Автореферат и диссертация по медицине (14.00.13) на тему:Система естественной цитотоксичности и интерферона у больных рассеянным склерозом

¿£0 0 3 98 £ -

ч! Министерство здравоохранения Российской Федерации * ————.

Российский государственный медицинский университет

На правах рукописи

ЛАТЫШЕВА Ольга Леонардовна

УДК 616.832.004.2—092 : 612.017.1—07

СИСТЕМА ЕСТЕСТВЕННОЙ ЦЙТОТОКСИЧНОСТИ Н ИНТЕРФЕРОНА У БОЛЬНЫХ РАССЕЯННЫМ СКЛЕРОЗОМ

(Клинико-иммунологическое исследование) Специальность 14.00.13— Нервные болезни

.Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва 1992

Работа выполнена на кафедре неврологии и нейрохирургии № 1 лечебного факультета Российского государственного медицинского университета.

Научный руководитель \

академик АМ'Н России Е. И. Гусев.

Научный консультант

старший научный сотрудник, канди!дат»медйцинских наук С. Б. Чекнев.

Официальные оппоненты:

- доктор медицинских наук, профессор Н. Н. Яхно,

член-корреспондент АМН России, профессор И. В. Ганнушкина.

¡Ведущее учреждение— Московский медицинский стоматологический институт им. Н. А. Семашко.

Защита диссертации состоится « . . . » . . . 1992 г.

в '. . . час. , на заседании специализированного совета Д-084-14-03 при Российском государственном медицинском университете по адресу: 117513, Москва, ул. Островитянова, д. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в .библиотеке .института.

Автореферат разослан «.-..» . . •. . . . . 1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета

доктор медицинских наук, профессор П. X. Джанашия.

V-'V i

• :: . I 2

Отдал Актуальность.

склероз (PC) - одно из нмболее распространенных органическ-х заболеваний нервной системы, характеризующееся диссе-минированным поражением структур белого вещества головного и спинного мозга. Широкое распространение и неуклонный рост заболеваемости. быстрая инвалидизация, недостаточная изученность этиологии и патогенеза, отсутствие эффективных методов лечения, способных прервать или стабилизировать теченче патологического процесса, обусловливают медицинскую и социальную значимость проблемы (Вейн A.M. и соавт., 1983; Верещагин Ч.В. и с авт., 1983; Гуггв л.И. и соавт., 1983, 1990; Завалишин И.А., 1990; Ивакоков А.Н., 19~3; Хондкариан O.A. и соавт., 1982, 1987; " ntet J. et Igofca Д., ШВ '

Ku, tzke IS^mo.j McFarfcnd M.F. et Sayettq (?.B.; W66).

В настоящее время наиболее распространенной является вирусная теория возникновения заболевания в генетически предрасположенном организме с последующей аутоиммунной атакой на антигены миелина (Вейн А.И., Смирнов D.K., 298С; Завалишин И.А., 1982, 1990; Хондкариан O.A. и соавт., 1983; Anrecht Р. et ai, №Ъ; Goswänei А.«., -<9ö7 j f?cder Аi985;i?em^otdA.((№). Наличие при PC выраженного имму-норегулйторного дисбаланса (Ducjcjan- Keen Ryskeva 0.^ {986 ;

Vervtiet ß;

f984 ' 'Vtfjniewstf^ U.jJQ87 ) определяет необходимость углубленного изучения различных звеньев иммуиьой системы, в частности, естественной иитотоксичности (ЕЦГ), составляющей важное звено иммунорегуляиии (Ломакин М.С., 1985; $укс Б.Б. и соавт., 1984; 3ondciC М ,WÖ7 ).

Несмотря на то, что недостаточность функционирования системы ЕЦТ у больных PC прослеживалась многими авторами (Сорокин A.M. и соавт., 1987; Meinour P.A.,Ш • ioyetia R.6.,4966; ШЬ'Ыа Д.,W{), дагные по оценке активности естественных киллеров (ЕЮ - основной популяция лимфоцитов в системе ЕЦГ, противоречивы, что связано с

3.

проведением исследований в разнообразной по составу группе больных с различным характером течения, длительностью процесса и степенью выраженности неврологичееког дефицита, а также ме:одическими особенностями экспериментов. Состояние этой системы при различных клинических формах течения заболевания в предшествующих работах не оценивалось.

Наряду с чэменен! :м активности ЕК у больных РС выявлено нарушение функционирования системы интерферона (ИФН), являющееся, по-видимому, ведущим звеном патогенеза недостаточности системы ЕЦХ (Сорокин А-.М. и соавт., 1987; Чекнев С.Б. и соавт., 1988; бгеак-таи Е.,ЩЬ \ "Ое^ге М.,е+а€.,/97б ; Законен Я. еЬ а1., №2. ). Однако, при этом не исследовались изменения ИФН-статуса организма, как комплекса показателей, характеризующих уровень работы компонентов, ответственных за выработку ИФН и сохранение его биологической активности (Ершов Ф.И. и соавт., 1986), с учетом индивидуальных показателей у больных с различным харагтером течения процесса и длительностью заболевания. В предшествующих исследованиях не изучалась возможность не связанного с недостаточностью ИФН блокирования активности "К факторами сыворотк. крови больных РС.

Сформировавшиеся представления о ролг аутоиммунных механизмов в патогенезе ЕС обосновали необходимость и возможность широкого применения иммунодепрессантое и стероидных гормочов в терапии заболевания. С другой стороны, выявленный в ряде работ ИФН-эависимый характер иммунодефицита по ЕК у больных РС (Чекнев С.Б., Ковальчук Л.В., 1989) в сопоставлении со способностью ИФН восстанавливать сниженную активность ЕК и» у^ю (Петров Р.В. 1984; Сорокин1'.А'^Ш и соавт., 1986; Чекнев С.Б. и соавт., 1988) требует исследований^ возможностей нормализации функциональной активности ЕК ИФН, а так-гп комбинации; ИФН с пептидами, влияющими на другие звенья иммум -тета и обладавшими определенными свойствами в отношении ЕК.

