Автореферат и диссертация по медицине (14.00.03) на тему:Хелатирование цинка панкреатических бета-клеток как один из механизмов нарушения продукции инсулина

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УССР Киевский научно-исследовательский институт эндокринологии и обмена веществ

На правах рукописи

БАВЕЛЬСКИЙ Залман Евгеньевич

УДК 617.379.-008.64.-084:546.47

ХЕЛАТИРОВАНИЕ ЦИНКА ПАНКРЕАТИЧЕСКИХ БЕТА-КЛЕТОК КАК ОДИН ИЗ МЕХАНИЗМОВ НАРУШЕНИЯ ПРОДУКЦИИ ИНСУЛИНА

14.00.03 — эндокринология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Киев —1989

Работа выполнена в Карагандинском государственном медицинском институте.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, академик АМН СССР, профессор А. С. Ефимов;

доктор биологических наук, профессор Л. Н. Богацкая;

доктор медицинских наук В. В. Полторак.

Ведущее учреждение—Институт экспериментальной эндокринологии ц химии гормонов АМН СССР.

Защита состоится « _»_^ 19 г. в ча-

сов на заседании специализированного совета Д 088.14.01 при Киевском научно-исследовательском институте эндокринологии и обмена веществ МЗ УССР (252114, Киев-114, ул. Вышгородская, 69).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке института.

Автореферат разослан «_» _19 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат медицинских наук

И. Н. ШОСТАК-ПАСЕЧНИК

ОБ Ш ХАРАКТЕРИСТИКА

: к i j а л ь н а о ; ь проблемы. Сахарный диабет продолжа-:т оставаться самым широко распространенным эндокринным заболеванием. :есмотря на. явный прогресс в лечении» астота его не умен-лается,, а юуклоннс растет. По данным ВОЗ, сахарный, диабет и, его с с суди стае 'слокнения будут и дальше, оставаться вез возрастающим бременем, ярак-•яческого здрав о о хранения.

Открытке э 1943 г. Duna аллоксановпго диабета чрезвычайно рас-: ирияо методические возможности для воспроизведения. сахарной болезни.; амечатэлышй, почти уникальный факт специфического действия химичео-ого соединения на васокодифференцкрованнуп клеточнуа систему панкреас ических островков привлек внимание исследователей во многих странах, тало очезидным, что выяснение разных сторон патогенеза диабет на оде лях, зазываемых некоторыми химическими соединениями, могаг* принизить исследователя к выяснений механизма сахарной болезни у чело-ек.а. поиски ученых не остановились на аялохсаловой модели этого заболевания. За относительно короткий ерпк оыл создан ряд других химических" моделей сахарного диабета. Выяснилось, что цитстзкси-зским действием на бета-клетки панкреатических островков, помимо ллокеана, обладают дегидроаскорбиновая кислота, дитизон, производив хинолина, стрептозотоцин и другие соединения самой разной струк-урн ( С&апоСо, 1^149,1250; Fcítersen, 1Э49,1350; Kaácta,1950;. Jíafroda, Э57; Hacad»!V35S; Kuousaki, 1975; Fence, Меняв«1,1379).

Известно, что поджелудочная железа обладает уникальной способ-зстьв накапливать большиз количества цинка.( Deaicl^r. alvo,1977: ano, Budinger,1977; ¡JiXlei- «t al., 1978).

В Х9ч9 г. okanoto » сообщив о диабетогвкном действии дитизоиа, »•сказал предпложзние о том, что он способен реагирозагь о цинком 1нкреатических бета-клеток с последующих их разрушэг эм. Нами первые было обращено внимание на то, что ряд диабетогеиных веществ-литкэок, производные б-оксихиноляна, 8-оксихинальдииа, ккразеаопа,

тропслсн) обладают свойствами хелатообразозателей, т.е. являвтся лиганде.ми, спос ибнь'ми соединяться с исками металла через два и более глектронно-донорнах атома с образованием хглатного кольца. Отсюда была выдвинута рабочая гипотеза ( Я.А.Лазарис,1959), по которой способностью к диабетогенезу обладают не лвбые ьешестэа, способные реагировать с ципкок, а лишь ограниченное чис~о соединений, образуе-щи>. с цинком бета-клеток панкреатинесхих островков хелатнкй комплекс, Собранные камк из большого объема литератора и обобщенные разрозненные факты свидетельствуют о том? что хелатообразогатеди могут поступать в органкзк с пидей, е виде декарств, а также способна образовываться з условиях нарушенного обмена веществ. Отсюда родилось предположение о том, что хелатсобразсван..е некоторых веществ с цинком в бета-клетках панкреатических островков может быть одним из мехаккзиод возникновения диабета у человека.

Цель исследования заключалась в доказательстве явления цитотоксичного хелатообразоваяия веществ определенной химической структуры с цинком панкреатических бетз-клеток, как одного из молекулярных механизмов нарушения продукции инсулина.

Для реализации этой цели были выдвинуты следующие задачи исследования: <.

1. Получить новае модели сахарного диабета с помощью соединений, обладающих хелатообразувщими свойствами и доказать зависимое'.«-." меед'у диабетогеннсй способностью и особенностями химической структуры этих и ряда целенаправленно синтезированных близких по структуре .производных хинодина, диыекных способности к хедатообразоваюш.

2. Разработай, качественные и количественные методы, позволяющие .специфично и с вксокой степенью точности определять цинк в панкреатических островках. Выяснить зависимость кехзу возможностью развития диабета после введения хелатообразумцих даабетогеиных сое-Д1«ненлй животкыи разных зидсз и содержанием раакционноспособного,

гкстсхиж^ески выявляемого цинке в лх яаихреотическдх Сега-кдетках.

3.Сопоставить, превентивные свойства^едиабетогенных хелатооб-разователей а особенностями их химической структуры.

4,Изучить динамику диабетогенного и недиабетогенного хелато-

образовааия с цинком панкреатических бета-клеток.

Научная новизна и теаретичеокая значимость исаледавйни.я.

1.Разработана новые модела сахарного диабета, вызываемые производными 8-огссихинолина: В-(п-толуале.ульфониламино)хинолином (8ICAJ0; 8-(п-бензолсульфониламино^хинолино» (8БСАХ); 8~(гьметансульфониламико) хинолином (8МСЙ.Х); 5-(п-ацетаминофенилазо}-8~окоихинолияач (JMCX). Доказана, что диабетогеннО® дейотйие этих соединений обусловлено их хелатоойрагуящими' качествами. Лишение вещества; хзлатообразушцих свойств путем небольших изменений era структура сопровождается утратой, км дкабетогекной. способности.

2.Дана сравнительная характеристика! общего содержания цинка в панкреатических .островках у человека и ряда млекопитающих, а таяаа содержания в них реакционнсмвовабиого, гиотохимически выявляемого цинка.'Доказана, ■ что днабег о' помощь» производите 8-окоихинолина и дитизона. мокно получить .лишь в условиях высокого содержания реакцион-носпособнога цинка в бета -клетках при общем содержании цинка в панкреатических островках не менее 20Q мкг/г снрой ткани.»

3.Изучена динамика диабетогеннога хзлатообразования в панкреатических бета-клетках и показано, что око основана на обратимой цу-акции хзяации с цинком беха-инаулоцитов. - ®

<кИсследовано, влияяие на.углеводный обмен ряда комплзксоойразув-щх соединений» лияенних дяабетогенной активности, изучено их превентивное действие в отношении диабета, вызываемого хелатообразователя-

.Сх ' ..

ми, й выяснен механизм этого явления.

Праг. «ячвокая заачикво « ь. р а б о х и. .

I.B ходе, исследования- получена 4 леПссвоспрсиззодикыа моделл сахарнor а диабета„ которые могут быть использованы в эксперимеиталъ-

ной даабстолсгии. Разработан высокочувствительный гистоХШйч^мпй! люминесцентный м^тод специфического выявления цинка з паййрбатическм;^ островках.

2. О помощью приоритетного xwaffifcKca доказательств впервые

и

высказано положение о той,- что цитотокА»чнсе хелатпроваие цинка в панкреатических островках, которой к высокий к кцектрации ссдер-.чит-оя и ь кнсулярнай ткакй лодж дудочной! железы у человека, кожей являться одним из молекулярных меха&й'змов развития диабета у человека Зто открывает козы» куть профилаетиьи -сахарного дг.абета.

В ходе выполнения работе оформлена заявкр, ка открытие "Явление хелатообразовэния с щгаком з панкреатических бета-клетках как один иг молекулярных механизмов нарушения икс^кногекеза (per, номер 11822 от 26 сентября 1930 г.)? оформлено 5 рацпредложений по новым методам исследования. Изданы методические рекомендации "Современное представление. об этиологии срхарного диабета" (Караганда, 1966) для использования их в учебном процессе. Выпущен информационный листок "Мцг.роспособ определения следоз тяжелых металлов б биологических объектах" (Караганда, 1987).

■ По результатам раооти проведены семинара с врачами-андоярпныге-rawi Карагандинской (Караганда, 1375;1979) и Гурьевакой (Гурьев* t 1986) оОЛ£.стай,

Результата работа внедрена в учебный процесс курса эвдокрикол-ск" гии изадцинсхих институтов г.г. Караганды и Целинограда, в института усовершенствования врачей. (Алма-Ата), на-кафедрах патологической ф'а-эиолсгий кедмиинских институтов г.г. Ярославля, Харькова, Караганда, Актюбинска, Целинограда, на кафедре физиологии Целиноградского иеди~ шшсксг? института и Карагандинского университета (биофак).

Ка ваши ту выносятся следующие основные, положения: I. Хела-тоэб-разуогдее производные 8-ог.сихи;:олина, а кис не дитизон у животных,з панкреатических островкам которых содержится не менее 2СО»«г/х сырой

ткани цинка и основная масса иеакц/онноспособного цинка локализуется в бета-клетках, вызывают деструкцию этой ткани с развитием первичной иксулиновой недостаточности.

