Роль оксида азота в иммуносупрессорной и противоопухолевой активностях естественных супрессорных клеток

Патрушев, Виктор Константинович

Диссертации по медицине → Патологическая физиология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Роль оксида азота в иммуносупрессорной и противоопухолевой активностях естественных супрессорных клеток

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Патрушев, Виктор Константинович Томск 2004 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.16

Автореферат диссертации по медицине на тему Роль оксида азота в иммуносупрессорной и противоопухолевой активностях естественных супрессорных клеток

На правах рукописи

Патрушев Виктор Константинович

РОЛЬ ОКСИДА АЗОТА В ИММУНОСУПРЕССОРНОЙ И ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЯХ ЕСТЕСТВЕННЫХ СУПРЕССОРНЫХ КЛЕТОК

14.00.16 - патологическая физиология 14.00.14 - онкология

АВТОРЕФЕРАТ

Диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Томск-2004

Работа выполнена в ГУ НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор

Научный консультант: кандидат медицинских наук

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор,

член-корр РАМН

доктор медицинских наук

Агафонов Владимир Иванович Вельский Юрий Павлович

Новицкий Вячеслав Викторович Скурихин Евгений Германович

Ведущая организация:

Новосибирская государственная медицинская академия МЗ РФ

Защита состоится «_»_2004 г. в_часов на заседании

диссертационного совета Д 001.031.01 при ГУ НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН (634028, г. Томск, пр. Ленина, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ фармакологии

Томского научного центра СО РАМН

Автореферат разослан « /-3 » 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук Амосова E.H.

ZDor-Ч

15 491

jfjooo

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. Одним из важных патогенетических факторов опухолевого роста, как известно, является дефектность иммунного ответа и, как следствие, развитие иммуносупрессии. Вклад в этот процесс вносят, с одной стороны, опухолевые клетки, которые сами продуцируют различные иммуносупрессорные цитокины [Fu Y.X. et al., 1991; Oghiso Y. et al., 1993]. С другой стороны, при опухолевом росте возрастает продукция иммуносупрессорных цитокинов лимфоцитами, дендритными клетками, макрофагами и др. [Alleva D.G. et al., 1994; Huang M. et al., 1998; Radoja S. et al., 2000]. Кроме того, источником иммуносупрессорных цитокинов могут бьпъ незрелые гемопоэтические клетки различных ростков кроветворения - естественные супрессорные клетки (ЕСК). ЕСК - крайне неоднородная популяция клеток нулевого фенотипа, обладающих способностью подавлять функции иммунокомпетентных клеток неспецифически (без предварительного контакта с мишенями, не требуя рестрикции по антигенам комплекса гистосовместимости) [Michelson J.D. et al. 1988; Noga S.J. et al. 1988; Saffran D.C. et al. 1991; Hoskin D.W. et al. 1992; Sugiura K. et al. 1992].

ЕСК обладают широким спектром иммунодепрессивного действия: подавляют митоген- и антиген-индуцированную пролиферацию Т-лимфоцитов, утилизацию ИЛ-2 и образование ЦТЛ; ингибируют пролиферацию и продукцию IgM В-лимфоцитами в ответ на ЛПС, а также выработку специфических антител на эритроциты барана и на опухолевые антигены; снижают активность НК и продукцию ФНО-а макрофагами [Nicoletti G. et al., 1985; Subiza J.L. et al., 1989; Young M.R. et al., 1988; Young M.R. et al., 1990; Young M.R. et al., 1994]. В то же время, ЕСК обладают способностью оказывать выраженное цитостатическое действие in vitro на опухолевые клетки [Sugiura К. et al., 1990; Seledtsov V.I. et al.,

В основе механизма иммуносупрессорного действия ECK лежит, как правило, секреция ими супрессорных факторов, таких как трансформирующий фактор роста бета (ТФР-ß), оксид азота (NO), простагландины, некоторые нуклеозиды и другие, в

1995].

том числе еще не идентифицированные вещества [Moore S.C. et al., 1992; Belsky Y.P. et al., 1993; Angulo I. et al., 1995; Kusmartsev S.A. et al., 1995; DeKoter R.P. et al., 1997; Yanagie H. et al., 1997; Mori T. et al., 1998]. Основным супрессорным фактором ECK интактного костного мозга является оксид азота [Angulo I. et al., 1995], при опухолевом росте - ТФР-бета [Young M.R.I, et al., 1990; Young M.R.I, et al., 1992]. В последнее время появились сообщения о том, что фактором ЕСК при опухолевом росте может быть оксид азота [Kusmartsev S.A. et al., 2000, Gabrilovich D.I. et al., 2001; Mazzoni A. et al., 2002].

Роль оксида азота при опухолевом росте в настоящее время активно обсуждается. В литературе имеются данные, указывающие как на проопухолевое [Jaiswal М. et al., 2000; Meeta J. et al., 2001; Kisley L.R. et al., 2002], так и противоопухолевое действие NO [Xie К. et al., 1996; Lagadec P. et al., 1999; Wei D. et al., 2003]. Какой, про- или противоопухолевый эффект будет оказывать оксид азота, может зависеть от длительности его экспозиции, его концентрации и типа тканей [Wink D.A. et al., 1998]. Низкие дозы NO стимулируют клеточный рост и предохраняют клетки от апоптоза, а высокие концентрации могут ингибировать клеточный рост и индуцировать апоптоз [Kim Р.К. et al., 2001].

В то время как факторы ЕСК, обуславливающие иммуносупрессорный эффект, известны, о медиаторах противоопухолевой активности информации нет, только в работах [Seledtsov V.I. et al., 1997; Бельский Ю.П. и др., 1999] показано, что она не зависит от NO. Было обнаружено, что при определенных экспериментальных условиях можно раздельно регулировать противоопухолевую и иммуносупрессорную активности клеток костного мозга [Бельская Н.В. и др., 2000], однако данные о путях активации противоопухолевых свойств ЕСК в литературе отсутствуют.

Печень эмбриона как источник ЕСК исследовалась мало. Известно, что она

является органом эмбрионального кроветворения, интенсивность которого

снижается к концу внутриутробного развития. Показано, что выделенные из печени

эритроидные незрелые клетки подавляют функции В-лимфоцитов и не влияют на Т-

клетки [Цырловл И.С. й,ДР~. J985J. Данные о противоопухолевой активности ЕСК *! * ►' ra.4,vj>;,t !

! ' - 3!f f!.

эмбриональной печени, а также о роли оксида азота в подавлении пролиферации мишеней в литературе отсутствуют.

Сравнительные исследования иммуносупрессорной и противоопухолевой активностей ECK популяций костномозговых клеток в зависимости от степени их обогащения незрелыми гемопоэтическими клетками хотя и представлены в литературе, но фрагментарны и противоречивы. Совсем нет данных о роли оксида азота в качестве возможного супрессорного фактора ECK у обогащенных клеточных популяций. Так, в работах [Sugiura К. et al., 1988; Sugiura К. et al., 1990] показано, что при разделении клеток по аффинности к агглютинину из зародыша пшеницы (WGA) ECK с иммуносупрессорными и противоопухолевыми свойствами сосредотачивались во фракции WGA-позитивных клеток. Напротив, в работе [Seledtsov V.l. et al., 1997] показано, что ECK с иммуносупрессорной и противоопухолевой активностями принадлежат к разным популяциям - первые к WGA+, а вторые - к WGA-негативным клеткам.

Цель исследования: изучить роль оксида азота в иммуносупрессорной и противоопухолевой активностях естественных супрессорных клеток разных кроветворных тканей (костный мозг, печень эмбриона) и обогащенных в разной степени гемопоэтическими элементами, а также механизмы инициации и реализации противоопухолевой активности в зависимости от свойств опухолевых клеток.

Задачи:

1.Сравнить вклад оксида азота в иммуносупрессорную и противоопухолевую активности разных популяций костномозговых клеток, отличающихся содержанием незрелых гемопоэтических клеток (цельный костый мозг, его неприлипающая к пластику фракция, фракция с низкой и высокой плавучей плотностью, а также при обогащении незрелыми клетками в результате длительного их культивирования).

2.Изучить иммуносупрессорные и противоопухолевые свойства клеток эмбриональной печени, участие оксида азота в их проявлении.

3.Исследовать механизмы индукции и реализации противоопухолевой активности костномозговых клеток (зависимость от контакта клетка-клетка между эффектором и мишенью, секреция индукторных и антипролиферативных факторов клетками эффекторами и мишенями).

4.Изучить противоопухолевую активность клеток костного мозга и участие в ней оксида азота с использованием различных опухолевых клеточных линий.

5.Изучить способность опухолевых клеток проявлять иммуносупрессорную активность через секрецию оксида азота.

Научная новизна. В работе показано, что оксид азота является основным фактором иммуносупрессорной, но не противоопухолевой активности костного мозга и клеток эмбриональной печени интактных животных. Впервые проведено исследование противоопухолевой активности костного мозга в зависимости от типа опухолевых клеток-мишеней и установлено, что для ее индукции необходим контакт клетка-клетка между эффектором и мишенью. Впервые показано, что опухолевые клетки способны стимулировать синтез оксида азота неприлипающими миелокариоцитами, продуцировать его сами и проявлять естественную супрессорную активность, в основе которой лежит механизм, аналогичный механизму индукции и реализации иммуносупрессорной активности кроветворных клеток интактного организма.

Практическое значение работы. Полученные данные позволят глубже понять механизмы, лежащие в основе регуляции иммунного ответа, прежде всего, направленного на подавление опухолевого роста. Результаты работы внесут вклад в представления о патогенезе иммунодепрессии, развивающейся при онкологических заболеваниях, и роль в этом опухолевых клеток.

Основные положения выносимые на защиту:

1. Неприлипающие клетки костного мозга и эмбриональной печени (14-е и 19-е сутки внутриутробного развития) обладают естественной супрессорной активностью: МО-зависимой иммуносупрессорной и МО-независимой противоопухолевой активностями. Обогащение клеток костного мозга незрелыми гемопоэтическими элементами приводит к увеличению естественной супрессорной

активности. Клеточные популяции с более высокой иммуносупрессорной активностью обладают и более высокой противоопухолевой.

2. Неприлип ающие клетки костного мозга продуцируют факторы, подавляющие пролиферацию опухолевых клеток. Выработка их индуцируется опухолевой клеткой-мишенью, при этом важную роль играет непосредственный контакт клетка-клетка между миелокариоцитами и трансформированными клетками.

3. Клетки различных опухолевых линий (карцинома легких LLC и Эрлиха, мастоцитома Р-815, лимфолейкоз L1210, миеломоноцитарная линия WEHI-3, эритролейкоз К-562) инициируют NO-независимую противоопухолевую активность костного мозга, несмотря на то, что некоторые опухоли (карцинома легких LLC и Эрлиха, миеломоноцитарная линия WEHI-3, эритролейкоз К-562) стимулируют NO-синтазу костномозговых клеток.

4. Опухолевые клетки (карцинома легких LLC и Эрлиха, мастоцитома Р-815, лимфолейкоз L1210, миеломоноцитарная линия WEHI-3) способны продуцировать оксид азота под влиянием интерферона-у, а клетки карциномы Эрлиха и миеломоноцитарной линии продуцируют его и без экзогенного стимула. Так же все эти опухолевые линии могут проявлять NO-зависимую иммуносупрессорную активность, аналогичную естественной супрессорной активности нетрансформированных гемопоэтических клеток.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены и обсуждены на конференции молодых ученых, посвященной 25-летию НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии» (Томск, 2004 г.); V-ом Конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2004 г.)

Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 10 научных статей.

Библиографический указатель включает 282 источников, в том числе 27 отечественных и 255 иностранных.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ В экспериментах было использовано 145 мышей, полученных из коллекционного фонда НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН, разного возраста обоего пола следующих линий: С57В1/6, DBA/2, Balb/c.

В качестве основных моделей опухолевого роста использовали: опухоль Эрлиха (карцинома), Р-815 (мастоцитома), LLC (карцинома легких Льюиса) -поддерживали имплантацией 1х106 клеток/мышь; опухоли Эрлиха и Р-815 перевивали внутрибрюшинно мышам линии С57В1/6 и DBA/2 соответственно, a LLC - под кожу бедра животным линии С57В1/6. Клеточные линии лимфолейкоза мыши L1210, мышиной миеломоноцитарной линии WEHI-3, человеческой эритролейкемии К-562 поддерживали in vitro.

Для получения клеточных суспензий животных забивали цервикальной дислокацией, клетки костного мозга получали промывкой бедренной и болыпеберцовой костей холодным изотоническим раствором хлорида натрия, спленоциты получали гомогенизацией селезенок. Клетки эмбриональной печени получали от эмбрионов известного возраста (16-19 сутки), гомогенизировали их печень, фильтровали через металлическую сеточку или 4-слойный капрон. Полученные клетки трижды промывали этим же раствором и ресуспендировали в культуральной среде. Клетки культивировали в среде следующего состава: RPMI 1640 («Sigma», США) с добавлением 10% ЭТС («ICN», «Serva»), 20 мМ HEPES, 0,05 мМ 2-меркаптоэтанола (оба «Sigma»), 50 мкг/мл гентамицина и 2 мМ L-глютамина (оба «Flow Lab», Великобритания). Культивирование проводили в атмосфере с 5% СОг и абсолютной влажности.

