. по сравнению со 100±8,4 o.e. в контроле, тогда как яркость свечения окрашенных на шюулин B-клеток достигала 64,ß±6,9 o.e. по сравнению со 100^12,6 с.е. в контроле. Двукратное действие ТГ в этих условиях не сопровождалось какими-либо изменениями степени положительности реакций на цинк и инсулин: к концу третьих суток культивирования она находилась соответственно в пределах 62,2±5,2 o.e. (100±10,2 o.e. в контроле) и 56,9±6.3 o.e. (100*10,8 o.e. в контроле) и но отличалась от результатов, полученных'при действии лишь хи-ибенкламида. Однако, при подсчёте числа островков с признаками повреждения В-клеток были получены несколько иные результаты. Количество таких островков составляло через 48 ^асов 20,6^4,5$ от общего числа ( в контроле,то есть после действия только ТГ, - 23,3±3,9Й, а через 72 часа - 24,4^5,5% (38,3±6,4$ в контроле). Результаты этих опытов свидетельствуют о том, что предварительная мобизизация цинка из цитоплазмы B-клеток сопровождалась предотвращением появления островков с признаками повреждения на фоне значительного снижения содержания в них депонированного инсулина.

Анализ результатов исследования влияния тетрациклина показал, что препарат в опытах на животных'не вызывал значительнее изменений динамики уровня гликемии за исключением относительно умеренного и непродолжительного подъёма концентрации глтозы крови после очередного введения антибиотика. Яри этом следовало бы, по-видимому, обратить внимание на тот факт, что у нескольких животных к конау опыта уровень гликемии достоверно и устойчиво превышал нормальные значения. Опыты на культуре ткани показали, что прямое действие тетрациклина сопровождается отчётливым снижением содержания депонирование-

го в В-клетках инсулина при одновременном отчетливом увеличена числа островков с очевидными признаками повреждений.

Обращает на себя внимание то обстоятельство, что наблюдалась полная противоположность между .динамикой содержания реакционноспособ-ного цинка в В-клетках после прямого воздействия ТГ и .динамикой содержания депонированного инсулина. Если содержание инсулина в цитоплазме В-клеток постепенно снижалось к концу третьих суток культиви-рованияА реаетия на цинк, наоборот, резко ослабевала по окончании действия ТГ с последующим максимальным усилением к концу третьих суток культивирования. Объяснить это можно, на наш взгляд, следующим: тетрациклин, взаимодействуя с ионами островкс.г,ого цинка, формирует комплексные соединения, в результате чего ионы цинка, будучи связанными, не могут выявляться с помощью строго специфичного в отношение ионов этого металла люминесцентного реагента толуолсульфонилашно-хинолина, который образует со свободными ионами цинка яркофлуорес-цирувдие хелатные комплексы (И.А.Красавин, 1569; Я.А.Лазарис и соавт., 1971-1974), которые затем, при сохранении кровообращения у животных, распадаются, в результате чего ионы цинка вновь обретают способность вступать в реакцию (Я.А.Лазарис, Г.Г.Мейрамов,1974). Присутствие этого комплекса с ТГ в В-клетках сопровождается, по-видимому, определённым токсическим влиянием, поскольку через 3 суток число островков с признаками повреждения этих клеток отчётливо возрастает. Дополнительным и достаточно убедительным подтверждением этому служат опыты с глибечкламидом, которые показали, что предотвращение взаимодействия ионов цинка с антибиотиком сопровождалось и предотвращением появления островков с признаками повреждения В-клзток. Ещё одним подтверждением этому может служить наличие большого сходства с данными, которые были получены нами ранее прк исследовании патогенеза экспериментального диабета, вызываемого комплексобразующими соединениями -- диабетогеиными веществами дитизояом и 8-пара(толуолсульфонилашно) хшолином. Их введение сопровождалось аналогичным расхождением между динамикой реакции на инсулин и шик в В-клетках. В последующем, с помощью методов спектрального анализа было доказано (В.И.Лапин, 1971), что формирующийся после введения одного из этих веществ комплекс является, действительно, хелатом цинка с дитизоном, присутствие которого в цитоплазме В-клеток в течение первых 15 мин после его образования приводит к необратимому их поражению и развитию сахарного диабета (Г.Г.Мейрамов, Н.И.Труханое,1975; Н КаматвЫ ,1966).

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что

'гидрохлорид тетрациклина оказывает прямое влияние на В-клетки изолированных панкреатических островков, вызывая снижение содержания депонированного в них инсулина, а также оказывая на них прямое повреждающее действие. Полученные нами данные также служат указанием на то, что в механизме повреждающего действия антибиотика но В-клетки тлеет значение его способность к образованию комплексных соединений с ионами цинка, содержащинимя в цитоплазме В-клоток.

Состояние B-клеток изолированных островков в условиях воздействия на них циклоспорина А.

Успехи, достигнутые в трансплантологии за последние 10-15 лет в существенной мере связаны с началом применения нового иммуносупрес-сивного препарата циклоспорина А, являющегося сегодня одним из наиболее эффективных средств подавления реакции отторжения. Он активно используется при клинических и экспериментальных пересадках поджелудочной железы и изолированных панкреатических островков.

Вместе с тем, в последние года пиявился ряд иногда противоречивых сообщений о том, что циклоспорин А(ЦсА) оказывает неблагоприятноь влияние на углеводный обмен и на B-клетки. Так,A.flndersson и соавг. в 1984 г. впервые сообщили о снижении секреции инсулина изолированными островками под влиянием высоких когздентраций ЦсА.. H.-J. HaHti и сошт(1986 в опытах на животных обнаружили стойкую гипергликемию, снижение толерантности к глюкозе, снижение содержания инсулина в В-клетках, а также уменьшение их объёма. В опытах in vitro F. Laube и соавтД986), H.-J.Habn и соавт.(1986) выявили лишь минимальное снижение секреторной активности B-клеток под влиянием больших доз ЦсА (2000 нг/мл), иногда наблюдавшееся в опытах, тогда как P. Leonard и соавг. (1989) в опытах, на изолированных островках человека её не отмечали. Напротив, A. Andersson и соаг (1984) ,F.StBckiT>ann и соавт. (1989) сообщили о резком снижении секреции инсулина изолированными островками под действием ЦсА в дозах от 42S н./мл до 7750 нг/мл, что соответствует дозам от 5 до 50 мг/кг. M.Htaley и соавт. (1990) в опытах in vitro обнаружили резкое снижение влияния специфических в отношение островковнх клеток ростовых факторов вырабатываемых в поджелудочной железе, ня размножение и дифференциацию B-клеток в условиях воздействия на них ЦсА, a rt.Yoshimura и соавт.. (1988) выявил у пациентов с пересаженной поджелудочной жолезой, лечившихся ЦсА, более высокий уоовень глюкозы крови .по сравнению с другими больными.

