Автореферат и диссертация по медицине (14.00.10) на тему:Состояние функционально-метаболической активности лейкоцитов у больных вирусным гепатитом В

-РГ6--0;

На правах рукописи

Иванова Марина Руслановна

СОСТОЯНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНО-МЕТАБОЛИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЛЕЙКОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ ВИРУСНЫМ

ГЕПАТИТОМ В

14.00.10 - инфекционные Болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

МОСКВА - 1996

Работа выполнена на кафедре инфекционных болезней Кабардино-Балкарского Государственного университета Государственного комитета Российской Федерации по высшему образованию

Научный руководитель - академик РАЕН, доктор медицинских наук, профессор НАГОЕВ Б.С.

Официальные оппоненты - доктор медицинских наук,

профессор МЛШИЛОВ В.П. доктор медицинских наук, профессор ЛУЧШЕВ В.И.

Ведущая организация - Московская медицинская

академия им.И.М.Сечепова

Защита состоится "_"_ 1996 г. в_час.

На заседании диссертационного совета Д 074.19.01 в ЦЕНТРАЛЬНОМ ИНСТИТУТЕ ЭПИДЕМИОЛОГИИ (111123, г.Москва, ул.Новогиреевская, ЗА).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ЦНИИИЭ

Автореферат разослан "_"_ 1996 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук

Пименова М.Н.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Проблема вирусных гепатитов остается одной из наиболее актуальных в инфекционной патологии человека. В материалах ВОЗ и в программных решениях многих государств в области здравоохранения борьба с вирусными гепатитами рассматривается как одна из важнейших задач.

Социальная значимость вирусных гепатитов определяется их широким распространением и тем экономическим ущербом, который они наносят. В структуре инфекционной заболеваемости вирусные гепатиты вышли на второе место после гриппа и гриппоподобных заболеваний, составляя 16-30% удельного веса всей инфекционной патологии (А.Ф.Блюгер, 1986, 1988; В.М.Жданов с соавт., 1986; В.И.Покровский, 1986, 1990; С.Н.Соринсон, 1987, Ю.А.Ильинский с соавт., 1988 и др.).

В последние два десятилетия усилия исследователей ознаменовались достижениями в изучении эпидемиологии, этиологии, патогенеза и лечения вирусных гепатитов (А.Ф.Блюгер, Н.И.Новицкий, 1988; Э.Ш.Боцвадзе с соавт., 1988; В.И.Покровский с соавт., 1990; Н.А.Фарбер с соавт., 1990; А.В.Змызгова с соавт., 1991; С.Л.Мукомолов с соавт., 1992; С.Н.Соринсон с соавт., 1992,1995; В.Ф.Учайкин с соавт., 1994; М.Х.Турьянов с соавт., 1995 и др.). Однако способность вируса гепатита В длительно порепетировать в организме и вызывать тяжелые формы заболевания и осложнения, возможность затяжного течения и хронизации патологического процесса обусловливают необходимость пристального изучения отдельных сторон патогенеза, клиники и прогнозирования вирусного гепатита В. Может представить значительный интерес также изучение вопросов нсспсцифической реактивности организма, связанных с нейтрофильньгми лейкоцитами, являющимися первыми клеточными элементами внутренней среды, мобилизуемыми организмом в защитных целях в борьбе с инфекционными заболеваниями бактериальной и вирусной этиологии (В.Е.Пшаревский, 1978; М.Г.Шубич, Б.С.Нагоев, 1980;

з

В.И.Покровский с соавт., 1983, 1987; Klebanoff, Clark, 1978; Baggiolini, 1984; Babior, 1986).

В настоящее время в нейтрофильных гранулоцитах обнаружено более 50 биологически активных соединений.

Активность микробицидной (вирицидной) системы обеспечивается содержимым азурофильных и специфических гранул нейтрофилов, в частности, кислой и щелочной фосфатаз, миелопероксидазой, цито-хромоксидазой, лактоферрином, уровнем лизосомальных кати-онных белков, гликогеном, лшшдами и др. (В.И.Пигаревский, 1978; Б.С.Нагоев, 1986; В.И.Покровский с соавт., 1987; Klebanoff, Clark, 1978; Babior, 1984; Klebanoff, 1985; Houde, Grey, 1986; Alam, 1987 и др.).

Несмотря на значительное количество работ, посвященных изучению функциональной активности лейкоцитов, при инфекционных заболеваниях, в том числе и вирусной этиологии, не уделено достаточного внимания выявлению состояния интралейкоцитарных вирулицидных компонентов клеток и показателей спонтанного НСТ-теста в динамике заболевания вирусными гепатитами с учетом этиологии, стадии, степени тяжести патологического процесса, характера сопутствующих заболеваний и осложнений, а также методов терапии.

Тем более нет изучения показателей функционально-метаболической активности лейкоцитов у больных вирусными гепатитами с помощью стимулированного специфическими антигенами гепатита В (австралийского, COR- и E-антигенами и антителами к ним), что может иметь определенное дифференциально-диагностическое значение между гепатитами различной этиологии.

Целью работы явилась клинико-патогенетическая оценка функционально-метаболической активности лейкоцитов крови в динамике у больных вирусным гепатитом В для разработки дополнительных критериев контроля за характером течения, прогнозирования исходов заболевания и методов лечения. Выявить наличие связи между цитохимическими компонентами и функционально-метаболической (фагоцитарной) функцией в динамике заболевания.

- Задачи исследования

1. У больных вирусным гепатитом"""В'изучить в нейтрофилыгых лейкоцитах динамику активности миелопероксидазы, кислой фосфа-тазы, цитохромоксидазы и содержание гликогена, а также катионного белка с целью выяснения их значения в патологических механизмах.

2. Выявить состояние внутриклеточных компонентов лейкоцитов в динамике заболевания у больных вирусным гепатитом А.

3. Изучить с помощью использованных цитохимических методов исследования нормальные показатели лизосомальных компонентов лейкоцитов у группы здоровых людей (контрольная группа).

