Автореферат и диссертация по медицине (14.00.23) на тему:Морфофункциональная характеристика панкреатических бета-клеток при воздействии на них повреждающих и корригирующих факторов (в условиях in vivo и in vitro)

ОРДЕНА ДРУЖБЫ НАРОДОВ

РОССИЙСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ДРУЖБЫ НАРОДОВ рТГ=Ш!-—-

2 3 199*1 На правах рукописи

КОРЧИН Владимир Иванович

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПАНКРЕАТИЧЕСКИХ БЕТА-КЛЕТОК ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ НА НИХ ПОВРЕЖДАЮЩИХ И КОРРИГИРУЮЩИХ ФАКТОРОВ

(В УСЛОВИЯХ IM VIVO И IN Vitro )

14.00.23 - гистология, цитология, эмбриология 14.00.03 - эндокринология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинах наук

/Л i * >

>-7 -.с'

МОСКВА - 1994

J

■/ /

Работа выполнена в Карагандинском государственном медицинском институте Министерства здравоохранения Республики Казахстан

Научные консультанты:

академик РАМН, доктор биологических наук,'

профессор И. Г. Акмаев доктор биологических наук, профессор В. 3. Ланкин

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор В.В. Яглов доктор медицинских наук, профессор А.В.Древаль доктор медицинских наук, профессор А. С. Аметов

Ведущая организация - Российский государственный медицинский университет

Защита состоится " 03 " ин>н$^ 1994 г. в 14. 00 час на заседании специализированного совета Д 053.22.02 при Российском университете друдбы народов по адресу:

117198 г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8, медицинский факультет, комната 224.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке: 117198 г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6

Автореферат разослан " 2 1994 г

Ученый секретарь специализированного совета доктор медицинских наук,

профессор В. Э. Т0РБЕК

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

Сахарный диабет - одна из ведущих проблем клинической медицины. Значительная распространенность, хронический характер течения и разнообразие органных поражений определяют медико-социальное значение данной патологии. По современным представлениям, основным условием развития сахарного диабета I типа является абсолютная инсулиновая недостаточность, ведущая к характерным нарушениям обмена веществ (В. Г. Баранов и соавт. , 1983; М. И. Балаболкин, Л.И. Гаврилюк, 1983; A.C. Ефимов, 1989; Н. Keen, 1989).

Для всестороннего изучения патогенеза и патоморфологии данного заболевания эндокринной системы, а также для выяснения механизма антидиабетического действия различных препаратов, наиболее удобной и доступной для многих исследователей является экспериментальная модель аллоксанового диабета. Большинство авторов связьшают цитотоксический эффект аллоксана с генерацией высокоактивных свободных радикалов (М. Я. Николаева, Р. М. Пархимо-вич, А. Б. Зарайский, 1986; К. О. Блох, В. Е Полторак, А. Ii Поверенный, 1987; Д. М. Геворкян, 1989; В. Н Бобырев и соавг. , 1992; R. Е. Heikkila, В. Winston, G.Cohen, 1976; К. Asayama et al. , 1984; M. Nukatsuka, H.Sakurai, J. Kawada, 1989; L. V. Oberley, 1988), которые инициируют процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) в . клетке. Установлено, что при экспериментальном и клиническом диабете в крови и тканях существенно повышено содержание токсичных продуктов ПОЛ CILН, Боднар, А. М. Приступи«, 1984; ЕВ. Иванов, И. В. Васенева, Е А. Удинцев, 1984; К. Г. Карагезян, Л.М.Овсепян, К. Г. Адонц, 1985, 1990; Л. К. Старосельцева и соавг.., 1386; И. Г. Шумейко, 1986; А. С. Ефимов, 1990; JL К Корязова, А. К Гулевский, 1990; И. И. Дедов и соавт., 1992; Т.С.Балашова и соавт., 1993; I.Nishi-gaki et al. , 1981; R. Selva^, С. V. Anuradha, 1988; R. Yabe et al. , 1988; I. H. Nomikas, Y. Vans, К. J. Lafferty, 1989; V. Prccaccl et al. , 1991), особенно при тяжелом его течении.

Однако в большинстве своем эти авторы лишь констатировали Факт усиления липидной пероксидации, не уделяя достаточного внимания состоянию активности антиокскдантных ферментов и не сопоставляли в эксперименте это явление с морфофункциональными тамэненияш островкового аппарата поджелудочной железы. Извест-

но, что общий уровень свободнорадикальных процессов и скорость накопления лишпероксидов в клетке зависят от соотношения процессов образования и обезвреживания свободных радикалов. Исходя из этой предпосылки, мы сочли целесообразным использовать комплекс современных методов исследования для получения более целостного представления о патогенетической роли процессов ПОЛ в повреждении бета-клеток при сахарном диабете и выяснения эффективности влияния антиоксидагных препаратов (никотинамид, пробукол) на упорядочение процессов тканевого метаболизма, функциональной активности ферментов антиоксидантюй системы защиты, а также на усиление пролиферативной способности клеточных элементов поджелудочной железы у крыс до и после введения диабетогенного фактора. Углубленное исследование в этом направлении важно не только для понимания молекулярно-цитологических основ диабетогенеза, оно позволит расЕиригь представление о механизме действия нико-гинамида и пробукола и увеличить диапазон их клинического применения.

Цель ' исследования. Настоящая работа была предпринята с целью изучения морфофункциональной характеристики панкреатических бета-клеток при воздействии на них повреждающих и корригирующих факторов в услоьиях in vitro и in vivo.

Задачи исследования. Конкретными задачами нашей работы, которые обусловили выделение ее основных разделов, явились следующие:

1. Выяснить влияние однократного и продолжительного введения йикотинамида и пробукола на динамику изменений углеводного и липидного обмена, уровня продуктов ПОЛ и активность антиокси-дантных ферментов в плазме крови и в органах (печень, поджелудочная железа), а также на показатели морфофункционального состояния -панкреатических остроЕков у здоровых крыс.

2. Исследовать возможность превентивного действия никотин-амида и пробукола в отношении развития аллоксановой и других химических моделей диабета.

_ 3. Изучить на культуре изолированных панкреатических островков (in vitro) прямое воздействие никотинамида и пробукола на устойчивость бета-клеток к цитотоксическому действию аллок-сана при различных условиях эксперимента.

4. Оценить состояние углеводного и липидного обмена, процессов ПОЛ и антиоксидантной системы защиты, а также гистострук-туры поджелудочной ,телезы у крыс с хроническим аллоксановым диабетом на фоне введения никотинамида или пробукола. .

5. Выяснить возможность влияния яикогинамида и пробукола на процесс регенерации островковой ткани подтелудочной железы у крыс, больных диабетом в зависимости от продолжительности курса их лечения.

6. Изучить механизм избирательной уязвимости панкреатических бета-клеток к действию диабетогенного фактора у разных млекопитающих.

7. Экспериментально обосновать целесообразность использования антиоксидантных препаратов с лечебно-профилактической целью при сахарном диабете.

Научная новизна. Впервые проведено углубленное исследование влияния никотинамида и пробукола на динамику изменений показателей углеводного и липидного обмена, процессов ПОЛ и системы антиоксидантной защиты, а также на морфофункцио-чальное состояние панкреатических островков в целом организме и in vitro. Доказано, что предварительное введение этих антиоксидантных препаратов предупреждает появление биохимических сдвигов и структурно-функциональных изменений в островковом аппарате поджелудочной железы после инъекции аллоксана и препятствует развитию клинических признаков диабета. Впервые обнаружено, что проявление превентивного эффекта никотинамида и пробукола зависит от выбора химического агента для воспроизведения экспериментальной модели диабета. Установлено, что предварительное введение антиоксидантных средств не предотвращает возникновение диабетического статуса у кроликов после инъекции дитизона В случае использования другого диабетогенного соединения - стреп-тозотоцина было отмечено отчетливое протективнсе действие лишь у никотинамида.

Впервые на модели изолированных островков методом сканирующей электронной микроскопии выявлены особенности цитотопогра-фии и микрорельефа поверхности инсулоцитов при воздействии никотинамида, пробукола и аллоксана. Получены прямые доказательства, ' что никотинамид и пробукол обеспечивают надежную запиту

панкреатических бета-клеток от токсического действия аллоксана в условиях in vitro. Разработан высокочувствительный цитофлуо-риметркческий способ определения функциональной (инсулинобразу-ющей) активности островковых бета-клеток позволяющий оценить степень воздействия на них как повре.эдающих, так и корригирующих факторов.

Впервые показана взаимозависимость и взаимообусловленность мевду процессами липидной пероксидации и деятельностью ферментативного звена антиоксидантной системы в поджелудочной железе -"органе-мишени" при. ■ воздействии на нее диабетогенных агентов. Обнаружено, что введение аллоксана сопровождается нарушением углеводного и связанного с ним лилидного обмена, избыточным накоплением продуктов БОЛ и резким снижением в исследуемых тканях активности энзимов, утилизирующих свободные радикалы кислорода и липопероксиды,•что способствовало появлению дисбаланса между ними и развитию деструктивных изменений в панкреатических бета-клетках.

Впервые продемонстрирована эффективность применения нико-тинамида и пробукола в упорядочении процессов тканевого метаболизма, функциональной активности ферментов антиоксидантного действия, а также в' стимуляции пролифератавной активности клеточных элементов поджелудочной железы и образовании островков de novo у крыс с хроническим аллоксановым диабетом. Отмечено, что корригирующее влияние испытуемых антиоксидантных препаратов однотипно по направленности, но отличается по своей выраженности. В отличие от никотинамида, многократное введение пробукола способствовало значительному увеличению активности антиоксидантних ферментов, лимитирующих интенсивность течения процессов переокисления липидов.

Впервые представлено сравнительное исследование содержания продуктов ЮЛ и активности ферментов антирадикальной защиты в ткани поджелудочной железы у различных млекопитающих (крысы, морские свинки, кролики) до и после инъекции аллоксана. Показано, что в механизме избирательной уязвимости панкреатических Оета-клегок к повреждающему действию аллоксана важное значение имеет исходный уровень активности основных антиоксидантных энзимов, который значимо отличался у разных еидоб тавотных.

