Механизмы регуляции активности естественных супрессорных клеток в норме и при опухолевом росте

Бельский, Юрий Павлович

Диссертации по медицине → Патологическая физиология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Механизмы регуляции активности естественных супрессорных клеток в норме и при опухолевом росте

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Бельский, Юрий Павлович Томск 2005 г.

Ученая степень: доктора медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.16

Автореферат диссертации по медицине на тему Механизмы регуляции активности естественных супрессорных клеток в норме и при опухолевом росте

На правах рукописи

ВЕЛЬСКИЙ Юрий Павлович

МЕХАНИЗМЫ РЕГУЛЯЦИИ АКТИВНОСТИ ЕСТЕСТВЕННЫХ СУПРЕССОРНЫХ КЛЕТОК В НОРМЕ И ПРИ ОПУХОЛЕВОМ РОСТЕ

14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Томск-2004

Работа выполнена в ГУ Научно-исследовательском институте фармакологии Томского научного центра СО РАМН.

Научные консультанты: доктор медицинских наук, профессор Агафонов Владимир Иванович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук Шерстобоев Евгений Юрьевич

доктор биологических наук, профессор Чердынцева Надежда Викторовна

доктор медицинских наук, профессор Карпова Мария Ростиславовна

Ведущая организация: Новосибирская государственная медицинская академия

Защита состоится «_»_2005 г. в_часов на заседании

диссертационного совета Д 001.031.01 при НИИ фармакологии Томского Научного центра СО РАМН (634028, г. Томск, пр. Ленина, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ фармакологии Томского Научного центра СО РАМН (634028, г. Томск, пр. Ленина, 3).

Автореферат разослан 13.11.2004 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета кандидат биологических наук

Амосова Е.Н.

Актуальность проблемы. Как известно, одним из важных патогенетических факторов опухолевого роста является дефектность иммунного ответа, что проявляется в неадекватной его инициации и, как следствие, развитии иммуносупрессии. Показано, что опухолевые клетки экспрессируют так называемые опухоль-ассоциированные антигены [Whiteside T.L. 2000], в случае адекватного распознавания которых иммунная система успешно предотвращает опухолевый рост или вызывает его регрессию [Cheever MA et al., 1995; Bocchia M. et al., 1996; Boon T. et al., 1996]. Механизмы ухода опухоли от иммунологического надзора многообразны. Опухолевые клетки, продуцируя иммуносупрессорные цитокины (ТФР-ft простагландины, оксид азота, ИЛ-10, альфа-2-макроглобулин, фактор роста эндотелиальных сосудов -VEGF), воздействуют как непосредственно на Т-лимфоциты, так и на клетки микроокружения [Black P.H. et al., 1980; Куртенков ОЛ. с соавт., 1983; Ladisch S. et al., 1983; Miescher S. et al., 1986; Cukrova V. et al., 1987; Ключарева Т.Е. с соавт., 1988; Miescher S. et al., 1988; Ebert E.C. et al., 1990; Roszman T. et al., 1991; Tada T. et al., 1991; Gregoire M. et al., 1992; Yoshino I. et al., 1992; Alexander J.P. et al., 1993; Lahm H. et al., 1993; Alleva D.G. et al., 1994; Chen Q. et al., 1994; Lieubeau B. et al., 1994; Hersh E.M. et al., 1995; Weller M. et al., 1995; Lagadec P. et al., 1996; Tsushima H. et al., 1996; Wojtowicz-Praga S. et al., 1997; Santin A.D. et al., 1999; Zou J.P. et al., 1999; Sharma S. et al., 1999; Shurin G.V. et al., 2001; Andreola G. et al., 2002; Abrahams V.M. et al., 2003; Kudo D., 2003; Mullins D.W. et al., 2003; Peguet-Navarro J. et al., 2003].

Инициация и развитие иммунного ответа в значительной степени зависят от микроокружения иммунокомпетентных клеток, а ключевая роль в регуляции этого процесса принадлежит цитокинам. Одним из важных источников иммунорегуляторных веществ (NO, ТФР-|8, ИЛ-10 и др.) являются некоторые гемопоэтические клетки - естественные супрессорные клетки (ECK) [Moore S.C. et al., 1992; Belsky Y.P. et al., 1993; Angulo I. et al., 1995; Kusmartsev S.A. et al., 1995; Sennikov S.V. et al., 1996; DeKoter R.P. et al., 1997; Seledtsova G.V. et al., 1997; Yanagie H. et al., 1997; Mori T. et al., 1998; Sennikov S.V. et al., 2001], которые представляют собой незрелые клетки различных ростков кроветворения. ЕСК — крайне неоднородная популяция клеток, обладающих естественной супрессорной активностью, т.е. способностью подавлять пролиферацию иммунокомпетентных клеток неспецифически (без предварительного контакта с мишенями, не требуя рестрикции по антигенам комплекса гистосовместимости) [Michelson J.D. et al., 1988; Noga S.L et al., 1988; Saffian D.C et al., 1991; Hoskin D.W. et al., 1992; Sugiura K.etal., 1992].

ECK могут принадлежать к грануло1щхо^акрофга*шыищ^^витроидному, лимфоидному ростку [Чеглякова В.В. с coa^.fTO^jnjgg^giugt al., ¡992; Brooks-

Kaiser J.C. et al., 1993; Bronte V. et al., 2003; Kusmartsev S.A. et al, 2003J, однако их объединяет, во-первых, то, что они имеют нулевой фенотип, и во-вторых, обладают выраженной иммуносупрессорной активностью как in vitro, так и in vivo (подавляют реакцию Т- и B-лимфоцитов на антигены и митогены) [McGarry R.C. et al., 1982]. Кроме того, показано, что ЕСК обладают и противоопухолевой активностью, ингибируя пролиферацию некоторых опухолевых клеток in vitro [Seledtsov V.I. et al., 1995]. Следует отметить, что если при опухолевом росте иммуносупрессорная роль ЕСК показана, то данных об их противоопухолевых свойствах в литературе нет. Пока вопрос о значении противоопухолевой активности ЕСК в развитии злокачественных новообразований остается открытым.

Важная роль ЕСК в регуляции иммунитета показано в работах in vivo при опухолевом росте [Young M. et al., 1994], РТПХ [Hertel-Wulff В. et al., 1987], иммунизации Salmonella typhimurium [Schleifer K.W. et al., 1993]. При некоторых физиологических состояниях (беременность) [Brooks-Kaiser J.C. et al., 1993], при заболеваниях (опухолевый рост) [Kusmartsev S.A. et al., 1989; Young MR. et al., 1996], а также определенных экспериментальных моделях (трансплантация клеток костного мозга [Imamura M. E. et al., 1986], РТПХ [Holda J.H. et al., 1988], введение циклофосфана [Maier Т. et al., 1989]) активность ЕСК значительно возрастает. В ситуациях стимулированного гемопоэза активность ЕСК также значительно увеличивается, при этом они мигрируют из костного мозга в очаги эктопического гемопоэза, в частности, в селезенку, где оказывают выраженное иммуносупрессорное действие.

