Лекарственный патоморфоз эндокринной части поджелудочной железы при экспериментальном сахарном диабете

Снигур, Григорий Леонидович

Диссертации по медицине → Патологическая анатомия

Автореферат и диссертация по медицине (14.03.02) на тему:Лекарственный патоморфоз эндокринной части поджелудочной железы при экспериментальном сахарном диабете

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Снигур, Григорий Леонидович Волгоград 2012 г.

Ученая степень: доктора медицинских наук

ВАК РФ: 14.03.02

Автореферат диссертации по медицине на тему Лекарственный патоморфоз эндокринной части поджелудочной железы при экспериментальном сахарном диабете

На правах рукописи

ЛЕКАРСТВЕННЫЙ ПАТОМОРФОЗ ЭНДОКРИННОЙ ЧАСТИ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ

14.03.02 - патологическая анатомия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Волгоград, 2012

Работа выполнена в ГБУ «Волгоградский медицинский научный центр» и ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ.

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор Смирнов Алексей Владимирович; член-корреспондент РАМН, заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор [Писарев Вячеслав Борисович.

Официальные оппоненты:

Туманов Владимир Павлович - доктор медицинских наук, профессор кафедры патологической анатомии № 2 педиатрического факультета ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н. И. Пирогова» Минздравсоцразвития России.

Даниленко Виталий Иванович - доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой патологической анатомии ГБОУ ВПО «Воронежская государственная медицинская академия им. Н. Н. Бурденко» Минздравсоцразвития России.

Дерижанова Ирина Сергеевна - доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой патологической анатомии педиатрического факультета ГБОУ ВПО «Ростовский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России.

Ведущая организация:

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт морфологии человека» РАМН (г. Москва).

Защита состоится «3О » /О 20/%г. в-/¿7^4. на заседании диссертационного совета Д 208.008.01 ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ (400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ.

Автореферат разослан « ¿Г 2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор медицинских наук / ^ Наталья Владимировна Григорьева

РОССИЙСКАЯ rocvДАРСТВЕННАЯ

библиотека. _ _ ?о 12_

Актуальность проблемы

Сахарный диабет (СД) является одним из социально значимых заболеваний, что обусловлено его повсеместной распространенностью и быстрыми темпами роста [Дедов И. И., 2010]. Сахарным диабетом страдают более 150 млн человек по всему миру, количество которых удваивается каждые 12-15 лет [Дедов И. И. с соавт., 2008; Аметов А. С., 2008]. Однако фактическая распространенность СД в 3—4 раза превосходит данные официальной статистики, что свидетельствует о масштабах неинфекционной эпидемии диабета [Бала-болкин И. И. с соавт., 2008].

Несмотря на разнообразие лекарственных средств для лечения СД, одним из приоритетных направлений в современной эндокринологии и фармакологии является активный поиск новых мишеней для действия антидиабетических средств [Петров В. И., Спасов А. А., 2007; Дедов И. И., 2010; Петров В. И. с соавт., 2010; Спасов А. А., Чепурнова М. В., 2011]. Для скрининга и детального изучения механизма действия антидиабетических препаратов используют различные экспериментальные модели СД, обусловленные введением селективных В-цитотоксических веществ (аллоксан, стрептозсггоцин и др.) [Mythiii D. М., et al., 2004; Islam S., Loots D. Т., 2009]. В зависимости от применяемой в эксперименте дозы цитотоксина и путей его введения возможно моделирование различных состояний нарушения углеводного обмена, соответствующих определенным клиническим типам диабета (СД тип 1, СД тип 2, латентный СД, скрытый СД) [Srinivasan К., et al., 2007]. При этом клинико-биохимические признаки СД (гипергликемия, глюкозурия, полиурия, полидипсия, потеря веса, снижение концентрации С-пептида и инсулина, увеличение концентрации гликолизированного гемоглобина и др.) не позволяют достоверно оценить степень повреждения эндокриноцитов панкреатических островков и определить потенциальные тканевые мишени для лекарственных средств [Reed J. С., Green D. R., 2011].

Балаболкин М. И., 2007]. В современной литературе широко освещены особенности структурных изменений органов и тканей при СД (диабетическая ангиопатия, нефропатия, кардиопатия и т. д.) [Jennette J. С., Heptinstall R. Н., 2007; Burke А. Р., Tavora F., 2010], однако сведения об особенностях патогистологических изменений в панкреатических островках с учетом современных представлений о повреждении и регенерации B-клеток в литературе представлены недостаточно полно и без учета лекарственного патоморфоза.

С позиций современных представлений о патоморфогенезе и лекарственном патоморфозе сахарного диабета большое значение придается состоянию эндокринной части поджелудочной железы, особенно А- и B-клеток [Reed J. С., Green D. R., 2011]. Способность селективных цитотоксических соединений повреждать B-клетки панкреатических островков широко используется для моделирования СД при проведении доклинического этапа испытаний новых лекарственных средств [Хабриев Р. У., 2005]. Известно, что эффекты токсического действия на B-клетки зависят от дозировки и способа введения цитотоксинов и могут проявляться некротическими изменениями различной степени выраженности или быть представлены запрограммированной клеточной гибелью [Lenzen S., 2008]. Современные представления о механизмах повреждения B-клеток при различных моделях экспериментального диабета требуют уточнения путей активации апоптоза и стимуляции регенерации эндокриноцитов. Детально изучен механизм действия большинства антидиабетических лекарственных средств, однако данные о комплексных морфофункциональ-ных изменениях эндокринной части поджелудочной железы в зависимости от экспериментальной модели диабета противоречивы и разрознены, а структурные изменения поджелудочной железы при введении инновационных отечественных противодиабетических лекарственных средств отсутствуют.

Значимость процессов повреждения и репарации предопределяет переориентацию направленное™ медико-биологических исследований из области теоретической биологии в сферу интересов клинической медицины [Саркисов Д. С., 1988]. Изучение процессов повреждения и репарации В-клегок поджелудочной железы при СД является актуальной задачей, поскольку каждый уровень и элемент регуляции секреторной активности инсулоцитов служит потенциальной мишенью для действия лекарственных средств и биологически активных веществ.

Таким образом, возможность целенаправленного управления процессами повреждения и репарации является основой для создания новых лекарственных средств, применяемых в терапии социально значимых заболеваний, а изучение особенностей лекарственного па-томорфоза позволяет выявить специфические структурные компоненты для разработки инновационных антидиабетических лекарственных препаратов [Karp G., 2010; Reed J. С., Green D. R., 2011]. С этих позиций изучение патогистологических аспектов повреждения и регенерации инсулоцитов при экспериментальном диабете с учетом лекарственного патоморфоза, обусловленного действием различных групп антидиабетических лекарственных препаратов и лекарственных веществ, является актуальным.

Тема утверждена на заседании Ученого Совета ГБУ ВМНЦ (протокол № 5 от 27 декабря 2006 г.) и включена в план НИР в рамках темы «Патоморфологические изменения и лекарственный патомор-фоз внутренних органов при нарушениях различных видов обмена веществ» (регистрационный № 01200904037).

Целью исследования явилось выявление морфофункциональных закономерностей процессов повреждения и репарации эндокриноцитов В островков Лангерганса поджелудочной железы при экспериментальном сахарном диабете с учетом его лекарственного патоморфоза.

Задачи исследования

1. Провести комплексную морфофункциональную оценку изменений островкового аппарата поджелудочной железы при экспериментальном сахарном диабете с учетом его лекарственного патоморфоза.

2. С использованием иммуногистохимического метода исследования выявить закономерности апоптоза эндокриноцитов В панкреатических островков на различных экспериментальных моделях сахарного диабета.

3. С применением иммуногистохимического метода исследования выявить патоморфоз эндокринной части поджелудочной железы и особенности апоптоза эндокриноцитов В панкреатических островков при фармакологической коррекции.

4. Выявить морфофункциональные закономерности репарации эн-- докриноцитов В островков Лангерганса поджелудочной железы при

экспериментальном сахарном диабете с учетом его лекарственного патоморфоза с использованием иммуногистохимического метода исследования.

5. На основании качественной и количественной патогистологичес-кой оценки обосновать концепцию струюурных преобразований панкреатических островков при СД с учетом фармакологической коррекции различными группами антидиабетических лекарственных средств.

Научная новизна

Впервые в сравнительном аспекте показаны морфофункциональ-ные особенности эндокриноцитов панкреатических островков при моделировании аллоксан-, стрептозотоцин-, стрептозотоцин-никоти-намид-индуцированного сахарного диабета. С применением методов морфометрического анализа впервые выявлены инициаторные пути активации апоптоза В-клеток на различных моделях экспериментального сахарного диабета с учетом сроков его развития.

С помощью морфометрических, иммуногистохимических и электронно-микроскопических методов исследования обоснованы закономерности повреждения и репарации эндокриноцитов островков Лан-герганса, а также определены возможности блокады апоптоза В-кле-ток при лечении экспериментального сахарного диабета.

Впервые изучены комплексные морфологические изменения эндокринной части поджелудочной железы, возникающие под влиянием нового отечественного противодиабетического лекарственного препарата. Впервые проведен сравнительный анализ и установлены особенности лекарственного патоморфоза эндокринной части поджелудочной железы под воздействием известных и инновационных, про-тиводиабетических лекарственных средств.

На основе полученных данных сформулирована теоретическая концепция о фенотипической вариабельности эндокриноцитов панкреатических островков, которая рассматривается как ключевой мор-фофункциональный субстрат реализации клеточного повреждения, компенсаторно-приспособительных процессов и репарации при действии различных цитотоксических веществ и коррекции морфофунк-циональных изменений под влиянием противодиабетических лекарственных препаратов.

Практическая значимость

Полученные данные существенно расширяют современные фундаментальные представления о процессах повреждения и репаратив-ной регенерации В-клеток островков поджелудочной железы.

Сведения об инициаторных путях ингибирования и активации апоп-тоза В-клеток панкреатических островков посредством ТКА1Ь-ин-дуцированного апоптоза позволяют использовать их как потенциальную мишень для создания новых противодиабетических лекарственных препаратов.

Результаты исследования могут быть использованы в научных целях и патологоанатомической практике для оценки патоморфоза эндокринной части поджелудочной железы в результате лечения сахарного диабета.

Работа носит фундаментальный характер и представляет развернутую морфологическую характеристику тканевых, клеточных, иммуногистохимических, ультраструюурных и морфометрических изменений в эндокринном аппарате поджелудочной железы в условиях моделирования сахарного диабета и при его лекарственном пато-морфозе.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Комплексные морфофункциональные изменения, выявленные в островковом аппарате поджелудочной железы на различных моделях экспериментального сахарного диабета, отражают основные этапы его морфогенеза и лекарственного патоморфоза.

2. В условиях моделирования сахарного диабета селективными в-цитотоксическими веществами определяются различные пути активации апоптоза эндокриноцитов В островков Лангерганса, выявляемые с помощью иммуногистохимического метода.

- метрических методов, что отражает динамику процессов повреждения и регенерации эндокриноцитов и зависит от механизма действия используемых лекарственных средств.

Публикации и апробация работы

По теме диссертации опубликовано 42 печатных работы (в т. ч. в журналах перечня ВАК - 14 и 1 монография). Результаты диссертации докладывались и обсуждались в материалах: научно-практи-

ческой конференции «Состояние здоровья населения Волгоградской области и современные медицинские технологии его коррекции» (Волгоград, 2005); II Всероссийской конференции с международным участием «Клинико-морфологические аспекты эндокринопатий» (Белгород, 2006); XIV Российского национального конгресса «Человек и лекарство» (Москва, 2007); «The next line of defense» International conference on diabetes. Synergy and strategy (Анталия, Турция, 2007); III Съезда фармакологов России «Фармакология - практическому здравоохранению» (Санкт-Петербург, 2007); II Международной научной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений» (Алматы, Казахстан, 2007); Международной научной конференции «Лекарственные средства и биологически активные соединения» (Гродно, Беларусь, 2007); IV Всероссийского диабетологического конгресса (Москва, 2008); IV Конгресса международной ассоциации морфологов (Москва, 2008); IX Конгресса международной ассоциации морфологов (Бухара, Узбекистан, 2008); Всероссийской научно-практической конференции патологоанатомов (Красноярск, 2008); Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы клинической и экспериментальной медицины» (Чита, 2008); Всероссийской научной конференции по патологической анатомии (Санкт-Петербург, 2009); Российско-Белорусской научно-практической конференции «Роль коммуникационных систем в развитии опухолевых процессов» (Смоленск, 2009); 56 и 57 Региональной научно-практической конференции ВолГМУ (Волгоград, 2009 и 2010); Научно-практической конференции «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической морфологии» (Волгоград, 2010); VIII Всероссийской конференции по патологии клетки (Москва, 2010); X Конгресса международной ассоциации морфологов «Функциональная морфология человека и животных» (Ярославль, 2010); Научной конференции сотрудников КГМУ, Центрально-Черноземного научного центра РАМН и отделения РАЕН (Курск, 2011); Ежегодной научно-практической конференции «Биомедицина и биомоделирование» (Москва, 2011); Российско-Индийской выставке-семинаре «От генериков к инновационным препаратам» (Волгоград, 2011); III Эмбриологического симпозиума «Югра-Эмбрио-2011» (Ханты-Мансийск, 2011); Научно-практической конференции «Актуальные вопросы патологической анатомии. Герон-тологические аспекты патологических процессов» (Волгоград,

2012). Апробация работы состоялась 24.03.2012 г. на заседании межкафедральной научной конференции с участием кафедр ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздравсоцразвития России и лабораторий ГБУ ВМНЦ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 264 страницах машинописного текста, иллюстрирована 54 таблицами, 66 рисунками, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, практических рекомендаций и выводов. Список литературы включает 325 источников (из них 93 - отечественных и 232 - иностранных).

Материалы и методы исследования

Эксперименты выполнены на 610 половозрелых нелинейных белых крысах-самцах массой от 280,0 до 300,0 г (табл. 1). Животные содержались в стандартных условиях вивария кафедры фармакологии ВолгГМУ на диете для лабораторных животных согласно ГОСТ Р50258-92. Проведение экспериментальной части исследования одобрено решением регионального независимого этического комитета (протоколы № 1-06; № 43-2006; № 70-2008; № 89-2009) и выполнены согласно методическим руководствам и нормативным документам: правила лабораторной практики (ОЬР) при проведении доклинических исследований в РФ; Федеральный закон «О лекарственных средствах» № 86-ФЗ от 22.06.1998 (Собрание законодательства РФ от 29.06.1998 г. № 26, ст. 3006; от 13.01.2003 г. № 2 ст. 167; схг 10.01.2000 г. № 2, ст. 126; от 07.01.2002 г. (Часть I) № 1, ст. 2) и положение о Министерстве здравоохранения РФ, утвержденное постановлением Правительства РФ от 29.04.2002 № 284 (Собрание законодательства РФ от 06.05.2002 г. № 18, ст. 1771), а также в соответствии с ГОСТ 3 51000.3-96 и 51000.4-96. На момент проведения экспериментов животные были здоровыми, изменений поведения, аппетита, режима сна и бодрствования обнаружено не было. Все манипуляции с животными проводили с соблюдением международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных (1997).

Таблица 1

Распределение животных по экспериментальным группам

Группы Время наблюдения, сутки Кол-во животных

Интактный контроль 3, 7, 14,21,28 50

Аллоксан-индуцированный СД 3, 7, 14, 28 50

Аллоксан-индуцированный СД + инкретиномиметики 3,7, 14,28 50

Стрептозотоцин-индуцированный СД 7,21 30

Стрептозотоцин-индуцированный СД + инкретиномиметики 7,21 30

Иммунозависимый СД 3,7, 14,21 50

Иммунозависимый СД + инкретиномиметики 3,7, 14,21 50

Стрептозотоцин-никотинамид-индуцированный СД 3,7,21,28 50

Стрептозотоцин-никотинамид-индуцированный СД + сенситайзеры (бигу аниды) 3,7,21,28 50

Стрептозотоцин-никотинамид-индуцированный СД + секретогены (препараты сульфонилмочевины) 3,7,21,28 50

Стрептозотоцин-никотинамдц-индуцированный СД + сенситайзеры (ванадий содержащий комплекс) 3,7,21,28 50

Стрептозотоцин-никотинамид-индуцированный СД + антиоксиданты 3,7,21,28 50

Стрептозотоцин-никотинамид-индуцированный СД + секретоген (Диабенол) 3,7,21,28 50

ВСЕГО 610

При проведении эксперимента у лабораторных животных контролировали массу тела, объем потребляемой жидкости, проводили глюкозотолерантный тест, а также определяли уровень кетоновых тел в моче по стандартным методикам. В эксперимент производился отбор животных с уровнем сахара крови не ниже 15 ммоль/л, то есть крысы с индуцированным сахарным диабетом [Akbarzadeh А., et al., 2007]. Содержание гликозилированного гемоглобина (HbAlc) определяли методом катион-обменной хроматографии низкого давления со стандартными наборами («Фосфосорб», Россия). Концентрацию инсулина и С-пептида определяли в плазме крови брюшной аорты крыс на автоматическом иммуноферментном анализаторе «SUNRISE» фирмы TECAN (Австрия) с использованием наборов DRG Insulin Elisa Kit и DRG C-peptide Elisa Kit.

Экспериментальные формы сахарного диабета1

Аллоксан-индуцированный СД вызывали внугрибрюшинным введением аллоксана в дозе 120 мг/кг [Srinivasan К., Ramarao Р., 2007] с последующим введением экстракта Гимнемы лесной (перорально 280 мг/кг водного раствора, 2 р/сугки). Забор тканей для патогистоло-гического исследования осуществляли на 3, 7, 14 и 28 сутки. Стреп-тозотоцин-индуцированный СД моделировали однократной в/в инъекцией стрептозотоцина (45 мг/кг) [Баранов А. Г., 1985]. На фоне развития диабета осуществляли введение экстракта Гимнемы лесной (перорально 280 мг/кг, 2 р/сутки). Забор тканей для патогистологического исследования осуществляли на 7 и 21 сутки. Иммунозависимый СД осуществляли инъекцией 0,2 мл полного адъюванта Фрейнда п/к с последующим ежедневным в/в введением стрептозотоцина 20 мг/кг в течение 5 суток [Ziegler В., et al., 1990]. На фоне развития иммунозави-симого СД осуществляли введение экстракта Гимнемы лесной (per os 280 мг/кг, 2 р/сутки). Забор тканей доя патогистологического исследования осуществляли на 3, 7, 14 и 21 сутки. Стрептозотоцин-никоти-намид-индуцированный СД вызывали инъекцией стрептозотоцина (интраперитониально - 65 мг/кг) с предварительным (за 15 минут) введением никогинамида (интраперитониально - 230 мг/кг на 0,9%-м р-ре хлорида натрия) [Islam S., et al., 2007]. На фоне развития экспериментального диабета осуществляли введение метформина («Харман Фай-нокем», Индия) (интрагастрально, с 7 суток после моделирования СД в течение 28 суток 1 р/сутки по 100 мг/кг); глибенкламида («Hyderabad-500082», Индия) (интрагастрально, с 7 суток после моделирования СД в течение 28 суток 1 р/сутки по 5 мг/кг); диабенола («ООО След», Россия) (интрагастрально, с 7 суток после моделирования СД в течение 28 суток 1 р/сутки по 25 мг/кг); ванадий содержащего комплекса (интрагастрально, 100 мг/кг ежедневно в течение 14 суток, с 3 суток после введения стрептозотоцина); гликлазида (интрагастрально, 7,5 мг/кг ежедневно в течение 14 суток, с 3 суток после введения стрептозотоцина); а-липоевой кислоты (18 мг/кг) (табл. 2). Забор тканей для гистологического исследования осуществляли на 3,7, 21 и 28 сутки.

'Выражаем благодарность заведующему кафедрой фармакологии ВолгГМУ академику РАМН, ЗДН РФ, д. м. н., профессору А. А. Спасову, д. б. н., доценту М. П. Воронковой, к. м. н. ассистенту М. В. Чепурновой, к. м. н., ассистенту Н. И. Чепляевой за помощь в проведении исследования.

Таблица 2

Антидиабетические лекарственные средства (ЛС)

и лекарственные вещества (ЛВ), используемые для лечения экспериментального сахарного диабета

№ п/п Группы антидиабетических ЛС и ЛВ ЛС, ЛВ

1. Лекарственные средства, повышающие секрецию инсулина (секретогены) Производные сульфонилмочевины (ПСМ) 1. Глибенкламид 2. Гликлазид

3. Диабенол

2. Лекарственные средства, преимущественно повышающие чувствительность периферических тканей к инсулину (сенситайзеры действия инсулина) Бигу аниды Метформин

3. Лекарственные вещества, преимущественно повышающие чувствительность периферических тканей к инсулину (сенситайзеры действия инсулина) Соли ванадия Ванадий содержащий комплекс

4. Антио кси данты Липоевая кислота а-липоевая кислота

5. Инкретиномиметики Гимнемовые кислоты экстракт Гимнемы лесной

Морфологические методы исследования

Для патогистологического исследования поджелудочную железу разделяли на три фрагмента: кишечный, желудочный и селезеночный, затем фрагменты фиксировали в 10%-м р-ре нейтрального забуференного формалина. Парафиновые срезы монтировали на предметные стекла, обработанные адгезивным покрытием. Микропрепараты окрашивали гематоксилином и эозином по общепринятым методикам [Коржевский Д. Э., 2005]. Иммуногистохимическое исследование выполнено в лаборатории морфологии и иммуногистохимии ГБУ ВМНЦ. Для типирования А- и В-клеток островков использовали первичные антитела к инсулину и глюкагону, для изучения апоптоза и пролиферативной активности - первичные антитела к про- и анти-апоптогенным белкам (табл. 3).