2.При низком содержании у швотных реакционноопособного цинка в бетв-инсулецитах производные З-оксихиноиина и- диткзоя сахарный диебет у них не вызывают.

3.Диабетсгекнлл активность производных 8-оксихинолике связана с их хелатообразующими свойствами. Небольшое изменение структуры вещества, направленное на утрату им способности к хелстообразовеишя, закономерно сопровождается лишением его диабетогенной активности. Все исследование диабетогеиные хелатеобразоватеяи (в от.тачие от кедиайетогенных) обладают значительным количеством двойных связей, способных участвовать в делокализации нзспврекяых электронов.

4.Развитие диабета, вызываемого хелатоебрагсзатеяями, обусловлено появлением в бета-клетках токсичного продукта их взаимодействия с цинком бета-иисулсцитсз, необратимо пс вручающего клетки а пределах 15-33 мин после его- образования.

5.Ряд исследованных нами хеяатообразозателей не.обладает див-бзтсгенкым действием и оказывает -выраженный превентивный эффект при диабете, вызываемом производными 8-оксихинолина и дитизоном« Предупреждающее действие этих соединений основано на реакции хелации с. островковым цинком с образованием прочного нетоксичного комплекса, согнавшего препятствие для взаимодействия с цинком вводимого затем диабетогенного вещества.

Апробация работы проходила по I и II Зозсоозшх съездах эндокринологов (Москва, 1972; Ленинград,1^81), на 1,11 и III Всесоюзных съездах патофизиологов (БакуД97С; Ташкент,1У76; Тбилиси, 1982), на У11» УШ и X Всевоэзвтгх кояфере"ЦЕях (совещаниях) по микре&лемеятам (Рига,1975; Иваио-4ренковск,1978; Чебоксары, ШЗб). ив республиканский конференции по микроэлементам (Ивано-4ралхочм,1982),

на заседании кафедра патофизиологии Ц01ЙУВ (Москва, 1972), кг научно-практической конференции преподавателей Карагандинского унизарситета (1976), на научно-практических конференциях преподавателей Карагандинского медицинского института (1980,1983), на научно-практических конференциях врачей-эидокринологав (Каратанда, 197 5 ; 1379 ; Гурьев,1986)я на расаиренном заседании общества физиологов г. Леш;нграда(1979),. на . I республиканской конференции' патофизиологов Казахстана (Алма-Ата,1962 на заседании, проблемной комиссии, по физиологии., биохимии и патэфизиолс гии (Алма-Ата, 198*0, на У1Д Международном симпозиуме по сахарному дне бету (Братислава,1985).

Публикации. По теме диссертации, опубликовано 53 работы. О б s и « к ' с г р у к s у р а.Диссертация изложена на 342 страницах машинописи (собственного текста 195 страниц),1 содеретт 69 таблиц и 145 рисунков, вхлачающих X схему, 2 фотографии, 9 графике®, 22 электронс-грамкы и III микрофотографий. Состоит из введения, обзора литературы, главы "Объекты, и метода исследования", четырех глав собственных после,в ванкй, заключения и выводов-. Указатель литературы, включает 602 источника, в ток числе 196 на русском языка и 406 на иностранных.

' • МАТЕРИАЛ S МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Использованные в работе поджелудочные, железы человека и низотнк

представлены в таблЛ. Таблица!

Объекты исследования

Число и креатич кмх жея

. 3 '

34

ia 2

' III. "

Исследованный Число панкреа- m Исследованный

обзьек! ц, тических келаз . обгекг - м

I Человек 32 7 Собака

о Кролик 1036. 8 Свинья

3 Крыса. 110 9 ; Корова.

4 Мыак- ЮЗ. . 10 Овца

5 ® Морская евкнка 35 . II Лягушка

6. Кожа 2

В.се кспольновашше для. инъекций химические соединенна, их дозы к зяд растворителя приведены з табл. 2.

Таблица 2

Химические соединения, использованные для инъекций лабораторным животнкм

т Химическое вещество Сокращенное название Дсаа мг/кг ...иаосв

I Дктизон 27-100

2 Аллаксан 150

3 8-{п-толуолсульфони-ламино) хинолин 8ТСДХ 18-100

4 8-(п-бенэолсульфо-нкламшо) хинолин 8БС.АХ 20-100

5 8-( п-иетансульфонк-дамино) хинолш ■ 8МОАХ 40-81

6 5-йенилазо-8~гирр-оксихинодин' 5Ф6Х 26-41

7 . (о -диэтйлами- . иофенкзазо) -8-гид-роксихиколин кжс 22-32

3 8-аминсхкнолин ш 40-60

9 2-(п-толуолсульфо-нилемино; ан клин 2ТСА 40

10 2-(п-толуолсульфо-ниламино} нитробензол гтен 40-100

II 4(п-толуолсульфо~ ниламино) хинолин 4ТСЙС ЗС-60

12 5{п-толуолсульфо-ниламино) хинолин 5ТСЖ 30-60

13 8-(п-?олуолсульфо-нялметиламино) хинолин . 8ТСЖ 30-75

14 8-< п-толуолсульфо-ниламино)-1-метил-хиколиний лодид _ еташхи 30-100

15 ' б-Сп-ацетвминсфе- нилазо)-8-окси- хинолин • ПАВОК Ш-60

16 Диэтилдитиокарбамат натрия ДЭД1КЙ 250-ЮС

Растворитель

дисгилл •. вода с добавлением аммиака

;тштный буфер,

разбавленный гтанол / 0,1 моль едкого натрия

0,1 моль едкого ЕВТрИЯ

разбавленная соляная кислота

0,1 мель едкого натрия

разбавленькя уксусная или соляная кислота

разоавленкая соляная кислота

п

ч

я

окончение табл.2 Химическое вещество' ^^ние"06 мг%г Растворитель

Дистилл.вода

и и

и

If

Содержание сахара в крови определяли по методу Kagedorn--lessen (152^)» антроковым (Тодоров, 1963) или ортотолуидиновым методом С Fried, Houfbxsyer ,1964). В небольвой серия у мышей сехар в крови многократно в течение суток определяли глюкозоксидаэным методом с помощьп системы "Айтон-Дейстростикс" фирмы "Ames " (Австрия). О наличии сахара в моче судили . по методу Бенедикта (1963). Опыты' проводились в первую половину дня. Все острые опыты проведены под уре-тановым наркозом. Эвтаназию осуществляли под эфирным наркозом с,помощью воздушной эмболии."

О наличии инсулина, в островковых бета-клетках судили путем окраски срезов поджелудочной железы, фиксированной в жидкости Буэна, .• ыьдегидфуксином' ( Gomori,. 193®; 1950) и диэтилпсевдоизоцианинхпСри-дом С Schiebler, Hctiiessler 1959)« Обаг_метода позволяют выявлять . депо-форму инсулина. Морфологические изменения в островках изучали на препаратах, окрашенных гематоксилин-флоксином. Для обнаружения гликогена срезы железы окрашивали по Шабадашу-(19б1),

Лля электронно-микроскопических исследований кусочки железы фиксировали'в глатаррзом альдегиде и четырехокиси осмия и после сбез-зсг.-лвання заключали в смесь эпона с аралдитом. Срезы толщиной 3DO-400хЮ*"^м были получены на ультратоме 1КЗ-4802А. Их просматривали в ■ электронном микроскопе JЕМ-7, J.EM-I00B или УЭМК-100К. Автор выражает благодарность проф. К.А.Зуфарову, проф. Б.А.Хидо'ятозу, ст. научным

17 Цистеин 250-IC00

IB Глвтатион 500-1000

19 2,3-димеркапто-

пропанол БАЛ 50-252

2С У нити or . , 110-200

21 Гистидин ' 300-1000

22 Пеницилламин 1000

сотрудникам Е.Л.Зумерову и 3.И»Медведеву, Н.И.Труханову за помоць при выполнении этой части работы.

О содержаний цинка в островках судили по цветной гистохимической реакции,, наблюдаемой в островках после прижизненной внутривенной инъекции животным дитизона» Замороженные срезы железы рассматривали в светлом или темном поле зрения микроскопа. В части опытов окрашивали депарафинированные срезы поджелудочной железы, предварительно фиксированной в 70$ спирте, насыщенном сероводородом, по способу Zoaidnaga (1963). Для обнаружения цинка в островках использовали также сульфид серебряную методику ( lim, 1958; Voigt 1959).

В ходе выполнения работы нами была разработана и использована ■ высокоспецифичная и чувствительная гистохимическая методика обнаружения цинка в тканях о помощью производных 8-оксихинолина (З.Е.Ба-. вельский и еоав?»,1568; И.А.Красавин и со авт., 1969.). О содержании цинка в островках судили также по сподограммам поджелудочной xenesa-после реакции их с дитиэоном или с 8ТСАХ.

Для электронно-гистохимического выявления тяжелых металлов кусочки железы фиксировали в глютаровом альдегиде, насыщенном опрсьедо-родом» После процедуры серебрения, обезвоживания и заливки з зпон--аралдит-срезы исследовали в электронном микроскопе.

