Состояние иммунной и цитокиновой систем у часто болеющих детей и методы коррекции выявленных нарушений.

Карпова, Нина Викторовна

Диссертации по медицине → Аллергология и иммулология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Состояние иммунной и цитокиновой систем у часто болеющих детей и методы коррекции выявленных нарушений.

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Карпова, Нина Викторовна Москва 2008 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.36

Автореферат диссертации по медицине на тему Состояние иммунной и цитокиновой систем у часто болеющих детей и методы коррекции выявленных нарушений.

На правах рукописи

Карпова Нина Владимировна

СОСТОЯНИЕ ИММУННОЙ И ЦИТОКИНОВОЙ СИСТЕМ У ЧАСТО БОЛЕЮЩИХ ДЕТЕЙ И МЕТОДЫ КОРРЕКЦИИ ВЫЯВЛЕННЫХ

НАРУШЕНИЙ

14.00.36 - Аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 1 НОЯ 200В

Москва-2008

003453586

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении науки «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Бляхер Мария Сергеевна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Краснопрошина Людмила Ивановна

доктор медицинских наук Суслов Анатолий Петрович

Ведущая организация: Государственное предприятие

Государственный научный центр «Институт иммунологии Федерального медико-биологического агентства»

Защита состоится «'/ / » ь'/у-6008г. в _[0часов

на заседании диссертациокного совета Д 208.046.02 при Федеральном государственном учреждении науки «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (125212, Москва, ул. Адмирала Макарова, д.Ю).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского, г. Москва

Автореферат разослан «

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук

Л.И.Новикова

Общая характеристика работы.

Актуальность проблемы.

В основе частых. ОРЗ у детей лежат состояния, характеризующиеся нарушением нормального функционирования одного или нескольких звеньев иммунитета (Петрук Н.И. и др., 1999; Daele J., Zicot A.F., 2000). Функциональное состояние иммунокомпетентных клеток и способность к формированию полноценной межклеточной кооперации определяют возможность сопротивления иммунной системы частым ОРЗ, при недостаточности этих звеньев иммунной системы развиваются хронические заболевания (Запруд-нов A.M., 1996). Таким образом, возрастная относительная незрелость механизмов иммунной реактивности и других адаптивных систем при отсутствии достаточного уровня неспецифических и специфических факторов защиты создают предпосылки для формирования приобретенного иммунодефицита.

Нужна ли и эффективна ли иммунокоррекция у ЧБД? Этот вопрос постоянно привлекает внимание как клиницистов, так и иммунологов, но остается до конца не разрешенным (Коровина Н.А. и др., 2003; Таточенко В.К., Озерецковский Н.А., 2003; Tricarico D. et al., 2004; Pessey J.J. et al., 2003). Поскольку частые эпизоды ОРЗ в детстве могут приводить к негативным последствиям в виде хронизации заболеваний, задача сокращения числа ОРЗ, в частности с помощью адекватной иммунокоррекции, остается актуальной.

Цель настоящего исследования

Целью данной работы является исследование состояния иммунной и цитокиновой систем часто болеющих детей и подбор адекватной иммуномо-дулирующей терапии, корригирующей выявленные нарушения.

Задачи исследования

1. Получение данных о продукции цитокинов у здоровых детей.

2. Оценка состояния иммунной и цитокиновой систем у ЧБД в сравнении со здоровыми детьми.

3. Выявление наиболее информативных показателей состояния иммунной и цитокиновой систем у ЧБД, влияющих на возникновение у них ОРЗ.

4. Сравнение влияния препаратов Ацилакта, ИРС 19 или их сочетанного применения на иммунную и цитокиновую системы у ЧБД в зависимости от исходного состояния этих систем.

Научная новизна

В работе проведено широкое комплексное обследование ЧБД по показателям состояния численности субпопуляций лимфоцитов, уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови, интерфероногенеза (в биологических тестах и методом иммуноферментного анализа), сывороточного содержания и продукции ряда цитокинов.

Выявлено, что иммунный и цитокиновый статусы здоровых и часто болеющих детей одного возраста отличаются. Эти различия заключаются в снижении у ЧБД численности ряда субпопуляций лимфоцитов, индуцированной продукции ИФНу, спонтанной продукции ФНОа, соотношения Тх1/Тх2 и повышении индуцированной продукции ИЛ4.

Показано, что хотя у ЧБД в среднем численность субпопуляций лимфоцитов, особенно Т-субпопуляций, снижена по сравнению со здоровыми детьми, риск возникновения очередного ОРЗ от этого мало зависит. В то же время у детей со сниженной продукцией ИФНу и ИФНа, а также снижением соотношения Тх1/Тх2, ОРЗ возникало чаще, чем у детей с нормальными показателями.

Впервые прослежено влияние препарата Ацилакт и его сочетания с ИРС 19 на состояние иммунной и цитокиновой систем у ЧБД. Их применение оказывает влияние как на численность субпопуляций лимфоцитов, так и на цитокиновый профиль у ЧБД. Сниженные показатели под влиянием указанных иммуномодуляторов повышались или нормализовались.

При сравнении разных схем иммуномодулирующей терапии у ЧБД впервые показано, что Ацилакт оказался более эффективным в плане коррекции выявленных нарушений, т.к. он нормализовал численность субпопуляций, повышал продукцию как ИФНа, так и ИФНу, повышал соотношение Тх1/Тх2, не оказывая негативного влияния на эти показатели, если исходно они были в норме, в отличие от ИРС 19 или его сочетания с Ацилактом.

Практическая значимость работы

Показана эффективность применения препарата Ацилакт у ЧБД для коррекции нарушений состояния иммунной и цитокиновой систем. Продемонстрирована необходимость проведения анализа состояния указанных систем перед началом лечения, т.к. иммунокоррекция у ЧБД с нормальными показателями может привести к существенному снижению последних.

Внедрение результатов работы

Материалы диссертации использованы при написании медицинской технологии «Использование иммуномодуляторов для коррекции показателей иммунной и цитокиновой систем при оздоровлении детей, часто болеющих острыми респираторными и вирусными заболеваниями верхних дыхательных путей» (утверждена на заседании Ученого Совета ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского 11.12.05, протокол №9) и «Инструкции по применению Ацилакта, таблетки 1 доза, 5 доз» (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ Г.Г. Онищенко 26.06.07 №01- 11/104 - 07).

Положения, выносимые на защиту

1. Состояние иммунного и цитокинового статуса здоровых и часто болеющих детей одного возраста отличаются. Некоторые из этих изменений - сниженный уровень индуцированной продукции ИФНу, ИФНа и соотношения Тх1/Тх2 - способствуют возникновению у ЧБД очередного ОРЗ.

2. Препарат Ацилакт имеет ряд преимуществ перед ИРС 19 в плане коррекции иммунного и цитокинового статуса у ЧБД, т.к. он нормализует численность субпопуляций лимфоцитов, соотношение Тх1/Тх2, повышает продукцию как ИФНа, так и ИФНу.

3. Применение указанных иммуномодуляторов наиболее показано детям со сниженными показателями состояния иммунной и цитокиновой систем.

Апробация материалов диссертации

Апробация диссертационной работы проведена на заседании Секции Ученого Совета ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского "Общая и прикладная иммунология» 24 октября 2008 г.

Результаты работы доложены и обсуждены на Международной конференции «Пробиотики, пребиотики. синбиотики и функциональные продукты

питания. Современное состояние и перспективы » (Москва, июнь 2004 г.), на Всероссийском научном симпозиуме «Цитокины. Стволовая клетка. Иммунитет» (Новосибирск, июль 2005 г.), на Конгрессе «Дни Иммунологии в Санкт-Петербурге, 2006», на Объединенном иммунологическом форуме (Санкт-Петербург, июнь 2008).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 100 страницах и состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы», главы «Результаты собственных исследований», обсуждения результатов, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 7 рисунками и 21 таблицами. В список литературы вошли 188 работ, из которых 79 отечественных и 109 зарубежных авторов.

Содержание работы

Материалы и методы исследования

Исследование было проведено в лаборатории по изучению клеточных и молекулярных основ иммунитета ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского в сотрудничестве с сотрудниками детского санатория общего типа «Кратово».

Материалы исследования

Материалом для иммунологических исследований служили сыворотки крови, лимфоциты периферической крови, супернатанты стимулированных культур лейкоцитов периферической крови.

В ходе работы было обследовано 177 детей в возрасте от 4 до 7 лет.

Группа из 160 детей, однородная по клиническим показателям и проводимому лечению, была сформирована из часто болеющих детей, поступивших в санаторий «Кратово» для прохождения реабилитационно-

оздоровительных мероприятий. Кровь для исследования бралась до начала применения препаратов и через 21 день.

Контрольная группа из 17 детей, обследованная в тот же период, была сформирована из детей, находившихся в санатории и не относящихся к группе длительно и часто болеющих детей.

Обе группы детей были обследованы по одинаковой схеме, с использованием одних и тех же иммунологических реагентов.

Для изучения влияния на иммунную и цитокиновую системы в данном исследовании были использованы следующие иммуномодуляторы.

1. ИРС 19 - Solvey Pharma, Франция, per. номер: П № 012103/01-2000 -спрей для интраназального применения. Препарат применялся по 1 дозе ин-траназально 2 раза в день в течение двух недель.

2. Ацилакт - Витафарма, Россия, per.№ 000062/01- 2000, 19 .10.2000 - применялся в виде таблеток per os по 5 таблеток (по 5 доз каждая) 2 раза в день в течение двух недель.

Вид лечения Санаторное лечение Ацилакт ИРС 19 Ацилакт + ИРС 19

Количество детей 50 57 39 14

Методы исследования Иммунофенотипирование CD3+, CD4+, CD8+, CD19+, CD16+ лимфоцитов проводили на проточном цитофлюориметре «Beckman Coulter FC 500», США, или «Fax Calibur», США, с использованием моноклональных антител фирмы «Beckman Coulter», США.

Определение интерферонового статуса человека проводили микрометодом в цельной гепаринизированной крови по методике С.С. Григорян (Григорян С.С., 1989; Ершов Ф.И., 1996). Определяли уровень интерферона в сыворотке крови, способность лейкоцитов периферической крови к спонтанной продукции интерферонов и под действием индукторов ИФНа (вирус болезни Ньюкасла, штамм Канзас, предоставленный сотрудниками ГУ «Науч-

но-исследоватсльский институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи» РАМН, Москва) и ИФНу (ФГА Р, «DIFCO», США). Биологическая активность интерферонов определялась по их способности отменять цитопа-тогенный эффект вируса болезни Ньюкасла in vitro, и выражалась в единицах, обратных логарифму (lg) титра, на мл сыворотки или супернатанта.

Определение концентрации иммуноглобулинов (IgA, IgM, IgG) в сыворотке крови было выполнено методом радиальной иммунодиффузии в агарозном геле по Манчини (Чернохвостова Е.В., Герман Г.П., 1984; Manchi-ni G. et al., 1964).

Определение цитокннов в сыворотке крови или в супернатантах культуры клеток крови проводилось иммуноферментным методом с помощью тест-систем фирм «Цитокин» и «Вектор-Бест» (Россия).