Таблица 3

Первичные антитела, используемые при проведении ИГХ

№ п/п Антитела Клон Производитель

1. Инсулин Поликлональные DakoCytomation, Дания

клон Ab-6 (INS04 + INS05) Lab Vision, Великобритания

2. Глюкагон Поликлональные Novocastra, Великобритания

3. Каспаза-3 JHM62 Novocastra, Великобритания

Rb-1197-PO NeoMarkers, США

4. TRAIL (алоптоз индуцирующий лиганд фактора некроза опухоли) 27В12 Novocastra, Великобритания

5. MDM2 1В10 Novocastra, Великобритания

6. Вс1-2 sc-7382 Santa Cruz Biotechnology, США

7. Р53 (РаЪ 240) MS-104-P0 NeoMarkers, США

8. В ах Поликлональные BD Biosciences Pharmingen, США

9. PCNA Поликлональные Dako Cytomation, Дания

(PC10)MS-106-P0 NeoMarkers, США

10. Ki-67 (ядерный антиген пролиферирующих клеток) MIB-1 Dako Cytomation, Дания

ММ1 Novocastra, Великобритания

11. NOS-3 (эндотелиальная NO-синтаза) RN5 Novocastra, Великобритания

12. NF-kB (ядерный фактор кВ) Поликлональные DiagnosticBioSystems, США

Иммуногистохимическое исследование проводили в соответствии с протоколами фирм производителей с использованием систем детекции ABC, «UltraVision, «EnVision» и хромогеном — диаминобензи-дином (ДАБ), используя протокол высокотемпературной демаскировки антигенов [Kumar G. L., et al., 2009]. Характер иммуногистохими-ческой реакции оценивали с помощью визуально-аналоговой шкалы noAllredD. С., etal. (1998) или определяли удельное количество позитивно окрашенных клеток стандартизированными методами морфо-метрии в иммуногистохимии с помощью системы анализа изображений [Dabbs D. J., 2010].

Для выявления олигонуклеосомалъной фрагментаг^и ДНК in situ2 B-клеток панкреатических островков выполняли TUNEL-метод (терминальное дезоксиуридиновое нуклеотидное мечение «концов» с проявлением меченых биотином диаминобензидином) по стандартной методике [Петров С. В., Райхлин Н. Т., 2004].

Электронно-микроскопическое исследование3 выполнено на фрагментах поджелудочной железы, фиксированных в 4%-м р-ре па-раформа с последующей постфиксацией в 1 %-м растворе тетраоки-си осмия. После заливки в эпон-аралдит изготавливали полутонкие срезы с окраской метиленовым синим. Ультратонкие срезы толщиной 50-90 нм монтировали на медные сетки. После контрастирования в 2,5%-м растворе уранилацетата на 50°-м этаноле в течение 40 минут и 0,3%-м растворе цитрата свинца в течение 20 минут срезы изучались в электронном микроскопе Tesla BS-500 при ускоряющем напряжении 60 кВ.

Морфометрический анализ проводили с помощью компьютерной программы «Видео ТестМорфо-4» (Россия). Определяли объемную долю (ОД, %) островков по отношению к экзокринной части железы, площадь островков (S, мкм2), объемную долю эндокриноцитов А и В по отношению к площади островков (ОД, %), удельное количество B-клеток панкреатических островков по отношению ко всей клеточной популяции островков (%), площадь ядер эндокриноцитов В (S, мкм2), а также объемную долю (ОД, %) и диаметр (Д, нм) секреторных гранул при ультраморфометрии. Определяли индекс апоптоза и пролиферации как отношение каспаза-3-, TUNEL-, Kj-67- и PCNA-позитивных эндокриноцитов к общему количеству эндокриноцитов панкреатических островков (%).

Результаты экспериментов обрабатывались методами базисного статистического анализа на ПК с использованием программ Excel Microsoft Office (Microsoft, USA) и STATISTICA 6.0 (Stat Soft Inc.,

-Выражаем благодарность заведующему лабораторией патоморфо-логии ФГУП НИИ гигиены, токсикологии и проф. патологии ФМБА России А. Я. Почепцову и н. с. Ю. И. Великородной за помощь в проведении исследования.

3 Выражаем благодарность сотруднику лаборатории морфологии и иммуногистохимии Волгоградского медицинского научного центра н. е., к. м. н. М. В. Шмидту за помощь в проведении исследования.

USA). Анализ параметров при нормальном распределении значений проводили с помощью критерия Стьюдента с вероятностью ошибки р < 0,05, анализ непараметрических количественных признаков - с помощью критерия Манна-Уитни. Для сравнения качественных признаков использовали критерии и Фишера. Проводили анализ корреляционной зависимости между морфометрическими и иммуногисто-химическими показателями [Кучеренко В. 3., 2006].

Результаты исследования и их обсуждение

Развитие аллоксан-, стрептозотоцин-, стрептозотоцин-никотина-мид-индуцированного и иммунозависимого СД по сравнению с контрольной интактной группой животных сопровождалось статистически достоверными (р < 0,05) изменениями клинико-биохимических показателей: снижением массы тела, увеличением потребления жидкости, гипергликемией и уменьшением концентрации инсулина и С-пептида плазмы крови, увеличением концентрации гликозилирован-ного гемоглобина.

Течение аллоксан-индуцированного диабета во все сроки наблюдения сопровождалось явлениями полнокровия, отека и деструктивных изменений панкреатических островков с тенденцией к уменьшению на 14 сутки эксперимента. При морфометрическом исследовании с 7 по 14 сутки эксперимента отмечалось статистически достоверное уменьшение объемной доли и удельного количества В-кле-ток и достоверное увеличение объемной доли А-клеток желудочного и селезеночного отделов поджелудочной железы. На 21 сутки объемная доля и удельное количество B-клеток были достоверно снижены во всех отделах, а объемная доля А-клеток - увеличена. Достоверных изменений в объемной доле островков их размеров и площади ядер не отмечалось на протяжении всего эксперимента. При имму-ногистохимическом исследовании наряду с выраженными некротическими изменениями клеток островков поджелудочной железы определялось увеличение апоптогенной активности эндокриноцитов в период с 7 по 14 сутки. Отмечалось умеренное цитоплазматическое окрашивание при использовании антител к каспазе-3, Вах и негативное окрашивание к белкам р53, TRAIL и Вс1-2. Различия интенсивности иммунного окрашивания клеток, вступающих в апоптоз при определении белка р53 и каспазы-3, вероятнее всего, можно объяснить тем, что активация апоптоза не сопровождается накоплением проте-

ина р53 в количествах, необходимых для его визуализации, или осуществляется без его участия. Каспаза-3, напротив, является ключевым ферментом каскадного цикла, участвующим в протеолизе белков ядра и цитоплазмы клетки, и может экспрессироваться не только при активации гена р53, но и при активации других сигнальных путей [Петров C.B., Райхлин Н. Р., 2004]. В эндотелии кровеносных капилляров визуализировалась умеренная экспрессия эндотелиальной NOS-3, что согласуется с литературными данными об участии оксида азота (N0) в цитотоксических эффектах, так как низкая концентрация N0 в клетках ингибирует индуцибельные формы NO-синтазы, уменьшая повреждение ДНК [Спор М., 2008]. Индекс апоптоза по сравнению с интактной группой достоверно увеличивался во все сроки наблюдения и достигал максимума (17,4 ± 0,9 %) на 7 сутки. Происходило уменьшение экспрессии ядерных белков NF-kB и MDM2, что свидетельствовало о развитии оксидативного стресса [MariappanN., 2010]. К 21 суткам интенсивность экспрессии маркеров апоптоза значительно уменьшалась. При проведении TUNEL-метода обнаруживалось увеличение количества клеток с позитивно окрашенными ядрами во все сроки эксперимента (рис. 1). Начиная с 7 суток эксперимента, в панкреатических островках происходило достоверное увеличение (р < 0,05) количества PCNA-позитивных клеток по отношению к интактной группе. Достоверных изменений количества Ki-67-позитив-ных эндокриноцитов по сравнению с группой интактного контроля не отмечалось на протяжении всего эксперимента (рис. 2). Увеличение количества PCNA-позитивных клеток на фоне низкой пролифератив-ной активности можно расценивать как активацию внутриклеточных репаративных процессов в эндокриноцитах В, так как ядерный антиген пролиферирующих клеток экспрессируется не только при делении клеток, но и при репарации ДНК [Петров С. В., Райхлин Н. Т., 2004; Essers J., et al., 2005].

Из литературных данных известно, что токсичность аллоксана обусловлена образованием активных форм кислорода и перекиси водорода, что сопровождается окислением SH-групп белков и повреждением ДНК с выраженным развитием некротических изменений В-клеток [Szkudelski Т., 2001; Szkudelski Т., 2012]. Важным эффектом аллоксановой цитотоксичности является нарушение интрацеллюляр-ного гомеостаза кальция, что влечет за собой поступление кальция из внеклеточной жидкости и его мобилизацией из внутриклеточных

депо в силу деполяризации клеточных мембран и мембран митохондрий В-клеток [Sakurai К7, et al., 2001; Srinivasan К., Ramarao P., 2007]. На этом фоне сверхсинтез белка - промотора Вах — приводит к дестабилизации мембран митохондрий с высвобождением цитохрома С в цитоплазму и активацией эффекгорных каспаз [Wu Н. С., et al., 2011], что ведет к завершению митохондриального сигнального пути апоптоза, вызванного повреждением ДНК [Мушкамбаров Н. Н., Кузнецов С. Л., 2003; Nakayama Т., et al., 2004; Karp G., 2010].

Развитие стрептозотоцин-индуцированного СД сопровождалось характерными патогистологическими изменениями в виде выраженных некробиотических изменений эндокриноцитов островков в период с 7 по 21 сутки эксперимента. По сравнению с интакгным контролем начиная с 7 суток происходило статистически значимое уменьшение объемной доли и удельного количества В-клеток во всех изучаемых отделах железы с достоверным увеличением объемной доли A-клеток только в селезеночном отделе. В островках селезеночного отдела поджелудочной железы также прослеживалось увеличение площади ядер эндокриноцитов. Иммуногистохимически в большинстве эндокриноцитов отмечалось выраженное иммунное окрашивание к проапоптотическим белкам - каспаза-3, TRAIL, NOS-3 и Вах на 7 сутки, которое уменьшалось к 21 суткам эксперимента.

В многочисленных экспериментах показано, что основной причиной индуцированной стрептозотоцином гибели В-клеток является алкилирование ДНК за счет образования таких токсических соединений, как супероксид анион, пероксинитрит и оксид азота [Bedoya F., et al., 1996; Eisner M., et al., 2000]. Таким образом, избирательная цитотоксичность стрептозотоцина обусловлена разрушением системы антиоксидантной защиты и фрагментацией ДНК В-клеток и не имеет индивидуальной вариабельности, так как он повреждает В-клет-ки у всех животных разных видов [Morgan N. G., et al., 1994]. На клеточном уровне токсические эффекты стрептозотоцина реализуются за счет развития некротических процессов и апоптоза. Выраженная экспрессия проапоптогенных протеинов каспаза-3 и TRAIL свидетельствует об инициации внешнего рецепторного пути активации апоптоза, так как экстрацеллюлярная активация апоптоза осуществляется в результате взаимодействия специфических лигандов с соответствующими клеточными рецепторами, в том числе и TRAIL [Baud V., Karin M„ 2001; Alladina S. J., et al., 2005; Кротова Ю. H.,

Каркищенко В. Н., Хлопонин Д. П., 2005; Князькин И. В., Цыган В. Н., 2007]. Доказано, что активация каспазного каскада может осуществляться при экспрессии протеина TRAIL, однако эффективность TRAIL-индуцированного апоптоза определяется процессами синтеза и распада эндогенного фактора NF-kB [Рыжов С. В., Новиков В. В., 2002; Alladina S. J., et al., 2005]. Протеин NF-kB - один из главных внутриклеточных мишеней при гипергликемии и окислительном стрессе, который играет ключевую роль в реакции воспаления, иммунном ответе и апоптозе В-клеток [Evans J. L., 2002]. Известно, что ингиби-рование синтеза белка NF-kB защищает В-клетки панкреатических островков человека от рецепторного пути активации апоптоза [Giannoukakis N., et al., 2000], также имеются экспериментальные данные по ингибированию индуцированного фактором NF-kB В-клеточно-го апоптоза на очищенной культуре инсулиноцитов крыс [Heimberg Н., et al., 2001; Maedler К., et al., 2002].

TUNEL-позитивные клетки обнаруживались как в центральных, так и в периферических отделах островков на протяжении всего периода исследования. Экспрессия протеинов Bcl-2, MDM2, NF-kB была значительно снижена. На 7 сутки статистически достоверно увеличивался индекс апоптоза с тенденцией к уменьшению к 21 суткам наблюдения (рис. 1). Во все сроки наблюдения отмечалось умеренное увеличение экспрессии эндотелиальной нитрооксидсинтазы-3 (NOS-3) в капиллярах панкреатических островков, что расценивается как признак эндотелиальной дисфункции [Calles-Escandon J., 2001; Hadi A. R., 2007]. PCNA- и Ki-67-позитивно окрашенные клетки определялись в составе эндокриноцитов панкреатических островков, а также встречались единичные иммунопозитивные клетки среди аци-нарной ткани и эпителия внутридольковых протоков, что свидетельствует об активации регенераторных процессов, однако.наличие единичных внеостровковых инсулиноцитов может встречаться в поджелудочной железе интактных животных [Trucco М., 2005].

По сравнению с контрольной интактной группой индекс пролиферации оставался достоверно выше (рис. 2), что согласуется с литературными данными о подавлении синтеза ДНК и пролиферации клеток, ингибированием митоза и активацией апоптоза на фоне действия стрептозотоцина [SzkudelskiT., 2012].

Патогистологические изменения при иммунозависимом диабете во все сроки наблюдения свидетельствовали о значительном

уменьшении объемной доли и удельного количества B-клеток на 46,7 (Р < 0,01) и на 67,5 % (Р < 0,01) соответственно по сравнению с контрольной группой за счет выраженных некробиотических изменений клеток и воспалительной инфильтрации панкреатических островков на 7 и 14 сутки. В селезеночном отделе железы на протяжении всего периода наблюдения отмечалось статистически значимое увеличение объемной доли эндокриноцитов А, а на 21 сутки - в желудочном. С 14 суток определялись частично склерозированные островки. При электронной микроскопии отмечалось набухание митохондрий, кари-опикноз, визуализировались фрагменты разрушенной гранулярной эн-доплазматической сети (ГЭС) и комплекса Гольджи (КГ). В отдельных эндокриноцитах В ядерный хроматин конденсировался и располагался в периферических отделах ядра, в цитоплазме отмечалось появление единичных липидных включений, элементы ГЭС и КГ были резко расширены и вакуолизированы. Секреторные гранулы располагались неравномерно в виде небольших скоплений у разных полюсов клетки, их объемная доля составляла 10,3 %, а диаметр 302-,5 ± 43,4 нм. Аналогичные ультрамикроскопические изменения инсулиноцитов обнаруживаются при исследовании биопсий поджелудочной железы человека и экспериментальных животных при сахарном диабете [Се-вергина Э. С., 2002; PavelkaM., 2010].

В большинстве эндокриноцитов В на 7 и 14 сутки происходило увеличение экспрессии проапоптогенного протеина TRAIL и каспазы-3 с незначительным уменьшением к 21 суткам, увеличение TUNEL-no-зитивных ядер, визуализирующихся во многих островковых клетках. Разница в количестве TUNEL-позитивных клеток и клеток, экспресси-рующих каспазу-3, объяснима с позиций развития стадий апоптоза. Процесс апоптоза занимает несколько часов, в течение которых последовательно осуществляются все стадии запрограммированной клеточной гибели: сигнальная, эффекторная и деградация [Karp G., 2010; Reed J. С., Green D. R., 2011], однако активация эффекторной каспа-зы-3 осуществляется раньше, чем происходит олигонуклеосомаль-ная фрагментация ДНК, чем и обусловлена разница в количестве B-клеток, выявляемых при проведении иммуногистохимического исследования и гибридизации in situ [МанскихВ. Н., 2004].

Индекс апоптоза во все сроки наблюдения был достоверно увеличен по сравнению с интактной контрольной группой (рис. 1). Усиливалась экспрессия NO-синтазы в эндотелии капилляров панкреати-

ческих островков во все сроки наблюдения. Отмечалась умеренная экспрессия факторов пролиферации клетках островков Лангер-ганса. Достоверное увеличение PCNA-позитивных клеток отмечалось на протяжении всего эксперимента, а Ki-67-позитивных-только на 14 сутки (рис. 2).

При экспериментальном стрептозотоцин-никотинамид-ин-дуцированном диабете отмечались мозаичные незначительные деструктивные изменения эндокриноцитов панкреатических островков с уменьшением удельного количества В-клеток на 21,8 % (р < 0,05) во всех отделах поджелудочной железы и объемной доли на 26,9 и 27,4 % соответственно в желудочном и селезеночном отделах на 21-28 сутки эксперимента. При этом определялось увеличение площади ядер В-клеток на протяжении всего наблюдения и во всех отделах железы. В части островков на 21-28 сутки исследования визуализировались очаговые склеротические изменения. Выявлялось умеренное количество TUNEL-позитивных ядер эндокриноцитов в части панкреатических островков. При иммуногистохими-ческом исследовании во все сроки эксперимента отмечалось отсутствие или сомнительная экспрессия проапоптогенных протеинов, за исключением умеренно выраженной экспрессии каспазы-3. Индекс апоптоза был незначительный (рис. 1). Достоверных изменений с контрольной интактной группой в экспрессии протеинов Ki-67 и PCNA не отмечалось на протяжении всего эксперимента (рис. 2).

В отличие от модели стрептозотоцин-индуцированного диабета превентивное введение никотинамида непосредственно перед инъекцией стрептозотоцина минимизирует его повреждающее действие и оказывает цитопротекгивное действие на инсулиноциты островков Лангерганса. Механизм действия никотинамида связан с угнетением активности поли (АДФ-рибозо) полимеразы и (моно) АДФ-рибозил-трансфераз, что предотвращает снижение уровня NAD+ и АТФ в В-клетках и препятствует их некрозу [Полторак В. В., 2001; Szkudelski Т., 2012]. В литературе описаны важные цитопротекторные свойства никотинамида, которые заключаются в снижении повреждений ДНК, обусловленных действием стрептозотоцина [Bedoya F. J., et al., 1996; СЫТ. S., et al., 2007]. Поданным ряда авторов терапия никотинамидом приводит к существенному увеличению частоты клинической ремиссии СД со снижением потребности в экзогенном инсулине [Pozzilli Р., 1997; Crino А., 2004], однако клинико-экспериментальные исследова-

ния о профилактическом действии никотинамида противоречивы и требуют дальнейшего уточнения.

Рис. 1. Сравнительная характеристика индекса апопгоза эвдокриноцитов при экспериментальном сахарном диабете.

Примечание: Аллоксан - аплоксан-индуцированный диабет; СТЗ — стрептозотоцин-индуцированный диабет; Иммунозависимый -иммунозависимый диабет; СТЗ-НА — стрептозотоцин-никотинамид-индуцированный диабет; * — достоверно по отношению к контролю

Рис. 2. Сравнительная характеристика индекса пролиферации эвдокриноцитов при экспериментальном сахарном диабете.

Примечание: Аллоксан — аллоксан-индуцированный диабет; СТЗ — стрептозотоцин-индуцированный диабет; Иммунозависимый — иммунозависимый диабет; СТЗ-НА — стрептозотоцин-никотинамид-индуцированный диабет; * — достоверно по отношению к контролю

На фоне введения изучаемых групп лекарственных средств (сен-ситайзеры инсулина, антиоксиданты, секретогены, инкретиномиме-тики) отмечались статистически достоверные изменения в динамике клинико-биохимических показателей: увеличивалась масса тела (на 14 сутки), уменьшалось потребление жидкости (на 7 сутки), нор-мализовывались уровень глюкозы крови (на 7 сутки), концентрация инсулина (на 7 сутки) и С-пептида (на 21 сутки) плазмы крови, уменьшался уровень гликозилированного гемоглобина (на 28 сутки).

Морфофункционалъные изменения панкреатических островков под действием сенситайзеров инсулина (бигуаниды) на модели стрептозотоцин-никотинамид-индуцированного диабета. При гистологическом исследовании в ткани поджелудочной железы признаки воспаления отсутствовали. Площадь панкреатических островков и их объемная доля достоверно не изменялись как по отношению к интактному контролю, так и по отношению к группе диабета во все сроки наблюдения. Определялось достоверное уменьшение объемной доли и удельного количества В-клеток по сравнению с ин-тактной контрольной группой в селезеночном отделе на 7 и 21 сутки на 26,3 (р < 0,05) и 21,5 % (р < 0,05) соответственно, а в желудочном - на 21 сутки на 32,2 % (р < 0,05). При этом отмечалось статистически значимое увеличение площади ядер эндокриноцитов В во всех отделах железьг с 7 по 21 сутки. По сргвнению с группой сахарного диабета значимых статистических изменений морфометрических параметров не отмечалось. В отдельных островках определялись единичные Т1ЖЕЬ-позитивные В-клетки. При иммуногистохимическом исследовании во все сроки эксперимента отмечалась умеренно выраженная экспрессия каспазы-3. Индекс апоптоза был сопоставим с группой сахарного диабета (табл. 4). Достоверных изменений с контрольной группой и группой экспериментального диабета по уровню экспрессии протеинов Кл-67 и РСЫА не отмечалось (табл. 4).

В последнее время широко применяется комбинированная терапия, включающая в себя, помимо ПСМ, несульфанилмочевинные стимуляторы секреции инсулина и бигуакиды, однако препараты этих групп могут оказывать действие только в присутствии эндогенного инсулина, восстанавливая раннюю секрецию инсулина. Бигуаниды не обладают панкреатотропным действием, а снижают гипергликемию путем угнетения образования глюкозы (глюконеогенеза) в печени, т. е. подавляют глюконеогенез в печени и увеличивают периферическую

- утилизацию глюкозы [Kirpichnikov D., et al., 2002; Robinson J. Т., et al., 2005]. Учитывая литературные данные об отсутствии достоверных изменений в уровне апоптотической и пролиферативной активности В-клегок, увеличение площади ядер эндокриноцитов В во всех отделах железы вполне объяснимо с позиций их компенсаторной гипертрофии.

