Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Роль вегетативной нервной системы в регуляции гемопоэза

НБ ОД - 8 кПР '99В

На правах руюписи

КМ УСОВ Втора Альбертов»«

РОЛЬ ВЕГЕТАТИВНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕШ В РЕГУЛЯЦИИ ГЕШЮОЗА

\

14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Тонек - 1996

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте фармакологии Томского научного центра РАМН и Сибирском государственном медицинском университете.

Научные консультанты:

Академик РАМН, профессор К. Д. ГольдОорг Член-корреспондент РАМН, профессор А. И ДыгаД

Официальные оппоненты:

академик МАИ Ш, профессор Н Е Новицкий доктор медицинских наук.профессор »В.Лишманов доктор медицинских наук Е. С. Смольянинов

Вздутая организация: Институт физиологии СО РАМН (г. Новосибирск)

Зашита состоится "_"_1996 г. в_ часов на

(

еаседании диссертационного совета Д. 084.28.02. Сибирского государственного медицинского университета (634050, г. Томск, Московский тракт, 2 ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Сибирского государственного медицинского университета (г. Томск, пр. Ленина, 107).

Автореферат разослан "_"_1896 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор

"

, Н. А. Бражникоаа

Актуальность проблемы. Системе крови принадлежит решаюаая роль в формировании неспецифических и специфических реакций организма, в определении его резистентности и реактивности,в том числе в условиях экстремальных ситуаций Г Рудаков И. А. ,5953; Горизонтов П. Д., Бэлоусова О. И., Федотова U. И. , 1983; Goldberg. Dygai. 19921. В этой связи вскрытие механизмов,регулирующих жизнедеятельность кроветворной ткани в различных условиях существования макроорганизма,является одной из основных задач патофизиологии.

Согласно современным представлениям,поддержание тканевого гомеостаза в норме и при воздействии экстремальных факторов определяется комплексом принципиально однотипных взаимодействий нейро-зндокринной и локальных систем жизнеобеспечения организма t Ястребов А. П., Юшков R Г., Большаков В. Н. ,1988;Goldberg, Dygai,1992).К настоящему времени накоплено достаточное колм-чество данных,свидетельствующих о значительной роли гуморальных и клеточных компонентов геыопозз индуцирующего микроокружения (ГИМ) в развитии гиперпластических {Зимин ft И., 1S74;Зишш Ю.И. .Хаитов Р.С. .1975; Горизонтов П Д. , Еелоусова О, И , Федотова И. it ,1983;Лыгай А. И, Шахов Е а .1989; Goldberg Е. D. , Dygai А. М., 19921 и гипопластических состояний системы крови СГоль-дберг Е. Д. , Дыгай А. М. . Карпова Г. В. , 1983; Дыгай A. U. , Клнменко Е А.. 1992; Северин U. Е , КЫков Б. Г., Ястребов A. П. .19931. Доказана организующая и координирующая функции нейро-эндокринной системы в формировании и реализации общего адаптационного синдрома со стороны гемопоэза в ответ на действие чрезвычайных раздражителей, не обладавши миелоингибируюдам эффектом (Семе Г. ,1960,1972; Горизонтов П. Д. . и др. , 1983; Гольдберг Е. Д.. ДыгаЛ A. U., Захарова 0. й ,1930; Goldberg, Dygai, 19923. При этом основополагающим моментом признается наличие прямого (рецелторного) и опосредованного через факторы ГИМ вегетативного контроля процессов деления и созревания кроветворных клеток tЯстребов А. П.',Кйков Б. Г.,Большаков Е ¡1. ,19881 .значительно усиливающегося при экстремальных воздействиях £ Goldberg,Dygai. 19921. Однако, определеннач фрагментарность исследований не позволяет оценить коикр&тный вклад локальных и дистантных меленизуов ь процессы кроветворения в экстремальных ситуациях и,в большей степени, л условиях нормы (сбалансированный гемопоээ).

С другой стороны,из поля зрения патофизиологов практически

выпали важные вопросы,касающиеся механизмов функционирования и значения различных отделов нейро-эндокринной системы в регуляции кроветворения в условиях врожденных и приобретенных гипо- и аплаетических состояний. В частности, давно установлено,что наряду с повреждением клеточных систем,развитие общего адаптационного синдрома, сопровождающееся активацией гипофиз-вадпочеч-никовых и симлато-адреналовых структур, является одним иа последствия воздействия пов,)еждаюших факторов (термический ожэг,облучение,введение цитостатиков) [Докшина Г. А. ,1984; Пере-верзев А- Е., 1985; Балицкий К П., Шмалько Ю. П. , 1087; Переверзев А.Е.,Розанов Ю.Я , 19931 и сохраняется в условиях химиотерапии опухолевых процессов IБалицкий КII ,Ю«ш>ко Ю.П. ,1987}. Однако,о роли нейро-эндокринных процессов в контроле гемопозза при ци~ тостатической мнелодепрессии можно судить только по немногочисленным косвенным дадным. Например,известно,что глюкокортикои-ды снижахэт токсическое влияние антибластомных препаратов на кроветворение [ Гершанович М. Я. ,19823. Легкий наркоз галотаном существенно уменьшает чувствительность КОЕс к цитостатикам [Чертков И. Л. . «раденштейн А. Я, 1977].

Подобные исследования описательного характера не позволяют сформировать целостного представления о значении вегетативных сигналов в механизмах пролиферации и ди<М>еренцировки кроветвор-них клеток при гемодепрессиях. В связи с вышеизложенным представляется важным исследовать при помощи адекватных фармакологических методов значение вегетативной нервной системы (ВНС) в процессах регуляции гемопозза при гипопластических состояниях,обусловленных введением цитостатиков с различным механизмом действия.

Не вызывает сомнения тот факт, что реализация -компенсаторно* приспособительных реакций в конкретных органах,включая костный мозг,осуществляется посредством активации локальных регуля-торных единиц,способных транслировать и трансформировать даль-норанговые сигналы в доступную для исполнительных клеток-мишеней форму. В последние годы концепция гедаяоэз индуцирующего микроокружения является одной из наиболее перспективных с объяснении локальных механизмов регуляции кроветворения (Яауменко О. К. ,1992;Северин Н Б. .Юшков Б. Г. .Ястребов А. а ,ШЗ;Оо1<ЗЬегя, Бугаи 1992}. Ира этом усиление функциональных свойств элементов ГШ является обязательным компонентом неспецифических реакций

кроветворной ткани на воздействие различных экстремальных раздражителей (иммобилизация, воспаление,цитостатики,облучение) СГольдСерг Е. Д. и др. ,10933.В то де время нервные терминала входят; в состав Г ИМ ! Тауаззо11,1975), что позволяет выделять новую структурно-функциональную единицу,так называемый нейро-ре-тикулярный комплекс CKa2uto.Terenc9.1990].

В связи с вышеизложенным изучение общих механизмов и особенностей кейро-гормонального обеспечения пластических процессов, протекающих в кроветворной ткани в различных,часто противоположных по своей биологической направленности условиях существования организма, вызывает несомненный интерес. С одной стороны,проведение такого рода исследований направлено на решение фундаментальной задачи, а именно вскрьггие механизмов регу-ляторных влияний ВНС на геиопозз.имеюаге большое значение для разработки теории регуляции кроветворения в норме и при экстремальных воздействиях. Кроме того.с точки зрения практической медицины, применение в исследовании официальных вегетативных антагонистов и агонистов позволяет расширить наши представления о сфере использования известных фармакологических

средств,способствует разработке универсальных,патогенетически обоснованных методов Фармакологической коррекции нарушений,возникающих в системе крови в различных условиях жизнедеятельности организма.

Цель мсслодоваюы. Оценить роль вегетативной нервной системы в регуляции гемопоээа в норме и при экстремальных воздействиях различного генеза, вскрыть основные закономерности и механизмы ее влияния на процессы пролиферации и дифференцировки гемопоэтических клеток.

Основию задачи, каторш ревалмсь в работе:

1. Оценить значение вегетативных антагонистов (ганглиобло-катора,альфа- либо бета-адреноблокатора) в регуляции гемопоэза в условиях нормы (интактные мыши).

2. Показать модулирующее влияние вегетативных антагонистов на систему крови в различные периоды развития гипоплазии костномозгового кроветворения,вызванной введением высоких доз ци-тоетатиков (5-фгорурацил, циклофосфан).

3. Определить модулируюдае действие вегетативных антагонистов на кроветворение в различные периоды развития гиперпла-вии кроветворной ткани костного моага,обусловленной иммобилиэа-

ционным воздействием.

4. Исследовать направленность эффектов адренергических антагонистов на гемопоэа в условиях химиотерапии циклофосфаном опухолевого процесса

5. Вскрыть в системе in vivo возможные механизмы .контролирую®« влияний вегетативных антагонистов на функциональную активность клеток ГИМ и процессы пролиферации и дифференцировки кроветворных элементов в норме, при гемопоэзсупрессируюших (Б-фгорурацкл) и возмушаюцих воздействиях (иммобилизационный стресс).

6. Установить in vitro прямое (рецепторное) воздействие адренергических антагонистов и агонистов на процессы пролиферации и диМеренцировки коммитированных прекурсоров эритро- и грануломэноцитопоэза у интактных и стрессировачных мышей,а также у животных,получаьяих 5-фторурацил.

7. Определить обще закономерности и особенности взаимодействия ЕЧС и ГИМ в регуляции гемопозза в различных условиях кизнедеятельности организма на основе комплексной статистической обработки экспериментальных данных.

¡кыюашюа.выюскмыз иа аакиту:

1. При введении высокой дозы цитостатика (5-фторурацил) наблюдается выраженная катехоламинергическая реакция,во многом идентичная таковой при иммобилизационном воздействии и заключавшаяся в усилении выброса катехолачиноз из мозгового вещества надпочечников.

2. Применение вегетативных антагонистов (ганглиолитик, альфа- либо бета-адренолитик) в различные сроки после иммобилиза-ционного воздействия показывает,что при реакции стресс вегетативная нервная система (ВИС),в основном,чб симпатический отдел, оказывает прямое (рецепторное) ь опосредованное через усиление активности и интеграции клеток гемопоэз индуцирующего микроокружения (ГИМ) однозначное стимулирухщее влияние на коммитиро-ванные прекурсоры эритро- (КОЕ-Э) и грануломоноцлтопозза СКОЕ-ГЮ .развитие гиперплазии кроветворной ткани костного юз-га

3. Медиаторы ВНС,в первую очередь,катехоламины, регулируют гемопозз в условиях развитии гипоплазии кроветворной, тка-ь«з, обуслов пенней введением высоких доз цитостатиков (5-фторура-цил,циклофосфаи). Цэк этом введение вегетативных антагонистов

одновременно с цитостатиком ингибирует.а на 3-й сутки посла него - стимулирует восстановление костномозгового эритро- (бе-та->альфа-адренолитик.ганглиолитик) и гранулоцитопоэза (аль-фа->бета-адренолитик,ганглиолитик),клеточности периферической крови.

4. Катехоламины в условиях гемопоэзсупрессируадего экстремального воздействия (5-фторурацил) оказывают неоднозначное влияние на механизмы регуляции кроветворения. Усиливая миграцию и функциональную активность относительно резистентных элементов {Т-лимфоцитов),они,в то де время,тормозят восстановление поврежденных кроветворных клеток и элементов ГИМ (числа и секреторной способности моноцитов/макрофагов, количества гемопоэти-ческих островков и ДНК-синтеэирующих КОЕ-Э).что разобщает интеграцию процессов пролиферации и дифференцировки и,в конечном итоге, замедляет регенерацию эритро- и,в меньшей степени,гранулоцитопоэза.

5. Фармакологическая блокада вегетативных структур in vivo и in vitro в условиях нориы (интактные мыши) не вызывает заметных изменений показателей системы крови.включая колониеобраз>ю-шув способность миелокариоцитов.

Научная новизна. В работе впервые на классических экспериментальных моделях экстремальных состояний,обладающих разнонаправленным влиянием на кроветворную ткань,с применением стандартизированных фармакологических и культуральных методов изучено в сравнительном аспекте вначение ИЮ в регуляции кроветворения. Показано, что в ответ на введение высокой дозы 5-фторураци-ла (5-ФУ),как и в условиях иммсбидизациоккого стресса.развивается аналогичная по своим параметрам катехоламинергическая реакция , выражающаяся в усилении выброса медиаторов иэ мозгового вещества надпочечников. С помощью вегетативных антагонистов (ганглиолитик,альфа- либо Оета-алреноблокатор) доказано,что при стрессе в основном через катехоламины осуществляется прямое (рецепторное) и опосредованное через факторы ГИЫ однозначное стимулирующее влияние ВНС на кроветворные прекурсоры (КОЕ-Э.КОЕ-ГМ), способствующее развитию гиперплазии эритровдио-го и гранудоцитарного ростков костного мозга. При этом усиление функциональной активности ГШ включает в себя накопление Т-лимфоцитов в костном мозге,возрастание функциональной активности прилипаюаих клеток ГИМ,кооперативное их взаимодействие в про-

душки эритропоэтическай (ЭПА). колониестимулируюцей (КСА) активностей и формировании гемопоэтических островков (ГО).С другой стороны.впервые установлено,что процессы кроветворения при введении цитосгаткков (5-ФУ) находятся В еще Солее тесной по сравнен;;» с имиобилизационндо воздействием зависимости от контролирую« влияний медиаторов ВНС.в первую очередь,катехолами-нов . Экспериментально и статистически описаны интегральные ме-хаткмы ингкбируш?го í-ФУ на гемопоэз, связанные с суп-