В экспериментах по изучению роли клеточных контактов различные популяции клеток культивировали совместно в лунках, разделенных между собой полупроницаемой мембраной (transwells, «Costar»), что позволяло клеткам взаимодействовать посредством растворимых факторов, но исключало прямой контакт клетка-клетка. Изучаемые клетки (по 105 опухолевых или 2х106 клеток

костного мозга) помещали в лунки с диаметром 6,5 мм и опускали в другие лунки (с диаметром 15 мм) 24-луночного планшета, содержащего клетки сингенного костного мозга (5х106), опухолевые клетки Р-815 или карциномы Эрлиха (ЗхЮ5) либо те и другие одновременно. Клетки культивировали 20-22 ч в общем объеме 2 мл. Затем клетки КМ из встроенных лунок переносили в свежую среду и использовали для получения супернатанта. У опухолевых клеток, культивированных во встроенных лунках, оценивали пролиферативную активность радиоизотопным или колориметрическим методом.

Оценка иммуносупрессорной активности проводилась по способности подавлять пролиферацию клеток-мишеней - сингенных спленоцитов, активированных митогеном. Для этого клетки-эффекторы (неприлипающие клетки костного мозга или селезенки) культивировали 60-64 ч в 96-луночных планшетах совместно с клетками-мишенями (2x105 на лунку) в различных соотношениях в присутствии конканавалина A («Sigma», 4 мкг/мл). В некоторых сериях экспериментов спленоциты-мишени предварительно инкубировали 20-22 ч с конканавалином А (4 мкг/мл), после чего митоген удаляли, а полученные лимфобласты смешивали с клетками-эффекторами в 96-луночных планшетах. За 16 ч до окончания культивирования вносили по 0,5 мкКю/лунку 3Н-тимидина (дальнейшие манипуляции описаны выше). Пролиферацию клеток выражали в количестве импульсов в минуту либо в виде индекса ингибиции (%), который вычисляли по следующей формуле: ИИ = (1 - О/К ) х100, где О - количество имп/мин в лунках (клепш-эффекторы + клепси-мишени), К - количество имп/мин в лунках с клетками-мишенями.

Противоопухолевая активность определялась по способности подавлять пролиферацию клеток-мишеней, в качестве которых использовались опухолевые клетки мастоцитомы Р-815. Для этого неприлипающие клетки-эффекторы (полученные из костного мозга) в различных концентрациях культивировали 36-40 ч в 96-луночных планшетах совместно с опухолевыми клетками (2x104 на лунку), за 16 ч до окончания культивирования вносили по 0,5 мкКю/лунку 3Н-тимидина.

Результаты выражались в процентах подавления пролиферации соответствующих клеток-мишеней.

Продукцию N0 оценивали по содержанию нитритов в супернатантах при помощи реактива Грейса [Green L.C., 1982]. Реактив (0,1 мл) смешивали с эквивалентным объемом супернатанта и измеряли абсорбцию при длине волны 550 нм. Концентрацию нитритов определяли по калибровочной кривой, построенной с использованием стандартных растворов нитрита натрия. В части экспериментов в лунки вносили 2 шМ блокагора NO-синтазы - №-монометил-Ь-аргинина (NMMA, «Sigma»).

Полученные результаты обработаны статистически с помощью программы Statistics 5. Для всех имеющихся выборок данных проверена гипотеза нормальности распределения. Для каждой выборки вычисляли среднее значение величины признака X и ошибку средней величины т. Проверка гипотезы о равенстве средних проводилась с использованием /-критерия Сгьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В костном мозге кроме ЕСК оказывать влияние на пролиферацию клеток (в том числе и через синтез оксида азота) могут и макрофаги. Кроме того, макрофаги обладают высокими адгезивными свойствами (способностью прилипать к пластику). Для выявления величины вклада макрофагов мы сравнили исследуемые показатели клеток цельного костного мозга и его фракции, содержащей неприлипающие к пластику клетки. Было обнаружено, что удаление прилипающих к пластику клеток приводит к усилению иммуносупрессорной и противоопухолевой активностей миелокариоцитов (табл. 1). При таком способе обогащения пула естественных супрессорных клеток наблюдалось увеличение их способности продуцировать оксид азота в ответ на соответствующий стимул - факторы активированных лимфоцитов-мишеней. В случае использования клеток опухоли в качестве мишеней такого стимула очевидно нет, поскольку выработка оксида азота нами не наблюдалась.

Таблица 1

Иммуиосупрессориая и противоопухолевая активности клеток различных

популяций, а также продукция ими оксида азота

Клеточные популяции Мишени - лимфоциты (200 тыс/лунку) Мишени - опухолевые клетки (20 тыс/лунку)

% супрессии конц. нитритов (мкМ) % супрессии конц. нитритов (мкМ)

Без эффекторов (контроль) 0% <2 0% <2

Цельный КМ (400 тыс.) 26,9% 12,7±0,1 73% <2

Неприлипающая фракция КМ (400 тыс.) 66,5% 28,3±0,5 82% <2

Низкоплотностная фракция КМ (400 тыс.) 95% 41,7±0,4 96,4% <2

Высокоплотностная фракция КМ (400 тыс.) - <2 - <2

Клетки эмбриональной печени 14-дневного эмбриона 51,4% 15,4±1,3 71% <2

Клетки эмбриональной печени 19-дневного эмбриона 38,1% 11,3±0,4 43,3% <2

Были изучены иммуносупрессорная и противоопухолевая активности клеточных популяций костного мозга, полученных с использованием разных способов обогащения незрелыми гемопоэтическими клетками, кроме того, показан вклад оксида азота в антипролиферативное действие ECK у фракций, обогащенных бластными клетками. Для этого были использованы следующие способы: фракционирование по плотности и длительное культивирование. Было выявлено (табл. 1), что неприлипающие миелокариоциты, имеющие плавучую плотность более 1,075 г/мл, не обладали иммуносупрессорной и противоопухолевой

активностями и не продуцировали N0. Неприлипающие клетки костного мозга с плотностью менее 1,075 г/мл проявляли данные виды активностей более выражено, чем клетки исходной, не разделённой по плотности, популяции. Полученное распределение клеток с иммуносупрессорной активностью по плотности согласуется с данными других авторов [Sugiura К. et al., 1988; Sugiura К. et al., 1990; Angulo et al., 1995]. Кроме того, одновременно с усилением иммуносупрессорных свойств клетки костного мозга в совместной культуре со спленоцитами продуцировали больше оксида азота, чем клетки контрольной культуры. Однако, несмотря на повышение антипролиферативного действия в отношении опухолевых клеток-мишеней та же популяция клеток-эффекторов в этом случае совсем не синтезировала оксида азота.

Для обогащения популяции миелокариоцитов незрелыми гемопоэтическими клетками неприлипающие клетки костного мозга культивировали в течение 1-х, 2-х, 3-х и 4-х суток, сравнивая уровень иммуносупрессорной активности клеток культуры и свежевыделенных костномозговых клеток после удаления из них способных к адгезии на пластике элементов. Было обнаружено, что уже после 2-х суток культивирования иммуносупрессорная и противоопухолевая активности костномозговых клеток достигали практически максимально возможных значений, оставаясь на этом уровне и позже. Тем не менее, после 3-х и 4-х суток рост иммуносупрессорной и противоопухолевой активностей продолжался, что можно было заметить только при очень малых соотношениях эффектор/мишень. Аналогичная динамика была отмечена и в отношении продукции оксвда азота при сокультивировании костномозговых клеток с митоген-стимулированными лимфоцитами: уже на 2-е сутки в культуре клеток концентрация нитритов была на порядок больше, чем в контроле, однако прирост количества нитритов также продолжался. При сокультивировании костномозговых клеток с опухолевыми клетками-мишенями продукция оксида азота не регистрировалась, несмотря на увеличение противоопухолевой активности у клеток костного мозга в процессе культивирования.

Таким образом, одновременно с обогащением миелокариоцитов незрелыми клетками наблюдалось закономерное усиление естественной супрессорной активности такой популяции. Клеточные популяции с более высокой иммуносупрессорной активностью проявляли и более высокую противоопухолевую. Вне зависимости от степени обогащения наблюдалось проявление NO-зависимой иммуносупрессорной и NO-независимой противоопухолевой активностей. Более высокий уровень иммуносупрессорного действия сопровождался и более интенсивным синтезом оксида азота.

В следующих экспериментах была проанализирована иммуносупрессорная, противоопухолевая и NO-синтезирующая активности неприлипающих костномозговых клеток у мышей линии С57В1/6 (п=4, п=4, п=5 соответственно в 1-ом, 2-ом и 3-м экспериментах). Было обнаружено, что костномозговая популяция со сниженной иммуносупрессорной проявляла и более низкий уровень противоопухолевой активности, а также продуцировала меньше оксида азота в иммуносупрессорном тесте. Для определения роли оксида азота в иммуносупрессорном эффекте клеток костного мозга интактных животных использовали блокатор NO-синтазы. В его присутствии происходила практически полная ее отмена. Таким образом, нами было выявлено, что иммуносупрессорная активность ECK интактного костного мозга была обусловлена оксидом азота.

Полученные результаты, подчеркивающие описанный выше механизм иммуносупрессорного действия ECK интактного костного мозга, согласуются с данными в работе [Angulo I. et al., 1995], в которой также показано, что основным супрессорным фактором является оксид азота. В отношении механизма противоопухолевой активное™ ECK полученные нами данные не противоречат имеющимся сведениям о том, что она не обусловлена оксидом азота [Вельский Ю.П. и др., 1999; Seledtsov V.l. et al., 1997].

Для того чтобы выяснить, сохраняются ли выявленные закономерности в зависимости от источника гемопоэтических клеток, была использована печень эмбрионов разного возраста. Пулы клеток печени получали из 3-6 эмбрионов, извлеченных из 2-3 самок на 14-й день гестации или из 2-3 эмбрионов, полученных

из 2 самок на 19-й день гестации. Проведенные исследования показали (табл. 1), что, как и клетки костного мозга, клетки печени эмбриона, полученные на 14-е и 19-е сутки внутриутробного развития, обладали как иммуносупрессорной, так и противоопухолевой активностями. Как и в экспериментах с клетками костного мозга, популяция, обладающая большей иммуносупрессорной активностью, имела и большую противоопухолевую, а оксид азота выступал в роли главного супрессорного фактора только против лимфоцитов и не участвовал в подавлении пролиферации опухолевых клеток. Кроме того, клетки эмбриональной печени с иммуносупрессорными свойствами, также как и клетки-продуценты оксида азота, обладали низкой плавучей плотностью. Следовательно, клетки эмбриональной печени, как и костного мозга, обладают Ж>-зависимой иммуносупрессорной и МО-независимой противоопухолевой активностями. Суммируя вышесказанное и учитывая данные других авторов, можно заключить, что естественная супрессорная активность является общим свойством гемопоэтических тканей.

По нашим данным, клетки костного мозга осуществляли свое иммуносупрессорное действие, синтезируя повышенное количество оксида азота, который являлся главным и единственным супрессорным фактором. Синтез N0 костномозговыми клетками индуцировался непосредственно самими клетками-мишенями: под влиянием митогена лимфоциты селезенки начинали секретировать повышенное количество интерферона-гамма, который и вызывал усиленный синтез оксида азота эффекторными клетками. В отсутствии стимулированных лимфоцитов клетки костного мозга не проявляли своего иммуносупрессорного действия.

Для того чтобы определить, подавляется ли пролиферация опухолевых клеток при помощи фактора (факторов) или иным образом, изучили влияние супернатантов клеточных культур различного состава на пролиферацию клеток Р-815. Было обнаружено, что супернатант монокультуры клеток костного мозга не оказывал влияния на пролиферацию мишеней, в то время как супернатант культуры, содержавшей смесь клеток костного мозга и мастоцитомы Р-815, снижал ее. Из этого можно заключить, что супрессорный фактор начинал продуцироваться при взаимодействии миелокариоцитов и клеток мастоцитомы Р-815. Возможно, что, как

и при индукции иммуносупрессорной активности, сами мишени (опухолевые клетки) продуцируют индуктор противоопухолевого фактора.

Для выяснения механизмов стимуляции секреции этого фактора изучали влияние супернатанта неприлипающих миелокариоцитов на пролиферативную активность клеток Р-815, предварительно прокультивировав миелокариоциты с супернатантом опухолевых клеток Р-815. Предварительная экспозиция клеток костного мозга с факторами опухоли не привела к появлению супрессорного эффекта. Возможно, для индукции выработки фактора миелокариоцитам необходим контакт с опухолевыми клетками-мишенями. Нельзя исключить и то, что продуцентом антипролиферативного фактора может быть сама опухолевая клетка, а источником его индуктора - клетка костного мозга. Кроме того, появление супрессорного фактора может происходить в результате ряда последовательных событий, являясь итогом нескольких обменов сигналами между клеточными популяциями.