Имеющиеся, таким образом, на сегодня данные являются в достаточной степени противоречивыми и не позволяют делать какие-либо определённые вывода о характере влияния ЦсА на панкреатические В-клетки.

На сегодня отсутствуют также какие-либо обоснованные предположения относительно возможных механизмов елияния ЦсА на углеводный обмен и, в особенности, на B-клетки, равно как и отсутствуют работы, выполненные с применением морфологических, и гистохимических методов, что, по нашему мнению, не способствует получению данных, которые могли бы помочь в изучении эффектов ЦсА в отношение B-клеток панкреатических островков. Вышеизложенное определило задачи исследования, которые сводились к следующему:

1) изучить содержание депонированного инсулина и функциональную актив-• аость B-клеток изолированных островков в условиях воздействия различных концентраций ЦсА (от терапевтических до токсических);

2) исследовать с помощью гистологических и гистохимических методов состояние гистоструктуры островков с тем, чтобы ответить на вопрос, оказывает ли ЦсА прямое повреждающее влияние на B-клетки; исследовать с помощью сканнирунцэй электронной микроскопии состояние поверх нооги изолированных островков в условиях действия ЦсА.

С этой целью в опытах in vitro ЦсА вводился в питательную среду в концентрациях 420^46 нг/мл, 1500±176 нг/мл и 7750±623 нг/мл, что соответствовало дозам in vivo, равным 5, 10 и 50 мг/кг. Препарат действовал в течение 12 и 24 часов, после чего островки культивировались в среде, не содержащей ЦсА.24 и 48 часов..В срезах фиксированных островков, окрашенных псевдоизоцианином (T.SchiebUr, s.schiesbler, I95S ; R.Coalson,I966) или иммунофлуоресцентным методами (S.Sternberger ,1979) исследовалось содержащее депонированного инсулина, функциональная активность В-клеток, а также выявлялось количество островков с признаками повреждения. Методом екпннирущей электронной микроскопии изучалось состояние поверхности панкреатических островков, подвергнутых прямому действию ЦсА в дозе 5000 нг/мл.

Результаты показали, что 12-часовое воздействие ЦсА в дозе 420 нг/ ври последующем культивировании в течение 24 часов не сопровождалось снижением количества депонированного в B-клетках инсулина, тогда как под влиянием более высоких доз препарата, равных 1500 нг/мл и 7750 ht/mj наблюдалось существенное снижение интенсивности флуоресценции цитоплазмы В-клеток соответственно до 56,6-6,9 o.e. и I8,2¿2,9 o.e. по сравнению со 100^12,6 o.e. в контроле, что свидетельствует о снижении количества депонированного в них инсулина. Увеличение продолжительности культивирования до 48 часов после воздействия на рстровки 1500 нг/мл ЦсА сопровождалось ещё большим, по сравнению с результатами, полученными после 24-часолого культивирования, снижением степени положительности реакции на инсулин, составлявшей 43,6¿4,2 o.e.

-Действие препарата в течения 24 часов приводило в дозах 1500 иг/мл и 7750 нг/мл к достоверному и значительному сни.-гению реакции на инсулин в цитоплазме B-клеток по сравнению п соответствующей величиной в контроле, составлявшей 100^9,3 o.e. соответственно дс 42,9-4,0 o.e. и 20,2*4,4 o.e. при продолжительности культивирования по окончании действия поеларата в пределах 24 часов. Удлинение времени культивирования но 48 часов не сопровождалось какими-либо достоверными изменениями по сравнению с данными, полученными после 24-часового зсультивя-рованта. Что кажется дозы, равной 420 irr/мл, то такал концентрация не оказала влияния на содержание депонированного инсулина ни в случае когда препарат действовал в течение 24 часов, ни в условиях более продолжительного влияния ЦсА, составившего 48 часов. Интенсивность свечения окрашенных голттгофлуоресцентным методом B-клеток составила соответственно 97,7*12,4 o.e. и 92,8*15,6 o.e. по сравнению со 100*12,3 о. в контроле. Исследование функционального состояния B-клеток островков с помощью геота с глибенкламидом также не выявило каких-либо изменений: степень восстановления степени положительноети. реакции на инсулин после предварительной его мо^ихизаци" и последующего культивирования островков в течение 72 часов составила 76,2-8,2 o.e. по сравнению с 74,3*7,9 o.e. в контроле, тогда как действие ЦсЛ в более высоких концентрациях сопровождалось значительным замедлением скорости восстановления депонированного инсулина в аналогичных условиях опыта и составляло лишь, соответственно, 42,5*6,1 o.e. и 36,7*5,8 o.e.

Подсчёт числа островков с признаками повреждения B-клеток дал следующие результаты. После 12-часового воздействия ЦпА и последующего 24-часового культивирования островков, количество их с признаками повреждения составляло 18,5*4,8/£ от общего числа (420 нг/мл), 21,8*5,2$ (1500 нг/мл) и 35,7*3,1$ (7750 нг/мл) по сравнению с 21,3*3,8$ в контроле. Увеличение продолжительности культивирования до 48 часов не сопровождалось появлением каких-либо различий по этому показателю, тогда как увеличение времени действия препарата до 24 часов при дозе 7750 irr, /мл сопровождалось возрастанием'числа повреядёшгах островков до 39,2* *4,4$. Наиболее часто наряду с дегрануляцией B-клеток обнаруживались вакуолизация цитоплазмы, а такте признаки Дегенерации отдельных В-кле-ток, располагавшихся в виде небольших групп в различных частях островка. Исследование состояния поверхности островков, проведенное с помощью сканнирущей электронной микроскопии, не обнаружило каких-либо изменений со стороны расположенных на поверхности островков клеток, подвергнутых действию ЦсА в концентрации 5000 нг/мл. Поверхность меток выглядела гладкой, без каких-либо отличий от поверхности клеток

-не подвергавшихся действию ЦсА.