4. Провести изучение фагоцитарной активности с использованием живой культуры золотистого стафилококка и показателей спонтанного и стимулированного с помощью специфических антигенов-маркеров вируса В НСТ-тсста у больных гепатитом В.

5. Дать сравнительную клинико-цитохимическую характеристику базисной терапии, применения реальдерона и аминофталшдрозида при лечении средне-тяжелых и тяжелых форм вирусного гепатита В.

6. Выявить сопряженность между цитохимическими показателями лейкоцитов и основными показателями лабораторного исследования крови (количество лейкоцитов, иалочкоядерный сдвиг, СОЭ).

Научная новизна. Комплексное исследование основных внутриклеточных компонентов вирулицидной системы лейкоцитов позволило установить, что изменение функционально-метаболической активности лейкоцитов у больных вирусными гепатитами А и В носит неспецифический и однонаправленный характер. В основе этих изменений лежат угнетение активности миелопероксидазы, цитохром-оксилазы, содержания катионного белка и гликогена в лейкоцитах. В то же время наблюдается возрастание активности кислой фосфатазы, показателей спонтанного и стимулированного специфическими антигенами вируса В НСТ-теста. При этом установлено, что изменение интралейкоцитар-ных компонентов зависело от вида, стадии, степени тяжести заболевания, характера сопутствующих заболеваний и проводимой терапии.

Новым в работе является установление роли и значения интралейко-цитарных компонентов в процессе фагоцитоза больных вирусным гепатитом В. У больных вирусным гепатитом впервые использована постановка стимулированного специфическими антигенами-маркерами вируса В НСТ-теста, имеющего большое значение для оценки функционально-метаболической активности лейкоцитов, следовательно, и показателей неспсцифической резистентности организма при этом заболевании.

Практическая значимость работы. Практическое значение работы состоит в том, что у больных вирусными гепатитами А и В показана возможность использования определения цитохимических интра-лейко-цитарных компонентов и показателей спонтанного и стимулированного специфическими антигенами НСТ-теста в качестве критерия неспецифической резистентности организма, а так же для оценки степени тяжести патологического процесса, характера осложнений, прогнозирования исходов болезни и излеченности заболевания.

Выявлены нормальные показатели активности миелопероксидазы, цитохромоксидазы, кислой фосфатазы, содержания катионного белка и гликогена в лейкоцитах у здоровых людей. Установлены активность и процент НСТ-положительных клеток при постановке спонтанного НСТ-теста. Полученные показатели нормы могут быть использованы в качестве исходных при проведении цитохимических исследований с помощью наших методик.

Внедрение в практику. Результаты исследований внедрены в клини-ко-лабораторную практику Кабардино-Балкарского республиканского центра инфекционных болезней и используются в учебном процессе кафедры инфекционных болезней, субординатуре, интернатуре и усовершенствовании врачей Кабардино-Балкарского Госуниверситета при прохождении тем:

"Вирусные гепатиты А, В", "Хронические гепатиты", "Циррозы печени".

б

Публикации. По основным положениям диссертационной работы опубликованы 11 работ.

Апробация диссертационного "материала. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на ежегодных итоговых конференциях сотрудников медицинского факультета КБГУ (Нальчик, 19941995), на заседании инфекционистов КБР (Нальчик, 1995), на выездной сессии Академии естественных наук России "Фундаментальные и прикладные вопросы естественных наук" (Махачкала, 1993), на второй Всероссийской научной конференции по программе "Университеты России", "Фундаментальные основы жизнедеятельности организма в норме и патологии"(Нальчик,1994), на ХН-ой Российской научной конференции "Факторы гуморального и клеточного иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях"(Челябинск, 1995), на юбилейной научной конференции молодых ученых "Достижения медицинской науки - практическому здравоохранению" (Нальчик, 1995).

Диссертационная работа апробирована на совместной конференции кафедры инфекционных болезней Кабардино-Балкарского Госуниверситета и Республиканского центра инфекционных болезней (1996).

Структура и объем диссертации. Текст диссертации изложен на 175 страницах в машинописи, содержит 6 глав, заключения, выводы и указатель литературы, содержащей 241 отечественных и 120 иностранных авторов. Иллюстрации представлены 51 таблицей, 22 рисунками 12 примерами из клинических наблюдений.

Материал и методы исследования

Для оценки содержания катионного белка, гликогена, активности миелопероксидазы, кислой фосфатазы, цитохромоксидазы, показателей НСТ-теста и фагоцитарной активности лейкоцитов нами проведено обследование 53 (39 женщин и 14 мужчин) практически здоровых людей в возрасте 18-65 лет. Эти лица предварительно прошли клинико-лабораторное обследование.

Под нашим наблюдением находилось 166 больных вирусным гепатитом В (42 женщины и 124 мужчины) и 44 больных вирусным гепатитом А (26 женщин и 18 мужчин) в возрасте от 15 до 70 лет. Диагностическим критерием вирусного гепатита В было нахождение в сыворотке крови больных специфических маркеров: австралийского антигена и антител к сердцевинному антигену. Через месяц после выписки этих больных в сыворотке крови обнаруживали антитела к НВе антигену, что также является диагностическим критерием. У больных вирусным гепатитом А в сыворотке крови были найдены антитела к антигену вируса А, относящиеся к иммуноглобулинам класса М, что является диагностическим критерием для постановки диагноза ВГА. Из 166 больных вирусным гепатитом В легкая форма наблюдалась у 33 (19,8%), средняя тежесть - у 93 (56%) и тяжелая форма - у 40 (24,2%) больных. Из 44 больных вирусным гепатитом А легкая форма заболевания наблюдалась у 22 (50%), среднетяжелая - у 17 (38,6%) больных и тяжелая - у 5 (11,4%) больных.

Сопутствующие заболевания отмечены у 29 больных вирусным гепа- титом В (15%): хронический холецистит наблюдался у 12 человек, хронический бронихит - у 9 больных и хронический пиелонефрит -у 8 больных. У наблюдаемых больных отмечались такие осложнения как прекома, кома.