В основе механизма иммуносупрессорного действия ЕСК лежит секреция ими растворимых медиаторов - супрессорных факторов (СФ), в роли которых могут выступать ТФР-Р, оксид азота, простагландины, некоторые нуклеозиды и другие, в том числе еще не идентифицированные вещества [Moore S.C., 1992; Angulo I. et al., 1995; Kusmartsev S.A. et al., 1995; DeKoter R.P. et al., 1997; Yanagie H. et al., 1997; Mori Т. Е. et al., 1998]. Данные литературы относительно иммуносупрессорных факторов ЕСК при опухолевом росте немногочисленны и противоречивы, в частности, в качестве СФ обнаружен ТФР-0 [Young MR. et al., 1991] и NO. Однако не ясно, обусловлены ли эти разноречивые данные конкретными особенностями использованной модели опухолевого роста, продуцируют ли ЕСК только один СФ или в динамике роста опухоли происходит смена факторов. Известно, что иммуносупрессорная активность ЕСК костного мозга интактных мышей обусловлена продукцией оксида азота [Angulo I. et al., 1995]. Изменяется ли уровень его продукции ЕСК в процессе опухолевого роста, зависит ли это от вида канцерогенеза или от динамики опухолевой прогрессии - все эти вопросы остаются открытыми.

Известно, что сама опухоль вырабатывает стимулирующие гемопоэз факторы (ГМ-КСФ, ИЛ-3), активируя ECK [Young M.R., Newby M. et al., 1987; Young MR., Wright M.A. et al., 1992; Young MR. et al., 1996]. Представляется актуальным изучить прямое действие опухолевых факторов на активность ЕСК и синтез оксида азота, сопоставить свойства ЕСК опухоленосителей со свойствами ЕСК, полученных после воздействия факторов, вырабатываемых данной опухолью.

Показано, что важными регуляторами гемопоэза являются Т-лимфоциты [Гольдберг Е.Д. с соавт., 1982; Гольдберг ЕД с соавт., 1983; Гольдберг ЕД, Дыгай А.М., 1985; Гольдберг ЕД с соавт., 1988; Дыгай А.М. с соавт., 1989; Бабаева А.Г., 1990], кроме того, индуктором одного из основных супрессорных факторов ЕСК (N0) является Т-лимфоцитарный цитокин - интерферон-7- Несмотря на это, исследователями уделяется недостаточное внимание вопросам регуляции активности ЕСК Т-клетками. Представляется актуальным изучить действие Т-клеточных факторов на ЕСК, а также сопоставить качественные и количественные характеристики ЕСК с функциональным состоянием Т-лимфоцитов при различных способах иммунизации.

Цель исследования: изучить механизмы регуляции иммуносупрессорной и противоопухолевой активностей естественных супрессорных клеток в норме и при опухолевом росте. Оценить роль оксида азота в реализации антипролиферативной активности естественных супрессорных клеток.

Задачи исследования:

1. Изучить роль оксида азота в иммуносупрессорной и противоопухолевой активностях естественных супрессорных клеток основных гемопоэтических тканей, а также у мышей различных линий.

2. Сравнить вклад оксида азота в иммуносупрессорную и противоопухолевую активности естественных супрессорных клеток в популяциях миелокариоцитов с различным содержанием незрелых гемопоэтических клеток (после удаления из костного мозга макрофагов, после длительного его культивирования, в период восстановления гемопоэза после введения циклофосфана, а также при фракционировании клеток костного мозга по плотности).

3. Исследовать способность патологически измененных недифференцированных клеток (клеток ряда опухолевых линий) проявлять естественную супрессорную активность.

4. Изучить механизмы индукции и реализации противоопухолевой активности в зависимости от свойств опухолевых клеток-мишеней, а также роль растворимых факторов ЕСК и контактных межклеточных взаимодействий в этих процессах.

5. Изучить иммуносупрессорную и противоопухолевую активности естественных супрессорных клеток на различных моделях опухолевого роста (при химически индуцированном и вирус-индуцированном канцерогенезе, при перевивном и спонтанном опухолевом росте).

6. Оценить роль оксида азота как фактора естественных супрессорных клеток в механизме реализации их иммуносупрессорной активности на различных моделях опухолевого роста (при химически индуцированном и вирус-индуцированном канцерогенезе, при перевивном и спонтанном опухолевом росте).

7. Изучить взаимосвязь между функциональным состоянием Т-лимфоцитов (по продукции ими интерферона-гамма и интерлейкина-2) и механизмом реализации иммуносупрессорной активности естественных супрессорных клеток у животных с различным типом опухолевого роста.

8. Исследовать механизмы индукции и реализации иммуносупрессорной и противоопухолевой активностей естественных супрессорных клеток костного мозга при прямом действии факторов, секретируемых клетками опухолевых линий.

9. Изучить прямое влияние Т-лимфоцитов на индукцию и механизмы реализации активности естественных супрессорных клеток in vitro. Сопоставить активность естественных супрессорных клеток и механизмы ее реализации в зависимости от функционального состояния Т-лимфоцитов в моделях in vivo (реакция трансплантат против хозяина, аллогенная беременность, развитие иммунного ответа на тимус-зависимые антигены).

Положения, выносимые на защиту.

1. Естественная супрессорная активность присуща бластным клеткам различного генеза, индуцируется самой клеткой-мишенью, способ индукции определяет и механизм ее реализации.

2. Иммуносупрессорная активность естественных супрессорных клеток, индуцируемая лимфоцитами, реализуется через продукцию оксида азота, а противоопухолевая их активность, индуцируемая опухолевыми клетками, реализуется через выработку факторов, отличных от оксида азота.

3. Закономерностями опухолевого роста, вне зависимости от вида канцерогенеза и гистологического типа опухоли, являются:

- количественные и качественные изменения иммуносупрессорной активности естественных супрессорных клеток (повышение ее уровня и появление иного фактора кроме оксида азота);

- увеличение противоопухолевой активности естественных супрессорных клеток в процессе роста опухоли, в основе которой лежит NO-независимый механизм.

4. Рост карциномы Эрлиха является нетипичной моделью канцерогенеза: особенности свойств клеток данной опухолевой линии определяют и особые свойства ЕСК.

5. Т-лимфоциты в зависимости от своего функционального состояния индуцируют альтернативные пути активации естественных супрессорных клеток: Т-лимфоциты с повышенной продукцией интерферона-гамма активируют естественные супрессорные клетки, механизм реализации иммуносупрессорного действия которых определяется оксидом азота; Т-клетки со сниженной продукцией интерферона-гамма индуцируют естественные супрессорные клетки, вырабатывающие иные супрессорные факторы.

Научная новизна. В работе выявлены механизмы инициации иммуносупрессорной и противоопухолевой активностей естественных супрессорных клеток. Впервые показано, что индукция этих активностей различна и зависит от клеток-мишеней, которые через вырабатываемые факторы определяют различные механизмы реализации естественной супрессорной активности. В работе также показано, что есть возможность селективно регулировать либо иммуносупрессорную, либо противоопухолевую активности естественных супрессорных клеток. Обнаружено, что иммуносупрессорная активность естественных супрессорных клеток в значительной степени обусловлена оксидом азота, синтез которого тем активней, чем больше содержание незрелых гемопоэтических клеток в популяции клеток-эффекторов. Противоопухолевая активность при таком обогащении также возрастает, однако оксид азота в ее формировании участия не принимает.

Впервые показано, что опухолевые клетки обладают иммуносупрессорной активностью, идентичной по механизмам индукции и реализации таковой у нетрансформированных низкодифференцированных кроветворных клеток.