Внутриклеточное меченне: количество Т-хелперов 1 и 2 типа среди Т-лимфоцитов крови (CD3 положительных) определяли по находящимся внутри них ИФНу или ИЛ-4, соответственно. Внутриклеточное иммунофлуорес-центное мечение СЕ)3+ИФНу+ и CD3+HJI4+ лимфоцитов в крови обследуемых детей проводилось с помощью реагентов фирмы «Becton Dickinson», США.

Статистическая обработка результатов исследования была выполнена с помощью компьютерных программ MS EXCEL. Статистически достоверное различие результатов определялось с использованием t-критерия Стьюдента. Различия между параметрами считались статистически достоверными при р<0,05.

Результаты исследования и их обсуждение

Проведено исследование состояния иммунного, интерферонового статуса и продукции цитокинов у часто болеющих детей, а также воздействия на эти показатели иммуномодуляторов - ИРС 19 и Ацилакта.

На рисунках 1 и 2 приведены результаты исследования численности субпопуляций лимфоцитов у ЧБД. У этих детей наблюдалась некоторая лимфопения и значимое (р < 0,05) снижение численности (абсолютной и от-

носительной) практически всех основных субпопуляций лимфоцитов по сравнению с возрастной нормой; только количество СБ8+ лимфоцитов значимо не отличалось.

Рис.1 Абсолютная численность субпопуляций лимфоцитов у ЧБД (——) в процентах от нормы (-) - обследовано 160 детей.

лимф.

Рис.2 Относительная численность субпопуляций лимфоцитов у ЧБД (——) в процентах от нормы (-)

лимф.

Концентрация иммуноглобулинов в сыворотке крови ЧБД была изменена по сравнению со здоровыми детьми следующим образом - ^О был несколько снижен, ^М оставался в пределах нормы, концентрация ^А у большинства детей была на нижней границе возрастной нормы, таким образом, функция В-лимфоцитов у ЧБД несколько снижена.

При применении различных схем оздоровительной терапии наблюдалась следующая картина (табл. 1). Санаторное лечение не оказываю существенного действия на субпопуляционный состав лимфоцитов.

Табл.1. Влияние иммуномодуляторов на относительную (%) и абсолютную (х106/л) численность субпопуляций лимфоцитов (М±(.т)

№ Санатор. лечение ИРС19 Ацилакт ИРС19+ Ацилакт Норма

Лейкоциты 1 7682±1460 7797±853 7125±658 667Ш192 7900

2 7870±997 8708±942 7586±514 8936±1319*| ±1000

Лимфоциты 1 36±3 2630±470 28±4 2138±348 32±3 2305±226 26±4 1603±230 47±4

2 33±3 2428±443 29±4 2430±294 34±2 3048±867 30±4 2655±396 *| 3900 ±600

СОЗ+ 1 62±3 170Ш78 57±3 1227±211 61±3 1399±151 65±4 1050±169 68±2

2 62±3 1675±339 60±3*| 1306±170 64±2 1672±183 62±4 1638±258 *Т 2600 ±400

С04+ 1 38±3 930±172 32±2 652±107 36±2 835±94 37±3 596±103 50±2

2 37±2 929±190 32±2 663±87 40±2*| 1045±112 *| 30±3*| 799±137 1950 ±350

СБ8+ 1 24±2 605±113 22±2 466±93 24±2 565±71 23±2 373±70 21±2

2 23±2 598±170 23±2 534±82 25±2 681±94*Т 25±3 647 ±134 *Т 870 ±200

С04+/ 1 1,62 ±0,24 1,59 ±0,16 1,66 ±0,17 1,64 ±0,19 2,4 ±0,15

СО 8+ 2 1,66 ±0,23 1,32 ±0,12*1 1,74 ±0,16 1,32 ±0,26*1

СО 19+ 1 20±2 484±95 18±2 390 ±90 21±3 491 ±82 15±2 236 ±44 22±2

2 20±3 384±76 16±1 357 ±56 21±3 554 ±98 17±2 458 ±108*| 900 ±130

СБ 16+ 1 13±2 350±157 15±2 498±113 16±2 369 ±56 13±3 219 ±57 14±2

2 13±2 269±65 15±2 299 ±52*1 16±2 442 ±82 16±3*| 414 ±82*| 500 ±150

В графах с данными о численности лимфоцитов или их няя строка - процентное содержание, нижняя строка — ство клеток. 1 - до лечения, 2 - после лечения * значимое отличие от исходного уровня (р<0,05)

субпопуляций верх-абсолютное количе-

Применение ИРС19 приводило к увеличению относительного количества СБЗ+ лимфоцитов, однако так же наблюдалось снижение соотношения СЭ4+/ С08+ и содержания СО 16+ лимфоцитов. Ацилакт оказывал положительное влияние: увеличивалось абсолютное количество СОЗ+ лимфоцитов, СВ4+ лимфоцитов и абсолютное количество С08+клеток.

Так выглядело воздействие иммуномодуляторов в целом на группу, которая состояла из детей с разным исходным состоянием иммунной системы.

Был проведен анализ того, является ли влияние иммуномодуляторов на иммунную систему характеристикой только самих препаратов или зависит от состояния иммунной системы ребенка. Было рассмотрено действие иммуномодуляторов на исходно нормальную и исходно сниженную численность субпопуляций лимфоцитов (табл. 2 и 3).

Было выявлено, что при применении иммуномодуляторов у детей с исходно нормальной численностью субпопуляций лимфоцитов наблюдается более или менее выраженное снижение ряда показателей (табл. 2), причем Ацилакт снижал наименьшее количество показателей. Применение иммуномодуляторов у детей с исходно сниженной численностью субпопуляций лимфоцитов приводило к увеличению численности основных субпопуляций (табл. 3), только Ацилакт повышал и соотношение С04+/ С08+ клеток.

Влияет ли исходная численность субпопуляций лимфоцитов на заболеваемость детей респираторными заболеваниями? Часть детей в период пребывания в санатории перенесла очередное ОРЗ. Ретроспективный анализ субпопуляционного состава лимфоцитов показал, что исходная численность субпопуляций у заболевших и не заболевших детей не различалась, но в примерно одинаковой степени была снижена по сравнению с группой здоровых детей. Это говорит о том, что на возникновение заболевания ОРЗ, вероятно, влияет не только численность субпопуляций лимфоцитов, но и другие компоненты, характеризующие состояние иммунной системы - уровень иммуноглобулинов, фагоцитоз, продукция цитокинов и др.

Табл. 2 Влияние иммуномодуляторов на исходно нормальную относительную (%) и абсолютную (х10б/л) численность субпопуляций лимфоцитов (М+йп)

№ Санатор., лечение ИРС 19 Ацилакт ИРС19+ Ацилакт Норма

Лейкоциты (х106/л) 1 899Ш825 8584+857 8970+637 7950+1515 7900 ±1000

2 8200+1421 8632+1055 7894+678*]. 9288+2147

Лимфоциты 1 38+4 2903±530 41+7 3050+457 41+3 2832+236 37+12 47+4 3900 ±600

2 33±3 2384+511 38+9 2474+510 34+3*1 2857+339 32+15

СБЗ+ 1 70+3 2072+361 68+4 1965+261 69+2 1991+183 69+4 68+2 2600 ±400

2 70+4 1635+500 63+3 1175+318*1 66+3 1855+281 63+5*],

СБ4+ 1 44+8 1311+470 43+2 1240+171 45+2 1307+115 44+2 50±2 1950 ±350

2 43+6 986+520 38+5 514+281*1 44+4 1222+230 34+4*4

СБ 8+ 1 23+2 717+126 23+2 748+134 26+2 773+76 23+2 530+62 21+2 870 ±200

2 24+3 630+269 23+2 525+193 26+2 779+132 24+3 657+530

СЭ4+/ СБ 8+ 1 2,06+0,36 2,08+0,19 2,35+0,23 2,03+0,11 2,4 ±0,15

2 1,88+0,40 1,34+0,26*1 1,91+0,26*1 1,82+0,6

СО 19+ 1 19+2 604+139 20+2 558+116 23+3 670+99 16+2 22±2 900 ±130

2 16+2 344+90*4 17+2 378±96*| 21+2 662+155 16+2

СБ 16+ 1 17+6 624 +405 20+3 643+107 18+2 505+72 17+2 14±2 500 ±150

2 13+4 246+133 17+2 306+68*1 18+2 498+86 18+5

В графах с данными о численности лимфоцитов или их субпопуляций верхняя строка — процентное содержание, нижняя строка - абсолютное количество клеток.

1 - до лечения, 2 - после лечения * значимое отличие от исходного уровня (р < 0,05)

Табл. 3 Влияние иммуномодуляторов на исходно сниженную относительную (%) и абсолютную (х106/л) численность субпопуляций лимфоцитов (М+Ш)

№ Санатор. лечение ИРС19 Ацилакт ИРС19+ Ацилакт Норма

Лейкоциты 1 5283±648 4300±1511 4785±275 4966+646 7900 ±1000

2 7267±162 9000±2674* | 7196+814*! 8466+2065*!

Лимфоциты 1 23±16 1744±162 22±2 1356±132 21±2 1441±131 23+3 1485+181 47±4 3900 ±600

2 28±14 2570±1641 29±3*t 2393+372*! 34±4 2282±375*f 30+5*! 2732+454*!

СОЗ+ 1 57±5 1284±168 52±5 925±139 51±3 988+91 59±4 1006+152 68±2 2600 ±400

2 66±8*t 1719±594 59±4 1360+213*! 61+4 *t 1546±242*t 60+8 1642+284*!

СИ4+ 1 33±4 772±85 30±2 565±75 30+2 636+61 34+2 596+103 50+2 1950 ±350

2 36±3 906±231 32±2 686±95*t 38+2 *T 971+126*! 29+3*1 799+137*!

СБ8+ 1 399±84 16±1 311+46 14+1 322+39 326+61 21+2 870 ±200

2 540±164 23+7*! 538±87*t 20+3*! 567+127*t 644+165*!

СЭ4+/ С08+ 1 1,38±0,22 1,36+0,12 1,21+0,09 1,46+0,15 2,4 +0,15

2 1,54±0,30 1,31+0,14 1,63+0,21*1 1,1+0,18*1

СО 19+ 1 349±37 10±2 211±51 11+2 284+38 236+44 22+2 900 ±130

2 430±143 15±3*| 334+69*! 19+12 429+94*t 458+108*!

СО 16+ 1 8±2 200+43 9±1 142+33 9+1 249+32 8+1 204+51 14+2 500 +150

2 10±3 281+87!* 13+4*! 281±96*t 11+3 390+141*! 14+2*! 430+82*!

В графах с данными о численности лимфоцитов или их субпопуляций верхняя строка - процентное содержание, нижняя строка - абсолютное количество клеток.

1 - до лечения, 2 - после лечения - * значимое отличие от исходного уровня (р < 0,05)"

Поскольку по сравнению со здоровыми детьми иммунная система ЧБД характеризуется снижением численности ряда субпопуляций лимфоцитов, их увеличение после приема ИРС 19 или Ацилакта может расцениваться как положительный фактор. Однако на основании только данных о субпопуляци-онном составе лимфоцитов невозможно делать какие-либо определенные выводы. В следующей части работы исследовалась функциональная активность лимфоцитов.

Ее исследование дало нам возможность понять особенности продукции цитокинов у часто болеющих детей по сравнению со здоровыми детьми и констатировать различия в воздействии иммуномодуляторов на продукцию цитокинов. Исследованию функциональной активности клеток - продукции цитокинов и действию различных иммуномодуляторов на этот процесс - посвящены следующие разделы.