Атомно-абсорбционное.определение микроэлементов (не.чезо, цинк, медь, кадмий, никель) производили у человека и ряда кивотных. Зта часть.работы выполнена совместно о преподавателем кафедры физики КарГУ Т«З^Завязкиной по разработанной ею методике. После высушивания поджелудочной железы-до постоянней массы навеску ткани растворяли в смеои азотной и хлорной кислот«.Кислоты зыпоривали до получения влажной-соли, растворяли в деионизированной воде и.жидкость вводили в пламя горелки. Атомизацию раствора производили' в. пламени газовой • смеси пропан-бутвн-воздух» Изменение оветопоглощения,атомами опродс-ляемого элемента производили на установке для атемно-абсорбилоаного

определения микроэлементов, собранной нь основе монохроматора ДМР-4 " с кварцевой призмой. - -

Раздельное определение микроэлементов в вцинозной и инкреторной ткани поджелудочной железы, производили разработанным нами методом (Т.З.Вавягкина, З.Е.Бавзльский, 1987) у человека, свиньи, кролика, мыии, крысы и морской свинки. Островховуа ткань получали микро-диссекцией. Навеску ткани (обычно.пул из 5-6 панкреатических островков) помешали ,в специально высверленный s .спектрально чистом графитовом стержне небольшой кратер. Стержень нагревался током медленно нарастающей силы до 4СС-500°С за 1,5-2 мин. Затем включали режим-етомизации и в этот момент на ленто самописца регистрировался пик абсорбции. Расчет содержания металла производили по градуированному графику, построенному на основе органической ткани.

Полученный цифровой материал подвергнут статистической обработке методом непрямых разностей с расчетом но кэадратической формуле' Сть вд е кта-Фишер'а по готовым программам для ПЗЗМ "Электроника S3-

~21' рщльшш ИСОЩОВАНИЙ

• Первой задачей, поставленной перед нами, было установление закономерности" диабетогенного действия р.ядд комплексообразу»щкх соединений. На примере дитизонового диабета, впервые в Советском Союзе полученного в нашей лаборатории' (Я.А.Яазарио, Е.З.Науменко,1957), показана высокая егс диабетогенность (у 95$ кроликов), описана динамика дкабетогенеза, патсморфология поджелудочной железы, варианты клинического течения, вияччая возможность спонтанного выздоровления. Таким путем представлена высокая ценность этой модели для разных иеяей экспериментальной диебетологии. '

Далее на основе анализе химической структуры и свойств рада комплексообразуювдх производных 8-(п-асеноульфокиламино)хинолина, которые- наши соавторы-химики (В.М.Дзиомко, И.А.Краоавин, ИРЕА, г.Мо-

окза) предлошшгв качестве реагентов для определения тяжелых металлов. мы прогнозировали и впервые создали три. новых модели диабета, вызываемые. 8TGAJC, 8БСАХ и 8МСАХ (табд.З). В отличие отдитизонозого диабета заболевание возникало от введения меньших даз вещества; и на. сопровождалось начальной гипогликемией. Стойкий диабет,, прослеженный, на протяжении 9-174 дней возник у всех взятых в опыт животных посла' инъекции- 8ТСМ и 8БСМ и у 5 из 8 краткой посла введения 8MG&X. Заболевание было сходно с дитизоновым диабетом и имела разные варианз» течения. Выздоровление наступило у 2-х кроликов после инъекции 8TG/LX на 45 и 46 денье у одного животного на. 103 день, после введения 8БСАХ Еще у одного кролика после инъекции 8MG&X течение диабета прерывалось временными ремиссиями.

Еще одна, ^я модель диабета была получена нами с помоцьа ГйФОХ, целенаправленно синтезированнога для нао А.Е.Лазарисом путем введения в хинолиноэое ядро. ацетаминноЯ группы. У всех взятых в опыт 2?, кроликов возник стойкий диабет, прослеженный в течение 8-120 днаа. Подобно дитизону и з- отличие от других диабетогенных производных 8~(п-аренсульфониламино)хиколина ПАФОХ вызывал раннее (через 2 часа) и продолжающееся до 12ч онижение уровня глюкозы в крови. Диабет, вызываемый ПАФОХ, характеризовался выраженной гипергликемизй' (в средней около 20 ммоль/'л, у отдельных особей концентрация глюкоза в крови в среднем в течение 10-39 дней доходила до 27-34 ммоль/л) и возникалг даже после инъекции кроликам совсем небольших доз ПА.Ф0Х (15-25 мг/кг масон жвотного). 9 животных погибли при явлениях диабетической коми, 7-через 8-18 и два - через .30 й 39 дней. Выздоровление (с 28-го дня) мы наблюдали лишь у одного животного.

Дитнзон, 6ТСАХ и ПА§ОХ уже через 30 мин после введения кроликам вызывали лизис секреторных гранул панкреатических бета-клеток с образованием вакуолей в их цитоплазме, через 24ч происходило отчетливое разрусение ультраструктур, причастных к синтезу и депонировании инсулина, а к исходу суток большинство бета-инсулоцктов выглядело необратимо поврежденными.

Таблица 3

Влигяяе производных хинодина, 2ТСА. и 2ТСН на уровень глккозы в крови' у ХрОЛИКО».

2 : ■Реагензг Доза ве-: Числа : Продол-: Глякоза в к роз и (.мыоль/л>

серии:' щества. ; нивозу: китель.-: М + /П

. кг/кг : кассы : нчх : коотв, : ю^люде-. <зни) : -

: исходная : после я

: ; •: : введения

I. Ш ед-ео 6 - 5-18 •6,32<Ю,36 6,05+0,22

■ II. " ¿Ш 40 4 8-13 6,16+0,27 6,65+0,34

.111. гш ' 40-100 5 8-15 6,43+0,36 7,45+0,53

17. чШХ 30-60 .6 8-11 .6,05+0,50 5,94+0,13

У. 51Ш И 7-11 6,10+0,37 6,32+0.27

Л. 8Т0МХ 30-75 1 8-9 5,8^0,21 6,99+0,20

ш. аташ: 30-100 5 и 5,88+0,19 5,43+0,19

ни. 8ТСА1 £1,1-40 10 10-174* 5,9440,22 17,89+2,19 КО, 001

IX. 8БСАХ 30-50 6 9-132' 6,87+0,49 20,24+1,47 ЕгО, 001

X. 8МСАХ 40-81 5 40-121 6,16+0,26 18,37+1,23

к - средний данные из 4-42 определений концентрации гюокозн в к рази у кроликов г течение 5-174 дней посла инъекций соединений.»

У все,, животных о тяжелым течением сахарного, диабета без признаков нормализации гликемии морфологические изменения в,железе соотвез ствовали тякести Селезни. 0ш\касались, главным -образом островков, но иногда захватывали и мелкие протоки. Мы обратили внимание на ют факт, пто степень дегенеративных изменений, в инсулиыпродуцирувдей ткаки не была связана с особенностями химической структуры диабетогенн'ога агента, а зависела, по-видимому, только от тяжести и продолжительности ■ болезни. В случаях выздоровления от диабета б бета-клетках выявляли незначительное количества депо-формы инсулина. По-видкмому, уже небольшого количества инсулина в бета-клетках оказывается достаточным для нормализации гликемии у выздор&вгивавщях живоизых, что свидетельствует о больших компенсаторных возможностях .инкреторной ткани под-келудояной гзеяезы.

Порахг-ниа инсулкнпрсдуцирувгцей. дасанк, вызываемое даабетегеннн-•,.:ыи хедатооб^азователдаш; мы ЪвяэываеГс.;'токсическим'"действие«"'этих'

соединений на бета-клетки. Все испытанные не-п* 5 химических агентов являются моаки.ми хелеггообразуящими зеществами. Из них дитизои давно применяется з аналитической химии для обнаружения рдда тяжо-лих металлов, а 8ТСДХ, 8БСАХ <л 3MGAX были предложены как высоко«» чувствительные люминесцентные реагента для выявления цинка и каджя* Мы полегаем, что испытанные нами диБбетогеняыв соединения вступают в реакции хелатосбразоваяия с металлом панкреатических бета «слеток. При этом образуется токсичное соединение, вызывающее необратимую гибель бета-инсулоцятов. Мы выдвинули предположение о тем-, что мет ал л ом s с которым реагируя» в инеулинпродуцкрующей ткани дяебето-генныз хелатообразозетзяи, является цинк.

Далее для упрочения доказательства зекрномерного Характера диебетог-енностя именно тех соединений, которые обладают способностью, образовывать воиплаксн с тяжелыми металлами, в.том числе а цинком, ' мы исследовали действие ещз 7 соединений (рис.1).. Большинство из них было целенаправленно синтезировано нвшимя.соавторами. Одно из нях, 8-3í;i;hoxhko!ikii язлялось исходным продуктом для синтеза 8ТСАХ, 8БСАХ, ВМСАХ, Из остальных б веществ два - ЕТСА и 2ТСН были аналогами 8ТСДЯ s разомкнутым хинолиновым никло«. 4ТСАХ и ЗГСАХ - структурные изомер 8ТСАХ. 8ТСМХ и 8ТСАМХЙ - веэдетва, з которых сохранена структурные элементы 8ТСДХ к кх взаимное расположение» но один из. атомов азота (сульфамидный или хинодиновнй) блокирован метальной гру.той, что приводило к нарушению хедьтооб-разую^еЯ системы 8ТСДХ. Вса .7 соединений,хелапшх связэй. о цинксм . не' обрезуэт. Ей одно из' стих »ецеегг npir. внутривенном введении кроликам не изменяло'содер&епия сах&ра в ярози и!"не-яызквпЕо"дла-.'" бата. В противоположность ш 8ТСАХ, 8БСЙХ :К'ЗМСАХ ваэинави у.жизст- , set явный диабет\(табл.Э)."-V '' - - ;";" '.-■> '' *

Таким обрагеи» на«, удалось устакотглть, что способностью ка- „ зиветь диабаг .у. хроюжож-.с6х&же"ляж&;т*„:фсяая)дки4- -хваохяя^»'

в молекулах которых ^рулпа К-ЗО^й занимает восьмое положение. Такие реагенгн в панкреатических островках образуат комплексы с цинка.ч в бе та-:', летках, выявляемый специфической люминесцентной. реакцтеЛ, с псследуюяум избирательном повреждением бзтаг-инсулоцитов. поджелудочной железы. По существующим представлениям, реакция 8-(п-аренс5Льфонид-амино)хинолинов с цинком обусловлена комбинацией металла с |5дазка р&сполоызнкыми атомами азота (Г.3.Серебрякава и соавт. ,1964; ¡¡Г.А.Бо-хезольновДЭбб). Только благоприятное ззаимное расположение двух атомов азота (сульфамидного и хинотанового) составляем халатсобразую-иув группировку, ответстзеннуа за образование внутрикомплекснога соадиьенпя с металлом. Перенес этсга заместителя в другое. положение, разрушает такую группировку. Если; бы диабетогенноа. действие было обусловлено не комплзксообразованием, а другими особенностями молекулу, . оно могло би проявиться и у изомеров, у которых аренсульфониламино-группа расположена не только' в восьмом, но я з других положениях. Таким образом выяснилось, что нарушать образование инсулина способны лизь тс производные хинолмна, которые благодаря целому хинолиьовому ядру и налички 5 грушы в восьмом положения обладают свойствами хелатообразэвателей и .дают люминесцентную реакцию с цинком.