Полученные данные свидетельствуют о том, что циклоспорин А оказывает очевидное влияние на содержание депонированного инсулина в В-клетках изолированных островков, приводя к значительному снижению его при действии доз препарата, равных 1500 нг/мл и, особенно, 7750 нг/мл, тогда как доза, равная 420 нг/мл, не оказывала влияния на величину данного показателя. Увеличение продолжительности действия препарата в дозе Г500 нг/мл сопровождалось ещё более отчётливым снижением уровня нолокительности реакции на инсулин, тогда как возрастание продолжительности культивирования не оказывало елияния на величину этого показателя. Действие ЦсА в дозах, равных 1500 нг/мл и 7750 нг/мл сопровождалось одновременно и заметным снижением функциональной активности В-клеток изолированных островков. Результаты опытов показали также, что циклоспорин А на модели 1показывает прямое влияние на В-клетки, вызывая повреждение части из них.

Анализ результатов свидетельствует о том, что прямое действие ЦсА сопровождается циготоксическим эффектом в отношение В-клеток изолированных островков лишь в тех случаях, когда доза препарата была равна 7750 нг/мл. Однако, имеются определённые сложности при сопоставлении этих данных с результатами, полученными при оценке содержания депонированного инсулина: действие препарата в этой же дозе сопровождалось более выраженным снижением величины положительности реакции на инсулин по сравнению с количественными характернотиками его циго-токсического действия. Пока трудао дать этому удовлетворительное объяснение. В определённой степени это могло бы быть связано с тем, что в настоящее время кет серьёзно обоснованных представлений о механизме действия циклоспорина А на В-клетки, а существуют лишь отдельные предположения.

Состояние В-клеток островков поджелудочной железы

в условиях воздействия гексахлорциклогексана.

Гексахлорциклогексан является одним из наиболее высокоэффективных хлорорганических соединений, активно применявшимся на протяжении последних десятилетий в агропроизводетве. Его отличают стойкость в окружающей среде и выраженная способность к кумуляции. Из 9 существующих изомеров гексахлорциклогексана (ГХ) инсектицидным действием обладает лишь гамма-изомер, превосходящий по инсектицидным свойствам в 50-10000 раз все другие изомеры (Н.Н.Мельников,1968). Продолжающийся интерес к изучению влияния ЕХ на организм связан, по-видимому, с тем, что это соединение, накапливавшееся за десятилетия применения в почве

ввиду ого высокой стойкости будет продолжать оказывать влияние на человеческий организм и после прекращения его использования.

Среди многочисленных ойфект^в ГХ на организм значительное место гринадленит его разносторонним влияниям на углеводный обмен, изменения которого от^ечаютсп ™ 81% случаев у больных о профессиональной интоксикацией (В.А.Каримов, А.К.Лжапаров,1975). ПХ вызывает снижение утилизации углеводов (С.К.Саидкаримов и соавт.,1976), некоторое снижение уровня гликемии, либо кратковременную гипоргликешю, сменяющуюся гипогликемией (Г.В.Серебряная,1959; Е.П.Краснюк,1964; Е.Н.Буркпцкая,1970, 1971; М.В.Бочкарёв и соавт.,1979). Результаты многочисленных обследований людей с профессиональной интоксикацией ГХ показали наличие у них извращённых сахарных кривых (В.П.Безуглнй и соавт.,1976; М.В.Еоч-карёв и соавт.,1979). Аналогичные данные получены в опытах на животных, у которых .длительное применение ГХ вызывало замедление снижения уровня глюкозы крови после нагрузки галактозой (Е.А.Антонович,Т95Э). В некоторых случаях гликемическая кривая приобретает характер, типичный .для недостаточной функции инсулярного аппаоата поджелудочной хг-лезы (Е.П.Краешек,1964,1966). По мнению O.Caranlc (I9S7), IX вличет на общие пути обмена углеводов, жиров и Волков. Поражение печени при хроническом действии ГХ сопровождается нарушением её прогеосиитегкческой, антитоксической, жэлчевыделительной и углеводном функций (Л.Н.Кяске-лич,1972; Е.Н.Вуркатткая,В.Г.Папко,1977). В определённой мере изменения со стороны углеводного обмена могут объясняться нарушением Функции коркового слоя надпочечников, выражающимися в угнетении активности глюко- и минералокортикоидов (Е.П.Краснюк и соавт.,1966; RRamade etat., 1980). Вместе с тем, остаются неизученным! вопросы, касающиеся того, способен ли гексахлорцяклогексон оказывать влияние на состояние углеводного обмена через непосредственное воздействие на B-клетки панкреатических островков. Вышеизложенным и определялась задача исследования, заключавшаяся в изучении на модели in vitro характера прямого влияния ГХ на B-клетки изолированных панкреатических островков.

Нами изучался характер влияния ГХ на островки IO-12-дневннх крысят..Препарат вводился в питательную среду, содержавшую изолированные островки в дозах 50\нг/мл, 100 • нг/мл и 500 нг/мл и действовал в течение I и 3 часов. Выбор дозы'был осуществлён с учётом имепцихся данных о содержании ГХ в тканях человека (Р.А.Исаева,1981). Содержание депонированного инсулина в B-клетках определялось по результатам оценки интенсивности флуоресценции окрашенных псевдоизоцианином препаратов Фиксированных панкреатических островков.

Действие ГХ в концентрации 50 нг/мл не сопровождалось какими-либо изменениями: содержание депонированного инсулина в B-клетках составляло 92,0*14,9 o.e. по сравнению со 100*11,6 o.e. в контроле. Не обнаруживалось также каких-либо изменений со стороны гистосгруктуры островков. Число островков с признаками повреждения составило 16,4*5,1$ от общего числа и не отличалось от величины аналогичного показателя в контроле (ТВ,6*4,3$). Увеличение времени действия ГХ до 3 часов не привело к изменениям по сравнению с результатами, полученными после часового действия ГХ.

Повышение концентрации ГХ до 100 нг/мл привело к отчётливому снижению интенсивности флуоресценции окрашенных на инсулин B-клеток до 74,3*12,6 o.e. по сравнению со 100*8,8 o.e. в контроле. Число островков с признаками повреждения увеличилось при этом до 28,7*4,8$ от общего числа по сравнению с 19,5*5,2$ в контроле. Степень положительности реакции на инсулин в этих островках была ещё более сниженной и находилась в пределах 48,3*11,4 o.e., что свидетельствовало о пониженном содержании депонированного инсулина в цитоплазме В-клеток этих островков. Со стороны B-клеток отмечалось помимо дегрануляции цитоплазмы наличие кариолизиса и деструкции отдельных клеток. Увеличение времени действия ГХ до 3 часов сопровождалось возрастанием числа островков с признаками повреждения и дестру клип В-клеток.