Таблица 4

Динамика пролиферативной активности и индекса апоптоза

эндокриноцитов панкреатических островков при стрептозотоцин-никотинамид-индуцированном диабете на фоне введения сенситайзеров инсулина (бигуаниды)

Группы Длительность эксперимента, сутки Индекс апоптоза, % каспаза-3 позитивных клеток Индекс пролиферации, %

PCNA-позитивные клетки Ki-67-позитивные клетки

Интактный контроль 7 3,9 ±0,1 2,8 ± 1,0 1,2 ±0,3

14 4,2 ± 1,0 3,2 ± 0,7 1,4±0,4

21 4,0 ± 1,1 3,1 ± 1,0 1,6 ±0,2

28 3,6 ±0,9 2,9 ±1,3 0,9 ±1,1

сд 7 7,7 ± 1,6* 5,3 ±2,2* 2,0 ± 1,8

14 8,1 ±1,9* 9,2 ± 1,6* 2,2 ± 1,4*

21 7,3 ±1,6* 10,3 ± 1,5* 2,4 ± 1,5

28 6,2 ±2,1 3,5 ±2,7 1,9 ± 1,2

СД + сенситайзер инсулина (метформин) 7. 5,7 ± 0,2 4,2 ± 1,2 2,0 ±1,0

14 6,8 ± 1,4 3,9 ± 2,5 2,3 ± 1,6

21 4,9 ± 1,3 4,1 ± 1,6 1,9 ± 1,3

28 5,8 ±2,3 5,0 ± 1,7 2,1 ± 1,7

* — достоверно по отношению к интактному контролю (р<0,05).

Морфофункционалъные изменения панкреатических островков под действием сенситайзеров инсулина (ванадий содержащий комплекс) на модели стрептозотоцин-никотинамид-инду-цированного диабета. При микроскопическом исследовании отмечалось умеренное полнокровие капилляров островков. ОД островков по отношению к интактному контролю достоверно снижалась в желудочном и селезеночном отделах, а по сравнению с группой животных с экспериментальным диабетом - достоверно увеличивалась только в селезеночном отделе железы. Определялась мозаичность повреждения островков и эндокриноцитов: нормальные по гистологическому строению островки чередовались с островками с признака-

ми деструкции (ранние сроки наблюдения) или с частично склерози-рованными островками в отдаленные сроки эксперимента. Отмечено увеличение площади ядер инсулиноцитов на 23,9 % (р < 0,05) в кишечном отделе железы по сравнению с интакгным контролем. При иммуногистохимическом исследовании выявлялись единичные ТиКЕЬ-позитивные клетки. В отдельных эндокриноцитах определялась незначительная экспрессия каспазы-3. Индекс апоптоза был низкий, пролиферативкая активность увеличивалась незначительно (табл. 5). Таким образом, структурные изменения поджелудочной железы на фоне введения ванадий содержащего комплекса характеризуются не только увеличением объемной доли панкреатических островков, но и гипергрофией их ядер.

Таблица 5

Динамика пролиферативной активности и индекса апоптоза

эндокриноцитов панкреатических островков при стрептозотоцин-никотинамид-индуцированном диабете на фоне введения сенситайзеров инсулина (ванадий содержащий комплекс)

Группы Длительность эксперимента, сутки Индекс апоптоза, % каспаза-3 позитивных клеток Индекс пролиферации, %

РСЫА-позитивные клетки Кл-67-позитивные клетки

Интактный контроль 7 3,9 ±0,1 2.8 ± 1,0 1,2 ±0,3

14 4,2 ± 1,0 3,2 ± 0,7 1,4 ±0,4

21 4,0 ± 1,1 3,1 ± 1,0 1,6 ±0,2

28 3,6 ± 0,9 2,9 ±1,3 0,9 ±1,1

сд 7 7,7 ± 1,6* 5,3 ± 2,2* 2,0 ± 1,8

14 8,1 ±1,9* 9,2 ± 1,6* 2,2 ± 1,4*

21 7,3 ± 1,6* 10,3 ± 1,5* 2,4 ± 1,5

28 6.2 ±2,1 3,5 ± 2,7 1,9 ±1,2

СД+ сенситайзер инсулина (ванадий содержащий комплекс) 7 5,7 ± 0,2 5,3 ±1,2 2,2 ±1,1

14 6,8 ± 1,4 4,9 ± 2,4 2,4 ±1,2

21 4,9 ± 1.3 5,1 ± 1,2 2,9 ±1,4

28 5,8 ±2,3 5,2 ±1,4 2,2 ± 1,3

* - достоверно по отношению к интактному контролю (р<0,05).

Морфофунщиональные изменения панкреатических островков под действием секретогенов (производные сульфонилмочеви-ны) на модели стрептозотоцин-никотинамид-индуцированного диабета. При микроскопическом исследовании отмечались мозаичные изменения в виде деструкции единичных В-клегок отдельных островков в ранние сроки наблюдения и очаговые склеротические изменения в поздние сроки. По отношению к интактному контролю объемная доля островков Лангерганса оставалась достоверно уменьшена, а по сравнению с СД - достоверно увеличивалась. Происходило уменьшение удельного количества и ОД В-клеток во всех отделах железы с достоверным увеличением по отношению к контрольной группе площади ядер В-клеток на протяжении всего эксперимента. Индекс апоптоза составлял от 2,4 до 4,5 % (табл. 6), так как определялись единичные ТЦЫЕЬ-позитивные и каспазы-3 позитивные клетки. Индекс пролиферации был сопоставим с группой СД (табл. 6).

Таблица 6

Динамика пролифератнвной активности и индекса апоптоза

эндокриноцитов панкреатических островков при стрептозотоцин-никотинамид-индуцированном диабете на фоне введения секретогенов (производные сульфонилмочевины)

Группы Длительность эксперимента, сутки Индекс апоптоза, % каспаза-3 позитивных клеток Индекс пролиферации, %

РСЫА-позитивные клетки К^-позитивные клетки

Интактный контроль 7 3,9 ±0,1 2,8 ± 1,0 1,2 ±0,3

14 4,2 ± 1,0 3,2 ± 0,7 1,4 ±0,4

21 4,0 ± 1,1 3,1 ± 1,0 1,6 ±0,2

28 3,6 ±0,9 2,9 ± 1,3 0,9± 1,1

СД 7 7,7 ±1,6* 5,3 ± 2,2* 2,0 ±1,8

14 8,1 ± 1,9* 9,2 ±1,6* 2,2 ± 1,4*

21 7,3 ± 1,6* 10,3 ±1,5* 2,4 ±1,5

28 6,2 ±2,1 3,5 ± 2,7 1,9 ±1,2

СД+секретогены (производные сульфонилмочевины) 7 2,4 ± 1,2 4,3 ± 1,4 1,7 ±1,1

14 3,8 ±2,4 4,5 ± 1,3 1,4 ±1,2

21 4,5 ± 2,3 4,2 ± 1,2 2,0 ±1,1

28 4,3 ± 1,3 5,1 ± 1,5 22 ± 1,7

* — достоверно по отношению к интактному контролю (р< 0,05).

Поскольку производные сульфонилмочевины (ПСМ) влияют на способность стимулировать секрецию инсулина В-клетками поджелудочной железы [ЕЬегК А. М., 1990; Мамедов М. Н., 2006], результатом их действия становится высвобождение запасов инсулина из внутриклеточных гранул и выброс инсулина в кровь [Галстян Г. Р., 2007]. Проведенные ранее гистологические исследования инсулярного аппарата поджелудочной железы на интакгных животных выявляли панкреатотропное действие препаратов сульфонилмочевины 2-го поколения, которое заключалось в гипертрофии островков и В-клеток, слабой активации пролиферативных процессов, усилении миграции секреторных гранул и высвобождении инсулина с последующим истощением функционального резерва инсулиноцитов [РГе1йег Е. Б., & а]., 1974; Балаболкин М. И., 2007; Уильямз Г., Пикап Д., 2007]. Результаты нашего исследования указывают на возможность развития аналогичных структурных изменений островкового аппарата при па-томорфозе стрептозотоцин-никотинамид-индуцированного диабета.

Морфофункциональные особенности панкреатических островков при введении секретогенов (диабенол) на модели стреп-пюзотоцин-никотинамид-индуцированного диабета. На протяжении всего эксперимента при гистологическом исследовании определялись мозаичные структурные изменения (некротические и склеротические изменения). При морфометрическом анализе были выявлены статистически недостоверные изменения в виде увеличения ОД островков, удельного количества и ОД В-клеток по отношению к группе с диабетом. Отмечалось статистически достоверное увеличение площади ядер В-клеток во всех отделах железы на 23,8 %. Индексы апоптоза и пролиферации изменялись незначительно по сравнению с группой сахарного диабета (табл. 7).

В проведенных исследованиях установлено, что диабенол усиливает секрецию инсулина, усиливает биологическое действие инсулина на периферические ткани при СД и проявляет антиагрегантную активность [Спасов А. А. с соавт., 1999; Ки-рюИшсоу Б., е! а1., 2002; Дедов И. И. с соавт., 2008; Р1зшап Е. г., ТепепЬаит А., 2009]. Ранее полученные экспериментальные данные по изучению механизмов действия свидетельствуют о присутствии как панкреотропных, так и экстрапанкреатических эффектов у диабенола. В экспериментах по исследованию секретогенной активности диабенола в ответ на его внутривенное введение наблюдалось увеличение инсулина в крови,

сочетающееся с сахароснижающим эффектом, что является прямым доказательством инсулинотропного эффекта, основанного на стимулировании функционально способных В-клеток островков Лангерган-са [Дудченко Г. П., 2001]. В наших исследованиях патогистологичес-кие изменения инсулярного аппарата в виде увеличения ОД островков, удельного количества и ОД В-клеток, увеличение площади ядер В-клеток подтверждают возможность увеличения синтетической активности инсугшноцитов под влиянием диабенола..

Таблица 7

Динамика пролиферативной активности и индекса апоптоза

эндокриноцитов панкреатических островков при стрептозотоцин-никотинамид-индуцированном диабете на фоне введения секретогенов (диабенол)

Группы Длительность эксперимента, сутки Индекс апоптоза, % каспаза-3 позитивных клеток Индекс пролиферации, %

РСЫА-позитивные клетки К1-67-позитивные клетки

Интактный контроль 7 3,9 ±0,1 2,8 ± 1,0 1,2 ±0,3

14 4,2 ± 1,0 3,2 ± 0,7 1,4 ±0,4

21 4,0 ±1,1 3,1 ± 1,0 1,6 ±0,2

28 3,6 ± 0,9 2,9 ± 1,3 0,9 ± 1,1

сд ■ 7 7,7 ± 1,6* 5,3 ±2,2* 2,0 ± 1,8

14 8,1 ± 1,9* 9,2 ± 1,6* 2,2 ± 1,4*

21 7,3 ± 1,6* 10,3 ± 1,5* 2,4 ± 1,5

28 6,2 ±2,1 3,5 ± 2,7 1,9 ± 1,2

СД + секретоген (диабенол) 7 6,5 ±1,2 5,1 ± 1,3 2,1 ±1,2

14 7,9 ± 2,4 3,7 ± 1,5 2,5 ± 1,7

21 5,7 ±2,3 4,0 ± 1,7 1,5 ±1,0

28 6,8 ± 2,9 4,9 ± 1,3 2,4 ±1,6

* - достоверно по отношению к интактному контролю (р<0,05).

Морфофункционалъные изменения панкреатических островков под действием антиоксидантов (а-липоевая кислота) на модели стрептозотоцин-никотинамид-индуцированного диабета. При морфологическом исследовании в ранние сроки эксперимента в отдельных островках поджелудочной железы определялись признаки незначительного полнокровия, отека и перифокальной инфильтрации макрофагами и единичными нейтрофильными гранулоцитами.

К 21 суткам эксперимента в островках Лангерганса определялись участки очагового склероза. Происходило увеличение удельного количества В-клеток в панкреатических островках, особенно выраженные в желудочном и селезеночном отделах на 14,2 и 13,3 % (р < 0,05). При этом по сравнению с группой диабета не обнаруживалось достоверного увеличения объемной доли, а значимое уменьшение площади ядер отмечалось только в селезеночном отделе на 16,0 % (р < 0,05). Индексы апоптоза и пролиферации были сопоставимы с группой сахарного диабета (табл. 8). Таким образом, при курсовом пероральном введении антиоксидантов наблюдались мозаичные па-тогистологические изменения, достоверно увеличивалось удельное количество и ОД эндокриноцитов В по отношению к группе с сахарным диабетом, сохранялись признаки умеренной гипертрофии ядер инсулиноцитов. Введение антиоксидантов не препятствовало уменьшению объемной доли панкреатических островков.

Таблица 8

Динамика нролнферативной активности и индекса апоптоза

эндокриноцитов панкреатических островков при стрептозотоцин-никотинамид-индуцированном диабете на фоне введения антиоксидантов (а-липоевая кислота)

Группы Длительность эксперимента, сутки Индекс апоптоза, % каспаза-3 позитивных клеток Индекс пролиферации, %

РСЫА-позитивные клетки Ю-67- позитивные клетки

Интахтный контроль 7 3,9 ±0,1 2,8 ± 1,0 1,2 ± 0,3

14 4,2 ± 1,0 3,2 ± 0,7 1,4 ±0,4

21 4,0 ± 1,1 3,1 ± 1,0 1,6 ±0,2

28 3,6 ± 0,9 2,9 ± 1,3 0,9 ±1,1

сд 7 7.7 ± 1,6* 5,3 ± 2,2* 2,0 ± 1,8

14 8,1 ±1,9* 9,2 ± 1,6* 2,2 ± 1,4*

21 7,3 ± 1,6* 10,3 ± 1,5* 2,4 ± 1,5

28 6,2 ± 2.1 3,5 ± 2,7 1,9 ± 1,2

СД+антиоксиданты (а-липоевал кислота) 7 5,4 ± 2,2 3,1 ± 1,3 1,9 ± 1,1

14 5,4 ± 2,4 2,7 ± 1,5 1,3 + 1,2

21 4,2 ± 1,1 3,2 ± 2,6 1,7 ± 1,0

28 3,8 ± 1,3 4,1 ± 2,0 1,5 ± 1,3

* - достоверно по отношению к интактному контролю (р<0,05).

Учитывая низкий уровень содержания антиоксидантных ферментов, становится понятной высокая чувствительность инсулиноцитов поджелудочной железы к повреждающему действию свободных радикалов, что влечет к снижению экспрессии инсулина и активации апоптоза [Чистяков Д. А., 2000; Robertson R. Р., 2004; Robertson R. R, 2007]. Являясь антиоксидантом, липоевая кислота способна реализо-вывать свое действие как в цитозоле, так и на уровне плазматической мембраны, препятствуя свободно-радикальным процессам, вызванным введением цитотоксических агентов для моделирования СД [Biewenga G.,1997]. В эксперименте на моделях сахарного диабета 1 и 2 типа липоевая кислота проявляла гипогликемическую активность, вероятно, связанную с активацией трансмембранного транспорта глюкозы и некоторых этапов сигнального каскада инсулина [Чепляева Н. И., 2012]. Способность ЛК предотвращать окислительное повреждение островков поджелудочной железы была продемонстрирована в экспериментах на животных. ЛК защищала клетки поджелудочной железы от токсического действия стрептозогоцина и тем самым способствовала снижению уровня глюкозы и гликозилированного гемоглобина [Budin S. В., 2007], что подтверждается в наших исследованиях структурными изменениями в виде увеличения удельного количества В-кле-ток в желудочном и селезеночном отделах железы.

Морфофункционалъные особенности панкреатических островков при введении инкретиномиметиков (экстракт Гимнемы лесной) на модели аллоксан-индуцированного диабета. При па-тогистологическом исследовании отмечалось восстановление ОД островков кишечного отдела железы на 21 сутки эксперимента. Происходило увеличение ОД и удельного количества B-клеток желудочного, селезеночного отделов на 7,14 и 21 сутки с параллельным уменьшением ОД А-клеток желудочного, селезеночного отделов на 7 сутки и во всех отделах на 21 сутки наблюдения. При этом статистически значимое увеличение площади ядер В-эндокриноцитов отмечалась на 14 сутки только в желудочном отделе на 16,9 % (р < 0,05). Курсовое введение гимнемовых кислот способствовало достоверному снижению индекса апоптоза во все сроки эксперимента по сравнению с группой аллоксан-индуцированного диабета, наиболее выраженному, на 7 сутки (табл. 9). Происходило уменьшение Ki-67-позитивных эн-докриноцитов наравне с увеличением PCNA-позитивных клеток (на 62,3 и 14,6 % соответственно), что свидетельствовало об активации

репаративных процессов в инсулоцитах панкреатических островков, с одной стороны, и активации пролиферации с другой [Кагр в., 2010]. При сопоставлении динамики изменений в индексах апоптоза и пролиферации была выявлена статистически значимая (р < 0,05) обратная корреляционная зависимость (табл. 9).

Морфофунщионалъные особенности панкреатических островков при введении инкретиномиметиков (экстракт Гимнемы лесной) на модели стрептозотоцин-индуцированного диабета. Микроскопически отмечалось достоверное увеличение ОД панкреатических островков во всех отделах железы на 21 сутки эксперимента. Определялось статистически значимое увеличение ОД и удельного количества эндокриноцитов В островков кишечного, желудочного и селезеночного отделов во все сроки наблюдения с уменьшением ОД А-клеток во всех отделах на 14 и 21 сутки. Возникало достоверное снижение индекса апоптоза на 37,8 % в сочетании с достоверным увеличением индекса пролиферации во все сроки наблюдения максимально на 39,1 % по сравнению с группой иммунозависимого сахарного диабета (табл. 9).

Морфофунщионалъные особенности панкреатических островков при введении инкретиномиметиков (экстракт Гимнемы лесной) на модели иммунозависимого диабета. На 7 сутки в панкреатических островках на фоне выраженной инфильтрации лимфоцитами, нейтрофильными гранулоцитами и макрофагами, полнокровия капилляров отмечалась выраженная деструкция эндокриноцитов. Изменения в ОД островков, их площади, ОД А-клеток были не достоверны по отношению к группе интакгного контроля и группе иммунозависимого сахарного диабета на протяжении всего эксперимента, однако ОД и удельное количество эндокриноцитов В достоверно увеличивались по отношению к группе иммунозависимого сахарного диабета во всех отделах железы. Ядра инсулоцитов находились в состоянии умеренной гипертрофии, о чем свидетельствовало увеличение занимаемой ими площади. Инсулиноциты с большим количеством инсулин-позитивных включений располагались поодиночке или в виде мелких скоплений в центральных отделах островков. Глюка-гон-позитивные клетки визуализировались на периферии панкреатических островков. В период с 14 по 21 сутки эксперимента определялись единичные мелкие островки Лангерганса, которые располагались в тесной связи с внутридольковыми выводными протоками.

Сохранялись явления полнокровия капилляров островков, неравномерного отека и их воспалительной инфильтрации во всех отделах железы, однако эти изменения были менее выражены, чем в группе без — фармакологической коррекции. В отдельных островках на 21 сутки наблюдения определялся очаговый склероз. Визуализировались островки, содержащие только эндокриноциты В. Экспрессия факторов пролиферации носила выраженный характер: PCNA-позитивные клетки составляли 13,1 ± 1,9 % (р < 0,05), Ki-67-позитивные- 3,2 ± 0,2 % (р < 0,05), что на 12,9 и 39,1 % было выше, чем в группе с СД (табл. 9). Выявлялись PCNA-позитивные и Ki-67-позитивные клетки эпителия протоков и единичные клетки, расположенные в ацинарной ткани и в непосредственной близости от островков. Известно, что белок PCNA, в отличие от протеина Ki-67, экспрессируется не только на протяжении всего цикла клеточного деления, но также активно участвует в репарации ДНК [Rosa М. A., Galli М., Fadda G., et al., 2000; Paunesku Т., MittalS., ProcticM., et al., 2001], поэтому высокий уровень экспрессии PCNA в наших исследованиях можно расценивать как подтверждение регенерации в ткани поджелудочной железы при моделировании сахарного диабета [Papadopoulos I., Rudolph P., Wirthetal В., 1996; Beer Т., et. al., 1998]. Экспрессия белков р53, Вс1-2 носила слабо выраженный характер, Вах-негативное окрашивание. В большинстве B-клеток островков Лангерганса нарастала экспрессия протеина MDM2. В единичных В-инсулоцитах панкреатических островков отмечалась слабая экспрессия каспазы-3 и TRAIL, количество TUNEL-позитивных клеток было уменьшено (р < 0,05) по сравнению с группой диабета. Количество B-клеток в состоянии апоптоза по сравнению с животными с иммунозависимым СД достоверно уменьшалось (табл. 9). При ультрамикроскопическом исследовании выявлено достоверное уменьшение количества эндокриноцитов В по отношению к группам сравнения с признаками конденсации хроматина ядер, наличием липидных включений в цитоплазме, расширением и вакуолизацией компонентов ГЭС, КГ и отсутствием секреторных гранул. Секреторные гранулы располагались у одного из полюсов клетки и занимали ОД до 15,6 ± 1,0 %, диаметр секреторных гранул составлял 393,2 ± 41,6 нм, что на 4,6 и 3,6 %, соответственно, выше по сравнению с контрольной группой.

Таблица 9

Динамика пролиферативной активности и индекса апоптоза эндокриноцитов панкреатических островков на фоне введения инкретиномиметиков

Группы Длительность Индекс апоптоза, % Индекс пролиферации, %

эксперимента, каспаза-3 РСЫА- Кл-67-

сутки позитивных клеток позитивные клетки позитивные клетки

Интактный 3 4,1 ±0,2 3,0 ±0,2 1,5 ±0,3

контроль 7 3,9 ±0,1 2,8 ±1,0 1,2 ±0,3

14 4,2 ± 1,0 3,2 ± 0,7 1,4 ±0,4

21 4,0 ± 1,1 3,1 ±1,0 1,6 ±0,2

28 3,6 ± 0,9 2,9 ± 1,3 0,9 ± 1,1

Аллоксан- 3 10,2 ± 1,2* 4,2 ± 0,3* 2,1 ±0,4

индуцированный 7 17,4 ±0,9* 7.5 ± 1.2* 4,3 ± 2,2

СД 14 14,9 ± 1,0* 6,3 ± 1,4 3,2 ± 1,2

21 12,5 ±0,6* 5,5 ±0,9* 2,5 ± 1,0

Аллоксан- 3 5,2 ± 1,2** 5,1 ±1,2 1,7 ± 1,1

индуцированный 7 6,1 ±1,8** 6,4 ± 1,3 1,6 ± 1,0

СД + экстракт 14 5,8 ± 1,6** 5,7 ±1,2 1,7 ±0,9

Гимнемы лесной 21 4,7 ±2,0** 5,6 ±1,1 1,8 ± 1,0

СТЗ-индуцирован- 7 35,2 ± 2,9* 10,1 ±0,7* 2,3 ±0,1*

ный СД 14 27,4 ±2,3* 8,2 ±2,0* 2,0 ±0,8*

21 26,3 ± 2,0* 7,4 ± 1,9* 1,7 ± 1,0

СТЗ-индуцирован- 7 13,3 ± 1,1** 13,1 ± 1,9 3,2 ±0,2**

ный СД + экстракт 14 13,9 ± 1,3** 14,2 ± 2,3 3,1 ±0,9**

Гимнемы лесной 21 14,1 ± 1,4** 9,0 ±4,2 3,2 ± 1,2**

Иммунозависимый 7 35,2 ± 2,9* 10,1 ±0,7* 2,3 ±0,1*

СД 14 33,2 ±2,1* 9,8 ± 1,0* 2,2 ± 1,0*

21 29,4 ± 3,4* 7,8 ± 1,1* 2,1 ± 1,2*

Иммунозависимый 7 13,3 ±1,1** 13,1 ±1,9 3,2 ±0,2**

СД + экстракт 14 14,5 ± 2,1** 12,8 ± 1,1 3,1 ±2,3**

Гимнемы лесной 21 15,2 ± 1,7** 13,4 ±2,5 3,0 ±2,1**

* — достоверно по отношению к интактному контролю (р < 0,05); **- достоверно по отношению к группе СД (р < 0,05).