Для выяснения, какой из предполагаемых вариантов соответствует реальности, были проведены следующие эксперименты. Опухолевые или костномозговые клетки культивировали 24 ч в присутствии других клеток, отделенных полупроницаемой мембраной. После этого изучили изменение пролиферативной активности клеток мастоцитомы и карциномы Эрлиха, в другой группе экспериментов определили способность неприлипающих клеток костного мозга продуцировать противоопухолевые факторы. Полученные результаты показали, что клетки костного мозга начинают вырабатывать противоопухолевый фактор только после обмена сигналами между костномозговыми и опухолевыми клетками. При этом важным моментом является контакт клетка-клетка. Эти результаты согласуются с данными [Seletsov V.l. et al., 1995] и показывают, что контакт между ECK и опухолевой клеткой нужен для индукции противоопухолевой активности.

Таким образом, проведенные эксперименты позволили сделать важный вывод о том, что противоопухолевая активность неприлипающих клеток костного мозга (также как и иммуносупрессорная) индуцируется самими клетками-мишенями.

Подавление пролиферации клеток опухоли осуществляется при помощи супрессорных факторов (но не NO), которые появляются в результате обмена сигналами между костномозговой и опухолевой клетками. При этом важную роль играют непосредственные контакты клетка-клетка.

Отсутствие участия оксида азота в противоопухолевой активности ECK, показанное нами, может быть также следствием свойств используемой мишени клеток мастоцитомы Р-815. Другими словами, неспособность этих клеток стимулировать индуцибельную NO-синтазу ECK могла явиться возможной причиной того, что в противоопухолевом тесте нитриты не обнаруживались. Для выяснения вопроса, способны ли другие опухолевые клетки вызывать проявление противоопухолевой активности ECK через механизм, аналогичный механизму иммуносупрессорной активности (т.е. через стимулирование синтеза оксида азота), были проведены эксперименты с использованием нескольких клеточных опухолевых линий. Клетки различались по гистологическим характеристикам, представляя собой карциномы (легких - LLC, аденокарцинома Эрлиха) и опухоли гемопоэтической ткани. Последние были представлены линиями, происходящими из разных ростков кроветворения - мастоцитома (Р-815), лимфолейкоз (L1210), миеломоноцитарная линия (WEHI-3) и эритролейкоз (К-562). Клетки карцином LLC, Эрлиха, миеломоноцитарной линии WEHI-3 и эритролейкоза К-562 индуцировали синтез оксида азота неприлипающими миелокариоцитами, в то время как у клеток Р-815 и L1210 такой способности не выявлено.

В проведенных экспериментах клетки костного мозга культивировались не с опухолевыми клетками, а с их супернатантами. Было обнаружено, что супернатант опухоли Эрлиха дозозависимо повышал концентрацию нитритов в культуре, а супернатант Р-815 - нет. Супернатанты клеток эритролейкоза человека К-562, карциномы Льюиса LLC и миеломоноцитарной линии WEHI-3 также стимулировали продукцию оксида азота костномозговыми клетками. Эксперименты с использованием блокатора NO-синтазы (NMMA) подтвердили, что факторы опухолевых клеток стимулируют индуцибельную NO-синтазу миелокариоцитов.

Для получения ответа на вопрос о возможности активирования опухолевыми клетками противоопухолевого действия ECK через стимулирование синтеза оксида азота, были проведены эксперименты с использованием нескольких клеточных опухолевых линий. Когда в качестве мишеней выступили клетки L1210, факторы которых, как и клеток мастоцитомы Р-815, не стимулировали продукцию оксида азота, нитритов обнаружено не было. При использовании в качестве мишеней тех опухолевых клеток, супернатанты которых стимулировали продукцию оксида азота клетками костного мозга (LLC, карцинома Эрлиха, К-562), выработка его в небольших количествах была отмечена лишь в одном случае. Наличие выраженной супрессорной активности в отсутствии продукции оксида азота показывает, что в этом случае он не являлся ведущим супрессорным фактором.

В случае применения клеток эритролейкозной линии К-562 на фоне значительного уровня противоопухолевой активности наблюдалось и большое количество нитритов. Таким образом, можно предполагать, что при использовании в качестве мишеней клеток К-562 имелся значительный вклад оксида азота в противоопухолевую активность клеток костного мозга.

Полученные результаты показывают, что все изученные опухолевые клетки активируют противоопухолевые эффекторы костного мозга. Однако роль оксида азота в реализации противоопухолевого действия невелика.

Опухолевые клетки, также как и ECK, являются низкодифференцированными. Обладают ли такие трансформированные бласты иммуносупрессорными свойствами, присущими низкодифференцированным гемопоэтическим клеткам? Из представленных выше данных очевидно, что иммуносупрессорное действие клеток интактного организма, по сути, обусловлено их способностью продуцировать оксид азота в ответ на Т-лимфоцитарный стимул.

Мы оценили способность опухолевых клеток, происходящих из различных ростков гемопоэза, а так же из не гемопоэтических тканей, отвечать на интерферону продукцией оксида азота. Было обнаружено (рис.1), что исследуемые клеточные линии карциномы легких LLC и Эрлиха, мастоцитомы Р-815, лимфолейкоза L1210, миеломоноцитарной линии WEH1-3 (пять из шести протестированных) были

способны к синтезу оксида азота под влиянием Т-клеточных факторов, а две из них продуцировали его и без экзогенного стимула (карцинома Эрлиха и WEHI-3). Следовательно, экспрессия индуцибельной NO-синтазы опухолевыми клетками является достаточно распространенным явлением среди них. Единственная опухолевая линия, не синтезирующая оксид азота (К-562), имела эритроидное происхождение. Дело в том, что нетрансформированные эритробласты оказывают избирательное иммуносупрессорное действие в отношении В-, но не Т-лимфоцитов [Цырлова И.Г. и др., 1986; Сенников C.B. и др., 1988]. Эритроидные супрессоры не подавляют пролиферацию Т-лимфоцитов, стимулированную митогеном [Цырлова И.Г. и др. 1986; Кашлакова Н.В. и др., 1988] или аллоантигеном [Кашлакова Н.В. и др., 1987], то есть в присутствии интерферона-у Таким образом, в случае с клетками опухоли К-562 нельзя говорить об утрате естественной супрессорной активности в процессе злокачественной трансформации. Биологический смысл отсутствия NO-синтазной активности у эритроидных клеток связан, вероятно, с особенностями физиологии этих клеток. Основной их задачей является синтез гемоглобина, который, как известно, связывается с оксидом азота с образованием метгемоглобина и нитратов [Doyle М.Р. et al., 1981]. Поэтому одновременный синтез NO и гемоглобина становился бы биологически бессмысленным.

Резюмируя вышесказанное, можно заключить, что трансформированные низкодифференцированные клетки способны реализовывать тот же механизм иммуносупрессии, который свойственен и аналогичным нормальным гемопоэтическим, а возможно и иным незрелым клеткам.

Эрлих WEHI-3 LLC P-815 L1210 K-562 клеточные линии

о контроль в "+"Т-факторы

Рис.1. Продукция оксида азота различными опухолевыми клетками под действием факторов Т-лимфоцитов

ВЫВОДЫ

1. Обогащение популяции миелокариоцитов незрелыми гемопоэтическими клетками сопровождается увеличением ее естественной супрессорной активности. Клеточные популяции с более высокой иммуносупрессорной активностью проявляют и более высокую противоопухолевую. Вне зависимости от способа обогащения незрелыми клетками наблюдается проявление МО-зависимой иммуносупрессорной и МО-независимой противоопухолевой активностей.

2. Клетки печени эмбрионов мыши (14-е и 19-е сутки внутриутробного развития) обладают МО-зависимой иммуносупрессорной и МО-независимой противоопухолевой активностями. Клетки эмбриональной печени с иммуносупрессорными свойствами обладают низкой плавучей плотностью.

3. В основе механизма противоопухолевого действия неприлипающих клеток костного мозга лежит продукция ими факторов, подавляющих пролиферацию опухолевых клеток. Выработка их индуцируется опухолевой клеткой-мишенью, при этом важную роль играет непосредственный контакт клетка-клетка между миелокариоцитами и трансформированными клетками.

4. Клетки различных опухолевых линий (карцинома легких LLC и Эрлиха, мастоцитома Р-815, лимфолейкоз L1210, миеломоноцитарная линия WEHI-3, эритролейкоз К-562) инициируют NO-независимую противоопухолевую активность костного мозга.

5. Клетки некоторых опухолей (карцинома легких LLC и Эрлиха, миеломоноцитарная линия WEHI-3, эритролейкоз К-562) стимулируют NO-синтазу костномозговых клеток. Несмотря на это, роль оксида азота в противоопухолевой активности и в этих случаях несущественна.

6. Опухолевые клетки (карцинома легких LLC и Эрлиха, мастоцитома Р-815, лимфолейкоз L1210, миеломоноцитарная линия WEHI-3) могут проявлять N0-зависимую иммуносупрессорную активность, аналогичную естественной супрессорной активности нетрансформированных гемопоэтических клеток.

7. Опухолевые клеточные линии (карцинома легких LLC и Эрлиха, мастоцитома Р-815, лимфолейкоз L1210, миеломоноцитарная линия WEHI-3) способны продуцировать оксид азота под влиянием интерферона-у, а клетки карциномы Эрлиха и миеломоноцитарной линии продуцируют его и без экзогенного стимула.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Роль естественных супрессорных клеток во взаимодействии гемопоэтической и иммунной систем. // Експериментальна i клшчна медицина.-2003.-№ 2.-С. 36-43. Изд-во Харьковского гос. медицинского университета (соавт. Вельский Ю.П., Вельская Н.В., Данилец М.Г., Агафонов В.И.).

2. Естественная супрессорная активность и опухолевый рост. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-2003.-Прилож. № 2.-С. 68-75. (соавт. Вельский Ю.П., Вельская Н.В., Данилец М.Г., Трофимова Е.С., Агафонов В.И.).

3. Изучение активности естественных супрессорных клеток при опухолевом росте. // В сб. «Актуальные проблемы фармакологии».-Томск, 2004, Изд-во ТГУ,

с.34-36. (соавт. Вельский Ю.П., Вельская Н.В., Данилец М.Г., Трофимова Е.С., Агафонов В.И.).

4. Иммуносупрессорная активность естественных супрессорных клеток при гиперчувствительности немедленного типа, вызванной овальбумином. II В сб. «Актуальные проблемы фармакологии».-Томск, 2004, Изд-во ТГУ, с.99-101. (соавт. Вельская Н.В., Данилец М.Г., Трофимова Е.С., Вельский Ю.П., Агафонов В.И.)

5. Роль клеточных взаимодействий в индукции противоопухолевой активности естественных супрессорных клеток // Сб. статей по материалам 5-го конгресса молодых ученых и специалистов «Науки о человеке», Томск, 20-21 мая 2004 г., под ред. Огородовой JI.M., Капилевича J1.B., Томск, СибГМУ, 2004, стр. 314-315. (соавт. Вельский Ю.П., Вельская Н.В., Данилец М.Г., Трофимова Е.С., Агафонов В.И.).

6. Иммуносупрессорная и противоопухолевая активности различных популяций костномозговых клеток. // Сибирский онкологический журнал (Томск).-2004.-№ 2-3 (10-11).-С.118-123. (соавт. Вельский Ю.П., Данилец М.Г., Вельская Н.В., Трофимова Е.С., Агафонов В.И.).

7. Роль оксида азота в иммуносупрессорной активности клеток костного мозга при экспериментальном опухолевом росте. // Материалы Российской научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы развития экспериментальной и клинической онкологии», поев. 25-летию НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН.-Томск, 24-25 июня 2004.-С.63-64. (соавт. Вельский Ю.П., Вельская Н.В.,. Данилец М.Г, Трофимова Е.С., Агафонов В.И.).

8. Иммуносупрессорная и противоопухолевая активности клеток костного мозга у животных с разным генотипом. Роль оксида азота. // Материалы Российской научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы развития экспериментальной и клинической онкологии», поев. 25-летию НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН.-Томск, 24-25 июня 2004.-С.61-62. (соавт. Вельский Ю.П., Вельская Н.В., Данилец М.Г., Трофимова Е.С., Агафонов В.И.).

9. Продукция оксида азота клетками опухолевых линий. // Материалы Российской научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы развития экспериментальной и клинической онкологии», поев. 25-

летаю НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН.-Томск, 24-25 июня 2004.-С.180-181. (соавт. Вельский Ю.П., Вельская Н.В., Данилец М.Г., Трофимова Е.С., Агафонов В.И.).

10. Иммуносупрессорная активность костно-мозговых клеток мышей при гиперчувствительности немедленного типа. // Иммунология. - 2004.-Т25.-№ 4-С213-215. (соавт. Вельская Н.В., Вельский Ю.П., Данилец М.Г., Трофимова Е.С., Агафонов В.И.).

í i

№1 8 8 4 1

РНБ Русский фонд

2005-4 15491

Тираж 100. Заказ 1043. Томский государственный университет систем управления и радиоэлектроники пр. Ленина, 40

Оглавление диссертации Патрушев, Виктор Константинович :: 2004 :: Томск

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Общая характеристика естественных супрессорных клеток.

1.2. Субпопуляции естественных супрессорных клеток.