Выявлено, что противоопухолевая активность гемопоэтических клеток проявляется в отношении различных по своим свойствам опухолевых клеток-мишеней и, только в некоторой степени, может реализовывается через оксид азота. Естественные супрессорные клетки оказывают противоопухолевое действие через растворимые медиаторы, секреция которых индуцируется опухолевой клеткой-мишенью, в том числе и в результате контакта клетка-клетка между эффектором и мишенью.

естественных супрессорных клеток в значительной степени обусловлено оксидом азота. В основе механизма наблюдаемого усиления активности естественных супрессорных клеток может лежать и непосредственное стимулирующее действие факторов, продуцируемых клетками опухоли. Впервые показано, что при разных типах канцерогенеза параллельно с повышением иммуносупрессорной активности возрастает и противоопухолевая.

Впервые показано, что солидный рост карциномы Эрлиха представляет собой особую модель канцерогенеза, что обусловлено наличием у данной опухоли ряда свойств: ее клетки сами вырабатывают оксид азота без дополнительной стимуляции, секретируют индуктор его синтеза, стимулируют продукцию интерферона-7 Т-лимфоцитами, что, вероятно, и является причиной спонтанной (без дополнительной стимуляции) продукции оксида азота клетками костного мозга животных-опухоленосителей. Нетипичен также и патогенез роста данной опухоли -он сопровождается повышением продукции интерферона-гамма Т-клетками опухоленосителя. Иммуносупрессорная активность естественных супрессорных клеток в данной модели канцерогенеза также повышается, однако оксид азота в этом случае является основным и единственным их супрессорным фактором.

Впервые выявлена взаимосвязь между функциональным состоянием Т-лимфоцитов и количественными и качественными характеристиками естественных супрессорных клеток.

Теоретическое и практическое значение работы. Полученные данные позволяют яснее понять механизмы, лежащие в основе индукции активности естественных супрессорных клеток, их функциональной гетерогенности, что, в свою очередь, позволяет глубже понять механизмы иммунорегулирующего действия гемопоэтических клеток и расширить имеющееся представления о патогенезе опухолевого роста, а также о механизмах взаимодействия иммунной системы и гемопоэза. Вскрытые в данной работе аспекты патогенеза опухолевого роста позволят наметить новые точки приложения фармакологической коррекции при данном виде патологии.

(Томск, 2000); «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологию) (Томск, 2001); «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии» (Томск, 2002); «Актуальные проблемы фармакологии» (Томск, 2004); на Российской научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы развития экспериментальной и клинической онкологии» (Томск, 2004).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 29 печатных работ, из них 14 в центральных журналах.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 413 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырех глав, выводов, списка использованной литературы. Работа иллюстрирована 92 рисунками и 49 таблицами. Библиографический указатель включает 699 источников, из них 81 отечественных и 618 иностранных.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проведены на 803 мышах, в том числе линий C57B1/6Y (356), DBA/2JY (134), BAlb/cY (161), AKRY (98), гибридов Fl (CBAxAKR) и F1 (СВАхС57В1/6) (18 и 24 соответственно), мутантной линии Balb/c-nude (12) обоего пола в возрасте 8-10 недель, полученных из питомника НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН. Животные соответствовали 1 категории (согласно сертификату), содержались в неполной барьерной системе, имели постоянный доступ к воде и пище (стерилизованный гранулированный корм, кипяченая подкисленная соляной кислотой питьевая вода с рН 4-4,5). Животных забивали цервикальной дислокацией под легким эфирным наркозом.

Опухоли (карцинома Эрлиха, мастоцитома Р-815, меланома В-16, карцинома легких РЛ-67, карцинома легких Льюиса LLC) поддерживали имплантацией 1x106 ' клеток/мышь: клетки Эрлиха и Р-815 перевивали внутрибрюшинно мышам линии С57В1/6 и DBA/2 соответственно, а В-16, LLC и РЛ-67 - под кожу бедра животным линии С57В1/6. Клеточные линии лимфолейкоза мыши L1210, мышиной миеломоноцитарной линии WEHI-3, человеческой эритролейкемии К-562 поддерживали in vitro. Для использования клеток карциномы Льюиса LLC в экспериментах in vitro клетки, выделенные из солидно растущего узла, были преобразованы в суспензионную культуру, содержащую одиночные клетки.

Перевивной опухолевый рост моделировали имплантацией ЗхЮ5 опухолевых клеток под кожу бедра самцам С57В1/6 (Эрлиха, В-16, LLC и Р-Л67) и DBA/2 (Р-815). Химический канцерогенез изучали на мышах линии С57В1/6, которым под кожу бедра однократно вводили 7, 12-диметилбенз[а]-антрацен (ДМБА) по 0,4 мг в

0,1 мл оливкового масла. Через 4 мес в месте введения развивалась опухоль, идентифицированная гистологически как фибросаркома. Материал для исследований забирали тогда, когда опухоль достигала 1 см в диаметре. Вирусиндуцированны канцерогенез моделировали при помощи вируса лейкоза Раушера RLV, который у мышей линии Balb/c вызывает развитие эритролейкоза [Клочко А.В. с соавт., 1984; Rauscher F.J., 1962]. Вирус поддерживали пассированием бесклеточной суспензии селезенки инфицированных мышей. В предварительных экспериментах был выбран тот титр вируса, который вызывал гибель всех животных к 40 дню, эритролейкоз обнаруживался с 20 дня, о чем судили по количеству лейкоцитов и гемограмме периферической крови. Материал для исследований забирали на 22 день после внутрибрюшинного инфицирования, когда еще не было выраженной спленомегалии. Спонтанный опухолевый рост изучали с использованием мышей линии AKR, у которых из-за наличия вируса Гросса спонтанно развивается лимфома тимуса. По многолетним наблюдениям, в наших условиях содержания средняя продолжительность жизни мышей линии AKR/J составляет 276±54 дней (п=50), гибнуть животные начинают в возрасте 6 мес и к 13 мес погибает 90% мышей. Большинство животных погибает в возрасте 6-9 мес (72%). Основная причина гибели - развитие злокачественной лимфомы тимуса, вероятность возникновения которой увеличивается с возрастом [Карпова Г.В. с соавт., 2002]. На основании этого и, учитывая динамику злокачественного процесса, в качестве опытных были выбраны 3 возрастные группы животных: 2,4 и 7 месяцев. Контролем служили мыши, не несущие вирус Гросса, - гибриды Fl(CBA/CaLac x AKR/JY) в возрасте 4 месяцев.

Суспензию клеток костного мозга получали перфузией бедренной и болыпеберцовой костей холодным изотоническим раствором хлорида натрия, спленоциты получали гомогенизацией селезенок. Опухолевые клетки выделяли из асцитной жидкости или из опухолевого узла, гомогенизируя его в стеклянном гомогенизаторе и пропуская через металлическую сеточку. Клетки эмбриональной печени получали от эмбрионов известного возраста (14 и 19 сутки), гомогенизировали их печень, фильтровали через металлическую сеточку или 4-слойный капрон. Жизнеспособность клеток оценивали в тесте с 0,1% трипановым синим. В экспериментах использовали суспензии, содержащие не менее 95% жизнеспособных клеток.

Клетки культивировали в среде RPMI 1640 («Sigma») с добавлением 10% ЭТС («ICN», «Serva»), 20 мМ HEPES, 0,05 мМ 2-меркаптоэтанола (оба «Sigma»), 50 мкг/мл гентамицина и 2 мМ L-глютамина (оба «Flow Lab») в атмосфере с 5%

СО2 и абсолютной влажности.