Лля подтверждения гипотезы о диабетогенезе. путем хелатного связывания цкнка панкреатических островков было необходимо под-учпть четкие слстечатизированнне сведения о содержании цинке з островках человека и ряда животных, по резному реагируедих на вззденке диа-бетсгенных хелатообразователей. С этой целью были использованы дитизоновый и оульфидсерсбрчный методы. Показано, что оол^шое коли- » чсство цинка выявляется в панкреатических островках у человека, кро-ии-;,' на й свиньи, преимущественно ч местах локализации бета-клеток. Несколько мекьагз его обнаруживается в панкреатических островках у ет; у крыс же основная масса цинка находится по периферии островка, где > ааспояэ:*е:ш альфа-клзтки. 3 островках Лангдрганса у морской сезьхк, ,

коровы и овцы цинк не выявлялся.

Методом электронной гистохимии было -показано, что выявляемы! б бета-клетках у кроликов цинк сосредоточен преимущественно з секреторных гранулах, которые являются депо инсулина.

По нашему мнению, дитизсноввк реакция и оульфидсеребренис0 вполне приемлемы для гистохимического выявления цинка з панкреатических островках у человека и некоторых животных. Обе методе особенно.демонстративны в тех случаях, когда в тканях.локализуется большое количество гкстохимически выявляемого цинке, как, например в нанкоеатических островках у человека, кролика и свиньи.

/.ля кденткфикещи« металла, с каким ревгасуьт дкабетогенние хонплйхсообрагователи, целесообразно бы ко разработать г/.стохккичзс кую реакцию с таким химическим соединением, которое избирательно реагировало бы только с цинком или хотя бы с очень ограниченным числом химических слементсв. Еще более достоверным представлялось • нам получение прямых данных о содержании пинке непосредственно в панкреатических островках.

В содружестве с химиками ИРЕА мы разработали высокоспецкфич-шй гистохимический метод выявления цинка с помощью описанных нами диьбетог-еноз.- ОТСАХ, ВЕСАХ и ЗЭДСАХ, которые при рН внутренней среды организме способны девать люминесцентные реакции только о цинком и кадмием. Так кг.к кадмий в поджелудочной железе не бил обнаружен (А.О.Войнар и соавт.,1947; В»ИЛапин, 1971; Т.3«8авя5кина и соавт.,1978) , можно полагать, что возникающая^в островках яркая зеленая люминесценция обуслсвиека взаимодействием диабетогенкых ве-у;естз с атомами цинка. Мы установили, что наиболее интенсивнув

щсмкнесценгяул реакцию мояно наблюдать в остповках человека, кролист '

:са и свиньи, явно более слабую - у мышей, собак и кошок. У крыс яамЗольисй интенсивности реакция достигала по периферии островка, где расположена альфа-клетки. У морской свинки, коровы н овца '

-17-

О

цинк в островках люминесцентным способом.ене выявлялся. Незначительное количество цинка мы обнаруживали также а острозках у кроликов, страдавших аллоксановым, дитизоновым диабетом или вызываемым инъекцией бТСЛХЛ'шпшесцектная реакция, как и дитизоновая, наблюдалась в островках только в том случае, когда в них была сохранена основная масса иноудинпродуцируэдей ткани и з цитоплазме бета-клеток оставался гистохимкчески выявляемый реакционноспоссбный цинк. . При сксперкменталанон диабете, в связи с гибелью бета-кло-ток из островков исчезает цинк, а следовательно, дитизоновая и ламикесцентная реакции на происходят.

данное о содержании цинка в островках у кроликов и снижв-н-.!'/? его прг; диабете мы подтвердили методом спсдографии с последующей дитизоновой или люминесцентной реакцией. Этим методом было-

покапано, что основная масса цинка в нормальной железе действи-

о

тельно локализуется в'островках, но что и в экзокринкой ткани, где гистохимачееки металл не выявляется, он содержится, хотя и в намного менькем количестве, чем в острозках« Отсюда следует за-кдючение, что цинк в железе находится .в двух формах гкстохими-чески выявляемой (реакционноспособной) и не выявляемой.

Определение в цельной ткани поджелудочной железы цинка, железа, меди, никеля и кадмия методом атомноабсорбционной спектро-фотометрли позволяло сделать важный для нас вывод о высоком, сравнительно с другими микроэлементами, содержании з железе цщглг я*4 отсутствия в ней сколько-нибудь значительных количеств кадмия (как и никеля). Однако этот метод не позволяет составить представления о количестве цинка в островковой тСани, которая в железе Составляет около 2-% ее зассы.

С целью получения точных количественных данных о содержании цинка в островках совместно с Т.В.Завяз*:иной был разработан микрометод атомно-абсорбциояной спектрофотоиетрии, позволявший вняв--

Содержание ц;щкя в игкретзриой и ацинозной тканях поджелудочной железы человека и некоторых млекопитающих

Таблица 4'

Исследо-

вангай

объект

Со-

;_ержаятг~^и;ка в сырой ткани (Л-'чиоло проб)

островков. ыциноанзй

I.Человек '.л=5) 2.10+20 (п=9) 30+3{п=9)

217+18Сп=9) 32^31п=6)

,220+19(п=Ю) 26+2(п=Ю)

206^17(п=10ч, 27+3(п=10)

224+20(пЛО) 30*3<п=Ю)

М+ т 215*, 4+3,28 29+1,09

Л.Кролик 200+12(п-Ю; 26+2(пЛ1)

(п*-5) ■ 2П+Ю(пЛ,Т) 21+2(пЛ1)

212+16(п=П) 20+2(пЛ0)

.Т97+Ю( пЛ 0) ■ 35+3 (п= Ю)

2127Н(п=И) 25+2(иЛ0)

М+П1 20674+3,26 23^4+1,21 .

Ш.Свинья (п=Ь) 230+20-п=10/ 30+3(пЛ0) ■

222+18(п=101 32+3(п=Ю) ■

210+16{п-Ю) 35+3 (п= 10)

• 232+20(п=Ю) 36+3(пЛ0)

208+15(п-Ю) 28+2(п=Ю)

220,40+4,95 32,2+1,50-

Исследованный объект

1У.Мь:шь (п=з;

Мч- т

Ь. Крыса Гп^-з;

УI.Мор^кея свинко

(ьа;

М+ т

Содержание цинка с сырой ткани мкг/г (п-число проб)

островкоз ЕЦИНОЗИОЙ_

26+2,9(п=9) 24+2,5£п-9)

Ю3+10ГПЛ0) 115+11 ир 10}

108+10 (п=» Ю)

109,1+3,55 Р 1У и П<- 0,001

60+б(п=8) 63+6([Ы0)

бб^Сп-Э)

63ДЛ,25 Р У и ЕК 0,001 Р У и П^ 0,001 126+25(п=9) 125+25 (пЛО)

126+1,0? Р У1 и П^ 0,001 Р У1 и 1У ^ 0,02 Р У1 и У0,001

25,6+0,60. 20+2(п=8)

19+2(лЛ0) 22+2(п~9)

20,9+0,93

63+10(п=9) 57+10 (пЛО) 57+Ю(п=9) 55,6+1,33

I

?

лять микроэлементы в кичтокно малом количестве биологического материала. Применительно к поджелудочной железе мы получили возможность определять цинк э пуле только из 5-6 озтровксв. Этим методом (тебя.4) было обнаружено высокое (более 200 мкг/г сырой ткгни) со-- . держание цинкэ в сстоовкьх у человека, кролике и стн-ньи. Содержание цинка в ецинозной ткани у йтих объектов колебалось з узких пределах и было в несколько раз (на порядок) чем в островкях. У мышей

цинка в сырой ткани островков содержалось примерно вдвое, у крыс ~ - примерно етооо, а у морских связок в- 1,7 разе, меньше, чек у названных вайе видов. У кротекоч в островксх и л ацикозной ткани был текже определен кадмий. Его содержание а островках было ничтскно мало и почти л 480 раз уступало цинку. Это чезначительное•количество кадмия, которым■богаты эритроциты, по-видимому, было обусловлено кеоольЕим остатком крови з микрососудах островков. Таким об- -разом, мы впервые получили ^прямые данные^ о ток, чп в понкреати-. .: ческих островках у человека,кролкка и свиньи содержится больвое количество цинка, о кадмий в них практически отсутствует. Следовательно, разработанная нами гистохимическая лэ.чинеснегинея реакция . на цинк с помощь» производных 8-(п-йренеульфо;!ил&мино)хкнолпнов выявляет его з панкреатических островках высокоспид.чфично..