рессией содержания в костном мозге клеток системы мононуклеар-иых фагоцитов (CMZj и секреторной активности прилипающих элементов ГКМ,протекаюэей.тем не менее, в условиях накопления Т-ляи1сщггов.о5еспеЧ1шанз1х,в свое очередь, процессы пролиферации КОЕ-ГК к.в меньвей степени, КОЕ-Э. При этом разобщение процессов пролиферации клеток с их последующей дифференциров-кой,определяемой прилипашнми миелокариоцитами,обусловливает возрастание в костном мозге концентрации КОЕ-Э и КОЕ-ГМ на фоне га»?дленной регенерации гранулоцнтарного и,в большей степе нн.эритрсидного ростка кроветворения. Получены оригинальные дан-" ¡'M:.ci¡!z--Tt'zic7hyt^:i- о том, что фармакологическая блокада веге-7íí~íízi:vx структур в различные ср~ки после назначения цитостати-ксв сиазызает юдуллруксэе влияние,d основном,на процессы лост-u¿vr с ст атс ко го восстановления кроветворения,неоднозначное в зависимости от сроков использования препаратов. Так. адренобло-катори при одновременном с 5-СУ введении нарушает, главным образе«, хоминг в костный мозг (бета->альфа-адреноли-. их секретогнув активность с соответствующим. палением числа KOS-Э л КОЕ-ГЫ (Сета-адренолитик) в S-Фазе клеточного цикла и концентрации прекурсоров в костном мозге. Кроме того, скитается количество (бета->альфа-адренолитик) клеток СШ>, ек бельке разобьется координированная деятельность неприлипа-ксях к прглклахжнх элементов ГИМ (бета-адренолитик), что,в со-Еокупности, обусловливает замедление восстановления гемопозза. В то жг время, назначение адренергических антагонистов на 3-й сутки после введения 5-СУ вызывает,в основном,усиление (бе-та->адьфа-адренолиткк) фикции поврежденных цитостатиком отделов гемопозза (увеличение числа и секреторной активности клеток Ctó5.возрастание количества гемопоэтических островков и количества ЛНК-синтезируших КОЕ-Э) с восстановлением координированного взаимодействия Т-димфоцитов и прилипающих клеток ГИМ в

процессах пролиферации и дифференцировки кроветворных клеток от коммитированных до зрелых форм. Данные механизмы обусловливают усиление темпов регенерации гранулоцитарного и.в большей степени, эритроидного ростка кроветворной ткани костного мозга. При этом направленность модулируодего действия различи!« схем вье-дения адреноблокаторов на гемогоэз сохраняется и в условиях ци-тостатического воздействия,вызванного введением циклофосфаиа здоровым либо опухолевым животным. В то жа время в обычных условиях жизнедеятельности (интактные мыши) вегетативные антагонисты не вызывают заметных изменений колониеобразования и показателей системы крови. В опытах in vivo и in vitro в различных ситуациях (норма,стресс,введение 5-ФУ) доказана определенная тропность бета-ндренергических стимулов к эритроидным,альфа-ад-ренергических - к гранулоцито-макрофагальныы прекурсорам. Впервые представлены прямые доказательства того,что катехоламины усиливают обусловленное 5-ФУ подавление пролиферации и диффе-ренцировки КОЕ-Э и,в меньшей степени,КОЕ-ГМ. В работе подчеркивается практически идентичное эффекту ад!>еноб локаторов модулирующее действие на процессы кроветворения во всех экспериментальных ситуациях ганглиолитика,блокирующего как симпатические, так и парасимпатические ганглии. В этой связи ведущим ре-гуляторнш звеном,осуществляющим вегетативные влияния на гемо-поэз,признается симпато-адреналовая система (СЛС).

Теоретическое и практическое аначоняо работы. Проведенные исследования позволили доказать важную роль ВШ,осуществляемую, главным образом,через симпатический отдел, в регуляции костномозгового кроветворения как при гемолоээсупрессирующих.так и стимулируюадх экстремальных воздействиях и внести существенный вклад во вскрытие механизмов вегетативного контроля функциональной активности ГШ, пролиферации и дифференцировки гемопоэ-тических прекурсоров в различных условиях жизнедеятельности. Представленные данные расширяет сложившиеся представления о механизмах регуляции гемопоэза в обычных условиях и экстремальных ситуациях. Выполненные исследования дополняют имеющиеся сведения о спектре применения официналышх фармакологических вегетотропных препаратов и могут служить основой разработки патогенетически обоснованных,целенаправленных способов коррекции гематологических нарушений,возникающих в экстремальных ситуациях.

Для изучения структурно-функциональных единиц костного мозга в норме и при экстремальных воздействиях Оыл предложен "Способ получения клеток костного мозга для цитологического исследования" (АС N 1721467 от 22.11.1991 г). Получен Патент N 2020936 от 15Л0.1994 г на изобретение "Средство.избирательно стимулирушее грануломоноцитопоэз при гипоплазии костномозгового кроветворения,вызванной цитостатиком".

В Роспатент поданы заявки на изобретения "Лекарственное средство, стимулирутее гранулоцитарный росток кроветворения при цитостатической миелодепрессии" (положительное решение от 05.05.1995 г. .заявка М 93016030 от 29.03.1993 г.);"Лекарствен-кос средство,стимулирушее эритроидный росток кроветворения при цитостатических миелоделрессиях" (положительное решение от 30.03.1995 г. .заявка N 92013625 от 18.12.1992) и "Лекарственное средство,стимулирушее эритроидиый и гранулоцитарный ростки кроветворения при цитостатических миелодепрессиях" (приоритет от 01.06.1993 г., заявка N 93034376).

В соавторстве с А. М. Дыгаем, О. т Захаровой и Е Б. Гольдбергом разработаны и внедрены в практику "Методические рекомендации по доклиническому изучению гемосимуляторов" под редакцией Е. Д. Гольдберга (Москва. 1992).

Материалы диссертации обобщены в соавторстве с Б. Д. Гольдбергом, А. я Дыгаем.Е Е Удутом и • С. А. Наумовым в монографии "Закономерности структурной организации систем жизнеобеспечения в норме и при развитии патологического процесса",находящейся в печати.Изд-во ТГУ,1996 г.

Апробация роботы. Материалы диссертации докладывались и обсуждались на конференции патофизиологов Урала "Системные клеточные механизмы адаптации организма к действию повреждают}!/ факторов" (Челябинск,1991).конференции "Профилактика и экспериментальная терапия экстремальных и терминальных состояний" (Омск.1992).объединенном пленуме патофизиологов и фармакологов Сибири и Дальнего Востока (Кемерово,1994),II съезде физиологов Сибири и Дальнего Востока с международным участием (Новосибирск, 1995),I съезде Российского научного общества фармакологов "Фундаментальные исследования как основа создания лекарственных средств" (Волгоград,1995),II йэждународном симпозиуме фонда медицинского обмена Японии,России и стран Северо-восточной Азии (Владивосток,1994),XVI Международном конг-

рессе рака (Ныо Дели,Индия, 1994),XII Международном конгрессе фармакологов (Мэнреаль. Канада, 1994) и VII Международном .конгрессе токсикологов (Сиэтл,США, 1995).

Публикации По теме диссертации опубликовано 45 печатных работ.

0б1ем и структура райоти Диссертация изложена на 413 страницах машинописного текста и состоит из введения, IV глав,выводов,списка литературы и приложения. Диссертация иллюстрирована 27 рисунками и 88 таблицами. Библиографический уклга-тель включает 440 источников, нэ них ¡67 отечественных и 273 иностранных.

Материалы и методы исследовании

Эксперименты проведены на 2905 мышах-самцах линии СВА, мышах-самцах П(СВАхС57В1./6), 663 неинбредных мышах-самцах (питомник "Рассвет", г. Томск) и 2 кроликах. Забор .материала для исследований осуществляли до воздействий (интактные мыши) И в течение первых 12 суток после таковых. Илией умерщвляли методом разрушения позвоночника в веяном отделе под эфирным наркозом.

Мишей подвергали следующим воздействиям: однократное вмут-рибрххшшое иве донке 5-фторурацила (5-ФУ) либо циклофос&ша (Ц4>) н дозе 1 /С М1Щ (114 и 125 мг/кг соответственно); иммобилизация п 1юлгш;11ш1 лежа на спине в течение б-Ю часов;трансплантация опухолевых клеток аденокарциноми Зрлнха либо карштош легких Льюис с последующим ведением химиотералевтичеекой дозы ЦФ (175 и 125 мг/кг соответственно).

Все вегетативные антагонисты непосредственно перед инъекцией растворяли в физиологическом растворе и вводили экспериментальным животным подкожно.в фармакологически активных дозах [Гацура а В. .Саратиков А. С. .1997). Альфа-алреисблокатор (дигвд-роэрготамин) в дозе 3,9 мг/кг,Сета-адревоблокатср (обзидаи) в дозе 5 мг/кг, ганглиоблокатор Спентшлт) в дозе б мг/кг назначали согласно слепукшш схемам: 1. Двукра-гко (эа 3-5 мин до и через 5 ч) от начала кшосилизадаи.а таю» инъекции цитостатика здоровым либо опухолевым ливотным. 2. Двукратно (через 5 ч) ин-тактнш мьгам либо на 3-й сутки от начала ишюбилизедиа, инъекции одного вз цитостаагоков здоровым животным. Контрольным животным во всех сериях экспериментов в аналогичных условиях производили иягекци» эквивалентного обгена ^апологического раствора (0,2 иг).

Подсчет общего количества миелокариоцитов (ОКК) в бедренной кости и обсего количества лейкоцитов в циркулирующей крови, приготовление мазков костного мозга и крови,анализ миело- и гемограмм осуществляли стандартными гематологическими методами. Подсчет микроядер в каждом случае проводили на 4000 эритроцитов и выражали в промилле (|*?ньшико8 а Е ,1987).Определение жизнеспособности кариоцитов осуществляли с помощью трипанового синего («римелъ Г. ,1987).

Для определения концентрации адреналина и норадреналина в медуллярном слое надпочечников применяли хрзмаффинную реакцию по Хидларпу и Хекфельту (Луппа X. ,1980). Для этого выделяли надпочечники и обрабатывали в течение 2-х дней 5 X рас гсорами хромата и бихромата калия (соотношение объемов 1:9) пои комнатной температуре и р!!-5-6.

Клонирование прекурсоров эритропоэза (КОЕ-Э) и грануломо-ноцитопоэза (КоЕ-ГМ) осуществляли посредством культивирования неприлипакаих миелокариоцитов либо клеток цельного костного мозга (1-2 х 10® клеток/мл) в метилцеллшозной культуре ткани (Гольдберг Е. Д. .Дыгай А. М. .Шахов а П. ,1992). В качестве стимуляторов роста использовал;) сыворотку крови анемизированного кролика и супернатант сплена!штов,активированных ФГА-М.В целях определения качественного состава выросших на 3-й и 7-й дни культивирования колоний (агрегатов,содержащих более 50 клеток) препараты окраиивади азуром И-эозином. Пролиферативную активность гемопоэтических прекурсоров определяли in vitro с помощью гид-роксимочевины (Si вив,США).водный раствор которой в концентрации 1,5 мг/мл добавляли на 2 часа к клеткам цельной фракции костного мозга (Гольдберг Е. Д.,Дыгай А. М. .Шахов В. П. ,1932).

Тестирование эритропоэтической (ЭПА) и колониестимулиру-х®ей (КСА) активностей супернатантов клеток костного мозга проводили микрометодом С Гольдберг Е. Д. , Дыгай А. К ,Шахов' ЕЛ ,1992]. В каждую лунку вносили 0.С5 мл кондиционной среды, добавляли 0,2 мл взвеси жизнеспособных интактных миелокариоци-тов (10^ клеток/мл) в полной культуральной среде,содержащей 1 X метилцеллшозы (Sigma,США).Культивирование взвеси клеток производили в течении 3-х либо 7-и суток в С02-инкубаторе. ЭПА и КСА выражали в условных единицах (у.е.) (количество колоний,выросших при культивировании 10® миелокариоцитов).

Количественный и качественный состав гемопоэтических

островков (ГО) изучали по, методике Crocker,Gordon (1985) в модификации СГольдберг Е. Д., Дигай А. Ы. .Шахов а П. ,1992) .используя 0,05 Z раствор коллагенааы (Signs,США), 0,1 X раствор нейтрального красного и азур 11-эозин. На основании морфологии клеток, ассоциированных с центральным элементом,выделяли следующие виды островков: гранулоцитарные.зритроидные и эритро-гранулоци-тарные.

Подсчет содержания в костном мозге элементов моноцитарнзго ряда проводили в камере Горяева (Хлусов И. А. .1995] после супра-витаяьного окрашивания ядер клеток I Х>йхоу Ф, Г.. Клаглино Д,. 1983).прилипающих к пластику, 0,1 X раствором нейтрального красного.

В качестве маркера Т-лимфоцитов использовали моноклональние антитела DT-aHTH-Thy-l (DiagnoTech Ltd,Мэсква). Цитотоксический тест ставили по методу Р. Г, Кеннет и др. (1983) с применением трипанового синего. Источником комплемента служила нетоксичная неразведениая сыворотка кролика.

Исследование in vitro влияния альфа-адреномиметика мезато-на, бета1,2-адреномиметика алупента .альфа-адреноблокатора ди-гидроэрготамина и Сета-адреноблокатора обзидана на колонкеобра-вующую способность неприлипаюимй фракции костного мозга осуществляли микрометодом в 96-луяочных пластиковых плоскодонных планшетах (Cornintr,США). Неадгезируювие миелокариоилты,выделенные из костного мозга интактных мышей, на 3-й сутки после введения 5-4У либо на 4-е сутки от начала иммобилизации,доводили до конечной концентрации 105клеток/мд культуральной среды для выращивания КОЕ-Э и КОЕ-ГМ. Клеточную взвесь помещали по 0.2 mi в каждую лунку и добавляли in vitro фармакологические агенты в концентрациях 1 нМ - 10 мкЦ, Через 3 и 7 суток культивирования подсчитывали число колоний,выросших в культуре.

Микропрепараты изучали на микроскопе Polivar и цитофото-метре Umvar (Австрия),бинокулярном микроскопе МВС-9.

Полученные дан!ше подвергались статистической обработка методами вариационной статистики с использованием програмного обеспечения IBM. В случаях нормального распределения признаков [Гмурман а Б.. 19773 для статистической оценки применяли параметрические t-критерий Стыодента и F-критерий Фишера СЛакин Г. Ф.. 1990). Цри больших отклонениях распределений признака от нормального видь использовали непараметрические U-критерий Вид-

коксона-Манна-Уитни (для независимых выборок) и Т-критерий Вш!-коксона (Лакин Г. Ф. ,1990).