Ноеиэна работы состоит б комплексном подходе к раскрытию

патогенетической роли липндной пероксидации и ферментативного звена антиоксидантной системы защиты в механизме развития метаболических нарушений при сахарной диабете. Полученные данные убедительно свидетельствуют об эффективности влияния никотин-амида и пробукола на показатели углеводного и липидного обмена, интенсивность течення процессов ПОЛ и активность антиоксидант-ных ферментов, а также морфофункциональное состояние панкреатических островков при различных условиях эксперимента и открывают преспективу для более широкого использования этих препаратов в профилактике и лечении диабета.

Теоретическая и практическая

значимость. Результаты экспериментальных исследований, проведенных на молекулярном, клеточном и ультраструктурном уровнях, позволили сформулировать целостное представление о роли липидной пероксидации в генезе повреждений бета-клеток при аллоксановом диабете и рекомендовать использовать антиоксидатные препараты (никотинамид, пробукол) для коррекции нарушений тканевого метаболизма и деструктивных изменений в панкреатических островках. Полученные данные позволили установить особенности структурно-функциональных изменений в тканях печени и поджелудочной железы при интенсификации ПОЛ, а также выявить роль ферментативного звена антиоксидантной системы защиты в утилизации, свободных радикалов, что обусловливает различную степень чувствительности бета-клеток к псвреждающему воздействию диабето-генных агентов.

Получены прямые доказательства того, что никотинамид и пробукол обеспечивают надежную защиту бета-инсулоцитов от цитоток-сического действия аллоксана в условиях in vitro.

Предложенный в работе цитофлуориметрический способ выявления инсулинобразующей активности панкреатических бета-клеток является высокочувствительным'и может быть рекомендован для использования в научных исследованиях, проводимых с культурой островков поджелудочной железы с целью сценки степени воздействия на них как повреждающих, так и корригирующих факторов.

Результаты работы открывают перспективы для более широкого использования антисксидантных препаратов в комплексной терапии сахарного диабета

Реализация результатов исследования. Полученные экспериментальные данные опубликованы в различных изданиях стран СНГ, доложены на съездах, симпозиумах и конференциях. Результаты и выводи диссертационной работы внедрены в учебный процесс на кафедрах гистологии, патологической физиологии, патологической анатомии, биохимии и физиологии, а таете при чтении лекционного курса по эндокринологии в ряде медицинских институтов и факультетов усовершенствования врачей в Республике Казахстан и России.

По материалам исследования получено 1 авторское свидетельство на изобретение и 8 удостоверений на рационализаторские предложения.

Основные положения, в и и о с и и и о

н а з а ц и т у.

1. Однократное и продолжительное введение никотинамида и пробукола влияет на динамику изменений показателей углеводного и липидного обмена, уровня пиридиновых нуклеотидов, процессов ЮЛ и активности антиоксидантных ферментов, а также на морфо-функциональную характеристику панкреатических островков у здоровых крыс.

2. Предварительное введение крысам исследуемых препаратов с антиоксидантным спектром действия предупреждает появление биохимических сдвигов и структурно-функциональных изменений в ост-ровковом аппарате поджелудочной железы после инъекции аллоксана и препятствует развитию у них клинических признаков диабета. Превентивный эффект никотинамида и пробукола зависит от выбора химического агента для воспроизведения экспериментальной модели диабета

3. Внесение никотинамида или пробукола в питательную среду обеспечивает надежную защиту панкреатических бета-клеток от прямого цитотокслческого действия аллоксана в условиях in vitro.

4. Аллоксановый диабет у крыс сопровождается нарушением углеводного и связанного с ним липидного обмена, избирательным накоплег м продуктов ПОЛ и резким снижением активности антиоксидантных ферментов в тканях печени и поджелудочной железы, а также- деструктивными изменениями в островковых бета-клетках.

5. Продолжительный курс лечения никотинамидом или пробуко-лом крыс с хроническим аллексановым диабетом приводит к эффективному упорядочению процессов тканевого метаболизма, функциональной активности энзимов антисчсидантного действия, а также способствует стимуляции новообразования и митотического деления панкреатических бета-клеток.

6. Избирательная уязвимость бета-клеток к повреждающему действию аллоксана у разных млекопитающих обусловлена исходным уровнем активности антиоксидантных ферментов в их поджелудочной железе.

7. Использование никотинамида и пробукола при различных условиях эксперимента (in vivo и ia vit.ro) свидетельствует об их эффективности в коррекции метаболических расстройств и морфо-функциональных изменений в инкреторном аппарате поджелудочной железы и служит теоретическим основанием для более широкого применения этих препаратов в комплексной терапии сахарного диабета.

Апробация работы. Основные положения работы доложены на Ш Всесоюзной съезде патофизиологов (Тбилиси, 1982), межвузовской конференции "Вопросы физиологии эндокринной системы" (Кар ганда, 1985), П Всесоюзном совещании по хемилюминес-ценции (Уфе, 1835), IY съезде эндокринологов УССР (Львов, 1937), IY Всесоюзной конференции по патологии клетки (Москва, 198?), Y Всесоюзном съезде геронтологов и гериатров (Тбилиси, 1988), симпозиуме "Траксплантологические методы лечения сахарного диабета" (Юрмала, 1988), IY конференции морфологов республик Средней Азии и Казахстана (Караганда, 1988), Республиканской научно* практической конференции эндокринологов Таджикской ССР (Душанбе, 1989), Всесоюзном симпозиуме "Ыикрозлементозы человека" .Москва, 1989), IY Всесоюзном съезде патофизиологов (Кишинев, 1989), Ш Всесоюзном съезде эндокринологов (Ташкент, 1989), Ш Всесоюзной конференции "Еиоангиоксзданг" (Москва, 1989), Республиканской научной конференции патофизиологов (Алма-Ата, 1990), Всесоюзной школе-семинаре "Шо-термо-хемил.шикесценций" (Суздаль, 1990), IX Всесоюзном семинаре "Кислородные радикалы в химии, биологии и медицине" (Минск, 1990), X Всесоюзном совещании по эволюционной физиологии (Ленинград, 1900), Y конференции республик Средней Азии и Казахстана (Чолпон-Ата, 1991), Всесо-

ксной конференции "Клиническая витаминология" (Москва, i99i), 111 международной конференции "Экологическая патология и ее фар-макокоррекция" (Чита, 1991), Y конференции биохимиков республик Средней Азии и Казахстана (Ташкент, 1991), IY Всесоюзном совещании "Люминесцентный анализ в медицине и биологии и его аппаратурное обеспечение" (Москва, 1992/, IY конференции "Биоантиок-сидант" (Москва, 1992), конференции "Проблемы экологической медицины" ( Алма-Ата, 1993)

Диссертационная работа апробирована на обтединенном заседании Научно-исследовательского центра ( НИЦ), кафедр патологической физиологии, биохимии, патологической анатомии, гистологии и проблемной комиссии "Медико-биологические проблемы в медицине" Карагандинского государственого медицинского института.

П у б л м к а ц к л По теме диссертации опубликовано 44 работы в журналах, сборниках научных трудов, материалах съездов, конференций. На основании результатов исследования изданы методические рекомендации, утвержденные ИЗ Республики Казахстан.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 322 страницах машинописи, из которых собственно текст занимает 2S5 страниц. Работа состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследования, восьми глав собственных наблюдений, заключения и выводов. Список литературы содержит 500 наименований, из которых 312 зарубежных источников. Работа иллюстрирована 49 таблицами и 73 рисунками, среди которых 43 микрофотографий и 28 элелтронограмм.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и метода исследования. В острых и хронических опытах было использовано 378 крыс линии Август и породы Еиегар (ш = 160-200,0 г), 88 кроликов породы шиншилла (m = 2560-3640,0 г) и 25 морских свинск (ш = 280- 390,0 г) обоего пола, которых содержали в виварии на обычном рационе питания.

За 24 ч до эксперимента животных лишал;! пиши, но не ограничили воду. Было проведено 8 серж основных опытов, перечень которых представлен в таблице 1.

Серии опытов

Таблица 1.

: число

Условия эксперимента :животных

И,

Влияние однократного и продолжительного взеденпя никотинамида на показатели, характеризующие угле-водно-липидний обмен и морфофункциональное состояние островкового аппарата поджелудочной лелезц крыс Введение никотинамида: -однократное

3-дневное

- 10-дневное

- 20-дневное

- 30-дневное

- 60-дневное Контроль (введение физраствора»соответственно

к каждой группе

Влияние предварительного (превентивного) введения никотинамида (500 кг/кг) на развитие аллоксанового диабета у крыс

Никотинамид, через 5 кин аллоксан Никотинамид, через 10 мин аллоксан Никотинамид, через 30 мин аллоксан Никотинамид, через 45 мин аллоксан Никотинамид, через 60. мин аллоксан Контроль (физраствор + аллоксан; соответственно

к какдой группе Интактные крысы

Влияние продолжительного введения никотинамида 500 мг/кг) на течение хронического аллоксанового диабета у крыс

Введение никотинамида:

10-дневное 20-дневное

- 30-дневное

- 80-дневное Контроль (введение инсулина) соответственно

к каждой группе

Г/ Влияние однократного и продолжительного введения

пробукола (50 мг/кг> на показатели, характеризующие углеводно-лилидный обмен и морфофункциональное состояние островкового аппарата поджелудочной железы крыс Введение пробукола: - однократное

3-дневное 7-дневное

- 14-дневное

- 20-дневкое

- 30-дневное

Контроль (введение 2У. раствора крахмала) соответственно к каждой группе

У. Влияние предварительного (превентивного ) введения

пробукола '50 мг'кг) па развитие аллоксанового диабета у к рис

Пробукол, через 6 ч аллоксан

1

П

Таблица 1 (продолжение)