Исследование цитокинового статуса детей проводилось по схеме, приведенной на рис. 3.

Рис.3 Структура исследования цитокинового статуса

V-^-^

Определение концентрации цитокина методом ИФА

Оценка влияния иммуномодуляторов на продукцию цитокинов требовала предварительно установить пределы нормальных колебаний параметров этой продукции. Оказалось, что у здоровых детей они варьируют, но поддаются статистической обработке и могут быть использованы для сравнения с этими показателями у ЧБД и для сравнения данных до лечения и после. Результаты обследования здоровых детей представлены в табл.4.

Табл.4 Продукция цитокинов у здоровых детей (М±йп), п = 17.

Цитокин Концентрация в сыворотке крови (пг/мл) Спонтанная продукция (пг/мл) Индуцированная продукция (пг/мл)

ИЛ 2 3,2 ±1,5 2,3 ±1,1 28,3 ± 5,6

ИЛ 4 0,04 ±0,01 1,2 ±0,3 4,1 ±2,3

ИЛ 6 1,4 ±0,7 1380 ±700 6000 ±2200

ИЛ 8 2,3 ± 1,6 8500 ±4100 17500 ±5300

ИЛ 10 0,1 ±0,01 3,0 ±0,2 27,4 ±13,1

ИФНу 1,7 ±0,8 51,0 ±7,6 1077 ±109

ФНОа 0,3 ±0,14 5,7 ±2,2 180 ±53

Готовность организма адекватно реагировать на возникающую инфекцию зависит, в частности, от баланса между Т-хелперами 1 и 2 типа. В настоящей работе состояние этого баланса оценивалось по соотношению клеток, продуцирующих ИФНу (Тх1) или ИЛ4 (Тх2), и обозначалось как Тх1/Тх2. Оказалось, что у ЧБД это соотношение ниже, чем у здоровых детей (табл. 5). Эти данные подтверждают широко распространенное мнение, что относительное преобладание Тх2-иммунного ответа может быть связано с ухудшением иммунной защиты против вирусных и бактериальных инфекций.

Табл.5 Соотношение Тх1/Тх2 у здоровых и часто болеющих детей (М±1ш).

Норма ЧБД

п= 17 п =51

Тх1/Тх2 18,7 ± 12,2 * 8,0 ± 2,0

* значимое отличие от нормы (р < 0,05)

Полученные нами данные (табл. 6) свидетельствуют, что показатели функционирования цитокиновой сети у ЧБД отличаются от таковых у здоровых детей. Методом ИФА была определена концентрация цитокинов в сыворотке крови и в супернатантах культур клеток цельной крови. Сывороточная концентрация и спонтанная продукция характеризовали текущее состояние, а индуцированная продукция - функциональный резерв цитокиновой сети.

Табл.6 Продукция цитокинов у ЧБД и здоровых детей ( М±1ш, пг/мл)

Цитокин ЧБД Здоровые дети п=17

ИФНу концентрация в сыворотке крови 1,1±0,1 1,7 ±0,8

спонтанная продукция . 51,0 ±7,6

индуцированная продукция 849 ±146 1077±109

ИЛ 4 концентрация в сыворотке крови 0 0,04 ± 0,01

спонтанная продукция 0 1,2 ±0,3

индуцированная продукция 9.5 ±5,7* 4,1 ±2,3

ФНОа концентрация в сыворотке крови 0 0,3 ±0,14

спонтанная продукция 2,3 ±0,7* 5,7 ±2,2

индуцированная продукция 173 ±26,3 180 ±53

* значимое отличие от показателей здоровых детей (р < 0,05) ИФНу исследован у 87 ЧБД, ИЛ 4 и ФНОа - у 43 ЧБД.

У ЧБД снижена спонтанная продукция ФНОа и повышена индуцированная продукция ИЛ4.

Важным фактором защищенности человека от инфекций является полноценное функционирование системы интерфероногенеза. Оценка этого процесса недостаточна, если изучается только концентрация интерферонов методом ИФА. Важно оценивать биологическую активность продуцируемых клетками интерферонов, т.е. их способность предотвращать цитопатогенное действие вирусов. Именно это было исследовано у ЧБД (интерфероновый статус), и результаты этого исследования приведены далее.

Средняя величина биологической активности интерферонов, определенная нами у 76 обследованных ЧБД, указана в таблице 7.

Индуцированная продукция интерферонов у ЧБД отличалась от нормы. Если биологическая активность продуцируемого ИФНа была в пределах возрастной нормы, то для ИФНу она была значимо снижена.

Табл.7 Биологическая активность интерферонов у ЧБД (ед/мл, среднее и 95%-ный доверительный интервал)

Вид интерферона ЧБД Норма

п = 76 п= 13

ИФНа 186 186

(151-229) (145-240)

ИФНу 12* 30

(10-39) (20-44)

* значимое отличие от нормы (р < 0,05)

Все приведенные выше данные о состоянии иммунной и цитокиновой систем у ЧБД свидетельствуют о наличии у ЧБД ряда изменений в показателях клеточного и гуморального иммунитета. Была проведена попытка выяснить, имеется ли связь между наличием этих нарушений и склонностью к заболеванием ОРЗ. Наблюдение за возникновением ОРЗ у детей проводилось на протяжении 7-10 дней после поступления их в санаторий и первичного

иммунологического обследования. Оказалось, что у детей, заболевших ОРЗ в санатории, по сравнению с оставшимися здоровыми было снижено соотношение Тх1/Тх2, продукция как ИФНу, так и ИФНа.

Рис.4 Заболеваемость ОРЗ в зависимости от исходного уровня Тх1/Тх2 и продукции интерферонов (п = 85)

% от нормы

■ заболели □ не заболели

Тх1/Тх2 ИФНу* ИФНа* Показатели выражены в % от нормы

* - значимое отличие показателя у заболевших и не заболевших детей при р < 0,05

В связи с тем, что выявлена четкая взаимосвязь заболеваемости ОРЗ в санатории со сниженными показателями интерфероногенеза, было прослежено их изменение в результате иммунокоррегирующей терапии у ЧБД. Результаты этой работы приведены в табл. 8.

Для унифицированной оценки влияния иммуномодуляторов на продукцию цитокинов было введено понятие изменения уровня продукции ци-токина в процентах к исходному уровню у каждого конкретного ребенка.

Табл.8 Изменение цитокинового статуса у детей, получавших в санатории лечение иммуномодуляторами, в % к исходному уровню (Мйм).

Показатели цитокинового статуса Санатор. лечение ИРС 19 ИРС 19 +Ацилакт Ацилакт

Тх1/Тх2 125±52 145±42 106±70 317±174Т

Концентрация цитокинов в супернатантах после стимуляции клеток крови ФГА ИФНу 126±37 262±94*Т 314±195*Т 182±102

ИЛ4 104±24 290±97*Т 144±95 -

ФНОа 109±44 193±66*Т 197±66*Т 88±27

Биологическая активность интерферонов ИФНу 100± 19 261±88*1' 164±30*Т 183±47*Т

ИФНа 91±15 68=Ш*1 35±22*4 186±29*Т

* значимое отличие от исходного уровня р < 0,05

• каждая группа включала от 10 до 30 человек

Санаторное лечение в отличие от иммуномодуляторов не оказывало значимого влияния на показатели цитокинового статуса. У детей, получавших ИРС 19, значительно увеличивалась продукция ИФНу, ИЛ 4 и ФНОа.

При применении сочетания ИРС 19 вместе с Ацилактом изменения в цитокиногенезе были аналогичны, однако не наблюдалось повышения индуцированной продукции ИЛ 4.

В результате лечения Ацилактом у детей повышалась продукция как ИФНу, так и ИФНа, соотношение Тх1/Гх2; важно, что у них не повышалась продукция ФНОа.

Анализ полученных в ходе исследования данных позволил сделать следующие выводы.

ВЫВОДЫ

1. Состояние иммунного и цитокинового статуса здоровых и часто болеющих детей одного возраста отличаются. Эти отличия заключаются в снижении у ЧБД численности ряда субпопуляций лимфоцитов, индуцированной продукции ИФНу, соотношения Тх 1 /Тх2 и повышении индуцированной продукции ИЛ 4.

2. Выявленное снижение численности субпопуляций лимфоцитов не влияло на возникновение ОРЗ во время наблюдения у ЧБД, а снижение индуцированной продукции ИФНа и ИФНу, а также соотношения Тх1/Тх2 способствовало возникновению ОРЗ в тот же период.

3. Исследованные показатели цитокинового статуса (ИЛ2, ИЛ4, ИЛ6, ИЛ8, ИЛ10, ИФНу, ФНОа, Тх1/Тх2) у здоровых детей имеют индивидуальные различия, но поддаются статистической обработке, а ряд из них (ИФНу, ФНОа) сохраняются на одном уровне в течение 30 дней наблюдения.

4. Применение иммуномодуляторов (Ацилакта, ИРС 19 или их совместно) оказывает влияние как на численность субпопуляций лимфоцитов, так и на цитокиновый профиль у ЧБД. Это воздействие наиболее выражено у ЧБД со сниженными показателями, характеризующими иммунную и цитокиновую системы.

5. При сравнении разных схем иммуномодулирующей терапии у ЧБД Ацилакт оказался наиболее эффективным в плане коррекции выявленных изменений, т.к. он нормализовал численность субпопуляций лимфоцитов, повышал продукцию как ИФНа, так и ИФНу, увеличивал соотношение Тх1/Тх2.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Сочетанное применение пробиотиков и других иммуномодуляторов //Вестник РАМН, 2005, № 12, с.32-35 (М.С.Бляхер, Т.КЛопатина, И.М.Федорова, Н.В.Карпова и др.)

2. Анализ эффективности комплексной иммунотерапии у часто болеющих детей // Медицинская иммунология, 2005, т.7, № 2-3, с. 290-291 (Бляхер М.С., Лопатина Т.К., Федорова И.М., Капустин И.В., Карпова Н.В., Котелева С.И. Шарапов Н.В., Иванов В.А.)

3. Цитокиновый статус детей, часто и длительно болеющих респираторными заболеваниями, до и после очередного ОРЗ //Труды Международного Междисциплинарного симпозиума «От экспериментальной биологии к превентивной и интегративной медицине», Судак, 17-27 сентября 2006, с.83 (Федорова И.М., Бляхер М.С., Алешкин В.А., Карпова Н.В., Капустин И.В.)

4. Цитокиновый статус - возможность и необходимость существования понятия. // Медицинская Иммунология, 2006, т. 8, № 2-3. с. 415 (Бляхер М.С., Федорова И.М., Капустин И.В., Карпова Н.В.)

5. Состояние иммунной системы и продукция цитокинов у часто болеющих детей и подходы к коррекции их нарушений // Российский иммунологический журнал, 2008, т.2, №2-3, апрель-сентябрь 2008, стр.329 (Н.В.Карпова, Т.КЛопатина, М.С.Бляхер, И.М.Федорова)

6. Сравнение иммунологической эффективности разных схем иммуно-коррекции у часто болеющих детей материалы Всероссийской научно-практической конференции «Современные представления об иммуно-коррекции», Пенза, 2008,с.50 (Н.В.Карпова, Т.КЛопатина, М.С.Бляхер)

Список сокращений

ИЛ2, ИЛ4, ИЛ6, ИЛ8, ИЛ 10 - интерлейкины ИФНа - альфа-интерферон ИФНу- гамма-интерферон

СОЗ+, С04+, С08+. СБ16+, С019+ - субпопуляции лимфоцитов крови

!§0и 1§М- иммуноглобулины классов А.йи М Тх1 и Тх2 - Т-хелперы 1и 2 типа ИФА - иммуноферментный анализ

Ед - единицы противовирусной активности интерферонов

ОРЗ - острое респираторное заболевание

ФГА - фитогемагглютинин

ФНОа - фактор некроза опухолей-альфа

ЧБД - часто болеющие дети

Подписано в печать 07.11.2008 г.