Интегральный показатель (ИП) , характеризующий влияние исследуемого препарата на динамику того или иного показателя системы крови, вычисляли согласно {Новицкий ЕЕ;СЕокин Е А., Гольдберг ЕЕ. ,1990) в нашей модификации: п

Z 1-1

ИП -............ * 100 X , где

п * MjCO)

п - количество сроков измерения; Mi j - значение j-ro показателя в 1-ый срок измерения; М)(0) - исходное значение.

Оценку корреляционной связи параметров системы крови проводили при помощи коэффициента корреляции рангов,предложенного Спирменом Г Джин Г. Ф. ,1990).

Результаты нсследеванка н их обсуждение

Применение гистохимического метода выявления- биогенных аминов позволило выявить 3-х Фазный характер динамики содержания катехоламинов в надпочечниках мышей,подвергнуть« иммобили-зационному стрессу. Снижение концентрации на 6 час,1-2-е (до 52-82 I) и 4-е сутки (до 76 X от исходного) сменялось к б-м суткам эксперимента значительным увеличением показателя (на 27 X по сравнению с исходным уровнем). Другими словами,реакция хромафинной ткани на стресс-воздействие заключается в высвобождении катехоламинов СХайсман Е. Б. и др. ,1991;6iaconelU е. а ,1988), способствуххаих Формированию устойчивой адаптации различных тканей макроорганизма СПшенникова М. Г. ,1986),с последующим компенсаторным усилением внутриклеточного синтеза медиаторов. Описанные процессы полностью укладываются в рамки ней-ро-гормональных изменений,характерных для стадии адаптации (резистентности) организма к чрезвычайным раздражителям (Пшеннико-ва Ы.Г. ,198б;Хайсман Е. Б. и др. ,1991).

Вызывает интерес тот факт,что в условиях назначения мытам 5-ФУ,цитостатика из группы антиметаболитов (Проценко Л. Д. ,Бул-кина 3. П. ,19853, в дозе 1/2 МПД динамика содержания адреналина , и норадреналина в хромафинных клетках надпочечников в первые 4 суток практически не отличалась от таковой у животных,подверг-

нутых иммобилизации. Наблюдалось аналогичное снижение показателя на б час.1-2-е и сутки исследования. Подученные данные можно интерпретировать.вероятнее всего,как усиление процессов секреции КА в кровь,поскольку 5-ФУ,согласно [Проценко Л. Д. .Булкнна 3.П.. 1985),в терапевтических дозах не обладает токсическим эффектом на надпочечники (их масса даже увеличивается),вегетативные ганглии и симпатическую нервную систему (СНС).

Подтверждением предположения может служить обнаруженное авторами увеличение образования цАИФ из АТФ в ткани печени на 2-й я 6-й дни после введения фгорафура (производного 5-ФУ) с реверсией событий на 4-й день,поскольку влияние на энергетический обмен является характерным признаком симпатических медиаторов (Шамбах X и др. ,1988).Более того,результаты согласуется с установленной К. П. Балицким, й П. Шзлько (1987) динамикой экскреции КА с мочой у. опухолевых (карцинома легких Льюис) насей в процессе химиотерапии 5-<1У в дозах 100-150 иг/кг. Наблюдалось, в частности,максиизльнсе возрастание вызедешш КА на 1-е сутки после причинения цктсстаткка с возвращением к иачалы.-оы/ уровню медиаторов к 3-м суткам эксперимента [Еаг.ицкиЗ К. а .ЕЬалько И П ,1937). При этом аналогичны* процессы активации САС отмечены и в условиях применения высотах доз других цч-тостатических препаратов (I-аспарагипаза. ц^.кло'.'ос 1ан). Установлено таклг усиление выброса к&техоламннов из надпочечников при термическом о«?ге №реьерзев «.Б. ,19801 и ионизирую® й радиа- ■ ции (Докшна Г. А. ,1984; Переверзев А. Е., 1966).

Результаты исследования позволяют говорить о том, что при использовании высотах доз 5-СУ развивается активация СДС. направленная. по суагству,на'Формирование механизмов адаптации к эффектам цитостатика и вносящая сеой ёклэд в динамику постци-тостатичееких репарационных процессов меточных систем, мзлрн-цер,системы крови. В частности, обрапает па себя внкканиа тот Факт, что гипоплазия кроветворной ткани костного мозга,вызванная назначением 5-ФУ,совпадает по времени с высвобождением адреналина и норадреналииа из хремаффинной ткани надпочечников.

Действительно, при введении мышам 5-ФУ в 1/2 МПД развивалось выраженное опустошение костного мозга. Так. уже к 4-м суткам эксперимента ОКК достигало своих минимальных значений ( 14Х от исходного,Р<0,001). Анализ миелограмм показал,что гипоплазия костного мозга обусловливалась выраженным угнетением сбразова-

ния незрелых (ННГ) и зрелых (ЭНГ) форм нейтрофильных и эозино-фильных гранулоцитов.эритроидных клеток (ЭК) вплоть до полного их исчезновения на препаратах костного мозга в период с 1-х по 5-е сутки наблюдения. Кроме того.наблюдалось 3-х кратное уменьшение клеточности лимфоидного ростка гемопоэаа.

В дальнейшем отмечалось постепенное восстановление ОКК, в основном,в результате возрастания клеточности нейтрофильного ростка костного мозга,достигавшей исходного уровня к 10-12-м суткам. Тем не менее,содержание ЭК оставалось сниженными по сравнению с исходным значением в течение практически всего эксперимента. Во многом аналогичные результаты были получены ранее СМелик-Гайказян Е. а ,1980; Lerner,Harrison, 19901. При этом обнаруженная нами прямая корреляционная связь между концентрацией КА в надпочечниках и клеточностью различных ростков костномозгового гемопозза свидетельствует,по-видимому,о тесной зависимости динамики постцитостатического опустошения и восстановления костного мозга от регулирующего воздействия САС. Другими словами,выброс катехоламинов из надпочечников сопряжен с развивающейся гипоплазией костного мозга,закономерным следствием которой является значительное обеднение клеточного состава перифзрической крови и возрастание количества эритроцитов с микроядрами. Активная регенерация кроветворной ткани начинается в фазу послеследового накопления нейромедиаторов в хромзффишшй ткани железы (6-8-е сутки эксперимента).

Известно,что при помовд нейротропных ведеств мокло управлять неспецифической сопротивляемостью организма за счет регуляции реакции стресс,неизбежно возникающей в экстремальных ситуациях [Самунджан Б. М. ,19811.0 этих позиций интересными оказались данные о возможности контролировать процессы репарации кроветворной , ткани при помощи адренергических антагонистов. В наших экспериментах совместное с 5-ФУ введение альфа- (AAA) либо бета-адренергического антагониста (БАА) первоначально сникало выраженность гипопластического состояния костного мозга на 3-й и 6-е сутки исследования вследствие менее значительного падения числа лимфоидных клеток. С другой стороны,начиная с 7-х суток,отмечалось обусловленное AAA и БАА замедление процессов регенерации кроветворения по сравнению с мытами,получавшими один цитостатик.В частности, наблюдалось статистически значимое уменьшение а костном мозге количества ЭК и ННГ. с нарушением их

дифференцировки в зрелые формы на 8-10-е сутки эксперимен-таЛак.к 8-м суткам содержание ЗНГ оказалось в 8-9 раз сниженным по сравнению с таковым в контроле (один цитостатик), В периферической крови замедлялись процессы постцитостатического восстановления лейкоцитарной формулы. Кроме того,резкое увеличение по сравнению с одним цитостатиком содержания эритроцитов с микроядрами на 1-е сутки эксперимента можно связать,прежде всего,с нарушением механизмов их элиминации,обусловленным непосредственным эффектом адренергических антагонистов.

Противоположным оказалось влияние AAA и БАА на гемопо-зз,подавленный 5-ФУ,при их назначении на 3-й сутки после ци-тостатика.в период,предшествующий вторичному выбросу НА из надпочечников (см.выше). Применение адренергических антагонистов приводило,начиная с 7-х суток исследования,« значительному усилению постцитостатического восстановления кроветворения,сопро-■ воздавшемуся ускоренным возрастанием ¡^неточности нейтрофилыюго ростка костного'мозга и периферической крови до исходного уровня и выше к 9-12-м суткам. ИП для незрелых нейтрофильных грану-доцитов при введении ДГЭТ либо обзидана в 1,5-2 раза (Pf<0,05;Рт<0,05) превышал таковой, у мышей,получавших один 5-ФУ (табл.1). Кроме того,наблюдалась резкая стимуляция эритро-поэзаВ частности, количество ЭК в костнсм мозге мышей, получавших AAA либо ВАА,возрастало к 9-м суткам в 5-9 раз и в 2,5-4,5 раза соответственно по сравнению с цитостатическим контролем и начальным уровнем. При этом в циркулирующей крови число эритроцитов с остатками ядерного материала снижалось практически до исходного уровня в период,предшествующий активной регенерации костномозгового эритропозза.

Необходимо подчеркнуть,что назначение мышам пентаадна, блокирующего вегетативные ганглии с нарушением выделения как симпатических, так и парасимпатических медиаторов Г Аничков С. а, 19823, оказывало на геыопозз,подавленный 5-ФУ, модулирующее действие,во многом идентичное адренергичэским антагонистам, в основном,препятствующим воздействию RA на рецепторнкй аппарат клеток С Аничков С. а, 1982). Можно предположить, что холинерги-ческие структуры не принимают сравнимого с гатехоламинами участия в регуляции кроветворения при цитостатической миелодеп-рессии. Тем более,что отсутствие выраженного гемопоззмодулирую-иего эффекта у М-холиноблокатора показано нами ранее на модели

иммобилюационного стресса t Гольдберг Е. Д. и др. , 1991; Дыгай А. М. и др. ,19911. Высокая протекторная эффективность ганглиоли-тико8,алы}а- и бета-адреноблокаторов,но не М-холиноблокато-ров.при поражениях различных внутренних органов в условиях сверхсильных экстремальных воздействий показана С Аничков С. В. ,19821. С другой стороны, представленные нами данные не исключает синергично'сти холинергических и адренергических влияний на гемопо.ээ.как это предполагается Byron (1972:1974) в отношении клеточного цикла КОЕс.

С наией точки зрения, на зависимость постцитостатической регенерации кроветворения от активности CAO, указывают и эксперименты с алкилируюсим агентом циклофосфаном (ЦФ),имеющим, во многом отличные от 5-ФУ механизмы цитоповреждающего эффекта (Герпанович М. Л , 1982;Проценко Д. Д. .Булкина 3. а .1905),но также приводящего к стимуляции стресс реализующих систем организма I Балицкмй К П., Шмаль ко Ю. ÏL , 1987). Совместное с И» введение мышам одного из вегетативных антагонистов приводило к еше более выраженному,чем при использовании 5-ФУ, подавлению восстановления клеточности костного мозга и периферической крови. В то же время, применение ганглиоблокатора.ААА либо БАА на 3-й сутки после введения ЦФ в 1/2 МПД вызывало заметное увеличение содержания ННГ.ЭК и, в меньшей степени.ЗНГ. При этом в циркулирующей крови отмечаются процессы, во многом аналогичные таковым при использовании вегетативных антагонистов на 3-й сутки после 5-ФУ (ускорение восстановления числа нейтрофильных лейкоцитов и уменьшение уровня эритроцитов с микроядрами,предшествующее регенерации костномозгового эритропоэза).

Согласно (Гусач II П. и др. .19811 как недостаток,так и избыток гормональных веществ является неблагоприятным фактором в формировании оптимальной згодны организма от,экстремальных воздействий. В связи с этим можно заключить,что вторичная волна неспецифической активации САС в ответ на введение цитостати-ков.в отличие от первой,является в функциональном плане негативной для механизмов,обеспечивающих регенерашш кроветворной ткани. Интересно,что подобные закономерности описаны в условиях радиационного воздействия и для глюкокортикоидов ГДокиина Г. А. ; 1984; Переверзев А.Б. ,1986).повышающих в экстремальных ситуациях эффективность функционирования САС СТеппермен Еж. .Теппермен X,19891.

Существует мнение,что противоопухолевые препараты тормозят пролиферацию или повреждают опухолевые клетки,а окончательное их разрушение и рассасывание осуществляется защитными механизмами организма СБулкина 3. П. ,1981],в значительной мере страдающий в процессе цитостатической терапии £ Гершанович М.Л. ,1982).В частности,однократное введение ЦФ в дозе 175 мг/кг на 2-е сутки после перевивки мышам клеток опухоли Зрлиха.наряду с торможением роста опухоли (до 49 X к 9-м суткам эксперимента) приводило к развитию выраженной гипоплазии костного мозга. При этом быстрое восстановление процессов нейтрофиломоноцитопоэза протекало на фоне длительного (до конца периода наблюдений) падения числа эозинофилов,лимфоцитов и эритрокариоцитов.что имеет место и при назначении ЦФ здоровым, мышам.

Известно,что уже на 1-3-и сутки после перевивки опухолей отмечается активация САС,усиливающаяся в процессе химиотерапии [Балицкий К. П. .Шмалько XI П. ,19873. Совместное с ЦФ" назначение животным бета-адренолитика вызывало усиление (по сравнению с цитостатиком) процессов дифференцировки ННГ в зрелые формы, увеличение числа моноцитов, кратковременное возрастание в костном мозге содержания лимфоцитов и тенденцию к увеличении количества ЭК. Аналогичная направленность действия наблюдалась при использовании альфа-адренергического антагониста.

Таким образом,антистрессорное действие адренергических антагонистов, позволяющее в определенной степени снизить влияние катехоламинов на костномозговые клетки,поврежденные цитостатиком.способствует ускорению темпов регенерации кроветворной ткани и в условиях химиотерапии опухолевого процесса. При этой практически не страдает эффективность цитостатической- терапии асцитной опухоли Зрлиха. Более того,отмечается тенденция к усилению противоопухолевых свойств ЦФ в отношении первичного узла аденокарциномы легких Льюис (альфа- > бета-адренолитик) и увеличению его антиметастатического эффекта (бета- > альфа-адрено-лнтик) при одновременном с ним назначении адренергических антагонистов.