Лечение больных вирусным гепатитом В зависело от тяжести болезни, степени интоксикации и наличия осложнений. Основными звеньями применяемой базис-терапии были: щадящий режим, рациональная диета. Лекарственная терапия включала в себя: инфузионную терапию дезинтоксикационными препаратами, витаминые препараты. При затянувшейся реконвалесценции болные вирусным гепатитом получали гепатопротекторы; для улучшения обменных процессов в ткани печени наблюдавшиеся получали препараты типа рибоксина, цито-хрома С. Были выделены 2 группы больных, которые помимо базис-терапии получали аминофталгидрозид внутримышечно (24

больных) и препарат рекобинантного человеческого «¿-интерферона (реальдерона) внутривенно капельно (23 больных).

Для решения поставленных в работе задач, наряду с общепринятыми клипико-лабораторпыми методами обследования, нроведен ряд современных цитохимических и иммуно-лопгчсских исследований. Для цитохимического исследо-вания содержания катионного белка в лейкоцитах применяли метод М.Г.Шубича (1974) в прописи Б.С.Нагоева (1983) с использованием красителя бромфенолового синего при рН 8,2. Выявление гликогена в лейкоцитах проводили по

A.А.Шабадашу (1947) с применением Шифф-реактива. Исследование миелопероксидазы в лейкоцитах осуществляли по методу Sato (1925). Выявление кислой фосфатазы лейкоцитов проводили с помощью реакции азосочетания по Goldberg и Barka (1962) в модификации

B.И.Дудецкого (1970). Выявление цитохромоксидазы проводят с помощью НАДИ-реакции в прописи М.Берстона (1965). Для количественного определения содержания цитохимических компонентов и активности ферментов в лейкоцитах использован метод Kaplow (1955). Для изучения фагоцитарной функции нейтро-фильных лейкоцитов нами использован метод В.М.Бермана и Е.М.Славской (1958) в модификации А.Г.Алексеевой и А.Д.Волковой. В качестве тест-микроба использована живая культура Staphylococcus aureus. При изучении поглотительной способности лейкоцитов определялись следующие показатели: 1)фагоцитарная активность (ФА) лейкоцитов (индекс Гамбургера), 2) фагоцитарное число (ФЧ) и 3) фагоцитарный индекс (индекс Райта-ФИ). Для оценки переваривающей способности лейкоцитов вычисляли: 1)процент завершенности фагоцитоза (ПЗФ) и 2)индекс переваривания (ИП).

Для изучения функциональной способности исследовались тесты "спонтанного" и "стимулированного" поглощения и восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) нейтрофильными гранулоцитами иереферической крови. Спонтанный НСТ-тест определяли по методике Stuart с соавт. (1975) в модификации Б.С.Нагоева (1983). Тест

стимулированного поглощения и восстановления НСТ, основанный на воздействии особого агента (антигена) на нейтрофильные гранулоциты крови до их контакта с нитросиним тетразолием, дает информацию о возможностях увеличения функциональной активности лейкоцитов и, следовательно, диагностирует дефект системы фагоцитоза. Стимуляция НСТ-теста проводилась по методике В.И.Покровского и Б.С.Нагоева (1983). В качестве стимуляторов использовались специфические антигены вируса гепатита В - австралийский и сердцевинный.

Математическая обработка цифрового материала произведена на ЭВМ ЕС-1020 с использованием основных законов и положений статистики (Д.Сепетлиев, 1968; П.Ф.Роцкий, 1973; Ю.Ф.Кабатов, М.Б.Славин, 1976) в вычислительном центре Кабардино-Балкарского госуниверситета.

Цитохимические показатели и функциональная активность лейкоцитов у здоровых людей

Для цитохимической оценки изменений в содержании КБ, ГЛ, ферментной и фагоцитарной активности клеток, а также показателей НСТ-теста нейтрофилов при патологических состояниях необходима стандартизация физиологических показателей указанных компонентов в лейкоцитах у здоровых людей. Она сводится к нахождению с помощью используемых методик пределов колебаний указанных показателей, т.е. к установлению "собственной нормы", как это принято в цитохимии (М.Г.Шубич, Б.С.Нагоев, 1980).

При изучении содержания отдельных цитохимических компонентов в лейкоцитах у здоровых людей и в патологии нами соблюдались стандартные условия обработки препаратов и единые критерии визуальной оценки для выведения качественных и количественных показателей учета, что в целом могло отражаться на результатах исследования.

Полученные результаты позволили подойти к решению вопроса о границах нормы в цитохимических показателях содержания катионного

белка, гликогена, активности миелопероксидазы, кислой фосфатазы, цитохромоксидазы иейтрофильных лейкоцитов,выраженные в условных едининах(таблЛ).

Таблица 1

Цитохимические показатели и функциональная активность лейкоцитов у

Исследуемые п Xmin-Xmax J.S T+2S

показатели

Гликоген 51 144-216 1S0+2.3 16.0 148-212

Катионный белок 52 64-150 125±2.7 19.1 87-163

Кисшая фосфатаза 30 34-102 62i3.0 16.6 28-95

Мислопероксццаза Цитохромоксндаза 50 169-236 204+2.1 'ГО........... 174-233

47 164-258 215+3.0 21.1 172-257

HCT-тест 32 3-20 12+0.8 4.1 3-20

спонтанный

HCT-тест, стимулир. HBsAg 17 12-46 32±2.3 9.4 13-50

НСТ-тест, стимулир. HBcorAg 14 9-33 27±1.9 7.Ö 13-41

Из законов статистики известно, что граничные значениязоны являются пределами "суженной" нормы изучаемого признака. Так, по теоретическим расчетам зона Х±т должна охватывать 68,8% всех наблюдений, а зона Х±25 включает в себя 94,4% наблюдений. Исходя из 95%-ного уровня значимости, достаточного для медико-биологических исследований, следует считать, что двухеигмальная зона охватывает всю широту изучаемого признака и поэтому с полным основанием может быть принята за норму. В наших исследованиях при цитохимическом определении показатель активности катионного белка превышал Х±28 у 4,2%. Следовательно, нормальные величины колебаний уровня катионного белка в лейкоцитах при цитохимическом исследовании лежат в интервале 72-168 усл.сд. Аналогичным образом вычислены и показаны стандартные величины колебаний и других цитохимических показателей (табл.1).