Оценка состояния и регуляторных взаимодействий мегцу системами ЕЩГ и ИФН у больных с различными клиническими характеристиками процесса становится тем более актуальной, если учесть, ч'.о при исследовании функционирования Т- и В-звеньев иммунитета, а также других показателей именного статуса больных РС кч всегда выявляются значимые корреляции с активностью процесса, длительность!!) заболевания и степенью инвалидизацки больных (Иваноков А.Н., 1988; ОопаЬ I). е'Ь а(.,№0).

Цель исследования - изучить состояние системы естественной пито'токсичности и интерферона у больных РС с различными клиническими характеристиками процесса, а также чувствительность лимфоцитов, обладающих ЕК-активностьо, к действию различных иммуномодуляторов.

Задачи исследования:

1) изучить активность Ж периферической крови у больных РС с различными "линическими характеристиками процесса;

2) определить индивидуальные показатели интерферонового статуса у больных РС различных клинических групп;

3) изучить влияние сыворотки крови больных РС на цитотоксиче-сную функцию ЕЛ;

4) изучить действие Я®, Т-активина, миелопида и даларгина на активность ЕК у больных РС ф \л.4:го.

Научная новизна.

В работе впервые выявлена связь состояния системы ЕЦТ и ИФН с клиническими характеристиками патологического процесса при РС, выявлены возрастные особенности активности ЕК, описана корреляция показателей цитотоксичности клеток с длительностью заболевания. Обнаружено, что изменения ИФН-статуса организма больных РС, проявляющиеся в большей степени в отношении продукции стимулированными лимфоцитами ИФН- , чем ИФН- о1, опережают по времени развитие недостаточности системы ЕЦТ, могут служить причинным фактором иммуно-

дефицита-по ЕК РС и подтверждают положение об ИФН-зависимом характере этого дефицита.

В сыворотке крови больных РС не выявлены блогаторы активности ЕК, также подтверждает ведущую роль дефекта системы ИШ в развитии дефицита по ЕК при РС.

Впервые описано изменение чувствительности ЕК больные РС к действию Сп V 1.-1: го рек^мбинантного аналога И® (реаферона), а также иммуноактивных пептидов тимического г костномозгового происхождения. Выявлен факт возникновения оа ^утсТ1,ую1цей у здоровых доноров отвечаемости ЕК больных РС на препарат опиатного ряда даларгин. Обнаружено, что комбинирование реаферона с Т-антивином, миелопидом и даларгином позволяет в определенной степени нормализовать регу-ляторный баланс, обеспечивающий функционирование системы ЕЦТ, а также чувствительность клеток к действию факторов их физиологической регуляции 1п v^lro .

Практическое значение работы.

I. Полученные в работе данные о состоянии системы ЕЦТ и УШ при различных типах течения РС, длительности заболевания и степени инвалидизации больных могут бвть использованы в клинической практике для уточнения стадии заболевания и прогнозирования эффекта иммунотерапии.

Результаты работы патогенетически обосновывают использование реаферона в сочетания с регуляторными пептидами тимического и костномозгового происхождения, а также с препаратом опиатного ряда даларгином для коррекции чувствительности ЕК к действию фактотюв их физиологической регуляции ип «Ь-о к нормализации у больных РС регуля'" арного баланса, обеспечивающего функционирование системы ЕЦТ.

Положен'ич, выносимые на защиту.

I. Состояние системы ЕЦТ и ИФН при РС в определенной степени (нли.гует е югничеекими характеристиками процесса.

Цитотоксичность ЕК снижена при ремиттирухщем типе течения в стадии ремиссии, при длительности болезю. более 10 лет при неактивном про-'ессе и у больных с минимальными клиническими проявлениями, а также со значительной, но не средней степенью выраженности неврологической симптоматики.

2. Недостаточность ЕЦТ отмечается только у лиц в возрасте ¿1-50 лет.

3. Изменения ИФН-счтуса ооганизма бл ль них PC опережают по времени развитие недостаточности системы ЕЦТ, что подтверждает положение об ШН-зависимом характере дефицита по ЕК пр». этом заболевании.

4. В сыворотке крови больных PC не обнаружены факторы, блокирующие активность ЕК, что также подтверждает представление о ведущей роли дефекта системы И2Н в развитии дефицита по ЕК при PC.

5. ЕК брльннх PC, по сравнению с ЕК здоровых доноров, обладают измененной чувствительностью к действию экзогенного ИФН, а также иммунно .ктивных пептидов тклического и костномозгового происхождения.

Комбинирование ИФН с Г-активином, миелопидом и даларгином позволяет в определенной степени нормализовать регуляторный баланс, обеспечивающий функционирование ¿системы ЕЦТ, а также чувствительность клеток к действию факторов их физиолоыческой регуляции iWtrо.

Реализация работы в практике

Результаты диссертационной работы используются в клинике нервных болезней и нейрохирургии № I лечебного факультета Российского государственного медицинского университета им. Н.И.Пирогова на базе городской клинической больницы № I им. Н.И.Пнрогова.

Апробация работы.. Диссертация выполнена в плане научных исследований Российского государственного медицинского университета им. Н.И.Пирогова.

Основные положения диссертации доложены на совместной конференции кафедры нервных болезней и нейрохирургии № I лечебного факультета Российского государственного медицинского университета им. Н.И.Пирогова с ФУВ (1988), конференцуч "Иммунный гомеостаз в норме ч патологии в г. Фрунзе (1989), X научной конференции "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях" в г. Челябинске (1990), на конференции по исследованию интерферона в г. Флоренции (Италия, 1989), на межобластной научно-практической конференции по инфекционным заболеваниям нервной системы е г. Костроме (1990).

Публикации. По материалам диссертационного исследования опубликовано 15 работ.

Структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 146 страницах маииноьисного текста и состоят из введения, трех глав, заключения, в"водов, практических рекомендаций и списка основной использованной литературы. Библиография содержит 51 отечественный и 141 зарубежный источники. Работа иллюстрирована 20 таблицами и 19 рисунками.

СОДЕРЕАНИЕ РАБОТЫ Общая характеристика больных и методы исследования

Проведено клин: хо-иммунологическое обследование 67 больных РС (22 мужчин и 55 женщин) в' возрасте от 15 до 59 лет. Все больные находились на обследовании и лечении в неврологических отделениях 1ГКБ им. Н.И.Пирогова. Диагноз ставился на основании критериев, предложенных Институтом неврологии АМН СССР (1983). Согласно классификации Мс£юис1?Л (197?) все 6? случаев отнесены к несомненному РС.

Большинство больных (54 человека) страдали цереброспинальной формой заболевания, у 13 пациентов выявлена преимущественно мозжечковая форма РС. Длительность заболевания варьировала от 3 месяцев до 20 лет, у I больной был диагностирован дебют заболевания.

Все больные не получали иммуномодулирувдую терапию в течение б месяцев до момента настоящего обследования.

В соответствии с анамнезом и особенностями клинических проявлений РС больные были разделены на группы (приложение I), Независимо от представленного распределения больных по типу течения заболевания, больные РС, у которых за последние 2 месяца наблюдалась отчетливая отрицательная клиническая динамика в. виде углубления старых и появления новых симптомов заболевания, были выделены в группу с нарастанием активности процесса, остальные - в группу с неактивным процессом. Тяжесть клинического состояния больных оценивали по шкале неврологического дефицита 14)г (1961) в модификации " Мппег£ EELy.ii. Согласно оценке в баллах выраженности объективных неврологических симптомов, сумма баллов неврологического дефицита у обследованных больных находилась в пределах от I до 2? баллов (в среднем 11,1+0,6 балла). В зависимости от степени инва-лкдилации. оцениваемой по '"кале прогрессировашя процесса, отражающей адаптацию больного к проявлениям заоолеван;я, больные были разделены на группы с легкой, средней и тяжелой степенью выраженности неврологического дефицита.

В неврологическом статусе больных РС в первую очередь выделялись 3 группы симптомов: церебральные, спинальные и мозжечковые. Не отмечалось какой-лиоо группы симптомов, свойственных определенному типу течения болезни.

55 обследованных больных (82%) составили возрастную группу от 15 до 40 лет. Дебют заболевания приходился в основном на молодой возраст: у 47 больных (70%) первые симптомы РС отмечены в возрасте до 40 лет (самое раннее начало заболевания - в 13 лет). У большинства больных (49.чел., 73%) РС дебютировал моноеикптомно, у 18 больных (27%) - в виде 2-3 симптомов.

Наряду с общеклиническими метода«»! обследования больных для верификации диагноза, выявле.'М и контроля за состоянием субклинических очагов использовались электромиографическое исследование мышц конечностей, электчээнцефалографическое исследование в покое и с нагрузочными пробами, коротколатентные стволовые вызванные потенциалы на акустическуя стимуляцию, а таете у части больных -ядерно-магнитная томография.

Контрольную группу практически здоровых доноров составили 40 человек (19 мужчин и 21 женщина) в возрасте от 16 до 54 лет. Объектом исследований служила периферическая венозная кровь, полученная асептически от больных PC и здоровых доноров.

Общее число исследований составило 381.

Цитотоксическую активность ЕК во взвеси мононуклеарных клеток и расчет цитотоксического индекса (ЦИ) определяли с использованием радиометрической методики ftabhimote 3. и -SudoU.b модификации Рыковой М.И. и соавт. (1981) против меченных Н3-уридином клеток человеческой эритромиелолейкозной линии К-562 при соотношениях эффектор-мишень (Э:.Ч) в экспериментальной системе 100:1, 50:1, 25:1, 12:1 и 6:1. Для кащого соотношения 3:М вычисляли индекс вариабельности (ИВ), представляющий собой отношение максимального отклонения к среднему значению и отражающий диапазон реагирования системы.

Исследование ИФН-статуса проводили в отделе интерферонов НИИ ЭМ им. Н.Ф.Гамалеи АМН СССР по методу Klr-ctier И. в модификации Григоряна С.С. и соавт. (1988). Титрование ЙФН проводили на монослой-ной культуре фибробластов человека M-I9 по методу Соловьева В.Д. и Бектемирова Т.А. (1979).

Для коррекции активности ЕК у больных PC в работе использовали следующие иммуномодуляторы: Т-активин (НЙИФХМ МЗ РСФСР), миело-пид (Институт иммунологии МЗ СССР), даларгин (ВКНЦ АМН СССР), реа-ферон (НПО "Фермент" Минмедбиопрсма СССР). Т-активин, миелопид и

. даларгин вносились в суспензию мононуклеарных клеток в дозе 1,0 и 10 мкг/мл, реаферон - в дозе 100. МЕ/мл. В комбинации с реафероном использовали дозу перечисленных пептидов, равную 10 мкг/мл. Эффективность иммуномодуляторов оценивали с применением показателей регулирования, представляющих собой абсолютное изменение ЦИ отне -сенное к исходной ЕК-активности, взятое с соответствующим знаком ("+" или "-") и рассчитанное как среднее арифметическое для всех соотношений Э:М. Группы обследованных характеризовали общим показателем регулирования (ОПР). ,

Математическую обработку результатов исследования проводили общепринятыми методами вариационной статистики. :

Результаты исследований и обсуждение Полученные результаты подтверждают положение о наличии у боль- | ных РС дефицита системы ЕЦТ и выявляют определенную связь измене- , ний нитотоксической активности ЕК с клиническими характеристиками процесса и возрастом больных.