В то же время феномен гиперплазии эритроидного и грануло-цитарного ростков костного мозга,закономерно развивающийся при б-10-часовой иммобилизации,является,по-существу,одним из неспецифических соматических проявлений активации нейро-эндокринной системы (Горизонтов П. Д. и др., 1983;ОэМЬегг,Буда!, 1992). При

этом стимуляция гемопоэза в 1-е сутки (реакция тревоги общего адаптационного синдрома) [Рудаков И. А. ,1963],а также.на 4-8-е •сутки (стадия резистентности) (Рудаков НА. ,1963; Шахов В. П., 1930) от начала стресс-воздействия соответствует двухфазному выбросу катехоламинов из надпочечников.

Одновременное с 6-часовой иммобилизацией назначение ганг-лиоблокатора либо бета-адренолитика приводило к замедлению развития постстрессорной гиперплазии гранулоцитарного ростка костного мозга и полной отмене активации зритропозза. При этом снижение КП (до 95 X),характеризующее супрессирующее влияние обзи-дана на динамику содержания ЭК в костном мозге,достигало статистических различий (Рт<0,05) со стресс-контролем. Аналогичные данные для Сета-адренолитика были получены С Михайлов а а и др. ,19801 и на модели острой кровопотери. Оказалось,что введение обэиданз до кровопускания приводит" к резкому угнетению в костном мозге животных пролиферации незрелых эритрондных элементов и увеличению содержания незрелых нейтрофильных гранулоцитов. Ин-гибирумцее действие препарата на ответную реакцию эритрона к гипоксическоку стимулу с нарушением процессов эрэтроидной диф-ферениировкн показано (Ганчэв Т.е. .Новиков ЕМ ,1978).В то же вреяч.альфа-адренергический антагонист вызывал нарушение стимуляции в основном гранулоцитопоээа.

В услоы'.;',х использования вегетативных антагонистов па 3-й сутки после иммобилизации также отмечался супрессируввий эффект на процессы активации эритро- и гранулоцитопоэза, инвертированный для гангдиолитика и альфа-,но не бета-адренолитика.

Таким образом, при отсутствии выраженного повреждения клеточных систем,катехолаыикы играют,без сомнения .однозначную позитивную роль в формировании механизмов резистентности кровет-, ворной ткани к ««мобилизационному стрессу. По-видимому,позитивной Судет роль гормонов шагового слоя надпочечников в регуляции гемопоэза и при других экстремальных воздействиях,не обладающих маелоингибкруюшш эффектом. В частности, введен»:е интаот-ным мызам адреналина в дозе 1 мг/кг моделирует,наряду с глюко-кортикоидами, неспецифические гематологические проявления реакции стресс на различные раздражители (иммобилизация,электро-раздражеиие,ниточная нагрузка, холод и др.) £ Горизонтов П. Д. 5! др. ,1983).

Согласно мнению ССаркисов Д. С. ,1987; Северин М. Е .Юпков

& Г. .Ястребов А. П., 1993), в регуляции репаративиой регенерации органов и тканей после экстремальных воздействий участвуют механизмы, которые либо отсутствуют.либо слабо выражены при физиологической регенерации. В наших экспериментах введение интактным мышам одного из вегетативных антагонистов (ганглиоблокатор,альфа- либо бета-адренолитик) не оказывало в последуигие 5 суток исследования заметного как по амплитуде,так и длительности, влияния на количественные показатели системы крови по сравнению с животными,получавшими физиологический раствор. Необходимо подчеркнуть, что использованные дозы препаратов определяйся для мышей как эффективные терапевтические дозы.по биологическому эффекту соответствующие 1/10 - 1/20 ДД50 и вызывайте отчетливый ганглиоблокирующйй,альфа- либо Сета-адренолитический эффект СГацура'&а .Саратиков А.С. ,1977). Хроническое применение больших доз адренергических блокаторов в клинике и эксперимента (Алехин Е.К. н др. ,1993;Ртк,р1БЬег,19771 показало,что если гематологические изменения и возникают.то в отдаленные (через месяц и более) сроки лечения. 11з вышеперечисленного логично вытекает заключение об отсутствии у препаратов при их однократном назначении собственных влияний на кроветворение,не связанных с вегетативными механизмами. Кроме того.формируется представление о незначительной (по сравнению с экстремальными ситуациями) роли Е!!С в регуляции гешпоэза з нормальных уелсз:ш х:заедел-тельности организма.

Ранее в условиях нанесения травмы ШЮ.перерезг-н спинного мозга либо седаяиадюго нерьа были обнаружены отсроченные изменена реактивности сжтет крови, причисленные авторами к расстройствам дистрофического характера С Гольдберг Д. М ,1352; Чзрииговсгай К Н. .ЯросэвскиЯ А. Я. ,3253; Черниговский ВЛ1,0зу?ер С. &,Ярозевский Л. Я . 10073. При этом в ряде рсбот под-фриша-ется.что в подобных ситуациях функцга кроветворных органов нарушается только при дополнительных экстремальных воздействиях СКуватов Р. Г. ,1933; Павлов А.Д. .Мэряэкова Е.&,1987; НоПтуог, 1933). Известно, что ЕШ, наряду с эндокринной и гс.с/ушюй системами,составляет единую трофическую систему жизнеобеспечения организма [ Крыганонский Г. Н. ,1990). Ш-видкшму,в регуляции интактного гемопоэза точкой приложения ЕШ является контроль обмена веществ и потребивши кислорода £ Чгрниговскнй а !1, Шзх-тер с. И. .Ярошевский А. Я. .1967; Рябов С. И. ,1971), трофогенноэ

воздействие на внутриклеточные метаболические процессы [Ястребов А.П. .Юшков В. Г. .Большаков R H. ,10881 в кроветворных и .строгальных элементах костного мозга,регулирующих,в свою очередь, пролиферативный потенциал гемопоэтических клеток СДыгай А. М.,Шахов ЕЕ,1989; Шумейко О. И. ,1992; Ziporl, 1989].

В этом плане интересным выглядит выделение Kazuto,Terence (1990) новой анатомической единицы - нейроретикулярного комплекса, связывающего в единое целое кроветворные клетки со стро-мальными элементами,контактирующими,в свою очередь, с эфферентными вегетативными окончаниями. Наличие тесного контакта нервных терииналей с лимфоцитами,макрофагами и другими клетками кроветворной ткани показана в работе САс'кегтап е.а, 1986). Поскольку трофическое обеспечение развивающихся гемопоэтических клеток является одной из функций стромальных мехакоцитов.в частности, макрофагов, как в норме,так и при чрезвычайных воздействиях (Ястребов А. П. .Юаков Б.Г. .Большаков В. Е , 1988) .можно предположить,что основное влияние ВНС на сбалансированный гемо-поэз опосредовано через систему ГШ Таким образом, учитывая мнение Л.А.0рбели (1961,1962,1964) о том,что с эволюционной точки зрения функция любых органов вначале характеризуется автономностью и связь с нервной системой возникает на более поздних ступенях эволюции,следует говорить о преимущественном значении в контроле интактного кроветворения локальных механизмов (факторов ГЮ.0,обладавши высокими регуляторными возможностями.

Следует подчеркнуть,что роль различных отделов ГШ в регуляции активности кроветворной ткани существенно возрастает при экстремальных воздействиях,отличавщихся по своей природе и биологической направленности (иммобилизация,воспаление. введение цитостатиков,облучение и т.д.) СГольдберг Е.Д. и др. ,19933. Так,в четности,у мышей,подвергнутых 10-часовой иммобилизации, развитию феномена гиперплазии костного мозга предшествовало накопление Thy-1+ клеток (Т-лимфоцитов) на 2-7-е сутки от начала иммобилизации с достижением максимальных значений к 3-м и 5-м суткам эксперимента.В интактном костном мозге содержание Т-кдеток незначительно СЯрилин . А. А., Мирошниченко И. Е .Шичкин ЕП. ,19903 и они не играют существенной роли в регуляции сба, лансированного гемопоэза IДыгай А.М. .Клименко а А. ,19923. •

lb имеющимся представлениям Т-клетки,мигрирующие в костный мозг,стимулируют процессы пролиферации и дифференцировал коыми-

тированных прекурсоров эрит'ро- и грануломоноцитопоээа При этом прослеживается последовательная смена субпопуляций Т-лимфоци-тов,контролирующих кроветворение:незрелые клетки (4-е сутки) -хелперы (6-е сутки) - сгупрессоры (8-е сутки) tGol'dbersr е.а ,1990]. В основе активирующего влияния Т-клеток на клеточный цикл гемопоэтических прекурсоров,помимо прямого эффекта СЯрилинА-А., Мирошниченко И. В. . Шичкин Е Л.. 1990; Ruscetti, Chervenick, 1975-,Nathan е.а, 19783, лежит их действие через клеточные элементы ГИМ СДыгай А.М. ,Шахов Е П. ,1989;Gordberg,Dygai, 19921.контролирующие пролиферацию и дифференцировку посредством межклеточных контактов СДыгай А. М. .Шахов Е а ,1989;Нзуменко 0. И.. 1992) и секреции гемопоэтинов С Натан Д. Г. .Зифф К. А. ,1994; Kurland,Moore,1977; Rich е. а.1982; Gol'dberg,Dyeai,1992).

В наших экспериментах возрастание содержания Т-лимфоцитов в костном мозге мышей.подвергнутых иммобилизации,сопровождалось значительным усилением выработки ЭЛА (до 883-3333 X от исходного уровня) и КСА (до 550-1100 X от исходного) как прилипающей, так и неприлипающей фракциями соответственно ЛПС либо Кон А стимулированных миелокариоцитов. Следует обратить вниманне на более высокие уровни продукции монокинов (ИП-469-769 X) по сравнению с лимфокинами (ИП-272-456 7. ) и прямую корреляционную зависимость между динамикой накопления Thy-1-позитивных элементов в костном мозге и выработкой КСА адгезируюдами клетками, стимулированными ЛПС - митогеном моноцитов/макрофагов СКо-вальчук Л. Е , Чередеев А. Н., 19913. Кроме того, можно говорить о тесном сопряжении между продукцией ЭПА и КСА в прилипающей и неприлипающей фракции костномозговых нуклеаров,выработки КСА между адгезирующимн и неадгезирующими клетками.

Полученные данные свидетельствуют о кооперативном взаимодействии Т-лимфоцитов,мигрирующих в костный мозг,и моноцитов/макрофагов в процессах продукции гемопоэтинов.определяющих, в свою очередь,увеличение выхода зритроидных (до 311 X от исходного,3-й сутки) и гранулоцитомакрофагальных (до 356 X от начального уровня,4-е сутки) колониеобразующих единиц. Возрастание ЯП практически на 100 X по отношению к исходному колониеоб-разованию подчеркивает длительную стимуляцию пролиферации и дифференцировки гемопоэтических прекурсоров. При этом для сти-' муляции КОЕ-ГМ и КОЕ-Э при иммобилизационном стрессе имеет значение не только секреторная активность клеток ГИМ,но и воз-

растанке плотности межклеточных контактов.поскольку наблюдается резкое возрастание в костном мозге числа ГО,особенно,эритровд-вых {КП-287 X) структурно-функциональных единиц,обеспечивай®« развитие кроветворных клеток от коммутированных до зрелых форм [Наум?нко О.И. .1992;Crocfcer,Gordon, 1935J.

Дри назначении 5-СУ в 1/2 ЩД важный является то обстоятельство. vro уже в период ыаксишльного опустошения костного мозга формируются механизмы, направленные на обеспечение процессов постшггостатического восстановления кроветворной ткани. Tax, например, увеличение содержания в костном мозге Thy-1+ кдэток (Т-лимфоцитов) наблюдалось с 4-х суток и достигало мзксимадьша величин в условиях цнтотоксического теста на б-е (22.76+2.74 Z.PvO.OQl) и 9-е' сутки (14.96U.52 Z,P<0.001) эксперимента, сопровождаясь соответствуют! возрастанием абсолютного числа лкм;оидных клеток. Установлено, что ткдацеты.мигри-руюсие в костный ыоэг при введении 5- СУ, обусловливаю? процессы пролиферации и дв^^еренцироЕки ЕОЕе СШлик-ГаЯказян Е. В., 1980]. восстанавлигакся свои популяциэ на 5-7-й дни исследования tKo-вкнец Г. К. .ГольЕберг Е. Л . 1532]. При этом для действия шггоста-ткка характерно езксвлекке пре-ШЕс. практически кг чувствительных к препарату iLerner.Karrison.1990) в отличие от более дифференцированных прекурсоров [Кэзцнец Г. II, ГогьдОерг Е. Д. ,19821.

Б нзсзгх экспериментах концентрация эрктродных { КОЕ-Э) и грааухошкоцитарных {КОЕ- I'M) коммкткровэнных предшественников в костном шзге практически на прстяиати всего периода наблвде-шШ (3-10-е сутки) превышала исходные показатели. ИП превышал 100 Z-кыа начальный уровень более чем в 4-17 раз (табл. 1). Одна-ка,статистически екачндае повышение абсолютного количества КОВ-З и КОЕ-ГУ,находящихся в S-фазе клеточного цикла. отмечалось только с 7-х суток с 'достижением максимального уровня синтеза ДНК к 8-н суткам опыта.