Было логичным предположить, что возможность дкабзтогенного действия комплекоообразучщпх веществ должна зависеть ст колкчем-за аинкь в бета-чнсулоцитех. Закнае для подтверждения* выдвинуто" концепции. выводы вытекают из сопоставления визуально установленных нами видовых различий в нахождении реакцнояноспоообнсго (гис-то.хи-мически выявляемого) цинка ь островках и количественно определенного его содержания в инсуляркой ткани. У пгздтних, ннсулчрная ткань чоторчх содержит значительно меньшее количество цинка (мыта, ::рц-оы, чорсга-.о сзинки) с помесью дит-лзона или 8ТСЛХ диебат лолучять ь.е удалось. Ло-зпдимсму, диабстогснгые хелатос'боа&озатели способны вызывать нарушение инсуликогенной функции лишь в услсзкях высокого

содержания цинка а панкреатических острозках v прп локализации основной масса реакционноспособного цикка л бэта-клетках*

Поэтому наиболее подходящим объектом для получения диабета с помощь» хелатообразователей являэтся кролики. Списан дитизоно-вый диабет у свиньи (О.С.Радбиль, В.Е.Григорьев,1974)» у которой содержание цинка в островках-даже несколько выие,' чем у кроликов, lie удалось получить дитизонового диабета у кошкк и собаки (a^bA&ií и соавт.,(1952). Ке описан ди-гкзокозий диабет у коровы и овии. Больпое количество чинка обнаружено в островках у человяка» Это обстоятельство имеет особую практическую значимость, учитывая известные данные о большой вероятности контакта поджелудочной железы чеаовека с многими экзо к эндогенными камплехсообраасзате-ЯЯМЙ*

Еще одним подтверждением важности высокого содержания цинка в островковой ткани для возможности диебетогекного действия хеяа-тируюших соединений явились результаты опытов с кроликами резных этапов постнат'альксго развития* Установлено, что цинк накасш'.виет-ся в островках постепенно, по нерв роста и развития организма. У новорожденных крольчат и в первую неделю их жизни содержание цинка''в островках„ как и депо-формы инсулина, еце очень мало» Их содержание параллельно нарастает ко 2-ой над, но ene более - к четырехнедельному возрасту« Однако я в этот срок гистохимические реакции на цинк и инсулин оставались е;де -более слабыми, чем у кроликов ювенильного возраста (5-ó мес), у которых их содержание визуально не отличалось от содержания в островках взрослых животных.

3 соответствии с этик у новорожденных животных к в первые 1-2 нед жизни дитизоновый диабет вызвать не удавалось. Преходяща,'! пщерглижемия развивалась лишь у части четырехнедельных животных, и лкпь у бот;'з зрелых жквотнчх. СЗ-о мес) удавалось воспроизвести днтизоковый д.:абет.

^скусотвзнного обеднения инсулярной ткани цинком одновременно о изгнанием из нее депо-формы инсулина нн достигали путей повторного (7-дневного) введения кроликам сахароснижающего суль-фанкламкдного препарата глибешсламнде. (манинил). Элиминация депонированного инсулина вызывала достоверное снижение уровня сахара в крови. У всех, животных происходила почти полная дегрвнуляция бете-клеток, заявляемая окраской альдегидфуксином и реакцией с пеездоизоцивяиномо Одновременно с депо-формой инсулина из бете«' -клеток исчезал и гистохимически выявляемый цянк. Дегре.нуляция■-сохранялась в течение не менее двух нед после отмены препарата.

Исследование ультраструктуры островковых клеток после повторных введений гдибенклвкида (мананияа) показало, что основным" з механизме его действия, по-видимому, является выведение секреторных гранул кз бета-клеток с одновременным усилением синтеза инсулина.

У животных» островки которых были лишена гяибеюсламида^ч боль- : вей части реачционноспссобного цинка, дктизоновый диабет не'развивался (тебя .5)* Диебет не возник деже в том случае, когда дитизон вводили спустя 3,7 и деке 10-й сут после отмены препарата, когда \ большая часть бета-клеток еке' оставалась лишенной цинка и депо~ -формы инсулина. . , / < -

Таким образом, все представленные варианты опытов убезздеэ? в том, что диабетогенные комплексообр8зователи способны вызывать изобретшее поражение бетв-инсулоцитов только при достижении з них критически высокой концентрации цинка.

Возмскность исследования динамики процесса хелвтообразозанкя в бета-клетках создает яркая окраска комплекса цинка о дитизоиом и специфическая люминесценция его комплекса с дивбетогенныки производными 8~окоихиколина. Было выяснено, что эти комплексы существуют в островках шгвогс организма примерно в течение одного чеса,

Тс-блипг. 5

Предупреждение диабета 7-дневккм введение:.: манкншга за 24ч - 14 еут дг. инъзкцки кролллр.ы 40-42 кг/кг кассы датйзона'

Серки опытен

Коли- Продол-чес Г- Г.МТСЛЬ-зо ьос'/ь кро- наблв-лйкоь деьий (дни)

Х.^'.Тк- 1С

ПЫ! '

контроль к серии 2 и)

Чи-зло определений гло-козы

1'люкоза ъ лрови (к.моль/л)

исходная

Г5-42 8-15 ;.о~30 8-10 17-60 3-12

после введений

Р по сравнению с контролем

5.44+0,15 20,13+0, $Ь ж 5,15+0,77 12,327о,36ж 5,22+0,45 8,45+0.63

22 I

Ч.Мани-нид 7сут л через

ДНТИ60Н

Ш.Дит'и- 8 ЗОН

(контрояЬ к еэг/.и 1 I У;

1У Лани»

над: 7сут 1- через 9 7<<г ди- ■ ткзон

5-122 6-20

II - с

4-41 3-14

58-79 15-1.6

22 7

16-55 Е>~16

4,34+0,2? 6,55

5,25^0,24

5,72

6,05

5,33+0,16 ж? /0,001 8,19+0,65

26,51+2.94 я

12,91+0,72

8,69+0,49

4,40+0,23 Ь,66+0,16 гсе / 0,001

У.Дитк-уон

(контроль серу.км >1 и Ун)

У1 .^а ни-ни;! 7сут ч пссьч 7 гут ДРгИССН

10 1

14

2-15

7-116 8-15

6,94+0,29 5.17

19,30+1,52 н 6,54+0,32

5,44+0,23 5,72+0,20 . /.0,001

[."^•.ЛСР

и-

с,8?.+Э,72 о ,87 гО, ¿0,001

чениз V-

а:-ср9дчуе данные из 2.-16 определений сахара в крови в течение г дн^й после -введения дитигня.

»ж-среднме данные из 5-20 определений сахара з кровя в

-122 дней после- »ведения дигизока на фоке нагрузки манлнилом

а затем постепенно полностью исчезают. После прекращения микроциркуляции в островках трупа окрашенные или лшинесцируюиие комплексы сохраняются в течении многих часов. Повторное введение дитизона или 8ТС$Х живому кролику енозь приводит к появлению з островках окрашен-, него или лшинесцируюаего продукта, который сохраняется в них снова не более часа.

Количественное определение цинка показало, что островки теряют после первого введения дитизона совсем небольшую часть образовавшегося в них дитизоката цинка, при повторных - еще меныге. По-видимому, та

основная масса дитизонв распадается в самих острсзках с освобождением атома цинка, который остается в островке и может снова реагировать с повторно введенным дитизоном. Дитизон же, освобождаемый из-комплекса при сохранении мккроцирку^яции, по-видимому, удаля.ется из островка с кровью.

3. диабетогенной концентрации дитизон связывает весь.реакционно-способный цинк островка» .В этом мы убедились, экстрагируя хлороформом из срезов келезы весь дитизонат цинка. ¡-¿Три последующем нанесении на эти срезы 8ТСАХ люминесцентная реакция на цинк была отрицательней.

Далее мы обнаружили,- что далеко не все химические агенты, образующие хеяаты цинка в островках, обладают диабетогенные действием. Одним из таких недиабетогекных комплексообразователей является производное дитиокарбаминовой кислоты - диэтилдитиокарбамят натрия (ДЭДТКН), который насел применение в клинике при отравлении тяжелыми металлами. Производные дктиокарбамировой кислоты являются типичными комплексонами-, связывающими 1п */Нгр ионы многих металлов (М.З.Ко-раблез,1971).

Нами было покь;зено, что очень большие дозы ДЭДТКН не вызывают у кроликов расстройств углеводного обмена и не нарушают гисто- и ультраструктуру секреторного .аппарата-железы. - Этот ¿акт доказывает, что в основе действия испытанных нами диабетогенных комплексообразователей лежит не просто связывание ими и исключение из цепи биоло-

гичэских рзакций хшкка-инсулоцитоэ:, а именно образование цита-iokcí.':ihux хелатов. .. '

ДЭ1ЖН íыя ис-пыган нами как возможный конкурент дчабетогенны*. хомллексообразслателей в отношения еотровхового цинка,. Мы исходили; при атом из предположения, что предварительное введение.этого моцна-го халагообра зователя до лн$екции дитизона путем прочного связывания островкового ^илка в нетоксичный комплекс. способно предупреждать. бетогенное хедатирование его дитизоной. И действительна предваритель-нбе введение кроликам ДЗДЗКН полнестьы предупреждало возникновение; диабета, вызываемого на только, дитизоном, ко и бШЦС, ШШ и ецэ двумя мслиыма Хй л а т о о брз. зу а м и веществами, дкабетогенкая активносаь которых бала впервые- установлена в иаией лаборатории - 5ÍÓX и 53Ф8Х (watfat 6, призе да на средние цифры многократных определений концентрации глнхози s крови после инъекции соединений). Было, обнаружено, что • превентивное действие дгЛТКЕьпроявляется сразу se посла его икаекциа . и сохраняется в течение суток. ДЭДТКК /оказывал превентивней оффект не только в том.случай, когда его вводил» до инъег.цчк дктияана, не*'и . спустя X—10 мщ. посла 5Ьэ5Х, то есть он .способен вытеснять зга диа-бетогениые компгексообразователи из их хелатоа с цинком. Инъекция ' ге.ДЭДЖК через 15-30 ккн после дкабетогэнных ьомплексорЯразущих соединения ужа не сказывала превентивного эффекта.. Результата этих опытов'свидетельствовали с том, что ДЗуТЕКН образует очень, прочную связь с; островховнн аинкок и кз отой связи его не могут .вытеснить дие.бетогонные хелатооорагув^ие вещества, тогда как ДЭДЕШ их вытеснить, способе».