В общей группе больных РС, мзсмогря на большой разброс индивидуальных показателей (при соотношении Э:М 100:1 разброс значений • ЦИ составил от В% до 98$), определяется снижение иитотоксичности ЕК по сравнению со значениями ЦИ у здоровых доноров на функциональных соотношениях Э:М 100:1 и 50:1 (рс0,05). При этом отмечается расширение диапазона реагирования системы ЕЦТ, что может свидетельствовать о вовлечении в цитотоксический цикл дополнительных механизмов регулирования.

При анализе цитотоксической активности ЕК в выделенных группах по типу течения заболевания достоверное снижение ЦИ (р<0,05) отмечается только у больных с ремиттирующим типом течения болезни в стадии ремиссии. В этой группе больных соотношение числа сниженных показателей ЦИ к общему количеству наблюдений больше Ъ0% для всех соотношений Э:М и достигает 100« при соотношении Э:М 6:1.

Эта же группа больных характеризуется наиболее выраженной вариабельностью цитотоксическсй активности ЕК.

При других типах течения РС значимых отклонений от нормы не обнаружено.

В зависимости от характера активности процесса цитотоксичность ЕК меняется следующим образом: снижение ЦИ по сравнению с показателями в группе здоровых доноров у больных с нарастанием активности процесса отмечалось только при соотношении Э:М 100:1 (¡>¿0,05), а в группе со стабилизацией активности процесса - при соотношении Э:М 50:1, 6:1 ( р< 0,01) и 12:1 ( р<^0,1).

Индивидуальный анализ показывает снижение ЦИ в ^олее 50$ случаев только в группе больных со стабилизацией активности процесса.

КВ цитотокскчности ЕК увеличен по сравнению с соответствующими показателями у здоровых доноров в обеих обследованных группах больных, однако, увеличение ИВ в группе больных с нарастанием активности процесса носит более выраженный характер.

. При изучении связи изменений в системе ЕЦТ со степенью выраженности неврологического дефицита выявлено снижение иитотоксич-ности в группе больных РС с минимальными клиническим!! проявлениями и со значительной степенью выраженности неврологической симптоматики при соотношении Э:К 50:1.( р^0,05). Больные со средней степенью выраженности неврологического дефицита достоверного изменения цитотоксической активности ЕК по сравнению с группой здоровых доноров не обнаруживают.

Такой динамике изменений цитотоксичности ЕК, связанной с углублением неврологического дефицита, соответствует изменение силы связи между показателями ЦИ в выделенных группах, описанные с помощью рангового коэффициента корреляции по Спирману. Только между показателями активности ЕК в группах больных с легкой степенью выраженности неврологического дефицита и с глубокой инвэлидизацией

выявлена сильная корреляционная связь 0,9). Вариабельность цитотоксичности ЕК увеличена по сравнению с группой здоровых доноров при всех трех степенях тяжести процесса.

Анализ цитотоксической активности у больных с различной длительностью заболевания выявляет тенденцию к увеличению цитотоксичности ЕК в-динамике процесса с последующим резким снижением активности ЕК (р^О, I) при длительности заболевания более 10 лет. Такому изменению цитотоксичности ЕК соответствуют определенные сдвиги силы связи между активностью ЕК и давностью заболевания: цитотоксическая активность клеток тем выше, чем более выражена корреляционная зависимость в системе ЕЦ'Г у больных РС.

Группу больных с длительностью течения болезни более 10 лет составляли в основном больные с выраженным неврологическим дефицитом. Эта группа больных характеризуется максимальным числом сниженных показателей ЦИ к общему количеству наблюдений и наиболее выраженным увеличением вариабельности цитотоксической активности ЕК при всех соотношениях Э:М, как количественных, так и функциональных.

Представленные результаты подтверждают точку зрегия Туннель О.И. и соавт. о возможной роли ЕК в патогенезе аутоиммунизаши при РС и позволяют предположить, что наиболее перспективными в плане коррекции измене"ий сйстемы ЕЦ'Г являются именно группы больных РС с ремиттируицим течением заболевания в стадии ремиссии, длительностью процесса более 10 ле% с минимальной и глубокой инва-лидиэацией, а также с неактивным патологическим процессом.

У больных РС выявляется тенденция к увеличению цитотоксической активности ЕК с нарастанием длительности заболевания и углублением неврологического дефицита, с последующим снижением показателя ЦИ при продолжительности болезни более 10 лет и достижен! эм больными глубокой инвалидиэации, т.е. дефицит по ЕК при этом забо-

левании ассоциирован с тяжелым клиническим состоянием Зольных и большой длительностью патологического процесса.

Исходя из этих результатов, можно предполагать, что персистен-ция вируса, являющегося предполагаемьш этиологическим фактором РС, приводит на начальных этапах к активации системы ЕЦТ-МН в организме больного с последующим выходом во вторичный иммунодефицит по Г'.{, компенсируемый за счет включения дополнительных механизмов системы и проявляющийся в снижении цитотоксической активности ЕК и показателей вариабельности лишь на стадии декомпенсация, ассоциированной с тяжелым клиническим состоянием пациентов. Однаяо, это положение нельзя считать доказанным без длительного наблюдения за больн ми в динамике патологического процесса.

Анализ выделенных по возрасту групп больных РС позволяет выявить определенную возрастную динамику цитотоксической активности ЕК, при которой дефицит по ЕК отмечается лишь у больных, обследованных в возрасте 21-50 лет, с наиболее вырэжгчньм снижением ЕК-ак-тивности у больных в возрасте 41-50 лет. В то же время в возрасте1 51-60 лет при соотношении Э:М 6:1 активность ЕК повышается по сравнению с группой здоровых доноров ( р<0,1).

Изучение вариабельности показателей цитотоксичности ЕК выявляет ее увеличение по сравнению1, с группой здоровых доноров у больных в возрасте 21-50 лет на функциональных соотношениях Э:М (100:1 - 25:1). Наиболее выраженное увеличение показателей вариабельности по сравнений с группой здоровых доноров отмечается у больных в возрасте 41-50 лет. Наоборот, в следующей возрастной группе (51-60 лет) значения ИВ резко (в 1,7-2,8 раза) снижены по сравнению со здоровым контролем.