Таким образом, возрастание концентрации коммутированных ге-мопоэтических прекурсоров в первые 3-6 суток после применения 5-5У можно связать,по аналогии с про-КОЕс,с их меньшей чувствительностью к цитостатику по сравнению с отделом морфологически идентифицируемых клеток, «неточность которого в эти сроки практически не определялась. Значительное превышение величин ИП для ЮЭЕ-ГМ над таковыми для КОЕ-Э (табл.1),а также темпов восстановления граиулоцитопоэза по отношению к эритропоэзу подтверд,-

дает существующее представление о большей резистентности к цн-тостатику гранулоцито-макрофагальной линии дифференцировки гемопоэтических прекурсоров С Козинец Г. И., Гольдберг Е. Д. ,1982].Считается,что помимо прямого повреждающего эффекта 5-ФУ на быстро пролиферирующие эритроидные клетки [Козинец Г. И.,Гольдберг Е. Д, ,1982] .имеет место,по крайней мере в условиях облучения,детерминированная гранулоцитарная линия дифферен-цировки КОЕс через мигрирующие в костный мозг Т-лимфоциты и/или клетки микроокружения [Манько а М. ,1984) .поскольку направленность созревания прекурсоров сохраняется и в условиях Т-клеточ-ного дефицита,например,при тотальном облучении {Гольдберг Е. Д., Дыгай А. М. , Карпова Г. Е ,1983; Манько Е М. ,19341. По-видимому, в условиях гемопоэзсупрессируюшлх воздействий речь идет о повреждении клеток ГИМ,ответственных за регенерацию зритроидно-го ростка гемопоэза.а Т-лимфоциты усиливают функциональную активность резистентной стромы.

Действительно, существует преимущественная анатомическая связь, лежащая , в основе функционирования ГО CCrocker.ttordon, 1985),эритрондных клеток с центрально расположенным макрофагом [Zakharov,Prenant,1982.1983),миелоидных - с ретикулярными фиб-' робластоподобными клетками IV типа СПауменко 0. И. .1992).Оказалось, что введение б-ФУ в 1/2 ШТД в значительной степени снижает (до Э X от исходной величины,4-е сутки) содержание в костном мозге клеток моноцитарного ряда в течение всего эксперимента (ИП-32-43 X) (табл.1).Ib мнению И. Л.Гериановича (1982),это происходит в результате избирательного ингибируюаего действия препаратов- антиметаболитов на их пролиферацию. Креме того,отмечается длительное угнетение деятельности купферовских клеток печени (Проценко Л. Л , Еулкина 3. П. ,1985], имеющих моноцитарное происхождение СЫаянский A. R .Мзянский Д.Е ,19891. При этом 5-ФУ ингибирует формирование ГО. в основном, эритроидных ( КП-5 2) ' и зритро-гранудоцитарных форм (ИП-15 X) клеточных ассоциаций на протяжении всего срока наблюдений (табл. 1).В то же время грану-лоцитарные ГО после периода длительной деструкции восстанавливают свое содержание к 10-м суткам опыта (до 9,95 + 0,95 х 103/бедро.151 Z от исходного,Р<0,05).

Интересно.что только к 10-11-м суткам восстанавливается способность прилипающих миедокариоцитов продуцировать ЗПА и КСА а спонтанном и стимулированном ЛПС тесте в ответ на экстремаль-

ное воздействие,связанное с введением цитоста'1 ика. По-видимому, Б-ФУ снижает как численность,так и секреторную активность моноцитов/макрофагов. Последнее может быть связано,в частности,с ингибицией внутриклеточного синтеза белка [Проценко Л Д. ,Еулки-на 3. П. ,1985]. При этом падение ИП для некоторых гемопоэтинов (ЭИА нестимулированная и КСА стимулированная).секретируемых прилипающими нуклеарами.до 91 X от исходного уровня (табл.1) подчеркивает повреждающее действие антиметаболита на данный тип клеток ГИМ. Вместе с тем,в неприлилакщей фракции ГИМ наблюдалось относительно более раннее (с 7-х суток) и высокое по амплитуде (средний ИП*241 X при 142 X у прилипающих клеток,п-4) возрастание секреторной активности.усиливающейся при добавлении в культуру клеток костного мозга Кон А (табл. 1).являющегося митогеном Т-лимфоцитов ГЯрилин A.A. .Мирошниченко И. В. .Шичкин ЕЕ ,1990).

Таким образом,в основе длительного супрессирующэго воздействия Б-ФУ на гемопоэз лежит его повреждающее влияние на клетки моноцитарного ряда,сопровождающееся разобщением их кооперативного с Т-лимфоцитами участия в продукции цитокинов. Патологическое разобщение механизмов гемэпозза отмечается и в условиях радиационного воздействия (Ястребов А.Е.Юшков Б. Г. .Большаков ЕЕ , 1968). Следствием ингнбиции моноцитов/макрофагов является выраженное нарушение формирования ГО (особенно зритрдпд-тк форм) .секреторной активности прилипающих клеток П1Ч (табл. 1). При этом тесная корреляционная взаимосвязь данных отделов кроветворения между собой и .с отделом морфологически распознапаемых элементов обусловливает нарушение фушшиЛ юко-цитов/макроФагов как лимитируккее звено в механизмах восстановления клеточности костного мозга.подавленного 5-ФУ. Быстрое' нарастание пролкферативной активности гемопозтичееккх прекурсоров (табл. 1).обусловленное секреторной деятельностью,в основном, неприлилавщих клеток ГШ {мнгрирую:з:х в костный мозг Т-лимфоцитов), оказывается для регенерации гранулоцитопозза и,в большей степени,эритропоэза неэффективным, поскольку полностью разрушается корреляция процессов пролиферации клеток с их последующей дифференцировкой в зрелые элементы в составе ГО. В этой связи накопление КОЕ-Э и КОЕ-ГМ на фоне гипоплазии кроветворной ткани можно считать характерным для 5-ФУ процессом (табл. 1)'.

Безусловно,природа экстремального фактора непосредственно

сказывается на особенностях реакции кроветворной ткани,выражающейся,в конечном счете,в продукции тех или иных специализированных клеток. Тем не менее,наличие в структуре совершенно различных по своей природе экстремальных воздействий (иммобшшза-ционный стресс,введение 5-ФУ) общих неспецифических моментов (накопление в костном мозге Т-лимфоцитов,активация компонентов ГИМ и клеточного цикла кроветворных прекурсоров),составляющих, по сути,локальную основу компенсаторно-приспособительных процессов CGoldberg,Dygai,1992),а также тесная структурно-функциональная взаимосвязь локальных и нервных механизмов контроля гемопоэза неизбежно ставит вопрос о существовании единых вегетативных принципов обеспечения физиологической и репаративной регенерации кроветворной Ticami.

Действительно, назначение БАЛ одновременно с 5-ФУ либо им-шбилизационным воздействием приводило к выраженному уменьшению накопления Thy-1+ глеток в костном мозге (табл. 1).Считается,что именно при участки бета-адренергических структур реализуются процессы миграции лимфоцитов в костный мозг [Горизонтов П. Д. и др. ,1983). Тем не менее,введение АЛЛ та1те снзшзапо снижение количества T-jnMioraToB при имюЗшиэацковгюи стрессе и, в менылея степени,п усдогиях применена цитсстоткка (табл. 1). Как сда«стви9,ааренергп'кск!» еятагсяксты существенно каптировали Сальфа->бета-адренолиткк) обусловленную стрессом усиленную продукцию ЗПА н КСА ноприлилашимя и прилилапзяки элементами ГИМ. В частности, согласно Ш. дкгидрозрготамин (ДГЭТ; обусловливал 2-х кратную супрессию КОД и более чем 3-х кратное снижение ЗИЛ су-яерштаятсв соответственно ноадгезируеткс а адгезирутаис >а:ело-кариоцитов. При этом полностью нарушалось характерное для иммо-бллиааиконного стресса кооперативное взаимодействие Т-лимфоцитов и макрофагов в процессах секреции цптокшюв.

Кроме того,введение адреноблокаторов способствовало уменьшению содержания в костнсм мозге ГО.особенно эритроидных и зритро-гранулоцитарных форм до исходного уровня (альфа-atpsполитик) и нижа {бета-адренолиткк). Так,например,обзидан вызывает 10-кратное уменьшение (Pf,PT<0,05) ИП эритроидных ГО до 23 % от исходной величины. Другими словами, на протяжении всего экспери мента уровень данного типа клеточных ассоциаций близок к нулевому значению. В этой связи не вызывает удивления и вызванное AAA и БАА достоверное падение содержания в культуре костного

- 26 -

мозга коммитированных прекурсоров типа КОЕ-Э и КОЕ-ГМ.

Снижение корреляционных взаимоотношений (более чем в 2 pasa, Pf <0,01) между параметрами костномозгового кроветворения наряду с уменьшением эффективности гемопоэтических свойств элементов РИМ у стрессированных мышей,получавших адренергические антагонисты, подчеркивает определяющее значение САС в стимуляции функций "и координации клеток ГШ и кроветворных прекурсоров, обеспечивающих, в свою очередь,необходимую численность зрелых клеток' для адекватного ответа системы крови на экстремальные воздействия,не обладающие миелоингибируюшим влиянием. Способность вегетативных антагонистов оказывать ингибируюдай эффект на гиперплазию костного мозга независимо от сроков введения (см. выше) свидетельствует о позитивной роли катехоламинов в формировании механизмов кроветворения в условиях стресса,не сопровождающегося значительным повреждением клеточных систем.

Интересно,что процессы,обеспечивающие замедление регенерации кроветворной ткани при совместном с 5-ФУ введении вегетативных антагонистов оказались во многом идентичными таковым при иммобилизационном стрессе. Ранее отмеченное уменьшение (БАА>ААА) миграции Т-лимфоцитов в костный мозг сопровождалось на 7-8-е сутки достоверным снижением секреторной активности неприлипаю-ших миелокариоцитов. ИП (для п-4) падал с 241 % в цитостати-ческом контроле до 135 Х- (пентамин) -142 7, (обзидан) -146 X (ДГЭТ), тогда как деятельность адгезирующих элементов ГИМ практически не менялась либо даже возрастала (КСА при стимуляции ЛШ,обзидан,пентамин) (табл.1). В эти же сроки резко снижалась пролиферативная активность КОЕ-Э (альфа- и бета-адренолитик) и КОЕ-ГМ (бета-адреноблокатор) с соответствующим уменьаением концентрации коммитированных прекурсоров во всех фракциях костного мозга (табл. 1).

Отсутствие модулирующего влияния AAA на содержание' ДНК-синтезируквдх КОЕ-ГМ может быть связано с тем,что некоторое падение (по сравнению с 5-ФУ) КСА кепршшпающих клеток (табл. 1) компенсируется ее увеличением на 8-е и 10-е сутки ошда в цельной фракции миелокариоцитов,отражающей кооперативное участие клеток ГИЫ в продукции гемопозтинов. В условиях подавления CUS, обусловленной 5-ФУ, в качестве акцепторов Т-кдеток, все-таки поступающих в костный мозг при введении AAA, могут выступать и фибробласты, способные продуцировать КСА tVillem е. а.1988) и

формировать клеточные ассоциации с гранулоцитарными клетками ГНауменко О. И. ,19923.

В структуре корреляционных взаимоотношений разрушалась связь показателей в отделах прекурсоров и гейопозтинов ,а также - между данными отделами. В совокупности с появлением отрицательных корреляций, полученные данные свидетельствуют о том,что введение адренергических антагонистов совместно с 5-ФУ,ингиби-руя миграцию и секреторную активность Т-клеток,увеличивает характерное для шггостатика разобщение различных компонентов ГЙМ в регуляции процессов пролиферации и дифференцировки кроветворных клеток от коммитированных до зрелых форм. При этом БАА по сравнению с AAA обладает более выраженным суп рессирушим влиянием на миграцию и функциональную активность Т-лимфоцитов, их регулирующее взаимодействие с КОБ-ГМ (табл. 1).По-видимому,именно через Т-лимфоциты, способные при экстремальных воздействиях управлять функциями CMS (Gol'dberg.Dygai, 19923 .опосредуется выраженный по сравнению с ДГЭТ ингибирующий эффект обзидана на количество костномозговых моноцитов и меньшая способность прилипающих клеток регулировать клеточность костного мозга,особенно регенерацию гранулоцитарного ростка (табл.1).

Применение вегетативных антагонистов одновременно с назначением 5-ФУ в связи с. их быстрой фармакодинамикой (Аничков С. Е , 1982; Чекмая И. С. и др. ,19873 ограничивает, вероятнее всего, соматические эффекты только первой волны секреции КА надпо-. чечниками. Исходя из перечисленных выве супрессирущих эффектов вегетативных антагонистов на гемопозз,следует заключить,что именно реакция САС, формирующаяся в момент введения цитостати-ка,обусловливает, в основном,через бета-адренергические структуры, миграцию Т-лимфоцитов в костный мозг,стимуляцию их секреторной активности,обеспечивающей процессы пролиферации прекурсоров зритро- и,в большей степени,гранулоцитопоэза. Аналогичные моменты активации зафиксированы наш при иммобшшзацион-ном стрессе. При этом достаточная отсроченность эффектов при назначении высокой дозы цитостатика обусловлена,во-первых,выраженной первичной фазой деструкции клеток. Кроме того,согласно (Балицкий К. Е ,ИЫалько Kl П. ,19873 .стимуляция САС на несколько суток (по крайней мере,до 4-х) предшествует изменениям функциональной активности лимфоцитов. Тем. не менее, в условиях повреждения СМФ,вызванного 5-ФУ, нарушаются процессы кооперации эле-

ментов ГИМ, дифференцировки кроветворных клеток,что приводит к длительной гипоплазии костного моага на фоне повышенного в нем содержания КОЕ-Э и КОЕ-ГЦ.

Среди последствий воздействия повреждающих факторов выделяют два явления:1) синдром первичного повреждения клеточных систем и 2) неспецифический ОАО,возникающий в ответ на чрезвычайный раздражитель. Вне зоны агрессии не исключается прямой вклад нейро-эндокринной системы в реакцию кроветворной ткани [ Переверзев В. А. ,1986], как это установлено нами для относительно неповрежденных Т-клеток и прекурсоров грануломоноцито- и, в меньшей степени,эритропоэза при цитостатическом воздействии и для механизмов кроветворения при иммобилизационном стрессе. В то же время негативное значение вторичной реакции надпочечников (на 4-5-е сутки после введения 5-®0 для регенерации кроветворной ткани предполагает воздействие катехоламинов на поврежденные элементы ГИМ,поскольку при стрессе роль медиаторов СНС является позитивной. Более того,для низких доз 5-ФУ (15-30 мг/кг) также характерно увеличение клеток костного мозга,находящихся в S-фазе митотического цикла,к 3-б-м суткам после введения [Шма-ров Д. А.,Першин а Н. ,1993),что можно объяснить только преобладанием опосредованного через нейро-зндокринную систему стимулирующего действия 5-ФУ над его прямым генотоксическим эффектом. Увеличение дозы вещества до 100 мг/кг вызывает длительное падение ДНК-синтетических процессов [Шмаров ДА. .Першин R а,1993).обусловленное,вероятно, усилением прямого повреждающего действия самого цитостатика,а также проявлением извращенного (супрессирующего) влияния катехоламинов на измененные клетки.