1.3. Механизмы действия естественных супрессорных клеток.

1.4. Естественные супрессорные клетки при опухолевом росте.

1.5. Роль оксида азота при опухолевом росте.

1.5.1. Противоопухолевые эффекты оксида азота.

1.5.2. Проопухолевое действие оксида азота.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ.т.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ЗЛ. Исследование иммуносупрессорной и противоопухолевой активностей естественных супрессорных клеток при обогащении их популяции незрелыми гемопоэтическими клетками. Роль оксида азота.

3.1.1. Исследование активности естественных супрессорных клеток цельного костного мозга и его неприлипающей фракции.

3.1.2. Изучение активности естественных супрессорных клеток костного мозга при фракционировании их по плотности. Роль оксида азота.

3.1.3. Естественная супрессорная активность клеточных популяций миелокариоцитов, обогащенных незрелыми гемопоэтическими клетками при длительном культивировании, участие в ней оксида азота.

3.2. Вклад оксида азота в иммуносупрессорную и противоопухолевую активности клеток разных гемопоэтических тканей.

3.2.1. Роль оксида азота в иммуносупрессорной и противоопухолевой активностях клеток костного мозга взрослых мышей в отношении разных мишеней.

3.2.2. Исследование активности естественных супрессорных клеток из эмбриональной печени.

3.3. Изучение противоопухолевой активности естественных супрессорных клеток костного мозга.

3.3.1. Механизмы противоопухолевого действия естественных супрессорных клеток костного мозга.

3.3.2. Зависимость механизмов противоопухолевой активности естественных супрессорных клеток от свойств опухолевых клеток.

3.4. Иммуносупрессорная активность опухолевых клеток.

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Патрушев, Виктор Константинович, автореферат

Актуальность. Одним из важных патогенетических факторов опухолевого роста, как известно, является дефектность иммунного ответа и, как следствие, развитие иммуносупрессии. Вклад в этот процесс вносят, с одной стороны, опухолевые клетки, которые сами продуцируют различные иммуносупрессорные факторы [Fu U.X. et al., 1991; Oghiso Y. et al., 1993]. С другой стороны, при опухолевом росте возрастает продукция иммуносупрессорных цитокинов лимфоцитами, дендритными клетками, макрофагами и др. [Alleva D.G. et al., 1994; Huang M. et al., 1998; Radoja S. et al., 2000]. Кроме того, источником иммуносупрессорных цитокинов могут быть незрелые гемопоэтические клетки различных ростков кроветворения -естественные супрессорные клетки (ЕСК). ЕСК — крайне неоднородная популяция клеток нулевого фенотипа, обладающих способностью подавлять функции иммунокомпетентных клеток неспецифически (без предварительного контакта с мишенями, не требуя рестрикции по антигенам комплекса гистосовместимости) [Michelson J.D. et al. 1988; Noga S.J. et al. 1988; Saffran D.C. et al. 1991; Hoskin D.W. et al. 1992; SugiuraK. et al. 1992].

ЕСК обладают широким спектром иммунодепрессивного действия: подавляют митоген- и антиген-инду цированну го пролиферацию Т-лимфоцитов, утилизацию ИЛ-2 и образование ЦТЛ; ингибируют пролиферацию и продукцию IgM В-лимфоцитами в ответ на ЛПС, а также выработку специфических антител на эритроциты барана и на опухолевые антигены; снижают активность ПК и продукцию ФНО-а макрофагами [Nicoletti G. et al., 1985; Subiza J.L. et al., 1989; Young M.R. et al., 1988; Young M.R. et al., 1990; Young M.R. et al., 1994]. В то же время, ЕСК обладают способностью оказывать выраженное цитостатическое действие in vitro на опухолевые клетки [SugiuraK. et al., 1990; Seledtsov V.I. et al., 1995].

В основе механизма иммуносупрессорного действия ЕСК лежит, как правило, секреция ими супрессорных факторов, таких как трансформирующий фактор роста бета (ТФР-Р), оксид азота (NO), простагландины, некоторые нуклеозиды и другие, в том числе еще не идентифицированные вещества [Moore S.C. et al., 1992; Belsky Y.P. et al., 1993; Angulo I. et al., 1995; Kusmartsev S.A. et al., 1995; DeKoter R.P. et al., 1997; Yanagie H. et al., 1997; Mori T. et al., 1998]. Основным супрессорным фактором ЕСК интактного костного мозга является оксид азота [Angulo I. et al., 1995], при опухолевом росте - ТФР-бета [Young M.R.I, et al., 1990; Young M.R.I. et al., 1992]. В последнее время появились сообщения о том, что фактором ЕСК при опухолевом росте может быть оксид азота [Kusmartsev S.A. et al., 2000, Gabrilovich D.I. et al., 2001; Mazzoni A. et al., 2002].

Роль оксида азота при опухолевом росте в настоящее время активно обсуждается. В литературе имеются данные, указывающие как на проопухолевое [Jaiswal М. et al., 2000; Meeta J. et al., 2001; Kisley L/R et al., 2002], так и противоопухолевое действие NO [Xie К. et al., 1996; Lagadec P. et al., 1999; Wei D. et al., 2003]. Какой, про- или противоопухолевый эффект будет оказывать оксид азота, может зависеть от длительности его экспозиции, его концентрации и типа тканей [Wink D.A. et al., 1998]. Низкие дозы NO стимулируют клеточный рост и предохраняют клетки от апоптоза, а высокие концентрации могут ингибировать клеточный рост и индуцировать апоптоз [Kim Р.К. et al., 2001].

В то время как факторы ЕСК, обуславливающие иммуносупрессорный эффект, известны, о медиаторах противоопухолевой активности информации нет, только в работах [Seledtsov V.I. et al., 1997; Вельский Ю.П. и др., 1999] показано, что она не зависит от NO. Было обнаружено, что при определенных экспериментальных условиях можно раздельно регулировать противоопухолевую и иммуносупрессорную активности клеток костного мозга [Вельская H.B. и др., 2000], однако данные о путях активации противоопухолевых свойств ECK в литературе отсутствуют.

Печень эмбриона как источник ECK исследовалась мало. Известно, что она является органом эмбрионального кроветворения, интенсивность которого снижается к концу внутриутробного развития. Показано, что выделенные из печени эритроидные незрелые клетки подавляют функции B-лимфоцитов и не влияют на Т-клепш [Цырлова И.Г. и др., 1985]. Данные о противоопухолевой активности ECK эмбриональной печени, а также о роли оксида азота в подавлении пролиферации мишеней в литературе отсутствуют.

Сравнительные исследования иммуносупрессорной и противоопухолевой активностей ECK популяций костномозговых клеток в зависимости от степени их обогащения незрелыми гемопоэтическими клетками хотя и представлены в литературе, но фрагментарны и противоречивы. Совсем нет данных о роли оксида азота в качестве возможного супрессорного фактора ECK у обогащенных клеточных популяций. Так, в работах [Sugiura К. et al., 1988; Sugiura К. et al., 1990b] показано, что при разделении клеток по аффинности к агглютинину из зародыша пшеницы (WGA) ECK с иммуносупрессорными и противоопухолевыми свойствами сосредотачивались во фракции WGA-позитивных клеток. Напротив, в работе [Seledtsov V.l. et al., 1997] показано, что ECK с иммуносупрессорной и противоопухолевой активностями принадлежат к разным популяциям - первые к WGA+, а вторые - к WGA-негативньтм клеткам.

Задачи:

1.Сравнить вклад оксида азота в иммуносупрессорную и противоопухолевую активности разных популяций костномозговых клеток, отличающихся содержанием незрелых гемопоэтических клеток (цельный костный мозг, его неприлипающая к пластику фракция, фракция с низкой и высокой плавучей плотностью, а также при обогащении незрелыми клетками в результате длительного их культивирования).

3.Исследовать механизмы индукции и реализации противоопухолевой активности костномозговых клеток (зависимость от контакта клетка-клетка между эффектором и мишенью, секреция индукторных и антгатролиферативных факторов клетками эффекторами и мишенями).

Основные положения выносимые на защиту.

1. Неприлипающие клетки костного мозга и эмбриональной печени (14-е и 19- сутки внутриутробного развития) обладают естественной супрессорной активностью: NO-зависимой иммуносупрессорной и NO-независимой противоопухолевой активностями. Обогащение клеток костного мозга незрелыми гемопоэтическими элементами приводит к увеличению естественной супрессорной активности. Клеточные популяции с более высокой иммуносупрессорной активностью обладают и более высокой противоопухолевой.

2. Неприлипающие клетки костного мозга продуцируют факторы, подавляющие пролиферацию опухолевых клеток. Выработка их индуцируется опухолевой клеткой-мишенью, при этом важную роль играет непосредственный контакт клетка-клетка между миелокариоцитами и трансформированными клетками.

4. Опухолевые клетки (карцинома легких LLC и Эрлиха, мастоцитома Р-815, лимфолейкоз L1210, миеломонодитарная линия WEHI-3) способны продуцировать оксид азота под влиянием интерферона-у, а клетки карциномы Эрлиха и миеломоноцитарной линии продуцируют его и без экзогенного стимула. Так же все эти опухолевые линии могут проявлять NO-зависимую иммуносупрессорную активность, аналогичную естественной супрессорной активности нетрансформированных гемопоэтических клеток.

Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 10 научных статей.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 150 страницах машинописного текста и состоит из введения, 4-х глав, выводов и списка литературы. Работа проиллюстрирована 19 рисунками и 16 таблицами. Библиографический указатель включает 282 источника, в том числе 27 отечественных и 255 иностранных.

Заключение диссертационного исследования на тему "Роль оксида азота в иммуносупрессорной и противоопухолевой активностях естественных супрессорных клеток"

1. Обогащение популяции миелокариоцитов незрелыми гемопоэтическими клетками сопровождается увеличением их естественной супрессорной активности. Клеточные популяции с более высокой иммуносупрессорной активностью проявляют и более высокую противоопухолевую. Вне зависимости от способа обогащения наблюдается проявление NO-зависимой иммуносупрессорной и NO-независимой противоопухолевой активностей.2. Клетки печени эмбрионов мыши (14-е и 19- сутки внутриутробного

развития) обладают NO-зависимой иммуносупрессорной и NO-независимой противоопухолевой активностями. Клетки эмбриональной печени с иммуносупрессорньими свойствами обладают низкой плавучей плотностью.3. В основе механизма противоопухолевого действия неприлипающих клеток костного мозга лежит продукция ими факторов, подавляющих пролиферацию опухолевых клеток. Выработка их индуцируется опухолевой клеткой мишеныо, при этом важную роль играет непосредственный контакт клетка клетка между миелокариоцитами и трансформированными клетками.4. Клетки различных опухолевых линий (карцинома легких LLC и Эрлиха, мастоцитома Р-815, лимфолейкоз L1210, миеломоноцитарная линия WEHI-3, эритролейкоз К-562) инициируют NO-независимую противоопухолевую активность костного мозга.5. Клетки некоторых опухолей (карцинома легких LLC и Эрлиха, миеломоноцитарная линия WEHI-3, эритролейкоз К-562) стимулируют N0-

синтазу костномозговых клеток. Несмотря на это, роль оксида азота в противоопухолевой активности миелокариоцитов и в этих случаях несущественна.6. Опухолевые клетки (карцинома легких LLC и Эрлиха, мастоцитома Р-815, лимфолейкоз L1210, миеломоноцитарная линия WEHI-3) могут проявлять N0-

зависимую иммуносупрессорную активность, аналогичную естественной супрессорной активности нетрансформированных гемопоэтических клеток.7. Клетки ряда опухолевых линий (карцинома легких LLC и Эрлиха, мастоцитома Р-815, лимфолейкоз L1210, миеломонощггарная линия WEHI-3) способны продуцировать оксид азота под влиянием интерферона^/, а клетки карциномы Эрлиха и миеломоноцитарной линии продуцируют его и без экзогенного стимула

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2004 года, Патрушев, Виктор Константинович

1. Адамян А.Т., Смольянинов Е.С., Васильев Н.В., Удут В.В. Типологический анализ реакций системы иммунитета у больных раком молочной железы и здоровых женщин. // Иммунология.-1989.-№ 5.-С.56-59.

2. Вельская Н.В., Данилец М.Г., Вельский Ю.П., Трофимова Е.С., Кусмарцев С.А., Агафонов В.И. Характеристика естественной супрессорной активности при росте опухоли Эрлиха. // Бюлл. эксп. биол. и мед. — 2000. -Приложение 1. С. 60-63.

3. Вельский Ю.П., Вельская Н.В., Данилец М.Г. и др. Супрессорная и противоопухолевая активность клеток костного мозга и селезенки мышей AKR при старении. //Бюлл. эксп. биол. имед.-1999.-Т.127.-№ 4.-С.452-454.

4. Гольдберг Е.Д., Вельский Ю.П., Данилец М.Г., Дыгай A.M., Коснырева Л.А., Кусмарцев С.А., Хлусов И.А. Структурно-функциональная организация костного мозга в динамике старения мышей AKR/J // Бюлл. эксперим. биол. медиц. 1998. -N. 3. - С. 266-268.