Проведено изучение показателей спонтанного и стимулированного НСТ-теста у здоровых людей. При этом установлено, что активность спонтанного НСТ-теста составляет 12+0,8 ед. В то же время, при

стимуляции нейтрофильных гранулоцитов происходит значительное возрастание уровня тетразолиевой активности клеток. Более высокие показатели НСТ-теста отмечены при стимуляции австралийским антигеном (32±2,3 ед.), несколько ниже показатели при стимуляции сердцевинным антигеном (27+1,9ед.).

У здоровых людей изучена фагоцитарная функция лейкоцитов с определением переваривающей и поглотительной способностью нейтрофилов (Б.С.Нагоев, М.Ю.Канукоева, 1990). При этом в качестве объекта фагоцитоза использована живая культура золотистого стафилококка.

Большой объем исследований, апробированность, специфичность и воспроизводимость примененных методик позволили использовать полученные результаты как критерий нормы при проведении клинических исследований.

Цитохимические показатели и фукциоиальная активность лейкоцитов у больных вирусным гепатитом В

Цитохимическое изучение содержания гликогена, лизосомального катионного белка, активности миелопероксидазы, кислой фосфатазы, цитохромоксидазы лейкоцитов в динамике заболевания вирусным гепатитом В выявило весьма важные закономерности во внутриклеточном обмене нейтрофильных гранулоцитов. Так, в периоде разгара заболевания отмечено значительное угнетение содержания гликогена, катионного белка, активности миелопероксидазы и цитохромоксидазы клеток (табл.2). В то же время, обнаружено достоверное возрастание активности кислой фосфатазы в лейкоцитах с максимальным значением на высоте болезни.

В периоде угасания клинических симптомов, параллельно улучшению общего состояния больных, уменьшению интоксикации и спада

желтухи, происходят закономерные и разнонаправленные сдвиги в восстановлении уровня интралейкоцитарных компонентов (табл.2). Так, происходит некоторое повышение содержания гликогена и катионного белка, заметное повышение активности миелопероксидазы и цитохром-оксидазы, а также заметное снижение активности кислой фосфатазы. В периоде ранней реконвалесцеищит больных происходит значительное повышение уровня гликогена, катионного белка, активности миелопероксидазы и цитохромоксидазы, а также снижение активности кислой фосфатазы, однако приведенные значения отличаются от уровня у здоровых лиц. Через месяц после выписки из стационара практически у всех обследованных больных произошла нормализация цитохимических показателей (табл.2).

Следует отметить, что у больных вирусным гепатитом В содержание гликогена, катионного белка, активности миелоиероксидазы, кислой фосфатазы и цитохромоксидазы в лейкоцитах зависели от степени тяжести патологического процесса. Чем тяжелее протекало заболевание, тем сильнее и длительнее была выражена степень угнетения или возрастания исследуемых интралейкоцитарных компонентов в динамике вирусного гепатита В. Кроме того, изменения цитохимических компонентов лейкоцитов зависели и от вида гепатита. При вирусном гепатите В определялись достоверно более выраженные изменения исследуемых показателей, чем при вирусном гепатите А. На изменение содержания гликогена, катионного белка, активности миелопероксидазы, кислой фосфатазы и цитохромоксидазы лейкоцитов оказывало влияние проведенное лечение. Было показано, что у больных, которые, наряду с комплексной терапией, получали аминофгалгидрозид, происходило восстановление цитохимических показателей до нормальных уровней уже в периоде ранней реконвалесценции, по сравнению с больными, получавшими только базис-терапию.

Таблица 2

Цитохимические показатели лейкоцитов у больных вирусным гепатитом В(уел. ед.)

| Исследуемый показатель Период болезни ; п

I 1 166 70±0.9 <0.001 ; |

I Гликоген II ; 160 89±1.1 <0.001 ; <0.001

III ] 149 138+1.3 <0.001 { <0.001

IV ! 87 175+2.1 >0.05 \ <0.001

I ; 166 Зб±0.8 <0.001 ;

\ Катнонный II ; 154 62±1.1 <0.001 ; <0.001

1 белок III | 149 86*0.9 <0.001 ) <0.001

IV 1 97 118+2.0 <■05 ; <0.001

I )' 166 93±1.1 <0.001 |

[ Миелопероксидаза II | 162 12Ш.5 <0.001 ; <0.001

III 1 160 ! 14б±1.3 <0.001 ; <0.001

IV ] 97 199±1.6 >0.05 ! <д.оо1

I 5 60 1 9б±1.5 <0.001 ■;

! Кислая фосфатазаза ! II ! 56 84±1,4 <0.001 ; <0.001

| III { 50 74±1.0 <0.001 ) <0.001

IV I 42 66±1.2 >0.05 ; <0.05

! I { 54 15911.1 <0.001

! Цитохромоксидаза II 51 171+1.7 <0.001 1 <0.001

III | 49 19Ш.6 <0.001 1 <0.001

1 IV 1 29 213±2.7 >0.05 1 <0.001

Примечание здесь и далее в таблице 3: периоды болезни соответствуют : I - разгару болезни; И-спаду желтухи; III- ранней реконвалесценции; IV- через один месяц пооге выписки из стационара. Р - достоверность рамичия по отношению к здоровым людям Р1- достоверность различия к предыдущему периоду.

На степень и глубину цитохимических показателей оказывают существенное влияние имеющиеся хронические сопутствующие заболевания, при которых отмечено достоверно более выраженное угнетение катионного белка.