Опыта о ДЗДЫЙ. подводили установись, что необратимое повреждение беть-клетск панкреатических островков- зазервзегоя у»а в первые 15-Х1 мин после кх введения, .после чзга-ДЗД'КН не к oses ere затормозить, хотя и раарушаев- токсичный, хелаз» 2та положение подтверждается и тем. -что -омский, -удьтраструктургоа повреждения-

Серия опытов Д°за

мг!

Концентрация глюкозы в крови кроликов посяс введения ДЭДТ1Ш до- инъекции 8ГШ#-ПМ0Х, БШХ; 5Э28Х и аллоксайг

_____....Pnfcg_______

1аблица'6'

ДГКН диабето- .

/кг . гена Число i люкоза з арови масса ^ кг . нивот-. { ымоль/ л;

waocu

исходная после 'V введен®

1.ДЭДГКК и ■ 500 18-40 ' 4 - ,5,94+0,68 б,65ч0,33 через 40-Й0 " ~

2.ДЭД1КН и 500-; 15-50 6 6,62+0,52 . ' 6,32+0,39 через 30 1000. ■ .,/'.. . ;"'■**.',

ыик 8TGAX о

.ДЭД1КН'« через 30 мин ШОХ

З.ДВДШН к 250 6-41 , 3 6,21+1,05 б',54^0,13 чепез .15-30 . • ' ' ~

мин b.siex . -

£У.ДЗМКН и . 400- 22-32 10 6Д0+0Л1 б,71+0,X? ■ через хбмин-) 500 ■* - •-;••' ~

Лснц&яь

Р по сравнению о

Число - Глюкоза в крова контро-1к;,вот-. {тюгь/л/ лом

исходная после

введения-

.;; .дадтк к зоо- 1бо

чареа 5-10 1000 нин еллск-сан '■

10 6,71+0,20 17,32+1,19

• , 6»65

7,31

8 . 5,94+0,22 17,71+£Д9 ¿0,001

19 . 5,83+0,19 19,85+1,56 -< О,001 .

3 . 5,1.1+0,23- 23,32+2,13 <0,001

, *

: 16 / 5,21+0,23 20,40+1,08 ¿0,001 /II- 6,0.сг0,25 17,16+1,49

I • •..»

с .

. • ■ го

, г

2

,• 6,98 , 7,53

' -26в бета-инсулоцитвх после инъекции дитизона, 8ТСАХ, ЛА§0Х нагляделись уже в первые 30 мин после их введения и раньше всего касались зрел-а секреторных гранул и их мембран.

Правильность представления о механизме действия ДЗДТКН подтверждал тот факт, что предварительная инъекция кроликам ДЗДТКН ни в одном случае не приводила к предупреждении диабета, вызываемого аллоксаном (табл.6), который не является комплексооб-разователем и обладает другим механизмом бета-цптотоксического действия.

, 0 значительном превосходстве хелатообразующих свойств ДЭД1ТСН над аналогичной способностью испытанных комплексообразув-щих диабетогенов говорит очень большая - более 24ч - продолжительность существования его комплекса с цинком в островках, даже при сохранении мккроциркуляции. Через 2Чч наступает постепенный распад ■ этого комплекса и частично освобождавшийся цинк уже может прореагировать с дитизоком и 8ТСАХ. Было Показано также, что'.ДЗДТКН предупреждает'возможность образования дитизоната цинка не только в поджелудочной железа, но и в других тканях кролика.

Закономерный харектер явлений, связанных с высокой хелато-образуюцей активностью ДЗДТКН, бил убедительно подтвержден опытами с противодийбетогенннм действием других комплексообразующих' соединений: биогенных тиолов цистеина и восстановленного глютатпона, , синтетических тнодовых соединений димеркаптопропанола (БАЯа) и • унитпола, а,также имидазольного соединения гистидина, Их противо-диабетогенное действие было нами правильно прогнозировано исходя из знания их хедатирувцих свойств: комплексообрагованпе с цинком §Н-групп и имидазольной группы.

Аминокислота цистеин эффективно предупреждала развитие дити-зонозого диабета н? только в тех случаях 5 когда его инъецировали зе 5 мин - бч до зведения дкабе-тогенкой дозы дсткзона,, но и

спустя 3-5 мин после него, Он оказался .кроме, того, также действенным" и при диабете, вызываемом 5ЭЙЗХ. Превентивными свойствами з-отно- -ненки дитг.зонового диабета обладал и пеницилламкн, являющийся в химическом отнопении -диметилцистеином -конфигурации, а также другие .названные выше соединения, обладающие сульфидрильжми группа:®. Окисленный глютатисн лишен су'льфтедрпльшх групп, а потому, как и ожидалось, антидиаоетогенкого действия не оказывал* Это касается и серина, который по структуре, в основном, повторяет цистзин, ко вместо сульфгидрильной групга содержит гидроконлькую.

Отчетливым бал превентивный эфйгхт в отношении дитизона у обладающей имидазольнкн кольцом аминокислота гпстидина. Торможение диабетогенеза гистицином и при его инъекции через 3-5 мин после дитизона подтверждает-заключение, сделанное на оснозакии- опытов с ДЗДТКК и цисте инок о том,- чт-с дитизон не вызывает немедленной гибели всех бета-клетск. Поэтому последующее введение гистидина, видимо, бистро проникающего в эти клетки,, предохраняет часть из них от гибельного действия дктизона. Уцелевшие клетки, в которых металл связывается с недиебетогешшм гиствдином, сохраняют своз инкреторнув Функция. *'

Таким образом, хелатообразуюшке соединения могут оказывать на организм двоякое действие. Одни из них, такие как дитизон, 8ТСАХ, ВЕСАХ,. 8МС АХ, ПАФОХ вызывают альтерации бета-клеток и развитие диабета. Их повреждающее действие на инсулкнпрсдуцкруацую ткань с последующим резвитием диабета прямо связано'-с наличием з ней значительной концентрации цинка.-" •

Зт-орая группа испытанных, нами хелат'ссбразолателеИ (ДЭДТКН, цкстекн и др.) превосходи? первую по компяексообразующей потенции, , но токсического действия на бета-клетки не производит. Эти соединения образуют с островковым-цинком нетоксичный комплекс, создавая этим пространственные препятствия для взаимодействия связанного

атома цинка с Диабетогенкым.. хелатообразователем.

При попытке ответить на весьма непростой вопрос, почему одни хелатообразователи обладают диабетогенным действием, а другие, наоборот, от него предохраняют, мы еще раз проанализирова пи особенности структуры соединений обеих групп и обратили внимаг ние на следующее. Хелатообразователи сами по себе, видимо, редко оказываются-цитотокоичными. Их токсичность резко возрастает в результате хелации о металлом в клетке, даже если этот металл и . не обладает жизненно важной функцией (Альберт, 1971)., Но-и в случае хелации,-как мн видели, токсический эффект не обязателен. Сдним из возможных,-объяснений феномена этих различий может быть наличие и количество в структуре хелатообразователя двойных сзя-зей,' способных участвовать в делокализеции нэспарендах-'электронов. - Вещества, обладающие одновременно большим количеством двойных связей и хелвтосбразуащей способностью, могут в момент распада хеяата превращаться в свободные, радикалы в-результате стабилизации последних вследствие сопряжения неспаренного электрона -о пк-элек-тронвми. ' " ;

В качестве примера приведем расчет плотности неспаренного 'электрона для арилнетильдах радикалов в. приближении теории эозыу-щения молекулярных орбиталей (Дьюар, Догерти, 1977).

-I. Э радикале I имеется три двойные связи, плотность неспаренного электрона равнаС,75б; в радикале 2 - плотность неспаренного

В случае локализаций электрона его плотность на атоме равна

з!

электрона составляет 0,633; в радикале 3 имеется 9 двойных'связей и плотность нвспаренного электрона рввна только 0,555.

. Эмпирически установлено, что радикал 3 значительно стабильнее радикала I. Это обусловлено большим количеством дзойшх связей, участвующих в сопряжении. Увеличение же количества свободных радикалов способно усиливать активность перекисного окисления дипидоз о последующим разрушением мембран, ограничивающих клетки . и их ультраструктуры. . •3 самом деле, испытанные нами недиабетогенкые комплексообра-зователи были лишены дзойшх связей, способных к сопряжению, а ' потому вероятность образования ими л клетке свободных радикалов -очень мала. Наоборот, полученные- нами диабетогены имели по 5-9 двойных связей, участвующих з сопряжении (делоквлг»звции) и в общем сила их вовре'адающего действия на инсуяоциты соответствовала количеству этих связей:-ПА50Х > 8ТСАХ = 8БСАХ >дктизон: > 8ЖДХ.

Независимо от того, какоз истинный интимный механизм повреждений, возникающих в бета-клетках пос^ инъекции дивбетогенных " хелатосбразоветелей,■анализ полученных нами многочисленных "фактов позволяет првдта к заключению о том,, что хелатирование .цинка бета-кнсулоцитоз соединениями определенной структуры является одним из молекулярных, механизмов диабетогенезав эксперименте -к у, человека»

Все сказанное дает нам основания придти к следующим выводам;

• -.;..' ВЫВОДЫ

Х.Однокретное введение в кровь кроликам хелатообразувцих производных 8-оксихинояика: 8-(п-тодуолсульфокиламино)хинолина ' (8ТСЮ, 8-(п-бензо"лсульфонилаг.;ино)хинол!!на {8БСАХ), 8-(п-метан-сульфониламино)хинояина (8МСАХ), 5~С п - ец е т амин о ое ни л а зо ) ~8~с к-сихинояина (ПМОХ), а такх:е дитизона .сопровождается-развитием у

подавляпцего большинства животных сахарного диабета,

2.Через 24ч после инъекции кроликам 0ГСАХ, ПАФОХ, дктизона в бета-клетках наблюдается гибель большинства уяьтраотруктур, причастных к синтезу я депонированию инсулина„ Развитие диабета, еызы-ваемого хелатообраэователяии,-характеризуется уменьшением числа и деформацией панкреатических островков, появлением в них зон некроза дегрануяяцией бета-клеток*

3.В поджелудочной железе человека и ряда животных цинк содержится в реакционноспособной, тастохимнчески выявляемой форма и на~ рзакционноспособной. У человека, кролика к свиньи основная касса гистохимичесхи выявляемого цинка локализуется в бета-юхегках, у крысы - в альфа-кнсулоцитах. В панкреатических островках морской свшш коровы и овцы цинк гистохимическн не выявляется.