5. Кашлакова Н.В. Иммунодепрессивное действие бластных клеток эритроидной природы in vitro. // Автореф.дис. . канд.биол.наук. Новосибирск: Ин-т клинич. иммунол. АМН СССР, 1987.-21 с.

6. Кашлакова Н.В., Лисуков И.А., Цырлова И.Г., Васильев Н.В., Козлов В.А. Супрессивный эффект бластных клеток мышей линии AKR на антителообразование in vivo и пролиферацию in vitro // Бюлл. эксперим. биол. медиц.-1988.-1чГ 2.-С. 184-186.

7. Козлов В.А., Цырлова И.Г., Чеглякова В.В. Иммунорегуляторные клетки нелимфоидной природы (Ег-супрессоры) // Докл. АН CCCP.-1984.-T.273.-N 1.-С.67-69.

8. Лисуков И.А., Цырлова И.Г., Козлов В.А. Влияние андрогенов на развитие лейкоза у мышей линии AKR // Эксперим. онкол. 1986. - Т.8. - N. 1. -С. 71-73.

9. Митасов A.B., Черных Е.Р., Цырлова И.Г., Шубинский Г.З., Козлов В.А. Действие Эр-супрессорного фактора (ов) на пролиферацию лимфоцитов человека // Иммунол.-1990.-К5.-С.61-63.

10. Пол У., Сильверстайн А., Купер М. И др. Иммунология: В 3-х т. Т.1. Пер. с англ./ Под ред. У. Пола. -И53 М.: Мир, 1987 1988. С. 414-462.

11. Самарин Д.М., Селедцова Г.В., Селедцов В.И., Тарабан В.А., Козлов В.А. Супрессорный эффект незрелых эритроидных клеток на пролиферацию В клеток. //Бюлл. эксперим. биол. медиц.-1997.-№.1.-С.66-70.

12. Сенников C.B. Влияние эритробластов на реакции клеточного и гуморального иммунитета//Автореф. дис. .канд.мед.наук, Новосибирск:Ин-т юшнич. иммунол. АМН СССР, 1988а.-22с.

13. Сенников C.B., Кашлакова Н.В., Санин A.B., Цырлова И.Г., Козлов В.А. Исследование роли Т-лимфоцитов в иммуносупрессии, осуществляемой клетками эритроидного ряда // Иммунол.-1987.-N 3.-С.36-38.

14. Сенников C.B., Козлов В.А. Эритробласты клетки-регуляторы в системе гемопоэза // Всесоюзн. конфер. с междунар. участием. Под ред. Гольдберга Е.Д., Козлова В.А. Томск.-1988Ь.-С.21-23.

15. Сенюков B.B. Иммунорегуляторная и противоопухолевая активность клеток эритроидного ряда. // Автореф.дис. . канд.биол.наук. Новосибирск: ГУ НИИ клинич. иммунол. СО РАМН, 2000.-18 с.

16. Трофимова Е.С., Вельский Ю.П., Вельская Н.В., Агафонов В.И. Механизм усиления иммуносупрессорных свойств клеток костного мозга при росте карциномы Эрлиха. //БЭБМ, 2001, приложение 1, с.75-77.

17. Хаитов P.M. Т и В-супрессоры и контрсупрессоры при опухолевом росте // ВИНИТИ, сер. Онкология. 1984. - Т. 13. - С. 50.

18. Цырлова И.Г. Взаимоотношения между эритропоэзом и иммуногенезом // Автореф.дис. д-ра мед.наук, М.:Ин-т иммунологии МЗ СССР, 1987.

19. Цырлова И.Г. Иммуносупрессорные клетки эритроидноо ряда Эр-супрессоры и их роль в регуляции иммунитета // Вестн. АМН СССР.-1991.-N 12.-С.34-39.

20. Цырлова И.Г., Кашлакова Н.В., Козлов В.А. Влияние клеток "эритропоэтической" селезенки на пролиферацию Т- и В-лимфоцитов // Иммунол.-1986.-N 4.-С.27-29.

21. Чеглякова В.В. Клетки-регуляторы гуморального иммунного ответа эритроидной приоды //Автореф.дис. .канд.мед.наук, Новосибирск: Ин-т клинич. иммунол. АМН СССР, 1984.-25 с.

22. Чеглякова В.В., Цырлова И.Г., Козлов В.А. Эритроидная природа естественных супрессорных клеток костного мозга. //Иммунол.-1989.-Ы.З.-С.52-55.

23. Adler Н., Frech В., Thony М., Pfíster Н., Peterhans Е., Jungi T.W. Inducible nitric oxide synthase in cattle. Differential cytokine regulation of nitric oxidesynthase in bovine and murine macrophages. I I J. Immunol.-1995.-V. 154.-P.4710-4718.

24. Ahn B., Ohshima H. Suppression of intestinal polyposis in Ape (Min/+) mice by inhibiting nitric oxide production. // Cancer Res.-2001.-V. 61.-P.8357-8360.

25. Alalami O., Martin J.H. ZR-75-1 human breast cancer cells: expression of inducible nitric oxide synthase and effect of tamoxifen and phorbol ester on nitric oxide production. // Cancer Lett.- 1998.-V. 123.-P.99-105.

26. Alleva D.G., Burger C.J., Elgert K.D. Tumor-induced regulation of suppressor macrophage nitric oxide and TNF-a production: role of tumor-derived 3L-10, TGF-B and prostaglandin E2. //J. Immunol.-1994.-V. 153.-P. 1674-1686.

27. Almand B., Resser J.R., Lindman B., Nadaf S., Clark J.I., Kwon E.D., Carbone D.P., Gabrilovich D.I. Clinical significance of defective dendritic cell differentiation in cancer. // Clin. Cancer Res.-2000.-V. 6.-P. 1755-1762.

28. Angulo I., Rodriguez R., Garcia B. Involvement of nitric oxide in bone marrow-derived natural suppressor activity. Its dependence of IFN-g. // J.Immunol.-1995.-V.155.-P. 15-26.

29. Bakshi A., Nag T.C., Wadhwa S., Mahapatra A.K., Sarkar C. The expression of nitric oxide synthases in human brain tumours and peritumoral areas. // J. Neurol. Sci.-1998.-V. 155, №2.-P. 196-203.

30. Bani D., Masini E., Bello M.G., Bigazzi M., Sacchi T.B. Relaxin activates the L-arginine-nitric oxide pathway in human breast cancer cells. // Cancer Res.-1995.-V. 55.-P.5272-5275.

31. Belsky Y.P., Zemlyanskaya N.V., Kusmartsev S.A. Increasing activity of natural suppressor cells and production suppressor factor by bone marrow cells in aging of mice of high-tumor strain. // 2th Int. Congress ISNIM, Salerno, Italy, 1993.-P.284.

32. Binder C., Schulz M., Hiddemann W., Oellerich M. Induction of inducible nitric oxide synthase is an essential part of tumor necrosis factor-a-induced apoptosis in MCF-7 and otlier epithelial tumor cells. // Lab. Investig.-1999.-V. 79.-P.1703-1712.

33. Bing R.J., Miyataka M., Rich K.A., Hanson N., Wang X., Slosser H.D., Shi S.R. Nitric oxide, prostanoids, cyclooxygenase and angiogenesis in colon and breast cancer. //Clin. CancerRes.-2001.-V. 7.-P.3385-3392.

34. Bronte V., Apolloni E., Cabrelle A., Ronca R., Serafini P., Zamboni P., Restifo N.P., Zanovello P. Identification of a CDllb/Gr-l/CD31 myeloid progenitor capable of activating or suppressing CD8 T cells. // Blood.-2000.-V. 96.-P.3838-3846.

35. Brooks-Kaiser J.C., Borque L.A., Hoskin D.W. Heterogeneity of splenic natural suppressor cells induced in mice by treatment with cyclophosphamide. // Immunopharm.-1993a.-V. 25.-P. 117-129.

36. Brooks-Kaiser J.C., Murgita R.A., Hoskin D.W. Pregnancy-associated suppressor cells in mice: functional characteristics of CD3+4-8-45R+ T cells with natural suppressor activity. //J. Reprod. Immunol.-1992.-V.21.-P. 103-125.

37. Chang M.J., Modzelewski R.A., Russell D.M., Johnson C.S. Interleukin 1 alpha and gamma-interferon induction of nitric oxide production from murine tumor-derived endothelial cells. // Cancer Res.-1996.-V. 56, № 4.-P.886-891.

38. Chen Q., Daniel V., Maher D.W., Hersey P. Production of IL-10 by melanoma cells: examination of its role in immunosuppression mediated by melanoma. // Int. J. Cancer.-1994.-V. 56.-P.755-761.

39. Chhatwal V.J., Ngoi S.S., Chan S.T., Chia Y.W., Moochhala S.M. Aberrant expression of nitric oxide synthase in human polyps, neoplastic colonic mucosa and surrounding peritumoral normal mucosa. // Cancinogenesis.-1994.-V. 15.-P.2081-2085.

40. Chin K., Kurashima Y., Ogura T., Tajiri H., Yoshida S., Esumi H. Induction of vascular endothelial growth factor by nitric oxide in human glioblastoma and hepatocellular carcinoma cells. // Oncogene.-1997.-V. 15.-P.437-442.

41. Choi K.L., Maier T., Holda J.H., Claman H.N. Suppression of cytotoxic T-cell generation by natural suppressor cells from mice with GVHD is partially reversed by indomethacin. // Cell. ImmunoL-1988.-V112.-P.271-278.

42. Cipone G.M., Festuccia C., Cironi L., Cavallo G., Chessa M.A., Pensa V., Tubaro E., Santoni A. Induction of the nitric oxide-synthesizing pathway in fresh and interleukin 2-cultured rat natural killer cells. // Cell. hnmunol.-1994.-V. 157.-P.181—194.

43. Clark D.A., Slapsys R., Croy B.A., Kroek J., Rossant J. Local active suppression cells in the decidua. // Am. J. Reprod. Immunol.-1984.-V.5.-P.78-83.

44. Cobbs C.S., Brenman J.E., Aldape K.D., Bredt D.S., Israel M. Expression of nitric oxide synthase in human central nervous system tumors. // Cancer Res.-1995.-V. 55.-P.727—730.

45. Cortesina G., Sacchi M., Galeazzi E., De Stefani A. Immunology of head and neck cancer: perspectives. //HeadNeck.-1993.-V. 15.-P.74-77.

46. Cui S., Reichner J.S., Mateo R.B., Albina J.E. Activated murine macrophages induce apoptosis in tumor cells through nitric oxidedependent or -independent mechanisms. //Cancer Res.-1994.-V. 54.-P.2462-2467.

47. Curley S.A., Roh M.S., Feig B., Oyedeji C., Kleinerman E.S., Klostergaard J. Mechanisms of Kupffer cell cytotoxicity in vitro against the syngeneic murine colon adenocarcinoma line MCA26. //J.Leukoc. Biol., (1993) 53, 715-721.

48. Deruysscher D., Sobis H., Vandeputte M., Waer M. A subset of asialo GM1+ cells play a protective role in the occurrence of graft-versus-host disease in mice. // J. Immun.-1991.-V146.-Is.l2.-P.4065-4070.

49. Dinapoli M.R., Calderon C.L., Lopez D.M. The altered tumoricidal capacity of macrophages isolated from tumor-bearing mice is related to reduce expression of the inducible nitric oxide synthase gene. // J. Exp. Med.-1996.-V. 183.-P.1323-1329.

50. Dong Z., Staroselsky A.H., Qi X., Xie K., Fidler I.J. Inverse correlation between expression of inducible nitric oxide synthase activity and production of metastasis in K-1735 murine melanoma cells. // Cancer Res.-1994.-V. 54.-P.789-793.

51. Doyle M.P., Hoekstra J.W. Oxidation of nitrogen oxides by bound dioxygen in hemoproteins. //J. Inorg. Biochem.-1981.-V. 14, № 14.-P.351-358.

52. Farias-Eisner R., Sherman M.P., Aeberhard E., Chaudhuri G. Nitric oxide is an important mediator for tumoricidal activity in vivo. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1994.-V. 91.-P.9407-9411.

53. Field E.H., Becker G.C. Blocking of mixed lymphocyte-reaction by spleen-cells from total lymphoid-irradiated mice involves interruption of the IL-2 pathway. // J. Immunol.-1992.-V148.-Is.2.-P.354-359.

54. Folkman J. Angiogenesis and angiogenesis inhibition: an overview. // EXS.-1997.-V. 79.-P.1-8.

55. Franchi A., Gallo O., Paglierani M., Sardi I., Magnelli L., Masini E., Santucci M. Inducible nitric oxide synthase expression in laryngeal neoplasia: correlation with angiogenesis. // Head Neck.-2002.-V. 24.-P. 16-23.

56. Fukumura D., Yonei Y., Kurose I., Saito H., Ohishi T., Higuchi H., Miura S., Kato S., Kimura H., Ebinuma H., Ishi H. Role in nitric oxide in Kupffer cellmediated hepatoma cell cytotoxicity in vitro and ex vivo. //Hepatology, (1996) 24, 141-149.

57. Gabrilovich D.I., Velders M.P., Sotomayor E.M., Kast W.M. Mechanism of immune dysfunction in cancer mediated by immature Gr-1+ myeloid cells. // J. Immunol.-200 l.-V. 166.-№ 9.-P.5398-5406.