Действительно,введение мышам БАА на 3-й сутки после назначения 5-ФУ в дозе 114 мг/кг (1/2 ЩД),в период,предшествующий второй волне выброса катехоламинов из надпочечников,уменьшало длительность первого и полностью отменяло второй пик миграции Т-лимфоцитов в костный мозг. Эффект AAA на повторное накопление Thy-1+ клеток оказался менее выраженным. Из совокупности полученных данных по 1-й и 2-й схемам применения адренергических антагонистов следуют два вывода. Во-первых,двухводновая динамика миграции Т-лимфоцитов в костный мозг определяется аналогичным характер динамики катехоламинергичеекой реакции надпочечников на экстремальные воздействия (стресс.введение 5-ФУ) и реалиэу-

ется.в основном, через бета-адренергические механизмы. Ш-вторых, в ладных экстремальных ситуациях Г-лимфоциты сохраняют свои регулирующие свойства,поскольку адекватно реагируют на дмедиа-торные стимулы СНС.

Выше отмечалось,что основным поврежденным элементом ГИМ при однократном назначении высокой дозы 5-ФУ являются клетки С!№. Безусловно,в период максимальной гипоплазии костного мозга (3-5-и сутки) наблюдаются и наиболее выраженные структурно-функциональные нарушения. Оказалось,что повторная волна кате-холаминов усиливает супрессируюадэе действие цитостатика на моноциты/макрофаги, так как назначение БАА на 3-й сутки после 5-ФУ приводило к резкому (в 2,5-3 раза) повышению содержания мопоци-тарных элементов в костном мозге на 5-б-е сутки эксперимента. При этом к 6-м суткам показатель в отличие от цитостати-ческого контроля достигал исходного уровня. ААЛ,в свою очередь, повышал неточность моноцятарного роспа только к 10-м суткам (до 312+49 х 102'/бедро,212 % от контроля,59 X от исходного, Р< О,С5;<0,02),вероятно,опосредованно,через усиление процессов диференцировки КОЕ-ГМ в зрелые элементы вследствие высокой К0А иеприлипапдих клеток. Об этом свидетельствует и уменьсе-ние в костном мозге концентрации КОЕ-ГМ (табл.1) на фоне сохраненной (по сравнению с 5-ФУ) пролиферативной активности грану-ломоноцитарных прекурсоров (табл. 1). Ш-видимому,именно стимуляция катехоламинами адренергических рецепторов, прежде всего,бе-та-типа,и ншеопдешге избыточных количеств внутриклеточных мессенджеров (особенно, цА№£) в повреаденных клетют в результате антиметаболического (антиферментативного) действия 5-ФУ [Процент Л. Д. .Булкика 3. П. ,19851 может рассматриваться как патогенетическая причина нарувения деления клеток [Федоров НА. ,1979;Теппермен Дк. Деппермен X, ,19891 и ингибиции их функций СКоГГ е. а. ,1980).

В этой связи не вызывает удивления способность вегетативных антагонистов (ганглиолитик>БАА>ААА) при их использовании на 3-й сутки уже с 4-6-х суток исследования увеличивать продукцию ЭПА и КСА прилипающими клетками ГКЫ,стимулировать межклеточные контакты посредством усиления формирования ГО гранулошггаряого (ганглиолитик> ААА> БАА),эритро-гранулоцитарного и эритроидного типов (ЕАА>ганглиолитик?ААА) (табл. 1).Интересно,что на фоне пониженной миграции возрастает и секреторная (ЭПА) активность

Т-лимфоцитов. Однако, ИП для неприлил шоадх элементов (п-4) вследствие тормозящего (AAA) либо ингибируювдего действия (ганг-лиодитик.БАА) препаратов на их КСА практически не растет (241 X у цитостатика, 250 X у AAA. 256 X у БАА и 268 X у ганглиолитика) в отличие от прилипающих нукдеаров (142 X для 5-ФУ, 204 X для AAA,245 X для БАА и 261 X для ганглиолитика) (табл.1).Так как повышается выработка ЭПА и КСА цельным костным мозгом (табл.1), при 2-й схеме применения вегетативных антагонистов,в большей степени ганглиолитика и БАА. следует признать первичным процессом стимуляции прилипавших 'клеток,их активирующее влияние на Т-лимфоциты и кооперативное взаимодействие в продукции гемопоз-тинов.

Данное предположение находит подтверждение в структуре корреляционных связей,в которой для наиболее активного гемости-мулятора (БАА) впервые появляется прямая корреляция мокоци-ты-Т-лимфоциты,что говорит об установлении пропорционального взаимодействия клеток в процессах кроветворения. При этом клетки СШ> могут выступать в качестве регуляторов направления диффе-ренцировки прекурсоров гемопоэза,через соотношение внутриклеточных посредников цА1®/цГМ$ контролирующих реципрокным образом продукцию КСФ (Алехин Е. К., Лазарева Д. Я ,Сибиряк 0. В. , 1993; Mstcalf ,19843.

Увеличение структурно-функциональной активности и взаимодействия отдельных элементов ГШ является одной из основных причин резкого возрастания числа КОЕ-Э в S-фазе митотического цикла с б-х (практически в 4-6 раз) по 8-е сутки при введении AAA либо БАА на 3-й сутки после назначения 5-ФУ. В меньшей степени (только 6-е сутки,AAA) стимулировались ДНК-синтетические процессы в гранулоцито-макрофагальных КОЕ (табл.1). В сочетании со скииеннем ИП, описывающего концентрат® коммитированных прекурсоров в иеприлипавдэй и, преимущественно,в цельной фракциях миедокариоцитов.и повышением ИП для морфологически распознаваемых клеток костного мозга (табл. 1) .полученные результаты свидетельствует об обусловленной адреноблокаторами (8АА>ААА) усилении как пролиферации,так и дифференцировки КОЕ-Э и возрастании, преимущественно, процессов созревания КОЕ-ГМ в морфологически распознаваемые гранулоцитарные элементы костного мозга.

Необходимо подчеркнуть,что 5-ФУ вызывает преимущественное повреждение эритроидного отдела кроветворения (ИП-244 X ,п-11)

по сравнению с гранулоцитарным (ИП-580 Х,п«12) (табл. 1).Тот факт,что вегетативные антагонисты (БДА>АЛА) способны значительно стимулировать восстановление зритропоэза (ИП для обэидана равен 353 Z-.для ДГЗТ - 291 Z) и,в меньшей степени,гранулодато-поэза ( табл. 1),указывает на модулирующий отрицательный вклад САС именно в механизмы цитостатического повреждения эритроидно-го ростка костного мозга, фи этом страдают не только элементы ГИМ (моноциты,формирование эритроидных ГО,продукция вдтокинов прилипающими ¡метками) и их кооперативноё взаимодействие,но такяе и клетки-предшественник.

Из проведенных экспериментов в культуре неприлипающих клеток костного мозга интактных мышей следует,что добавление альФа- либо бета-адренергического агониста ß различных концентрациях не вызывало статистически значимых изменений содержания прекурсоров эритропоэза. Добавление различных разведений альфа-либо бета-адренергического антагониста в аналогичных условиях эксперимента также не вызывало статистически значимых (согласно U-критерию Вилкоксона) изменений зритроидного и гранулоии-то-макрофагального колониеобразования. В то же время наблюдалось стимулирующее влияние альфа-адреномиметика,но не бета-адренер-гического агониста,на процессы пролиферации и дифференцнровки КОЕ-ГМ (254 7. от начального уровня,Ри<0,05) в конечной его концентрации 10 мкМ.

В условиях реакщга стресс адренергические агоиисты оказывали более выр&тэнное активирующее влияние на рост КОЕ-Э и КОЕ-ГМ в культуре непрклипаюдах миелокариоцитов. Так, в неприли-пающзй фракции костного мозга,взятого на 4-е сутки от начала иммобилизации, наблюдалось статистически значимое (Ru<0,05) возрастание числа эритроидных и грануломоноцитарных толоний соответственно до 12,15 (211 Z от исходного уровня) и 9,05 ( 262 7. от исходного уровня) в 10® культивируемых нуклеаров. Введение мышам, подвергнутым иммобилизации,одного из адренергических антагонистов ингибировало (до начального значения) обусловленное стрейсом повышение выхода КОЕ-Э и КОЕ-ГМ,тестируемых в системе in vitro.

Добавление альфа-адреяомиметика в концентрации i нМ либо 0,1 мк!.! в культуру костного мозга,полученного от стрессирован-ных мышей,которым вводили альфа-адренолитик,значительно увеличивало содержание КОЕ-ГМ (соответственно на 211 X и 273 %,

Таблица 1

Величины интегрального показателя (X от исходного уровня),характеризующие влияние совместного с 5-ФУ СI) и на 3-й сутки после цитостатика (II) введения вегетативных антагонистов на динамику показателей костномозгового гемопозза.Х

]■ ■ ' -------------- Показатели • 7 а II

5-ФУ | ДГЭТ Обзидан) Пентамин 5-ФУ ДГЭТ Обзидан| Пентамин

О К К 51 47 41 46 35 39 42 41

А Н Н Г 36 38 28 34 27 ■49 *# 53 39

3 н Г 35 28 26 30 25 34 35 38

э к 33 27 29 29 21 54 * 108 60 *

ЭПА ц 18В 147 125 130 188 194 253 296 в

. КСА Ц 130 186 139 135 130 213 е 260 # 224 в

ЭПА нн 200 138 161 124 200 230 323 363

ЭПА не 314 204 186 189 314 259 326 322

Б ЭПА ПН 91 69 67 143 91 157 в 204 / 229 в

ЭПА пс 163 146 97 138 163 196 293 246

КСА НН 197 118 83 137 197 225 168 ■ 186

КСА не 252 125 135 90 252 283 205 202

КСА ПН 223 191 153 159 223 324 313 428 *

КСА пс 91 110 143 138 91 137 168 139

Продолжение таблицы 1

- Показатели ! П

5-ФУ ДГЭТ- | Сбзидан] Пентамин 5-ФУ 1 ДГЭТ Обзидан] Пентамин

Г-ГО 51 35 34 38 51 73 54 78

В э-го • 5 10 4 5 5 17 *я 45 *-Я 20 я

. эг-го 15 13 11 10 15 22 » 39 *Я 32 я \

го 21 17 14 16 21 34 я 43 я 38 Я \

КОЕ-Э Н 653 513 470 533 511 634

КОЕ-ГМ Н 427 253 386 - 407 322 290 -

Г КОЕ-Э Ц 457 241 262 - 457 350 355

КОЕ-ГМ ц 1769 1461 1247 - 1769 1231 1372

КОЕ-Э г 895 424 452 - 395 1214 1305 -

КОЕ-ГМ з 3767 3633 1466 * - 3767 3700 3800 "

Тимоциты 295 218 168 - 295 183 123 я -

Моноциты 43 23 18 * • - 32 40 49 -

Примечание: А - отдел морфологически распознаваемых клеток, Б - отдел гемопоэтинов, В - отдел гемопоэтических островков, Г - отдел гемопоэтических прекурсоров: ц - цельный костный мозг, нн - неприлипаюаие нестимулированные, не - неприлипаюшие стимулированные Кон А, пн - прилипающие нестимулированные, пс - прилипающие стимулированные ДЛС миелокариоциты; з - клетки в Б-фазе; (*) - достоверные различия с контролем (один цитостатик) согласно Р-критерию йиера, (#) - то же согласно Т-критершо Уилкоксона.

PikO,05), Однако,альфа-адренергический агонист ни в одном из использованных разведений не стимулировал рост и созревание эритроидных прекурсоров.

С другой стороны,добавление>бета-адреномиыетика в культуру неприлипаших миелокариоидтов, выделенных из костного мозга етрессировапных мышей,которым назначали бета-адренолитик,вызывало дозозависимое повышение количества КОЕ-Э,достигавшего статистических различий (на 154 X, Ри<0,05) о контролем (один бе-та-адренолитик) при использовании 10 мкМ вещества В то же время бета-адреномиметик в системе in vitro не действовал на рост КОЕ-ГМ. Полученные данные позволяют говорить о преимущественном стимулирующем действии адреномиметиков (как альфа-,так и бета-селективного агента) на рецепторы клеток-предшественников соответственно грануломоноцитарного и эритроидного ростков костномозгового миелопозза

По-видимому,это может быть связано с определенной избирательностью распределения специфических рецепторов к медиаторам ОБО на мембранах различных типов прекурсоров гемоТтозза. Так,в частности, бета-адренорецепторы определены на БОЕ-Э и КОЕ-Э n,iladenovic,AdanBon,1984) и других клетках эритроидного ряда £ Brown,Adamson,1977 ; Setchenska е. а ,1986), но не обнаруживаются на коммитированных предшественниках гранулоцитопоэза [Козлов RA., Журавкин И. Е , ••. Цырлова И. Г., 1382). •

Тем не . менее,нам представляется более вероятным предположение о возможности разнонаправленного влияния внутриклеточных мессенджеров (цАМ1>,цГМФ) на выбор стволовой клеткой (КОЕс, НОЕ-ГЭШ) той иди иной линии диффереицировки. Бета-адренерги-ческая стимуляция (увеличение цАЫФ) предопределяет дифференци-ровку в эритроидные.а холлнергическая (увеличение цГМ$) - в гранулоцито-ыакрофагальны© прекурсоры [Byron, 1974; Oshi ta е. а ,1977).