. Пробукол. через 12 ч аллоксан : 14

Пробукол, через 24 ч аллоксаи : 14

Пробукол в течение 3 сут + аллоксан : 14

Пробукол в течение 7 сут + аллоксан : 14

Контроль (крахмальный раствор +• аллоксан) соответс- :

твеино к. каждой группе : MJ

YI. Влияние продолжительного введений пробукола

(50 мг/кг) на течение хронического аллоксанового :

диабета у крыс :

Введение пробукола: - 7-дневное : 14

- 14-дневное : 14

- 20-дневное : 14

- 30-дмевное : 14 Контроль (введение инсулина) соответственно к :

каждой группе : 40

YII. Влияние предварительного (превентивного) введения : никотинамида и пробукола на развитие стрептоэотоци-

нового диабета у крыс и дитизонового - у кроликов :

Крысы :

Никотинамид, через Ь мин стрептозотоцин : 14

Никотинамид, через 30 мин стрептозотоцин : i 4

Никотинамид, через 60 мин стрептозотоцин : 14

Никотинамид, через 120 мин стрептозотоцин ; 14

Пробукол, через 24 ч стрептозотоцин :. 14

Пробукол в течение '-i сут + стрептозотоцин : 14

Пробукол в течение. 7 сут ■+ стрептозотоцин : 14 Контроль (физиологический иль крахмальный растворы + :

стрептозотоцин) соответственно к каждой :

группе : 60

,

Кролики :

Никотинамид, через Ь мин дитизон : 7

Никотинамид, через 16 мин дитизон : 7

Никотинамид, через 30 мин дитизон : 7

Пробукол, через 24 ч дитизон : 7

Пробукол в течение 3 сут + дитизон : 7

Пробукол в течение 7 сут + дитизон : 7

Контроль (физиологический или крахмальный растворы :

+ дитизон) соответственно к каждой группе : 30

Интактные животные ' : 6

Ylü. Избирательная уязвимость панкреатических бета-клеток г к токсическому действию аллоксана у -различных млекопитающих Крысы:

введение аллоксана 40 мг/кг : 12

интактные животные : в

Кролики: :

введение аллоксана 120 мг/кг : 10

интактные животные : 8

Морские свинки: :

введение аллоксана 100 мг/кг : 8

введение аллоксана 200 мг/кг : 8

иытактнь'е жмвогние : 10

- и -

На протяжении всего периода наблюдений у животных определяли содержание глюкозы в крови, унифицированным ортотолуидиновым или глккооксидазным методами, используя стандартные наборы - Еио-тест фирмы "Lac'nema" (Чехо-Словакия) или "Реагент" (г. Рига, Латвия). Уровень иммунореактивного инсулина t ПРИ) в сыворотке крови выявляли с помощью коммерческих

наборов фирмы "Cea- Ire-Sorin" (Италия) и РИА-ЙНС-ПГ 125I ИБОХ АН Беларуси.

Исходя из цули и задач настоящего исследования мы сочли необходимым проследить за влиянием изучаемых препаратов (никотии-змид, пробукол) на ряд показателей лшшдного обмена у интоктных и больных диабетом животных.

Количество общих липидсв и триглицеридор выявляли в плазме крови с помощью наборов "Био-тест" Фирмы "Lachem" (Чехо-Слова-ккя).

Общий холестерин извлекали из плазмы крови изопропило-вым спиртом и его содержание определяли в экстракте по методу, предложенному Б. А. Сентебовой (1977).

Наряду с общепринятыми методами исследования, свидетельствующими о состоянии углеводно-липидного обмена, мы использовали так же комплекс биохимических тестов, которые позволили изучить различные метаболические нарушения при экспериментальном диабете л адекватно оценить эффективность влияния никотинамида и пробу-кола на его развитие и течение.

После окончания опыта эвтаназию всех исследуемых животных осуществляли в одно и гол© время (10-11 часов утра) для предотвращения суточных колебаний биохимических и морфофункциональ-ных показателей. Испытуемых крыс и морских свинок умерщвляли путем декапитации под легким эфирным наркозом, а кроликов - методом быстро вызванной массивной воздушной эмболии.' Печень и под-/йлудочную железу немедленно извлекали и кусочки тканей этих органов быстро замораживали в жидком азоте и помещали в камеру глубокого охлаждения.

Для оценки состояния ПОЛ в плазме крови и тканях (печень, поджелудочная железа) животных определяли содержание диеновых конъюгатов по методу ¡Í. Д. Стальной (1977) и ТБК-активных продуктов по методу В, Б. Гаври.гова, А. Р. ГазрилоЕой, Л.Ы.Малуль (1967) в

• 12 -

модификации Э. Е Норобейникоюй (1989).

Для исследования активности ферментов аятиоксидантной системы защиты клеток организма образцы тканей, хранившихся при низкотемпературном режиме, быстро размораживали, гомогенизировали с помощью измельчителя тканей Ultra Turrax (СЕА; в 0,05 М K-Na фосфатном буфере (pH 7,4), центрифугировали при 8 ООО g в течение 15 мин и в полученном сулернатанте определяли активность антиоксидантных ферментов.

Активность супероксиддисмутазы (СОД) выявляли, используя систему кеантин-ксантиноксидаза для генерирования супероксидного анион-радикала (С. Beauchamp, I.Frldovich, 1971). Измерения проводили на спектрофотометре "Hitachi 220 А" (Япония) при температуре 25°С. За единицу активности принимали количество фермента, необходимое для 50% ингибирования реакции восстановления нитротетразолия синего в условиях определения.

Активность глутагионпероксидазы (ГП) определяли по методу D. EPaglia, W.N.Valentine (1967) в модификации В. 3. Ланкина и С. М. Гуревича (1976) в сопряженной глутатион-глутатионредуктаз-ной системе по окислению НАЛ®, используя гидроперекись третичного бутила в качестве субстрата. За единицу активности принимали количество фермента, необходимое для окисления 1 мкмоля восстановленного глутатиона в условиях определения (соответствует окислению 0,5 мкмоль НАДФН в 1 мин).

Глутатион-Б-грансферазную активность (ГТ) цитозоля печени и поджелудочной железы жиеотных определяли по образованию конъ-вгагов глутатиона с 1-хлор-2,4-динитробензолом (J.H. Keen, W. В. Yakoby, 1978). За единицу активности ГГ принимали количество энзима, необходимое для конъюгирования 1 мкмоля восстановленного глутатиона в 1 мин.

Активность глутатионредуктазы (ГР) выявляли по скорости убыли -НАД® в следствие восстановления окисленного глутатиона. в процессе инкубации при 3CÖC (Е. R Pinto, V. Bart ley, 1959). За единицу активнссти ГР принимали количество ферькнта необходимое для восстановления 1 мкмоля окисленного глутатиона в 1 мин.

Исследование всех глутатионзависимых ферментов выполняли в термостатируемой 9-канальной кювете при длине волны 340 им на химическом анализаторе FP-üOt "Labsystems Oy" iФинляндия). Активность изучаемых аитиоксид&нтных ферм«мтоб здражали е- ь'дшгл-

- 13 -

цах активности на 1 мг белка.

Определение белка производили микробадретовым методом.

Для выяснения морфофункциональкой характеристики панкреатических островков, часть поджелудочной железы всех животных Фиксировали в жидкости Буэна и проводили в спиртах возрастающей крепости. Депарафинированные срезы толщиной 4-5 мкм окрашивали гематоксилином и эозином для исследования общеморфологической картины цитоархитектоники поджелудочной железы. Другую часть срезов окрашивали альдегидфуксином по 6. Оотоп (1950) в модификации ЛИ. Фалина (1964) и я с е в д о и э о ц и-а и и н о м по методу Н. Е. СоаХзоп (1966) для дифференциации ост-ровковых клеток и выявления в бета-клетках депонированной формы инсулина.

Для ориентировочного определения процентного содержания эндокринной ткани готовили серийные срезы толщиной 4 мкм из хвостовой части поджелудочной железы с интервалом 200 мкм. Из общей серии выбирали каждый десятый срез и подсчитывали в нем число островков и их площадь. Кроме того, нами определялось количество бета- и альфа-клеток в островках и их соотношение как в контрольных, так и в опытных группах животных.

Исследование проведено с помощью компьютерного морфометри-ческого комплекса (КМК) "Телеметрик", разработанного в научно-техническом и учебном центре "Макроэлектроника" (г. Санкт-Петербург) и представляющего собой специализированную систему анализа изображения. КМК "Телеметрик" построен на базе персонального компьютера 1ВМ РС/АТ.

При изучении противодиабетогенного эффекта никотинамида и пробукола мы попытались также выявить в различных условиях эксперимента соответствующие структурные изменения в островковом аппарате поджелудочной железы на субклеточном уровне. Это послу-кило предпосылкой для применения методики электронно-микроскопического исследования.

Маленькие кусочки ткани (около 1 мм ) хвостовой части поджелудочной железы крыс помещали в 2,5% раствор глютэрового альдегида на фосфатном буфере Миллонига при рН 7,2 - 7,4. Затем дополнительно фиксировали материал в течение 2 ч в забуференном 1% растворе четырехокиоя осмия, обезвоживали в спиртах возрастающей крепости и заливали в смесь зпона и аралдита. Полимеризацию бло-,

ков производили в термостате при температуре +60 С.

Ультратонкие срезы толщиной 40-60 нм получали на ультрамикротомах LFß-Ш (Швеция), Richter (Австрия) и УШЧ1-5 отечественного производства, контрастировали 2,5Х раствором уранил ацетата и уксуснокислого свинца и исследовали их в электронных микроскопах JEMA ino В, JEMA 100 СХ (Япония) и УЭЫВ 100 АК при ускоряющем напряжении 75-80 кв.

С целью исследования ДНК-синтетической функции панкреатических бета-клеток использовали метод радиоавтографии (ЛЕНян-кин, 1959; Л Д. Крымский, К. Е Боцманов, 1971; Е. Rod j с га, 1972).