Печать трафаретная

Заказ №1113 Тираж: 100 экз.

Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferal.ru

Оглавление диссертации Карпова, Нина Викторовна :: 2008 :: Москва

Список сокращений.

Введение .5

Глава 1 Обзор литературы .10

1.1 Общая характеристика часто болеющих детей.

1.2 Состояние иммунной системы часто болеющих детей.

1.3 Продукция цитокинов у часто болеющих детей.

1.4 Применение иммунокорректоров у часто болеющих детей.

1.4.1 Влияние препаратов-пробиотиков на иммунную систему.

1.4.2 Влияние ИРС19 на иммунную систему.

Глава 2 Материалы и методы.38-43 ^

2.1 Материалы исследования.

2.2 Методы исследования.

2.2.1 Взятие и хранение крови.

2.2.2 Получение сыворотки крови.

2.2.3 Определение абсолютного количества лейкоцитов и лимфоцитов в крови больных.

2.2.4 Определение численности СБЗ+, СБ4+, СБ8+, СБ 19+, СБ 16+ лимфоцитов, Т-хелперов 1 и 2 типа методом проточной цнтометрии.

2.2.5 Внутриклеточное мечение цитокинов ИФНу и ИЛ-4.

2.2.6 Определение концентрации иммуноглобулинов основных классов в сыворотке крови.

2.2.7 Исследование интерферонового статуса.

2.2.8 Определение цитокинов в супернатантах культуры клеток цельной крови и сыворотке крови.

2.2.9 Статистическая обработка результатов.

Глава 3 Результаты собственных исследований.44

3.1 Иммунный статус у часто болеющих детей.

3.1.1 Влияние различных иммуномодуляторов на численность субпопуляций лимфоцитов.

3.1.2 Влияние иммуномодуляторов на исходно нормальную и исходно сниженную численность субпопуляций лимфоцитов.

3.2 Влияние состояния исходной численности субпопуляций лимфоцитов у детей на заболеваемость ОРЗ.

3.3 Содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови у часто болеющих детей.

3.4 Цитокиновый статус у часто болеющих детей.

3.4.1 Характеристика цитокинового статуса здоровых детей.

3.4.2 Продукция цитокинов у часто болеющих детей.

3.4.3 Интерфероновый статус ЧБД.

3.5 Влияние иммуномодуляторов на цитокиновый статус.

3.6 Влияние иммуномодуляторов на интерфероновый статус.

Обсуждение результатов.74

Выводы.

Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Карпова, Нина Викторовна, автореферат

Актуальность проблемы

Проблема часто и длительно болеющих детей (ЧБД) привлекает внимание педиатров и иммунологов тем, что контингент таких детей составляет весьма распространенную группу, а разработанные программы реабилитации часто неэффективны [77]. Об актуальности данной проблемы говорит то, что каждый 4-5 ребенок Российской Федерации может быть отнесен к этой группе [11,58]. Следует отметить, что зарубежные школы не используют термин «часто болеющие дети», нет его и в МКБ 10 (международной классификации болезней), так как это не диагноз в медицинском понимании слова [60]. В практике зарубежных педиатров принято считать, что обычно здоровые дети переносят до 8 - 10 ОРЗ в год, и это не явдяестся свидетельством иммунной недостаточности. Если частота респираторных инфекций составляет 8 и более раз в год, то используется термин «возвратные, рекуррентные респираторные инфекции» [95,105, 124,140]. В основе частых ОРЗ у детей лежат состояния, характеризующиеся нарушением нормального функционирования одного или нескольких звеньев иммунитета [52,' 105]. Функциональное состояние иммунокомпетентных клеток и способность к формированию полноценной межклеточной кооперации определяют возможность сопротивления иммунной системы частым ОРЗ, при недостаточности этих звеньев иммунной системы развиваются хронические заболевания [17]. Таким образом, возрастная относительная незрелость механизмов иммунной реактивности и других адаптивных систем при отсутствии достаточного уровня неспецифических и специфических факторов защиты создают предпосылки для формирования приобретенного иммунодефицита.

Нужна ли и эффективна ли иммунокоррекция у ЧБД? Этот вопрос постоянно привлекает внимание как клиницистов, так и иммунологов, но остается до конца не разрешенным [32,66,145,175]. Поскольку частые эпизоды ОРЗ в детстве могут приводить к негативным последствиям в виде хронизации заболеваний, задача сокращения числа ОРЗ, в частности с помощью адекватной иммунокоррекции, остается актуальной.

Цель настоящего исследования

Целью данной работы является исследование состояния иммунной и цитокиновой систем часто болеющих детей и подбор адекватной иммуномодулирующей терапии, корригирующей выявленные нарушения.

Задачи исследования

1. Получение данных о продукции цитокинов у здоровых детей.

2. Оценка состояния иммунной и цитокиновой систем у ЧБД в сравнении со здоровыми детьми.

Научная новизна

Практическая значимость работы

Показана эффективность применения препарата Ацилакт у ;ЧБД для коррекции нарушений состояния иммунной и цитокиновой систем. Продемонстрирована необходимость проведения анализа состояния указанных систем перед началом лечения, т.к. иммунокоррекция у ЧБД с нормальными показателями может привести к существенному снижению последних.

Внедрение результатов работы

Положения, выносимые на защиту

Апробация материалов диссертации

Результаты работы доложены и обсуждены на Международной конференции «Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты, питания. Современное состояние и перспективы » (Москва, июнь 2004 г.), на Всероссийском научном симпозиуме «Цитокины. Стволовая клетка. Иммунитет» (Новосибирск, июль 2005 г.), на Конгрессе «Дни Иммунологии в Санкт-Петербурге, 2006», на Объединенном иммунологическом форуме (Санкт-Петербург, июнь 2008).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ.

Объем и структура диссертации

Заключение диссертационного исследования на тему "Состояние иммунной и цитокиновой систем у часто болеющих детей и методы коррекции выявленных нарушений."

ВЫВОДЫ

1. Состояние иммунного и цитокинового статуса здоровых и часто болеющих детей одного возраста отличаются. Эти отличия заключаются в снижении у ЧБД численности ряда субпопуляций лимфоцитов, индуцированной продукции ИФНу, соотношения Тх1/Тх2 и повышении индуцированной продукции ИЛ 4.

3. Исследованные показатели цитокинового статуса (ИЛ2, ИЛ4, ИЛ6, ИЛ8, ИЛ 10, ИФНу, ФНОа, Тх1/Тх2) у здоровых детей имеют индивидуальные различия, но поддаются статистической обработке, а ряд из них (ИФНу, ФНОа) сохраняются на одном уровне в течение 30 дней наблюдения.

Заключение

Из полученных нами данных видно, что в сравнении с санаторным лечением иммуномодуляторы оказывают действие на продукцию цитокинов у часто болеющих детей.

Иммуноферментный анализ культуральных супернатантов показал, что при применении ИРС 19 увеличивалась способность лейкоцитов крови ЧБД продуцировать ИФНу, ИЛ4 и ФНОа при стимуляции фитогемагглютинином

Сочетание ИРС 19 и Ацилакта оказывало аналогичное действие, но не наблюдалось увеличение индуцированной продукции ИЛ 4.

Только после курса Ацилакта соотношение Тх1/Тх2 среди лимфоцитов крови ЧБД возрастало. Применение ИРС 19 или его сочетания с Ацилактом не влияло на баланс между Т-хелперами 1 и 2 типа: соотношение Тх1/Тх2 и после лечения оставалось ниже, чем у здоровых детей.

При исследовании интерферонового статуса, т.е. биологической активности интерферонов, обнаружено влияние на эти показатели иммуномодулирующей терапии и отсутствие существенного влияния на эти показатели санаторного лечения. Применение ИРС19 увеличивало продукцию ИФНу, но одновременно наблюдалось снижение продукции ИФНа. Сочетание ИРС 19 и Ацилакта оказывало аналогичное действие. Ацилакт напротив, повышал продукцию ИФНа и ИФНу, что свидетельствует о целесообразности его применения у ЧБД при признаках недостаточности интерфероновой защиты.

Обсуждение результатов

В настоящей работе было обследовано 160 часто болеющих детей с точки зрения состояния их иммунной системы. Почему был выбран именно этот контингент детей? Термин "часто болеющие дети" достаточно широко применяется врачами-педиатрами и подразумевает детей, часто, длительно и тяжело болеющих острыми респираторными заболеваниями (частота респираторных инфекций зависит от возраста ребенка). Количество таких детей растет, что обусловлено и неблагоприятными экологическими условиями, и бесконтрольным приемом лекарственных препаратов, и неправильным питанием как самих детей, так и матерей во время беременности [17, 36]. У таких детей есть нарушения в функционировании иммунной системы, которые с одной стороны способствуют их частым заболеваниям, а с другой стороны постоянно углубляются после повторно перенесенного ими ОРЗ [125,134].

Иммунокоррекция необходима таким детям, а для ее квалифицированного осуществления требуются подробные знания о состоянии иммунной системы и цитокинового профиля ЧБД, т.е. о состоянии систем, защищающих ребенка от инфекций. Это и обусловило поставленную нами цель работы - исследование состояния иммунной и цитокиновой систем часто болеющих детей и подбор адекватной иммуномодулирующей терапии, корригирующей выявленные нарушения.

При исследовании иммунного статуса ЧБД было показано, что он характеризуется снижением почти всех показателей численности субпопуляций лимфоцитов крови. У этих детей отмечалось снижение численности лимфоцитов, снижение абсолютной численности СБЗ+ клеток, относительной и абсолютной численности СБ4+ клеток, снижение соотношение С04+/СБ8+ сниженное абсолютное количество СБ 16+ клеток по сравнению с возрастной нормой. Численность В-клеток в среднем у ЧБД не была ниже, чем у здоровых детей, но среди ЧБД был выявлен высокий процент детей со сниженным количеством В-клеток, что сопровождалось одновременным снижением функциональной активности этих клеток - уровень сывороточных иммуноглобулинов в был несколько ниже нормы, концентрация ^М была в пределах возрастной нормы, а концентрация ^А - на нижней границе нормы.

Это согласуется с литературными данными, которые приводят большинство авторов, занимавшихся проблемой состояния иммунной системы у ЧБД [28, 125,152]. Однако некоторые авторы [71, 184] считают, что нет отличия в субпопуляционном составе лимфоцитов у часто болеющих и здоровых детей того же возраста. Вероятно, эти противоречия связаны с тем, каких именно детей в качестве ЧБД авторы брали для обследования.

Например, Wasik М, Kaczorowska М [184] отмечали у ЧБД снижение численности CD11+ клеток, т.е. лейкоцитов, мигрирующих в очаг воспаления. По данным Bossuyt X. et all. [89] в контрольной группе детей и в группе детей, часто болеющих ОРЗ, не было значимой разницы по субпопуляционному составу лимфоцитов; однако у многих ЧБД наблюдался в сыворотке крови дефицит IgA и подклассов IgG, что может указывать на некоторую функциональную недостаточность В-лимфоцитов.