Механизм действия инкретиномиметиков заключается в стимулировании глюкозозависимой секреции инсулина и в значительной степени потенцировании инсулинотропной активности самой глюкозы; в замедлении скорости опорожнения желудка, снижении желудочной и панкреатической секреции. Инкретиномиметики влияют на пранди-альный подъем уровня глюкозы; на регуляцию пищевого поведения через центральные механизмы регуляции центра насыщения; снижа-

ют апоптоз B-клеток, увеличивают массу В-клегок из клеток предшественниц эпителия панкреатического протока, способствуя трансформации неинсулинпродуцирующих клеток в инсулинпродуцирующие, нео-генезу и пролиферации островков из стволовых клеток поджелудочной железы [Mier J. J., et al., 2001; David J. A., 2005; Rummey С., 2006; Hou J., et al., 2007]. Экспериментально установлено, что одним из направлений восстановления нарушенного каскадного механизма действия инсулина, сопровождающегося инсулинорезистентностью, является регуляция количества инкретинов, в частности GLP-1 [KarasikA., et al., 2006].

Способность инкретиномиметиков влиять на секрецию GLP-1, посредством которого усиливается секреторная активность, активируется регенерация B-клеток, а также ингибируется апоптоз, подтверждена многими исследователями [Gymnema Lawrence Rev., 1993; Kieffer T. J.. 2005; Kim D., 2005]. Полученные результаты вполне согласуются с литературными данными о способности инкретинов не только увеличивать уровень секреции инсулина, но и снижать скорость апоптоза В-эндокриноцитов, а также стимулировать их пролиферацию [Fushiki T., et al., 1992]. Предполагается, что фармакологические эффекты при применении инкретиномиметиков реализуются с помощью следующих механизмов: модуляция активности инкретинов; стимуляция секреции и высвобождения инсулина; регенерация B-клеток островков Лангерганса [Shanmugasundaram Е. R., 1990]. Кроме того, в наших исследованиях на моделях аллоксан-, стрепто-зотоцин-индуцированного и иммунозависимого СД при применении инкретиномиметиков определены морфологические признаки достоверного увеличения секреторной активности и регенерации В-клеток со снижением индекса апоптоза инсулиноцитов. Возможность регенерации эндокриноцитов В путем неогенеза панкреатических островков из эпителия протоков, ациноинсулярной трансформации или по альтернативному пути - дифференцировке клеток-предшественниц, расположенных в панкреатических островках, обусловлена особенностями эмбрионального развития железы и сохранением клеток-предшественниц [Иванова В. Ф., Пузырев А. А., 2006]. Полученные нами результаты вполне согласуются с материалами исследования, в котором авторы предположили, что применение инкретиномиметиков увеличивало уровень инсулина за счет регенерации B-клеток поджелудочной железы, а не за счет истощающей секреции инсулина

[Chattopadhyay R. R., 1998; Ogawa Y., 2004]. Значит, есть вероятность того, что гипертрофия эндокриноцитов В происходит за счет повышения секреции GLP-1 и GIP [Murakami N.. 1996].

Таким образом, результаты эксперимента свидетельствуют о том, что антидиабетические эффекты препаратов с инкрегиномиметичес-ким действием проявляются на различных моделях экспериментального диабета в виде повышения статистически достоверных структурных изменений: восстановления ОД островков - на 21 сутки эксперимента; увеличения ОД и удельного количества В-клеток - на 7, 14 и 21 сутки во всех отделах; уменьшения ОД А-клеток желудочного, селезеночного отделов - на 7 сутки и во всех отделах - на 21 сутки. Курсовое введение инкретиномиметиков вызывало достоверное снижение индекса апоптоза и способствовало репаративной регенерации В-эндокриноцитов (увеличение индекса пролиферации) во все сроки наблюдения.

Изучение структурных преобразований в эндокринном аппарате поджелудочной железы при сахарном диабете представляет собой динамически развивающийся процесс, который требует исследования особенностей морфофункциональных изменений при разработке новых антидиабетических лекарственных средств, поэтому сопоставление структурных изменений в В-клетках в одном исследовании на всех моделях экспериментального сахарного диабета без лечения и при его фармакологической коррекции практически невозможно. Нами проведено выявление фенотипических особенностей эндокриноцитов В с использованием комплексного многоуровневого морфологического анализа, включающего иммуногистохимическое, электронно-микроскопическое исследование и количественную обработку данных, что позволило выявить на моделях цитотоксически-инду-цированного сахарного диабета различные пути реализации повреждения В-клеток, в т. ч. апоптоза, а также охарактеризовать закономерности репаративных изменений в островковом аппарате поджелудочной железы с учетом ее зональности.

Выводы

1. Морфофункциональные изменения при аллоксан-индуцирован-ном сахарном диабете характеризуются патогномоничными клини-ко-лабораторными признаками, а также преобладанием некротических изменений в В-клетках с уменьшением их объемной доли на 16,7 и 35,7 % (р < 0,05) и удельного количества на 53,3 и 56,8 % (р < 0,05) на 7 и 21 сутки соответственно в селезеночном отделе, относительным увеличением объемной доли А-клеток и статистически значимым увеличением индекса апоптоза в 4,5 раза (р < 0,05) на 7 сутки по сравнению с контрольной группой.

2. Структурные изменения при стрептозотоцин-индуцированном сахарном диабете сопровождаются достоверными изменениями динамики биохимических показателей, характеризуются сочетанием некротических изменений с активацией апоптоза В-клеток (увеличение индекса апоптоза в 8,3 раза (р < 0,05) на 7 сутки по сравнению с контрольной группой). Во всех отделах поджелудочной железы происходит уменьшение объемной доли, удельного количества и гипертрофия ядер эндокриноцитов В во все сроки наблюдения на фоне увеличения РСЫА- и Кл-67-позитивных клеток (максимально в 6,5 и 7,8 раза соответственно на 7 сутки), а также увеличение объемной доли А-клеток, что свидетельствует о селективном повреждении ин-сулиноцитов и активации в них регенераторных процессов.

3. Развитие иммунозависимого сахарного диабета по сравнению с контрольной группой сопровождается уменьшением объемной доли эндокриноцитов В на 46,7 %, развитием воспалительной реакции (инсулитов) с инфильтрацией островков лимфоцитами, нейтрофиль-ными гранулоцитами и макрофагами, выраженными некротическими изменениями на фоне активации апоптоза в В-клетках, начиная с 7 суток (увеличение в 7,3 раза каспазы-3 и в 4,3 раза ТХМЕЬ-пози-тивных клеток).

4. Морфофункциональные изменения при стрептозотоцин-нико-тинамид-индуцированном сахарном диабете характеризуются моза-ичностью процессов повреждения эндокринного аппарата с наличием незначительных некротических изменений в отдельных островках, статистически достоверным уменьшением объемной доли инсули-ноцитов селезеночного отдела (на 7 и 21 сутки), уменьшением удельного количества, гипертрофией ядер и умеренной активацией апопто-

за (увеличение ТЦКЕЬ-позитивных клеток на 30 % по сравнению с контрольной группой) в В-кпетках всех отделов поджелудочной железы.

5. Реализация запрограммированной клеточной смерти при ал-локсан-индуцированном сахарном диабете осуществляется посредством активации внутреннего сигнального пути апоптоза при увеличении экспрессии митохондриального проапоптогенного белка Вах. При моделировании сахарного диабета введением стрептозотоцина индукция апоптоза происходит за счет активации внешнего сигнального пути посредством ТКАГЪ-рецепторов.

6. При введении бигуанидов и производных сульфонилмочевины 2-го поколения животным со стрептозотоцин-никогинамид-индуциро-ванным сахарным диабетом в панкреатических островках сохраняются комплексные патогистологические изменения (мозаичность некротических изменений в отдельных островках, уменьшение объемной доли и удельного количества В-клеток, гипертрофия их ядер и активация апоптоза), характерные для данной модели заболевания, что свидетельствует о слабой выраженности лекарственного пато-морфоза эндокринной части.

7. Струюурные изменения эндокринной части поджелудочной железы при стрептозотоцин-ниютанамид-индуцированном диабете на фоне введения сенситайзеров инсулина (ванадий содержащий комплекс) сопровождаются достоверным увеличением объемной доли панкреатических островков, выраженной гипертрофией ядер В-клегок, сохранением высокого уровня каспазы-3 и ТТЖЕЪ-позитивных клеток по сравнению с группой интакгного контроля и сахарного диабета.

8. Морфофункциональные изменения у животных с моделью стрептозогоцин-никотинамид-индуцированного диабета при введении антиоксидантов характеризуются статистически значимым увеличением удельного количества и объемной доли эндокриноцитов В на фоне гипертрофии их ядер по сравнению с крысами-диабетиками. Происходит снижение степени выраженности апоптотических процессов на 13,2 % (р < 0,05) по сравнению с группой экспериментального диабета.

9. Лекарственный патоморфоз при стрептозотоцин-нишгинамид-индуцированном диабете на фоне введения секретогенов характеризуется наличием морфологических изменений эндокринного аппарата поджелудочной железы, характерных для индуцированного диабе-

та, с сохранением мозаичных структурных изменений В-эндокрино-цитов и сопровождается гипертрофией их ядер с выраженным цито-плазматическим накоплением инсулинпозитивного материала.

10. При аллоксан-индуцированном, стрептозотоцин-индуцирован-ном и иммунозависимом сахарном диабете на фоне введения инкре-тиномиметиков на 7 сутки достоверно снижается индекс апоптоза в 4,5 раза (р < 0,05) и 3,8 (р < 0,05) соответственно, определяемый с помощью выявления каспазы-3 и TUNEL-позитивных клеток. Происходит статистически значимое увеличение объемной доли островков, удельного количества В-клеток во все сроки наблюдения, увеличение количества PCNA-, Ki-67-позитивных эндокриноцитов В на 13,1 и 3,2 % соответственно по сравнению с группой животных с сахарным диабетом, что отражает блокаду апоптоза (гиперэкспрессия MDM2, NF-kB) и активацию репаративной регенерации В-клеток.

11. При проведении комплексного сравнительного анализа для верификации патогистологических изменений, характерных для па-томорфогенеза сахарного диабета и лекарственного патоморфоза эндокринного аппарата поджелудочной железы на экспериментальных моделях, наиболее информативными дифференциально-диагностическими критериями являются: объемная доля, удельное количество, относительная площадь ядер В-клеток, индексы апоптоза и пролиферации (по результатам иммуногистохимического исследования и гибридизации in situ).

12. Фенотипическая вариабельность инсулиноцитов панкреатических островков в различных отделах поджелудочной железы позволяет рассматривать их как ключевой морфофункциональный субстрат реализации клеточного повреждения (некроз, апоптоз) при действии В-цитотоксических веществ и развитии лекарственного патоморфоза. На фоне введения различных групп противодиабетических лекарственных средств и лекарственных веществ отмечается различная степень изменений морфофункциональных показателей, активация компенсаторно-приспособительных процессов (гипертрофия ядер, увеличение объемной доли В-клеток) и репаративной регенерации (увеличение индекса пролиферации и экспрессии PCNA) в эндо-криноцитах В.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

- 1. Снигур Г. JL Использование экстракта Гимнемы лесной в лечении сахарного диабета / А. А. Спасов, М. П. Самохина, В. Б. Писарев, Г. JI. Снигур // Материалы научно-практической конференции «Состояние здоровья населения Волгоградской области и современные медицинские технологии его коррекции».-Волгоград, 2005.-С. 104-105.

2. Снигур Г. Л. Морфологические особенности панкреатических островков крыс при моделировании стрептозотоцин-индуцированного иммунозави-симого сахарного диабета на фоне применения экстракта Гимнемы лесной / В. Б. Писарев, Г. J1. Снигур, А. А. Спасов, М. П. Самохина, А. Е. Буланов // Материалы II Всероссийской конференции с международным участием «Кли-ниш-морфолошческие аспекты эндокринопатий». —Белгород, 2006. - С. 88—92.

3. Снигур Г. JI. Использование раствора - gewf- для макроскопической оценки поджелудочной железы у крыс с экспериментальным сахарным диабетом / Г. JL Снигур, М. П. Самохина // Бюллетень Волгоградского научного центра РАМНи Администрации Волгоградской области. - 2006. -№ 4. - С. 23-24.

4. Снигур Г. Л. Влияние Диа-р на регенерацию Р-клеток поджелудочной железы / М. П. Самохина, А. А. Спасов, Г. Л. Снигур, В. Б. Писарев, В. А. Косолапов // Информационный бюллетень Российского НИИ здоровья. -2006.-№ 1.-С. 6-7.

5. Снигур Г. Л. Гипогликемические свойства экстракта Гимнемы лесной / А. А. Спасов, М. П. Самохина, В. Б. Писарев, Г. Л. Снигур, Д. Ю. Агар-ков, Е. В. Сорокина, А. Б. Буланов // Вестник Волгоградского государственного медицинского университета. -2007. - № l.-(21).-С.79-82.

6. Snigur G. L. Antidiabetic properties ofDia-P: experimental and clinical investigation. The next of defense/A. A. Spasov, V. A. Kosolapov, M. P. Samokhina, V. B. Pisarev, G. L. Snigur, A. E. Bulanov, M. E. Balabolkin // Intertational conference on diabetes. Synergy and strategy. -2007. -P. 11-12.

7. Снигур Г. Л. Влияние Гимнемы лесной на регенерацию р-клеток поджелудочной железы / В. Б. Писарев, Г. Л. Снигур, А. А. Спасов, М. П. Самохина, В. А. Косолапов, А. Е. Буланов // XIV Национальный конгресс «Человек и лекарство».-2007. -С. 863.

8. Снигур Г. Л. Противодабетические свойства Диа-р: экспериментальные и клинические исследования / А. А. Спасов, В. А. Косолапов, М. П. Самохина, В. Б. Писарев, Г. Л. Снигур, А. Е. Буланов, М. И. Балабопкин// Материалы Международной научной конференции «Лекарственные средства и биологически активные соединения». -Гродно, 2007. - С. 152-154.

9. Снигур Г. Л. Особенности распределения панкреатических островков крыс в норме и при моделировании сахарного диабета / Г. Л. Снигур, П. О. Матвеев, В. Н. Довженко, А. В. Новикова, М. П. Озерина // Материалы

65-й Итоговой научной конф. стуцентов и молодых ученых ВолГМУ - Волгоград 2007.-С. 181-182.

10. Снигур Г. JI. Влияние на регенерацию ß-клеток поджелуцочной железы комплексного препарата «Диа-ß» / М. П. Самохина, А. А. Спасов, Г. JI. Снигур, В. Б. Писарев, А. Е. Буланов // Материалы II Международной научной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений».-Алмата,2007.-С. 135.

11. Снигур Г. Л. Влияние препарата «Диа-ß» на стимуляцию секреции инсулина, ингибирование апоптоза и стимуляцию репаративных процессов в эндокриноцитах / А. А. Спасов, М. П. Самохина, Г. J1. Снигур, В. Б. Писарев, А. Е. Буланов // Материалы III Съезда фармакологов России «Фармакология-практическому здравоохранению». -Санкт-Петербург, 2007. - Т.7 (2). - С. 1964.

12. Снигур Г. Л. Ультраструктурные изменения ß-клеток поджелудочной железы крыс при моделировании сахарного диабета на фоне введения препарата «Диабета» / А. А. Спасов, Г. Л. Снигур, М. П. Самохина, А. Е. Буланов, А. Я. Почепцов И Морфология. - 2008. - Т. 133. - № 2. - С. 127.

13. Снигур Г. Л. Влияние препарата «Диабета» на апоптоз ß-эвдокрино-цитов / Г. Л. Снигур, В. Б. Писарев, А. А. Спасов, М. П. Самохина,

A. Е. Буланов // Морф ология. - 2008. - Т. 133. - № 4. - С. 93.

14. Снигур Г. Л Сгруюурные изменения в островках Лангерганса при экспериментальном сахарном диабете на фоне введения биологически активной добавки на основе Гимнемы лесной / Г. Л. Снигур, М. П. Самохина,

B. Б. Писарев, А. А. Спасов, А. Е. Буланов // Морфология. —2008. - Т. 133. -№ 1. - С. 60-64.

15. Снигур Г. Л. Фармакологическая коррекция апоптоза гимнемовы-ми кислотами / В. Б. Писарев, Г. Л. Снигур, М. П. Самохина, А. Е. Буланов // Материалы IV Всероссийского диабетологического конгресса. -Москва,2008.-С. 335.

16. Снигур Г. Л. Механизмы токсического действия стрептозотоцина на ß-клетки островков Лангерганса / В. Б. Писарев, Г. Л. Снигур, А. А. Спасов, М. IL Самохина, А- Е. Буланов // Бюллетень экспериментальной биологин и медицины. - 2009. - Т. 148. - № 12. - С. 700-702.

17. Снигур Г. Л. Влияние экстракта гимнемы лесной на регенерацию ß-клеток панкреатических островков при экспериментальном сахарном диабете / В. Б. Писарев, Г. Л. Снигур, А. А Спасов, М. П. Самохина, А Е. Буланов // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы клинической и экспериментальной медицины». -Чита, 2008. -С. 202-203.

18. Снигур Г. Л. Структурные изменения эндокриноцитов поджелуцочной железы при диабете на фоне введения гимнемовых кислот / В. Б. Писарев, Г. Л. Снигур, А. А. Спасов, М. П. Самохина, А. Е. Буланов // Проблемы и перспективы современной морфологии: Сб. науч. трудов 1. — Томск, 2008. - С. 40-41.

19. Снигур Г. JI. Особенности дитотоксического действия аллокеана на р-клетки панкреатических островков / В. Б. Писарев, Г. JI. Снигур, А. А. Спасов, М. П. Самохина//Проблемы и перспективы современной морфологии: Сб. науч. трудов 1. -Томск, 2008. - С. 41-42.

20. Снигур Г. Л. О возможности применения автоматизированного морфо-метрического анализа микропрепаратов при проведении иммуногистохимичес-кого исследования эндокриноцитов панкреатических островков / Г. Л. Снигур // Бюллетень Волгоградского научного центра РАМН. - 2008. -№ 3. - С. 59.

21. Снигур Г. Л. Клеточная гибель p-эндокриноцитов панкреатических островков, обусловленная аллоксановой цитотоксичностью / В. Б. Писарев, Г. Л. Снигур, А. А. Спасов, М. П. Самохина // Бюллетень Волгоградского научного центра РАМН. - 2008. - № 4. - С. 24-25.

22. Снигур Г. Л. Ультрамикроскопические изменения Р-эндокриноцитов при сахарном диабете на фоне введения гимнемовых кислот / В. Б. Писарев, Г. Л. Снигур, А. А. Спасов, М. П. Самохина, А. Е. Буланов // Материалы Всероссийской научной конференции, посвященной 150-летию кафедры патологической анатомии Военно-медицинской академии им. С. М. Кирова. - СПб., 2009.-С. 96-98.

23. Снигур Г. Л. Ультраструктурные изменения р-клеток панкреатических островков при сахарном диабете на фоне введения Б АД «Диабета»/ В. Б. Писарев, Г. Л. Снигур, А. А. Спасов, М. П. Самохина, А. Е. Буланов // Морфологические ведомости. -2010. -№ 1. - С. 78-81.

24. Снигур Г. Л. Влияние гимнемовых кислот на гибель и репарацию Р-эндокриноцитов при стрептозотоцин-индуцированном диабете / В. Б. Писарев, Г. Л. Снигур, А. А. Спасов, М. П. Воронкова, А. Е. Буланов // Вестник Волгоградского государственного медицинского университета. - 2010. -№1(33).-С. 38—40.

25. Снигур Г. Л. Пролиферативные и антиапоптогенные свойства гимнемовых кислот / А. А. Спасов, В. Б. Писарев, Г. Л. Снигур, М. П. Воронкова // Сборник научных трупов «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической морфологии»; под ред. В. И. Петрова. - Волгоград, 2010. - С. 132-136.

26. Снигур Г. Л. Профилактика сахарного диабета типа 1 с помощью антиоксидантных веществ в эксперименте / Е. В. Тибирькова, В. А. Косолапое,

A. А. Спасов, Г. Л. Снигур, В. А. Анисимова // Сборник научных трудов «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической морфологии»; под ред.

B. И. Петрова. - Волгоград, 2010. - С Л 39-145.

27. Снигур Г. Л. Особенности развития апоптоза эндокриноцитов островков Лангерганса при экспериментальном сахарном диабете/ Г. Л. Снигур, А. А. Спасов, М. П. Воронкова // Морфология. -Т137.-№ 4.-2010. - С. 175.

28. Снигур Г. Л. Особенности повреждения и регенерации р-клеток панкреатических островков при экспериментальном сахарном диабете /

Г. Л. Снигур, А. А. Спасов, М. П. Воронкова, А. Е. Буланов // Сборник научных трудов VIII Всероссийской конференции по патологии клетки. - Москва, 2010. — С. 232-233.

29. Снигур Г. Л. Алгоритм патогистсшогического исследования эндокринного аппарата поджелудочной железы при экспериментальном сахарном диабете / Г. Л. Снигур, А. В. Смирнов // Бюллетень Волгоградского научного центра РАМН. - 2010. - № 3. - С. 5 8-59.

30. Снигур Г. Л. К вопросу стандартизации патогистологической диагностики сахарного диабета / Г. Л. Снигур, А. В. Смирнов// Вестник Волгоградского государственного медицинского университета. - 2010. - Т. 35. -№3.-С. 112-115.