В экспериментах по исследованию роли клеточных контактов различные популяции клеток культивировали совместно в лунках, разделенных между собой полупроницаемой мембраной (transwells, «Costar»), что позволяло клеткам взаимодействовать посредством растворимых факторов, но исключало прямой контакт клетка-клетка. Изучаемые клетки (опухолевые или костномозговые) помещали в лунки с диаметром 6,5 мм и опускали в другие лунки (с диаметром 15 мм) 24-луночного планшета, содержащего клетки сингенного костного мозга, опухолевые клетки Р-815 или карциномы Эрлиха, либо те и другие одновременно. Клетки культивировали 20-22 ч, затем миелокариоциты из встроенных лунок переносили в свежую среду, и использовали для получения супернатанта. У опухолевых клеток из встроенных лунок оценивали пролиферативную активность.

В некоторых экспериментах клетки разделяли по плотности в градиенте Перколла («Pharmacia», Швеция) или в коммерческом растворе для сепарации клеток («Flow Lab», р 1,077 г/мл) с р=1,075-1,077 г/мл.

Супернатанты клеток получали в результате их культивирования в течение 24 ч в чашках Петри или в 96-луночных планшетах. Для определения продукции интерферона-гамма и интерлейкина-2 получали супернатанты Т-лимфоцитов [Williamson E. et al., 1996] и тестировали их способность индуцировать выработку N0 костномозговыми клетками интактных сингенных животных или стимулировать пролиферацию ИЛ-2-зависимых спленоцитов [Moore S.C. et al., 1992]. Продукцию NO оценивали по содержанию нитритов в супернатантах при помощи реактива Грейса [Green L.C. et aL, 1982]. В части экспериментов в лунки вносили 2 тМ блокатора NO-синтазы - №-монометил-аргинина (NMMA, «Sigma»).

Для оценки пролиферации радиокзотопным методом опухолевые клетки культивировали 36-40 ч, спленоциты 60-64 ч в 96-луночных планшетах, за 16 ч до окончания культивирования вносили по 0,5 мкКю/лунку 3Н-тимидина. Затем содержимое лунок переносили на стекловолокнистые фильтры («Titertek») и включение изотопа оценивали на Р-счетчике. Пролиферацию клеток выражали в количестве импульсов в минуту. В некоторых случаях пролиферативную активность клеток оценивали колориметрическим методом с использованием 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT, «Serva») [Mosmann Т., 1983]. Абсорбцию растворов замеряли при длине волны 550 нм.

Оценка иммуносупрессорной активности проводилась по способности подавлять пролиферацию клеток-мишеней - сингенных спленоцитов, активированных митогеном. Прилипающие к пластику клетки удаляли культивированием их 16 ч в пластиковых чашках Петри. Затем клетки-эффекторы (неприлипающие клетки костного мозга или селезенки) культивировали 60-64 ч

совместно с клетками-мишенями в различных соотношениях в присутствии конканавалина A («Sigma», 4 мкг/мл). В некоторых сериях экспериментов спленоциты-мишени предварительно инкубировали 20-22 ч с конканавалином А (4 мкг/мл), после чего митоген удаляли, а полученные лимфобласты смешивали с клетками-эффекторами. Пролиферацию клеток-мишеней оценивали радиоизотопным методом. Супрессию вычисляли по следующей формуле:

где МиЭ - количество импУмин. в лунках (клетки-эффекторы + клетки-мишени), М - количество имп/мин в лунках с клетками-мишенями.

Противоопухолевая активность определялась по способности подавлять пролиферацию клеток-мишеней (мастоцитома Р-815, кроме особых случаев, указанных отдельно). Для этого неприлипающие клетки-эффекторы (из костного мозга или селезенки) в различных концентрациях культивировали 36-40 ч совместно с опухолевыми клетками (2х104 на лунку), за 16 ч до окончания культивирования вносили по 0,5 мкКю/лунку 3Н-тимидина. Результаты выражались в процентах супрессии.

Реакцию гиперчувствительности немедленного типа моделировали, используя мышей линии Balb/c [Hsieh C.S. et al., 1995]. В качестве стандартного антигена, вызывающего поляризацию по 2 типу, использовали овальбумин с гидроокисью алюминия в качестве адъюванта [Oshiba A. et al., 1997]. Животным вводили под кожу бедра овальбумин (100 мкг/мышь, «Sigma») с гидроокисью алюминия (5 мг/мышь, «Sigma») в объеме 0,1 мл 2 или 3 раза с интервалом 2 недели между иммунизациями. Ответ на сенсибилизирующие введения овальбумина оценивали на 7 день после последней иммунизации по тяжести анафилактической реакции, развивающейся после разрешающей инъекции овальбумина (по 10 мкг в 0,1 мл физиологического раствора хлорида натрия в ретроорбитальный синус), в результате которой погибало 50 % дважды и 92 % трижды иммунизированных мышей. Материал для исследования забирали на 7 сутки после последней иммунизации.

Для изучения ЕСК при различной антигенной стимуляции in vivo использовали модель полуаллогенной беременности, иммунизацию ксеноантигеном (эритроцитами барана) и реакцию трансплантат против хозяина (РТПХ). Полуаллогенную беременность получали скрещиванием самок линии Balb/c с самцами линии С57В1/6. РТПХ вызывали введением мышам гибридам F1 (СВАхС57В1/6) внутривенно (в ретроорбитальный синус) лимфоцитов селезенок мышей С57В1/6. Забор материала осуществляли на 17-19 сутки гестации, на 7 день

после инъекции суспензии эритроцитов барана и на 14-15 сутки после введения лимфоцитов.

Полученные данные обрабатывали статистически с помощью программного обеспечения Statistics 6.O. Для всех выборок проверена гипотеза нормальности распределения по величине коэффициента асимметрии и коэффициента эксцесса [Гмурман В.Е., 2001]. Для каждой выборки вычисляли среднее значение величины признака X и ошибку средней величины т. Проверка гипотезы о равенстве средних проводилась с использованием t-критерия Стьюдента. Вычисленное значение t сравнивали с табличным при заданном уровне значимости р<0,05. Если расчетная t больше табличной, то гипотеза о равенстве средних отвергалась.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Активность естественных супрессорных клеток костного мозга мышей разных линий и эмбриональной печени. Роль оксида азота. В литературе описан ряд факторов, секретируемых ЕСК и ответственных за их иммуносупрессорную активность, проявляемую в отношении сингенных стимулированных митогеном лимфоцитов селезенки [Moore S.C. et al., 1992; Belsky Y.P. et al., 1993; Angulo I. et al., 1995; Kusmartsev SA et al., 1995; DeKoter R.P. et al., 1997; Yanagie H. et al., 1997; Mori T. et al., 1998]. В то же время в работе [Angulo I. et al., 1995] было продемонстрировано, что в случае, когда ЕСК выделяли из костного мозга интактного животного, единственным СФ для клеток-мишеней, в качестве которых выступали спленоциты, стимулированные конканавалином А, являлся оксид азота Причем оксид азота вырабатывался непосредственно в культуре в ответ на интерферон-гамма, который секретировался самими клетками-мишенями, т.е. Т-лимфоцитами. В случае, когда в качестве мишеней были использованы клетки опухолевых линий, ЕСК интактного костного мозга также проявляли свою активность, подавляя пролиферацию опухолевых клеток [Sugiura К. et al., 1990; Seledtsov VJ. et al., 1995; Seledtsov V.I. et al., 2001]. Факторы противоопухолевой активности не изучены, только в работе [Seledtsov V.I. et al., 1997] показано, что NO не является ее медиатором. Для того чтобы понять, насколько универсален механизм действия ЕСК на пролиферацию клеток через выброс оксида азота, нами было изучено это действие ЕСК в отношении, с одной стороны, лимфоцитов, с другой стороны, опухолевых клеток, а также исследована активность ЕСК из разных гемопоэтических тканей (костный мозг взрослых мышей и печень эмбрионов мышей) и от животных с различными гаплотипами (инбредные линии С57В1/6 - Н-2в, BAlb/c - H-2d, AKR - H-2k и DBA/2 - H-2d, а также мыши линии BAlb/c с мутацией Nude).