Таким образом, создается впечатление, что у ЧБД выявляются нарушения в иммунной системе, и даже если они не касаются субпопуляционного состава лимфоцитов, то проявляются в изменениях каких-то других показателей функционирования иммунной системы.

Воздействие острых респираторных заболеваний, которые часто являются инфекциями вирусной этиологии, усугубляет имеющиеся у таких детей нарушения клеточного звена иммунитета. У них снижаются показатели CD3+, CD4+ субпопуляций лимфоцитов, и это снижение сохраняется несколько месяцев после перенесенного респираторного заболевания. Такое нарушение может способствовать хронизации заболеваний носоглотки и респираторного тракта [119, 125, 130].

Следует отметить, что по теории П. Холта (2001г.) многие хронические заболевания являются следствием нарушения иммунной системы в детстве. Очевидно, что инфекции дыхательных путей ассоциированы с повышенным риском гиперчувствительности, а также могут способствовать нарушению процесса дифференцировки Т-лимфоцитов и повышать Тх2 ответ. [117]. По мнению Макаровой З.С. (2005г.) и многих других авторов часто болеющие дети -это дети с вторичными нарушениями иммунной системы. Следовательно, своевременное выявление и коррекция этих нарушений поможет избежать появления у них хронических заболеваний.

Защита от инфекций осуществляется, безусловно, не только лимфоцитами и антителами, но и при участии различных растворимых факторов, в частности цитокинов.

Сравнение цитокинового статуса часто болеющих и здоровых детей того лее возраста было проведено в динамике и с использованием иммуноферментных тест-систем фирмы «Цитокин» для исследования ИЛ4 или фирмы «Вектор Бест» для исследования остальных цитокинов. Приходится подробно останавливаться на этих методических деталях, т.к. тест-системы разных производителей дают разный уровень абсолютных величин концентрации цитокинов в исследуемых биологических жидкостях.

Например, при исследовании индуцированной продукции ИФНу у здоровых людей разные авторы получали весьма неоднородные результаты - продукция ИФНу колеблется от 100 пг/мл по данным Shirai Т., 300 пг/мл по данным Schmidt S.M., 1250 пг/мл по данным Калининой Н.М. с соавт. до 5516 пг/мл по данным Robinson D.S. [21, 154, 165, 167].

Так же неоднородно выглядит картина цитокинового статуса и по другим цитокинам. В связи с этим нами были предприняты меры и осуществлены методические подходы, которые позволили провести анализ полученных результатов при исследовании цитокинового профиля у ЧБД и здоровых детей. Это предполагало строгое следование следующим принципам:

• использование тест-систем одной фирмы при сравнении одних и тех же показателей

• при динамическом наблюдении за продукцией цитокинов и выявлении влияния на нее разных факторов (времени, заболевания, медикаментозного лечения) исследование образцов, взятые на разных сроках, проводить в один день на одном планшете тест-системы

• выражение показателей уровня продукции цитокинов в процентах к норме или в процентах к исходному уровню у конкретного пациента.

Такое обследование позволило констатировать следующее - концентрация ИФНу в сыворотке крови ЧБД и его индуцированная продукция несколько ниже, чем у здоровых детей. Выявлено также, что индуцированная продукция ИЛ4 у детей, часто болеющих респираторными заболеваниями, выше, а спонтанная продукция ФНОа ниже, чем у здоровых детей.

Основным патогенетическим механизмом осложненного, затяжного или хронического течения инфекций является неэффективность клеточной формы иммунной защиты, обусловленная нарушением активации и пролиферации Тх1 лимфоцитов [19; 120]. Складывается впечатление, что у часто болеющих детей иммунный ответ развивается по Тх2 типу. Это подтверждается и полученными нами данными. У часто болеющих детей соотношение Тх1/Тх2 ниже, чем у здоровых детей такого же возраста. Malaponte G, Li Yolti G. [134] также отмечали, что скорее всего у детей, часто болеющих ОРЗ, иммунный ответ развивается по Тх2 типу.

Учитывая выше изложенное, можно сказать, что состояние иммунного и цитокинового статуса здоровых и часто болеющих детей одного возраста отличаются. Эти отличия заключаются в снижении у ЧБД численности ряда субпопуляций лимфоцитов, индуцированной продукции ИФНу, спонтанной продукции ФНОа, соотношения Тх1/Тх2 и повышении индуцированной продукции ИЛ 4.

В полученных нами данных о продукции цитокинов у здоровых детей не наблюдалось большой индивидуальной разницы, и данные могут быть с успехом подвергнуты статистической обработке. Продукция некоторых цитокинов, в частности ИФНу и ФНОа, у детей, ничем не заболевших в этот период и не получавших никакого лечения, в течение 30 дней наблюдения менялась мало. Hagendorens М.М et all. отмечают, что возможна разница между индивидуальными значениями, также следует учитывать данные о наличии в популяции высоких и низких продуцентов цитокинов (ФНОа, ИЛ 10). К сожалению, в литературе не обсуждается постоянство показателей цитокинового статуса у одного и того же индивидуума.

Учитывая полученные нами данные можно сделать следующий вывод: исследованные показатели цитокинового статуса (ИЛ2, ИЛ4, ИЛ6,ИЛ8, ИЛ10,

ИФНу, ФНОа, Txl/Tx2) у здоровых детей имеют межиндивидуальные различия. При динамическом наблюдении продукция, по крайней мере, некоторых цитокинов (ИФНу, ФНОа) сохраняется у них на одном уровне в течение 30 дней наблюдения.

Так как некоторые из обследуемых нами детей заболели ОРЗ, мы исследовали, не влияло ли исходное состояние численности субпопуляций на заболеваемость. По полученным нами данным значимой разницы в численности субпопуляций лимфоцитов у детей, которые заболели и детей, которые оставались здоровыми, не было. Следовательно, те нарушения в численности субпопуляций лимфоцитов у ЧБД, которые мы наблюдали, не влияют напрямую на заболеваемость ОРЗ.

К нашему сожалению, в литературе не обсуждалось влияния исходного состояния численности субпопуляций на заболеваемость ОРЗ. Однако многие авторы Malaponte G. et al [134], Kim JH et all [125] отмечают негативное влияние ОРЗ на численность субпопуляций. Отмечают также, что изменения клеточного звена иммунитета может являться предрасполагающим фактором ОРЗ [57]. Хотя как видно из нашего исследования численность субпопуляций лимфоцитов не являлась предрасполагающим фактором ОРЗ. Вероятно, это связано с не очень ярко выраженными изменениями этих показателей (не более, чем на 15%), т.к. существенный дефицит субпопуляций лимфоцитов безусловно является фактором риска в плане инфекционной заболеваемости [57].

При исследовании вопроса о том, как влияют изменения в продукции цитокинов на подверженность ЧБД острым респираторным заболеваниям выявлено, что дети чаще заболевали, если у них была снижены показатели продукции ИФНу, ИФНа и соотношения Тх1/Тх2 по сравнению с ЧБД, не заболевшими в этот период.

Для коррекции выявленных изменений иммунной и цитокиновой систем нами были использованы иммуномодуляторы ИРС19, Ацилакт или их сочетание.

Применение ИРС19 приводило к следующим результатам: увеличивалось относительное количество CD3+ лимфоцитов, однако так же наблюдалось снижение соотношения CD4+/ CD8+ клеток и количество CD 16+ лимфоцитов крови.

Ацилакт в целом на группу оказывал положительное влияние: увеличивалось абсолютное количество СБЗ+ лимфоцитов, СБ4+ лимфоцитов и абсолютное количество СБ8+клеток.

При сочетанном применении этих препаратов наблюдалось увеличение количества лейкоцитов, абсолютного количества лимфоцитов и СБЗ+клеток. Также отмечалось увеличение абсолютного количества СБ4+, С08+, СБ 19+, СБ 16+лимфоцитов, но наблюдалось и снижение относительного количества СБ4+лимфоцитов и соотношения СБ4+/СБ8+ клеток. Таковы были средние изменения в каждой группе детей. Далее дети каждой группы были разделены на тех, у кого исходно показатели численности субпопуляций лимфоцитов находились в пределах возрастной норы и на тех, у кого они были исходно снижены.

Исходно нормальные показатели численности субпопуляций лимфоцитов часто снижались после применения иммуномодуляторов, особенно в результате воздействия ИРС 19. Выраженное положительное влияние в плане нормализации численности субпопуляций лимфоцитов происходило при применении иммуномодуляторов у детей с исходно сниженными показателями.

Поданным некоторых авторов при применении ИРС 19 исходно нормальная численность субпопуляций остается без существенной динамики, по данным других (Кладова О.В., Харламова Ф.С.) отмечается увеличение численности СОЗ+, СБ4+ лимфоцитов [27]. Итак, при исходно нормальной численности субпопуляций авторы не наблюдали, какого либо воздействия на численность субпопуляций, либо наблюдали ее некоторое увеличение. Эти данные не согласуются с полученными нами. Возможно, наблюдаемые нами изменения надо трактовать как поствакцинальную реакцию, так как ИРС 19 является местным иммуномодулятором со свойствами вакцины, а в определенные сроки после вакцинации наблюдается возникновение временного иммунодефицитного состояния.

Вопрос применения иммуномодуляторов у детей с исходно нормальной численностью субпопуляций остается открытым к обсуждению. Однако, у нас складывается впечатление, что не следует применять иммуномодуляторы у детей без предварительного исследования иммунной системы, а у детей с исходно нормальной численностью субпопуляций лучше их не применять.

При исходно сниженной численности субпопуляций лимфоцитов крови многие авторы наблюдали увеличение численности и CD3+, и CD4+ лимфоцитов после применения бактериальных лизатов [34, 35, 58], в частности ИРС19 [22, 23, 28], Это согласуется с полученными нами данными.

При сравнении действия Ацилакта и ИРС19 нами было обнаружено, что Ацилакт более благоприятно влияет на численность субпопуляций лимфоцитов и продукцию цитокинов.

Ацилакт повышал индуцированную продукцию интерферонов, ИРС19 увеличивал продукцию ИФНу, но снижал продукцию ИФНа. По данным Марковой Т.П., Чувирова Д.Г [43] ИРС19 не влияет на продукцию интерферона. Кладова О.В. [27] в своем исследовании отмечала нарастание продукции интерферонов, Коровина H.A.,2003 [32] отмечала увеличение индуцированной продукции ИФНа. По данным зарубежных авторов - L. М. Bowman, Holt P. G., Bergman K.C [90] бактериальные лизаты способствуют увеличению продукции ИФНу. Как видно, литературные данные о продукции интерферонов при применении ИРС19 противоречивы и требуют дальнейшего обсуждения.

Ацилакт по данным Бляхер М.С. и др. [3] приводит к повышению индуцированной продукции интерферонов. Сочетание ИРС19 и Ацилакта оказывало такое же действие на продукцию интерферона, как и ИРС 19. Учитывая выше изложенное, можно сделать следующие выводы:

Применение иммуномодуляторов (Ацилакта, ИРС 19 или их совместно) оказывает влияние как на численность субпопуляций лимфоцитов, так и на цитокиновый профиль у ЧБД. Это воздействие наиболее выражено у ЧБД со сниженными показателями, характеризующими их иммунную и цитокиновую системы.