31. Снигур Г. Л. Свободнорадикальные процессы в ткани поджелудочной железы при моделировании экспериментального диабета типа 2 / Н. И. Чепляева, М. В. Чепурнова, Г. Л. Снигур, М. П. Воронкова // Сб. науч. трудов «Инновационные достижения фундаментальных и прикладных медицинских исследований в развитии здравоохранения Волгоградской обл.». -Волгоград, 2010. - С. 240-241.

32. Снигур Г. Л. Структурные изменения в поджелудочной железе при алиментарном дефиците магния / Е. С. Голубева, Г. Л. Снигур // Сб. науч. трудов 68-й Научно-практической конф. молодых ученых и студентов «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины». - Волгоград, 2010.-С. 220.

3 3. Снигур Г. Л. Протекторное действие нового производного [ 1,2-А]бен-зимидазола при интоксикации стрептозотоцином / Е. В. Тибирькова, Г. Л. Снигур // Сборник научных трудов 68-й Открытой научно-практической конференции молодых ученых и студентов «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины». - Волгоград, 2010. - С. 184.

34. Снигур Г. Л. Патоморфоз экспериментального сахарного диабета / Г. Л. Снигур, А. А. Спасов, М. П. Воронкова //Университетская наука: Взгляд в будущее / Материалы Итоговой научной конференции сотрудников КГМУ, Центрально-Черноземного научного центра РАМН и отделения РАЕН, посвященной 76-летию Курского гос. мед. университета. - Курск, 2011. - Т. I-С. 383-386.

35. Снигур Г. Л. Лекарственный патоморфоз экспериментального сахарного диабета / Г. Л. Снигур, А. В. Смирнов, А. А. Спасов, М. П. Воронкова // Вестник новых медицинских технологий. -2011. -Т. XVIII. -№ 2. -С. 169-173.

36. Снигур Г. Л. Экспериментальная модель сахарного диабета типа 2 / А. А- Спасов, М. П. Воронкова, Г. Л- Снигур, Н. И. Чепляева, М. В. Чепурнова // Биомедицина. -2011. - № 3. - С. 12-19.

37. Снигур Г. Л. Гимнема лесная как источник для создания гилоглшсе-мических средств / А. А. Спасов, М. П. Воронкова, Г. Л. Снигур // Вестник ВолгГМУ: приложение (Материалы Российско-Индийской выставки-семи-

нара «От генериков к инновационным препаратам»). - Волгоград, 2011. -С. 41-43.

38. Сннгур Г. Л. Особенности структурных изменений поджелудочной железы при фармакологической коррекции экспериментального сахарного диабета / Г. Л. Снигур, А. В. Смирнов // Морфология. - 2011. - Т.140. - № 5. -С. 115-116.

39. Снигур Г. Л. Изучение влияния сулодексида на эндотелий зависимую вазодилатацию мозговых сосудов у животных со стрептозотоцин-инду-цированным сахарным диабетом / И. Н. Тюренков, А. В. Воронков, А. А. Слиецанс, Е. В. Петрова, Г. Л. Снигур // Сахарный диабет. - 2011. -Т. 52. -№3.- С. 12-15.

40. Снигур Г. Л. Влияние мексидола и сулодексида на уровень специфических маркеров развития эндолгелиал ьной дисфункции у животных с экспериментальным сахарным диабетом / И. Н. Тюренков, А. В. Воронков, А А Слиецанс, Г. Л. Снигур//Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2012. - Т. 75. - № 5. - С. 14-16.

41. Снигур Г. Л. Апоптоз Р-инсулоцитов панкреатических островков и пути его фармакокоррекции / Г. Л. Снигур, А. А. Спасов, М. П. Воронкова // Бюллетень Волгоградского медицинского научного центра. -2012. -№2. -С. 6-8.

Монографии:

1. Снигур Г. Л. Гимнема лесная (ботаника, фармакогнозия, фармакология, клиническая эффективность): Монография / А. А. Спасов, М. П. Воронкова, Г. Л. Снигур, Д. Ю. Агарков; под общей редакцией академика РАМН А. А. Спасова. - Волгоград: Изд-во ВолгГМУ, 2012.-200 с.

Свигур Григорий Леонидович

ЛЕКАРСТВЕННЫЙ ПАТОМОРФОЗ ЭНДОКРИННОЙ ЧАСТИ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ 14.03.02 - патологическая анатомия Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Подписано в печать 18.09.12. Формат 60x84/16. Усл. печ. л. 2,0. Тираж 120 экз. Заказ № У$9

Волгоградский государственный медицинский университет 400131, Волгоград, пл. Павших борцов, 1.

Издательство ВолгГМУ 400006, Волгоград, ул. Дзержинского, 45.

1 2 - 2 О 5 8 4

2012350523

Оглавление диссертации Снигур, Григорий Леонидович :: 2012 :: Волгоград

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О МОДЕЛИРОВАНИИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО САХАРНОГО ДИАБЕТА.

2.2. СОВРЕМЕННЫЕ ПРОТИВОДИАБЕТИЧЕСКИЕ СРЕДСТВА: МЕХАНИЗМЫ ДЕЙСТВИЯ, НАПРАВЛЕНИЕ ПОИСКА НОВЫХ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИХ СУБСТАНЦИЙ.

2.3. МЕХАНИЗМЫ КЛЕТОЧНОЙ ГИБЕЛИ ИНСУЛОЦИТОВ ПАНКРЕАТИЧЕСКИХ ОСТРОВКОВ ПРИ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ.

2.4. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О ПАТОМОРФОЗЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО САХАРНОГО ДИАБЕТА.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. КЛИНИКО-БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ МОДЕЛИ САХАРНОГО ДИАБЕТА.

3.3. МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Сеетооптическая микроскопия.

2. Иммуногистохимические методы исследования.

3. Выявление олигонуклеосомалъной фрагментации ДНК in situ.

4. Электронно-микроскопическое исследование.

5. Морфометрическое исследование.

6. Математический анализ.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4.1. морфофункциональная характеристика панкреатических островков у животных контрольной интактной группы.

4.2. Структурные изменения островков Лангерганса при аллоксаниндуцированном сахарном диабете.

4.3. Структурные изменения панкреатических островков при стрептозотоцин-индуцированном сахарном диабете.

4.4. Структурные изменения островков Лангерганса при иммунозависимом сахарном диабете.

4.5. Структурные изменения панкреатических островков у крыс с моделью стрептозотоцин-никотинамид-индуцированного диабета.

4.6. морфофункционалбные особенности панкреатических островков при введении сенситайзеров инсулина (бигуаниды).

4.7. морфофункционалбные особенности панкреатических островков при введении сенситайзеров инсулина (ванадий содержащий комплекс).

4.8. морфофункционалбные особенности панкреатических островков при введении секретогенов (препараты сулбфонил мочевины).

4.9. морфофункционалбные особенности панкреатических островков при введении секретогенов (диабенол).

4.10. морфофункционалбные особенности панкреатических островков при стрептозотоцин-никотинамид-индуцированном диабете под влиянием антиоксидантов (а-липоевой кислоты).

4.11. морфофункционалбные изменения панкреатических островков под влиянием инкретиномиметиков (экстракт гимнемовых кислот).

Введение диссертации по теме "Патологическая анатомия", Снигур, Григорий Леонидович, автореферат

Актуальность темы:

Сахарный диабет (СД) является одним из социально значимых заболеваний, что обусловлено его повсеместной распространённость и быстрыми темпами роста [Дедов И. И., 2010]. Сахарным диабетом страдают более чем 150 млн. человек по всему миру, количество которых удваивается каждые 12-15 лет [Дедов И. И. с соавт., 2008; Аметов А. С., 2008]. Однако фактическая распространенность СД в 3-4 раза превосходит данные официальной статистики, что свидетельствует о масштабах неинфекционной эпидемии диабета [Балаболкин И. И. с соавт., 2008].

Несмотря на разнообразие лекарственных средств для лечения СД одним из приоритетных направлений в современной эндокринологии и фармакологии является активный поиск новых мишеней для действия антидиабетических средств [Недосугова J1. В., 2006; Петров В. И., Спасов А. А., 2007; Дедов И. И., 2010; Петров В. И. с соавт., 2010; Спасов А. А., Чепурнова М. В., 2011]. Для скрининга и детального изучения механизма действия антидиабетических препаратов используют различные экспериментальные модели СД, обусловленные введением селективных В-цитотоксических веществ (аллоксан, стрептозотоцин, и др.) [Mythili D. М. et al., 2004; Islam S., Loots D. Т., 2009]. В зависимости от применяемой в эксперименте дозы цитотоксина и пути его введения, возможно моделирование различных состояний нарушения углеводного обмена, соответствующих определенным клиническим типам диабета (СД тип 1, СД тип 2, латентный СД, скрытый СД) [Древаль А. В., 2006; Srinivasan К. et al., 2007; Кроненберг Г. М., 2010]. При этом клинико-биохимические признаки СД (гипергликемия, глюкозурия, полиурия, полидипсия, потеря веса, снижение концентрации С-пептида и инсулина, увеличение концентрации гликолизированного гемоглобина и др.), не позволяют достоверно оценить степень повреждения эндокриноцитов панкреатических островков и определить потенциальные тканевые мишени для лекарственных средств [Reed J. С., Green D. R., 2011].

Достаточно детально изучены основные звенья пато- и морфогенеза СД, приводящие к расстройству гомеостаза глюкозы: аутоиммунная деструкция B-клеток панкреатических островков, инсулинорезистентность периферических тканей, избыточная продукция глюкозы печенью, нарушение секреции инсулина B-клетками панкреатических островков, снижение продукции инкретинов, и др. [Балаболкин М. И., 2000; Aronoff S. L., 2004; Балаболкин М. И., 2007]. В современной литературе широко освещены особенности структурных изменений органов и тканей при СД (диабетическая ангиопатия, нефропатия, кардиопатия и т.д.) [Jennette J. С., Heptinstall R. Н., 2007; Зверева И. В., Лукьянчиков В. С., 2009; Burke А. Р., Tavora F., 2010; Стаценко М. Е., 2010], однако, сведения об особенностях патогистологических изменений в панкреатических островках с учетом современных представлений о повреждении и регенерации В-клеток в литературе представлены не достаточно и без учета лекарственного патоморфоза.

С позиций современных представлений о патоморфогенезе и лекарственном патоморфозе сахарного диабета, большое значение придается состоянию эндокринной части поджелудочной железы, особенно А- и Вклеток [Reed J. С., Green D. R., 2011]. Способность повреждать B-клетки панкреатических островков при введении селективных цитотоксических соединений широко используется для моделирования СД при проведении доклинического этапа испытаний новых лекарственных средств [Хабриев Р.

У., 2005]. Известно, что эффекты токсического действия на B-клетки зависят от дозировки и способа введения цитотоксинов и могут проявляться некротическими изменениями различной степени выраженности или быть представлены запрограммированной клеточной гибелью [Lenzen S., 2008].

Однако, современные представления о механизмах повреждения В-клеток при различных моделях экспериментального диабета требуют уточнения 7 путей активации апоптоза и стимуляции регенерации эндокриноцитов В. Детально изучен механизм действия большинства антидиабетических лекарственных средств, однако данные о комплексных морфофункциональных изменениях эндокринной части поджелудочной железы в зависимости от экспериментальной модели диабета противоречивы и разрознены, а данные о патогистологических изменениях инновационных отечественных противодиабетических лекарственных средств отсутствуют.

Значимость процессов повреждения и репарации предопределяет переориентацию направленности медико-биологических исследований из области теоретической биологии в сферу интересов клинической медицины [Саркисов Д. С., 1988]. Изучение процессов повреждения и репарации В-клеток поджелудочной железы при СД является актуальной задачей, поскольку каждый уровень и элемент регуляции секреторной активности инсулоцитов служит потенциальной мишенью для действия лекарственных средств и биологически активных веществ. Таким образом, возможность целенаправленного управления процессами повреждения и репарации, является основой для создания новых лекарственных средств применяемых в терапии социально значимых заболеваний, а особенности лекарственного патоморфоза помогают выявить специфические клеточные компоненты для инновационных антидиабетических лекарственных препаратов [Karp G., 2010; Reed J. С., Green D. R., 2011]. С этих позиций изучение патогистологических аспектов повреждения и регенерации инсулоцитов при экспериментальном диабете с учетом лекарственного патоморфоза, обусловленного действием различных групп антидиабетических лекарственных препаратов и лекарственных веществ является актуальным.

Тема утверждена на заседании Ученого Совета ГБУ ВМНЦ (протокол №5 от 27 декабря 2006 г.) и включена в план НИР в рамках темы: «Патоморфологические изменения и лекарственный патоморфоз внутренних органов при нарушениях различных видов обмена веществ» (регистрационный №01200904037).

Цель исследования исследования явилось выявление морфофункциональных закономерностей процессов повреждения и репарации эндокриноцитов В островков Лангерганса поджелудочной железы при экспериментальном сахарном диабете с учётом его лекарственного патоморфоза.

Задачи исследования:

1) Провести комплексную морфофункциональную оценку изменений островкового аппарата поджелудочной железы при экспериментальном сахарном диабете с учётом его лекарственного патоморфоза.

2) С использованием иммуногистохимического метода исследования выявить закономерности апоптоза эндокриноцитов В панкреатических островков на различных экспериментальных моделях сахарного диабета.

3) С применением иммуногистохимического метода исследования выявить патоморфоз эндокринной части поджелудочной железы и особенности апоптоза эндокриноцитов В панкреатических островков при фармакологической коррекции.

4) Выявить морфофункциональные закономерности репарации эндокриноцитов В островков Лангерганса поджелудочной железы при экспериментальном сахарном диабете с учётом его лекарственного патоморфоза с использованием иммуногистохимического метода исследования.

5) На основании качественной и количественной патогистологической оценки обосновать концепцию структурных преобразований панкреатических островков при СД с учетом фармакологической коррекции различными группами антидиабетических лекарственных средств.

Научная новизна:

Впервые в сравнительном аспекте показаны морфофункциональные особенности эндокриноцитов панкреатических островков при моделировании аллоксан-, стрептозотоцин-, стрептозотоцин-никотинамид-индуцированного сахарного диабета. С применением методов морфометрического анализа впервые выявлены инициаторные пути активации апоптоза В-клеток на различных моделях экспериментального сахарного диабета с учётом сроков его развития.

С помощью морфометрических, иммуногистохимических и электронно-микроскопических методов исследования обоснованы закономерности повреждения и репарации эндокриноцитов островков Лангерганса, а также определены возможности блокады апоптоза В-клеток при лечении экспериментального сахарного диабета.

Впервые изучены комплексные морфологические изменения эндокринной части поджелудочной железы, возникающие под влиянием нового отечественного противодиабетического лекарственного препарата. Впервые проведен сравнительный анализ и установлены особенности лекарственного патоморфоза эндокринной части поджелудочной железы под воздействием известных и инновационных противодиабетических лекарственных средств.

На основе полученных данных сформулирована теоретическая концепция о фенотипической вариабельности эндокриноцитов панкреатических островков, которая рассматривается как ключевой морфофункциональный субстрат реализации клеточного повреждения, компенсаторно-приспособительных процессов и репарации при действии различных цитотоксических веществ и коррекции морфофункциональных изменений под влиянием противодиабетических лекарственных препаратов.

Научно-практическая значимость:

Полученные данные существенно расширяют современные фундаментальные представления о процессах повреждения и репаративной регенерации В-клеток островков поджелудочной железы.

Сведения о инициаторных путях ингибирования и активации апоптоза В-клеток панкреатических островков посредством Т11А1Ь-индуцированного апоптоза позволяют использовать их как потенциальную мишень для создания новых противодиабетических лекарственных препаратов.

Работа носит фундаментальный характер и представляет развернутую морфологическую характеристику тканевых, клеточных, иммуногистохимических, ультраструктурных и морфометрических изменений в эндокринном аппарате поджелудочной железы в условиях моделирования сахарного диабета и при его лекарственном патоморфозе.

Реализация результатов исследования:

Результаты работы внедрены в практическую деятельность патологоанатомического отделения ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Минздрава РФ Клиники №1, Волжского межрайонного патологоанатомического отделения ГКУЗ «Волгоградское областное патологоанатомическое бюро», судебно-гистологическую лабораторию ГКУЗ «Волгоградское областное бюро судебно-медицинской экспертизы»; внедрены в учебный процесс на кафедре патологической анатомии ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Минздрава России, научно-исследовательскую работу лаборатории моделирования патологии отдела экспериментальной и клинической хирургии и лаборатории морфологии и иммуногистохимии ГБУ

Волгоградский медицинский научный центр».

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Комплексные морфофункциональные изменения, выявленные в островковом аппарате поджелудочной железы на различных моделях экспериментального сахарного диабета отражают основные этапы его морфогенеза и лекарственного патоморфоза.

2. В условиях моделирования сахарного диабета различными селективными в-цитотоксическими веществами определяются различные пути активации апоптоза эндокриноцитов В островков Лангерганса, выявляемые с помощью иммуногистохимического метода.

3. Лекарственный патоморфоз эндокринной части поджелудочной железы при различных экспериментальных моделях сахарного диабета характеризуется значимыми морфофункциональными изменениями, определяемыми с помощью биохимических, гистологических, иммуногистохимических, электронно-микроскопических, морфометрических методов, что отражает динамику процессов повреждения и регенерации эндокриноцитов и зависит от механизма действия используемых лекарственных средств.

Апробация работы:

Результаты диссертации докладывались и обсуждались в материалах: научно-практической конференции «Состояние здоровья населения

Волгоградской области и современные медицинские технологии его коррекции» (Волгоград, 2005); II Всероссийской конференции с международным участием «Клинико-морфологические аспекты эндокринопатий» (Белгород, 2006); XIV Российского национального конгресса «Человек и лекарство» (Москва, 2007); «The next line of defense»

International conference on diabetes. Synergy and strategy (Анталия, Турция,

2007); III Съезда Фармакологов России «Фармакология - практическому здравоохранению» (Санкт-Петербург, 2007); II Международной научной конференции "Химия, технология и медицинские аспекты природных

12 соединений" (Алматы, Казахстан, 2007); Международной научной конференции «Лекарственные средства и биологически активные соединения» (Гродно, Беларусь, 2007); IV Всероссийского диабетологического конгресса (Москва, 2008); IV Конгрессе международной ассоциации морфологов (Москва, 2008); IX Конгресса международной ассоциации морфологов (Бухара, Узбекистан, 2008); Всероссийской научно-практической конференции патологоанатомов (Красноярск, 2008); Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы клинической и экспериментальной медицины» (Чита, 2008); Всероссийской научной конференции по патологической анатомии (Санкт-Петербург, 2009); Российско-белорусской научно-практической конференции «Роль коммуникационных систем в развитии опухолевых процессов» (Смоленск, 2009); 56 и 57 Региональной научно-практической конференции ВолгГМУ (Волгоград 2009 и 2010); Научно-практической конференции «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической морфологии» (Волгоград, 2010); VIII Всероссийской конференции по патологии клетки (Москва, 2010); X Конгресса международной ассоциации морфологов «Функциональная морфология человека и животных» (Ярославль, 2010); Научной конференции сотрудников КГМУ, Центрально-Черноземного научного центра РАМН и отделения РАЕН (Курск, 2011); Ежегодной научно-практической конференции «Биомедицина и биомоделирование» (Москва, 2011); Российско-Индийской выставке-семинаре «От генериков к инновационным препаратам» (Волгоград, 2011); III Эмбриологическом симпозиуме «Югра-Эмбрио-2011» (Ханты-Мансийск, 2011); Научно-практической конференции «Актуальные вопросы патологической анатомии. Геронто логические аспекты патологических процессов» (Волгоград, 2012). Апробация работы состоялась 24.03.2012 г. на заседании межкафедральной научной конференции с участием кафедр ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздравсоцразвития России и лабораторий ГБУ ВМНЦ.

Публикации:

По теме диссертации опубликовано 42 печатных работы (в т.ч. в журналах перечня ВАК - 14 и 1 монография).

Объем и структура работы:

Диссертация изложена на 264 страницах машинописного текста, иллюстрирована 54 таблицами, 66 рисунками, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, практических рекомендаций и выводов. Список литературы включает 325 источников (из них - 93 отечественных и 232 иностранных).

Заключение диссертационного исследования на тему "Лекарственный патоморфоз эндокринной части поджелудочной железы при экспериментальном сахарном диабете"

7. ВЫВОДЫ

1. Морфофункциональные изменения при аллоксан-индуцированном сахарном диабете характеризуются патогномоничными клинико-лабораторными признаками, а также преобладанием некротических изменений в В-клетках с уменьшением их объёмной доли на 16,7 и 35,7% (р < 0,05) и удельного количества на 53,3 и 56,8% (р < 0,05) на 7 и 21 сутки, соответственно, в селезеночном отделе, относительным увеличением объёмной доли А-клеток и статистически значимым увеличением индекса апоптоза в 4,5 раза (р < 0,05) на 7 сутки по сравнению с контрольной группой.

2. Структурные изменения при стрептозотоцин-индуцированном сахарном диабете сопровождаются достоверными изменениями динамики биохимических показателей, характеризуются сочетанием некротических изменений с активацией апоптоза В-клеток (увеличение индекса апоптоза в 8,3 раза (р < 0,05) на 7 сутки по сравнению с контрольной группой). Во всех отделах поджелудочной железы происходит уменьшение объёмной доли, удельного количества и гипертрофия ядер эндокриноцитов В во все сроки наблюдения на фоне увеличения РСМА-позитивных и Кь67 клеток (максимально в 6,5 и 7,8 раза соответственно на 7 сутки), а также увеличение объёмной доли А-клеток, что свидетельствует о селективном повреждении инсулиноцитов и активации в них регенераторных процессов.

3. Развитие иммунозависимого сахарного диабета по сравнению с контрольной группой сопровождается уменьшением объёмной доли эндокриноцитов В на 46,7%, развитием воспалительной реакции (инсулитов) с инфильтрацией островков лимфоцитами, нейтрофильными гранулоцитами и макрофагами, выраженными некротическими изменениями на фоне активации апоптоза в В-клетках, начиная с 7 суток (увеличение в 7,3 раза каспаза-3 и в 4,3 раза ТИЫЕЬ-позитивных клеток).