Эксперименты, проведенные на животных с разным генотипом, дали следующие результаты: неприлипающие клетки костного мозга всех протестированных линий мышей обладали как иммуносупрессорной, так и противоопухолевой активностями. В то же время вклад оксида азота в подавление пролиферации Т-лимфоцитов и опухолевых клеток был различен. В культурах, содержащих клетки костного мозга вместе с митоген-стимулированными лимфоцитами селезенки, закономерно регистрировалась продукция оксида азота вне зависимости от того, активировались ли спленоциты конканавалином А в присутствии костномозговых клеток или же клетки костного мозга добавлялись в культуру к уже активированным лимфоцитам. В культурах же, содержащих клетки костного мозга вместе с опухолевыми клетками Р-815, N0 не регистрировался. То есть оксид азота являлся ведущим и единственным супрессорным фактором неприлипающих клеток костного мозга в отношении Т-лимфоцитов и не играл роли в подавлении пролиферации опухолевых клеток Р-815.

Печень эмбриона как источник иммуносупрессорных клеток исследована мало. Показано, что выделенные из печени эритроидные незрелые клетки подавляют функции В-лимфоцитов и не влияют на Т-клетки [Цырлова И.Г. с соавт., 1985]. Данные о противоопухолевой активности естественных супрессорных клеток эмбриональной печени, а также о роли оксида азота в подавлении пролиферации мишеней в литературе отсутствуют. Как известно, печень эмбрионов является органом кроветворения, интенсивность которого снижается к концу внутриутробного развития.

Было обнаружено, что, так же как и клетки костного мозга, неприлипающие к пластику клетки печени эмбриона, полученные на 14 и 19 сутки внутриутробного развития, обладали как иммуносупрессорной, так и противоопухолевой активностями. Оксид азота выступал в роли главного супрессорного фактора только против лимфоцитов и не участвовал в подавлении пролиферации опухолевых клеток. Следовательно, клетки эмбриональной печени, как и костного мозга, имеют NO-зависимую иммуносупрессорную и NO-независимую противоопухолевую активности. Суммируя вышесказанное и учитывая данные других авторов, можно заключить, что естественная супрессорная активность является общим свойством гемопозтических тканей.

Иммуносупрессорная и противоопухолевая активности естественных супрессорных клеток при обогащении их популяции незрелыми гемопоэтическими клетками. Роль оксида азота. Сравнительные исследования иммуносупрессорной и противоопухолевой активностей ЕСК популяций костномозговых клеток в зависимости от степени их обогащения незрелыми гемопоэтическими клетками хотя и представлены в литературе, но фрагментарны и противоречивы. Нами была

изучена иммуносупрессорная и противоопухолевая активности клеточных популяций костного мозга, полученных с использованием разных способов обогащения незрелыми гемопоэтическими клетками, кроме того, показан вклад оксида азота в антипролиферативное действие ЕСК у фракций, обогащенных властными клетками. Для этого были использованы следующие общеизвестные способы: длительное культивирование, фракционирование по плотности и стимулирование гемопоэза (восстановительный период после введения циклофосфана).

Для обогащения популяции миелокариоцитов незрелыми гемопоэтическими клетками неприлипающие клетки костного мозга культивировали в течение 1,2,3 и 4 суток, после чего определяли иммуносупрессорную активность культивированных клеток, сравнивая ее с аналогичным показателем свежевыделенных костномозговых клеток после удаления из них способных к адгезии на пластике элементов (контроль). После культивирования в течение 1 суток иммуносупрессорная и противоопухолевая активности клеток, а также уровень продуцируемого ими оксида азота не отличались от контрольных значений. Уже после 2 суток предварительного культивирования иммуносупрессорная и противоопухолевая активности костномозговых клеток достигали практически максимально возможных значений, оставаясь на этом уровне и позже. Тем не менее, после 3 и 4 суточного предварительного культивирования рост иммуносупрессорной и противоопухолевой активностей клеток продолжался, что можно было заметить только при очень малых соотношениях эффектор/мишень. Аналогичная динамика отмечалась и в отношении продукции оксида азота костномозговыми клетками в присутствии митоген-стимулированных лимфоцитов: в результате предварительного культивирования продолжительностью 2 суток клетки синтезировали повышенное количество оксида азота - концентрация нитритов была на порядок больше, чем в контроле, однако увеличение количества нитритов также продолжалось по мере увеличения длительности предварительного культивирования миелокариоцитов. При сокультивировании костномозговых клеток с опухолевыми клетками-мишенями продукция оксида азота не регистрировалась, несмотря на увеличение противоопухолевой активности у клеток костного мозга в результате культивирования.

При фракционировании неприлипающих клеток костного мозга и печени эмбрионов по плавучей плотности были получены следующие результаты. Клетки, имеющие плотность более 1,075 г/мл, не обладали иммуносупрессорной активностью, в то время как клетки с плотностью менее 1,075 г/мл практически полностью подавляли пролиферацию мишеней (более чем на 95%); не разделенные неприлипающие клетки подавляли пролиферацию мишеней примерно вдвое слабее,

чем клетки низкоплотностной фракции. Клетки с высокой плотностью не продуцировали N0, в то время как клетки низкоплотностной фракции продуцировали оксид азота в 1,5-2,1 раза более активно, чем клетки со смешанной плотностью (контрольные). В культурах, не содержавших клеток-мишеней, нитритов не было. У разделенных по плавучей плотности клеток костного мозга противоопухолевой активностью обладали только миелокариоциты низкоплотностной фракции, подавлявшие пролиферацию опухолевых мишеней более чем на 90%. Неприлипающие клетки со смешанной плотностью в наименьшем соотношении эффектор/мишень не проявляли данную активность, в самом же большом соотношении (20/1) снижали пролиферацию мишеней на 35,7%. Полученное распределение клеток с иммуносупрессорной активностью по плотности согласуется с данными других авторов [Sugiura К. et al., 1988; Sugiura К. et al., 1990; Angulo et al., 1995]. Кроме того, одновременно с усилением иммуносупрессорных свойств клетки костного мозга и эмбриональной печени в совместной культуре со спленоцитами продуцировали больше оксида азота, чем клетки контрольных культур. Однако, несмотря на повышение антипролиферативного действия в отношении опухолевых клеток-мишеней, та же популяция клеток-эффекторов в этом случае не синтезировала оксид азота.