При сравнении разных схем иммуномодулирующей терапии у ЧБД Ацилакт оказался наиболее эффективным, т.к. он нормализовал численность субпопуляций, повышал продукцию как ИФНа, так и ИФНу, не оказывая негативного влияния на эти показатели, в отличие от ИРС 19 или ее сочетания с Ацилактом. Кроме того, только Ацилакт повышал соотношение Тх1/Тх2, что очень важно для полноценной защищенности ребенка от инфекций. По данным, приведенным в диссертационной работе В.А.Иванова [18], у детей на фоне приема Ацилакта не только исчезали проявления дисбактериоза, но и имела место тенденция к снижению частоты ОРЗ. В группах детей, получавших Ацилакт, за время пребывания в санатории уровень заболеваемости ОРЗ был на 16,7 % ниже, чем в группах, получавших только санаторное лечение.

Особое внимание хочется обратить на неблагоприятное влияние исследованных нами иммуномодуляторов на исходно нормальные показатели состояния как иммунной, так и цитокиновой системы и благоприятное, нормализующее влияние их на исходно сниженные показатели. Это свидельствует о необходимости предварительного, перед назначением иммуномодулятора, проведении скрининга состояния иммунной системы. Вероятно, это следует делать при назначении иммуномодуляторов как в лечебных, так и в профилактических целях.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2008 года, Карпова, Нина Викторовна

1. Альбицкий В.Ю., Баранов A.A. Часто болеющие дети. Клинико-социальные аспекты, пути оздоровления.- Саратов.- 1986. с. 181

2. Балаболкин И.И., Булгакова В.А., Сенцова Т.Е., Катосова JI.K., Реутова B.C. Эффективность профилактики респираторных инфекций у детей с бронхиальной астмой // Детский доктор.- 2001.- №1.- с. 16-18

3. Бляхер М.С., Федорова И.М, Лопатина Т.К., Жукова В.М, Архипов С.Н. Цитокиновый статус часто болеющих детей и влияние на него Ацилакта // Цитокины и воспаление. 2002.- Том 1. - №2. - с. 24

4. Буйко В.П., Батора Ю.И., Михайлов Г.Т. Роль факторов противовирусного иммунитета в выздоровлении детей раннего возраста больных ОРВИ // Педиатрия. -1986. №10. - с.62-66

5. Васильева И.А., Жахов A.B., Трофимов A.B., Ищенко A.M., Киселева О.И Исследование цитокинов при среднетяжелых формах гриппозной инфекции и других ОРЗ в условиях комплексной терапии // Цитокины и воспаление.-2003.- №2. с.23-28

6. Вельтищев Ю.Е. Онтогенез иммунной системы и факторы, влияющие на иммунобиологическую реактивность детского организма // Вопросы охраны материнства и детства.- 1989. Том 37. -№ 10. - с.3-12

7. Винников А.К, Гунчиков М.В. Эффективность ИРС-19 в лечении воспалительных заболеваний верхних дыхательных путей // Русский Медицинский Журнал.-2000.- Том 8.- №17.- с.712-714

8. Гавалов С.М. Часто и длительно болеющие дети // Новосибирск, 1993.-c.283

9. Гаращенко Т.И., Балоболкин И.И., Булгакова В.А., Балева JI.C. Результаты многоцентрового исследования применения ИРС19 для профилактики ЛОР заболеваний у часто болеющих детей //Детский доктор. 2001. - №1. -с.22-28

10. Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и при патологии М.: Медицина. -1996. -с.117,134,240

11. Ершов Ф.И., Киселев О.И. Интерфероны и их индукторы (от молекул до лекарств). М., ГЭОТАР-Медиа.- 2005. с.368

12. Железникова Г.Ф. Иммунитет против респираторно-вирусных инфекций у детей//Педиатрия.- 1995. -№5. с.89-93

13. Заплатников А.Л. Иммунокорректоры бактериального происхождения в профилактике и лечении респираторных инфекций у детей // Российский педиатрический журнал. -2002. -№1. с. 45-48.

14. Заплатников А.Л Клинико-патогенетическое обоснование иммунотерапии и иммунопрофилактики вирусных и бактериальных заболеваний у детей.- М. Автореферат диссертации д.м.н. 2003

15. Запруднов А.М. Перспективы применения Рибомунила в педиатрической практике // Ковров Бест-В , 1996.- с.9-11

16. Иванов В.А. Состояние здоровья часто болеющих детей и дифференциальный выбор методов их оздоровления в условиях специализированного санатория // Автореферат дисс. к.м.н. 2007- с.11

17. Иванова В.В., Железникова Г.Ф., Шилова И.В. Иммунопатогенез инфекционной болезни у детей // Педиатрия им. Сперанского.- 2005. №4.-с.61-65

18. Калинина Н.М. Нарушения иммунитета при рецидивирующем фурункулезе // Цитокины и воспаление.- 2003. №1. - с.41-44

19. Караулов A.B., Сокуренко С.И., Климов Э.В. Молекулярно-генетическое обоснование применения иммуномодулятора ИРС 19 при рецедивирующих респираторных заболеваниях // Иммунология. 2000.- №1. - с. 71-73.

20. Караулов A.B., Кокушков Д. В., Бицоева 3. В. Эффективность и безопасность иммуномодуляторов (на примере топических бактериальных лизатов). Аллергология и иммунология. 2007. - Том 8 -№ 2. - с.201-203

21. Каукиайнен А.Б. Факторы предрасположенности к повторным воспалительным заболеваниям органов дыхания у детей раннего возраста // СПб. Автореферат диссертации д.м.н. -1992.-45с.

22. Кетлинский С.А., Симбирцев A.C., Воробьев A.A. Эндогенные иммуномодуляторы // СПб. Гиппократ-1992.- с.241

23. Кириллов В.И. Клиническая практика и перспективы иммунокоррегирующей терапии в педиатрии // Практикующий врач.-1998.-№12.- с.9-12

24. Кладова О. В., Харламова Ф.С., Щербакова A.A., Легкова Т.П., Знаменская A.A., УчайкинВ.Ф. Результаты применения ИРС 19 у часто болеющих детей с синдромом крупа и другими поражениями бронхолегочной системы // Детский доктор, спецвыпуск.- 2001. №4. -с.26

25. Климов Э.В. Дифференцированная иммунотерапия длительно и часто болеющих детей различных возрастных групп и нозологических подгрупп // М. -2001. Дисс. д.м.н.

26. Ковалева C.B. Рекомбинантный ИФНа виферон в иммунореабилитации часто и длительноболеющих детей- М.- 2002г.- Дисс.к.м.н.- с.56-60

27. Коровина H.A., Чебуркин A.B., Захарова И.Н., Заплатников А.Л., Смирнова Г.И. Иммунореабилитация часто и длительно болеющих детей // Учебное пособие, Бэст-В, Ковров.- 1996. с.31

28. Коровина H.A., Заплатников А.Л., Захарова И.Н. Часто и длительно болеющие дети: современные возможности иммунореабелитации // Руководство для врачей- М. 2001.

29. Краснов М.В., Березенцева Е.В., Краснов В.М. Часто болеющие дети.-Чебоксары.- 2005. с.4, 6, 11

30. Краснопрошина Л.И., Ляшенко В.А., Сходова С.А. Иммунологическая эффективность терапевтических бактериальных вакцин // Биопрепараты.-2003.-№3.- с.6-8

31. Краснопрошина Л.И., Сходова С.А. , Панурина Р.Л. Бактериальные терапевтические вакцины // Медицинская иммунология.-2006.-Том 8.- № 2-3. с.273-274

32. Кузьменко Л.Г. Лечебно- профилактическая помощь детям с увеличенной вилочковой железой // Педиатрия 1996. №4. - с.63-69

33. Лазарев Ю.А., Богомолова О.В. Влияние отклонений в иммунном статусе на развитие осложнений со стороны дыхательной системы у детей, часто болеющих ОРИ. Реабилитация иммунной системы. Цхалтубо.- 1990- с. 206.

34. Леонова М.В., Ефременкова О.В. Местная иммуномодуляция при заболеваниях верхних дыхательных путей // Качественная клиническая практика.- 2002. №1.- с. 14-22

35. Лучихин Л.А., Полякова Т.С., Миронов A.A.Опыт применения препарата ИРС19 для профилактики и лечения воспалительных заболеваний верхних дыхательных путей // Вестник оторинолорингологии.-2000.- №4.- с.54-56

36. Лыткина И.Н., Ежлова Е.Б., Писарева В.А., Иваненко Т.Н., Шаханина И.Л. Оценка эффективности применения препарата ИРС19 для профилактики гриппа и острых респираторных заболеваний у детей // Детский доктор. -2001. №4 - с.62-64

37. Лютов Н.Г. Иммунотерапия рецидивирующих респираторных заболеваний // Русский Медицинский Журнал. 2001. - Том 9 №3-4.- с 136-138

38. Макарова З.С. Часто болеющие дети и их реабилитация в условиях детской поликлиники // Поликлиника. -2005. №1. - с.9-14

39. Маркова Т. П., Чувиров Д. Г., Гаращенко Т. И. Применение и механизм действия ИРС19 в группе часто болеющих детей // Иммунология. 2000. -№5. - с.56-58

40. Мешкова Р.Я., Коновалова М.И., Ковальчук JI.B. Клиника, диагностика, лечение некоторых форм иммунопатологии и аллергических заболеваний с основами организации службы клинической иммунологии: Смоленск.- 1995. с.32-34

41. Намазова JI.C., Вознесенская Н.И., Извольская З.А., Алексина С.Г. Иммунотерапия пациентов с респираторной аллергией // Consilium medicum.- 2002. Том 4. - №9. - с.472-474

42. Намазова JI.C., Ботвиньева В.В., Торшхоева P.M., Таги-заде Т.Г., Таранушенко Т.Е. Часто болеющие дети мегаполисов: лечение и профилактика острых респираторных инфекций // Педиатрическая фармакология. 2005. - Том 2. - №1. - с.3-7

43. Нестерова И.В., Старченко А.А., Иванова С.А., Симбирцев А.С. Справочник по иммунотерапии.- Диалог. 2002. - с.88-95

44. Ноников В.Е., Ленкова Н.И. Эффективность и переносимость местных бактериальных лизатов при лечении и профилактике инфекций дыхательных путей // Русский Медицинский Журнал. 2003. - Том 11.- №22. - с. 1263-1265

45. Организация наблюдения за детьми, часто болеющими ОРВИ, на педиатрических участках детских поликлиник г. Москвы. Информационное письмо. М. 1993г.