В качестве индикатора синтеза ДНК использовали 3Н -тими-дин (В/О "Изотоп"), разведенный средой 199 до концентрации 1CJ мк Ku/мл. Препарат вводили внутрибршлнно в дозе 2 ж Ku/г. 2Ш-вотных забивали через 1 ч после введения препарата декапитацией под легким эфирным наркозом. Поджелудочную железу извлекали, фиксировали в жидкости Карнуа и заливали в парафин. Депарафинк-рованные срезы толщиной 5-6 мкм покрывали гель-эмульсией типа М (НИКФИ, г. Москва) чувствительностью 0,2 единицы методом погружения. Экспонировали при +4° С в течение 20 дней. Полученные гистоавтографы докрашивали гематоксилином и эозином. На препаратах определяли индекс меченых ядер в эпителии концевых отделов, протоков и панкреатических островков (в расчете на 3000 -4000 клеток) и выражали его в промиллях (%„).

Для изучения прямого, непосредственного воздействия лекарственных препаратов (никотинамид, пробукол) и диабетогекного агента - ашюксана на ыорфофушщиональное состояние панкреатических оета-клеток нам представлялось весьма необходимым использовать в качестве модели (in vitro) изолированные островки поджелудочной железы. С этой целью была использована ткань поджелудочной «елезы 420 крысят линии Август и породы Вистар в возрасте 1-2 недели. Поджелудочные железы извлекали в стерильных условиях, несколько раз отмывали в холодном растворе Хенкса с антибиотиками и подвергали ферментативной обработке, с использованием коммерческой кол-лагеназы фирмы "SIGMA"- (США) и "Boehririger Mannheim Gtrb Н" (Австрия) по классической методике S.Kfoskalewski (1954) в модификации P.E.Lacy и М.Kostianovsky (1967). Выделенные .панкреатические островки, их фрагменты и отдельные клетки собирали в

колбу и неоднократно промывали их в 4-6 сменных порциях питательной среды 199 фирмы "SERVA" (Германия). Заключительным этапом дезагрегации являлась избирательная очистка островков поджелудочной железы (ОПЖ) от незначительных остатков ее зкзокрин-ной ткани. Эта манипуляция выполнялась с помощью стереомлкрос-копа МБС-2, под контролем которого пастеровской пипеткой поштучно извлекались из суспензии ОПЖ и переносились в чашечку с вышеуказанной средой, где они и накапливались в процессе работы. В зависимости от условий эксперимента в питательную среду, содержавшую жизнеспособные ОШ, поочередно вносили препараты ни-котинамид (0,75 мг/мл) или пробукол (0,1 мг/мл) и диабетогенное соединение - аллоксан (0,25 мг/мл) с интервалом времени 5-180 мин. По завершению соответствующего срока воздействия испытуемых Ееществ,культуру ОПЖ тщательно отмывали от инкубационной среды физиологическим раствором, центрифугировав 10 мин при 800-1000 об/мин и помещали ее либо в фиксирующую жидкость Вуэ-на, либо в забуференный 2,5% раствор глютарового альдегида. В первом случае использовали материал для проведения цитологических исследований на светооптическом уровне. Для достижения этой цели срезы ОПЖ окрашивали альдегидфуксином и псевдоизоцианином. Функциональную (инсулинобразуюиую) активность островковых бета-клеток оценивали цитофлуориметрическмм методом, который был разработан нами ранее (КИКорчин, Г. И. Злькин, Е II .Медведев, 1939) и внедрен в ряде лабораторий стран СНГ. Его отличает высокая чувствительность, надежность и информативность. С помощью фотометрической насадки ФМЭЛ-1 А на базе отечественного люминесцентного микроскопа МЛ-2 А и регистрирующего устройства (цифровой милливольтметр В 7-35) измеряли интенсивность свечения культуры ОПЖ, окрашенных псевдоизоцианином, при длине возбуждающего света 380-420 нм. Показатели содержания инсулина, выявляемого' в УФ лучах благодаря образованию метахроматической реакции с этим красителем, выражали в условных единицах (у.е.).

В другом случае, изолированные ОПЖ исследовали "етодом сканирующей электронной микроскопии. Для этого культуру ОПЖ, после общепринятой предварительной обработки, высушивали методом перехода критической точки жидкого СО^в приборе НСР-2 фирмы "HITACHI" (Япония), наклеивали электропроводным клеем на объектные столики, напыляли золотом в

аппарате EICO IB-3 фирмы "Engeniring" (Япония) и рассматривали в сканирующем электронном микроскопе S-570 фирмы "HITACHI" (Япония) при ускоряющем напряжении 15 кв .

Полученный цифровой материал был подвергнут статистической обработке методом вариационной статистики (Б.С. Бессмертный, 1967; R В. Александров,Е 3. Шнейдеров, 1984) по готовым программам для ВЗМВ "Электроника ВЗ-34" (Ю. И. Иванов, 0. Е Погорелик, 1990). На основании величин и числа наблюдений по таблице Стъюдента определяли вероятность различий (р). Различия расценивались как достоверные, начиная со значений р<0,05, то есть когда вероятность различия была равна или превышала 95%. Значения р для сравниваемых величин б таблицах будут приведены только в случаях достоверности их различия.

Результаты исследования. В первой части исследования изучено влияние шкотинамида и пробукола на показатели углеводно-ли-пидного обмена, интенсивность процессов ПОЛ и активность ферментативного звена антирадикальной защиты, а так зке на морфо-функциональное состояние осгровкового аппарата поджелудочной железы у здоровых животных. В опытах на крысах было показано, что длительное введение нккотинамида (особенно в первые две недели) способствовало более выраженному подъему уровня ИРИ и снижению концентрации глюкозы в крови по сравнению с таковыми значениями в контроле. В отличие от этого, ежедневная нагрузка пробуколом (7 и 14 сут) приводила лишь к недостоверному снижению уровня гликемии и умеренному возрастанию содержания ИРИ в сыворотке крови, что свидетельствовало о незначительном влиянии препарата на углеводный обмен у интактных животных.

Более выраженное действие пробукола мы наблюдали при изучении динамики показателей, характеризующих состояние липидного обмена. Так, при продолжительном введении опытным крысам испытуемого препарата отмечалось снижение уровня общего холестерина и общих липидов, которое неуклонно прогрессировало и достигало к 30 сут своего максимального значения. В то же время содержание триглицеридов изменялось в меньшей степени и практически не зависело от длительности приема лекарственного средства.

При изучении различных свойств вышеуказанных препаратов, мы сочли целесообразный также изучить их антноксидантный спектр действия. В ходе исследования было обкару.тено, что никотинамид

оказывает ингибирующее влияние на скорость накопления продуктов липидной пероксвдации (диеновые конъюгаты и ТЕК-активные продукты) как в плазме крови, так и в тканях (особенно в поджелудочной железе) у ингактных живот :ых.

Одновременно с изучением показателей уровня ПОЛ нами также была прослежена и динамика сдвигов активности основных ферментов антирадикальной защиты в печени и поджелудочной железе у здоровых крыс, подвергнутых воздействию никотинамида. Полученные нами впервые данные позволяют утверждать, что никотинамид обладает способностью стимулировать активность энзимов ДОС, лимитируя тем самым накопление продуктов ПОЛ в тканях.

Особого внимания заслуживают сведения, свидетельствующие о состоянии процессов ПОЛ и активности ферментов АОС у интактных жиеотных на фоне введения лробукола, Ежедневное введение препарата способствовало Существенному снижению продуктов липидной пероксидации как в плазме крови, гак и в органах. Примечательным является то, что ангиокислительное действие препарата было более заметным в ткани поджелудочной железы, нежели в печени, особенно при введении его в первые две недели.

Наряду с уменьшением концентрации диеновых конъюгатов и ТБК-активиых продуктов происходило индуцирование активности ая-тиоксидантных ферментов в организме здоровых крыс, получавших ежедневно пробукол. Гак, продолжительное введение препарата (7 сут) обусловливало в исследуемых тканях разную степень увеличения активности таких энзимов как СОД и глутагионпероксидаза, играющих важную роль в утилизации активных форм кислорода и липо-пероксидов. Этот эффект пробукола более отчетливо наблюдался в поджелудочной железе, где исходный уровень всех ферментов АОС был почти в 10 раз ниже, чем в печени.

Чрезвычайно важным с нашей точки зрения, является обнаруженное нами стимулирование ншотинамидом и особенно пробуколом активности энзимов антирадикальной защиты, которые и обеспечивают поддержание неспецифической резистентности организма г. действию неблагоприятных факторов окружающей среды.

Для получения более целостного и углубленного представления о механизме действия никотинамида и пробукола, а также принимая во внимание вышеприведенны* данные об изменениях показателей ПОЛ и активности ферментативного звена АОС в ткани поджз-

лудочной железы интагегных животных на фоне введения этих препаратов, мы сочли необходимым изучить и морфофункциональное сое- • тояние ее островкового аппарата на клеточном и ультраструктурном уровнях. В ходе эксперимента было установлено, что степень выраженности влияния исследуемых лекарственных средств на панкреатические остров"и была не одинаковой во все сроки наблюдения. Так, однократное и непродолжительное (3 и 7 сут) введение никотинамида и пробукола не приводило к каким-либо существенным изменениям в основных морфометрических показателях, характеризующих состояние инкреторного аппарата поджелудочной железы, и ультрасгрукгуре бета-инсулоцитов. При более длительном (10-20 сут) поступлении в организм здоровых крыс этих препаратов отмечали появление морфологических признаков, свидетельствующих о структурно-функциональных сдвигах в изучаемом объекте, а именно: возрастание объемной доли островковой ткани и количества панкреатических островков, преимущественно за счет мелких и средних; увеличение содержания бета-клеток в островках и показателя их ми-тотической активности. 11нгенсивность флуоресценции бета-клеток после окраски их специфическим реагентом на депонированный инсулин - псевдоизоцианином не претерпевала значимых изменений и находилась в пределах обычного уровня. Электронномикроскопическое исследование ткани поджелудочной железы этих животных позволило выявить в цитоплазме бета-инсулоцитов хорошо развитые структуры мембранных органоидов, умеренное содержание свободных рибосом, митохондрий и значительное количество секреторных гранул повышенной электронной плотности.