Действие препарата в козе, равной 500 нг/мл сопровождалось развитием глубоких изменены;!. Отмечалось выраженное ослабление величины положительности реакции на инсулин в B-клетках, которая находилась в пределах 28,4*12,9 o.e. в сочетании с увеличением до 63,5*14,6^ числа островков, в которых обнаруживались глубокие деструктивные изменения со стороны большей части В-клеток. Нередко на месте этих клеток выявлялась бесструктурная масса.

Как было указано выше, нарушения обмена углеводов в результате действия ГХ большинством авторов объясняются кзменениями со стороны углеводной функции печени, а также влиянием этого вещества на другие эндокринные железы, в частности, на корковый слой надпочечников.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что введенный в питательную среду гексахлорциклогексан в концентрациях, соответствующих или несколько превышающих в среднем его содержание в органах к тканях, не оказывал какого-либо влияния на состояние B-клеток изолированных островков. Серьёзные изменения начинали развиваться при действии его в концентрациях, превышавших 100 нг/мл.

Полученные данные свидетельствуют также и о том, что в развитии нарушений углеводного обмена в условиях введения в организм гексахлор-

циклогексана имеют значение не только нарушения, развивакщиеся под его влиянием в печени, эндокринных железах, но и прямое влияние этого вещества на панкреатические В-клетки.

Состояние В-клеток панкреатических островков в условиях действия дитизона.

Способность дифонилтиокарбазона (дитизона) вызывать экспериментальный диабет было впервые обнаружена в 1949 г. «.Окатсйо Эта модель экспериментального диабета впоследствии в течение ряда лот с успехом использовалась исследователями. С её помощью был получен ряд экспериментальных данных, которые в определённой море помогли углубить знания о причинах и механизмах развития сахарного диабета. Последнему способствовало не только то, что была предложено данная модель экспериментального диабета, но и то обстоятельство, что в отличие от других моделей диабета, патогенез дитизонового .диабета, механизмы его возникновения удалось в значительной мере изучить.

В 1955 г. К.ОкапЫо на основании своих исследований выдвинул цинковую теорию патогенеза сахарного диабета, базируясь при этом на анализе результатов опытов по изучению не только дитизонового, но и некоторых других моделей экспериментального диабета. Согласно отой теории, диабет развивается в результате овязывания островкового цинка с вводимым дитизоном или другим веществом, способным реагировать с ионами цинка. Впоследствии это положение, которое выдвигалось К. Окаго^о в качестве гипотезы, получило серьёзные и обоснованные подтверждения.

В наших опытах па кроликах било показано (Я.А.Лазарпс, Г.Г.Мей-рамов,1974), что формирующийся в цитоплазме В-клеток хелатный комплекс .дитизона о цинком (дигизонат цинка), распадается при сохранении кровообращения у животных через 1,5-2 часа, после чего освободившиеся ионы цинка вновь способны вступать в реакцию с дитизоном. К это>у времени, однако, дитизон успевал оказать необратимое действие на ми-иень и через несколько суток « В-клегках развивались изменения, ти-тичные .для сахарного диабета (Е.В.Науменко,1958; Г.Г.Шеянов,1364; 3.А.Ещенко,1965).

Пытаясь предупредить формирование цитизоната цинка путём пред-зарительной, практически полной мобилизации его вместе с инсулином из 3-клеток с помощью глибенкламида, мы обнаружили, что последующее введение дитизона не сопровождается образованием в цитоплазме В-клеток 1ркокрасных зёрен рктлзоната цинка и диабет у животных не развивается М'.Мейрамов, 1975). Стремясь получить дополнительные прямые поптверж-хент этому мы попытались предупредить дитизоновый диабет другим путём, 1 именно: после предварительного связывания ионов цинка, содержащихся

в В-клеткпх, с более мощным, но недипбетогенным комплексообразоватв-лем - натриевой солью карбашновой кислоты - последующее введение животным дитизона но могло образовать дитизонат цинка и вновь .диабет предупреждался у всех животных.

Ещё одно важное подтверждение было получено с помощью метода спектрального анализа: сравнительный анализ спектров поглощения экстрагированного из В—юлеток дитизоната цинка и аналогичного соединения полученного химическим путём, подтвердил йх полное сходство (В.И.Лапин, 1971)

Дополнительным подтверждением того, что образовавшийся после введения дитизона комплекс являлся, действительно, дитизонатом цинка служил тот факт, что в течение всего времени, в продолжение которого ионы цинка в В-клоткэх были связаны с дитизоном, они не выявлялись с помощью строго специфичной в отношение ионов цинка люминесцентной реакции с толуолсульфонилашнохинолином (ТСАХ). Напротив, если животному вводили внутривенно этот реагент, ионы островкового цинка связывались с ним, формируя яркофлуоросцирующие комплексы и не давая тем самым возможности дитизону образовать .дитизонат цинка. В свою очередь, мобилизация депонированного инсулина и цинка из остров-кот« клеток с помощью глибенкламида препятствовала (Я.А.Лазарис, Г.Г.Мейрамов,1974) образованию токсического комплекса ионов этого металла с ТСМС, в результате чого .диабет, вызываемый этим соединением (Л.К.Бнстревская,1971) не развивался.

Таким образом было показано, что решапцое значение в развитии диабета, вызываемого дитизоном и производным 8-оксихинолина - 8-па-ра(толуолсульфониламиио)хиполином(ТСЛХ) имеет их временное связывание с островковыми ионами цинка. Возник следующий вопрос: в течение какого времени присутствие этого комплекса в В-клетках вызывает в последующем развитие необратимых изменений? Этот вопрос выяснялся двумя путями. Методом электронной микроскопии было показано, что уже через 5 мин. после образования комплекса .дитизона с цинком в островках появляются признаки повреждения В-клегок (Г.Г.Мейрамов, Н.П.Тру-ханов,1975,1976). Через 15 мин. эти изменения имели уже ярковыражен-иый характер, а через 2 часа в В-клетках сохранялось лишь ядро с небольшими обрывками цитоплазмы (Г.Г.Мейрамов, Н.И.Тртханов,1975). Наконоц, в опытах с вытеснением датизона из сформированного им в В-клетках дитизоната цинка не.диабетогенным комплексообразователем -- натриевой солью карбашновой кислоты было дополнительно убедительно показано, что присутствия дитизоната цинка в В-клетках в течение первых 15 мин. после его формирования достаточно, чтобы диабет раз-

вился у 95% животных, тогда как вытеснение дитнзоча из еог комплекса через 5 мин. после его формирования предупреждало развитие сахарного диабета у животных и лишь у 5% он возникал (П.А.Лазарис, Г.Г.Мей-рамо в,1974,1976).