Как известно, в период восстановления кроветворения после воздействия циклофосфаном в сублетальной дозе происходит значительное увеличение относительного содержания незрелых гемопоэтических клеток в костном мозге [Гольдберг Е.Д. и др., 1999]. С этим периодом также связано усиление активности ЕСК костного мозга и селезенки, как показано ранее [Braciale V.L. et al., 1980; Segre M. et al., 1985; Nikcevich DA. et al., 1987; Maier T. et al., 1989; Shimizu M. et al., 1992; Brooks-Kaiser J.C. et al., 1993]. В этих работах роль оксида азота и состояние противоопухолевой активности ЕСК не изучались. Проведенные эксперименты показали, что миелокариоциты мышей линии С57В1/6 в период восстановления гемопоэза (5 сутки после однократной инъекции им циклофосфана, 125 мг/кг массы тела) проявляли более высокую иммуносупрессорную активность, чем интактных животных. Неприлипающие к пластику костномозговые клетки животных опытной группы подавляли пролиферацию лимфоцитов-мишеней почти в 2 раза сильнее, продуцируя при этом в 3,7 раза больше оксида азота. Полученные данные согласуются с результатами других авторов, исследовавших активность ЕСК селезенок мышей в восстановительный период гемопоэза после воздействия циклофосфана, однако противоопухолевая их активность в приведенной работе не изучалась [Angulo I. et al., 2000]. Мы обнаружили, что противоопухолевая активность неприлипаюших клеток костного мозга животных, получавших

циклофосфан, была в 2 раза выше, чем у контрольных; при этом оксид азота не обнаруживался.

Анализируя полученные данные можно заключить, что обогащение популяций миелокариоцитов незрелыми клетками всеми использованными способами сопровождалось повышением как иммуносупрессорной, так и противоопухолевой активностей. В то же время способность обогащенных популяций костномозговых клеток продуцировать оксид азота в культуре с лимфоцитами увеличивалась, а в культуре с опухолевыми клетками N0 не обнаруживался. Следовательно, усиление иммуносупрессорной активности связано с повышением продукции оксида азота, в то время как увеличение противоопухолевой активности происходит вследствие иных механизмов.

Иммуносупрессорная активность опухолевых клеток. Опухолевые клетки, также как и ЕСК, являются низкодифференцированными. Обладают ли такие трансформированные бласты иммуносупрессорными свойствами, присущими малодифференцированным гемопоэтическим клеткам? Вообще, способность опухолевых клеток, происходящих из разных тканей, секретировать молекулы с иммуносупрессорными свойствами, хорошо известна [Lee S.H. et aL, 1998; Yang T. et al., 2002; Peguet-Navarro J. et al., 2003]. Из представленных выше данных очевидно, что иммуносупрессорное действие клеток интактного организма, по сути, определяется способностью продуцировать NO в ответ на Т-лимфоцитарный стимул. Поэтому вопрос о естественной супрессорной активности опухолевых клеток сводится к вопросу - сохраняется ли у них способность к продукции оксида азота в ответ на интерферон-у? Данные относительно продукции оксида азота опухолевыми клетками, несмотря на их обилие, крайне противоречивы, также как и данные относительно способности опухолевых клеток секретирозать NO в ответ на стимулирующее действие цитокинов. Насколько же универсален механизм иммуносупрессорной активности бластных клеток, является ли он свойством только низкодифференцированных гемопоэтических клеток интактного организма или присущ также низкодифференцированным злокачественно трансформированным клеткам? Для выяснения этого мы оценили способность опухолевых клеток, происходящих из различных ростков гемопоэза, а так же из не гемопоэтических тканей, продуцировать оксид азота как спонтанно (в отсутствии экзогенных индукторов), так и в ответ на И Ф . Эксперименты показали, что клетки карциномы Эрлиха и миеломоноцитарной линии WEHI-3 были способны синтезировать оксид азота спонтанно, в присутствии супернатанта Т-лимфоцитов продукция NO этими клетками достоверно увеличивалась. Начинали продуцировать оксид азота в присутствии супернатанта Т-лимфоцитов также клетки LLC, Р-815 и L1210. Следует отметить, что для получения детектабельных

количеств нитритов требовались значительно меньшие (на порядок) концентрации опухолевых клеток по сравнению с миелокариоцитами. В культуре клеток эритролейкоза человека К-562 даже в присутствии индуктора N0 нитритов не выявлено. Блокатор NO-синтазы отменял стимулирующее синтез оксида азота действие факторов Т-лимфоцитов, а моноклональные антитела к интерферону-у достоверно снижали ее.

Таким образом, почти все исследуемые клеточные линии (пять из шести протестированных) были способны вырабатывать оксид азота под влиянием интерферона, а две из них продуцировали его и без экзогенного стимула Следовательно, экспрессия индуцибельной NO-синтазы опухолевыми клетками является достаточно распространенным явлением среди них. Резюмируя вышесказанное, можно заключить, что трансформированные низкодифференцированные клетки способны реализовывать тот же механизм иммуносупрессии, который свойственен и аналогичным нормальным гемопозтическим, а возможно и иным незрелым клеткам.

Механизм противоопухолевого действия естественных супрессорных клеток костного мозга В то время как факторы иммуносупрессорной активности известны (например, ТФР-/3, оксид азота, простагландины и др. [Moore S.C. et al., 1992; Young M.R. et al., 1992; Mazzoni A. et al., 2002]), о факторах противоопухолевой активности информации нет. По нашим данным, которые полностью согласуются с литературой, клетки костного мозга осуществляли свое иммуносупрессорное действие, синтезируя повышенное количество оксида азота, который являлся главным и единственным супрессорным фактором. Синтез N0 костномозговыми клетками индуцировался непосредственно самими клетками-мишенями: под влиянием митогена лимфоциты селезенки начинали сскретировать повышенное количество интерферона-гамма, который и вызывал усиленный синтез оксида азота эффекторными клетками. То есть проявление иммуносупрессорной активности in vitro зависело от обмена сигналами между эффекторными клетками (ЕСК) и мишенями (митоген-стимулированными лимфоцитами). Против опухолевых клеток N0 никогда не синтезировался, но активность ЕСК, тем не менее, проявлялась. Следовательно, в основе противоопухолевой активности лежит NO-независимый механизм, который, однако, не работает в отношении лимфоцитов. Этому можно предложить два объяснения. Возможно, когда мишенью является опухолевая клетка, активирование ЕСК, как и в случае с лимфоцитами, происходит самой мишенью. Если же эта активность уже предсуществует до контакта с мишенью, то следует допустить, что лимфоцит не чувствителен к противоопухолевому фактору, что тоже возможно, хотя и менее вероятно.