46. Полевщиков А.В. Преимущества местной иммунотерапии в лечении и профилактике рино фарингитов // Новости оториноларингологии и логопатологии. 2000.- №3. - с. 16-20

47. Петрук Н.И., Тюрин Н.А., Кузьменко Л.Г., Бляхер М.С. Состояние иммунной системы детей раннего возраста с рецидивирующимизаболеваниями органов дыхания // Вестник Российского университета дружбы народов.- 1999.- №2.- с.67-72

48. Пуртов И.И. К проблеме ЧБД в раннем возрасте и дошкольном возрасте // Российский педиатрический журнал. 2002. - №6. - с.50-52

49. Резников Ю.П. Иммунокорригирующая терапия на рубеже тысячелетий (научно-практическая конференция к 400-летию кремлевской медицины) // Кремлевская медицина. Клинический вестник. 2000. - №3. - с.79-89

50. Ридуан А.Н. Иммуно-цитологические особенности лимфоузлов при лимфоаденопатии различного генеза: М. 1996. - Дисс. к.м.н,- с. 184

51. Ройт А., Бростофф Д., Мейл Д. Иммунология. // Пер. с англ.-М.: Мир. -2000. с.582

52. Романцев М.Р. Рациональная фармакотерапия ЧБД. СПб.- 2006г. - с.23-31

53. Рылеева И.В., Балаболкин И.И. Бактериальный иммуномодулятор ИРС19 и Имудон в педиатрической практике // Вопросы современной педиатрии. -2003.-Том 2.-№2.-с. 78-81

54. Рязанцев С.В., Хлебникова Н.А., Полевщиков А.В. Оценка клинической эффективности препарата ИРС19 при лечении острых ринофарингитов // Новости оториноларингологии и логопатологии. 2000. - №3 -с.231-234

55. Самсыгина Г.А. Часто болеющие дети: проблемы патогенеза, диагностики, терапии // Consilium medicum. 2004. - Том 6. - №2. - с.3-8

56. Сарычева А.В. Клинико- иммунологические особенности ЧБД и методы иммунореабелитации.- М. 2000. - Дисс. к.м.н. - с.43-50

57. Сидоренко И.В., Гонес П.А. Диагностика и лечение первичных иммуно-дефицитных состояний // Российская ринология. 1999. - №1. - с.38-40.

58. Стефани Д.В., Косенкова Т.В., Миху И.И., Данилов А.А. Определения типа иммунореактивности у детей путем оценки нагрузочных тестов // Первый съезд иммунологов России. Тезисы докладов.- Новосибирск 1992г.- с. 456

59. Стефани Д-В., Вельтищев Ю.Е. Клиническая иммунология и иммунопатология детского возраста. Руководство для врачей- М. -Медицина. 1996. - с.384

60. Таги-Заде Т.Г. Клинико-патогенетическое обоснование иммуномодули-рующей терапии ЧБД мегаполисов. Автореферат дисс. к. м. н. - М .- 2005. -с.12

61. Таточенко В.К., Озерецковский Н.А . Иммунопрофилактика // М.- 2003. -с.106-110

62. Таточенко В.К. Лечение острых респираторных заболеваний у детей // Лечащий врач.-2005. -№7.- с.47-52

63. Фрейдлин И.С. Иммунная система и ее дефекты: Руководство для врачей. -СПб. НТФФ "Полисан" - 1998 -с. 6-12

64. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Оценка иммунного статуса человека в норме и при патологии // Иммунология.-2001.- №4.- с.4-6

65. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Иммуномодуляторы: механизм действия и клиническое применение // Иммунология. 2003. - № 4. - с.196-203.

66. Харьямова М.Е. Влияние полиоксидония и миелопида на формирование поствакцинального иммунитета у длительно и часто болеющих детей.-Автореферат дисс.к. м. н. -М. 2000. - с.10-12

67. Чернова Н.Д., Кузьменко Л.Г. Клинико-иммунологическая характеристика ЧБД в интерморбидном фоне // Вестник Российского университета дружбы народов. 2002. - №3. - с.48-52

68. Чернова Н.Д., Кузьменко Л.Г, Смирнова Т.Н Иммунокоррекция у часто болеющих детей в амбулаторной практике // Детские инфекции. 2004. - №2. - с.46-49

69. Чернохвостова Е.В., Герман Г.П. Иммунохимическая диагностика гаммапатий // Методические рекомендации. 1984. - Москва. - с.80-85

70. Чувиров Д.Г. Клинико-иммунологическая эффективность применения полиоксидония ликопида и биостима у детей с повторными инфекциями.-М.- 2005. Дисс. к.м.н.

71. Шварцман Я.С., Сазесон Л.Б. Местный иммунитет.- Москва.-1978г.- с. 110

72. Щербакова Б.В., Федько И. А. Опыт использования ВП-4 в реабилитации часто болеющих детей // Российский педиатрический журнал.-2000.-№3. -с.26-29

73. Юрьев В.В., Подосинников И.С.Часто болеющие дети // Terra medica. -1999.-№ 3.-С.23-25

74. ЯрилинА.А. Система цитокииов и принципы ее функционирования в норме и при патологии // Иммунология.-1997.- №5.- с. 7-13

75. Banovcin P., Minarik M., Rosslerova V., Miklerova M., Cap J., Pullmann R. Broncho-Yax and IRS 19 in the treatment of recurrent respiratory tract inflammation in children // Cesk. Pediatr.-1992-Vol. 47- №11- p. 666-669

76. Bergman K.C., Waldman R.H. Stimulation of secretory antibody following oral administration of antigen // Rev. Infect. Dis.- 1988 -Vol. 10- p.939-950

77. Bernstein J.M., Rich G.A., Odziemiec C., Ballow M. Are thymus-derived lymphocytes (T cells) defective in the nasopharyngeal and palatine tonsils of children? // Otolaryngol Head Neck Surg. -1993 Vol. 109 - №4 - p.693-700

78. Bona C., Bonilla F. Textbook of immunology, sekond end Harwood Acard . Publ. Amsterdam 1996 - p.406

79. Bondestam M., Aim G.V. Foucard T. Interferon production in children with undue susceptibility to infections // Acta Paediatr Scand.- 1984 Vol.73 - №2 -p. 197-202

80. Bont L., Steijn M., van Aalderen W.M., Kimpen J.L. Impact of wheezing after respiratory syncytial virus infection on health-related quality of life //Pediatr. Infect. Dis J.- 2004 Vol.23 - №5 - p.414-417

81. Bossuyt X., Moens L., Van Hoeyveld E., Jeurissen A., Bogaert G., Sauer K., Proesmans M., Raes M., De Boeck K. Coexistence of (Partial) Immune Defects and Risk of Recurrent Respiratory Infections // Clin. Chem.- 2007- Vol. 53- №1 -p.124-130

82. Bowman L.M., Holt PG Selective Enhancement of Systemic Thl Immunity in Immunologically Immature Rats with an Orally Administered Bacterial Extract // Infection and Immunity -2001- Vol. 69- № 6- p.3719-3727

83. Boyle R.J., Robins-Browne R.M., Tang M.L.K. Probiotic use in clinical practice: what are the risks? // American Journal of Clinical Nutrition- 2006 -Vol. 83 № 6 - p.1256-1264

84. Brouard J., Freymuth F., Vabret A., Toutain F., Duhamel J.F. Respiratory allergy and the viruses // Arch. Pediatr. 1999 -Vol. 6 - №1- p.29-34

85. Cabana M.D., Shane A.L., Chao C., Oliva-Hemker M. Probiotics in Primary Care // Pediatrics Clin. Pediatr. 2006 - Vol. 45- p.405-410

86. Calvo M., Grob K., Bertoglio J.5 Marin F., Denis R. Secretory IgA deficiency in pediatric patients: clinical and laboratory follow-up // Allergol. Immunopathol.-1990 Vol. 18- №3- p. 149-153

87. Calvo Rey C., Garcia M.L.,Casas Flecha I., Sanchez Mateos M.F., Rodrigo Garcia G., de Cea Crespo J.M. , Perez-Brena P. Role of rhinovirus in respiratory tract infections in hospitalized children // An. Pediatr. 2006 - Vol. 65 - №3 -p.205-210.

88. Cernelc D., Hofman A., Cernelc S., Wagner H. Local immunomodulation in atopic and nonatopic children with nonspecific respiratory tract diseases // Glas. Srp. Akad Nauka- 1994 №44 - p. 12

89. Chen Z.M., Mao J.H., Du L.Z., Tang Y.M. Association of cytokine responses with disease severity in infants with respiratory syncytial virus infection // Act. Paediatr.- 2002 Vol. 91- №9 - p.914-922

90. Ciprandi G., Tosca M.A., Fasce L. Allergic children have more numerous and severe respiratory infections than non-allergic children // Pediatr. Allergy Immunol. -2006- Vol. 17- №5 p.389-391

91. Collet J.P., Boissel J.P., ОМ-85 BV: primary versus secondary prevention // Respiration.- 1994-Vol. 61-№1 l-p.20-23.

92. Constant S.L., Bottomly K. Induction of Thl and Th2 CD4+ T cell responses: the alternative approaches // Annu Rev. Immunol. -1997 -Vol. 15-p.297-322

93. Couriel J. Assesment of the child with recurrent chest infections // Br.Med.Bull.- 2002- Vol. 61- p.l 15-132

94. Daele J., Zicot A.F. Humoral immunodeficiency in recurrent upper respiratory tract infections. Some basic, clinical and therapeutic features // Act. Otorhinolaryngol. Belg.- 2000- Vol. 54- №3 -p.373-390

95. Del Prete G. The concept of type-1 and type-2 helper T cells and their cytokines in humans // Int. Rev. Immunol. 1998- Vol.16- №3-4 - p.427-455

96. Dennis D.P. Chronic sinusitis: defective T-cells responding to superantigens, treated by reduction of fungi in the nose and air // Arch. Environ Health. 2003 -Vol. 58- №7 -p.433-441

97. Forsythe P., Inman M.D, Bienenstock J. Oral Treatment with Live Lactobacillus reuteri Inhibits the Allergic Airway Response in Mice // Am. J. Respir. Crit. Care Med- 2007 Vol. 175- p.561 - 569.

98. Galdeano M.C., de Le Blanc A., Vinderola G., Bibas B.M.E., Perdigón G. Proposed Model: Mechanisms of Immunomodulation Induced by Probiotic Bacteria // Clinical and Vaccine Immunology- 2007- Vol. 14- № 5 p.485-492

99. Georas S.N., Guo J., De Fanis U., Casolaro V. T-helper cell type-2 regulation in allergic disease// Eur. Respir. J.- 2005- Vol. 26 p.l 119-1137

100. Gollob J.A., Murphy E.A., Mahajan S. , Schnipper C.P. , Ritz J. , Frank D.A. Altered interleukin-12 responsiveness in Thl and Th2 cells is associated with the differential activation of STAT5 and STAT1 // Blood.- 1998 -Vol. 91- №4 -p.1341-1354

101. Hagendorens M.M., Ebo D.G., Bridts C.H., De Clerck L.S., Stevens W.J. Flow cytometrical determination of regulatory cytokines (IL-10, IL-12) and circulating dendritic cell cytokines in allergic asthmatic children // Cytokine-2004 Vol. 26 -№2 - p.82-88

102. Härtel C., Adam N., Strunk T., Temming P., Müller-Steinhardt M., Schultz T. Cytokine responses correlate differentially with age in infancy and early childhood // Clin. Exp. Immunol.- 2005 Vol.142 - №3 - p. 446-453

103. Holt P. Interactions between respiratory tract infections and atopy in the aetiology of asthma // Eur. Respir. J. 2002 Vol. 19 - p.538-545

104. Hussell T., Spender L.C., Georgiou A., O'Garra A., Openshaw P.J. Thl and Th2 cytokine induction in pulmonary T cells during infection with respiratory syncytial virus // J. Gen. Virol.- 1996 Vol. 77 - №10 -p.2447-2455

105. Illy R., Von Mutius E., Lau S. The role of early childhood ifections diseases in the development of asthma up to school age // Allerg. and Clin.Immunol.-2001-Vol.13 №3 - p.99-106

106. Katsunuma T., Kawahara H., Suda T., Ishii T., Ohya Y., Akasawa A., Saito H., Oshida T., Sugita Y. Analysis of gene expressions of T cells from children with acute exacerbations of asthma // Int. Arch. Allergy Immunol.-2004- Vol. 134-p.29-33

107. Kemp A.S., Shelton M.J. Recurrent respiratory illness in the young child // Aust. Fam. Physician.- 1992- Vol. 21- №8 -p. 1122-1127

108. Kim J.H., Kim B.S., Lee S.Y., Seo J.H., Shim J.Y., Hong T.J., Hong S.J. Different IL-5 and IFN-gamma production from peripheral blood T-cell subsets in atopic and nonatopic asthmatic children // J. Asthma. -2004 Vol.41- №8 - p.869-876

109. Land M.H., Rouster-Stevens K., Woods Ch.R., Cannon M.L., Cnota J., Shetty A.K. Lactobacillus Sepsis Associated With Probiotic Therapy // Pediatrics- 2005 -Vol.115 -p.178-181.