Эти результаты можно рассматривать как убедительные аргументы в пользу того, что в механизме диабетогенного действия комплексобра-зуицях соединений существенном звеном яеляотся связывание шли ионов цинка в цитоплазме B-клеток и формирование токаичного комплекса, который разрушает эти клетки.

Принимая во внимание то, что упомянутые выше опыт;! проводились на модели in vivo, допускащей возможность влияния организма на описанные выше процессы мы понимали необходимость проведения модельных экспериментов, позволяющее выявить прямое действие цитизона на В-клетки в условиях in vitro , полностью псклттшх возможность какого-либо влияния на эти процессы со стороны организма. В связи с этим были поставлены опыты на культуре изолированных островков.

Результаты показали, что получасовое экспонирование В-клеток в питательной среде, содержавшей дитизон в концентрациях 50 мкг/мл и 100 мкг/мл, что соответствовало диабетогенным дозал этого вещества, приводило спустя 72 часа к почти полному отсутствию флуоресценции окрашенных на инсулин осгровковых B-клеток, интенсивность которой составляла 12,3*3,6 o.e. по сравнению со 100*15,4 o.e. в контроле. Это свидетельствовало о практически полном отсутствии депонированного инсулина в B-клетках. Гистологический анализ показал, что в 92,4*6,2$ островков обнаруживались очевидные признаки дегенеративных изменений со стороны B-клеток, характерные для картины сахарного диабета, по сравнению с 18,9*6,8$ островков с признакам повреждений, обнаруженных в контроле.

Опыты на культуре изолированных панкреатических островков око!гчательно подтвердили, таким образом, представления о мехинизме диабетогенного действия комплексобразувдих диабетогенных веществ, сложившиеся по результатам опытов на модели in vivo .

Гистофункциональный метод оценки активности инсуЛинпродуцирувдей функции B-клеток изолированных панкреатически островков.

В настоящее время для оценки функционального состояния В-клеток культивируемых пашреатических островкоЕ наиболее часто используется радиоиммунологическое определение содержания инсулина, секрети-ровонного в питательную среду. С его помощью определяется суммарное

количество инсулина, секретированного B-клетками за какой-либо, достаточно продолжительный промежуток времени. Последнее не даёт, однако, возможности точно оценить состояние клеток в момент исследования. В этой сеязи более информативными могли бы быть метода функциональной гистохимии. При свойственных им недостатках (имеется в вид? тот факт, что изменения интенсивности окраски цктоплазы клеток оцениваются не в абсолютных, а в относительных: единицах - o.e.) эти метода обладают следующими достоинствами: •

- интенсивность окоаски, с учётом которой супят о признаках функциональной акгишости клеток, определяется в конкретный момент наследования, что позволяет говорить не о суммарной активности клеток за некий промежуток времени, а об их активности на момент определения;

- метод позволяет получить дополнительную информацию о структурных признаках общей функциональной активности секреторной клетки.

В опытах на изолированных островках крысят IQ-14-дневного возраста была предпринята попытка оценить функциональное состояние В-кле-ток по скорости восстановления величины положительной реакции на инсулин после предварительной его мобилизации из цитоплазмы клеток с помощью глибенкламицаА

Было установлено, что введение в питательную среду препарата в количестве 5 и 10 мкг/мл вызывало1неполную мобилизацию из В-клеток депонированного инсулина. Практически полная мобилизация происходила лишь в 'тех случаях, когда доза тлибенкламила (ГБ) достигала 25 мкг/мл. Интенсивность сЕечения цитоплазмы B-клеток, окрашенных псевцоизоциашпюм, определялась величиной 16,6*2,1 o.e. по сравнению со 100*11,6 o.e. в контроле. В последующем, после смены питательной среды на свежую, не содержавшую ГБ, группы из 20-25 островков извлекались через 24, 48, 72 и 96 часов после завершения действия ГБ, .длившегося 2 часа. В окрашенных срезах интенсивность свечения незначительно возрастала спустя 24 часа, достигал 26,9*3,8 o.e. Через 48 часов она усиливалась до 39,2*11,3 o.e. по сравнению со 100*17,4 o.e. в контроле, через 72 часа - до 68*12,9 o.e., а через 96 часов - до 74,6*12,8 o.e. по сравнению со 100*18,5 o.e. в контроле. Дальнейшее увеличение времени культивирования не сопровождалось возрастанием степени положительности реакции ка инсулин. Сходные результаты были получены в аналогичных условиях опыта при использовании ß качестве естественного стимулятора секреции инсулина глюкозы, которая добавлялась в питательную сред,' в концентрации 16,7 ммоль/л. По окончании действия глюкозы интенсивность флуоресценции B-клеток составляла 23,5*4,2 o.e. (100*16,5 o.e. в контроле), через 24 часа -28,9*11,8 o.e.

•(100-12,7 o.e.), через 48 часов - 32,3*7,9 o.e. (100*14,5 o.e.), через 72 часа - 65,6*10,8 o.e.(100*11,3 o.e.) и через 96 часов -- 70,8*16,2 o.e. (100*16,6 o.e. в контроле)

Таким образом, оценка функциональной активности культивируешк панкреатических островков показала, что после полной мобилизации кз них депонированного инсулина, последний восстанавливается через 3 суток приблизительно на 65-70$ от исходного уровня. Многочисленные последующие эксперименты подтвердили это. Полного восстановления утраченного поело мобилизации инсулина, как это обычно бывает в опытах на животных, не происходило. Не вызывает, вероятно, сомнений, что одной из причин этого является то, что в условиях iii vitro панкреатические островки структурно полностью отделены от организма. Возникает вопрос: зачем нужен гисхофункциональный тест оценки инсулинпродуцирутацей функции B-клеток если состояние этих клеток па модели изолированных островков можно оценить с помощью тех хе гистохимических и морфологических методов, которые применяются при проведении данного теста? На наш взгляд, гистофункшюнальннй способ наиболее подходит для тех случаев, когда видимых изменений содержания депонированного инсулина в В-клет-ках, а также видимых гистологических нарушений не обнаруживается. Это положение было подтверждено следующими опытами с дитизоном. Введение в питательную среду неди&бегогенных доз дитизона, равных 10 мкг/мл сопровождалось незначительным и недостоверным снижением степени положительности реакции на цшга, а через 2 суток'- небольшим снижением содержания депонированного инсулина. Таким образом, по этим показателям В~клетки опытных островков практически не отличались от контрольных. Использование гястофункционального тзета с глюкозой показало наличие замедления скорости восстановления депонированного инсулина: интенсивность свечения цитоплазмы 3-клеток через 72 часа после окончания действия глюкозы составила 31,3*4,8,' заметно уступая скорости восстановления реакции в Е-клетках интактных островков - 69,9*6,7 o.e. На nam взгляд, гистофу!гкционалышй тест выявляет нарушения функции культивируемых B-клеток изолированных островков аналогично тому, как тест толерантности к глюкозе помогает выявить скрытые нарушения и оценить состояние B-клеток поджелудочной железы организма.