Обращают на себя внимание показатели цитотоксичности ЕК в возрастной группе 51-60 лет. По сравнению с предшествующими Труппами больных отмечается восстановление цитотоксической активности

ЕК и корреляция показателей цитотоксичности с параметрами юношеского возраста (г- = 0,8). При этом значения ИВ становятся минимальными не только по отношению к таковым в группе здоровых доноров, но также в 2-8 раз меньшими, чем у больных PC в возрасте 41-50 лет.

Расширение диапазона изменения показателей активности ЕК в большинстве возрастных групп больных PC может объясняться обнаруженным Чекневым C.B. и соавт. переключением системы ЕЦТ-ИФН на синхронный характер функционирования отдельных компонентов (по вариабельности) , проявляющимся в повыиении чувствительности ЕК Lri vitro к регулирующему действию ИФН- d-

Видимо, усиление восприятия эффекторной клеткой регулирующих сигналов, народу с постоянным увеличением число взаимосвязей в иммунной системе, приводит к резкому падению вариабельности системы ЕЦ'Г у больных PC в возрасте 51-60 лет и переводит ее в состояние ригидности при ответе на аллогенные клетки-мишени. Однако, нормализация цитотоксической активности ЕК в этой возрастной группе больных по сравнению с более ранним возрастом, а также корреляция показателей системы с параметрами юношеского возраста, определяют ригидность системы ЕЦТ у больных PC в отличие от здоровых доноров, не как завершенную форму угнетения компенсаторных механизмов системы, а как своеобразное состояние динамического равновесия, ассоциированное не со снижением,,а с восстановлением по сравнению с предшествующими возрастными группами показателей цитотоксической активности ЕК. Таким образом, вопреки ожиданиям, состояние системы ЕЦТ у больных PC в возрасте 51-60 лет характеризуется не истощением ее по типу вторичного дефицита, а нормальной активностью ЕК со снижением диапазона реагирования.

По-видимому, за счет регуляторных сдвигов в системе ЕЦТ-ИФН у больных PC включаются .ополнительные механизмы компенсации, выводящие эту систему на уровень работы, восстанавливающий у больных

РС старше 50 лет нормальный потенциал функционирования популяции £!{.

Однако, полученные результаты в лакей их интерпретации не могут представлять собой полностью адекватную модель для оценки возрастной динамики активности ЕК, т.к. в работе не исследовались изменения ЕК-активности на всем протяжении развития патологического процесса у длительно наблюдавшихся пациентов.

В последнее время Деминой Т.Л. и соавт. (1989) высказана точка зрения о циклическом характере иммунных сдвигов в патогенезе РС с последовательной сменой фаз. Система КЦГ, насколько можно судить по результатам настоящего исследования, отличается достаточной стабильностью, не позволяющей зарегистрировать ее циклические изменения, несмотря на определенные сдвиги в функционировании популяции ЕК, связанные с клиническими характеристиками процесса.

При' оценке ИФН-статуса в общей группе больных РС в среднем не удалось зарегистрировать изменений продукции лейкоцитами ИФ11-о( по сравнению со здоровыми донорами, хотя значения продукции ИМ- е( меньшие! чем в норме, встречались с частотой 72%. В то же время выявлен выраженный дефект в системе продукции лимфоцитами ИФН- Г (¡■">¿0,01), со снижением продушии КФН-^ по сравнению со здоровыми донорами в 95% случаев.

Полученные результаты зоответствуют данным Сорокина А.М. (198?), Чекнева С.Б. (1989), свидетельствующими, что при снижении выработки ИФН- гУ лейкоцитами больных РС уровень его продукции остается значительно ближе к нормальным значениям, чем уровень продукции ИФН-К1, , так и исследованию Тсл/е?£ Т), «Ь л С., (1983), где не зарегистрировано снижение, продукции ИФН-с*, лейкоцитами больных РС.

Содержание ЩГ в сыворотке крови больных РС не отличалось от титров ИШ, определенных в сыворотке здоровых доноров.

Анализ связи уровня продукции ИФН-(А с клиническими характеристиками процесса обнаруживает, что при.всех типах течения РС

выработка 111Н--I сохраняется на уровне средних значений, определенных в общей группе больных. Однако, выявляется тенденция к увеличению продукции этого типа ИФН у больных, обследованных в стадии обострения ремиттир/щего процесса, чх'о может быть связано с активацией в организме больного РС длительно персистирующего вируса, приводящей к стимуляции о( -ИФН-генеза. Продукция лейкоштами периферической крови больных РС КФН- не различается также в группах больных, страдающих менее I года, т.е. находящихся на начальном этапе болезни, и пациентов, имеющих длительность заболевания более 10 лет.

Уровень выработки лимфоцитами больных РС ИФН- ^ при всех типах течения процесса сохраняется на одном уровне, более низком, чем у здоровых доноров. В то же время продукция И£Н~ >р четко связана с длительностью заболевания. Так, больные с длительность» процесса менее I года имели, примерно в 2 раза более низкий уровень продукции КФН- , чем здоровые доноры, а больные, имевшие давность заболевания более 10 лет, характеризовались еще в 2 раза более низкой выработкой ИФН- Г лимфоцитами в ответ на ОГА.

Эти результаты подтверждают КФН-эависимь..1 характер дефицита по ЕК и свидетельствуют, что система продукции ИФН- в процессе развития РС истощается по типу вторичного дефицита. Это значительно осложняет проведение иммунокорригирующей терапии у больных РС с большой длительностью болезни и увеличивает риск присоединения к основному заболеванию вторичных, в первую очередь, вирусных процессов.

Имеющиеся в литературе сведения о состоянии системы №Ш у больных РС, а также полученные в данной работе результаты исследования показывают, что роль системы в регуляции иммунного гомеоста-за, а, возможно, и в патогенезе регуляторного дисбаланса при РС, неоднозначна.