Глубокие качественные и количественные сдвиги лейкоцитарных ферментов и содержания гликогена и катионного белка наблюдались

при присоединении грозных осложнений: нрекомы и комы. Так, у больного с тяжелым течением вирусного гепатита В, осложнившимся острой дистрофией печени за 3 дня до смерти наблюдалось глубокое угнетение всех цитохимических компонентов (КБ-17ед., ГЛ-18 ед., МГТ-18 ед.). В связи с приведенными показателями определнный интерес представляют данные Б.С.Нагоева (1986), который при тяжелых и грозных осложнениях брюшного тифа и менингококкового менингита выявил глубокое угнетение уровня катионного белка и активности миелопсроксидазы (до 20% и ниже), низкие уровни спонтанного и стимули-рованного НСТ-теста и расценил это состояние как "паралич микробицидной системы".

Показатели спонтанного и стимулированного НСТ-теста.

У больных вирусным гепатитом В отмечено значительное возрастание показателей спонтанного НСТ-теста в периодах разгара заболевания, спада желтухи и ранней реконвалесценции (табл.3). Нормализация показателей НСТ-теста наступала лишь в периоде поздней реконвалесценции, т.е. через один месяц после выписки из стационара.

Низкие уровни спонтанного НСТ-теста наблюдались при тяжелых и осложенных формах вирусного гепатита В. Кроме того, показатели спонтанного НСТ-теста зависят от метода лечения. У больных, получавших в комплексной терапии аминофталгидрозид, нормализация показателей НСТ-теста происходила уже в периоде ранней реконвалесценции, по сравнению с больными, получавшими только базис-терапию.

Проведенные исследования по изучению стимулированного НСТ-теста лейкоцитов с применением специфических антигенов вируса гепатита В: австралийского и сердцевинного в динамике заболевания вирусным гепатитом В выявили резкое возрастание тетразолиевой активности нейтрофилов, наиболее выраженное в периоде ранней реконвалесценции (табл.3).

Данная динамика изменения показателей стимулированного НСТ-теста говорит о значительных резервных возможностях нейтрофильных гранулоцитов, возрастающих по мере выздоровления больных. Обнаруженное в ряде случаев снижение стимулированного специфическими антигенами вируса гепатита В НСТ-теста в периоде ранней рекон-валесценции при тяжелом, затяжном течении заболевания свидетельствует, по все вероятности, об истощении резервных возможностей нейтрофильных гранулоцитов в процессе заболевания вирусным гепатитом В.

Таблица 3

Показатели спонтанного и стимулированного МВх/^ и НВсогНСТ-теста у больных

вирусным гепатитом В, а также у здоровых людей(усл. ед.)

нет- тест Период болезни п | Хтш-Хтах Х±т Р Р1

3 30 ! 3-20 12+0.8 ;

I 166 | 15-119 58±1.5 <0.001

спонтанный II 161 | 18-101 47±1.2 | <0.001 <0.001

III 156 ; 9-92 4411.2 <0.001 >0.05

ГУ 87 ; 4-49 135.9 >0.05 <0.001

3 17 | 1Й6 32±2.3

стимул л ров. I 24 ; й-т 10817,7 <0.001 ;

НВяАя II Т1 132-т 11917,5 <0.001 >0.05

III 19 | 46-193 14819,3 <о.ош <о.от

3 14 1 9-33 2711.9 |

стимулиров. I 24 1 25-152 100±4,3 <0.001

НВсог^ II 20 ] 37-132 _..}........................ 106+4,4 <0.«Л >0.05

III 18 | 36-142 118+4,7 <0.001 <0.001

Примечание:

3 - здоровые лица при стимуляции соответствующими препаратами.

Проведение стимулированного австралийским антигеном НСТ-теста у больных вирусным гепатитом А показала, что показатели стимулированного НСТ-теста достоверно выше, чем таковые у больных вирусным гепатитом А, которым проводился спонтанный НСТ-тест, но

значительно ниже, чем у больных вирусным гепатитом В, которым проводился стимулированный НСТ-тест. - —

Стимулированный НСТ-тест характеризует функцио-нальный резерв нейтрофилов, вскрывая потенциальную возможность лейкоцитов ответить респираторным взрывом на адекватное раздражение. Отсюда стимулированный НСТ-тест можно рассматривать как биохимический критерий готовности нейтрофильных гранулоцптов к завершенному фагоцитозу (В.И.Покровский, Б.С.Нагоев, 1983; Ноиёе с соавт., 1986).

О соотношении цитохимических и гематологических показателей лейкоцитов при вирусном гепатите В.

Для выяснения значения и информативности исследуемых цитохимических компонентов лейкоцитов при вирусном гепатите В по сравнению с общепринятыми гематологическими показателями

(лейкоцитоз, палочкоядерный сдвиг, ускорение СОЭ) нами с помощью статистического метода определения сопряженности (П.Ф.Рокицкий, 1973; В.Ю.Урбах, 1975; И.Т.Шевченко с соавт., 1984) не установлено соответствие закономерно!! сопряженности в развитии лейкоцитоза, нейтрофильного сдвига, ускорения СОЭ и изменения цитохимических показателей микробицидных компонентов (гликогена, катиониого белка и активности миелопероксидазы) и активности НСТ-теста лейкоцитов (табл.4). Следовательно, сравниваемые показатели не дублируют друг друга.

Таблица 4

Сопряженность цитохимических и гематологических

показателей у больных вирусным гепатитом В

Цитохимические П л с коцитсч | шиючкояденый сдвиг соз ;

пика/атсли 60 ■/.- р | X2 I' У? Р

Катиошгьш белок 60 1,552 ; >0.05 | 1.447 >0.05 0.869 | >0.05 |

Гликоген 60 0,041 | >0.05 | 0.412 ! >0.05 0.869 | >0.05 |

Мислопероксидаза 60 0,010 | >0.05 ! 0.041 | >0.05 0.323 | >0.05 ;

НСТ-тест 60 0,155 ! >0.05 ! 0.135 | >0.05 0.077 I >0.05 |

Представленный материал свидетельствует о том, что цитохимические исследования внутриклеточных компонентов нейтро фильных лейкоцитов и исследование активности НСТ-теста дают обширную дополнительную информацию о развитии патологического процесса при вирусном гепатите В. Аналогичные данные показаны в работах М.Г.Шубича, Б.С.Нагоева (1980), М.Ю.Канукоевой (1994) при других заболеваниях и патологических состояниях.