ВЫВОДи:

Антибиотик гидрохлорид тетрациклина оказывает прямое влияние на В-клетч ки изолированных панкреатических островков, сопровождающееся снижением количества депонированного в них инсулина, снижением скорости его восстановления после предварительной мобилизации глибенкламидом и появлением признаков повреждения В-клеток.

2.'Предварительная мобилизация иа В-клеток депонированного инсулина и ионов цинка препятствует возрастанию числа островков с признаками повреждения В-клеток, а скорость восстановления в В-клетках инсулина при этом не отличается от таковой в контроле. Полученные данные позволяют предполагать, что в механизма действия тетрациклина существенная роль принадлежит его способности образовывать комплексные соединения (хелаты) с ионами цинка, содержащимися в В-клетках. Подтверждением атому служат полученные нами данные о том, что введение тетрациклина в питательную среду сопровождается снижением уровня положительной реакции на шгну пр* сохранении обычной реакции на инсулин, что можно объяснить лишь одной прттчиной, а именно, тем, что ионы цинка пои этом связываются с антибиотиком.

3. Циклоспорин А снижает содержание депонированного инсулина в В-клетках изолированных островков, не влияя при этом на скорость его восстановления в клетке пссле предварительной мобилизации глибенкламидом. Препарат не оказывает влияния в терапевтических дозах на состояние поверхности изолированных панкреатических островков, равно как

не повреждает В-клетки. В токсических дозах его действие сопровождается снижением количества депонированного инсулина, замедлением скорости его восстановления после мобилизации его из В-клеток гли-бенкламидом и появлением большого числа повреждённых островков.

4. Гексахлорциклогексан снижает содержание депонированного в В-клетках инсулина и одновременно, в токсических дозах, вызывает гистологические изменения в островках, что свидетельствует о том, что вызываемые им нарушения углеводного обмена могут йытъ связаны не только с нарушениями функции печени, возникающими в результате действия этого вещества, но и его непосредственным влиянием на В-клетки.

5. Дитизон оказывает прямое повреждающее действие на В-клетки изолированных панкреатических островков, вызывая поражение большинства островков после получасового воздействия. Эти данные окончательно подтверждают существующие, хорошо теоретически и экспериментально обоснованные представления о. патогенезе диабета, вызываемого диабетоген-ными комплексобразующими соединениями, согласно которым их действие связано со способностью образовывать токсичные хелатные комплексы

с ионами цинка в В-клетках.

6. Гистофункциональннй метод оценки инсулинпродуцирупцой функции В-клеток изолированных островков является весьма информативным; его достоинствами являются возможность оценки функциональной активности в

конкретный момент определения и получение дополнительной информации

о структурных признаках клеточной активности; последние повышают

информативную ёмкость мвтода в работе с клеточными культурами.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО TIME ДИССЕРТАЦИИ

1. Влияние аллоксана на содержание инсулина и цинка в панкреатических островках. Патологическая физиология иг экспериментальная терапия. -1973.-.4.-с,36-40 (совм. с Лапиным В.И., Корчиным В.И., Сатоси-ннм В.А, Пальминоп Т.В.).

2. К механизму повреждающего действия цитизона на панкреатические островкивне В-клетки. Проблемы эндокринологии.-1974.-Jf5-c.90-94 (совм. с Лазарисом Я.А.).

3. О роли связывания цинка в патогенезе .диабета, вызываемого дигазо-ном. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-1974.-.Ю,-с.19-22 (совм. с Лазирисом Я.А.).

4. Ультраструктура панкреатических В-клеток при дитизоновом диабете и его предупреждении диэтилдитиокарбаматом натрия. Проблемы эндокринологии. -1975.-Я6-с.92-95 (совм. с Трухановым Н.И.).

5. Электронная микроскопия панкреатических В-клегок яроликов после введения циэтилдитнокарбамата натрия и дитизонн. В кн.:"Методы исследования в химии и биологии'.' Караганда.-1975.-в.2.-с.260-263 (совм. с Трухановым Н.И.).

S. Влияние диотилцитиокарбамата натрия на инкреторную функцию поджелудочной железы. В кн.:"Методы исследования в химии и биологии!' Караганда.-1975.-вЛ.-с.263-267 (совм. с Бавельским З.Е.).

7. Диабетогенное действие цитизона. Здравоохранение Казахстана.--IS76.-J,"2.-c.85-86 (совм. с Трухановым Н.И.).

3. Влияние манинила на инкреторную функцию поджелудочной железы. В сб.:"Биология растений и животных'.' Караганда.-1976.-в.3.-с.117-120 (совм. с Бавельским З.Е.).

Э. Патогенез диабета, вызываемого комплексобразуквдими соединениями. В сб. "2-й Всесоюзный сьезд патофизиологов'.'Ташкент.-1976.-т2.-с.322-323 (совм. с Лазарисом Я.А., Корчиным В.И., Бавельским З.Е.).

). Мнкрофлуориметрическое определение содержания инсулина в панкреатических островках" В сб.''Вопросы физиологии ¡эндокринной системы'.' Караганда.-Г985.-сЛО-11 (совм. с Корчиным В.И.). Гистохимическое определение цинка в В-клетках 4-5-лневной культу-

ры. В сб."Вопросы физиологии эндокринной системы1.' Караганда.-1985.-с.5-6 (совм. с Корчиным В.И.).

12.Влияние гамма-гексахлорциклогексача на содержание инсулина в В-клетках культивируемых панкреатических островков. В сб."Влиросы эндокринологии'.' Алма-Ата.-1985.-с.157-160 (совм. с Ахметовым A.A., Тусупбе-когой Г.Т.).

13.Состояние инсулиногенной функции культивируемых панкреатических островков в условиях воздействия гамма-гекоахлорциклогексана. Депонированная в ВИНИТИ статья.-1986.-ШЭ10-В.-с. 1-5 (совм.с Тусупбеко-вой Г.Т.).