• Методом атошо-абсррбционной спектрофотометрам, в микроиссечзн-ньйс панкреатических островках у человека, кролика к свиньи цинка обнаружено 206-220 ыкг/г сырой ткани, что в 6,8-7,4 раза визе, чем ь ацинозной паренхиме. У крысе уцшей и морских свиное »65-125 мкг/г

V

сырой ткани.

4.Дкабетогенные хелатообразователи выэиваят диабет дгслъ при условии содержания цинка в островках не ниже 200 икг/г сырой ткада и при локализация основной массы реакцзонноспособного цинка

в бета-клетках. У морской свинки, красы, мгон, панкреатические бета-клетки которых бедны цинком, диабет С помощью хелатообразователей ке воспроизводится. Он не возникает также у кроликов первых четырех-недель казни, которые по содержания реакционкссиособкого цинка значительно уступают взрослга жевотннм. Диабет на развивается к у кроли ков, у которое большая часть реакционностюсобного цинка утрачена ост ровкзкн в результате повторного »ведения гдибеналамида,

5. Дкабетогеннче свойства изученных нами соединений обусловлены кг хагатообргэухзцей способностью при наличии в структуре

не менее 5-У двойных связей, способных к 'делокалисеции нзспа-ренного электрона (сопряжению). Образовывать, цитвтоксйчшй комплекс с островковым цинком и вызывать развитие диабета: способны яиць те производные хинолина, в которых сохренено хинолиновзе ; . ядро и группа находится в восьмом положении. Перенос

этого заместителя в другое положение сопровождается утратой хе-латсобразукщих свойств и потерей диабетогенной; активности.

6.Инъекция кроликам диабетсгенных хелатообразовьталеЯ ео-ировондается. образованием' з панкреатических островках люминеоци-руюшего' или цветного комплекса со всем содержащимся .в них реакш*-онноспособным цинком. Основная масса этого комплекса-при сохранении шкроциркул¡етии в железе распадается в .течение .часа с;:оово- „■•, 6оэдением атома цинка, способного при повторной инъекции хелато-образователя вновь комплег.сироваться с ним. Необратимое повреждение бета~к леток,. вызываемое токсичным хелатшм комплексом,- возникает ухе.в первые 15-30 мин после его образования«

7.Дк&бетогенксй активностью не обладают хелатообразутощне соединения, не имеющие двойных связей, способных к сопряжению, • такие как диэтилдитиокарбамат натрия, цистеин, восстановленный глютатяог?, БАЛ, унг.тиоя, гчстидин. В отнесения диабета, вызывав-мог о другими хелатообразсвателями, эти вещества окачывеюг.вырвнен»! ный превентивный эффект. В основе данного явления ле/та образование ими прочного нетоксичного комплекса с цинком бета-клитск,..роторов юключает последующее образование цитотоксичногс хелета.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИЙ

I.Разработаны новые модели сахарного диабета, зазываемые ЗТСЯ, 8БСАХ, 8МСАХ и ПАФОХ', которые могут быть использованы' в -экспериментальной диабетологии1;'

2.Полученная зисокочуьотгнтельная и специфическая гистохимическая люминесцентная реаклия о 8-(»-толуоло/ль.сок;1лам1'но)хиноли-ном на цинк з панкреатических островках может ¿лудить основой для разработки количественных методе? определения шжк.а, v частности, в, экспяршзите при изучении процессов синтеза и секреции инсулина,

3,Р?и разработке ноиах "лекарство-нних • препаратов следует л^осгрть создания сочиненна с хелатообрззуоздми свойствами, в структуре которых имеется 5 и более двойных связей, способных участвовать в дзлокализедчп ¡попаренного олзктроне, что придает соединению позреадакнцуэ «ктизность в отношении с.нсулинпрод.гдпручдей ткани.

^.Кесбхсдчм- крайняя •■.осторожность при лечебном применении производных оксяхнноганп ''йштерссептоза, ятрене, нитроксаяика к др.,.). Необходимо соблюдение ¿ngaasi --мер предупреясг.е.чия попадания ь-оряь y:isu хзлатообразсБсгелей здаабетогенней структурой, используя ¿я»

о

в учэтческой аромышлешюп'Л,"а также в сельском хозяйстве-

СПИСОК РАБО,,, -ОПУШКСЗАНШХ ПО ДКХЕРГЛЩШ

Г.очоаериментальшй диабет, вызываемый 8-(метаксуль*эт{ламк-

но)хпко линем //Пет,фит/о л.-1969.-'S3..-C. 51-55 /соавт.-З.М.Дзномк.о, Н.А.К-асавин, Д. А. Лазание/,

^.Предупрежден-/ экспериментального диабета, вызываемого хсла-тообразу-одаж соединениям;! //Пат.С'ИЗГ.од.-1908.~}й.-С.Зо-42,/осе.вт.--Э.А.Лазарис/,

3.¡ipe. упреждение экспериментального диабета соединениями, сс-держозн:.'!; лул;Лгкд?илъкыв группы //Еия.э^пес.бисж.-ХЗбЗ.-ЗЗ.-

£'./соев\г.-Я.Д.Лаэирае/.

ФЛстохикаческис реакций на ьш а тадаггзхах ^ангергенса к зиэбетогеннсе действие реагентов, иеггельаушда. для этой цели // Йробх.зэдохриноя.-19б9.-$3;.-С. 1С2-1Гб«/со£Вт.~И:.А.Красазин, Я.АЛв-зарис, З.И.Дзиомко/.

5.К патогенезу экспериментального дитиаонозого дльбета// Механизм1.* регулирования этинвдеягеиъноота организма в условиях патологии,-Ба:'.у, 1570,-С.211-212.

6.Экспериментальный диабет, зыэизеемий 5-(п-ацетччикофе1П -взо)-8-о.".сихинолинон и его предупреждение //Пет. физ«сл.-1970.--'S2.-C.M-4 5./соаз?.-Я,А.Лезгрнс/.

Т'.ПротиЕоцисбест-енное действие биохомггла1:сочОЕ//Пет,физ:10Л»" -1571.-0.25-25. /со егт.-Я.Л.ЛаЕпоис/.

8.0 возможной роли блокирования ципха в ;:езвл":-:и дитизонозоге диабе?а//£оя»экаавр.биол.-1571.-»?г.-С.Х--й/сса.л,.-.с1.АЛезерио/.

5.К пгтегекезу эйспер'.:мек?алъксго дяебзта, зиамваекого 8- •

/соает.-Я.А.1я2сряо, й.А.Хрьсазин, З^Дзпсмхо/.

Ю.Ссдеркешге цлаКй и инсулина й панкреат'/чеекгсе острозхех у кркЗ после введения сахароенийаящпх суль^егсгле!®:»« препаратов// Бр зг«-зкс пер.би.ол..~';6. -С,57-60 /сойЛт.-Я.А.Лвзаро/.

II.Изменения гистоструктуры подхелудечной л.елезы при шссперк-иент'ашгсм диабете, газывееноы .производными *инояяне//1ройд. годо-хринол..-1?75.-т.':£.-С.91-95;/с1>аз7.- Я.А.Лезерпс. Д.М.Богуславская/.

К.Позрастние особенности зо^шкнезения дитизопозого диабета у кролихоз/'/Зспроси геронтологии к гериатрии.-лэрягацда, 197'!.г. -С.303-Х7. ' ■

ХЗ.Влилшге дизтилдаткеййрбкгрта натрия нп инкреторнуз фуихщяи . поддал удочкой кт.леза//2в.сйериментагвдае кетоди ксслепсэания з хтйгка й бислогии.-Ч&пагг1Нда,Е75.-С»2бЗ-г57,/со!1вт.-Г.Г.Кайрймов/.

цинке з резаи^ич зкелерюбнтаиъного л;шбета//Био.-сги-ческея роль к практическое атжхз.взн^е >п-хроэлеуектов,-Рига, 1575.--С. 50 ./со се г. -Я. А. Л аз гр п с/;.

15.3гаяЕиа припыле ни инкреторную фунвдив подхегудочной железа у чрел;1Ков//Е:;о.югкя растений ч газетных .--Хераганд а, 1975,-С. 117-120. /соеат» -Г.Г.Мейрамоз/.

\ 15 .Патогенез экспериментального диабета, вызываемого блоки; реваншем цинка в панкреатических островках//Механизмы повреждения ' резистентности, адаптации' и компенсации.' Тезисы докладов II Всесоюзного оъезда патофизиологов.-Ташкент,1976.-С. 322-323./соавт. -Я.А.Лазарио, В?И»Корчин, Г;Г.Мейрамов/«

■ 17.0 регенерации панкреатических островков у кроликов при диабете// Растительный и животный мир Казахстана. -Карагенда, 1977.-СЛ2-21»

18 Аядоровление при экспериментальном сахарном диабете// Актуальные вопросы явдокринологии.-Алма-Ата, 1977„-С.99-Ш1.'

19.К механизму противодиебстогеннсго действия, цистеине// . Пвт'.:1)Изиоло«1У77.-Ге5.^С.75-78/соЕвт.-Я.АЛазарис/.