4. Морфофункциональные изменения при стрептозотоцин-никотинамид-индуцированном сахарном диабете характеризуются мозаичностью процессов повреждения эндокринного аппарата с наличием незначительных некротических изменений в отдельных островках, статистически достоверным уменьшением объёмной доли инсулиноцитов селезеночного отдела (на 7 и 21 сутки), уменьшением удельного количества, гипертрофией ядер и умеренной активацией апоптоза (увеличение Т1ЖЕЬ-позитивных клеток на 30 % по сравнению с контрольной группой) в В-клетках всех отделов поджелудочной железы.

5. Реализация запрограммированной клеточной смерти при аллоксан-индуцированном сахарном диабете осуществляется посредством активации внутреннего сигнального пути апоптоза при увеличении экспрессии митохондриального проапоптогенного белка Вах. При моделировании сахарного диабета введением стрептозотоцина индукция апоптоза происходит за счёт активации внешнего сигнального пути посредством ТКА1Ь-рецепторов.

6. При введении бигуанидов и производных сульфонилмочевины 2-го поколения животным со стрептозотоцин-никотинамид-индуцированным сахарным диабетом в панкреатических островках сохраняются комплексные патогистологические изменения (мозаичность некротических изменений в отдельных островках, уменьшение объёмной доли и удельного количества В-клеток, гипертрофией их ядер и активацией апоптоза), характерные для данной модели заболевания, что свидетельствует о слабой выраженности лекарственного патоморфоза эндокринной части.

221

7. Структурные изменения эндокринной части поджелудочной железы при стрептозотоцин-никотинамид-индуцированном диабете на фоне введения сенситайзеров инсулина (ванадий содержащий комплекс) сопровождаются достоверным увеличением объёмной доли панкреатических островков, выраженной гипертрофией ядер В-клеток, сохранением высокого уровня каспаза-3 и Т1ЖЕЬ-позитивных клеток по сравнению с группой интактного контроля и сахарного диабета.

8. Морфофункциональные изменения у животных с моделью стрептозотоцин-никотинамид-индуцированного диабета при введении антиоксидантов характеризуется статистически значимым увеличением удельного количества и объёмной доли эндокриноцитов В на фоне гипертрофии их ядер по сравнению с крысами диабетиками. Происходит снижение степени выраженности апоптотических процессов на 13,2% (р < 0,05) по сравнению с группой экспериментального диабета.

9. Лекарственный патоморфоз при стрептозотоцин-никотинамид-индуцированном диабете на фоне введения секретогенов характеризуется наличием морфологических изменений эндокринного аппарата поджелудочной железы характерных для индуцированного диабета с сохранением мозаичных структурных изменений В-эндокриноцитов и сопровождается гипертрофией их ядер с выраженным цитоплазматическим накоплением инсулинпозитивного материала.

10. При аллоксан-индуцированном, стрептозотоцин-индуцированном и иммунозависимом сахарном диабете на фоне введения инкретиномиметиков на 7 сутки достоверно снижается индекс апоптоза в 4,5 раза (р < 0,05) и 3,8 (р < 0,05), соответственно, определяемый с помощью выявления каспаза-3 и Т1ЖЕЬ-позитивных клеток. Происходит

222 статистически значимое увеличение объёмной доли островков, удельного количества В-клеток во все сроки наблюдения, увеличение количества PCNA-, Ki-67-позитивных эндокриноцитов В на 13,1% и 3,2%, соответственно, по сравнению с группой животных с сахарным диабетом, что отражает блокаду апоптоза (гиперэкспрессия MDM2, NF-kB) и активацию репаративной регенерации В-клеток.

11. При проведении комплексного сравнительного анализа для верификации патогистологических изменений, характерных для патоморфогенеза сахарного диабета и лекарственного патоморфоза эндокринного аппарата поджелудочной железы на экспериментальных моделях, наиболее информативными дифференциально-диагностическими критериями являются: объёмная доля, удельное количество, относительная площадь ядер В-клеток, индексы апоптоза и пролиферации (по результатам иммуногистохимического исследования и гибридизации in situ).

12. Фенотипическая вариабельность инсулиноцитов панкреатических островков в различных отделах поджелудочной железы позволяет рассматривать их как ключевой морфофункциональный субстрат реализации клеточного повреждения (некроз, апоптоз) при действии В-цитотоксических веществ и развитии лекарственного патоморфоза. На фоне введения различных групп противодиабетических лекарственных средств и лекарственных веществ отмечается различная степень изменений морфофункциональных показателей, активация компенсаторно-приспособительных процессов (гипертрофия ядер, увеличение объёмной доли В-клеток) и репаративной регенерации (увеличение индекса пролиферации и экспрессии PCNA) в эндокриноцитах В.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные комплексные патогистолологнческие и биохимические данные о лекарственном патоморфозе на различных экспериментальных моделях сахарного диабета можно использовать при проведении научно-исследовательских работ для создания инновационных лекарственных препаратов.

Новые данные об инициаторных путях ингибирования и активации апоптоза В-клеток панкреатических островков позволяют использовать их как потенциальную мишень для создания новых противодиабетических лекарственных препаратов.

Комплексный сравнительный анализ патогистологических данных позволяет оценивать степень патоморфоза и эффективность действия потенциальных антидиабетических фармакологических веществ.

Разработанная и апробированная комплексная методика оценки морфофункциональных изменений в эндокринной части поджелудочной железы может использоваться в практическом здравоохранении при исследовании ткани поджелудочной железы полученной от больных с сахарным диабетом для оценки лекарственного патоморфоза.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Снигур, Григорий Леонидович

1. Акмаев И. Г. Руководство по гистологии (частная гистология органов и тканей) /Под ред. И.Г.Акмаева, В.Л. Быкова, О.В. Волкова. В 2 т. Санк-Петербург.: СпецЛит. - 2001. - 735 с.

2. Аметов А. С. Альфа-липоевая кислота в лечении симптомной диабетической полиневропатии / А.С. Аметов, И.А. Строков, А.Н. Баринов и др. // Фарматека. 2004. - Т.88, №11.-С. 69-73.

3. Аметов А. С. Роль Р-клеток в регуляции гомеостаза глюкозы в норме и при сахарном диабете 2 типа / А.С. Аметов // Сахарный диабет. 2008. -Т. 41, № 4. - С. 6-12.

4. Аметов А. С. Роль и место метформина в лечении сахарного диабета типа 2 / А. С. Аметов, И. В. Козедубова // Consilium Medicum. 2008. - Т.8. - №9. - С. 28-33.

5. Аметов А. С., Соловьева О. Л. Нарушения в системе гемостаза при сахарном диабете и пути их коррекции при назначении комбинированной терапии Диабетоном MB иметформином / A.C. Аметов, О.JI. Соловьева // Сахарный диабет. -2007. -Т. 36, № 3. С. 33-38.

6. Аметов А. С. Комбинированная терапия как особенность управления сахарным диабетом типа 2 у кардиальных больных / А. С. Аметов, И. В. Козедубова // Consiliummedicum. 2007. -Т. 2, № 2. - С. 26-31.

7. Анисимов В. Н., Попович И. Г., Спасов А. А., Аникин И. В., Тындык М. Л., Забежинский М. Л. Торможение антидиабетическим препаратом диабенол канцерогенеза кишечника, индуцируемого 1,2-диметилгидразином у крыс. Вопросы онкологии. 2004.-N 5.-С.562-566.

8. Анциферов М. Б. Новые подходы к лечению сахарного диабета типа 2: Глюкагогоподобный пептид-1 и эксенатид (БАЕТА) / М. Б. Анциферов, Л. Г. Дорофеева // Фарматека. 2007. -№ п. - с. 4-23.

9. Анциферов М. Б. Опыт использования комбинированного сахароснижающего препарата глибомет (глибенкламид+метформин) в практике лечения сахарного диабета типа 2 / М. Б. Анциферов, А. Ю. Майоров, Л. Г. Дорофеева // Фарматека. 2006. - №3. -С. 68-72.

10. Балаболкин М. И. Лечение сахарного диабета и его осложнений / М. И. Балаболкин, Е. М. Клебанова, В. М. Креминская. Москва, 2005 - 512 с.

11. Балаболкин М. И. Применение убихинона в комплексной терапии сахарного диабета и его сосудистых осложнений / М. И. Балаболкин, Е. М. Клебанова, В. М. Креминская // Сахарный диабет. 2007. -Т. 37, № 4. - С. 37-44.

12. Балаболкин М. И. Роль окислительного стресса в патогенезе сосудистых осложнений диабета (лекция)/ М. И. Балаболкин, Е. М. Клебанова // Проблемы эндокринологии. 2000, №6. - С.29-34.

13. Балаболкин М. И., Креминская В. М., Клебанова Е. М. Современная тактика лечения сахарного диабета типа 2 // Consilium Medicum. 2001. - Т. 3, № 11.

14. Балаболкин М. И., Сахарный диабет ABCoftheDiabetes : научное издание / П. Дж. Уоткинс ; пер. с англ. Д. Е. Колоды под ред. М. И. Балаболкина. 2-е изд. - Москва : БИНОМ, 2006. - 134 с. : цв.ил., табл.

15. Балаболкин М. И. Современные вопросы классификации, диагностики и критерии компенсации сахарного диабета / М. И. Балаболкин, Е. М. Клебанова, В. М. Креминская Качество жизни. Медицина, 2003. - С. 10-15.

16. Баранов В. Г. Экспериментальный сахарный диабет / В. Г. Баранов-Л., 1983. 300 с.

17. Барышников А. Ю., Шишкин Ю. В. Иммунологические проблемы апоптоза — М.: Эдиториал УРСС, 2002. — 320 с.

18. Василенко В. В. Сахарный диабет. Место комбинированных сахароснижающих препаратов / В. В. Василенко // Русский медицинский журнал. 2006. - Т. 14. - №6. - С. 468-469.

19. Владимирская Е. Б. // Механизмы апоптотической смерти клеток. Гематология и трансфузиология. 2002. - № 3. - с. 35-40.

20. Воронкова М. П. Противодиабетические свойства гимнемовых кислот: Дисс. д-ра биол. наук / М. П. Воронкова. -Волгоград, 2009. 338 с.

21. Галстян Г. Р. Интенсивный контроль гликемии и сосудистые осложнения при сахарном диабете типа 2: результаты исследования ADVANCE. Consilium medicum, 2008.-N 9.-С.5-8.

22. Глинкина И. В. Производные сульфонилмочевины в лечении сахарного диабета типа 2 на современном этапе / И. В. Глинкина // Фарматека. 2009. - №12. - С. 35-40.

23. Громнацкий Н. И., Диабетология, ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, Москва (2002). 256 с.

24. Дедов И. И. Значимость результатов исследования ADVANCE для контроля сахарного диабета в России / И .И. Дедов, М. В. Шестакова // Сахарный диабет. 2009. -Т. 43, № 2. - С. 4-6.

25. Дедов И. И., Мельниченко Г. А. Эндокринология. Национальное руководство. ГЭОТАР-Медиа. 2009. - с. 1100.

26. Дедов И. И. Сахарный диабет: развитие технологий в диагностике, лечении и профилактике (пленарная лекция) // Сахарный диабет. 2010. - №3. - с. 6-13.

27. Дедов И. И., Мельниченко Г. А., Фадеев В. Ф. Эндокринология. М.: ГЭОТАР-Медиа. 2007. 432 с.

28. Демидова И. Ю. Лечение сахарного диабета 2 типа / И. Ю. Демидова // Фарматека. 2007. - №5 (57). - С. 42-47.

29. Древаль А. В. Взаимосвязь HbAlc и параметров перорального теста толерантности к глюкозе у больных сахарным диабетом 2 типа / А. В. Древаль, Ю. А. Редькин, В. В. Богомолов // Проблемы эндокринологии. М. - 2005. - Деп. №53913.

30. Древаль А. В. Нарушенный баланс глюкозы и семь подтипов сахарного диабета, выявленных с помощью внутривенного теста толерантности к глюкозе / Древаль А. В. // Проблемы эндокринологии. 2006 - Т. 52, №6. - С. 3-10.

31. Дудченко Г. П. Поиск и изучение антидиабетических веществ среди новых производных безнзимидазола: Дисс. канд.мед.наук / Г. П. Дудченко. Волгоград, 1989, -127 с.

32. Дудченко Г. П. Противодиабетическая активность производных бензимидазола: Дисс. докт. мед.наук / Г. П. Дудченко. Волгоград, 2001, -331 с.

33. Зайцев В. Г. Связь между химическим строением и мишенью действия как основа классификации антиоксидантного действия / В. Г. Зайцев О. В. Островский, В. И. Закревский // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2003. - Т. 66, № 4. - С. 66-70.

34. Занозина Н. Н. Необходимость и достаточность использования антиоксидантов в терапии сахарным диабетом 2 типа / О. В. Занозина, Н. Н. Боровиков, М. И. Балаболкин // Бюллютень экпериментальной биологии и медицины. 2006. -Приложение 1.-С. 112-118.

35. Захарова И. В., Пащенко П. С. Изменения структуры поджелудочной железы после воздействия на организм гравитационных перегрузок. // Морфология. 2006. - N. 1. - С. 6267.

36. Зверева И. В., Лукьянчиков В. С. // Патогенез и профилактика сосудистых осложнений при метаболическом синдроме и сахарном диабете 2 типа. «Эндокринология». Русский Медицинский Журнал. 2009. Т.17. N10. - с. 717-720.

37. Зилов А. В. Метформин патогенетический препарат первой линии в лечении сахарного диабета 2 типа / А. В. Зилов // Трудный пациент. - 2008. - Т. 6. - №12. - С. 24-28.

38. Иванова В. Ф., Пузырев А. А. Структурно-функциональные изменения в поджелудочной железе белой крысы при введении глюкозы. // Морфология. 2006. - Т. 129 - N1. - С. 67-71.

39. Исакова М. Р. Пути коррекции патогенетических звеньев при сахарном диабете 2 типа: препараты сульфонилмочевины и бигуаниды / М. Р. Исакова, JI. В. Кондратьева // Русский медицинский журнал. 2007. - Т. 15. - №22. - С. 1630-1635.

40. Киясов А. П. Современные технологии морфологических исследований. Методическое пособие для студентов, аспирантов и врачей-патологов. Казань. 2001. - 38 с.

41. Князькин И. В., Цыган В. Н. Апоптоз в онкоурологии. СПб.: Наука, 2007. - 240 с.

42. Колуэлл Д. А. Сахарный диабет. Новое в лечении и профилактике. М., 2007. - 288 с.

43. Кононенко И. В. Комбинированная терапия пероральными сахароснижающими препаратами в лечении сахарного диабета 2 типа / И. В. Кононенко, О. М. Смирнова // Лечащий врач. 2007. -№2. - С. 28-33.

44. Коржевский Д. Э. Краткое изложение основ гистологической техники для врачей и лаборантов-гистологов. Санкт-Петербург, 2005.-48с.

45. Кроненберг Г. М. Сахарный диабет и нарушения углеводного обмена / Г. М. Кроненберг, Ш. Мелмед и др.. М.: ООО «Рид Элсивер», 2010. - 448 с.

46. Кротова Ю. Н., Каркищенко В. Н., Хлопонин Д. П. // Роль апоптоза в патологии миокарда. Биомедицина. 2005. - №1. - с. 17-34.

47. Мамедов М. Н. Возможны ли диагностика и лечение метаболического синдрома в реальной практике? / М. Н. Мамедов // Лечащий врач. 2006.- № 6. - С. 18.

48. Манских В. Н. // Морфологические методы верификации и количественной оценки апоптоза. Бюллетень сибирской медицины. -2004. №1. - с. 63-70.

49. Меньшикова Е. Б. Ланкин В. 3., Зенков Н. К. и др. Окислительный стресс. Антиоксиданты и прооксиданты М.: «Слово», 2006. 556 с.

50. Муравьева И. Н. Современные аспекты действия пероральных сахароснижающих препаратов на поджелудочную железу / И. Н. Муравьева, Теплая Е. В. и др. // Украшский медичний часопис. 2003. - №1 (33). - С. 33-37.

51. Мушкамбаров Н. Н., Кузнецов С. Л. Молекулярная биология.- М.: «МИА», с. 544, 2003.

52. Недосугова Л. В. Новые стратегии в лечении сахарного диабета 2 типа / Л. В. Недосугова // Русский медицинский журнал.- 2006. Т.Н. - №13. - С. 989-992.

53. Петров В. И. Спасов А. А. Российская энциклопедия биологически активных добавок к пище. ГЭОТАР-Медиа. 2007. -1056 с

54. Пикап Дж., Уильямз Г., Руководство по диабету. МЕДпресс. -2003.-248 с.

55. Писарев В. Б., Снигур Г. Л., Спасов А. А. с соав. Механизмы токсического действия стрептозотоцина на в-клетки островков Лангерганса // Бюлл. эксп. биол. и мед. 2009. - Т. 148. - N. 12. -с. 700-702.

56. Полторак В. В. Горбенко Н. И. Сакало Е. А. Профилактикасахарного диабета I типа: патофизиологическое обоснование,стратегия и клиническая реализация. Украинский медицинскийжурнал №2(22) III IV 2001. - с. 83-91231

57. Рациональная фармакотерапия заболеваний эндокринной системы и нарушений обмена веществ: Рук. для практикующих врачей/Под общ. ред. И. И. Дедова, Г. А. Мельниченко. М.: Литтерра, 2006. 1080 с.

58. Реутов В. П. Цикл оксида азота в организме млекопитающих и принцип цикличности / В. П. Реутов // Биохимия. 2002. - Т. 67, № 3. - С. 353-376.

59. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека. Издание 3-е, дополненное и переработанное. Под редакцией С. В. Петрова, Н. Т. Райхлина Казань, 2004. - 456 с.

60. Рыжов С. В., Новиков В. В. Молекулярные механизмы апоптотических процессов // Российский биотерапевтический журнал. 2002. - Т. 1, №3. - С. 27 - 33.

61. Саркисов Д. С. Очерки истории общей патологии/АМН СССР. — М.: Медицина, 1988, 336 с.

62. Севергина Э. С. Инсулинозависимый сахарный диабет -взгляд морфолога. М.: Издательский дом Видар-М. - 2002. - 152 с.

63. Смирнова О. М. Комбинированная терапия сахарного диабета типа 2 / О. М. Смирнова // Проблемы эндокринологии. 2005. -Т.51. - №3. - С. 7-10.

64. Смирнова О. М. Преимущества комбинированной терапии в лечении сахарного диабета типа 2 / О. М. Смирнова // Фарматека. -2008. -№3.-С. 48-51.

65. Спасов А. А. Влияние гипогликемических средств на гемореологические параметры крови / А. А. Спасов, А. Ф. Кучерявенко, О. А. Салазникова // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2009. - Т.72. - №5. - С. 31-34.

66. Спасов А. А. Диабенол новое противодиабетическое вещество с гемобиологическими свойствами / А. А. Спасов, Г. П. Дудченко, Е. С. Гаврилова, А. Ф. Кучерявенко и др. // Вестник BMA. - 1997. - Т. 52. - №3. - С. 47-51.

67. Спасов А. А., Косолапов В. А., Чепляева Н. И. Антиоксидантная активность пероральных сахарснижающих препаратов. Проблемы эндокринологии. 2011. - N. 4. - С. 21-24.

68. Спасов А. А., Косолапов В. А., Чепляева Н. И. Сравнительная характеристика антиоксидантных свойств гипогликемических препаратов диабенола и гликлазида. Экспериментальная и клиническая фармакология. -2011. N. 11.- С. 14-16.

69. Спасов А. А., Петров В. И., Анисимова В. А. и др. / Материалы IV Всероссийского диабетологического конгресса. . М., 2008. — С. 336

70. Спасов А. А., Чепурнова М. В. Научные подходы к комбинированной терапии сахарного диабета типа 2. Вестник ВолгГМУ.-2011. Вып. 1.-Т. 37.-с. 8-12.

71. Спасов A.A. Влияние препарата диабенол на секрецию инсулина / А. А. Спасов, Г. П. Дудченко, Н. А. Гурова // Вестник BMA. 2000. - Т. 56. - №6. - С. 46-49.

72. Спасов А. А., Воронкова М. П., Снигур. Г. JL, Чепляева Н. И., Чепурнова М. В. Экспериментальная модель сахарного диабета типа 2. Биомедицина № 3, 2011, С. 12-18.

73. Старкова Н. Т. / Клиническая эндокринология. Руководство // Н. Т. Старкова. — издание 3-е, переработанное и дополненное. — Санкт-Петербург: Питер, 2002. — 576 е.;

74. Старкова Н. Т., Клиническая эндокринология. Руководство / Под ред. Н. Т. Старковой. — издание 3-е, переработанное и дополненное. — Санкт-Петербург: Питер. 2002. — 576 с.

75. Стаховская JI. В. Клиническое применение препаратов липоевой кислоты / J1. В. Стаховская, А. В. Алехин, О. И. Гусева // Справочник поликлинич. врача. 2007. - № 5. - С. 1-6.

76. Стаценко М. Е. Поражение сердца у больных сахарным диабетом 2 типа: факторы риска и механизмы развития / М. Е. Стаценко, С. В. Туркина // Вестник ВолГМУ. 2010. - Т. 33, № 1. -С. 9-14.

77. Тибирькова Е. В. // Антиоксидантные и мембранопротекторные свойства тролокса. / Е. В. Тибирькова, В. А. Косолапов, А. А. Спасов // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2009. - Т.72. - с.47 - 50.

78. Трегубова И. А., Косолапов В. А., Спасов А. А. Антиоксид анты: современное состояние и перспективы. Успехи физиологических наук. 2012. - N1. - С. 75-94.

79. Фильченков А. А. Каспазы: регуляторы апоптоза и других клеточных функций // Биохимия. 2003. - Т. 68, Вып. 4. - С. 453 -466.

80. Хабриев Р. У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Р. У. Хабриев 2-изд., перераб. и доп. - М.: Медицина. - 2005. -832 с.

81. Чепляева Н. И. Фармакологические свойства комбинации гипогликемического вещества диабенол и альфа-липоевой кислоты. Дисс. . канд. мед. наук. Волгоград . 2012. - 175 с.

82. Чеснокова Н. П. Общая характеристика источников образования свободных радикалов и антиоксидантных систем / Н. П. Чеснокова, Е. В. Понукалина, М. Н. Бизенкова // Успехи современного естествознания. 2006. - № 7. - С. 37-41.

83. Шварц В. Применение ингибиторов дипептидилпептидазы 4 для лечения сахарного диабета 2-го типа / В. Шварц // Проблемы эндокринологии. - 2008. - Т.54. - №4. - С. 39-45.