Для того чтобы определить, подавляется ли пролиферация опухолевых клеток при помощи фактора (факторов) или иным образом, изучили влияние на пролиферацию опухолевых клеток супернатантов клеточных культур различного состава (неприлипающих миелокариоцитов, клеток мастоцитомы Р-815 и смешанной культуры миелокариоцитов и клеток Р-815). Супернатанты монокультур клеток костного мозга или Р-815 не оказывали влияния на пролиферацию мишеней, в то время как супернатант культуры, содержавшей смесь клеток костного мозга и мастоцятомы Р-815, достоверно снижал ее. Следовательно, супрессорный фактор начинал продуцироваться при взаимодействии миелокариоцитов и клеток мастоцитомы Р-815. Возможно, что, как и при индукции иммуносупрессорной активности, сами мишени (опухолевые клетки) продуцируют индуктор противоопухолевого фактора. Для проверки этого предположения изучили влияние супернатанта миелокариоцитов на пролиферативную активность клеток Р-815, предварительно прокультивировав миелокариоциты с супернатантом опухолевых клеток Р-815. Было обнаружено, что предварительная экспозиция клеток костного мозга с факторами опухоли не привела к появлению супрессорного фактора. Возможно, для индукции выработки фактора миелокариоцитам необходим контакт с опухолевыми клетками-мишенями. Нельзя исключить и то, что продуцентом антипролиферативного фактора может быть сама опухолевая клетка, а источником его индуктора - клетка костного мозга. Кроме того, появление супрессорного фактора может происходить в результате ряда последовательных событий, являясь итогом нескольких обменов сигналами между клеточными популяциями. Для выяснения, какой из предполагаемых вариантов соответствует реальности, были проведены следующие эксперименты. Опухолевые (Р-815 или карцинома Эрлиха) или костномозговые клетки культивировали 24 ч в присутствии других клеток, отделенных полупроницаемой мембраной. После этого изучили изменение пролиферативной активности клеток опухолей, в другой группе экспериментов определили способность неприлипающих клеток костного мозга продуцировать противоопухолевые факторы. Только в случае, когда миелокариоциты предварительно культивировались в присутствии смеси клеток костного мозга и Р-815, они приобретали способность продуцировать противоопухолевый фактор, поскольку супернатант таких клеток достоверно снижал практически в 2 раза пролиферацию опухолевых клеток Р-815. Когда клетки Р-815 и карциномы Эрлиха культивировали предварительно в присутствии миелокариоцитов, пролиферация таких опухолевых клеток достоверно снижалась. Однако в случае, когда опухолевые клетки культивировали в присутствии смеси миелокариоцитов и одноименных опухолевых клеток, их пролиферация снижалась еще больше. Как видно из полученных результатов, клетки костного мозга

начинают вырабатывать противоопухолевый фактор только после обмена сигналами между костномозговыми и опухолевыми клетками. При этом важным моментом является контакт клетка-клетка. Эти результаты согласуются с данными [Seletsov V.I. et al., 1995] и показывают, что контакт между ЕСК и опухолевой клеткой нужен для индукции противоопухолевой активности. Таким образом, противоопухолевая активность ЕСК (также как и иммуносупрессорная) индуцируется самими клетками-мишенями и осуществляется при помощи супрессорных факторов (но не N0), которые появляются в результате обмена сигналами между костномозговой и опухолевой клетками.

Исходя из полученных данных, можно предположить, что механизмы противоопухолевой активности могут зависеть от свойств конкретной используемой опухолевой клетки. Более того, нельзя исключить возможность существования таких опухолевых клеток, которые вообще не будут индуцировать антипролиферативную активность ЕСК, то есть против них не будет проявляться противоопухолевая активность.

Зависимость механизмов противоопухолевой активности естественных супрессорных клеток от свойств опухолевых клеток. Отсутствие участия оксида азота в противоопухолевой активности ЕСК, показанное нами, может быть также следствием свойств используемой мишени - клеток мастоцитомы Р-815. Другими словами, неспособность этих клеток стимулировать индуцибельную NO-синтазу ЕСК является возможной причиной того, что в противоопухолевом тесте нитриты не обнаруживались. В связи с этим была исследована противоопухолевая активность миелокариоцитов против ряда мишеней (LLC, карцинома Эрлиха, Р-815, L1210 и К-562) и изучена роль оксида азота в этой активности.

Проведенные эксперименты показали, что противоопухолевая активность проявлялась в отношении всех использованных мишеней. По способности стимулировать продукцию оксида азота миелокариоцитами опухолевые клетки разделились на 2 группы - Р-815 и L1210 не стимулировали его, а клетки LLC, карциномы Эрлиха и К-562 - стимулировали. Соответственно в противоопухолевой активности против первой группы мишеней оксид азота не играл роли. Клетки костного мозга подавляли пролиферацию клеток LLC и карциномы Эрлиха, при этом оксид азота хотя и обнаруживался, но лишь в некоторых сериях экспериментов, причём в небольших количествах. Это показывает, что и против таких мишеней оксид азота также не являлся ведущим супрессорным фактором ЕСК. Иная ситуация наблюдалась в случае использования в качестве мишеней клеток К-562: уровень противоопухолевой активности, сопоставимый с результатами, полученными на других клетках-мишенях, сочетался с продукцией миелокариоцитами оксида азота, что воспроизводилось во всех сериях

экспериментов. Следовательно, при использовании клеток К-562 в качестве мишеней можно предполагать значительный вклад оксида азота в противоопухолевую активность. Полученные результаты означают, что все изученные опухолевые клетки способны активировать противоопухолевые эффекторы костного мозга. Поскольку факторы, секретируемые разными опухолевыми клетками, а также экспрессируемые ими мембранные молекулы, различны (хотя, возможно, и имеют общие черты), то, вероятно, и механизмы индукции противоопухолевой активности, и механизмы её реализации разнообразны в зависимости от опухолевой клетки. Другими словами, ЕСК костного мозга способны проявлять антипролиферативную активность в ответ на достаточно широкий спектр клеточных сигналов. Роль оксида азота в реализации противоопухолевого действия невелика.

Возможность раздельного регулирования иммуносупрессорной и противоопухолевой активностей естественных супрессорных клеток. Из приведенных выше данных видно, что одна и та же клеточная популяция обладает как иммуносупрессорной, так и противоопухолевой активностями. Эти активности повышаются одновременно. Однако, как показано выше, механизмы индукции и, как следствие этого, супрессорные факторы у них различны. Следовательно, при запуске этих двух активностей работают разные (частично или полностью) сигнальные цепочки - рецепция сигнала вторичные мессенджеры ДНК. Для ответа на вопрос о том, сопряжены ли эти пути, были проведены эксперименты по изучению иммуносупрессорной и противоопухолевой активностей клеток костного мозга при воздействии на них дексаметазоном. Показано [Коёг^е2 Я. е! а1., 1994], что глюкокортикоиды подавляют иммуносупрессорное действие ЕСК в культуре, но неизвестно, оказывают ли они влияние на противоопухолевые свойства клеток костного мозга.

Проведенные исследования показали, что иммуносупрессорная активность неприлипающих костномозговых клеток в присутствии дексаметазона

снижалась в 1,8 раза, противоопухолевая активность, напротив, повышалась (почти в 2 раза).

Известно, что дексаметазон подавляет иммуносупрессорную активность клеток костного мозга опосредовано, через Т-клетки-мишени, угнетая продукцию ими интерферона, который, в свою очередь, активирует естественные супрессорные клетки [Ко(1г^е2 Я. е! а1., 1994]. Для того чтобы выяснить, связано ли полученное нами повышение противоопухолевой активности с влиянием дексаметазона на мишени (опухолевые клетки), мы провели предварительную краткосрочную обработку опухолевых клеток и костномозговых эффекторов дексаметазоном с последующим удалением гормона. Было получено, что

предварительная инкубация клеток Р-815 и неприлипающих миелокариоцитов с дексаметазоном в течение 3 часов не изменяла чувствительности к противоопухолевому действию клеток костного мозга и не влияла на уровень их противоопухолевой активности. В тоже время инкубация костномозговых клеток с дексаметазоном в течение 16 ч увеличивала их противоопухолевую активность. Таким образом, усиление дексаметазоном противоопухолевой активности неприлипающих клеток костного мозга связано с его прямым действием на эффекторы. Возможно, он стимулирует секрецию противоопухолевого фактора либо повышает чувствительность костномозговых эффекторов к опухолевым продуктам, которые активируют противоопухолевые свойства миелокариоцитов. Какой участок сигнального пути различается при реализации иммуносупрессорной и противоопухолевой активностей, а какой является общим - вопрос, в случае ответа на который может открыться способ регулирования этих активностей.