аО.Определение микроэлементов в подкелудочной кзлезе человеке V и некоторых кивотшх методом атомно-абсорбнионной опектрофотометрии \ //Вопроск теоретической и экспериментальной физики .-Караганда', . 1978.«С*5Э-59/соазт. Г.В.Зевязкина, А.НЛашев/.

• 21.Ультраструктура инкреторной ткани поджелудочной железы

у кроликов//Биология растений к животных'*-Карагандй,1978,-С.62-67. ' /соавт.-Н.И.Труханов/. ,'.

• Н2.Р.сль блокирования цинка в развитии эксперимзнтального-диа-бе'га//Ело логическая роль микроэлементов и их применение в сельском хозяйстве и медицине.-Ивано-Франковск,1978е-Т.2.-0,70/соавт.-* -Я;АДазарис/ ..

. . . ' 23.0. противодиабетогенном действии манинила//Пробл. эндо-. кринол.-1979.-!Я.-5«31-36/соавт.-Я.А.Лазарио/.

?Л.О роли образования цинксодержащих комплексов в развитии :диабета.'/Сахарный диабет. Эпидемиология, клиника, лечение .-Ка-раганда,1979.-С. 11-12 /соавт.-Я.АЛезариоЛ

25. 1^егви1;1*« йС£«сг о£ оп Ёхрег!-

■ Diabet.es ¿тойисвд Ъг ШЛЫсопе аш1 в-ОхусЫноИд^/У £зйо-

сгХпо1ое1а. Experim4otslis.-1979.-V.13»-Г.39-51^соевт.-й.А.Лазаркв/.

26.3пиякяе глибенкяамнда на ультраструктуру панкреатических островков и содержание в них инсулин е.//Проб л. ини оки к но л -1980.-:й;-С,72-76,/соевт.~Б.А.Х.чдсято»,. А.С,Ибрагимове/.

27.Распределение цинка в шюуяиноге.кисй ткани псдкелудоч-ноп железы крсликов//$:'.зиол.к.-1580.-№3.-0.370-375./ссав2.--К.й.Трухеноз/,

28. Priaary Insulin. Insufficíün j after Blocking of Zinc in l-'encrsatic tsta-Cells // ÜndocrinoloEia Kx^crinojGtalie.—

l981.-V.l3.-Jr.ií9-loy/coaBr.-fl.A.JIasapMc/.

^.Спектроскопическое" определение микроэлементов з поджелудочной геле se у некоторых позъсночшх//1шинесценция и теплой-зчка.-Караганда,1980.-С.130-121./ооавт.-Т.В.Завязккяа, Л.К.Спири-дснова/.

30.ДеНствис комплексосбразуюашх соединений на ультраструктуру панкреатических островксз//П Зеесопзжй смзд эндокринологов, Тезисы секционных заседаний ,-j!., 1280.-С.24-25.

31.K механизму диабетогенного действия комплексоноз, блоки-русркх цинк в бетпн1яоулоцитах//11 Всесоюзный оъзэд ендокриноло- ■ гов. Тезисы секционных заседаний.-Л.,1560.-С.140*/соавт.~Я.А.Ла-зепис/.

ЗЗ.Стрзптозотоцикозый диабет//Здравоохра>:;ение Казахстана.» 1581.-!';1С.-С.50-52/соазт.-Л.К.Еыстрйвсгсая, А.А.Букчина/.

ЗЭ.Злияние кокплексосбразук'цих соединений на инсулошгты панкреатических острсвков//§изиол.ж«-1982,—^1.-С.З-'1-39./соевт.--М.М.Сарсембаев, Н.И.Труханоз/. . ■ '

З-'i.O превентивном действии глибекклаиида при дитизоновом дкебетз//Ахтуальные вопросы зндо: ринологии.-Алма«Ата, 1951.- : -G.69-7I.

35.К мехакигмвя- иясуликогенеза и к патогенезу диабета// Повреждение и-регуляторше процессы в оргакизма.~М.,19£2.^ G.8S-90./coüBT.-íLAJIese.pnc, Р.С.Гсльдборг и др./»

36.Блокирование цинка в бета-инсуяоцугах днвбетогеннами комплексообра'зователями//гермента, металлы, мета л л о-J >¿ рм е нты в диагностике и лечении.-ЯБано.г$ранковсл,К62.-С.'31.

37.Ультраструктуркие изменения пнсулоцитоз кролика после иньзхшк! дитиэока/Д'орфологическиэ аспекты реактивных изменений в органах и ткеяях.-Ташкент, 1581.-С.70-7Э./соавт.-Б,А.Хадоятоз, А»С,Ибртимова, К.М.Варипоза/.

-Зс-

ЗР-Распроделекие цинка в мнсуяияпродгкгруэкой ткакк некоторых клчкоп«(теющ1ос//вопроси эндокринологии.-А.. т-Ата ,1582.-С. 49-54.

'iS.Изменение инсуя;;нпрОд;лц::ру::да;х струхгур после эведгняя дятизонв//Пробл.оидокрннол.,-С.65-CÍ./сопат.- Е.Л.3умерев/

-'Ю.Угхтраструктура йисудиая^одуакруячих кздгок locr; валкая S0HCi.eKC0Q6pasy»j;HX сосг,ккептЛЛ'Зопросы пеуолспч.гохсЙ ¿азлого?:я: з эксперименте и о кг.ннкхс. -Алиа-А?s, 1S84. -G .SI-SS.

4I.il SrftHeiiae ультреотиукт^ры нпсулоцктоэ tjosre вьедс!..я 5иа-бй-гоганчых хёлвтос0рб?,оь£телей//,11рикл2дше ссиехтк мор/опогин клеток, T К U не П , !' Р Г D Н О . . - ПС V. О С W б v;!, С11Д 9 04 . -С. ЧI - ч2 .

42.Dltuisone Diabetes in jtoH'i.te and itc jrrevention by öuif-iiyoriU and If.ids.iolo Contaiftir^ Ocapoimdo //¿ndocr.inolosiít i-

aentalis„-.19S4.-V. 18.-ir./ооаят.-Я. A.Ла гз рис/.

.Раздольнее преде ^ош'с цшу.с а кнкрйторпоГ: и 8зсскрв?о;>коР ткани подаеьудочно? гелезы//Зопроо:; патологии эндокринной спстзмы.-Агма-Ата, Í954.-С. 63-6Р/Г ~свт. -Т. З.Ьчвя ss -.-на/.

«Й.ПоурегхчЗНие ансуликпрогуцг.руглцкх .упьтр«структур гдазстогза-

хэлатсобре;оаа.е?ямр//Зопраси патогог;»: эндокринной снотемы,-Адма-А-га.ГСб^.-С. бб-бб ./сосвг.-ЕХЗумерсь/.

45. SSicfc-Bloclkieruiig in dea ЬглгегЬ^.аязЬаа Inseln als möglicher ¿»totcbuo£33¿ec£Aiiirüii.s der'DiabotäS lá'jllitus// V111 Intera.»fcions les jDcnrai-á^TUposluia ub ? Uiabetsa Mellitus.-er«tisiav»,1985.-ü«76P. /о оэвт, -Я. А Ль з з рис, Т. В. Бзгя зки на/.

^б.Содоряениз ц;.::::а з :tscy -.-гг txprí« :: воспрокззе-

дзкиэ чиа^а/Лроблеми сахарного дисбате,-Гурьев.,1526.-0.61-63. / с о р. ьт. -й. С - X ок oí е з, Т. В. Б р вя зк:: ь а/.

- ^Делегирование цинка бета-.-.нсуксцгтоа как весма-хний нехе.алсм неруг>е:.-,:я тюупУНсгзЕгза/Ук/.ето^г.зхоктц в биологии лтшекзкие в мес'-:-"-1не от.ьсчон хозя.'>стЪ'.!.-4ебо*с<:ра,1?8б.-С. 3[-32../есаь?.-

К.А.Ле:-.ерис/.

48.Раздельное оарст;леяче цлнг.е з пнкреторнол и эЯзекркг.кой нч поджелудочной кедеs«//íé»'Kpo!»sе^ектк £ биолог:;;; л jjx лрчмон'пл.з в кегиунке и c-üLbCKCM хозяйстве.-Чебоксары,IS36.-С. - 33-34. /со ыу?.-

49.Гистох имиче ск ое ц атомноабсорбаионное выявление цйкка и кад^'." мня в инкреторной и ацинозной ткани поджелудочной, же л е зы//Акту а ль ш е проблемы функциональной морфологии.-Новосибирск,5536.-С.-<3-55./Соазт,-Т.В.Завязкина/. - " | • , ':

ЗО.Динамика диабатогеиного ксиляексообрезов/щия в панкреатических бета-клетках/ЛСлиника, патогенез и лечение экстремальных и тер- ■. . минеяьннх состояний.-НовосйОкрскД985.-С. 101-102./сосшт.-Ю'.С.Моисеев/.

51»Микроспособ определения следов тяжелых металлов в биологических объектах/ЛСарагандинский ЦШ.-Х987.-Зо. -/соввт.-Т.В^ЗавяэкинйЛ.

52.Современное представление об этиологии сахарного диабета/ методические рекомендеции/Дареганда, ^:198б»-1бс,' . '.'"

53.Влияние негрузки глибёнпламидом на инсугиногенну»-функции ;. поджелудочной железы//СоБремендае проблемы эксперииентальн6й_и клинической эндокркнологиив-Ккев,1587.^С»21. ' , ; ' ■ ■ •->

54.Явление хвлатробразования с цинком з панкреатических бета-кяеткех как один из молекулярных механизмов нарушений инсулиногекеза (заявка на открытие, регЛ 11822 от 26 сентября 1988г., соевт.-Я.А." 1азарис).

Подписано к печати Объем с^З^п. д.

Формат 60X8471«. Заказ. 959 Тираж -ЮО Типография ВА ПВО СВ.