У мыией уже на 3-й сутки после введения 5-ФУ в • 1/2 ЫПД наблюдалось увеличение концентрации эритроидных и гранудоци-то-макрофагальных КОЕ соответственно до 9,65 и 9,05 прекурсоров в 10® неприлипающих миелогариоцитов,культивируемых в системе in vitro. Однако,вступление коммитированных прекурсоров в S-фазу отмечается гораздо позжз (7-е сутки) и может ускоряться применением адреноблокаторов in vivo (см. выше).Таким образом,наруие-ние пролиферации КОЕ в целом организме зависит от негативного

воздействия катехоламинов и отсутствия необходимых веществ для роста (гемопоэтины,питательные добавки) вследствие недостаточной функции ГШ Повышенная чувствительность пролиферативного статуса костномозговых клеток животных,получавших 5-ФУ,к дополнительным стресс-воздействиям (облучение,термический оизг,повторное введение цитостатика),сохраняющаяся до 14-х суток,описана в других работах (Софьина Э. IL , Лесная R А., Бабушкина Н.А. ,1982;Балицкий Н. Д, Шаль ко КХП. ,1087;Переверэев А.Е. .Розанов й М. ,1993).

Добавление различных разведений альфа- либо бета-адреноли-тика в культуру клеток костного мозга мышей,получавших инъекцию цитостатика, приводило к выраженной ингибиции (как правило,в 2-3 раза) выхода прекурсоров зритро- и грануломоноцитопоэза. При этом в культуре интактных миелокариоцитов подобного эффекта не наблюдалось.Вероятно,» условиях существенного мембраноповреяда-ющего действия 5-ФУ СПроцеико Л.Д.,Булккна З.П.,1985] могут иметь значение прямые мембрансстабилизирующие свойства адрепер-гических антагонистов. По крайней мере,для пропранолола подобные свойства, ведущие к ингибшши митогеннсй активации,установлены (Алехин Е. К. .Лазарева д. а .Сибиряк С. В. ,19931.

Использование в системе in vitro комбинации бета-адрснолл-тг.к«-альфз-адреномиметик (стимуляция альфа-адренорецепторов) приводило к достоверному (по сравнению с одним блокатором, Ри<0,05) повышению содержания КОЕ-ГМ (более чем з 3 раза) только при низкой концентрации, миметика (1 кМ).Напротив,в самой высокой концентрации (10 мкМ) препарат несколько увеличивал выход КОЕ-Э.

=С другой стороны, применение схемы альфа-адренолитик+бе-та-адреномиметик (активация бета-адренорецепторов) не влияло на выход грануломоноцитарных КОЕ в культуре,а при концентрации агоннста О,1 мкМ супрессировало (в 2 раза по отношению к блока-тору,Ри<0,05),в отличие от применения в условиях иммобилизаци-онного стресса, формирование неприлипаюцими миелокариоцнтами эритроидных колоний. Отсутствие эффекта либо да.те ингибирующее действие бета-адренергического агониста на рост и деление КОЕ-Э в условиях назначения 5-ФУ доказывает существование' выраженных внутриклеточных повреждений эритроидных прекурсоров.

Кстати, клетки костного мозга сублетально облученных мышей также теряют способность реагировать на введение адреналина и

его аналогов вследствие резко повышенной внутриклеточной концентрации цАМФ Г L i psk i,1976],обусловленой стимуляцией аденилат-циклазы эндогенными катехоламинами íSingh.Dhalla, 19753 и снижением активности фосфодиэстеразы С Абакумова 0. Kl и др. ,1970]. При этом высокие уровеи цАМФ тормозят клеточный цикл в фазах Gl и 82 [Федоров Н. А. ,1979;Теппермен Дж. .Теппермен X ,19893 . Нельвя исключить возможность повреждения фосфодиэсте-раэ и в условиях назначения 5-ФУ,нарушающего функцию различных фракций РНК, синтез белков и активность различных ферментов С Проценко Л. Д.. Вулкана 3. а ,19853.

Согласно концепции Byron (1972,1974).для КОЕ-Э пролифера-тивным стимулом является оптимальное увеличение соотношения цАЩ^цГМФ (бета-стимул/альфа-стимул), для КОЕ-ГМ - обратная ситуация. В этой связи полученное наш некоторое стимулирующее влияние только высокой (10 мкМ) концентрации альфа-адреномиме-тика на формирование эритроидных колоний в условиях введения 5-ФУ.но не иммобилизационного стресса,предполагает запредельные уровни цАМФ в КОЕ-Э,ингибируюиле вступление клеток в S-фазу и митоз. С другой стороны,только в самой низкой концентрации (1 н!.!) альфа-адреномиметяк.в отличие от его использования при стрессе, стимулирует пролиферацию и диф^еренцировку прекурсоров грануломоноцитопоэза,что доказывает наличие обусловленных ци-тостатиком определенных нарушений внутриклеточного обмена вторичных мессенджеров и для «КОЕ-ГМ.

Таким образом,5-ФУ,без сомнения,оказывает 'повреждающее действие на гемопозтические прекурсоры (КОЕ-Э>КОЕ-ГМ).усиливающееся выраженной катехолашнергичеекой реакцией на введение ци-тостатика и нарушением функционирования ГИМ. Поэтому помимо защитного действия,опосредованного через элементы ГИЫ.адренер-гические антагонисты в системе in vivo,в частности,обзидан (пропранолол), блогафующий бета-адренорецепторы, может иметь и прямой (мембранный) протективный эффект на прекурсоры эритро-и,в меньшей степени,грануломоноцитопоэза. Влияние на восстановление гемопозза ДГЭТ,блокирующего альфа-адренергические структуры, менее значительно по сравнению с обзиданом,поскольку сочетает негативное действие эндогенных катехоламинов на бета-адренорецепторы клеток костного мозга с положительным в условиях введения цитретатика уменьшением выброса КА через пресипапти-ческие альфа!-адренорецепторы [Сергеев П.В..Шимановский

Л ,1987]. В этом отношении более высокая по сравнению с ДРЗТ Фиктивность ганглиолитика (табл.1) дает право на суиествова-ie подобного предположения.

Предложенное объяснение,очевидно,является.одним из многих 13можных механизмов действия вегетативных антагонистов на клееном уровне. Тем не менее,установленные нами на различных хзвнях организации (отдельные клетки клеточные системы-орга-1эм) гемопоззмодулирующие эффекты препаратов в сочетании с шными литературы позволяют заключить,что с момента однократ-. >го назначения высокой дозы 5-ФУ формируется реакция САС на зедение ксенобиотика.по своим параметрам идентичная таковой )и иммобилизационном стрессе. Аналогичная направленность ?Йствия катехоламинов в условиях введения циклофосфаяа предпо-iraeT неспецифичность развивающейся реакции САС на различные > своей природе чрезвычайные раздражители. При этом катехолами-я обусловливают миграцию Т-лимфоцитов в костный мозг,активацию цементов,формирующих- микроокружеиие костного мозга,стимуляции гмопоэтических прекурсоров,а такте их кооперативное взаимо-гйствие с факторами Г!М в процессах пролиферации и дифферекци-эвки от коммитированных до зрелых Форм. Однако,значительно воз-зстаютее число корреляционных взаимоотношений параметров фор-нрует "жесткую" систему регуляции гемопоэга.сбдадгюоуй уже еньшей способностью адекватно реагировать на менявшиеся уело-ия жизнедеятельности.

В условиях' гемопоззсупрессирующих воздействий,приводящих к начительным нарушениям тех или иных клеточных систем и.таким бразом.структурно-Фяшдаокальноя целостности кроветворной тка-и,разрушается позитивная причинно-следственная взаимосвязь САС системы крови. При этом на Фоне стимуляции относительно ре-истентных клеток адренергические медиаторы усиливают супрессию лементов,поврежденных экстремальным фактором,что вызывает ра-общение процессов кроветворения,возрастагаее по мере нараста-ия концентрации катехоламинов. В подобных условиях появляется рямая корреляционная зависимость процессов кроветворения от ютивности САС,резко (даже по сравнению со стрессом) падает ластичность механизмов гемопоэза.что обусловливает полный срыв омпенсаторно-приспособительных процессов при дополнительных кстремальных вмешательствах.

В частности,при введении 5-ФУ первичная волна активации

САС способствует миграции Т-лимфоцитов (первая волна) в костный мозг,которые,в свою очередь,обеспечивают процессы пролиферации относительно резистентных ( КОЕ-ГМ> КОЕ-Э) кроветворных прекурсоров и активации прилипающих элементов ГИМ (моноцитов/макрофагов) .подавленных цитостатиком. Пги этом позитивное влияние САС,опосредованное через Т-клеточные механизмы, ешэ преобладает над прямым ингибирующим действием катехоламинов на движение кроветворных прекурсоров в фазу синтеза ДНК

В то же время, повторный выброс катехоламинов,вероятно.в ответ на значительное опустошение костного мозга вследствие максимальной деструкции клеток,способствует второй волне миграции Thy-1+ клеток в костный мозг,но,с другой стороны, усугубляет повреждение клэток СШ и прекурсоров гемопоэза, особенно КОЕ-Э. Цролиферация КОЕ,обусловленная секреторной активностью Т-лимфоцитов,стимулированных катехоламинами, протекает на фоне подавленной дифференцировки клеток вследствие нарушенной функции СМФ.что предопределяет характерную для 5-ФУ длительную регенерацию гранулоцито- и,в большей степени,эритропоэза в условиях еначительного накопления в костном мозге клеток-предшественников. Быстрое восстановление кроветворной ткани наступает с момента затухания реакции САС на чрезвычайный раздражитель. При этом возрастает степень свободы элементов ГИМ.способных обеспечивать потребность системы крови в зрелых клетках и в отсутствие значительных вегетативных влияний,например, в условиях сбалансированного гемопоэза (интактные животные).

выводы

1. При введении мышам 5-фторурацила в 1/2 МПД .как и в условиях иммобилизационного стресса .через 6 часов,а также на 1-2-е и 4-5-е сутки от начала воздействия отмечается выраженная катехоламинергическая реакция,заключающаяся в усилении секреторной активности клеток мозгового вещества надпочечников.

2. Цитостатическое воздействие 5-фторурацилом (5-ФУ) либо циклофосфаном (ЦФ) в 1/2 ЩД приводит к развитию значительного опустошения костного мозга и снижению числа лейкоцитов в периферической крови. При этом в случае применения 5-ФУ клеточность зритроидного и нейтрофильного ростков костного мозга находится в прямой корреляционной зависимости от,концентрации катехолами-

нов в надпочечниках.

3. В основе ингибирующего воздействия 5-ФУ на систему крови лежит его супрессирующее влияние на содержание в костном мозге гемопоэтических островков,клеток системы моноиуклеарных 4агоцитов (CWI>) и их секреторную активность,протекающую, тем не менее, в условиях накопления Т-лимфоцитов. При этом разобщение пролиферации коммитированных п;>журсоров гемопоэза (КОЕ-Э>КОЕ-ГМ).обусловленной мигрирующими Т-лимфоцитами, сих последующей дифференцировкой,определяемой прилипающими клетками ГЙМ,обусловливает возрастание в костном мозге концентрации КОЕ-Э и КОЕ-ГМ на фоне замедленной регенерации гранулоцитарного и,в большей степени,эритроидного ростка кроветворения.

4. Двукратное (через 5 часов) введение вегетативных антагонистов (ганглиолитик,альфа- либо бета-адренолитик) интактным мышам не вызывает заметных изменений показателей системы крови в течение 5 суток эксперимента В системах in vivo и in vitro адреноблокаторы не влияют на колониеобразуюшую способность ин-тактных неприлипаюших клеток костного мозга

5. Фармакологическая инактивация адренергических' структур при стрессе оказывает ингибирушее действие на развитие феномена гиперплазии кроветворной ткани,выражающееся в преимущественном влиянии . бета- и альфа-адренолитика соответственно на процессы костномозгового эритро- и гранулоцитопоэза

6. Адренергические антагонисты угнетают механизмы (факторы ГИМ).ответственные за развитие феномена гиперплазии костного моэга, в том числе миграцию Т-лимфоцитов, секреторную (эритропо-этическую и колониестимулирующую) активность клеток ГИМ,формирование гемопозтических островков,кооперативное взаимодействие Т-лимфоцитов к макрофагов в процессах пролиферации и ^ дифферен-цировки КОЕ-Э и КОЕ-ГМ

7. Фармакологическая блокада вегетативных структур оказывает модулирующее влияние на процессы постцитостатическогс восстановления системы крови. Интенсивность регенерации эритро-идисго и гранулоцитарного ростков костного мозга замедляется при одновременном с 5-ФУ либо ДФ введении одного из вегетативных антагонистов и ускоряется при назначении препаратов на 3-й сутки после цитостатика.

8. Стимулирующее действие адренергических антагонистов на гранулоцитопоэз проявляется и в условиях их совместного с ПФ

введения мышам на 2-е сутки после перевивки клеток адеиокарц номы Эрлиха. Важной является способность адреполитиков не сн жать либо несколько усиливать хиыиотерапевтический эффект и тоетатика в отношении соответственно опухоли Эрлиха и карцино легких Хьтс.

5. Адреноблокаторы (бета->альфа-адренолитик) при одновр ие'ином с '5-4У введении снижают эффективность механизмов восст новления гемопоэза за счет нарушения хоминга Т-лимфоцитов костный мозг,их секреторной активности,снижения количества ы ток CSíS, падения числа КОЕ-З и КОЕ-ГМ в S-фазе клеточного циг и их концентрации в костном мозге.

10. Назначение адренергичееких антагонистов на 3-й суч после введения 5-4У вызывает усиление (бета->альфа-адренолит! фуикции поврежденных цитостатиком отделов гьмопозза с bocci язвлением кооперативного взаимодействия Т-лимфоцитов и прилш ищи клеток Г ИМ в регуляции процессов пролиферации и диффери цмровки кроветворных клеток от коммитярованных до зрелых фор)

11. Практически идентичное эффекту фармакологичео десимпатизации влияние ганглиолитика на процессы кроветгоре! в обычных условиях и экстремальных ситуациях доказывает веду] аиачацие симпатического отдела вегетативной нервной систем! регуляции гемопозза.