58. Gallo O., Masini E., Morbidelli L., Franchi A., Fini-Storchi I., Vergari W.A., Ziche M. Role of nitric oxide in angiogenesis and tumor progression in head and ncckcancer. //J.Natl. CancerInst.-1998.-V. 90.-P.587-596.

59. Gallo O., Schiavone N., Papucci L., Sardi I., Magnelli L., Franchi A., Masini E., Capaccioli S. Down-regulation of nitric oxide synthase-2 and cyclooxygenase-2 pathways by p53 in squamous cell carcinoma. // Am. J. Pathol.-2003.-V. 163.-P.723-732.

60. Gardner T.E., Naama H., Daly J.M. Peritoneal and splenic macrophage functions in the tumor-bearing host. // J. Surg. Res.-1995.-V. 59.-P.305-310.

61. Gottke M., Chadee K. Exogenous nitric oxide stimulates mucin secretion from LS174T colonic adenocarcinoma cells. // Inflamm. Res.-1996.-V. 45.-P.209-212.

62. Gregoire M., Garrigue L., Blottiere H.M., Denis M.G., Meflah K. Possible involvement of TGF-ftl in the distinct tumorigenic properties of two rat colon carcinoma clones. //Invasion Metastasis.-1992.-V. 12.-P. 185-196.

63. Guo F.H., De Raeve H.R., Rice T.W., Stuehr D.J., Thunnissen F.B., Erzurum S.C. Continuous nitric oxide synthesis by inducible nitric oxide synthase in normal human airway epithelium in vivo. Proc. Natl Acad. Sci. USA, 1995, 92, 7809-7813.

64. Halak B.K, Maguire H.C., Lattime Jr., Lattime E.C. Tumor-induced interieukin-10 inhibits type 1 immune responses directed at a tumor antigen as well as a non-tumor antigen present at the tumor site. // CancerRes.-1999.-V. 59.-P.911-917.

65. Halwani F., Guttmann R.D., Saintecroix H., Prudhomme G.J. Identification of natural suppressor cells in long-term renal-allograft recipients // Transplantat-1992.-V.54. -Is.6.-P.973-977.

66. Hao X.P., Pretlow T.G., Rao J.S., Pretlow T.P. Inducible nitric oxide synthase (iNOS) is expressed similarly in multiple aberrant crypt foci and colorectal tumors from the same patients. // Cancer Res.-2001.-V. 61, № 2.-P.419-422.

67. Harris S.R., Thorgeirsson U.P. Flavone acetic acid stimulates nitric oxide and peroxynitrite production in subcutaneous mouse tumors. // Biochem. Biophys. Res. Commun.-1997.-V. 235, № 3.-P.509-514.

68. Hashimoto F., Inoue K., Ikehara S. Enhancing effects of cyclosporin A hematopoietic progenitors: possible role of CD8+ T cells as negative regulators // Exp. Hematol.-1994.-V.22.-P.947-953.

69. Hausmann E., Hao S.Y., Pace J., Parmely M. Transforming growth factor-Bl and gamma-interferon provide opposing signals to lipopolysaccharide-activated mouse macrophage. //Infect. lmmun.-1994.-V. 62.-P.3625-3632.

70. Hibbs J.B., Taintor R.R., Vavrin Z: Macrophage cytotoxicity: role for L-arginine deiminase and iminonitrogen oxidation to nitrite. // Science.-1987a.-V. 235.-P.473-476.

71. Hibbs J.B., Vavrin Z., Taintor R.R. L-arginine is required for the expression of the activated macrophage effector mechanism causing selective metabolic inhibition in target cells. // J. Immunol.-1987b.-V. 138.-P.550-565.

72. Holda J.H., Maier T., Claman H.N. Evidence that IFN-gamma is responsible for natural suppressor activity in GVHD spleen and normal bone marrow. // Transplant-1988.-V.45.-P.772-777

73. Holda J.H., Maier T., Claman UN. IL-3, IL-4, and IL-6 enhance IFN-gamma-dependent bone marrow natural suppressor activity. // Cell Immunol.-1990.-V.125.-N.2.-P.459-468.

74. Holda J.H., Maier T., Claman H.N. Natural suppressor activity in graft-vs-host spleen and normal bone marrow is augmented by IL-2 and interferon-y. // J. Immunol.-1986.-V. 137.-P.3538-3543.

75. Hoskin D.W., Bowser D.A., Brookskaiser J.C. Soybean agglutinin-positive natural suppressor cells in mouse bone-marrow inhibit interleukin-2 production and utilization in mixed lymphocyte reaction // J. Leucyte Biol.-1992a.-V.51. -Is.6.-P.649-656.

76. Hoslcin D.W, Brooks-ICaiser J.C, Kaiser M, Murgita R.A. Reactivity of monoclonal-antibody 1E5.B5 with a novel phenotypic marker expressed on a murine natural suppressor-cell subset // Hybridoma.-1992b.-V.ll.-Is.2.-P.203-215.

77. Hoskin D.W, Hooper D.C, Brooks-ICaiser J.C, Reilly B.D. Specific maternal anti-fetal lymphoproliferative responses and their regulation by natural immunosuppressive factors. //Exp. Immunol.-1989.-V.76.-P.262-267.

78. Hu D.-E, Dyke S.O.M, Moore A.M, Thomsen L.L, Brindle K.M. Tumor cell-derived nitric oxide is involved in the immune-rejection of an immunogenic murine lymphoma. // Cancer Res.-2004.-V. 64, № 1.-P.152-161.

79. Hu Z.Q, Yamazaki T, Cai Z. et al. Mast cells display natural suppressor activity partially by releasing transforming growth factor-beta. // Immunology.-1994.-V.82.-N.3.-P.482-486.

80. Hubbard N.E, Erickson K.L. Role of 59-lipoxygenase metabolites in the activation of peritoneal macrophages for tumoricidal function. // Cell. Immunol.-1995.-V. 160.-P.115-122.

81. Huchet R, Bruleyrosset M, Mathiot C, Grandjon D, Hallepannenko O. Involvement of IFN-gamma and transforming growth-factor-beta in graft-vs-host reaction-associated immunosuppression. // J. Immunol.-1993.-V.150.~Is.6.-P.2517-2524.

82. Iida S, Ohshima H, Oguchi S, Hata T, Suzuki H, Kawasaki H, Esumi H. Identification of inducible calmodulin-dependent nitric oxide synthase in the liver of rats. //J. Biol. Chem, 1992, 267, 25385-25388.

83. Jadus MR., Parkman R. The selective growth of murine newborn-derived suppressor cells and their probable mode of action // J. Immubol.-1986.-V.136.-P.783-792.

84. Jaiswal M., LaRusso N.F., Burgart L.J., Gores G.J. Inflammatory cytokines induce DNA damage and inhibit repair in cholangiocarcinoma cells by a nitric oxide-dependent mechanism. //Cancer Res.-2000.-V. 60.-P.184-190.

85. Jansson O.T., Morcos E., Brundin L., Bergerheim U.S., Adolfsson J., Wiklund N.P. Nitric oxide synthase activity in human renal cell carcinoma. // J. Urol.-1998.-V. 160, № 2.-P.556-560.

86. Jenkins D.C., Charles I.G., Thomsen L.L., Moss D.W., Holmes L.S., Baylis S.A., Rhodes P., Westmore K., Emson P.C., Moncada S. Roles of nitric oxide in tumor growth. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1995.-V. 92.-P.4392-4396.

87. Jin Y., Heck D.E., DeGeorge G., Tian Y., Laskin J.D. 5-Fluorouracil suppresses nitric oxide biosynthesis in colon carcinoma cells. //Cancer Res.-1996.-V. 56.-P. 1978-1982.

88. Kawamori T., Takahashi M., Watanabe K., Ohta T., Nakatsuki S., Sugimura T., Wakabayashi K. Suppression of azoxymethane-induced colonic aberrant crypt foci by a nitric oxide synthase inhibitor. // Cancer Lett-2000.-V. 148.-P.33-37.

89. Kim P.K., Zamora R., Petrosko P., Billiar T.R. The regulatory role of nitric oxide in apoptosis. // Int. Immunopharmacol.-2001.-V. 1.-P.1421-1441.

90. Kim Y.M., Bombeck C.A., Billiar T.R. Nitric oxide as a bifimctional regulator of apoptosis. // Circ. Res.-1999.-V. 84.-P.253-256.

91. Kisley L.R., Barrett B.S., Bauer A.K., Dwyer-Nield L.D., Barthel B., Meyer A.M., Thompson D.C., Malkinson A.M. Genetic ablation of inducible nitric oxide synthase decreases mouse lung tumorigenesis. // Cancer Res.-2002.-V. 62, № 23.-P.6850-6856.

92. Kitajima I., Kawahara K., Nakajima T., Soejima Y., Matsuyama T., Maruyama I. Nitric oxide-mediated apoptosis in murine mastocytoma. // Biochem. Biophys. Res. Commun.-1994.-V. 204.-P.244-251.

93. Klimpel G.R., Annable C.R., Cleveland M.G., Jerrells T.R., Patterson J.S. Immunosuppression and lymphoid hypoplasia associated with chronic graft versus host disease is dependent upon IFN-gamma production. // J. Immunol.-1990.-V.144.-N.1.-P.84-93.

94. Kojima M., Morisaki T., Tsukahara Y., Uchiyama A., Matsunari Y., Mibu R., Tanaka M. Nitric oxide synthase expression and nitric oxide production in human colon carcinoma tissue. // J. Surg. Oncol.-1999.-V. 70.-P.222-229.

95. Kong L., Dunn G.D., Keefer L.K., ICorthuis R.J. Nitric oxide reduces tumor cell adhesion to isolated rat postcapillary venules. // Clin. Exp. Metastasis.-1996.-V. 14.-P.335-343.

96. Kusmartsev S.A., Belsky Y.P., Zemlyanskaya N.V., Agranovich I.M. An increase of natural suppressor cell activity in mice following the injection of GM-CSF in vivo. // 12thEurop. Immunol. Confer., Barcelona, Spain.-1994.-294c.

97. Kusmartsev S., Cheng F., Yu B., Nefedova Y., Sotomayor E., Lush R., Gabrilovich D. All-trans-retinoic acid eliminates immature myeloid cells from tumor-bearing mice and improves the effect of vaccination. // Cancer Res.-2003a.-V. 63.-P.4441-4449.

98. Kusmartsev S., Gabrilovich D.I. Inhibition of myeloid cell differentiation in cancer: the role of reactive oxygen species. // J. Leukoc. Biol. 74: 186-196; 2003b.

99. Kusmartsev S.A., Li Y., Chen S. Gr-11 Myeloid cells derived from tumor-bearing mice inhibit primary T cell activation induced through CD3/CD28 costimulation. //The Journal of Immunology, 2000, 165: 779-785.

100. Kusmartsev S.A., Zemlyanskaya N.V., Belsky Y.P. Characteristics of suppressor factor produced by bone marrow cells after DT treatment // Immunology.-l 995.-V.86.-Suppl.-P.126.

101. Lala P.K., Kennedy T.G., Parhar R.S. Suppression of lymphocyte alloreactivity by early gestational human decidua. II. Characterization of the suppressor mechanisms // Cell. Immunol.-1988.-V.116.-P.411-422.

102. Lambert L.E., Paulnock D.M. Modulation of macrophage function by gamma-irradiation. Acquisition of the primed cell intermediate stage of the macrophage tumoricidal activation pathway. // J. Immunol.-1987.-V. 139.-P.2834-2841.

103. Lau Y.T., Ma W.C. Nitric oxide inhibits migration of cultured endothelial cells. //Biochem. Biophys. Res. Commun.-1996.-V. 221.-P.670-674.

104. Lee S.H., Jang J.J., Lee J.Y., Kim S.Y., Park W.S., Kim C.S., Kim S.H., Yoo N.J. Immunohistochemical analysis of Fas ligand expression in sarcomas. Sarcomas express high level of FasL in vivo. // APMIS.-1998.-V. 106.-P.1035-1040.

105. Lejeune P., Lagade C.P., Onier N., Pinard D., Ohshima H., Jeannin J.F. Nitric oxide involvement in tumor-induced immunosuppression. //J. Immunol., 1994 152, № 10, 5077-5083.

106. Li L.M., Kilbourn R.G., Adams J., Fidler I.J. Role of nitric oxide in lysis of tumor cells by cytokine-activated endothelial cells. // Cancer Res.-1991.-V. 51.-P.2531-2535.

107. Liebermann D.A., Hoffman B., Steinman R.A. Molecular controls of growth arrest and apoptosis: p53-dependent and independent pathways. // Oncogene.-1995.-V. ll.-P. 199-210.

108. Liu Q., Chan S.T.F., Mahendran R. Nitric oxide induces cyclooxygenase expression and inhibits cell growth in colon cancer cell lines. // Carcinogenesis.-2003.-V. 24, № 4.-P.637-642.

109. Liu R., Oberley T.D., Oberley L.W. Effects of endothelial nitric oxide synthase gene expression on the tumor biology of human oral carcinoma SCC-25 cells. // Cell Growth. Differ.-1998.-V. 9, № 3.-P.239-246.