Фагоцитарная функция нейтрофнлов н значение некоторых компонентов микробицидной системы лейкоцитов в процессе фагоцитоза Фагоцитарная функция нейтрофильных лейкоцитов изучена в динамике заболевания у 34 больных вирусным гепатитом В. При исследовании фагоцитарной функции нейтрофильных лейкоцитов у больных ВГВ обнаружено заметное снижение как поглотительной, так и переваривающей способности лейкоцитов в периоде разгара заболевания. В периоде ранней реконвалссценции показатели фагоцитарной функции нейтрофилов оставались достоверно сниженными, не отличаясь от показателей в периоде разгара. Исключение составил процент завершенности фагоцитоза, который достоверно повысился с возвращением к норме. Закономерные изменения фагоцитарной функции лейкоцитов у больных вирусным гепатитом В зависели от стадии, степени тяжести патологического процесса, вида гепатита и метода лечения. Проведенные исследования и литературные данные показали, что изучение фагоцитарной функции лейкоцитов в комплексе с цитохимическими показателями фагоцитирующих клеток у больных вирусным гепатитом В позволяют получить более полное представление о патологических механизмах данного заболевания.

На основании статистических и цитохимических сопоставлений приводим изменения важнейших компонентов микробицидной системы лейкоцитов в процессе фагоцитоза у здоровых людей и больных вирусным гепатитом В.

В динамике вирусного гепатита В одновременно изучались изменения цитохимических показателей в начальной и завершающей стации фагоцитоза. В качестве тест-микроба использован золотистый стафилококк. Изучены показатели фагоцитарной фукшш лейкоцитов: фагоцитарная активность, фагоцитарное число, фагоцитарный индекс, показатель завершенности фагоцитоза и индекс переваривания.

Гликоген. При изучении содержания гликогена в лейкоцитах здоровых людей в процессе фагоцитоза золотистого стафилококка выявлено достоверное снижение полисахарида в клетке как в начальной, так и в завершающей стадии фагоцитоза. При этом обнаружена высокая коррелятивная связь между уровнем содержания гликогена в клетке, поглотительной и переваривающей способностью лейкоцитов (-0,67±0,1). В процессе фагоцитоза у больных вирусным гепатитом В отмечено достоверное угнетение интра-лейкоцитарного полисахарида как в периоде разгара заболевания, так и в периоде ранней рскон-валссцснции. При этом на высоте болезни выявлена коррелятивная связь (0,84+0,2) между уровнем внутриклеточного гликогена с одной стороны. В то же время, в периоде ранней реконвалесценции между сравниваемыми показателями обнаружена слабая коррелятивная связь (0,38+0,1). Такое снижение внутриклеточного полисахарида в процессе фагоцитоза указывает, по-видимому, на расход этого компонента в лейкоцитарных фа гоцитах.

Катионный белок. При вирусном гепатите В на фоне сниженных значений катионного белка лейкоцитов обнаружено угнетение основных параметров фагоцитарной функции лейкоцитов. В периоде ранней реконвалесценции у больных вирусным гепатитом В происходило повышение уровня катионного белка при сохраняющихся низких показателях поглотительной и переваривающей функции.

Сравнение уровня содержания катионного белка лейкоцитов с поглотительной и переваривающей функцией лейкоцитов показало достаточно высокую коррелятивную связь в периоде разгара

заболевания (0,90±0,1) и умеренную в периоде ранней реконва-лесценции (0,50±0,1) между сравниваемыми величинами.

Таким образом, при изучении содержания катионного белка лейкоцитов в процессе фагоцитоза обнаружено закономерное изменение внутриклеточного белка, зависящее от степени тяжести заболевания и стадии фагоцитоза.

Миелопероксидаза. Установлено, что у здоровых людей в процессе фагоцитоза с использованием в качестве объекта фагоцитоза золотистого стафилококка в начальной фазе имело место достоверное снижение активности фермента, а в завершающей фазе - существенное повышение активности. На причинную связь между способностью к поглощению и перевариванию и изменению активности миело-пероксидазы нейтрофилов указывал достаточно высокий коэффициент регрессии (в у/х=0,73).

У больных вирусным гепатитом В обнаружено снижение активности миелопероксидазы нейтрофильных лейкоцитов, наиболее выраженное в периоде разгара заболевания. Сравнение активности миелопероксидазы лейкоцитов с поглотительной и переваривающей функцией лейкоцитов выявило хорошую корреляцию в периоде разгара заболевания (0,84+0,2) и слабую в периоде рсконвалесценции (0,60+0,1). Полученные данные свидетельствуют, что в осуществлении защитной функции нейтрофильных лейкоцитов миелопероксидазе принадлежит важная роль. Изменение активности миелопероксидазы может стать причиной снижения резистентных возможностей организма в борьбе с возбудителями инфекционных заболеваний, как на это указывали и другие авторы (Б.С.Нагоев, 1986; О.И.Пикуза, А.Н.Маянский, 1993).

Кислая фосфатаза. У здоровых людей процесс поглощения микробных тел не приводил к существенным изменениям активности кислой фосфатазы в фагоцитирующих клетках, хотя отмечена тенденция к уменьшению ферментативной активности лейкоцитов. В ходе переваривания, т.е. в завершающей стадии фагоцитоза происходило существенное снижение активности фермента. Статистически доказано

наличие умеренной коррелятивной связи между поглотительной способностью лейкоцитов и их ферментативной активностью (0,52+0,2). Достоверную коррелятивную связь активности кислой фосфатазы лейкоцитов обнаруживали также в завершающей стадии фагоцитоза.