84. Шестакова М. В. Влияние препаратов сульфонилмочевины на сердечно-сосудистую систему / М. В. Шестакова //Сахарный диабет. 2007. - Т. 34, № 1. - С. 54-60.

85. Шестакова М. В. Секреция инсулина при сахарном диабете 2 типа: от международного проекта группы IGIS к национальному проекту группы НГИС / М. В. Шестакова // Сахарный диабет. -2008. Т. 41, № 4. - С. 4-6.

86. Шубина А. Т. Стратегия выбора сахароснижающей терапии: ренессанс бигуанидов / Шубина А. Т. // Русский медицинский журнал. 2005. — Т. 13. - №19.- С. 1278-1281.

87. АЬоуе Т. L., 3D-QSAR studies of pyruvate dehydrogenase kinase inhibitors based on a divide and conquer strategy / T. L. Aboye, M. E. Sobhia, P. V. Bharatam // Bioorg Med Chem 2004. №12. - P. 270915.

88. Akbarzadeh A., Norouzian D., Mehrabi M. R., Jamshidi Sh., Farhangi A., Allah Verdi A., Mofidian S.M.A., Lame Rad B. Induction of diabetes by streptozotocin in rats. Indian J. of Clin. Biochem. -2007. Vol.22. - N2. - P. 60-64.

89. Allred D. C., Harvey J. M., Berardo M., Clark G. M. Prognostic and predictive factors in breast cancer by immunohistochemical analysis. Mod. Pathol. 1998. -N. 11. - P. 155-68.

90. Aughsteen A. A., An ultrastructural study on the effect of streptozotocin on the islets of Langerhans in mice // J. Electron Microscopy. -2000. Vol. 49. - №. 5. - P. 681-690.

91. Bae S.K., Kim J.Y., Yang S.H., Kim J.W., Kim T., Lee M.G. Pharmacokinetics of oltipraz in rat models of diabetes mellitus induced by alloxan or streptozotocin. Life Sci. 2006 Apr 11;78(20):2287-94.

92. Baggio L. L., Drucker D. J. // Biology of incretins: GLP-1 and GIP. Gastroenterology 132, 2131-57 (2007).

93. Bajt M. L., Cover C., Lemasters J. J., Jaeschke H. // Nuclear translocation of endonuclease G and apoptosis-inducing factor during acetaminophen-induced liver cell injury. Toxicol. Sci. 2006. - Vol. 94. -N 1. -P. 217-25.

94. Bandyopadhyay S., et al. Mechanism of apoptosis induced by the inhibition of fatty acid synthase in breast cancer cells. CancerResm, 593440 (2006).

95. Bassik M. C., Scorrano L., Oakes S. A., Pozzan T., Korsmeyer S. J. Phosphorylation of BCL-2 regulates ER Ca2 homeostasis and apoptosis. EMBO J 23, 1207-16 (2004).

96. Battell M. L., Yuen V. G., McNeill J. H. Treatment of BB rats with vanadyl sulphate. Pharmacol Commun. 1992. - Vol. 1. - P. 291301.

97. Baud V., Karin M. // Signal transduction by tumor necrosis factor and its relatives. Trends Cell Biol. 2001. - Vol. 11.-N9. -P. 372-7.

98. Beisner D.R., Chen I.L., Kolla R.V., et al. // Cutting edge: innate immunity conferred by B cells is regulated by caspase-8. J. Immunol. -2005. Vol. 175. - N. 6. - P. 3469-73.

99. Bell G. I. Polonsky K. S. Diabetes mellitus and genetically programmed defects in beta-cell function. Nature 414,788-91 (2001).

100. Bemard-Kargar C., Ktorza A., Diabetes, 50(Suppl.l), 30-35 (2001).

101. Bertalli E., Bendayan M. Association between endocrine pancreas and ductal system. More than an epiphenomenon of endocrine differentiation and development? // J. Histochem. & Cytochem. 2005.- Vol.53. -N3. P. 1071-1086.

102. Bertalli E., Bendayan M. Association between endocrine pancreas and ductal system. More than an epiphenomenon of endocrine differentiation and development? // J. Histochem. & Cytochem. 2005.- Vol.53. -N3. P. 1071-1086.

103. Bhanot S., McNeill J. H. Vanadyl sulfate lowers plasma insulin and blood pressure in spontaneously hypertensive rats. Hypertension. -1994. Vol. 24. - P. 625-632.

104. Blondel O., Bailbe D., Portha B. In vivo insulin resistance in streptozotocin-diabetic rats evidence for reversal following oral vanadate treatment. Diabetologia. 1989. - Vol. 32. - P. 185-190.

105. Bolitho P., Voskoboinik I., Trapani J. A., Smyth M. J. Apoptosis induced by the lymphocyte effector molecule perforin. Current Opinlmmunol 19,339-7 (2007).

106. Bone K. Phytotherapy Review & Commentary Gymnema: A Key Herb in the Management of Diabetes, FNIMH, FNHAA / K. Bone. // -2002.

107. Bonner-Weir S., Diabetes, 50, 20 24 (2001).

108. Bose A. K., Mocanu M. M., Carr R. D., Brand C. L., Yellon D. M. // Glucagon-like peptide 1 can directly protect the heart against ischemia/reperfusion injury. Diabetes 54, 146-51 (2005).

109. Bouwens L. Rooman I. Regulation of pancreatic beta-cell mass. PhysiolRev85, 1255-70 (2005).

110. Bowker S. L., Majumdar S. R., Veugelers P. et al. Increased cancer-related mortality for patients with type 2 diabetes who use sulfonylureas or insulin // Diabetes Care. 2006; 29: 254—258.

111. Brubaker P. L. Drucker D. J. Minireview: Glucagon-like peptides regulate cell proliferation and apoptosis in the pancreas, gut, and central nervous system. Endocrinology 145,2653-9(2004).

112. Budin S. B. Alpha lipoic acid prevents pancreatic islet cells dfamage and dyslipidemia in streptozotocin-induced diabetic rats / S. B. Budin, K. P. Kee, M. Yau Swee Eng // Malaysian Journal of Medical Sciences. 2007. - V. 14, № 2. - P. 47-53.

113. Burke A. P., Tavora F. Practical Cardiovascular Pathology. Lippincott Williams & Wilkins. 2010. - p. 608.

114. Butler A. E., Janson J., Bonner-Weir S., et al. // P-cell deficit and increased P-cell apoptosis in humans with type 2 diabetes. Diabetes. -2003.-Vol. 52.-N l.-P. 102-110.

115. Butler A.E., et al. // Oxidative stress and P-cell apoptosis. Diabetes. 2003. - Vol. 54. - N 3. - P. 98-114.

116. Buttke T. M., Sandstrom P. A. // Oxidative stress as a mediator of apoptosis. Immunol. Today. - 1994. - Vol.15. - N l.-P. 7-10.

117. Cahuana G. M., et al. Nitric oxide mediates the survival action of IGF-1 and insulin in pancreatic beta cells. Cell Signal. 2008. - Vol. 20. -P. 301-10.

118. Calles-Escandon J., Cipolla M. Diabetes and Endothelial Dysfunction: A Clinical Perspective. Endocrine Reviews. 2001. -Vol. 22. - N1. - P. 36-52.

119. Cam M. C., Brownsey R. W., McNeill J. H. Mechanisms of vanadium action: insulin-mimetic or insulin-enhancing agent? Can. J. Physiol. Pharmacol. 2000. - Vol. 78. - P. 829-847.

120. Cam M. C., Pederson R. A., Brownsey R. W., McNeill J. H. Long-term effectiveness of oral vanadyl sulphate in streptozotocin-diabetic rats. Diabetologia. 1993. - Vol. 36. - P. 218-224.

121. Chi T.C., Chen W.P., Chi T.L., Kuo T.F., Lee S.S., Cheng J.T., Su M.J. Phosphatidylinositol-3-kinase is involved in the antihyperglycemic effect induced by resveratrol in streptozotocin-induced diabetic rats. Life Sci 2007;80:1713-20

122. Cnop M. // Fatty acids and glucolipotoxicity in the pathogenesis of Type 2 diabetes. Biochem. Society Transactions. 2008. - Vol. 36. - N 3. - P. 348-352.

123. Cottet S., et al. cFLIP protein prevents tumor necrosis factoralpha-mediated induction of caspase-8-dependent apoptosis in insulin240secreting betaTc-Tet cells. Diabetes 51, 1805-14 (2002).

124. Crow M. T., Mani K., Nam Y. J., et al. // The mitochondrial death pathway and cardiac myocyte apoptosis. Circ Res. 2004. - Vol. 95. -N 10. - P. 957-70.

125. Czerski L., Nunez G. // Apoptosome formation and caspase activation: is it different in the heart? J. Mol. Cell Cardiol. 2004. -Vol. 37.-N3.-P. 643-52.

126. Daisy Mythili M., Rashmi Vyas, Akila G. Gunasekaran S. Effect of streptozotocin on the ultrastructure of rat pancreatic islets // Microsc. Res. Tech. 2004.-Vol.63.-N5.-P. 274-281.

127. Danial N. N., Korsmeyer S. J. Cell death: critical control points. Cell 116, 205-19 (2004).

128. De Leon D. D., Crutchlow M. F., Ham J. Y., Staffers D. A. // Role of glucagon-like peptide-1 in the pathogenesis and treatment of diabetes mellitus. Int J Biochem Cell Biol. 2006. - Vol. 38. - P. 84559.

129. Dickson L. M. Rhodes C. J. Pancreatic beta-cell growth and survival in the onset of type 2 diabetes: a role for protein kinase B in the Akt? AmJ PhysiolEndocrinolMetab. 287. 192-8 (2004).

130. Dohi T., et al., // Inhibitionof apoptosis by survivin improves transplantation of pancreatic islets for treatment of diabetes in mice. EMBORepl, 438A3 (2006).

131. Drucker D. J. Glucagon-like peptide-1 and the islet |3-cell: augmentation of cell proliferation and inhibition of apoptosis / D. J. Drucker // Endocrinology. 2003. - P. 5145-5148.

132. Drucker D. J., Rosen C. F. 11 Glucagon-like peptide-1 (GLP-1) receptor agonists, obesity and psoriasis: diabetes meets dermatology. Diabetologia. -2011.- Vol. 54. N. 11. - P. 2741 -4.

133. Dunn I., Mc. Letchie N., Sheehan H. Necrosis of islets of Langerhans produced experimentally // Lancet. 1943. V. 244. № 6242. p. 484 487.

134. Eherli A. M. Drugs that alter blood viscositi. Their role in therapy / A. M. Eherli // Drugs. 1990. - Vol. 39, № 2. - P. 155-159.

135. Eizirik D. L. Mandrup-Poulsen T. A choice of death the signal-transduction of immunemediated beta-cell apoptosis. Diabetologia44,2115-33 (2001).

136. Eldor R., et al. Conditional and specific NF-kappaB blockade protects pancreatic beta cells from diabetogenic agents. ProcNatlAcadSci USA 103, 5072-7 (2006).

137. Eisner M, Guldbakke B, Tiedge M, Munday R, Lenzen S (2000) Relative importance of transport and alkylation for pancreatic beta-cell toxicity of streptozotocin. Diabetologia 43:1528-1533

138. Eisner, M, Gurgul-Convey, E, Lenzen, S: Relation between triketone structure, generation of reactive oxygen species and selective toxicity of the diabetogenic agent alloxan. Antioxidants & Redox Signaling, 10, 691-699, 2008.

139. Eisner, M, Gurgul-Convey, E, Lenzen, S: Relative importance of cellular uptake and reactive oxygen species for the toxicity of alloxan and dialuric acid to insulin-producing cells. Free Radic Biol Med 41, 825-834, 2006.

140. Eisner, M, Tiedge, M, Guldbakke, B, Munday, R, Lenzen, S: Importance of the GLUT2 glucose transporter for pancreatic beta cell toxicity of alloxan. Diabetologia 45, 1542-1549, 2002.

141. Eisner, M, Tiedge, M, Lenzen, S: Mechanism underlying resistance of human pancreatic beta cells against toxicity of streptozotocin and alloxan. Diabetologia, 46, 1713-1714, 2003

142. Emamaullee J. A., et al. XIAP overexpression in human islets prevents early posttransplant apoptosis and reduces the islet mass needed to treat diabetes. Diabetes, 2541-8 (2005).

143. Emamaullee J. A., Shapiro A. M. Interventional strategies to prevent beta-cell apoptosis in islet transplantation. Diabetes 55,1907-14 (2006).

144. Emamaullee T., Liston P., Korneluk R. G., Shapiro A. M. Elliott J. F. XIAP overexpression in islet beta-cells enhances engraftment and minimizes hypoxia-reperfusion injury. Am.Transplants, 1297-305 (2005).

145. Essers J., Theil A. F., Baldeyron C., et al. Nuclear Dynamics of PCNA in DNA Replication and Repair // Mol. Cell Biol. 2005. - Vol. 25/-N21. - P. 9350-9359.

146. Evans J. M., Donnelly L. A., Emslie-Smith A. M., Alessi D. R., Morris A. D. Metformin and reduced risk of cancer of 25—37% in diabetic patients // BMJ. 2005; 330: 1304—1305.

147. Faideau B., Larger E., Lepault F., Carel J. C. Boitard C. Role of beta-cells in type 1 diabetes pathogenesis. Diabetes 54 Suppl 2, S87-96 (2005).

148. Fantus I. G., Tsiani E. Multifunctional actions of vanadium compounds on insulin signaling pathways: evidence for preferential enhancement of metabolic versus mitogenic effects. Mol. Cell Biochem. 1998.-Vol. 182.-P. 109-119.

149. Faust A. Effect of lipoic acid on cyclophosphamide-induced diabetes and insulitis in non-obese diabetic mice. / A. Faust, V. Burkart, H. Ulrich et al. //Int. J. Immunopharmacol. 1994. - V. 16. -P. 61-66.

150. Feanny M. A., PDX-1 Expression Is Associated with Islet Proliferation In Vitro and In Vivo / M.A. Feanny et al. // J. Surg. Res. 2007. № 19. - P. 342.

151. Francoz S., Froment P., Bogaerts S., et al. // Mdm4 and Mdm2 cooperate to inhibit p53 activity in proliferating and quiescent cells in vivo. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006. - Vol. 103. - N 9. - P. 32327.

152. Fujita E., et al. Two endoplasmic reticulum-associated degradation (ERAD) systems for the novel variant of the mutant dysferlin: ubiquitin/proteasome ERAD (I) and autophagy/lysosomeERAD(II). Hum Mol Genet 16, 618-29 (2007).

153. Fushiki T., An extract of Gymnema sylvestre leaves and purified gymnemic acid inhibits glucose-stimulated gastric inhibitory peptide secretion in rats / T. Fushiki et al. // J Nutr. 1992. - Vol. 122, № 12. - P. 2367-2440.

154. Giannoukakis N., Rudert W. A., Trucco M., Robbins P. D. Protection of human islets from the effects of interleukin-lbeta by adenoviral gene transfer of an Ikappa B repressor. J Biol Chem. 2000;275:36509-36513.

155. Gloria Y., Systematic Review of Herbs and Dietary Supplements for Glycemic Control in Diabetes. / Gloria Y. et al. // Diabetes Care. -2003. Vol. 26, № 4. - P. 1277-1294.

156. Godsland I. F., Jeffs J. A., Johnston D. G. // Loss of beta cell function as fasting glucose increases in the non-diabetic range. Diabetologia47, 1157-66 (2004).

157. Goldwaser I., Sim Q., Gershonov E., et al., Molecular Pharmacology, 58, 738 746 (2000)

158. Gysemans C.A., et al. Disruption of the gamma-interferon signaling pathway at the level of signal transducer and activator of transcription-1 prevents immune destruction of beta-cells. Diabetes54,2396-403 (2005).

159. Haataja L., Gurlo T., Huang C. J. Butler P. C. Islet amyloid in type 2 diabetes, and the toxic oligomer hypothesis. EndocrRev29, 30316 (2008).

160. Hadi H. A. R., Suwaidi J. A. 1. Endothelial dysfunction in diabetes mellitus // Vascular Health and Risk Management. 2007. -Vol 3. -N6. -P. 853-876.

161. Halberstam M., Cohen N., Shiimovich P., et al., Diabetes. -1996. Vol. 45. - P. 659-666.

162. Harris S. L., Levine A. J. // The p53 pathway: positive and negative feedback loops. Oncogene. 2005. - Vol. 24. - N 17. - P. 2899-908.

163. Hassan N, Janjua MZ. The optimum dose of nicotinamide for protection of pancreatic beta-cells against the cytotoxic effect of streptozotocin in albino rat. J Ayub Med Coll Abbottabad 2001; 13:26— 30

164. Haupt S., Berger M., Goldberg Z., Haupt Y. // Apoptosis the p53 network. J. Cell Sci. - 2003. - Vol. 116. - N 20. - P. 4077-85.

165. Hay den M. S., Ghosh S. // Signaling to NF-kappaB. Genes Dev. -2004. Vol. 18. - N 18. - P. 2195-224.

166. Heimberg H., et al. Inhibition of cytokine-induced NF-kappaB activation by adenovirus-mediated expression of a NF-kappaB super-repressor prevents beta-cell apoptosis. Diabetes. 2001;50:2219-2224.

167. Heinrich M., et al. Cathepsin D links TNF-induced acid sphingomyelinase to Bid-mediated caspase-9 and -3 activation. Cell Death Differ \\, 550-63 (2004).

168. Hetz C., et al. Bax channel inhibitors prevent mitochondrion-mediated apoptosis and protect neurons in a model of global brain ischemia. JBiol Chem280, 42960-70 (2005).

169. Heyliger C. E., Tahiliani A. G., McNeill J. H. Effect of vanadate on elevated blood glucose and depressed cardiac performance of diabetic rats. Science. 1985. - Vol. 227. - P. 1474-1477.

170. Holstein A. Lower incidence of severe hypoglycaemia in patients with type 2 diabetes treated with glimepiride versus glibenclamid / A. Holstein et al. // Diabetes Metab Res Rev. 2001. - Vol. 17. - №6. -P. 467-473.

171. Hou J., Oral administration of a fusion protein containing eight GLP-1 analogues produced in Escherichia coli BL21(DE3) in streptozotocin-induced diabetic rats / J. Hou et al. // Biotechnol Lett. -2007.-№21.-P. 112.

172. Hoyer-Hansen M., et al. Control of macroautophagy by calcium, calmodulin-dependent kinase kinase-beta, and Bcl-2. MolCelllb, 193205 (2007).

173. Hui H., et al. Adenovirus-mediated XIAP gene transfer reverses the negative effects of immunosuppressive drugs on insulin secretion and cell viability of isolated human islets. Diabetes, 424-33 (2005).

174. Huong D. T. // Dietary lipoic acid-dependent changes in the activity and mRNA levels of hepatic lipogenic enzymes in rats / D. T. Huong T. Ide // British Journal of Nutrition. 2008. - V. 100. - P. 7987.

175. Iqbal J., Zaidi M. // TNF regulates cellular NAD metabolism in primary macrophages. Biochem Biophys ResCommun342, 1312-18 (2006).

176. Islam M.S., Wilson R.D. Experimentally induced rodent models of type 2 diabetes. Methods Mol. Biol. 2012; 933:161-74.

177. Islam S., Choi H. Nongenetic Model of Type 2 Diabetes: A Comparative Study // Pharmacology. 2007. № 79. P. 243-249.

178. Islam S., Loots D.T. Experimental rodent models of type 2 diabetes: a rewiev // Methods Find Exp Clin Pharmacol 2009. 31(4): P. 249-261.

179. Jennette J. C., Heptinstall R. H., et al., Heptinstall's Pathology Of The Kidney. Lippincott Williams & Wilkins, 2007 1600 p.

180. Jung J.Y., Kim W.J. // Involvement of mitochondrial- and Fasmediated dual mechanism in CoCl(2)-induced apoptosis of rat PC 12 cells. Neurosci Lett. 2004. - Vol. 371. - N 2-3. - P. 85-90.

181. Karp G. // Cell and Molecular Biology: Concepts and Experiments (6th Edition). 2009. - 832 p.

182. Karp G. Cell and Molecular Biology. Concepts and experiments. John Wiley & Sons, Inc. - 2010 - 837 p.

183. Kassem S. A., Ariel I., Thornton P. S., Scheimberg I. Glaser, B. Beta-cell proliferation and apoptosis in the developing normal human pancreas and in hyperinsulinism of infancy. Diabetes 49,1325-33 (2000).

184. Kelley R.F., Totpal K., Lindstrom S.H., et al. // Receptor-selective mutants of Apo2L/TRAIL reveal a greater contribution of

185. DR5 than DR4 to apoptosis signaling. J Biol Chem. 2005. - Vol. 280. -N 3. -P. 2205-12.

186. Kerr J.F.R., Wyllie A.H., Currie A.R. // Apoptosis: a basic biological phenomenon with wideranging implications in tissue kinetics. Br. J. Cancer. 1972. - Vol. 26. - P. 239-257.

187. Kieffer T. J. The Glucagon-Like Peptides / Timothy J. Kieffer, J. F. Habener // Endocrine Reviews. 2007. - № 20(6). - P 876-913.

188. Kim B. M., Ham Y. M., Shin Y. J., et al. // Clusterin expression during regeneration of pancreatic islet 3-cell in streptozotocin-induced diabetic rats. Diabetologia. 2001. - Vol. 44. - N 12. - P. 2192-2202.

189. Kim D. Exenatide reduzierte HbAlc und gewicht uber 82 wochen bei patienten mit typ-2 diabetes / D. Kim, M. E. Troufman // Diabetes Stoffwechsel. 2007. - № 14(2). - P. 161.

190. Kim R. // Unknotting the roles of Bcl-2 and Bcl-xL in cell death. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2005. -Vol. 333. - N 2. - P. 33643.

191. Kim R., Emi M., Tanabe K. // Role of mitochondria as the gardens of cell death. Cancer Chemother. Pharmacol. 2005. - Vol. 21. -P. 1-9.

192. Kitiphongspattana K., et al. Protective role for nitric oxide during the endoplasmic reticulum stress response in pancreatic beta-cells. Am J Physiol Endocrinol Metab 292, El543-54 (2007).

193. Larson N. F. Metformin More Effective if Initiated Soon After Diabetes Diagnosis // Diabetes Care. 2010; 33: 501—506.

194. Laybutt D. R., et al. Endoplasmic reticulum stress contributes to beta cell apoptosis in type 2 diabetes. Diabetologia 50, 752-63 (2007).