Введение никотинамида и пробукола в течение одного и двух месяцев способствовало тому, что многие морфометрические показатели еще оставались увеличенными по сравнению с контролем, но уже наметилась тенденция к их снижению (особенно на 60 сут) до исходного состояния. При ультраструктурном анализе бета-инсулоцитов отмечалось некоторое усиление их функциональной активности. В цитоплазме бета-клеток выявляли обилие секреторных гранул, отличающихся своей гетерогенностью, незначительное увеличение числа митохондрий, а также умеренную гипертрофию и гиперплазию гранулярной зндоплазмагической сети и пластинчатого комплекса Гольджи.

Итак, полученные нами данные дают основание утверждать,

что продолжительное введение никотинамида и пробукола оказывает стимулирующее действие на панкреатические бета-клетки, обусловленное усилением функции органелл, ответственных за биосинтез инсулина и повышением пролиферативной активности клеточных элементов железы.

Исходя из вышеуказанных фактов, можно было предположить, что изученные нами препараты, по-видимому, могут быт" использованы в качестве средстза для повышения устойчивости бета-клеток к действию токсических веществ, способных инициировать в них избыточное образование активных форм кислорода и липопероксидов. С этой целью в следующей серил опытов мы изучили влияние предварительного введения никотинамида и пробукола на развитие аллокса-нового диабета.

Гзедение опытным животным аллоксана спустя 5-30 мин лосле инъекции никотинамида не вызывало каких-либо изменений показателей состояния углеводного и липидного обмена, которые на протяжении всего срока'эксперимента оставались в пределах обычных колебаний. Предварительное введение никотинамида предотвращало' чрезмерное накопление диеновых конъюгатов и ТБК-активных продуктов как в тканях, так и в плазме крови и соответствующее снижение активности • основных антиоксидантных ферментов после инъекции аллоксана. Все исследуемые показатели ПОЛ и уровень активности энзимо" ACO находились в пределах стационарного ур ¡вня. Увеличение интервала времени (45-60 мин) между введе :и-ями никотинамида и аллоксана сопровождалось заметным возрастанием концентрации продуктов липидной пероксидации в печени, поджелудочной железе и плазме крови, а также резким снижением активности ферментативного звена антирадикальной зищиты;

В случае использования пробукола, который вводили по соответствующей схеме (в течение 1, 3 и 7 сут) ДО инъекции аллоксана нами было- впервые выявлено., что этот антиоксидаитный препарат обладает отчетливым протективным действием и препятствует развитию диабетического статуса у опытных крыс. Исходя та предпосылки, что пробукол является гиполипидемическим средством, нас также интересовали и возможные изменения в липидном обмене у этих животных. Предварительное введение пробукола также.предотвращало нарушений метаболгзма липидов, возникающих после инъекции аллоксана.

Заслуживают внимания и сведения, полученные нами при изучении процессов окислительного метаболизма в тканях опытных крыс. Введение пробукола в течение 3 и 7 сут эффективно препятствовало накоплению продуктов липидной пероксидации в изучаемых органах и плазме крови. Полеченные нами впервые, результаты исследования свидетельствуют о том, что антиоксидаыный препарат про-букол способен упорядочить скорость течения процессов ПОЛ как в крови, так и в тканях, предотвращая тем самым развитие свобод-норадикальной патологии.

Анализ полученных данных позволяет придти к заключению, что предварительное введение пробукола не только препятствует угнетению, но и значительно стимулирует активность основных ан-тиокйслительных ферментов, несмотря на прооксидантное действие аллоксана. Это, возможно, способствует обеспечению устойчивости панкреатических бета-клеток к цитогоксическому влиянию аллоксана.

Гистологическое исследование поджелудочной железы крыс, которым инъецировали только аллоксан (контроль) позволило выявить значительные структурно-функциональные изменения в ее инкреторном аппарате. Повреждения островковой ткани сводились к значительному уменьшению числа панкреатических островков, их деформации, появлению в них зон некроза, заметному снижению числа бета-клеток. Метахроматическая реакция на инсулин с псевдоизоци-анином в бета-клетках отсутствовала, что указывало на угнетение диабетогенным агентом биосинтеза гормона.

На злектронномикроскопическом уровне в большей части бета-инсулоцитов обнаруживали тотальное разрушение внутриклеточных органелл и вакуолизацию цитоплазмы.

Предварительное введение опытным животным никотинамида предупреждало развита структурных изменений в островковом аппарате подлоэлудочной железы после инъекции аллоксана. Содержание депонированного в бета-клетках инсулина не изменялось, что подтверждалось уровнем интенсивности их флуоресценции. Субмикроскопическое исследование панкреатических островков показало, что основные структуры клеток, в которых происходит синтез и накопление гормонов практически не пострадали. Это превентивное действие препарата сохранялось в течение 30 мин после его отмены. Вне этого интервала времени протективный эффект его отсутствовал.

В случае использования пробукола, наш было отмечено, что данный антиоксидантннй препарат препятствует проявлению цито-токсического действия аллоксана на клеточном и ультраструтаур-ном уровнях только при предварительном введении его в течение 1, 3 и 7 сут. Эта отличительная особенность в действии пробукола, вероятно, связана с его выраженной липофильностью, а потому требуется не менее 24 ч для накопления препарата в липидном слое клеточных мембран в достаточном для их стабилизации количестве.

Особого внимания заслуживают наши дальнейшие исследования, выполненные на культуре изолированных панкреатических островков. Представляло интерес выяснить, как будет изменяться функциональная активность бета-клеток, их цитотопография и микрорельеф при действии на них как диабетогенного агента - аллоксана, так и корригирующих (никотинамид, пробукол) факторов.

В ходе исследования на светооптичёском уровне было установлено, что присутствие в культуральной среде никотинамида или пробукола не оказывало заметного влияния на морфофункциональное состояние панкреатических островков. Их бега-клетки содержали в' цитоплазме обильную адьдегидфуксиновую зернистость и сохраняли обычный высокий уровень флуоресценции в реакции на инсулин с псевдоизоцианином (табл. 2). Изучение особенностей цитотопотрафии и микрорельефа поверхности данных островков методом сканирующей электронной микроскопии показало, что их бета-клетки не пр.терпевали существенных изменений. Последние располагались компактно, на их сферической поверхности встречались шаровидные гранулы, являющиеся, по-видимому, депо-формой инсулина.

Введение аллоксана в питательную среду после предварительной инкубации островков с никотинамидом (через 5 и 15 мин), а также пробуколом (через 60 и 180 мин) не приводило г. проявлению его цитотоксического действия (табл. 2). Структура бета-клеток,. их функциональная активность и цитотопография оставались без видимых изменений. Спустя 30 мин после введения никотинамида аллоксан вызьшал деструктивные изменения в бета-клетках которые неуклонно прогрессировали с удлинением интервала времени после предшествующей обработки изолированных о^троиков лекарство/шим препаратом. Содержание инсулина в бета-клетках убывало, вплоть до полного исчезновения. Сканирующая электронная микроскопия позволила наглядно продемонстрировать, что при этих сроках иаб-

Таблица 2.

Влияние никотина!,шда (0,75 мг/мл) и пробукола (0,1 мг/мл) на содерл^нме инсулина (у. е.) в культуре изолированных островков поджелудо шой железы крыс до .и после внесения в инкубационную среду аллоксана (0,25 мг/м-0

NN: : Величина ¡штенсив-

п/п: Условия эксперимента : ности флуоресценции

: : бета-клеток, у. е. .

1 Интактные островки 75,34 + 3,12

2 Никотинамид 78,10 + 5,08**

о Никотинамид, через 5 минут аллоксан 72,12 + 4,26**

4 Никотинамид, через 15 минут аллоксан 66,38 + 3,82**

5 Никотинамид, через 30 минут аллоксан 21,06 + 0,9С**

6 Никотинамид, через 45 минут аллоксан 6,12 + 0,78

7 Аллоксан, через 5 мин никотинамид S, 25 + 0,84

8 : Пробукол 74,80 + 5,25**

9 : Пробукол, через 15 мин аллоксан 17,35 + 1,14**

■10 7!робукол, через 60 мин аллоксан 56,27 + 3,08**

11 Пробукол, через 180 мин аллоксан . 68,96 + 4,20**

12 : Аллоксан (контроль соответственно к

; каждой группе) 4,62 + 0,36

людения бета-клеткь располагались обособленно, теряли свою сферическую форму, их поверхность приобретала складчатость. •

В контрольных исследованиях было обнаружено, что внесение одного аллоксана в питательную среду с изолированными островка-. ми неминуемо приЕ дило к полному разрушению большей части их бета-клеток.

В основе механизма такого цитотоксического действия аллоксана, по-видимому, основная роль принадлежит образованию в бета-клетках избытка интермедиатов свободнорадикального окисления, которые способствуют инициации ПОЛ. повреждению молекул ДНК и подавлению биосинтеза инсулина (T. Nobuyki et al. , 1991; N. She-hadeh, F. Calcinar, К. J. Lafferty. 1992).

Таким образом, результаты наша' исследований убедительно

свидетельствуют о том, что предварительное введение никотинами-да или пробукода обеспечивает эффективную защиту панкреатических бета-клеток от повреждающего воздействия аллоксана в условиях как целостного организма, ' так и in vitro. Полученные данные подтверждают справедливость нашей рабочей гипотезы о роли липидной пероксидации в диабетогенезе и дают основание считать, что никотинамид и пробукол займут достойное место в арсенале лекарственных средств, используемых для профилактики и лечения сахарного диабета.

Логическим продолжением исследования механизма антидиабетического эффзкта данных препаратов явились эксперименты, проведенные на других химических моделях диабета.