110. Maeda H., Noguchi Y., Sato K., Akaike T. Enhanced vascular permeability in solid tumor is mediated by nitric oxide and inhibited by both new nitric oxide scavenger and nitric oxide synthase inhibitor. // Jpn. J. Cancer Res.-1994a.-V. 85.-P.331-334.

111. Maeda H., Tsuru S., Shiraishi A. Improvement of macrophage dysfunction by administration of anti-transforming growth factor-b antibody in EL4-bearing hosts. //Jpn. J. Cancer Res.-1994b.-V. 85.-P. 1137-1143.

112. Maier T., Holda J.H., Claman H.N. Murine natural suppressor cells in the newborn, in bone marrow, and after cyclophosphamide. Genetic variations and dependence onlFN-gamma. //J. ImmunoL-1989.-V.143.-P.491-498.

113. Maier T., Holda J.H. Natural suppressor (NS) activity from murine neonatal spleen is responsive to INF- y // J. Immunol.-1987.-V. 134.-N. 12.-P.4075-4084.

114. Maier T., Holda J.H., Claman H.N. Synergism between T and non-T cells in in vivo induction and in vitro expression of graft-vs-host desease-induced natural suppressor cells. //J. Exp. Med.-1985.-V.162.-P.979-992.

115. Martin J.H., Alalami O., van den Berg H.W. Reduced expression of endothelial and inducible nitric oxide synthase in a human breast cancer cell line which has acquired estrogen independence. // Cancer Lett.-1999.-V. 144, № 1.-P.65-74.

116. Mazzoni A., Bronte V., Visintin A., Spitzer J.H., Apolloni E,, Serafini P., Zanovello P., Segal D.M. Myeloid suppressor lines inhibit T cell responses by an NO-dependent mechanism. //J. Immunol.-2002.-V. 168.-P. 689-695.

117. Meeta J., LaRusso N.F., Gores G.J. Nitric oxide in gastrointestinal epithelial cell carcinogenesis: linking inflammation to oncogenesis. //Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol.-2001.- V. 281.-P.626-634.

118. Meltzer M.S., Benjamin W.R., Farrar JJ. Macrophage activation for tumor cytotoxicity: induction of macrophage tumoricidal activity by lymphokines from EL-4, a continuous T cell line. //J. Immunol.-1982.-V. 129.-P.2802-2807.

119. Messmer U.K., Ankarcrona M., Nicotera P., Brune B. p53 expression in nitric oxide-induced apoptosis. //FEBS Lett.-1994.-V. 355.-P.23-26.

120. Messmer U.K., Brune B. Nitric oxide-induced apoptosis: p53-dependent and p53-independent signalling pathways. //Biochem. J.-1996.-V. 319.-P.299-305.

121. Michelson J.D., Horowitz M.C. The interaction between bone marrow immune suppression andhematopoiesis //Exp. Hematol.-1988.-V.16.-P.815-819.

122. Mickel R.A., Kessler D.J., Taylor J.M.G., Lichtenstein A. Natural killer cell cytotoxicity in the peripheral blood, cervical lymph nodes, and tumor of head and neck cancer patients. // Cancer Res.-1988.-V. 48.-P.5017-5022.

123. Mills C.D. Molecular basis of «suppressor» macrophages. Arginine metabolism via the nitric oxide synthetase pathway. // J. Immunol.-199l.-V. 146.-P.2719—2723.

124. Moncada S., Palmer R.M.J., Higgs E.A. Nitric oxide: physiology, pathophysiology, and pharmacology.//Pharmacol. Rev., 1991, 43, 109-142.

125. Moochhala S., Chhatwal V.J., Chan S.T., Ngoi S.S., Chia Y.W., Rauff A. Nitric oxide synthase activity and expression in human colorectal cancer. // Carcinogenesis.-1996.-V. 17.-P.1171-1174.

126. Moore S.C., Shaw M.A., Sodeiberg L.S.F. Transforming growth-factor-beta is the major mediator of natural suppressor cells derived from normal bone-marrow. // J. Leuk Biol.-1992a.-V.52.-P.596-601.

127. Moore S.C., Theus S.A., Barnett J.B., Soderberg L.S.F. Bone-marrow natural suppressor cells inhibit the growth of myeloid progenitor cells and the synthesis of colony stimulating factors. //Exp. Hematol.-1992b.-V.20.-P.l 178-1183.

128. Moore S.C., Theus S.A., Barnett J.B., Soderberg L.S.F. Cytokine regulation of bone marrow natural suppressor cell activity in the suppression of lymphocyte function. //Cell. Immunol.-1992c.-V.141.-P.398-408.

129. Morbidelli L., Chang C.H., Douglas J.G., Granger H.J., Ledda F., Ziche M Nitric oxide mediates mitogenic effect of VEGF on coronary venular endothelium. //Am. J. Physiol.-1996.-V. 270.-P.411-415.

130. Mordan L.J., Burnett T.S., Zhang L.X., Tom J., Cooney R.Y. Inhibitors of endogenous nitrogen oxide formation block the promotion of neoplastic transformation in C3H 10T1/2 fibroblasts. // Carcinogenesis.-1993.-V. 14.-P.1555-1559.

131. Mori T., Guo M.W., Li X., Chen Z., Takeda Y. Isolation and identification of apoptosis inducing nucleosides from CD57(+)HLA-DRbright natural suppressor cell line. //Biochem. Biophys. Res. Commun.-1998.-V.251.-P.416-4122.

132. Mullins D.W., Martins R.S., Burger C.J., Elgert K.D. Tumor cell-derived TGF-P and IL-10 dysregulate paclitaxel-induced macrophage activation. // J. Leukoc. BioL-2001.-V. 69, № 1.-P.129-137.

133. Murata J., Corradin S.B., Janzer R.C., Juillerat-Jeanneret L. Tumor cells suppress cytokine-induced nitric-oxide (NO) production in cerebral endothelial cells. //Int. J. Cancer.-1994.-V. 59.-P.699-705.

134. Murillo-Carretero M., Ruano M.J., Matarredona E.R., Villalobo A., Estrada C. Antiproliferative effect of nitric oxide on epidermal growth factor-responsive human neuroblastoma cells. // J. Neurochemistry.-2002.-V. 83, № l.-P.l 19-131.

135. Nakano S., Matsukado K., Black K.L. Increased brain tumor microvessel permeability after intracarotid bradykinin infusion is mediated by nitric oxide. // Cancer Res.-1996.-V. 56.-P.4027-4031.

136. Nathan C. Inducible nitric oxide synthase: what difference does it make? // J. Clin. Invest.- 1997.-V. 100, № 10.-P.2417-2423.

137. Nathan C., Xie Q. Regulation of biosynthesis of nitric oxide. //J. Biol. Chem., 1994, 269,13725-13728.

138. Nicoletti G., Brambella P., De Govanni C., Nanni P. Colony-stimulating activity from the new metastatic TS/A cell line and its high- and low- metastatic clonal derivatives //Br. J. Cancer.-1985.-V.52.-P.215-222.

139. Nicotera P., Bonfoco E., Bru 'ne B. Mechanisms for nitric oxideinduced cell death: Involvement of apoptosis. //Adv. Neuroimmunol.-1995.-V. 5.-P.411-420.

140. Nikcevich D.A., Duffie G.P., Young M.R., Ellis N.K., Kaufman G.E., WepsicH.T. Stimulation of suppressor cells in the bone marrow and spleens of high dose cyclophosphamide-treatmed C57B1/6 mice // Cell. Immunol.-1987.-V.109.-P.349-359.

141. Noga S .J., Wagner J.E., Horwitz L.R., Donnenbrg A.D., Santos G.W., Hess A.D. Characterization of the natural suppressor cell population in adult rat bone marrow // J. Leukoc. Biol.-1988.-V.43.-P.279-287.

142. Ogreba V.I., Kusmartsev S.A., Vasilyev N.V. Activity of bone marrow and spleen suppressor cells in mice with spontaneus tumour // Eight Europ. Immunol. Meet.-Zagreb, Yugoslavia, 1987.~N10-49.-P. 195.

143. Orucevic A, Lala P.K. Effects of N(g)-methyl-L-arginine, an inhibitor of nitric oxide synthesis, on interleukin-2-induced capillary leakage and antitumor responses in healthy and tumor-bearing mice. // Cancer Immunol. Immunother.1996.-V. 42.-P.38-46.

144. Palathumpat V., Holm B., Dejbakhshjones S., Strober S. Treatment of BCL (1) leukemia by transplantation of low-density fractions of allogeneic bone-marrow and spleen-cells. // J. Immunol.-1992.-V.148.-Iss.l0.-P.3319-3326.

145. Peeler K., Wigzell H., Peck A.B. Isolation and identification of the naturally occuring, newborn spleen-associated suppressor cells // Scand. J. Immunol.-1983.-V.17.-P.443-449.

146. Peguet-Navarro J., Sportouch M., Popa I., Berthier O., Schmitt D., Portoukalian J. Gangliosides from human melanoma tumors impair dendritic cell differentiation from monocytes and induce their apoptosis. // J. Immunol-2003.-V. 170, № 7.-P.3488-3494.

147. Pela'ez B., Campillo J.A., Lo'pez-Asenjo J.A., Subiza J.L. Cyclophosphamide induces the development of early myeloid cells suppressing tumor cell growth by a nitric oxide-dependent mechanism. // The Journal of Immunology, 2001,166: 6608-6615.

148. Pervin S., Singh R., Chaudhuri G. Nitric oxide-induced cytostasis and cell cycle arrest of a human breast cancer cell line (MDA-MB-231): Potential role of cyclinDl. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-2001.-V. 98, № 6.-P.3583-3588.

149. Petit J.F., Nicaise M., Lepoivre M., Guissani A., Lemaire G. Protection by glutathione against the antiproliferative effects of nitric oxide. Dependence on kinetics of NO release.//Biochem. Pharmacol., (1996) 52, 205-212.

150. Pifuet P.F., Me C., Vassalli P. Immunosuppressor cells from newborn mouse spleen are macrophages differentiating in vitro from monoblastic precursors//Eur. J. Immunol.-1981.-V.ll.-P.56-61.

151. Pipili-Synetos E., Sakkoula E., Haralabopoulos G., Andriopoulou P., Peristeris P., Maragoudakis M.E. Evidence that nitric oxide is an endogenous antiangiogenic mediator. //Br. J. Pharmacol.-1994.-V. 111.-P.894-902.

152. Prazma J., Petrusz P., Mims W., Ball S.S., Weissler M.C. Immunohistochemical characterization of nitric oxide synthase activity in squamous cell carcinoma of the head and neck. // Otolaryngol. Head Neck Surg.-1995.-V. 113.-P.541—549.

153. Radoja S., Frey A.B. Cancer-induced defective cytotoxic T lymphocyte effector function: another mechanism how antigenic tumors escape immunemediated killing. // Mol. Med.-2000.-V. 6.-P.465-479,

154. Radomski M.W., Jenkins D.C., Holmes L., Moncada S. Human colorectal adenocarcinoma cells: differential nitric oxide synthesis determines their ability to aggregate platelets. // Cancer Res.-l991.-V. 51, № 22.-P.6073-6078.

155. Rao C.V., Kawamori T., Hamid R., Reddy B.S. Chemoprevention of colonic aberrant crypt foci by an inducible nitric oxide synthase-selective inhibitor. // Carcinogenesis.-1999.-V. 20.-P.641-644.

156. Rieder J., Marth C., Totzke G., Smolny M., Seibel M., Hoffinann G. Different patterns of inducible nitric oxide synthase gene expression in ovarian carcinoma cell lines. // Anticancer Res.-2000.-V. 20, № 5A.-P.3251-3258.

157. Roberts P.J., Riley G.P., Morgan K., Miller R., Hunter J.O., Middleton S.J. The physiological expression of inducible nitric oxide synthase in the human colon. //J. Clin. Pathol.-2001.-V. 54.-P.293-297.

158. Rodrigez G., Andersson G., Wigsell H., Peck A.B. Non T-cell nature of naturally occurring, spleen-associated suppressor cells present in the newborn mouse // Eur. J. Immunol.-1979.-V.9.-P.737-746.

159. Rodrigez R., Angulo I., Vinuela J.E., Medina M., GilJ., Subiza J.L. Inhibition of bone marrow-derived natural suppressor activity by glucocorticoids and its reversion by IFN-gamma or IL-2 // Transplant.-1994.-V.58.-N.4.-P.511-517.

160. Roozendaal R., Vellenga E., Postma D.S., De Monchy J.G., Kauffman, H.F. Nitric oxide selectively decreases interferon-g expression by activated human T lymphocytes via a cGMP-independent mechanism. // lmmunol.-1999.-V. 98.-P.393-399.

161. Rowland R.R., Butz E.A., Plagemann P.G. Nitric oxide production by splenic macrophages is not responsible for T cell suppression during acute infection with lactate dehydrogenase- elevating virus. // J. Immunol.-1994.-V. 152.-P.5785-5795.

162. Sadelain M.W.J., Voralia M., Green D.R., Wegmann T.G. The role of natural suppressor and natural killer activities in resistance to hemopoietic transplantation in unirradiated hosts. // J. Immunol.-1989.-V.142.-N.7.-P.2270-2278.