110. Leech S.C., Price J.F., Holmes B.J., Kemeny D.M. Nonatopic wheezy children have reduced interferon-gamma // Allergy. -2000 Vol. 55- №1 -p.74-78

111. Lemanske R.F. The childhood origins of asthma (COAST) study // Pediatr. Allergy Immunol.- 2002- Vol. 13- №15 -p.38-43

112. Lennon D.R., Cherry J.D., Morgenstein A., Champion J.G., Bryson Y.J. Longitudinal study of influenza B symptomatology and interferon production in children and college students // Pediatr. Infect. Dis. -1983 Vol. 2- №3 - p.212-215.

113. Lerou P. Low respiratory tract infections in children // Curr. Opin. Pediatr. -2001-Vol.13 №2 - p. 200-206

114. Mackova N.O., P. Fedorencko P. Recovery of peripheral blood cells in irrradiated mice pretreated with bacterial extract IRS-19 // Physiol. Res.- 2000 -Vol. 49- p.703-710

115. May A., Zielen S., Reimold I., Von Ilberg C. Weber A. Immunoglobulin subclass defects in patients with therapy refractor chronic rhinosinusitis // HNO. -1999-Vol. 47-№1 p. 19-24

116. Menard O., Butel M.-J., Gaboriau-Routhiau V., Waligora-Dupriet A.-J. Immune response induced by Bifidobacterium strains isolated from infants in gnotobiotic mice//.Appl. Envir. Microbiol. -2007 №12 -p.1261-1270

117. Miyajima A., Hara T., Kitamura T. Common subunits of cytokine receptors and the functional redundancy of cytokines // Trends Biochem Sci.- 1992- Vol. 17-№10 -p.378-382

118. Moubareck C., Lecso M., Pinloche E., Butel M.J., Doucet-Populaire F. Inhibitory Impact of Bifidobacteria on the Transfer of JJ-Lactam Resistance among

119. Enterobacteriaceae in the Gnotobiotic Mouse Digestive Tract // Applied and Environmental Microbiology- 2007 Vol. 73-№.3 - p.855-860

120. Nicola N.A. Cytokine pleiotropy and redundancy: a view from the receptor // Stem. Cells. 1994 - Vol. 12 - № 1 - p.3-12

121. Nokso-Koivisto J., Pitkaranta A., Blomqvist S., Jokinen J., Kleemola M., Takala A., Kilpi Т., Hovi T. Viral etiology of frequently recurring respiratory tract infections in children // Clin. Infect. Dis. 2002 - Vol.35- №5 - p.540-546

122. Ogra P.L., Lamm M.E., Vcchee S.L., Strober W., Bienenstok S Handbook of Mucosal Immunology san Diego // Academic Press, 1994 p. 127-137

123. Oosterhout J.M., Motta A.C. Thl/Th2 paradigm: not seeing the forest for the trees? // Eur. Respir. J.- 2005 Vol. 25 - p.591-593

124. Ouwehand A.C. Antiallergic Effects of Probiotics // J. Nutr.- 2007 Vol. 137 -p.794-797

125. Pessey J.J., Megas F., Arnould B. Prevention of recurrent rhinopharyngitis in at-risk children in France: a cost-effectiveness model for a nonspecific immunostimulating bacterial extract (OM-85 BV) // Pharmacoeconomics- 2003 -Vol. 21- №14 p.1053-1068

126. Pitkaranta A., Hovi T., Karma P. Interferon production by leukocytes in children with otitis media with effusion // Int J Pediatr Otorhinolaryngol. 1996 -Vol. 34- №1-2 - p.25-33

127. Raettig H., Schimmrich B. Animal experiments on combined local immunization against influenza // Wien Klin Wochenschr. -1979 Vol. 91- №13 -p.445-448

128. Revillard J.-P., Adorini L. et al. Apoptosis: potential for disease therapies // Immunology today -1998- Vol. 19 №7 - p291-296

129. Robinson D.S., Larche M., Durham S.R. Tregs and allergic disease // J. Clin. Invest.- 2004 Vol. 114 - p. 1389-1397

130. Rodríguez L., González C., Flores L., Jiménez-Zamudio L., Graniel J., Ortiz R. Assessment by flow cytometry of cytokine production in malnourished children // Clin. Diagn. Lab. Immunol. -2005 Vol. 12- №4 - p.502-507

131. Roitt I., Brostoff J., Male D. Immunology .Fourth edition.-1998- p 15

132. Romagnani S. T-cell subsets (Thl versus Th2) // Ann Allergy Asthma Immunol. -2000-Vol. 85- №1 p.9-18

133. Rook G.A.W., Brunei L.R. Microbes, immunoregulation, and the gut // B.M.J. Publishing Group Ltd & British Society of Gastroenterology- 2005- Vol. 54 -p.317-320

134. Rossi M.E, Marranci S., De Marco A., Lega L., Minutello M.A., Azzari C., Resti M., Vierucci A. Reduced natural killer function in children with recurrent respiratory tract infections //Pediatr. Med. Chir. 1993 - Vol. 15 - №1 - p. 1-4

135. Ruah S.B, Ruah C., van Aubel A., Abel S., Elsasser U. Efficacy of a polyvalent bacterial lysate in children with recurrent respiratory tract infections // Adv. Ther. -2001 Vol. 18 - №4 - p.151-162

136. Ruedl A., Fruhwirth M., Wick G., Wolf H. Immune Response in the Lungs following Oral Immunization with Bacterial Lysates of Respiratory Pathogens // Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology- 1994- Vol. 1 №.2 - p. 150-154

137. Salminen S.J., Gueimonde M.L., Isolauri E. Symposium: Innate Immunity and Human Milk. Probiotics That Modify Disease Risk The American Society for Nutritional Sciences // J. Nutr. 2005 - Vol. 135 - p.1294-1298

138. Sandmand M., Bruunsgaard H., Kemp K., Andersen-Ranberg K., Pedersen A.N., Skinh P and Pedersen BK Is ageing associated with a shift in the balance between Type 1 and Type 2 cytokines in humans? // Clin. Exp.Immunol. 2002 -Vol. 127 - №1 - p.107-114

139. Schmidt S.M., Muller C.E., Brans R, Wiersbitzky S.K. Bronchial Chlamydia pneumoniae infection, markers of allergic inflammation and lung function in children // Pediatr. Allergy Immunol. 2001- Vol.12 p.257-265

140. Schroder K., Hertzog P.J. , Ravasiand T., David A. Hume Interferon-y: an overview of signals, mechanisms and functions.- 2003 p.163-189

141. Shirai T, Suzuki K, Inui N, Suda T, Chida K, Nakamura H Thl/Th2 profile in peripheral blood in atopic cough and atopic asthma // Clin. Exp. Allergy 2003 -Vol.33 - p.84-89

142. Steurer-Stey C., Bachmann L.M., Steurer J., Tramèr M.R. Oral Purified Bacterial Extracts in Chronic Bronchitis and COPD // American College of Chest Physicians- 2004 Vol. 126 - p. 1645-1655

143. Sukoyan G.V., Mamuchishvili I.G., Pagava K.I. Relationship between immune status and activity of the lymphocyte energy supply system in adolescents suffering from frequent diseases // Bull Exp. Biol. Med.- 2005 Vol. 139- №6 -p.695-697

144. Taylor A., Verhagen J., Akdis C.A., Akdis M. T regulatory cells in allergy and health: a question of allergen specificity and balance // Int .Arch. Allergy Immunol. 2004 - Vol. 135 - p.73-82

145. Tomson A. The cytokine handbook // Academic Press, London 1992, p.418

146. Townsend M.J., McKenzie A.N. Unravelling the net ? Cytokines and diseases // J. Cell. Sci. 2000 - Vol. 113 - №20 - p.3549-3550

147. Tunon de Lara J. -M. Service des maladies respiratoires // Inserm E9937, hôpital Haut-Lévêque, CHU de Bordeaux, 33604 // Pessac cedex, France,2002

148. Van der Meide P.H, Schellekens H. Cytokines and the immune response // Biotherapy 1996 - Vol. 8 - №3-4 - p.243-249

149. Van Reeth K. Cytokines in the pathogenesis of influenza//Vet. Microbiol.-2000 Vol. 74-№ 1-2- p. 109-116

150. Vanecek K., Lehovcova A., Hlouskova Z. Deficiency of interferon production in children with recurrent respiratory diseases // Czech. Med.- 1990- Vol. 13- №23 p.64-70

151. Vanecek K., Lehovcova A., Hlouskova Z. Insufficient formation of interferon in children with recurrent respiratory infections // Cas. Lek. Cesk. -1990- Vol. 129-№31- p.979-982.

152. Vanecek K., Lehovcova A. Interferon production in children with respiratory diseases // Acta Paediatr. Scand.- 1985 Vol. 74 - №1- p. 118-121

153. Villena J, Racedo S., Agiiero G., Bru E., Medina M., Alvarez S. Lactobacillus casei Improves Resistance to Pneumococcal Respiratory Infection in Malnourished Mice // The American Society for Nutritional Sciences J. Nutr. -2005-Vol. 135-p. 1462-1469

154. Waed E.R. Frequency and severity of infections in gay care // J. Pediatr.- 1988 -Vol. 121-№4-p. 540-546.

155. Wasik M.,.Kaczorowska M., Demkow U. Altered expression of immune surface markers in children with recurent infections of respiratory tract // J. of Physiology and Pharmacology -2005- Vol.56- № 4 p.237-243

156. Weber J., Jand J., Phase I trial of subcutaneous IL-6 inpacients with advaced malignarcies // J. clin. Oncol.- 1993 Vol.2 - p 499-506

157. Yoo J., Tcheurekdjian H., Lynch S.V., Cabana M., Boushey HA. Microbial Manipulation of Immune Function for Asthma Prevention: Inferences from Clinical Trials // Proceedings of the ATS- 2007- Vol.4 p.277 - 282.

158. Zielnik-Jurkiewicz B., Jurkiewicz D., Stankiewicz W., Effectiveness of Broncho-Vaxom in prevention of recurrent upper respiratory tract infection in children // Pol. Merkur. Lekarski. -2005 Vol.19 - №113 - p.625-9.

159. Zlotnik A ,Yoshie O. Chemokines: a new classification system and their role in immunity //Immunity. -2000 Vol.12 - №2 - p.121-127