Предварительное однократное введение никотинамида за 5-120 мин до и 5 мин после инъекции сгрептозотоцина препятствовало развитию экспериментального диабета и появлению характерных метаболических сдвигов в углеводном и липидном обмене. Кроме того нами были получены доказательства, подтверждающие нашу гипотезу об ингибирующем влиянии степгозотоцина на каталитическую редокс-систему глутатиона.

Заслуживает особого внимания тот факт, что из всех компонентов этой ферментативной системы наиболее уязвимой к действию данного диабетогенного фактора оказалось глутатионредуктаза В связи с этим, в дальнейшем происходило угнетение процесса биорегенерации глутатиона, что приводило к наруизнию регуляции обмена глюкоза в пентозофосфатном цикле, избыточному накоплению продуктов ПОЛ и повреждению клеточных мембран. Отсюда понятно, почему предварительное введение такого мощного антиоксиданта как пробуютл не обеспечивало надежную защиту панкреатических бета-клеток от цитотоксического действия стрептозотоцина.

Итак, анализ полученного фактического материала позволил доказать, что только лишь предварительное введение никотинамида могло создать оптимальные условия для повышения устойчивости' бета-инсулоцитоь к повреждающему действию стрептозотоцина, благодаря выраженной способности препарата влиять на внутреклеточ-ный уровень НАД, препятствовать злкилированию ДНК и. соответственно активированию ядерной поли-АДО-рибозы.

В следующем варианте опытов мы попытались выяснить смогут ли никотинамид и пробукол препятствовать избирательному токси-

чзскому действию дитизона на инсулинпродуциру/шдае клетки поджелудочной железы кроликов и предупреждать тем самым развитие у них данной экспериментальной модели диабета.

Существенный интерес представляет тот факт, что предварительное введение исследуемых препаратов практически не предотвращало повреждающего действия дитизона на панкреатические бета-1шзтки. В ходе этих исследований нами было впервые установленно, что дитигон в значительной степени блокирует активность СОД, которая принимает участие в утилизации активных форм кислорода уже на стадии инициации свободнорадикального процесса.

Одной из актуальных задач современной диабетологии является поиск лекарственных препаратов,- способствующих регуляции метаболических расстройств и улучшающих субъективный и объективный статус больных.

У животных с хроническим аллоксановым диабетом, получавших на протяжении всего срока исследования только инсулин (контроль) наряду с выраженным нарушением состояния .углеводного и ли-лидного обмена наблюдали значительную активацию процессов ПОЛ в плазме крови и тканях которая была сопряжена с падением уровня активности антиоксидантных ферментов в печени и особенно в поджелудочной железе.

Продолжительное введение животным с хроническим аллоксановым диабетом никотинамида или пробукола способствовало значительной нормализации метаболизма углеводов и липидов, существенному уменьшению продуктов ПОЛ в тканях и плазме крови, а также возрастанию аютивности основных антиоксидантных ферментов. Вместе с тем следует отметить, что хотя и наблюдалось определенное повышение активности СОД л ГП под влиянием никотинамида, тем не менее она оставалась ниже величины соответствующих показателей' у интактных животных. Этот факт мы склонны объяснить глубокими расстройствами компенсаторно-приспособительных• механизмов при диабете. Применение антиокоидантов на этом фоне сказывается весьма эффективным, но не настолько, чтобы восстановить первоначальный уровень активности СОД и ГП, обеспечивавших утилизацию активных форм кислорода и ляпопероксидов.

Таким образом, на основании полученного нами фактического материала можно предположить о стимулировании синтеза ключевых энзимов ДОС ткани печени и поджелудочной железы у аллоксандиа-

бетмческих крыс на фоне продолжительного введения никотннашда и, особенно, пробукола.

Большого внимания заслуживают вопросы развития компенсаторных и регенеративных процессов в островковом аппарате поджелудочной железы при диабете, а также влияние на них лекарственных препаратов.

3 ходе исследования нами были впервые получены сведения о тем, что длительное введение (30-60 сут) никотинамида и пробукола способствовало перестройке эндокринного аппарата поджелудочной железы у аллокеандиабетических крыс.

При анализе морфофункционаяьного состояния инкреторного аппарата поджелудочной железы этих животных, леченных никотина-мидом или пробуколом, наблюдалось постепенное, хотя и неполное', восстановление объемной доли островковой ткани, увеличение содержания бета-клеток в сохранявшихся островках, рост числа новообразованных островков, активизация пролиферативной способности бетя-инсулоцитов V возрастание величины интенсивности их флуоресценции (табл. *3).

Таким образом, полученные нами данные на светооптическои и' ультраструктурном уровнях указывает на то, что продолжительное введение никотинамида или пробукола существенно влияют на структурно-функциональное характеристику инкреторного аппарата поджелудочной железы у крыс с аллоксановым диабетом, стимулирует гиперплазию, новообразование и митотическое деление бета-клеток, увеличивает содержание в них депонированного инсулина.

У животных с экспериментальным диабетом, которые не подвергались лечебному вогдействию исследуемых нами препаратов, отмечалось лишь частичное восстановление функциональной активности пораженных аллоксаном бета-клеток в основном за счет внутриклеточных регенераторных процессов. Установленный нами факт может быть объяснен гак своеобразное проявление компенсаторной реакции в ответ на сложившиеся новые условия функционирования клетки (а Г. Бараков и соавт. , 1983).

В последние годы было установлено, что в островкопых бета-клетках в отличие от других (гепатоциты, эритроциты) происходит более быстрое накопление интермедиатов свободнорадикагь-кого окисления (К. Лзауата ег а1. , 1984; V Ника^.ика, Н. ¡¿аЬига».

Таблица 1.

Влияние продолжительного введения никвтинамида и пробучола на показатели морФоФуккциональяого состояния панкреатических островков у- крнс с аллоксаиоЕЫм .диабетбм (М ± ш)

Сроки наблюдений, д ни

Объемней доля островков, • X

■ Количество -.Количество /?-кле-новообразованных: ток в сохракиЕшкх-оетрс-вкоЕ : ся островках

Интенсивность флуоресценции /й-клеток, у. *э

Индекс меченых ■ ядер,

Аллоксаксвий диабет + инсулин (контроль)

10 0, 16 + 0 0006 : 0,85 + 0,06 1,07 0,12 1 65 + 0 24 : 0,13 0 003

20 0, 17 А 0 00! 3 : 1.08 + 0,15 1.91 л. 0,25 07 0 12 0,31 + 0, 045

30 0, 19 + 0 0009 2,50 Ъ 0,52 2, €4 + 0,37 11 05 + 0 84 : 0.34 0, 034

№ 0 23 + 0 ООСб : 3,64 X 0,75 3,71 + 0,27 17 '61 + 0 54 : 0,19 + 0, 017

ДллоксаноЕЫй диабет + инсулин + никотинамид

ю ■ 0 17 + 0 0003* : 7,34 + 1,50** 6,6? + 0,41** 15 52 1 91** ; 2,37 + 0, 210**

20 0 СИ + 0 0033* : 17,32 + 2,25** 13.83 4- 2,84** 22 50 ■г 1 20** : 3,41 0, 334**

30' 0 46 + 0 ООО?'**: <9, ЯО + 1, у | л 27.78 -г 3,61** от 01 + 1 *. 2,94 ± 0, 321**

^0 0 43 + 0 С04Ь**: 20.62 + 3,50** 31, £3 + 3,87** 36 И + 2 72** : 1 ) С1 4. о, 143**

I

от I

Лллокс^новмй диабет + йнсу.иш + итобукол

7 0.18 0.0005** 4,15 +

) Д О .24 + 0,0014** 10.56 +

20 0,29 + 0,0007** 14 54 +

30 0,38 + 0,0015** 19,78 -<

0,76** 3,44 + 0.65**

¡,£4** 7,-36 + 0,56*«

2,1 Я** 12,75 + 2,34**

1,7 4** 20.30 + 2,80м

7,66 + 0,65**

14,52 + 1,30*«

[8,28 + 2.24**

50.15 + 3 16**

1,14 + 0,126**

1,90 + О,189**

2,26 ^ 0,324**

2,34 0,236**

Несмотря на достаточно большое количество доказательств избирательного поражения аллоксаном бета-клеток, сущность его цито-токс-ического эффекта до конца не Еыясьзна.

В эксперименте на различных видах млекопитающих (морские свинки, кролики, крысы) нами было изучено в сравнительном аспекте влияние аллоксана на состояние углеводного обмена, интенсивность течения процессов ПОЛ и активность антиоксидантных ферментов в тканях печени и подглелудочной железы. Одновременно исследовали с помощью световой и электронной микроскопии структурно-функциональные изменения, развивающиеся в панкреатических бета-клетках в ответ на действие аллоксана.

В ходе исследования нами были получены убедительные доказательства того, что у морских свинок в отличие от других уивотных чувствительность тканей к липопероксидам была менее выражена благодаря наличию высокого уровня глутатионзависимых ферментов, обу-словливаю!цих их своевременную утилизацию. Введение аллоксана морским свинкам не сопровождалось также появлением морфологических признаков, характерных для экспериментального диабета. Одна!ю' следует отметить, что в части бета-клеток выявлялись незначительные реактивные изменения,-затрагивающие некоторые ультраструктурные компоненты (митохондрии, секреторные гранулы). В то же время у опытных кроликов и крыс наблюдались выраженные деструктивные' изменения в большей части панкреатических бета-клеток, что свидетельствовало о высокой степени их чувствительности к .действию аллоксана

Приведённые данные' заслуживают серьезного внимания, так как могут приблизить к пониманию механизма избирательной чувствительности бета-клеток к повреждающему действию диабетогенних факторов.

Итак, используя комплекс современых биохимических и морфологических методов исследования, мы попытались сформировать целостное представление о патогенетической роли липидной перокси-дации в повреждении бета-клеток при сахарном диабете и. выяснить влияние лекарственных препаратов с антиоксидантным спектром действия на их морфофункциональное состояние в организме и in vitro.