14 Гистохимическая псевдоизоцианиновая реакция на инсулин, в культивируемых панкреатических B-клетках как метод оценки их функционального состояния. В кн.:"Современные проблемы теоретической и клинической эндокринологии'.' Киев.-1987.-с.249 (совм. с Корчиным В.И., ТУсупбе-ковой Г.Т.),

15.Микрофлтоориметрический метод определения содержания инсулина в пгн-креатических островках. Проблемы эндокринологии.-1987.-}?6.-с. 49-51 (со.вм. с Мейрамовой Р.Г., Тусупбековой Г.Т.).

16.0 содержании цинка в культуре островковых В-клеток поджелудочной железы при действии различных факторов. В сб,"Тезисы докладов 4-й Всесоюзной конференций по патологии клетки'.' Москва.-1987.-с.207 (совм. с Корчиным В.И., Жачибековой Т.Н., Медведевым В.И.).

17.0 возможности оценки функционального состояния культивируемых панкреатических B-клеток с помощью гистофункционального митода. В сб. "Трансплаитологические метода лечения сахарного диабета'.' Рига.--1988.-с.ЗЗ-ЗГ) (совм. о Ахметовым A.A., Скрнльник Г.С., Тусупбековой Г.Т.).

18.Гистохимическая характеристика культуры эндокринной ткани поджелудочной железы в условиях прямого воздействия на неё некоторых химических соединений. В сб."Трансплаитологические методы лечения сахарного .диабета'.' Рита.-1988.-с.43-44' (совм. с Тусупбековой Г.Т., Ахметовым A.A.).

19. Оценка состояния культивированных островковых В-клегок с помощью комплекса гистохимических методов. В сб."3-й Съезд эндокринологов СССР'.' Ташкент.-J989.-с.271 (совм. с Тусупбековой Г.Т.).

20.Влияние химических соединений и лекарственных препаратов на морфо-функдиональное состояние панкреатических островков. В сб."Вопросы эндокринологии'.' Алма-Ата.-1988.-п.48-49 (совм. с Корчиным В.И., Медведевым В.И., Жанкбековай Т.Н.).

Г!1. The hi .?tof Jiic tionsl metnod of npprecietinß functional state of lGolf.tud pf.ncrcr.tic inlet'з Б-ов11з ill the tis3iie of culture. Die.betea Research and Clinical Practice.-19ЛЯ. v. 5.-p. 226 (H.IJied-âorer, G.Tu'-.upbsfcovc) .

2,?. Tft', insulin contînt in B-cells or cultivfited pancreatic islets oft.or' direct inTluence of tftrecycline hydroclilori de. European Journfl of CJlinicrl Phurr.ifruJ Oi.;y.-19Й9.- v. 36. - p.236 ( G. TusupbeV.ove ). Estiirxtion of atrte of hi stostructure B-cella of isolated pnnc-reef.ic i .71 f--1 о î л cl insulin content in tnem by using of different îixctûchumiccl rnetnods. In book: "9-th .VorRshop of .А1ЮР1Т study Group" {Europ.Association for the Study of Diabetes). Igls.--1Qt)0.-p.75 (G.Tuuupbekovo).

24. Гистохимическое выявление инсулина в культуре эндокринной ткани поджелудочной железы с помощью псеядоизоцианинового и иммунофлуо-ресцентного методов. Проблемы эндокринологии.-1990.-М.-с.66-§9 (совм. с Конерт К.-Д., Т^рчиным И.С..Ахметовым A.A., Мейрамовой Р., ТусупбекояоЯ Г.Т.).

25. Разделение островков поджелудочной железы в градиенте плотности декстрана. В сб."Труды Карагандинского педагогического института'.' Караганда.-1990.-с.73' (совм. с Вольраб Ф., Бекмагамбетогнм Т.).

6. Tne insulin content in B-cella of isolated pancreatic islets during 9 days prolonged cultivation. In book: "10th Workshop of AID3PIT Study GroupУ Amsterdam.-1991.-p.53 (K.Ospenova, O.Tuaup-bekova.

7. funktioneller histochemischer test mit Glucose zur Schätzung der production durch isolierte pancreatische inaein. Aktuelle Endokrinologie und Stoff Wechsel.-1991.-v.2.-b.-12.-p.114 (J.Meyramovs).

B. In vitro effect of Gluco-че on functional state of B-cells of pancreatic islets. Diabetes.-1991.-v.40.-s.1.-p.65 (R.Ospanove, J.f,;eyrF.mova).

9. The high specificel hiHtochemical method of revneling of

Zn-iona in Е-се11з of isolated pancreatic islets. Diabetes.--1991.-v.40.-e. 1.-P.65 ((i.TusupoeVova).

30. Снижение содержания депонированного инсулина и панкреатических островках, подвергнутых воздействию циклоспорина А. В сб."Лктуа льные проблемы Физиологии'.' Кппаганпа.-1992.-т.2.-с.59 (сорм.

с Мейрамовой Р.Г.Досмагамбеговой Р.С.).

31. Реакция В-клеток изолированиях панкреатических островков на прямое влияние гидрохлорида тетрациклина. В сб."Актуальные проблемы физиологии'.' Караганда.-1992.-т.2.-с.60 (совм. с IV-ляевым А.Е.,Бекмпгамбетовим Т.О., Оспановой P.P.)

32. Decreaae of insulin content.in B-cella of isolated ialeta pretrested by Cyclosporine A. In books "11 Workshop Of AIDSFIT Study Group!' Igla.-1992.-p.-57 (I.Akmayev, A.Popykin, R. Doamegembetove.).

33. The inaulln content in Isolated pancreatic islets pretreeted by Cyclosporine A. In book "9th International Congress of Endocrinology!' Nice.-1992.-p. 354 (I.Akmayev, J.Meyramove).

34. The functional state of B-c»lls oi isolated pancreatic islets pretreated by Cyclosporine a. In book» "5th World Conference on Clinical Pharmacology end Therapeutics!' Yokohama.-1992.-

—p.238.

35. Гистофлюориметрический метод определения содержания инсулина в панкреатических В-клегках. В сб."Новости науки Казахстана (научное приборостроение)'.' Алма-Ата.-1992.-с.81-82 (совм. с Г. Т. Хусупбековой).