12. В системе in vitro как в норме,так и в условиях им; Сшашащшного стресса,лимитированного in vivo альфа-адреноб, кагором, альфа-адренергический агонист стимулирует вы КОЕ-ГУ,но не КОЕ-Э. В то ító время бета-адренергический агон 1Эбирательно активирует рост зритроидных.но не грануломоно тарных прекурсоров только при и».мобилизационном стрессе.огра чгпъои введением бета-адренолитика.

la В период максимальной шелодепрессии (3-и сутки по введения 5-$У) стимуляций бета-адренорецепторов в системе vitro приводит к сущгетЁеввому подавлению эритроидного коло еабразовакиз. В то же ьреш только низкая концентрация альфа-называет сткцудящш ьшода КОЕ- ГМ, что свидетель ьует о «»яокоЕреждаюйэи эф»вете (ШЙ-а^КОЕ-ГШ 5-фсорура ха.усугу&вяв«2»ся ¡сатехолаи-цк^а:. '

Список юуОлмнаций

- 41 -

Авторские свидетельства СССР и патенты на изобретения РФ

1. N 1721467. Способ получения клеток костного мозга для цитологического исследования (соавторы Е. Д. Гольдберг, В. П. Шахов, А. М. Дыгай, Е. В. Симанина).

2. N 2020936. Средство,избирательно стимулирующее грануломоно-цитопоэз при гипоплазии костномозгового кроветворения,вызванного цитостатиком (соавторы Е. Д. Гольдберг, А. М. Дыгай, Г. К Карпова и др.).

3. N 2008008. Психостимулирующее средство "Пантогематоген" (соавторы Е. Д. Гольдберг, А. М. Дыгай, Н. И. Суслов и др.). Методические рекомендации Министерства здравоохранения СССР

1. Методические рекомендации по доклиническому изучению ге-мостимуляторов.-Москва,1992.-7 с (соавторы А. М. Дыгай, О. Ю. Захарова, а Е. Гольдберг).

5. Применение экстракта шлемника байкальского в качестве ге-мостимулятора при цитостатической болезни//Штодические ре-комендации-М. ,1992.-8 с (соавторы А. М. Дыгай,Е И. Агафонов, Е. К Амосова и др.). Статьи

¡. Роль вегетативной нервной системы в механизмах регуляции гемопоэза при стрессе//Патол. физиол. и эксперим. терапия. -199,1. -N3.- С. 14-17 ( соавторы Е. Д. Гольдберг, А. М. Дыгай, а л аьхов).

'. Роль вегетативной нервной системы в регуляции костномозгового эритропоэза при стрессе // Патол. физиол. и эксперим. терапия. -1991. -Я 3. -С. 17-20 (соавторы А. М. Дьггай,Е Е Шахов, Е. Д. Гольдберг).

О роли симпатического отдела вегетативной нервной системы в механизмах регуляции эритропоэза при стрессе//Механиэмы патологических реакций. -Новокузнецк, 1991. -С. 12-15 (соавторы Е Е Шахов,Я. Е Богдашин.Е. КХ Шерстобоев, А. М. Дыгай).

. Роль гуморальных факторов в регуляции гемопоэза при экстремальных воздействиях//Системные и клеточные механизм; адаптации организма к действию повреждающих Факторов. -Челябинск, 1991. -С. 40-41 (соавторы А. М. Дыгай, И. Е Богдашин, Е Е Шахов и др.).

Компенсаторно-приспособительные реакции гемспоэзиндуцирую-шеп микроокружения костного мозга при стрессе//Гематология и трансфузиодогия.-1992. - N 1.-С. 3-5 (соавторы А. и. Дыгай,

- 42 -

Е. Д. Гольдберг, Е11 ¡Шов,И. Я И^асенко).

11. Роль симпатической нервной системы в механизмах регуляци грануломоноцитопоэза в условиях иммобилиэационнаг стресса//Профилактика и экспериментальная терапия экстре мальных и терминальных состояний.-Омск, 1992.-0.97-98 (соав торы И. а Богдэшн, а а Шахов, Е. !й Шерстобоев).

12. Влияние периферических структур симпатической нервнс системы на процессы кроветворения ь условиях цитостату ческой болезни//Ешл. Томского научного центра АМН СССР. Томск,1992. -С. 13-23 (соавторы С. Г. Аксиненко, А. М. Дыгай).

13. О механизмах стимулирующего влияния Д-глюкуроновой кислот на процессы костномозгового грануломоноцитопоэза в условш цитостатической шелодепрессии//Екш. эксперим. Сиол. и ме; -1993. -И 4. -С. 350-352 (соавторы Е. Д. Гольдберг, А. Ы. Дыга! Р. а Карпова и др.).

14. Значение симпатико-адреналовых структур в регуляции гемопс эза при цитостатической миелодепрессии//Бюлл. эксперим. био. и мед. -1993. -И 4. -С. 372-375 (соавторы А. а Дыгай.С. Г. Акс1 иенко, Е, Д. Гольдберг).

15. Продукция костномозговыми клетками гуморальных Фикторов щ экстремальных воздействиях различного генеэа //Вилл. эксш рим. биол. и мед. -1993.-М 9.-С. 244-246 (соавторы Е. Д. Голь, берг, А. Ы. Дыгай, И. а Богдашин и др.).

16. Адренергические механизмы контроля пролиферации и ди<14ере цировки кроветворных клеток-предшественников в условиях и мобилизационного стресса//Еюлл. эксперим. биол. и мед.-1993 N 11. -С. 457-460 (соавторы Е. Д. Гольдберг, А. М. Дыгай, а И. Аг фонов).

1?. Адренергическая регуляция продукции интерлейкинов метка костного мозга в условиях имыобилиэационного стрееса//Бкш эксперим. биол. и мед. - 1993. - N 12. - С. 570-572 (еоавто А М. Дыгай, Е. Д. Гольдберг).

16. Влияние О-глюкуроновой кислоты на процессы регенерации гр нулоыоноцитопозаа при цитостатической миелодепрессиис//Он перим. и клин, фармакология. - 1993,- N 6.- С. 25-28 (соавтс Е. Д. Гольдберг, А. М. Дыгай, Г. а Карпова и др.).

19. Значение периферических симпатических структур в репара1 кроветворной ткани после воздействия циклофосфана//Ага^ ные. проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных щ

паратов. -Томск, 1993. -Т. 6. -С. 6-9 (соавтор С. Г. Аксиненко). Ингибирующее влияние адреноОлокаторов на митотическую активность клеток костного мозга при иммобилизационном стрессе // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. -Томск, 1993. -Т. 6. -С. 34-37(соавторы Р. С. Домникова, л. Я Далингер, Т. Е Федорович, Е И. Тетерина). Способ выделения эндотелиальных островков из клеток костного мозга//Патол. Физиол. и эксперим. терапия. -1994. -N 1. -С. 49-50(соавторы В. Д. Гольдберг.Е П. Шахов, А. М. Дыгай.Е. R Симанина).

. К механизмам регенерации кроветворения при цитостатических гемодепрессиях// Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. -Томск, 1994. -Т. 7. -С. 24-25 (соавторы1 Е Е Жданов, Е. Е Симанина, П А. Любавина).

. Некоторые механизмы гемопоэзстимулирующей активности анти-адренергических препаратов при гипоплазии кроветворения,вызванной 5-фторурацилом//Актуальные проблемы фармаго-логии и поиска новых лекарственных препаратов,-Томск,1994,-• Т. 7.-С. 25-26,

. Симпатическая регуляция кроветворения при гемопоэзстимули-руюших и супрессорных воздействиях//Актуальнне проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. -Томск. 1994. -Т. 7. -С. 32-33 (соавтор С. Г. Аксиненко).

. Роль вегетативной нервной системы в регуляции гемопоэза при экстремальных Еоздействиях//Механиз1,<и развития патологических процесов: Матер, объединенного пленума патофизиологов и фармакологов Сибири и Дальнего Востока -Кемерово, 1994. -С.28-30 (соавторы А. М. Дыгай.С. Г. Аксиненко,Р. С. Домникова и др.).

|. Симпатическая регуляция кроветворения при гемопоэзвозмущаю-щих и супрессируююих воэдействиях//Нейрогуморальная регуляция в патологии. - Харьков: ХГМУ, 1994. -С. 46-50 (соавторы А. М. Дыгай, Е И. Агафонов, Е. Д. Гольдберг).

'. Adrenergic (nechanisrrs of hemopoietic growth factors production under 5-fluorouracil administration // Xiltb International Congress of Pharmacology, 24-29 July 1994, Montreal,Canada - V. 72. -Suppl. 1. -P. 330 (соавтора A. M. Dygai, S, G. Akstnenko.E. 0. Goldberg).

3. Natural stimulators of depressed hematopoiesjs // Xllth International Congress of Pharmacology, 24-29 July 1994,

Montreal,Canada. -V. 72. -Suppl. 1. -P. 613(соавторы E. 0. Goldberi A. M. Dygai, V. I. Agafonov).

20. The principles of hemostimulators creation for Ш treatment of anemias and leukopenias of various genesis // The II-nd International symposium of Japan-Russia rosdica] exchange foundation and the fiEA region, 19-21 September 1994,- Vladivostok.Russia - P.63-64 (соавторы E.D.Goldberg, A. M. Dygai. V. I. Agafonov et al).

30. The mechanisms of henatopoiesis precursor cells regulatior under myelodepressions caused by cytostattcs//XVl Internati onal Cancer Congress,New Delhi. India, 30 Oct.-5 Nov. 1994.-Abs. Book I.- P.310 (соавторы E.Goldberg,A.Dygai,V.Goldberg et al).

31. Адренергический контроль продукции гуморальных регуляторов гемолоээа при цитостатической миелодепрессии//Вюлл. эксперт* Сиол. и мед. -1995.-N 2. -С. 135-140 (соавторы А. М. Дыгай,С. Г. Аксиненко, Б. Id Гумилевский, Е. Д. Гольдберг).

32. Принципы создания лекарственных препаратов - стимуляторов кроветворения природного происхождения // Эксперим. и клин, фармакод. -1895. -N 1. -С. 3-7 (соавторы Е. Д. Гольдберг, А. Ы. Дыгай, Е И. Агафонов и др.).

33. О возможности стимуляции глицираыом костномозгового кроветворения, в условиях цитостатической гемодепрессии //Эксперим. и один, фармакол.-1995.-N 2.-С. 40-42 (соавторы А. к. Дыгай, Е В Жданов, Е А. Любавина и др.).

34. О стимулирующем влияний сиаловой кислоты на процессы постлучевой регенерации геюпозза // Эксперим. и клин, фарма-кол.-1995.-N 4.-С. 41-44'(соавторы Е И. Агафонов, А. Ы. Дыгай, Д. А. Волдышев.Е. Д. Гольдберг).

35. О регулирующем влиянии гемопоззиндуцирующэго микроокружения на процессы кроветворения при действии цитостатических пре-паратов//Гематология и трансфузиология. -1995. -Н 5.- С. 11-15 (соавторы A. М. Дыгай,Е Е Жданов,Е А. Любавнна,Е. Д. Гольдберг)."

36. Модулирующее влияние адренергических антагонистов иа содержание клеток моноцитаркого ряда в костном мозге мышей,получавших 5-фторурацил//Труды молодых ученых Института фармакологии ТНЦ РАМН. -Томск, 1995. -С. 12-14.

37. Препараты из лекарственных растений в терапии гемодепрессий различного генеаа//Человек и лекарство: 11 Российский нацко-

налышй конгресс,Москва, 10-15 апреля 1995.- И,, 1995. -С. 197 (соавторы Е. Д. Гольдберг, А. М. Дыгай, R Е Жданов и др.).

38. Создание гемостимуляторов на основе принципа подражаний естественным регуляторным системам макроорганизма//Фунда-ментальные исследования как основа создания лекарственных средств:Тез. 1-го Съезда Российского научного общества фармакологов, 9- 13 октября 1995 г. .Волгоград. -М. ,1995. -С. 114 (соавторы Е. Д. Гольдберг, А. М. Дыгай,В. И. Агафонов и др.).

39. Механизмы модулирующего влияния на гемопозз при цитостати-ческих миелодепрессиях фармакологических антагонистов симпатической нервной системы //1-й Съезд Российского научного общества фармакологов:Тез. докл. ,9-13 октября 1995 г. .Волгоград. -М.', 1995. -С. 154 (соавторы А. К Дыгай,С. Г. Аксиненко.Е. Д. Гольдберг).

40. Итоги работ по созданию гемостимуляторов природного про-исходдеНия//Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов.-Томск, 1995.-Т. 8.-С. 3-10 (соавторы

E. Д. Гольдберг, А. М. Дыгай, В. И, Агафонов и др. 5.

41. Мзхаяизмы вегетативной регуляции системы крови в различных условиях кизнедеятельности организма//!! Сгезд физиологов Сибири и Дальнего Востока, 15-17 ишя 1995 г. , №шосибирск. -Ч. 1. -С. 102 (соавторы Е. Д. Гольдберг, A. R Дыгай).

42. Adrenergic regulation of hematopoietic precursor cells amount in the bone marrow da-naged by 5-fluorouracil (5-FU) //The International Congress of Toxicology-VII,Seattle,USA, July 3-6,1695.-34-P-10 (соавторы A. M. Dygai,E. D. Goldberg).

43. Tht- toxic action of antitumor drugs on Itsmopoietic stem cell and micrcenvironrrent // The International Congress cf Toxicology-VI J,Seattle,USA, July 2-6,i9S5. -34-P-ll (соавторы

F.. D, Goldberg, A. M. Dygai, V. I. Agafonov, V. V. Zdsnov).

44. Гемосткмулирукике свойства О-гяэкурсновой кислоты //Экспериментальная и клиническая Фармакотерапия язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. Создание новых гемэсти-мулятосов. -Томск, 1996. -С. 31 (соавторы Е. а Симанина.С. Г. Акс-инеико, Е. Е Амосова).

45. О стимулирующем влиянии байглдинат-лизина на постлучевсе восстановление кроветворения//Экспериментальная и клиническая фармакотерапия язвенной болегни яелудка и двенадцатиперстной кивки. Создание новых гемостимуляторов. - Томск,1996. -С. 34-35 (соавторы а й. Агафонов, В. а Жданов, Е. а Симанинэ).