Углубленное исследование в этом направлении важно не только для понимания молекулярных и клеточных основ нарушения.инсу-линогенеза, оно позволит расширить представления о механизме действия никотинамида и пробукола и увеличить диапазон их кли-

нического применения.

ВЫВОДЫ

1. Предварительное введение никотинамида и пробукола до инъекции аллоксана предупреждает появление биохимических сдвигов и структурно-функциональных изменений в островковом аппарате поджелудочной железы и препятствует развитию клинических признаков диабета. Впервые обнаружено, что превентивный эф-фек?г никотинамида и пробукола зависит от выбора химического агента для воспроизведения экспериментальной модели диабета. Установлено, что предварительное введение препаратов с анти-оксидангным спектром действия не предотвращает возникновение диабетического статуса у кроликов после инъекции дитизока. В случае использования стрептозотоцина отчетливое протектявное действие было характерно лиаъ для никотинамида.

2. Впервые на модели изолированных островков методом сканирующей электронной микроскопии выявлены особенности цитотопо-графии и микрорельефа поверхности инсулоцитов при воздействии никотинамида, пробукола. Эти лекарственные препараты обеспе-41. ;ают надежную защиту панкреатических бета-клеток от токсического действия аллоксана в условиях in vitro.

3. Впервые показана взаимозависимость и взаимообусловленность между процессами липидной перокоидации и функционированием энзимного звена антиокеидантной системы в поджелудочной железе - "органе-мишени" при воздействии на нее диабетоген-ных агентов. Доказано, что введение аллоксана сопровождается нарушением углеводного и связанного с ним липидного обмена, избыточным накоплением продуктов ЮЛ и резким снижением ак- . тивности энзимов, утилизирующих свободные радикалы кислорода и проявляется развитием дистрофических, некробиотических и некротических изменений в панкреатических бега-клетках.

4. У крыс с хроническим аллоксановым диабетом установлена эффективность применения никотинамида и пробукола в нормализации процессов TicaneEoro метаболизма, характеризующаяся гипертрофией и гиперплазией внутриклеточных органелл (увеличение количества митохондрий, свободтя рибосом, расширение цистерн гранулярной эндоплазматшеской сети к пластинчатого

комплекса Гольджи) бета-инсулоцитов, а также стимуляцией их пролиферации и образованием островков tí© novo.

5. Корригирующее влияние исследованных лекарственных средств однотипно по направленности, но отличается по степени своей выраженности. 3 отличие от никотинамида, продолжительное введение прсбукола способствовало значительному увеличению активности ключевых антиоксидантных ферментов (суперокеиддисму-тазы в 1,7, а глутатионпероксидазы - 4,5 раза в ткани подай-лудочной лелезы), лимитирующих интенсивность течения процессов переокисления липидов.

6. Впервые представлено сравнительное исследование содержания продуктов ПОЛ и активности ферментов аятирадикальцой защиты в ткани поджелудочной железы различных млекопитающих до и после инъекции аллоксана. В механизме избирательной уязвимости панкреатических бета-клеток к повреждающему действию аллоксана важное значение имеет исходный уровень активности основных антиоксидантннх энзимов, который значимо отличался у морских свинок, кроликов и крыс.

7. Разработан высокочувствительный цитофлуориметрический способ определения функциональной (инсулинобразущей) активности островковых бета-клеток, позволяющий оценить степень воздействия на них как повреждающих, так и корригирующих факторов.

8. Экспериментально обоснованная целесообразность применения никотинамида и пробукола для нормализации показателей углеводного и липидного обмена, интенсивности течения • процессов ПОЛ и активности антиоксиданчных ферментов, а также морфо-функционального состояния панкреатических островков, открывает перспективу для более широкого использования этих препаратов в профилактике и лечении диабета.

Список работ, опубликованных по теми диссертации

1. Гистохимическая пс<эвдоизоцианьновая реакция на инсулин и островка/. Лангерганса поджелудочной железы у дорових животных и при диабете // Всесоюзная научная конференция студчнтон медицинских институтов с докладами на иностранных; языках : Тч:-1. докл.- Караганда, 1S68.- С. 129-13и.

2. Содержание циьха в эндокринной и экзокринкои тканях под -желудочной жиле-зы // Еюл. ьксперим. биологии и модпцини.~ 1970.-

М 2.- С. 52-55 . (Соавт. : Я.А.Лазарис, В.И.Лс.пнн, Т . В . Пальмппа >

- за -

О возможной роли биокировация цинка в рчзеитии дигизоново-го диабета // Бюл. эксперин. биологии :i медицины.- ;d?X.- tf 2.-С.30-33. /Соавт.: Я.А.Лазарис, 3.Е.Багельский)

4. Влияние аллоксана на содержание инсулина и цинка ь панкреатических островках у экспериментальных животных // Пагод. физи-ол. и экспорим. . терапия.- 1973.- N 4.- С. 33-44. (Соавт.: В.И.Лапин, Г.Г.Мейрамов, 'Г. В Пальмина и др.)

Ь. Экспериментальный аллокеановьш диабет у золотистых хомячков

1/ Патол. физиол. и эксперин. терапия.- 1373,- N 5,- С. 72-74. (Соавт.: Я.А.Лазарис)

Патогенез экспериментального диабета, вызываемого блокированием цинка в панкреатически островках // Механизмы повреждения. резистентности, адаптации и компенсации.- Ташкент, 1976.-С.322. (Соаит.: .ч. А .Лазарис, 3 .3. Еавельский, Г. Г. Мейрамов)

7. Роль бчокированиа цинка в развитии экспериментального диа-

бета //Биологическая роль микроэлементов и их применение в сельском хозяйстве и" медицине : Тез. докл. УШ Всесо.юз. конф,- Ивано-Франковск, 1Э78.- Т. 2.-С. 70. (Соавт.: Я.А.Лазарис, З.Е.Бавель-скии)

ci. К механизмам иисулиногенеза и к патогенезу диабета // По-

вреждение и регулягорные процессы организма : Тез. докл. Ш Всесоюз. съезда патофизиологоз, Тбилиси. 15-19 ноября 1982,- М., 1982.- С. 8'd--90 , (Соавт . : Я.А.Лазарис, Р.С.Гольдберг, З.Е.Ба-иельский и др.)

с<. Хемилюминесценция эритроцитов больных сахарным диабетом

как способ оценки степени тякести заболевания // Тез. докл. П Всесоюз. совет. по хемилюминзеценцииУфа, 1986.- С. 70. (Со-iiBT. : М.А.Беккер, Н.И.Аладьина)

J.U. О содержании цинка в культуре оотровковых еетл-клеток под-

желудочной железы при действии различных факторов // Тез. докл. iY Всесоюз. конф. по патологии клетки,- М., 1987.- С, 207. (Соавт.: r.r.MevipaMOB, В.И.Медведев, Т.Н.Жанибекова)

11. Гистохимическая псевдоизоцианиновая реакция на инсулин в культкгируемкх панкреатических бе га-клетках как метод оценки их Функционального состояния // Современные проблемы экспериментальной и клинической эндокринологии : Теэ. докл. 1Y с-ъезда эндокринологов УССР, 29 сентября - 1 октября 1987, Львов.- Киев, 1987.- С. ¿49 . (Соавт.: Г.Г.Мейрамов, Г.Т.Тусупбекова)

12. Влияние биологически активных веществ на структуру и функцию мембран клеток крови при нарушениях углеводного обмена // Тез. докл. 1Y Всесоиз. конф. по пат логин клетки,- М. , .1987.- С. 24,- (Соавт.: М.А.Беккер, Л . Е. Муравлеве, Г.И.'Элькин)

'3. Хемилюмпнесцекция плазмы и-клеток крови при сахарном диабете // Люминесценция и исследование параметров излучения.- Караганда, 1987,- С. 105-100. (Соавг.: М.А.Беккер, Г.И.Элькин)

14. Возрастные особенности состояния антиокислительной систе-

мы защиты в под»! лудочной железе у разного вида млекопитающих // Y Всесоиз^ съязд геронтологов и гериьтров, 22 - 25 ноября 1968, Тбилиси : Тез. и реф. докл.- Киев, 1988,- Ч. 1,- С. 338. <Соавт.: Т.Ф.Лбрамчук, Л.Г.Контарева)

1Ь. Инсулинобразующая активность острозкоеых клеток поджелу-

. дочной железы в процессе их культивирования // Траксплантологи-ческиз методы лечения сахарного диабета : Тез. счмпоз., 10-11 октября 1S88, Юрмала,- Рига, 1986,- С. 27-29. (Соавт.: Р.Д.Яр-кова, Л.fc.Муравлева, Л.М.Коваленко)

;0. Влияние никотинамкда на резистентность панкреатических

Свга-клеток к циготоксическому действию аллохсана // Проблемы

реактивности и адаптации клеток, тканей и органов : Тез. докл. 1У конф. морфологов республик Средней Азии и Казахстана, 14-1'6 сентября 1988.- Караганда, 1988.- С. 97-98. (Соавт.: В.И.Медведей)

17. Роль липидной пероксидации в патогенезе сахарного диабета и влияние биоантиоксиданг'ов на его компенсацию // Современные методы лечения и профилактики сахарного диабета и заболеваний щитовидной дгелезы : Тез. докл. Респ. науч.-прехт. конф. эндокринологов Таджикской ССР, 23-25 октября 1088.- Душанбе, 1989.-С.43-44.

18. Применение антиоксидантов в комплексном лечении диабетической гнойной остеоартропатии // Современные методы лечения и профилактики сахарного диабета и заболеваний щитовидной железы : Тез. докл. Респ. науч.-практ. конф. эндокринологов Таджикской ССР, 23 - 25 октября 1909.- Душанбе, 1989.- С.45-46. (Соавт.: С.В.Лохвидкий, М.Я.Маламуд, Л. Ё. Муравлева и др.)