Цитохимические сопоставления изменения активности кислой фосфатазы лейкоцитов и ее фагоцитарной функции при вирусном гепатите В выявили, что до фагоцитоза имеет место обычно умеренное повышение активности кислой фосфатазы. В процессе фагоцитоза при этом заболевании уровень активности кислой фосфатазы снижался до уровня здоровых, а в периоде реконвалесценции - еще ниже.

Высказано предположение о дегрануляции фосфатазо-содержащих гранул в фагосоме, что расходуется на деградацию содержимого фаголизосомы (Ме1Ьу, М^сНуесЙ, 1981; Ро^гоп, 1983; М.Г.Шубич, Б.С.Нагоев, 1980). Наши данные подтверждают результаты ОаЫс! и ВаЫог (1981) о высокой корреляции между показателями фосфатаз и завершенностью фагоцитоза и при других заболеваниях. В нашем случае - 0,70+0,1. Эти данные позволяют считать, что активация кислой фосфатазы лейкоцитов у больных вирусным гепатитом В, по-видимому, имеет биологическую целесообразность и является важным фактором усиления фагоцитарной функции на ранних этапах заболевания. Множественные коррелятивные связи. В связи с тем, что при инфекционных заболеваниях в процессе возможного фагоцитоза в организме больного интралейкоцитарные цитохимические компоненты действуют в совокупности, мы попытались изучить их совокупное влияние на фагоцитарную активность лейкоцитов. С этой целью расчитывали коэффициент множественной и парциальной корреляции (А.Д.Сепетлиев, 1968; А.И.Венчиков, В.А.Венчиков, 1974), позволяющий определить "тесноту" связи между изучаемыми признаками в целом и при элиминации на эту связь одного из многих коррелирующих признаков, в данном случае, интралейкоцитарных компонентов. В результате проведенных статистических сопоставлений установлены множественные коррелятивные связи между цитохимическими компонентами

лейкоцитов с одной стороны и поглотительной и переваривающей функцией лейкоцитов с другой стороны, как у здоровых людей, так и у больных вирусным гепатитом В.

При определении множественных коррелятивных связей между внутриклеточными компонентами микробиццдной системы лейкоцитов и ее фагоцитарной функцией у больных вирусным гепатитом В как в периоде разгара, так и в периоде ранней реконвалесценции обнаружены высокая коррелятивная связь цитохимических показателей с фагоцитарным индексом и индексом переваривания. Вместе с тем, необходимо отметить, что при определении множественных коррелятивных связей у больных вирусным гепатитом В обнаружена слабая коррелятивная зависимость завершенности фагоцитоза и интаралей-коцитарных компонентов (табл.5), что свидетельствует об отсутствии или ослаблении завершенности фагоцитоза при вирусном гепатите В.

При исключении из совокупности связанных между собой интралей-коцитарных компонентов: катионного белка, или кислой фосфатазы, заметно уменьшается степень коррелятивной зависимости между переваривающей функцией лейкоцитов и цитохимическими показателями.

Можно полагать,что изменение активности ферментов и содержания белков и углеводов в клетке происходит в результате дестабилизирующего действия вируса гепатита В и продуктов его жизнедеятельности на мембраны лейкоцитов. Снижение микробицидных (т.е. вирулицидных) компонентов лейкоцитов миелопероксидазы и катионного белка, по-видимому, объясняется расходованием их в процессе дегрануляции лизосомальных компонентов при контакте с вирусом или в процессе фагоцитоза и переваривания поглощенных вирусов.

Таким образом, проведенные математические сопоставле-ния цитохимических показателей лейкоцитов и параметров фагоцитарной способности свидетельствуют о важнейшей роли и значении интралей-коцитарной микробицидной системы в осуществлении лейкоцитами защитной функции организма.

________________________________Таблица 5

Множественные коррелятивные связи между цитохимическими г.ока-зотелями и фагоцитарной функцией лейкоцитов у здоровых людей и больных ВГВ

Сравниваемые Здоровые Вирусный гепатит В: периоды I

показатели разгар реконвалесценции

X | У А В а I? а ; В

ФА 1 ЦП 1 0.89±0.1 0.92±0.1 0.36+0.08 0.90+0.1 0.35+0.009 | 0.89+0.1

ФЧ ; ЦП ; о.91±о.1 1.0010.1 0.66±0.1 0.49±0.09 0.78+0.1 0.54+0.1

ФИ I ЦП 1 1.00 0.1 0.93±0.1 1.00+0.08 0.88+0.1 1.00+0.1 0.35+0.08

ПЗФ | ЦП \ 0.64+0.2 0.50+0.08 \ 0.32+0.07 0.35+0.1 0.34+0.08 0.33+0.08

ип 1 ЦП ) 1.00+0.1 0.92+0.1 1 1.00+0.1 0.87+0.1 0.94+0.01 0.34+0.08

Примечание х - показатели фагоцитарной функции лейкоцитов (ФА,ФЧ, ФИ,ПЗФ,ИП);у- комплекс цитохимических показателейГЛ, КБ,МП, КФ); А -

начальная стадия фагоцитоза; Б - завершающая стадия фог.оцитоза.

Выводы:

1. У больных вирусным гепатитом В изменение функционально-метаболической активности лейкоцитов (важнейшие компоненты интралейкоцитарной вирулипидной системы: катионный белок, миелоиероксидаза, фагоцитарная функция, показатели спонтанного и стимулированного НСТ-теста) носит неспецифический характер, являясь объективным критерием состояния резистентности организма.

2. В основе функционально-метаболической (фагоцитарной) активности лейкоцитов при вирусном гепатите В лежат изменения активности лизосомальных ферментов, энергетического баланса клеток и содержание катиониого белка. По мере выздоровления отклонешш функционально-метаболической активности лейкоцитов восстанавливаются, за исключением затяжных и осложненных форм заболевания.

3. Степень и длительность изменения функционально-метаболической активности лейкоцитов у больных вирусными гепатитами зависят от вида, стадии, степени тяжести заболевания. Они более

выражены при тяжелых и осложненных формах вирусного гепатита и его неблагоприятном исходе.