195. Lebovitz H. E. Insulin secretagogues: old and new // Diabetes Rev. 1999. - Vol. 7, № 3. - P. 139-153.

196. Lencioni C, Lupi R, Del Prato S. Beta-cell failure in type 2 diabetes mellitus. Curr Diab Rep 2008;8:179-84

197. Lenzen S. The mechanisms of alloxan- and streptozotocin-induced diabetes / S. Lenzen // Diabetologia. 2008. - Vol. 51. - P. 216-226.

198. Li F, Chong ZZ, Maiese K. Cell life versus cell longevity: the mysteries surrounding the NAD+ precursor nicotinamide. Curr Med Chem 2006;13:883-95

199. Li J., Lee B., Lee A. S. Endoplasmic reticulum stress-induced apoptosis: multiple pathways and activation of p53-up-regulated modulator of apoptosis (PUMA) and NOXA by p53. JBiol Chem 281, 7260-70 (2006).

200. Li L., Zhaohong Y., Masaharu S., Kojima I. // Effect on regeneration of pancreatic p-cell in neonatal streptozotocin-treated rats. Diabetes. 2004. - Vol. 53. - N 3. - P. 608-615.

201. Li W.J., Peng Y., Zhou J., Li B., Wang H., Zhang J., Wang Z. Poly(ADP-ribose) polymerase inhibition improves erectile function by activation of nitric oxide/cyclic guanosine monophosphate pathway in diabetic rats. J. Sex. Med. 2012 May;9(5): 1319-27

202. Liadis N., et al. Distinct in vivo roles of caspase-8 in beta-cells in physiological and diabetes models. Diabetes 56, 2302-11 (2007).

203. Liggins C., Orlicky D. J., Bloomquist L. A. Gianani R. Developmentally regulated expression of Survivin in human pancreatic islets. Pediatr Dev Pathol 6, 392-7 (2003).

204. Limbert C., Path G., Jakob F., Seufert J. // Beta-cell replacement and regeneration: Strategies of cell-based therapy for type 1 diabetes mellitus. Diabetes Res Clin Pract 79,389-99(2008).

205. Lin Y., Devin A., Cook A., et al. // The death domain kinase RIP is essential for TRAIL (Apo2L)-induced activation of IkappaB kinase and c-Jun N-terminal kinase. Mol. Cell Biol. 2000. - Vol. 20. - N 18. -P. 6638-45.

206. Lyonnet B. M. M., Martin E. L'emploi therapeutique des derives du vanadium. La Presse Medicale. 1899. Vol. 32. - P. 191-192.

207. Maedler K., et al. Glucose-induced beta cell production of ILlbeta contributes to glucotoxicity in human pancreatic islets. JClinlnvest 110, 851-60 (2002).

208. Maedler K., et al. Low concentration of interleukin-lbeta induces FLICE-inhibitory protein-mediated beta-cell proliferation in human pancreatic islets. Diabetes 55, 2713-22 (2006).

209. Maedler K., Sergeev P., Ris F., et al. Glucose-induced cell production of IL-ip contributes to glucotoxicity in human pancreatic islets // J. Clin. Invest. 2002. - Vol. 110. - N 6. - P. 851-860.

210. Malaisse W. J., Doherty M., Ladriere L., Malaisse-Lagae F. (2001) Pancreatic uptake of 2-14C.alloxan. Int J Mol Med 7:311-315

211. Marchetti P., et al. The endoplasmic reticulum in pancreatic beta cells of type 2 diabetes patients. Diabetologia 50, 2486-94 (2007).

212. Masiello P. Experimental NIDDM: development of a new model in adult rats administered streptozotocin and nicotinamide. / P. Masiello, C. Broca, R. Gross et al. //Diabetes. 1998. - V. 47. - P. 244-229.

213. Mathis D., Vence L. Benoist C. Beta-cell death during progression to diabetes. Nature414, 792-8 (2001).

214. McNeill J. H., Yuen V. G., Dai S., Orvig C. Increased potency of vanadium using organic ligands. Mol. Cell Biochem. 1995. - Vol. 153. -P. 175-180.

215. Meex S.J., et al. Activating transcription factor 6 polymorphisms and haplotypes are associated with impaired glucose homeostasis and type 2 diabetes in Dutch Caucasians. / Clin EndocrinolMetab92,2720-5 (2007).

216. Meglasson MD, Burch PT, Berner DK, Najafi H, Matschinsky FM (1986) Identification of glucokinase as an alloxan-sensitive glucose sensor of the pancreatic beta-cell. Diabetes 35:1163-1173

217. Melloul D. // Role of NF-kappaB in beta-cell death. Biochem Soc Trans36, 334-9 (2008).

218. Mering J., Minkowski O. Diabetes mellitus nach Pancreas extirpation //Zbl. Klin. Med. 1889. Bd 10. S. 393 407.

219. Micheau O., Lens S., Gaide O. Alevizopoulos K., Tschopp J. // NF-kappaB signals induce the expression of c-FLIP. Mol Cell Biol21, 5299-305 (2001).

220. Micheau O., Tschopp J. Induction of TNF receptor I-mediated apoptosis via two sequential signaling complexes. CelllU, 181-90 (2003).

221. Mier J. J., Reduced insulinotropic effect of Gastric Inhibitory polypeptide in first-degree relatives of patients with type 2 diabetes / J. J. Mier et al. // Diabetes. 2001. P. 2497-2504.

222. Minshall R.D., Sessa W.C., Stan R.V., et al. // Caveolin regulation of endothelial function. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 2003. - Vol. 285. - N. 6. - P. 1179-83.

223. Mir H. S., Darzi M. M. Histopathological abnormalities of prolonged alloxan-induced diabetes mellitus in rabbits. Int. J. Exp. Path. 2009. - Vol. 90. - N1. - P. 66-73

224. Monami M., Colombi C., Balzi D. et al. Metformin and Cancer Occurrence in Insulin-Treated Type 2 Diabetic Patients // Diabetes Care January. 2011. 34: 129—131.

225. Montolio M., Tellez N., Biarnes M., Soler J., Montanya E. // Short-term culture with the caspase inhibitor z-VADfmk reduces beta cell apoptosis in transplanted islets and improves the metabolic out come of the graft. Cell Transplants, 59-65 (2005).

226. Muoio D. M., Newgard C.B. // Mechanisms of disease: molecular and metabolic mechanisms of insulin resistance and beta-cell failure in type 2 diabetes. Nat Rev 9, 193-205 (2008).

227. Muppidi J. R., Tschopp J., Siegel R. M. // Life and death decisions: secondary complexes and lipid rafts in TNF receptor family signal transduction. Immunity 21, 461-5 (2004).

228. Nolan C. J., et al. Beta cell compensation for insulin resistance in

229. Zucker fatty rats: increased lipolysis and fatty acid signalling.254

230. Diabetologia49,2120-30 (2006).

231. Norbury C.J., Hickson I.D. // Cellular responses to DNA damage. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 2001. - N. 41. - P. 367-401.

232. O'Shea J. J. Murray P. J. // Cytokine signaling modules in inflammatory responses. Immunity 28,477-87 (2008).

233. Oyadomari S., et al. Nitric oxide-induced apoptosis in pancreatic beta cells is mediated by the endoplasmic reticulum stress pathway. ProcNatlAcadSci USA98,10845-50 (2001).

234. Park S. M., Schickel R., Peter M. E. Nonapoptotic functions of FADD-binding death receptors and their signaling molecules. Curr Opin Cell Biol 17, 610-16 (2005).

235. Patane G. Exposure to glibenclamide increases rat beta cells sensitivity to glucose / G. Patane, S. Piro, M. Anello et al. // Br J Pharmacol. 2000. - Vol. 129. - №5. - P. 887-892.

236. Pavelka M., Roth J. Functional Ultrastructure: Atlas of Tissue Biology and Pathology / Springer, Wien. 2010. 365 p.

237. Persaud S. J., Gymnema sylvestre stimulates insulin release in vitro by increased membrane permeability / S. J. Persaud et al. // J Endocrinol. 1999. - № 163. - P. 207-212.

238. Peter M. E., Krammer P. H. The CD95(APO-l/Fas) DISC and beyond. Cell Death Differ 10, 26-35 (2003).255

239. Pinton P., Rizzuto R. // Bcl-2 and Ca2 homeostasis in the endoplasmic reticulum. Cell Death Differ 13, 1409-18 (2006).

240. Pipeleers D., et al. Role of pancreatic beta-cells in the process of beta-cell death. Diabetes50 Suppl 1, S52-57 (2001).

241. Pirnia F., Schneider E., Betticher D.C., Borner M.M. // Mitomycin C induces apoptosis and caspase-8 and -9 processing through a caspase-3 and Fas-independent pathway. Cell Death Differ. -2002. Vol.9. - N9. - P. 905-14.

242. Plesner A., Liston P., Tan R., Korneluk R. G., Verchere C. B. The X-linked inhibitor of apoptosis protein enhances survival of murine islet allografts. Diabetes 54, 2533-40 (2005).

243. Poitout V., Robertson R. P. Glucolipotoxicity: fuel excess and beta-cell dysfunction. EndocrRev29,351-66 (2008).

244. Poucheret P., Verma S., Grynpas M. D., McNeill J. H. Vanadium and diabetes. Mol. Cell Biochem. 1998. - Vol. 188. - P. 73-80.

245. Qing Y., Costa-Pereira A.P., Watling D., Stark G.R. // Role of tyrosine 441 of interferon-gamma receptor subunit 1 in SOCS-1-mediated attenuation of STAT1 activation. J Biol Chem280, 1849-53 (2005).

246. Rakieten N., Rakieten M., Nadkarni M. Studies on the di-abetologenic action streptozotocin // Cancer Chemother. Rep. 1963. V. 29. P. 91 98.

247. Ramanadham S., Mongold J. J., Brownsey R. W., Cros G. H., McNeill J. H. Oral vanadyl sulfate in treatment of diabetes mellitus in rats. Am. J. Physiol. 1989. - Vol. 257. - P. 904-911.

248. Reed J. C., Green D. R. Apoptosis: physiology and pathology / edited by John C. Reed, Douglas R. Green. Cambridge University Press.-2011.-469 p.

249. Rees D. A., Alcolado J. C. Animal models of diabetes mellitus // Diabet. Med. 2005. - Vol.22. - N 4. - P. 359-370.

250. Reusens B., Remade C. Programming of the endocrine pancreas by the early nutritional environment. Int J Biochem CellBiol38, 913-22 (2006).

251. Rhodes C. J. Type 2 diabetes a matter of beta-cell life and death? Science 307, 380-4 (2005).

252. Riboulet-Chavey A., Diraison F., Siew L.K., Wong E.S., Rutter G. A. // Inhibition of AMP-activated protein kinase protects pancreatic beta-cells from cytokine-mediated apoptosis and CD8 T-cell-induced cytotoxicity Diabetes 57,415-23 (2008).

253. Ron D., Walter P. // Signal integration in the endoplasmic reticulum unfolded protein response. Nat Rev 8, 519-29 (2007).

254. Rong Y., Distelhorst C. W. // Bcl-2 protein family members: versatile regulators of calcium signaling in cell survival and apoptosis. Annu RevPhysiol70, 73-91 (2008).

255. Ronn S. G., et al. Suppressor of cytokine signalling-3 expression inhibits cytokine-mediated destruction of primary mouse and rat pancreatic islets and delays allograft rejection. Diabetologia 51,187382 (2008).

256. Rummey C., In silico fragmentbased discovery of DPP-IV SI pocket binders. C. Rummeyet al. // Bioorg Med Chem Lett. 2006. -№ 16. - P. 1405-9.

257. Sakurai K., Katoh M., Someno K., et al. // Apoptosis and mitochondrial damage in INS-1 cells treated with alloxan. Biol. Pharm. Bull. 2001. - Vol. 24. - N 8. - P. 876—882.

258. Schernthaner G. GUIDE-stady: double-blind comparison of once-daily gliclazide MR and glimepiride in type 2 diabetic patients / G. Schernthaner, A. Grimaldi, U. Di Mario et al. // Eur J Clin Invest. -2004. -№34.-P. 535-542.

259. Schulthess F.T., Katz S., Ardestani A., et al. // Deletion of the mitochondrial flavoprotein apoptosis inducing factor (AIF) induces beta-cell apoptosis and impairs beta-cell mass. PLoS One. 2009. -Vol. 4. -N 2. - P. 4394.

260. Schumann D. M., et al. The Fas pathway is involved in pancreatic beta cell secretory function. Proc Natl Acad Sci USA 104, 2861-6 (2007).

261. Scott K. A. The GLP-1 agonist exendin-4 reduces food intake in non-human primates through changes in meal size / K. A. Scott, T. I. Morgan // Am. J. Physiol. Regul Integr. 2007. - № 20. - P. 212.

262. Sekar N., Li J., Shechter Y. Vanadium salts as insulin substitutes: mechanisms of action, a scientific and therapeutic tool in diabetes mellitus research. Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 1996. - Vol. 31. -P. 339-359.

263. Shafrir E., Spielman S., Nachliel I., et al. Diab. Res. Rev, 17, 55 -66 (2001)

264. Shanmugasundaram E. R. B. Possible regeneration of the islets oflangerhans in streptozotocin- diabetic rats given Gymnema sylvestreleaf extracts / E. R. B. Shanmugasundaram et al. // J.

265. Ethnopharmacol. 1990. - № 30. - P. 265-279.258

266. Shawn M., Cripps R. Diabetes Mellitus and Increased Risk of Cancer: Focus on Metformin and the Insulin Analogs // Pharmacotherapy. 2010; 30 (11): 1159—1178.

267. Shen W. Protective effects of R-alpha-lipoic acid and acetyl-L-carnitine in MIN6 and isolated rat islet cells chronically exposed to oleic acid / W. Shen, K. Liu, C. Tian et al. // J. Cell Biochem. 2008. -V. 104, №4.-P. 1232-1243.

268. Shoda L. K., et al. A comprehensive review of interventions in the NOD mouse and implications for translation. Immunity23, 115-26 (2005).

269. Sistemic review of Aurvedic Intervention for Diabetes Mellitus, New Delhi, 2003

270. Srivastava A. K. Anti-diabetic and toxic effects of vanadium compounds. Mol. Cell Biochem. 2000. -Vol. 206. - P. 177-182.

271. Steinberg G. R., Kemp B. E. AMPK in Health and Disease // Physiol Rev. 2009. 89: 1025—1078.

272. Suarez-Pinzon W. L., Mabley J. G., Power R., Szabo C.,

273. Rabinovitch A. // Poly (ADP-ribose) polymerase inhibition prevents spontaneous and recurrent autoimmune diabetes in NOD mice by inducing apoptosis of islet-infiltrating leukocytes. Diabetes52,1683-8 (2003).

274. Sugihara Y., Antihyperglycemic effects of gymnemic acid IV, a compound derived from Gymnema sylvestre leaves in streptozotocin-diabetic mice / Y. Sugihara et al. // J Asian Nat Prod Res. 2000. - № 2. P. 321-7.

275. Surjana D, Halliday GM, Damian DL. Role of nicotinamide in DNA damage, mutagenesis, and DNA repair. J Nucleic Acids 2010;2010. Article ID. 157591. doi:10.4061/2010/157591.

276. Swanton E., Savory P., Cosulich S., Clarke P., Woodman P. // Bcl-2 regulates a caspase-3/caspase-2 apoptotic cascade in cytosolic extracts. Oncogene. 1999. - Vol.18. - N10. - P. 1781-7.

277. Systematic Review of Herbs and Dietary Supplements for Glycemic Control in Diabetes. / Gloria Y. et al. // Diabetes Care. -2003. Vol. 26, № 4. - P. 1277-1294.

278. Szabo C., // Roles of poly(ADP-ribose) polymerase activation in the pathogenesis of diabetes mellitus and its complications. Pharmacol Res 52, 60-71 (2005).

279. Szkudelski T. Streptozotocin-nicotinamide-induced diabetes in the rat. Characteristics of the experimental model // Experimental Biology and Medicine. 2012. - Vol.237. - P. 481-490.

280. Szkudelski T. The Mechanism of Alloxan and Streptozotocin Action in B Cells of the Rat / T. Szkudelski // Pancreas Physiol. Res. -2001. -V. 50. P. 536-546.

281. Targonsky E. D. a-Lipoic acid regulates AMP-activated protein kinase and inhibits insulin secretion from beta cells / E. D. Targonsky, F. V. Koshkin, G. T. Karaman et al. // Diabetologia. 2006. - V. 49. -P. 1587-1598.

282. Tellez N., et al. Adenoviral overexpression of interleukin-1 receptor antagonist protein increases beta-cell replication in rat pancreatic islets. Gene Ther 12, 120-8 (2005).

283. Thameem F., Farook V. S., Bogardus C., Prochazka M. // Association of amino acid variants in the activating transcription factor 6 gene (ATF6) on Iq21-q23 with type 2 diabetes in Pima Indians. Diabetes55, 839-42 (2006).

284. Thompson K. H., Mc Neill J. H., Orvig C. Vanadium compounds as insulin mimics. Chem. Rev. 1999. - Vol. 99. - P. 2561-2571.

285. Tiedge M, Eisner, M, McClenaghan, NH, Hedrich, H-J, Grube, D, Klempnauer, J, Lenzen, S: Engineering of a glucose-responsive cell for insulin replacement therapy of experimental insulin-dependent diabetes. Human Gene Ther 11, 403-414, 2000.

286. Tiedge M, Richter, T, Lenzen, S: Importance of cysteine residues for the stability and catalytic activity of human pancreatic beta cell glucokinase. Arch Biochem Biophys 375, 251-60, 2000.

287. Tortora V., Quijano C., Freeman B., Radi R., Castro L.

288. Mitochondrial aconitase reaction with nitric oxide, S261nitrosoglutathione, and peroxynitrite: mechanisms and relative contributions to aconitase inactivation. FreeRadic BiolMedM, 1075-882007).

289. Trucco M. // Reregeneration of the pancreatic P-cell. J. Clin. Investigation. -2005. Vol. 115. -N 1. - P. 5-12, 2005.

290. Turley S., Poirot L., Hattori M., Benoist C. Mathis D. Physiological beta cell death triggers priming of self-reactive T cells by dendritic cells in a type-1 diabetes model. J Exp Med 198,1527-37 (2003).

291. Uren R.T., Dewson G., Bonzon C., et al. // Mitochondrial release of pro-apoptotic proteins: electrostatic interactions can hold cytochrome c but not Smac/DIABLO to mitochondrial membranes. J. Biol. Chem. 2005. - Vol. 280. - N 3. - P. 2266-74.

292. Valera A., Pelegrin M., Asins G., et al., // Overexpression of mitochondrial 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA synthase in transgenic mice causes hepatic hyperketogenesis. J. Biol. Chem., 1994. - Vol. 269. -N. 9. - P. -6267-6270.

293. Vaughan A.T.M., Betti C.J. Villalobos M.J. // Surviving apoptosis. Apoptosis. 2002. - Vol. 7. - P. 173-177.

294. Verstrepen L., et al. TLR-4, IL-1R and TNF-R signaling to NF-kappaB: variations on a common theme. Cell Mol Life Sri 65, 2964-782008).

295. Wada R, Yagihashi S. Nitric oxide generation and poly(ADP ribose) polymerase activation precede beta-cell death in rats with a single high-dose injection of streptozotocin. Virchows Arch 2004;444:375-82

296. Wang G., Yuen V. and McNeill J. H., Molecular and Cellular biochemistry, 218, 93 96 (2000).

297. Wang Q. Glibenclamide activates translation in rat pancreatic beta-cells through calcium-dependent mTOR PKA and MEK signaling pathways / Q. Wang, H. Heimberg et al. // Diabetologia. 2008. -Vol. 51. -№7. -P. 1202-1212.

298. Weir G. C., Laybutt D. R., Kaneto H., Bonner-Weir S. Sharma, A. Beta-cell adaptation and decompensation during the progression of diabetes. Diabetes 50 Suppl 1, SI54-9 (2001).

299. Willis S., Day C., Hinds M.G. et al. // The Bcl-2-regulated apoptotic pathway. J. Cell Sei. 2003. - Vol. 116. - P. 4053-4056.

300. Winder W. W. AMP-activated protein kinase, a metabolic master switch: possible roles in Type 2 diabetes. / W. W. Winder, D. G. Hardie. // Am. J. Physiol. 1999. - V. 277. - P. E1-E10.

301. Wöhler F, Liebig J (1838) Untersuchungen über die Natur der Harnsäure. Investigations on the nature of uric acid. Ann Pharm 26:241-340

302. Wu H. C., Yang C. Y., Hung D. Z., et al. // Nickel(II) induced JNK activation-regulated mitochondria-dependent apoptotic pathway leading to cultured rat pancreatic ß-cell death. Toxicology. 2011. -Vol. 289. -N2-3. -P. 103-111.

303. Yamada K. M., Araki M. // Tumor suppressor PTEN: modulator of cell signaling, growth, migration and apoptosis. J. Cell Sei. 2001. -Vol. 114. -N.13. - P. 2375-82.

304. Zhang S., Liu H., Yu H., Cooper G. J. // Fas-associated death receptor signaling evoked by human amylin in islet beta-cells. Diabetes57, 348-56 (2008).

305. Zhou G. Role of AMP-activated protein kinase in mechanism of metformin action / G. Zhou, R. Myers, Y. Li // J. Clin. Invest. 2001. -V. 108.-P. 1167-1174.

306. Ziegler B., Kohler E., Kloting I., et al. // Survival of islet isografts despite cytotoxicity against pancreatic islets measured in vitro // Exp Clin Endocrinol. 1990. V. 95(1). - P. 31-38.r264 ,J

Автореферат и диссертация по медицине (14.03.02) на тему:Лекарственный патоморфоз эндокринной части поджелудочной железы при экспериментальном сахарном диабете

Автореферат диссертации по медицине на тему Лекарственный патоморфоз эндокринной части поджелудочной железы при экспериментальном сахарном диабете

Оглавление диссертации Снигур, Григорий Леонидович :: 2012 :: Волгоград

Введение диссертации по теме "Патологическая анатомия", Снигур, Григорий Леонидович, автореферат

Заключение диссертационного исследования на тему "Лекарственный патоморфоз эндокринной части поджелудочной железы при экспериментальном сахарном диабете"

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Снигур, Григорий Леонидович

Похожие научные работы

Каталог диссертаций