С одной стороны, развитие процесса характеризуется постоянно углубляющимся снижением продукции лимфоцитами ИФН- )¡ , что соответствует результатам работы B¡££iou /).(1Э88), в которой использование моноклональных антител к ИФН- f приводило у мышей к обострению экспериментального аллергического энцефаломиелита, а применение ИФН- Jf давало положительный эффект m vivo. С другой стороны, неудачные в ряде случаев попытки лечения РС ИФН- ij¡ (Thmtch W.S, 1987), по-видимому, связаны с усилением экспрессии антигенов П класса системы HÍ.A на клетках ЦНС.

Нами исследована возможность не связанного с дефектом системы ИФН блокирования активности ЕК факторами сыворотки больных РС, в роли которых могут выступать, например, цитотоксические антитела, циркулирующие иммунные комплексы, антитела к эндотелию сосудов и отдельным компонентам миелина.

Изучены эффекты выворотки крови больных РС на цитотоксическую функцию ЕК. При сравнении действия сыворотки крови больных РС и здоровых доноров на активность ЕК у больных РС выявлено, что как для сыворотки больных РС, так и для сыворотки здоровых доноров в общей группе обследованных действие на активность ЕК отсутствует. При этом соотношение индивидуальны:, эффектов (по стимуляции, угнетению и отсутствию действия на активность ЕК) для сыворотки больных РС и здоровых доноров практически совпадает.

Сравнение действия сыворотки крови больных РС и здоровых до-

i

: норов на активность ЕК у здоровых доноров показывает, что и в i этом случае для обеих групп сывороток эффект в общей группе об-| следованных отсутствует. Соотношение индивидуальных эффектов для сыворотки больных РС и здоровых доноров, тоже, практически, совпадает.

Определение содержания ИФН в исследованных сыворотках показало отсутствие различий между сывороткой больных РС и здоровых доноров.

Учитывая отсутствие общего угнетающего действия сыворотки кропи Сольных РС на активность ЕК, невысокую его дол» (менее 20 в индивидуальном распределении эффектов, а также обнаруженное сходство в действии сыворотки крови больных и здоровых лии в использованной системе оценки, мокио утверждать, что наличие сывороточных блокаторов активности ЕК не является патогномоничным признаком РС. Эти данные подтверждают представление о ведущей роли дефекта системы И<Ш в развитии дефицита по ЕК у больных РС.

Таким образом, установленный дефицит системы ЕЦ'Г при ведущей роли в его формировании недостаточности ИФН, а также выявленные при РС многочисленные иммунологические аномалии обосновали необходимость изучения действия 1!ФВ в сочетании с пептида:® , являющимися естественный! факторами'физиологической регуляции, на циготок-''сическузо активность ЕК.

Изучение действия реаферона на функционирование ЕК показывает, что у больных РС оно соответствует эффекту человеческого лейкоцитарного ИФН- Л (ЧЛИ, 125 МЕ/мл), в то время, как у здоровых доноров активность ЕК под действием реаферона увеличивается в значительно меньшей степени, чем при использовании натурального препарата. ОПР реаферона у больнюс РС составил 30$, ОПР ЧЛИ 24%, у здоровых доноров, соответственно, 20% и 143%.

ОПР при действии "Г-активина у больных РС в дозах 1,0 и 10 , мкг/мл составляет, соответственно, 36 и 42% (Приложение Zk). Комбинация Т-активина с реафероном повышает активность ЕК с ОПР 75%. У здоровых доноров Т-активин в дозе 1,0 мкг/мл выражение стимулирует ЕК-активность с ОПР 127% (Приложение 2Б). При этом сочетание реаферона с '1'-активином приводит не толь к <1 к снижению эффективности действия последнего, но даже к падению активности ЕК ниже исходных значений (ОПР - 27%).

Миелопид у больных РС в дозе 1,0 мкг/мл оказывает значимое

ДеистВие Т- актиёина^реасрерана и их комбинации но онтиЁность ЕК in vitro.

i 2 3

/ S 3

а

•w -го

SD

w

60

во

/3D ОПР(%)

а - ¿опьиые PC : /-рвасреран (п-7) ; ¡Я-актиВин (/.О миг/мл, п*9) ; 3 -Т- актиВин ( 1Û мна/мп, п=в) , реасрерон+Т- актиВин (п=7) .

5 - здоровые доноры :

реа<рерон (п=4) ;

2 - Т- активин (i.О riKí/мп ;

3 - Т- актиВин (.Юнкг/nn, п=5) ;

4 - реасрерон + Т- актиВин (л=4^ .

/Штрихоёка - р< о.ûS по сраёнснию с актиёностью ЕК 5ез препаратов/

Рис. /7/Х//.2

стимулирующее действие на активность'ЕК с ОПР 70» (Приложение ЗА). В дозе 10 мкг/мл ОПР миелопида составляет 37$. Сочетание миелопида с реафероном приводит к снижению эффективности действия миелопида до 25 % ОПР. В то же время у здоровых доноров ОПР миелопида в дозе 10 мкг/мл составляет 583, в дозе 1,0 мкг/мл - 1?.%, сочетание миелопида и реаферона стимулирует активность ЕК с ОПР 42% (Приложение ЗБ).

ОПР даларгина у больных РС составляет около 70% при действии обеих доз препарата, сочетание даларгина с реафероном приводит к дополнительному усилении ЕК-активности на 305 ОПР (Приложение 4А). У здоровых доноров даларгин, а также его комбинация с реафероном неэффективна в регуляции активности ЕК (Приложение 4Б).

Результаты исследования показывают, что действие изученных иммунорегуляторных пептидов на активность ЕК ч-. уьЬ-о отличается у больных РС и здоровых доноров. ЕК здоровых доноров отвечают значительной стимуляцией на действие фактора дифференцировки Т-лимфо-штов (Т-активина) и, в меньшей степени, но также стимуляцией на действие миелопида, являющегося, э первую очередь регулятором функционирования В-звена иммунитета. Реаферон при этом не оказывает выраженного действия на активность ЕК.