Резко выраженное и длительное нарушение функционально-метаболической активности лейкоцитов являлось неблагоприятным прогностическим признаком в отношении развития рецидивов, обострений и формирования затяжного течения вирусного гепатита В.

4. Проведение спонтанного и стимулированного маркерами вируса В НСТ-теста у больных вирусными гепатитами дает информацию о возможностях увеличения функциональной активности лейкоцитов, и, следовательно, диагностирует дефекты системы фагоцитоза.

При крайне тяжелых формах гепатита, осложненных печеночной комой, уровень НСТ-теста резко снижается, что свидетельствует о наличии приобретенного дефекта по типу угнетения интралейкоцитарной микробицидной системы нейтрофильных гранулоцитов и указывает на прогностическое неблагополучие.

Присоединение к вирусному гепатиту осложнений или сопутствующих заболеваний бактериальной этиологии приводит к возрастанию уровня спонтанного НСТ-теста, как следствие антигенной стимуляции.

5. Сопоставление цитохимических показателей нейтрофильных гранулоцитов с гематологическими данными (количество лейкоцитов, палочкоядерный сдвиг нейтрофилов, СОЭ) не выявили закономерной сопряженности между сравниваемыми величинами, следовательно, исследования внутриклеточных компонентов лейкоцитов дает обширную дополнительную информацию о развитии патологического процесса при вирусном гепатите В.

6. Применение аминофталгйдрозида в комплексном лечении больных вирусным гепатитом В со среднетяжелой и тяжелой формами заболевания приводило к более выраженному клиническому эффекту, выражающемуся в уменьшении длительности интоксикации, желтуш-ности и стационарного лечения, а также в более быстрой нормализации биохимических, иммунологических и цитохимических показателей

крови, что указывает па целесообразность- использования аминоф-талгидрозида в комплексном лечении больных вирусных гепатитом В.

7. Цитохимические исследования интралейкоцитарных компонентов в процессе фагоцитоза у больных вирусным гепатитом В выявили, что нарушения поглотительной способности нейтрофилов коррелируют с содержанием в них катиониого белка, гликогена и активности миелопероксидазы, а переваривающей функции нейтрофилов с содерлсанием катионного белка, активность миелопероксидазы л кислой фосфатазы.

Список работ, опубликованных по теме диссертации Статьи 1 и 2-х авторов

1. Иванова М.Р. К дифференциальной диагностике вирусного гепатита и желтух различной этиологии. - В сб.: Актуальные вопросы инфекционной патологии, КБГУ, Нальчик, 1993, с.88-91.

2. Иванова М.Р., Борисова Н.В. К дифференциальной диагностике вирусного гепатита и желтух различной этиологии - В сб.: Вопросы теоретической 11 клинической медицины. ■ Матер, юбилейной конф., посвященной 25-летию мед. факультета. Нальчик, 1993, с.47.

3. Иванова М.Р. К диагностике и дифференциальной диагностике механических желтух на почве кадькулезного холецистита - В сб.: Патология женщин и здоровье детей, КБГУ, Нальчик, 1993, с. 115-118.

4. Иванова М.Р. Показатели спонтанного НСТ-теста нейтрофильных лейкоцитов у больных вирусными гепатитами А и В - Вестник Кабардино-Балкарского Государственного Университета. Серия медицинские науки, Выпуск 1, Нальчик, 1994, с 55-57.

5. Иванова М.Р. I (Цитохимический профиль нейтрофильных гранулоци-тов у больных вирусным гепатитом В - В сб.: Фундаментальные основы жизнедеятельности организма в норме и патологии. Матер. 2-й Всерос. науч. конф. по программе "Университеты России", раздел "Медицина", Нальчик, 1994, с.62-66.

6. Иванова М.Р. Функциональная активность лейкоцитов и уровень иммуноглобулинов у больных вирусным гепатитом В - В сб.: Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях. Тез. докладов XII Российской науч. конф., Челябинск, 1995, с.48.

7. Иванова М.Р. Цитохимия гликогена лейкоцитов при вирусном гепатите В - В сб.: Достижения медицинской науки - практическому здравоохранению. Матер, конф.молодых ученых, посвященной 30-летию мед. факультета . Нальчик, 1995, с.32-33.

Статьи 3-х авторов

8. Иванова М.Р., Нагоев B.C., Гржибовская JI.H. Изменение содержания катионного белка и активности миелолероксидазы у больных вирусным гепатитом В - В сб.: Фундаментальные и прикладные вопросы естественных наук (региональные проблемы). Матер, сессии АЕН, том 1, Махачкала, 1994, с.70-72.

9. Иванова М.Р., Кимова И.А., Ташева Д.М. Эффективность применения аминофталгидрозида и реальдерона в комплексной терапии вирусного гепатита В - В сб.: Достижения медицинской науки - практическому здравоохранению. Матер, конф. молодых ученых, посвященной 30-летию мед. факультета. Нальчик, 1995, с. 33-35.

Статьи 4-х авторов

10. Иванов А.Б., Иванова М.Р., Моржохова С.С., Оразаев Н.Г. Цитохимическое изучение функциональной активности лейкоцитов человека и животных в норме - Вестник Кабардино-Балкарского Государственного Университета. Серия медицинские науки, Выпуск 1, Нальчик, 1994, с.15-19.

Статьи более 4-х авторов

11. Нагоев B.C., Абазова И.А., Иванова М.Р., Бакова М.А. К вопросу клинико-лабораторной диагностики вирусного гепатита В - В сб.: Использование горного климата с лечебной и профилактической целью, Нальчик, 1995, с.107-112.

12. Нагоев Б.С., Абидов М.Т., Иванова М.Р., Нагоева И.Х., Турьянов М.Х., Хачетлова Р.К., Шаов К'.Д. Эффективность реаферона (реальдерона) в комплексной терапии вирусного гепатита В - В сб. науч. трудов, посвящ. 60-летию кафедры инфекционных болезней с эпидемиологией Дагестанской Государственной Медицинской Академии, Махачкала, 1996, с.120-123.