19. Динамика изменений содержания цинка и инсулина в изолированных- панкреатических островках при повреждающих и корригирующих воздействиях на них // Микроэлементоэы человека : Материалы Всесоюз. симпоз., 15-17 ноября 1989.- М. , 1989,- С. 15..

20. Морфофункциональное состояние панкреатических островков в услииях повреждающих и корригирующих воздействий на них в организме и ин витро // Нарушение механизмов регуляции и их коррекция •• Тез. докл. 1У Всесоюз. съезда патофизиологов 3-6 октября 1988.- Кишинев, 1989,- Т. 1.- С. 224. (Соавт.: Г.И.Элькин, Г.Г.Мейрамов, В.И.Медведев и др.)

21. Влияние некоторых химических соединений и лекарственных препаратов на морфофункциональное состояние панкреатических островков в условиях ин виво и ин витро // Вопросы эндокринологии ..Алма-Ата, 1989.- С. 48-49. (Соавт.: В.И.Медведев, Г.Г!Мейрзмов, Т.И.Жанибекова)

22. Применение биоантиоксидантов при лечении больных с диабетической гнойной ос'теоартропатией // Вопроси эндокринологии. -Алма-Ата, 1989.- С. 44-45. (Соавт.: М.Я.Маламуд, Л.Е.Муравлева, Е.М.Сигал)

23. Способ определения инсулинпродуцирующей активности панкреатических клеток ,'/ А.с. 1493920 СССР, 5 01 N 1/23.- 1989,4 с. (Соавт.: Г.И.Элькин, В.И.Медведев)

24. Патогенетическое значение липидной пероксидации в повреждении мембран панкреатических бета-клеток при экспериментальном дичбете и влияние антиоксидантов на их морфофункциональное состояние // Тез. докл. Ш Всесоюз. съезда эндокринологов, 16-19 пая 1989.- Ташкент : Медицина, 1989.- С. 244-245.

25. Влияние никотинамида на развитие и течение экспериментального сахарного диабета // Тез. докл. И Всесоюэ. съезда эндокринологов, 16-19 мая 1989.- Ташкент: Медицина, 1989,- С. 269. (Соавт.: В.И.Медведев, Г.И.Элькин)

26. Диметилсульфоксид и его влияние на резистентность панкреатических бети-клеток к диабетогенному действию аллоксана //Сво-боднорадикальное окисление в эксперименте и диникв : Респ. сб. науч. тр.- Караганда, 1339.- С. 131-135. (Соавт.: Р.Д.Яркова, . Е.Л.Зуммеров;

27. Витамин Ё и его влияние на развитие аллоксаноього диабчта у крыс // Свободнорадикчльное окисление в эксперименте и клинике: Р«сп. со. науч. тр.- Караганда, 1909,- 0. 135-141. (Соавт.: Т . И . Жаниоекоьа . Т. Ф . Абрамчу к.)

28. Сравнительное изучение действия бииантиохендачтов'при са-

харном диабете в эксперименте и клинике // Бноактиоксидант: Тез. докл. Ш Всесоюэ. коиф., 27 - 29 июня 1989.- М., 1989.- Т. 2,- С. 65-66. (Соавт.: Л.Е.Муравлева, И.В.Щербакова, Л.Г.Контарева и ДР. )

29. Влияние антиоксидаитов на резистентность бета-клеток поджелудочной железы к повреядаюцему действию диабетогенных соединений в организме и и витро // Бпоантиоксидант : Тез. докл. Ш Всесоюэ. конф., 27 - 29 июня 1989,- М. , 1889,- Т. 2,- С. 97-98.

30. Динамика изменения показателей перекиекого окисления ли-пидов, антиоксидантной и иммунной систем у больных сахарным диабетом при лечении антиоксидантами (Экспериментально-клиническое исследование) // Актуальные вопросы патофизиологии в современной медицине : Материалы респ. науч. конф. патофизиологов, 27 - 28 сентября 1990.- Алма-Ата, 1990.- С. 65. (Соавт.: Л.Е.Муравлева, Г.И.Элькин, ¡11. А. Ерха.чова и др.)

31. Изучение морфофункционального состояния панкреатических островков при "действии на них повреждающих Факторов в условиях организма и вне его // Актуальные вопросы патофизиологии в современной медицине: Материалы респ. науч. конф. патофизиологов,

27-28 сентября 1990.- Алма-Ата, 2890.- С. 6С. (Соавт.: В.И.Медведев. Р.Д.Яркова, Т.Н.Ханибекова и др.)

32. Роль липндной пероксидации в механизме повреждения панкреатических бета-клеток и корригирующее влияние антиоксидантов на их морфофункцлональное состояние // Актуальные проблемы профилактической и клинической медицины : Тез. науч. конф.- Караганда,- 1990,- С. 160-161. (Соавт.: В.И.Медведев, Ш.А.Ержанова, Р.Д.Яркова и др.)

33. Сравнительное изучение окислительного метаболизма у белых крыс в онтогенезе // Тез. докл. X Всесоюэ. совещ. по эволюционной физиологии, лосвяценное памяти академика Л.А. Орбели,

28-30 ноября 1930.- Л.: Наука, 1930.- С. 347. (Соавт.: Л.Е.Муравлева)

34. Комплексное хирургическое лечение диабетических гнойных остеоартропатий // Метод, рекомендации / ИЗ Каз ССР; Разраб. Карагандинский гос. мед. ин-т.- Караганда, 1990,- С. 20 с. (Соавт.: С.В.Лохвицкий, А.Б.Баширов, Ю.А.Оамохин и др.)

35. Влияние различных антиоксидантов на повышение устойчивости панкреатических бета-клеток к повреждающему действию диабетогенных факторов // Проблемы морфологии: 5-я конф. респ. Средней Азии и Казахстана.- Чолпон-Ата, 1991.- Ч. 1.- С. П'-НЬ.

36. Корригирующее влияние витамина Е и иикотинзмида на течение сахарного диабета в эксперименте и клинике // Клиническая витаминология: Тез. докл. Всесою'з. конф.. 18-20 июня 1991.- М., 1991.- С. 309-310. (Соавт.: М.И.Балаболкин, В.И.Медведев. Ш.А. Ерданова и др.)

37. Эндогенное действие некоторых химических и физических факторов. Сравнительное влияние - гохо^ьрола и пробу кола // Экологическая патология и ее фармакокоррекция : Тез. докл. Ш Мехдунар. конф26-27 июня 1991.- Чита, 1991.- Ч. 1.- С. 78-79. (Соавт.: Т.З.Сейсембеков, Б.К.Айтпаев. Л.Е-Мур влева и др.)

38. Перекиское окисление лнпидов в генезе неспеиифических заболеваний легких и сахарного диабета и возможности его коррекции с помощью антиоксидаитов // Тез. докл. У конф. биохимиков респ. Средней Азии и Казахстана, 12-15 ноября 19Э1.-Ташкент : ФАН. 1991.- С. 302. (Соавт.: Л.Е.Муравлева. Т.З.Сейсембеков, А.В.Цой и др.)

39. Цитофлуориметрическии способ выявления инсуликобразующей

активности панкреатических бета-клеток в условиях ин витро // Флуоресцентнце методы исследования и клинической диагностики:' Тез. докл. IY Всесоюз. сов. "Люминесцентный анализ в медицине и биологии и его аппаратурное обеспечение", 17-23 февраля 1992.- М., 1992.- Ч. 2,- С. 8.

40 Изучение иммунного статуса и процессов перекисного окис-

ления липидов у больных сахарным диабетом в условиях комплексного лечения антиоксидантами // Тез. докл. Межд>лар. симп. по аллергологии и клинической иммунологии, 28 сент.- 1 окт. 1992.-Алма-А-'а, 1992.- Раздел П.- С. 168. (Соавт.: Ш.А.Еряанова, Н.Ш. Ахметова, И.К.Гальстер и др.)

41. Цитофлуориметрический способ выявления инсулинобразующей активности панкреатических бета-клеток в условиях in vitro // Изобретательство и рационализация в медицины: Респ. сб. науч. тр.- М., 1992,- С. 20-21.

42. Антиоксидант лробукод предотвращает развитие аллоисаново-го диабета и снижение активности антиоксидантных ферментов в тканях'крыс //Бюл. эксперим. биологии и медицины,- 1992,- N 9.-С. 279-282. (Соавт.: В.З.Ланкин, Р.Д.Ярхова, Г.Г.Коновалова и ДР. )

43. Влияние пробукола на морфофункциопальное состояние панкреатических островков и уровень активности антиоксидантных Ферментов при различных условиях эксперимента //Тез. докл. IY конф. "Биоантиоксидант", 2-4 июня 1S92.- М., 1993,- С. 77. (Соавт. : Р.Д.Яркова)

44. A1loxan-Induced Diabetes as a Model of F.ee Raidoal Pathology // Free Radio. Biol. Med.- 1994'.- V. 16, N 1,- P. 15. (Соавт.: V.Z.Lankin, G.G.Konovalova, R.D.Yarkova)

Morphofunctienal characteristic of pancreatic -cells affected by daaage and correction factors (in vivo and in vitro).

Korchin V. I.

Preliminary administration of nicotinamide and probucol in rats prevents the appearance of biochemical shifts as well as structure- and functional changes in pancreatic islets after alloxan injection arid inhibits development of any clinical signs of diabetes.

The preventive effect of these drugs depends upon the choice of chemical agent for the reproduction of experimental diabetes' pattern. The addition of nicotinamide or probucol into the medium provides reliable protection of pancreatic /-cells from direct cytotoxic effect of alloxan in vitro conditions.

A long-term treatment with nicotinamide or probucol in rats with chronic alloxan diabetes results in effective recrulatiiK o! tissue metabolism, functional activity of' antioxidant enzymes and also stipulates pancreatic islet neopenesis and mitotic division

of & -cells.

Selective sensitivity of/¡-cells to alloxan damage effect in various mammals is caused by the initial activity level of antioxidant enzymes in their pancreas.