У больных РС на фоне изменений в системе ЕЦТ, развивающихся по типу ИФН-зависимого дефицита, наблюдается функциональная неполноценность ЕК, связанная с резким снижением продукции КФН практически всеми вовлеченными в этот процесс клеточными элементами. При такой функциональной недостаточности ЕК Ы теряют чувствительность к Т-активину, повышается степень их активации под действием миелопида и повышается отсутствующая у здоровых доноров от-вечаемость на препарат спиатксго рзда даларгин. Кроме того, как свидетельствуют результаты.проведенного анализа, у этих больны* использование реаферона восстанавливаете \л4:го ¿примерно, на

Дейстёие миепопиВа, реасрерана и их комбинации на ахти В пасть £Н ш Vitra ■

SO

/ г з

уШШШул

so

40

во

во

алр(°/в)

а - вольные PC ; /. ~реаерерон (п=?] ; S - мийпопид (/.о мкз./мл, nsg) ; з - Атиалолид (/о мкг/пи , п-9) ; и - реаерерон + миепопид •

<Г- здороёые доноры: í - peatpepoH (n*tj) ; i - Husnanud (/.О п*ъ//чл, пз$) ;

3 - ми&попид (tafi , п» 6) ;

4 - рааерерон + гшепопид (n~6 )

/u/mpuyaêxa - p < о.OS no сра&нвнию с активностью £к Ses npsnapamoñ./

Рис. При а. 3

Даистёие даларгина , реаср&рана и их комбинации на актиВность ВК in vitro .

{ - рвасреран (rtsit) ; 2- дапаргии (7.0 , п=з) ;

3 - дапаргин (ta мкг/мп, nzs) ;

4 - рвасреран da.no.ps.UH. (nz3) .

/Штрцхаёка -р< D£S na сравнению С актиВ^остььо ЕК Ses препарата8/.

Рис. Прил. Q

50$ действие Т-активина и отменяет избыточную стимуляцию ЕК миело-пидом. При использовании сочетаний реаферона с даларгином и резервна с Т-активином отмечается эффект кумуляции, не определяемый при комбинировании реаферона и миелогшда.

Таким образом, можно коистатировать, что иммунодс.фииит по ЕК у больных РС проявляется не только в снижении цитотоксической активности клеток и интенсивности их дифферекшровки, п и ассоциирован с резким изменением чувствительности ЕК к действию факторов регуляции 1п \zL-ir» о . Выявляется нарушение тонких механизмов созревания ЕК и изменение распределительных процессов при формировании циркулирующего пула лимфоцитов. Полученные данные позволяют предполагать, что реаферон, а возможно, и препараты натурального ИЗН-л' будут эффективны при их совместном использовании с другими иммуно-модуляторами в терапии РС у больных, клетки которых обладают измененной чувствительностью к действии, препаратов, являющихся аналогами факторов регуляции их активности в физиологических условиях.

ВЫВОДЫ

1. Комплексным клинико-иммунологическим обследованием больных РС подтверждено наличие дефицита систем ЕЦГ при этом заболевании .

2. Установлена определенная связь между выраженностью изменений цитотоксической активности ЕК и клиническими характеристиками РС. Цитотоксичес:ая активность ЕК снижена в группах больных с ре-миттирующим типом течения в стадии ремиссии, при длительности заболевания более 10 лет, в фазе стабилизации активности процесса и у больных с г'тнимальными клиническими проявлениями, а также со значительной, но не средней степенью выраженности неврологической симптоматики.

3. На отдельных этапах развития заболевания при нарастании длительности процесса функционирование системы ЕЦТ характеризует-

ся увеличением цктотоксической активности ЕК с последующим выходом во вторичный иммунодефицит по ЕК, ассоциированный со снижением вариабельности активности клеток.

4. У больных РС отмечаются возрастные изменения активности ЕК, недостаточность которой выявляется в возрасте 21-50 лет. Больные РС старте 50 лет имели скомпенсированный уровень функционирования популяции ЕК, характеризующийся сильной положительной корреляцией показателей цитотоксичности с гчраметрами больных в возрасте до 20 лет, и снижением диапазона реагирования ЕК на аллогенные клетки-м^зени.

5. Дефект по ЕК у больных РС ассоциирован со снижением продукции И£Н-ц - в большей степени ИФН- jf стимулированными лимфоцитам!. Уровень выработки ИФН- if обратно связан с длительностью заболевания: отмечается сн.-жение продукции И4Н-Jp при длительности болезни более 10 лет в 4 раза по сравнекию с группой здоровых доноров. Изменение KCii-статуса организма больных РС предшествует выявленным сдвигам в системе ЕЦТ.

6. В сыворотп крови больных РС не обнаружены факторы, блокирующие активность ЕК.

?. Иммунодефицит по ЕК при РС ассоциирован с изменением чув-ствительн сти ЕК к действию регуляторных пептидов. ЕЙ больных РС in vitro теряют чувствительность к Т-активину,повышается степень активации клеток под действием миелопида и появл;. jtch отсутствующая у здоровых доноров отвечаемость на препарат опиатного ряда даларгин.

8. Сочетание Т-активина, миелопида и даларгина с ^еафероном tn vitro приводит у больных РС к частичному восстановлению под д "¡ствием реаферона чувствительности % к Т-активину, отмене избыточной стимуляции ЕК миелопидэн и кумуляции эффектов при комбинировании реаферона с даларгеиом и реаферона с Т-активином.

Практические рекомендации

1. Установленная связь между выраженностью изменений в системе ЕЦТ и клиническими характеристиками РС позволяет уточнить тяжесть состояния больного, активность процесса и стадию заболевания, а также прогнозировать эффект иммунотерапии.

Группы больных со сниженной цитотоксической активностью ЕК являются наиболее перспективными в плане коррекции изменений в системе ЕЦТ.