а к a i i i и в е БЛАГОДАРНОСТЬ

I от very thankful í.'nr rear,sr.ta as financial Gild consultative supporting of i nvo.-itii'.n't-icn to:

Автор благодарит за финансовую, материальную и консультативную помощь, оказанную пои выполнении этой работы:

1. Dp Напч Le-.ng: sch (lioohrinf.c!- í.!ennh^im UnbH), 1979-1990 ■?. Ins. fiobt-rt ScMlly (Boehrin^fr I.&nnheim GmbH, Vi en), 19Г-3-199? 9. fir I'iter Fein (EoehrJnrer «annhoin ünbH, Wien), 1°R7-1993 Mr Dictar Xeibel (Eoehrinr.er Vannheim GnibH), 19"0

5. Г*г Joh'.r.nes Tfritaek (Boelirir ".er Knnnneira GmbH), 19R0, 190?

6. 3r Err.'i л B?it-X (Bochrinp.er ¡.fennhelm Gi?blf, Vi en), 1983

7. Dr Hnrald Rif-zel (Hoechat AG), 1992, 1993

В. Prof., I/ine-PriisiJent ID?, John 'Turtle (Sydney), 199B-199Í;

9. Prof.,Ildur Akmayev (Koecov), 1988-1993

10. Prof. Sultan Doane-emtetov (Karaganda), 1982-1993

11. Dr Med. K.-D.Konnort (Ktrlaburg), 1988-1992

12. Mre Elisabeth Horn (SERVA), 1930-1992

13. Dr Нг.пз Niedderer, Preuidont of SERVA In 19Г>Э-19PH. 1980-198"

14. Dr Jamas Brswley, President of SERVA in 1989-1991. 19B9-1991

5. Dr Ргрля Enznenn, President of Serva from 1991. 1991-1992

6. Dr Roland Thunberg (Phrrrarcia Pine Chemicals AB), 19EO-1985

7. Dr Keel. Valentin Gerain (Frenkfurt), 1982, 1908

Q. Mr Thomas Murauer (Fotostudio "Thomas Murauer;* Inriebruck), 19 "VI

9. Dr I.'at. Frank V/ohlrab (Leipzig), 1988-1992

U. Dr Gerrit ,/olters (Groningen), 1991

•1. Dr '.Verneг Manned: (MERCK), 1987

%ilc'iи^о-и+'б G.Keyrnrnov, ' Head of

Endocrine Гадсгс-о Hiatocheraiutry Lib., Pedagogical Institute 470074 I'i rf £f;nda 74 Republic of Kazakhotan

Интенсивность Флуоресценции < содержание ионов цинка и инсулина (в о. е. ')

100 -ЭО -ВО -70 -БО -50-40 ЗО -

го -та . о

Влияние, гидрохлорида тетрациклина ( 50 ткг/тл ) на содержание свободных ионов цинка и депонированного в В-клетхах инсулина

ш-

ионы цинка

- инсулин

г ч. 24 ч. 48 ч. 72 ч.

Время культивирования после окончания действия тетрациклина

о.

Влияние предварительной тобилизации ионов цинка из В-клеток на повреждающее действие тетрациклина

Число островков с признаками повреждения В-клеток < У. ')

100 -ЭО -□О -70 -БО -50 _ 40 -ЗО -20 -10 _ О

Г*1

1

у] - мобилизация ионов цин*а тетрациклин

□

- тетрациклин

2 ч.

24 ч. 48 ч. 72 ч.

Ерегая культивирования после окончания действия тетрациклина

»-3

о а. й

в

&

к»

■Ч>1

Число сстроеков с признаками повреждения Е-клетск < V. >

Влияние тетрациклина

на состояние В-клеток изолироганных

островков

ш

- тетрациклин

- контроль

зо 20 ю о

ЦЩ

Ш

I

Э ч. Э4 ч. 43 м. 7Е ч.

Воетя культивирования после окончания действия

да

о.

со

тетрациклина

Влияние 12-чаоового дьист°ня ииклсспорича А не содержание депонированного ннсугин« в В-к^леткьх

Содержание

депонированного инсулина Б В-клетках < о. е. )

100 -90 -80 -70 -БО -50 » 40 -30 20 -I Ю О

420 нг/мл

Ш

^ m

контроль шхлоспорин А

1500 нг/мл

JA

У/Л

ш

У/.'/

ш

¡Щ

ívA

гЪ

7750 нг/мл

Дозы циклоспорина А

>-3

и о.

со it*

■OJ

Число оотроекоз с признакагаи повреждения Е-клеток ( У. )

100 90 ВО 70 БО 50 40 ЗО 20 Ю О

Ii

420 иг/мл

Влияние 12-часоеого действия циклоспорина А на состояние панкреатических остроаков

ш

KOHTDOflb

□

ЦИКЛОСПОРИН

J—L

i

1500 иг/мл 7750 нг/ил

Дозы циклоспорина А

иисло островков с признаками повреждения В-клетэк

100 зо во

70 БО 50 40 30 20 Ю О

1

гм

4

Злияиие 24-иасоеого действия циклсспсэииа А па состояние панкреатических островкоб

г1///.

///А - контроль

цмкяосповин А

г/.-.'

420 мп/мл

1500 нг/мл 7750 нг/мл

Дезы циклсспорима А

>-3

и

СИ

а

(.о дер*г пне делошиссеаннсго иигу.чщ-э £ В-кгатках < о. е. )

1 1

юо

зс ао

70 БО -] 50 ЗО ЗО

I;

" 1 ■о Л X ^

50 нг/мл

йличнче -ексахлорциклогексана на. содержани делоииосвэнного инсулина в В-клетках изолированных островков

'//>'<1 ■/'•'•'И "

гексахлооциклогексан

- контооль

Г///А Г//У.Я

Г///' Т? л

ЮО нг-/мл

500 нг/мл

Концентрация гексзхясрциктегексана в питательной среде

Влияние гексахлорциклогексана на состояние островков

Число островков с признаками повреждения В-клеток ( V. )

ЮО -

эо _

ВО -70 -ВО -50 _ 40 _ 30 -

ао -ю _

о

- гексахлсрциклогексан

П-

контроль

гЬ

50 нг/мл ЮО нг/мл 500 нг/мл

Концентрация гексахлорциклогехеана в питательной среде

>-3

ю о.

сз

Содержание депонированного инсулина и ионов цинка е В-кяетках < о. е. );

Число островков с признакати повреждения В-клеток < У. >

п-

Окончание вретени действия дитизона

Влияние дитизона на содержание депонированного инсулина, ионов цинка и на состояние В-клаток

ионы цинка г>т_"т - инсулин

.»111 " поврежденные остроеки

7а ч.

Время культигмрования после окончания действия дитизон*