163. Saffian D.C., Parsons M.F., Singhal S.K. Separation of allostimulatory and natural suppressor stem-cell functions of murine bone-marrow implications for bone-marrow transplantation // Transplant-1991.-V.52.-N.4.-P.680-684.

164. Saffran D.C., Singhal S.K. Further characterization of by murine bone marrow-derived natural suppressor cells. Potential relationships between NS andNK/LAK activités // Cell. Immunol.-1990.-V.128.-Is.l.-P.301-313.

165. Schleifer KW., Mansfield J.M. Suppressor macrophages in African trypanosomiasis inhibit T cell proliferative responses by nitric oxide and prostaglandins. //J. Immunol.-1993.-V. 151, № 10.-P.5492-5503.

166. Schwadron R.B., Gandour D.M., Strober S. Cloned natural suppressor cell lines derived from the spleens of neonatal mice // J. Exp. Med.-1985.-V.162.-P.297-310.

167. Schwadron R.B., Palathumpat V., Strober S. Natural suppressor cell derived from adult spleens and thymus // Transplant.-1989.-V.48.-P. 107-110.

168. Segre M., Tomei E., Segre D. Cyclophosphamide-induced suppressor cells in mice: suppression of the antibody response in vitro and characterization of the effector cells // Cell. Immunol.-1985.-V.9L-P.443-454.

169. Seledtsov V.l., Avdeev I.V., Morenkov A.V. Antiproliferative effect of bone marrow cells on leukemic cells. // Immunobiol.-1995.-V.192.-P.205-217.

170. Sennikov S.V., Eremina L.V., Samarin D.M., Avdeev I.V., Kozlov V.A. Cytokine gene expression in erythroid cells. // Eur. Cytokine Netw.-1996.-Vol. 7,- № 4.-P.771-774.

171. Shen Y.H., Wang X.L., Wilclcen D.E. Nitric oxide induces and inhibits apoptosis through different pathways. // FEBS Lett.-1998.-V. 433.-P.125131.

172. Shimizu M., Sabolovic D., Ozawa H., Iwaguchi T. Cyclophosphamide-induced suppressor cells in nude-mice // Anti-Cancer Drugs.-1992.-V3.-IsA-P.427-433.

173. Siegert A., Rosenberg C., Schmitt W.D., Denkert C., Hauptmann S. Nitric oxide of human colorectal adenocarcinoma cell lines promotes tumour cell invasion. // Br. J. Cancer.-2002.-V. 86, № 8.-P.1310-1315.

174. Skowroncendrzak A., Kubera M. Effect of neonatal spleen and thymus implants on H-Y incompatible skin grafts // Foli. Biol. (Krakow).-1989.-V.37.-N.1-2.-P. 101-104.

175. Snyder D.S., Lu C.Y., Unanue E.R. Control of macrophage la expression in neonatal mice role of splenic suppressor cells // J. Immunol.-1982.-V. 128.-P.1458-1465.

176. Stuehr D.J., Nathan C.F. A macrophage product responsible for cytostasis and respiratory inhibition in tumor target cells. // J. Exp. Med.-1989.-V. 169.-P.1543-1555.

177. Subiza J.L., Gil.J., Rodrigez R., Coll J., J.G.R. De Morales., Vinuela J.E., De La Concha E.G. Tumor cytostasis mediated by a monoclonal IgM antibody promoting adhesion between macrophages and tumor cells // J. Immunol.-1992.-N.8.-V. 148.-P.2636-2642.

178. Subiza J.L., Vinuela J.E., Rodrigez R., Gil.J., Figueredo M.A., De La Concha E.G. Development of splenic natural suppressor (NS) cell in Ehrlich tumor-bearing mice. //Int. J. Cancer.-1989.-V.44.-P.307-314.

179. Sugiura K., Inaba M., Ogata H., Jasumizu R., Sardina E.E., Inaba K., Kuma S., Good R.A., Ikehara S. Inhibition of tumor cell proliferation by natural suppressur sell present in murine bone marow // Cancer Res.-1990a.-V.50.-P.2582-2586.

180. Sykes M., Sachs D.N. Mechanisms of suppression in mixed allogeneic chimeras. // Transplant.-1988b.-V.46.-P. 1356-1426.

181. Sykes M. Suppressive activity in recipients of non-T cell-depleted allogeneic bone marrow transplants: role of T cell-depleted syngeneic marrow // Bone-Marrow-Trans-plant.-1989.-V.4.-P.30-33.

182. Taylor-Robinson A. The sequestration hypothesis: an explanation for the sensitivity of malaria parasites to nitric oxide-mediated immune effector function in vivo. //Med. Hypotheses.-2000.-V. 54, №4.-P.638-641.

183. Thomsen L.L., Lawton F.G., Knowles R.G., Beesley J.E., Riveros-Moreno V., Moncada S. Nitric oxide synthase activity in human gynecological cancer. // Cancer Res.-1994.-V. 54.-P. 1352-1354.

184. Thomsen L.L., Miles D.W., Happerfield L., Bobrow L.G., Knowles R.G., Moncada S. Nitric oxide synthase activity in human breast cancer. // Br. J. Cancer.-1995.-V. 72.-P.41-44.

185. Tsuchiya Y., Igarashi M., Suzuki R. Production of colony-stimulating factor of tumor cells and the factor-mediated of induction of suppressor cells // J. Immunol. 1988. -V. 141. - P. 699-705.

186. Tsurumi Y., Murohara T., Krasinski IC., Chen D., Witzenbichler B., Kearney M., Couffinhal T., Isner J.M Reciprocal relation between VEGF and NO in the regulation of endothelial integrity. //Natl. Med.-1997.-V. 3.-P.879-886.

187. Van Vlasselaer P., Strober S. 7a 5 7b 5 OTCR 5+ 0 CD3 5+ 0 CD4 5- 0 CD8 5- 0 cloned natural suppressor 7 0(NS) cells produce an immunosuppressive factor which is different from INF- 7g 0 and TGF- 7b 0. // Transplant. Proc.-1991.-V.23.-P.200-213.

188. Vodovotz Y., Bogdan C. Control of nitric oxide synthase expression by transforming growth factor-beta: implications for homeostasis. // Prog. Growth Factor Res.-1994.-V.5.-N.4.-P.341-351.

189. Vodovotz Y, Bogdan C, Paik J. Mechanisms of suppression of macrophage nitric oxide release by transforming growth factor p. // J. Exp. Med.-1993.-V. 178-P.605-613.

190. Vodovotz Y. Control of nitric oxide production by transforming growth factor-pl: mechanistic insight and potential relevance to human disease. // Nitric Oxide: Biol. Chem, (1997)a 1, 3-17.

191. Vodovotz Y, Hsing A., Cook J.A, Miller R.W, Wink D„ Ritt D.M., Mitchell J.B, Danielpour D. Qualitative and quantitative analysis of DNA fragmentation using digital imaging. //Anal. Biochem, (1997)b 250,147-152.

192. Wall D.A, Sheehan K.C.F. The role of tumor-necrosis-factor and interferon-gamma in graft-versus-host disease and related immunodeficienty // Transplant.-1994.-V.57.-Iss.2.-P.273-279.

193. Wang B, Xiong Q, Shi Q, Le X, Abbruzzese J.L, Xie K. Intact nitric oxide synthase II gene is required for interferon-p-mediated suppression of growth and metastasis of pancreatic adenocarcinoma. // Cancer Res.-2001.-V. 61, № 1.-P.71-75.

194. Wei X. Q, Charles l.G, Smith A, Ure J, Feng G.J, Huang F.P, Xu D, Muller W, Moncada S, Liew F.Y. Altered immune responses in mice lacking inducible nitric oxide synthase. // Nature.-1995.-V. 375.-P.408-411.

195. Wei D, Richardson E.L, Zhu K, Wang L, Le X, He Y, Huang S, Xie K. Direct demonstration of negative regulation of tumor growth and metastasis byhost-inducible nitric oxide synthase. // Cancer Res.-2003.-V. 63, № 14.-P.3855-3859.

196. Weidner N., Semple J.P., Welch W.R., Folkman J. Tumor angiogenesis and metastasis-correlation in invasive breast carcinoma. //N. Engl. J. Med.-1991.-V. 324.-P.1-8.

197. Weller M,. Fontana A. The failure of current immunotherapy for malignant glioma. Tumor-derived TGF-B, T cell apoptosis, and the immune privilege of the brain. //Brain Res. Rev.-1995.-V. 21.-P.128-151.

198. Wink D.A. Vodovotz Y., Laval J., Laval F., Dewhirst M.W., Mitchell J.B. The multifaceted roles of nitric oxide in cancer. // Carcinogenesis, 1998, vol.19 no.5 pp.711—721.

199. Wu N.Z., Klitzman B., Dodge R., Dewhirst M.W. Diminished leukocyte-endothelium interaction in tumor microvessels. // Cancer Res.-1992.-V. 52.-P.4265-4268.

200. Xiao L., Eneroth P.H.E., Qureshi G.A. Nitric oxide synthase pathway may mediate human natural killer cell cytotoxicty. // Scand. J. Immunol.-1995.-V. 42.-P.505-511.

201. Xie K., Dong Z., Fidler I.J. Activation of nitric oxide synthase gene for inhibition of cancer metastasis. //J. Leukocyte Biol. -1996.-V. 797.-P.797-803.

202. Xie K., Huang S., Dong Z., Juang S.H., Wang Y., Fidler I.J. Destruction of bystander cells by tumor cells transfected with inducible nitric oxide (NO) synthase gene. // J. Natl. Cancer. lnst.-1997.-V. 89.-P.421-427.

203. Xu W., Liu L., Charles I.G. Microencapsulated iNOS-expressing cells cause tumor suppression in mice. // FASEB J.-2002.-V. 16.-P.213-215.

204. Yanagië H., Chen Z., Takeda Y. Regulation of mouse immuno-responses by a natural suppressor cell clone from bone marrow. // Res. Exp. Med.-1997.-V.197.-N.3.-P. 165-175.

205. Yang W., Ando J., Korenaga R., Toyo-oka T., Kamiya A. Exogenous nitric oxide inhibits proliferation of cultured vascular endothelial cells. // Biochem. Biophys. Res. Commun.-1994.-V. 203.-P.1160-1167.

206. Yim C.-Y., Bastian N.R., Smith J.C., Hibbs J.B., Samlowslci W. Macrophage nitric oxide synthesis delays progression of ultraviolet lightinduced murine skin cancers. //Cancer Res., (1993) 53, 5507-5511.

207. Yim C.Y., McGregor J.R., Kwon O.D., Bastian N.R., Rees M., Mori M., Hibbs J.B J., Samlowski W.E. Nitric oxide synthesis contributes to IL-2-induçed antitumor responses against intraperitoneal Meth A tumor. //J. Immunol., (1995) 155, 4382-4390.

208. Yoshida T., Norihisa Y., Habu S., Kobayashi N., Takei M., Kanehira N., Shmamura T. Proliferation of natural suppressor cells in long-term cultures ofspleen-cells from normal adult mice I I J. Immunol.-1991.-V.147.-Is.12.-P.4136-4139.

209. Young M.R., Ellis N.K., Young M.E., Wepsic H.T. Stimulation of hematopoiesis and bome marrow suppressor cells by the subcutaneous injection of linoleic acid // Cell. Immunol.-1987a.-V.107,-P.238-359.

210. Young M.R., Newby M., Wepsic H.T. Hematopoiesis and suppressor bone marrow cells in mice bearing large metastatic Lewis lung carcinoma tumors // Cane. Res.-1987b.-V.47.-P. 100-105.

211. Young MR, Wright MA, Matthews J.P. Suppression of T cell proliferation by tumor-induced granulocyte-macrophage progenitor cells producing transforming growth factor-beta and nitric oxide. //J. Immunol.-1996.-V.156.-N.5.-P.1916-1922.

212. Young M.R., Young M.E., Kim K. Regulation of tumor-induced myelopoiesis and the associated immune suppressor cells in mice bearing metastatic Lewis lung carcinoma by prostaglandin E2 // Cane. Res. 1988a. - V. 48. - P. 68266831.

213. Young M.R., Young M.E., Wepsic H.T. Effect of recombinant murine interferon-y on the hematopoietic and immunological parameters of mice bearing metastatic Lewis lung carcinoma tumors // Intl. Soc. Exp. Hemat. 1988b. -V. 16. -P.295-301.

214. Young M.R.I., Wright M.A, Young M.E. Antibodies to colony-stimulating factors block Lewis lung carcinoma cell stimulation of immune-suppressive bone-marrow cells. // Cane. Immunol. Immunother.-1991.-V.33.-N.3.-P.146-152.

215. Young M.R.L, Young M.E., Wright M.A. Stimulation of immune-suppressivc bone-marrow cells by colony-stimulating factors //Exp. Hematol.-1990.-V. 18 -P.806-811.

216. Zeidler R., Csanady M., Gires O., Lang S., Schmitt B., Wollenberg B. Tumor cell-derived prostaglandin E2 inhibits monocyte function by interfering with CCR5 and Mac-1. // FASEB J.-2000.-V. 14, № 5.-P.661-668.