2. Выявлено, что у больных РС старше 50 лет включаются механизмы компенсации состояния дефицита в системе ЕЦТ, что обусловливает нецелесообразность проведения иммунокоррекции цитотоксической активности ЕК в этой группе пациентов.

3. Выявленная недостаточность системы КФН, особенно при большой продолжительности болезни, обосновывает назначение препаратов для предупреждения присоединения вторичных, в первую очередь, вирусных процессов.

4. Результаты исследования действия реаферона в сочетании с Т-активином, миелопидом и даларгином у больных РС 1п иНга патогенетически обосновывают использование этих препаратов для коррекции чувствительности ЕК к действию факторов их физиологической регуляции.

5. Индивидуальный характер у каждого больного РС изменений чувствительности ЕК к действию регуляториых пептидов делает нег">-ходимой предварительную оценку состояния системы ЕЦТ, а также других звеньев иммунитета при назначении этих препаратов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

I. Естественные киллеры и их возможная роль в патогенезе рассеянного склероза//Иммун!шй гомеостаз в норме и патологии. -Фрунзе, 1989. - С. 47-49 (сорм. с С.В.Чекневым, Т.Л.Деминой, И.С.Фроловой).

2. О системе естественной штотоксичноети у больных рассеянным склерозом: клинико-иммунологические параллели/Д. Невропатология и психиатрия. - 1989. - № 7. - С. 16-19 (совм. с Е.И.Гусевым, С.Б.Чекневым, Т.Л.Деминой, А.Ь».Сорокиным).

3. Отсутствие эндогенных блокаторов активности ЕК-клеток подтверждает интерферон-зависимый характер дефицита по ЕК при рассеянном склероэе//Интерферон-89. Сб. научн. трудов. - М., 1989. -С. 42-47 (совм. с С.Б.Чекневым, И.С.Фроловой, А.Д.Прилкер, Т.Л.Деминой , А.М.Сорокиным).

4. Сывороточные факторы в регуляиии активности естественных киллеров в корме и у больных рассеянным склерозом//Иммунньй* гомео-стаз в норме и патологии. - Фрунзе, 1989. - С. 84-85 (совм. с С.Б.Чекневым, А.Д.Ирицкер, А.М.Сорокиным, Ф.И.Ершовым).

5. шмунокорригирущес действие и клиническая эффективность миелопкда при рассеянном склерозе//Современные аспекты применения интерферонов и других имыуномодуляторов. - М., 1990. - С. I40-I4I (совм. с Е.И.Гусевым, С.Б.Чекневым, Т.Л Деьжной, А.Н.Бойко, М.Ю. Татаркновой, Н.Ф.Поповой, Р.Н.Степаненкз).

6. йкмуиокоиигирущее действие ¡/иелопада у больных рассеян-. . ным склерозом с нарастанием и стабилизацией активности процесса// Иммунология. - 1990. № I. - С. 55-57 (совм. с Е.И.Гусевым, С.Б. Чекневык, А.Д.Приикер, И.С.Фроловой, т.Я Деминой, А.М.Сорокиным).

7. йнтерфероновьгй статус при рассеянном склерозе/Л'ммуноло-гия. - 1920. 6. - С. 57-60 (совм. с С.Б.Чекневым, О.ИД'ункель, А.Д.Приикер, И.С.с-роловой, А.М.Сорокиным, Ф.И.Ершовым).

8. Интерфероны и другие иммуномодуляторы в коррекции активности ЕК-клеток у больных рассеянным склерозом//Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях. - Челябинск, 1990. - С. 221-222 (совм.

с С.Б.Чекневым, Я.А.Дениссвым). . чУ

9. Клиник^-иммунонейрофизиологическое испытание кислот-да при рассеянном склерозе/межобластная научно-практическая конференция по инфекционным заболеваниям нервной системы. - Кострома, 1990. - С. 136-138 (совм. с Е.И.Гусевым, Т.Л.ДеминоЯ, М.Ю.Татари-новой, Н.Ф.Поповой).

10. Корригирующие эффекты иммунотерапии у больных рассеянным склерозом//У1 Всероссийский съезд невропатологов. - !,1., 1930. -'1'. I. - С. 198-199 (совм. с А.Д.Прицкер, А.М.Сорокиным).

11. Состояние системы естественной цитотоксичности у больных рассеянным склерозом//Межобластная научно-практическая конференция по инфекционным заболеваниям нервной системы. - Кострома, 1990. - с. 182-183 (совм. с С.В.Чекневым, Т.Л.Деминой, А.Д.Прицкер).

12. Возрастная и половая вариабельность активности естественных киллеров у здоровых доноров//Иммунология. - 1991. № I. -

С. 39-43 (совм. с С.Б.Чекн'вым, М.З.Саидовым, В.В.Цветковым, Н.Б. Моисеевой, Т.Ю.Ульяновсй, Я.Г.Лозеевой, Л.В.Ковальчуком).

13. Возрастные особенности системы естественной цитотоксичности у оольных рассеянным склерозом и их возможная связь с патогенезом эаболевания//Д. Невропатология и психиатрия. - 1991. -

№2. - С. 13-16 (совм. с С.В.Чекневым, О.И.Тункель).

14. Acje-reCated ai>pecti> cj interretciticn с-1 the nature^ citctcxic. system and inter-|eron in patients with mufti-pie sctercsif, and fieaCthcj ciencr-s ^ Jcar-п. cj Interfere ; Research - W© Ann. Meet. the ISlR . Florence , It.; 27 Oct.^&Oj P. 297 (witK E.QuseVj T,Ъеп-нпа } S, Chefc»ev; A.&orokm

L. KovatVhulc).

Variafeifctij activity oj naturae Icifcier ce&s

Ln ' eatthy dencrft 0 age mu. ^ex // Wo-

rn ecke« С Sei, P. ГС-tOi (with S.Oheknev, M.Saidrv,

V.Tr,vetkov i Nf.Mclseeva , T.Wtjcii.cva ;"^.Loseevo, LKcvatHuk).

Л'/'// aVA

>/06'