Естественные супрессорные клетки при опухолевом росте. Как известно, важнейшим элементом патогенеза опухолевого роста является утрата способности иммунной системы полноценно распознавать и элиминировать новообразование. Опухоль использует множество механизмов для создания иммунодефицита, необходимого ей для развития. Так, известно, что опухолевые клетки сами продуцируют различные иммуносупрессорные цитокины [Куртенков О.А. с соавт., 1983; Ключарева Т.Е. с соавт., 1988; Torre-Amione G. et al., 1990; Ferrone S. et al., 1995; Kim P.K. et al., 2001], кроме того, при опухолевом росте возрастает продукция иммуносупрессорных факторов лимфоцитами, дендритными клетками, макрофагами, естественными супрессорными клетками - ECK [Sugiura К. et al., 1992; Brooks-Kaiser J.C. et al., 1993; Alleva D.G. et al., 1994; Huang M et al., 1998; Radoja S. et al., 2000]. Роль оксида азота при опухолевом росте в настоящее время активно обсуждается, имеются данные, указывающие как на проопухолевое, так и противоопухолевое действие NO [Farias-Eisner R. et al., 1994; Lejeune P. et al., 1994; Xie K.P. et al., 1996; Xie K. et al., 1997]. В этой связи одной из задач работы было изучение активности ЕСК и продукции ими NO при опухолевом росте с использованием широкого набора моделей. Исследование активности естественных супрессорных клеток было проведено на следующих моделях опухолевого роста: солидный рост (опухолевые линии Р-815, В-16, карцинома Эрлиха, карциномы легких РЛ-67 и LLC), вирусиндуцированный канцерогенез (эритролейкоз Раушера), химически индуцированный опухолевый рост (фибросаркома, вызванная введением ДМБА), спонтанно развивающаяся тимома у мышей линии AKR. Этот набор включает в себя модели, различающиеся как по способу инициации канцерогенеза (перевивной, спонтанный, индуцированный вирусом и химическим агентом), так и

по гистологическим характеристикам опухолей (мастоцитома, фибросаркома, меланома, карцинома легких, аденокарцинома, тимома, эритролейкоз).

Как известно, важнейшим показателем активации иммунной системы является повышение продукции интерферона-у и интерлейкина-2 Т-лимфоцитами [Cher DJ. et al., 1986; Mosmann T.R. et al., 1986; Roszman T. et al, 1991; Alexander J.P. et al., 1993; Kharkevitch D.D. et al., 1994; Wang Q. et al., 1995; Coventry B.J. et al., 1996; Maeda H. et al., 1996; Pellegrini P. et al., 1996; Carter L. L. et al., 1998; Kobayashi M. et al., 1998; Bellone G. et al., 1999; Uzzo R. G. et al., 1999; Hombach A. etal., 2001]. В связи с этим для оценки состояния иммунной системы было изучено изменение продукции этих цитокинов Т-клетками опухоленосителей.

Естественные супрессорные клетки при перевивном опухолевом росте. Опухоли Льюиса и РЛ-67, как и опухоль Эрлиха, являются карциномами, но отличаются от последней высокой способностью метастазировать. Так же высокометастазирующей является и опухоль В-16, но гистологически представляет собой меланому. Динамика опухолевого роста не зависела от вида опухоли. Появление пальпируемых опухолевых узлов наблюдалось на 5-7 день после инъекции клеток, на 14 сутки размер опухолей достигал 1 см в диаметре. На 21 сутки после перевивки отмечалось появление очагов некроза в опухолевой ткани. Гибель животных наступала на 28-32 день после перевивки опухолевых клеток. Проведенные исследования выявили следующее. На 14 и 21 сутки роста меланомы В-16, карциномы LLC, мастоцитомы Р-815 и карциномы Эрлиха наблюдалось увеличение супрессорной активности костного мозга. Кроме того, на 21 сутки появлялась иммуносупрессорная активность у неприлипающих клеток селезенки животных с В-16, Р-815 и карциномой Эрлиха. В присутствии блокатора NO-синтазы (NMMA) иммуносупрессорная активность хотя и снижалась, но полностью не отменялась во всех случаях, кроме мышей с карциномой Эрлиха, что позволяет сделать вывод о наличии кроме N0 еще одного супрессорного фактора. Противоопухолевая активность миелокариоцитов, полученных от мышей с LLC, карциномой Эрлиха, В-16 и РЛ-67, повышалась, но не сопровождалась продукцией оксида азота. Выработка ИЛ-2 и ИФ-у Т-лимфоцитами опухоленосителей была снижена как на 14, так и на 21 сутки, исключение составили Т-лимфоциты мышей с карциномой Эрлиха, у которых продукция ИФ-у была повышена.

Обращал на себя внимание тот факт, что миелокариоциты и спленоциты, полученные от мышей с карциномой Эрлиха на 14 и 21 сутки опухолевого роста, обладали способностью продуцировать оксида азот спонтанно, без дополнительной стимуляции in vitro. Очевидно, что активирующий продукцию N0 сигнал клетки получили in vivo, в организме опухоленосителя. Таким сигналом, вероятно, был ИФ-у, продукция которого Т-лимфоцитами, увеличивалась при росте опухоли

Эрлиха. Кроме того, сами клетки опухоли Эрлиха (как было показано выше) секретируют стимулятор продукции оксида азота. Мы предположили, что этим стимулятором (опухолевого происхождения) является Для проверки данного

предположения были проведены эксперименты с блокирующими антителами к интерферону-у, которые показали, что присутствие антител к не влияло на

активность синтеза N0 как клетками карциномы, так и миелокариоцитами. Следовательно, в основе стимулирующего синтез N0 действия факторов опухоли Эрлиха лежат механизмы, не зависимые от Другими словами, клетки

карциномы Эрлиха секретируют индуктор NO-синтазы, отличный от ИФ-у.

Для исследования механизмов, приводящих к повышению секреции интерферона-у лимфоцитами селезенки животных с карциномой Эрлиха, изучили прямое влияние факторов клеток данной опухоли на продукцию этого цитокина интактными Т-лимфоцитами. Для этого спленоциты интактных животных культивировали с Т-клеточным митогеном в присутствии супернатанта опухоли Эрлиха (25% или 50% от общего объёма) и обнаружили, что супернатант дозозависимо стимулировал продукцию интерферона-у Т-лимфоцитами.

Таким образом, при росте опухоли Эрлиха мы наблюдали следующие особенности: клетки опухоли Эрлиха сами, спонтанно, продуцируют N0; они вырабатывают факторы, стимулирующие его продукцию другими клетками; факторы опухоли Эрлиха стимулируют выработку ИФ-у Т-лимфоцитами, что, в свою очередь, ещё больше активирует синтез N0. Наличие такой гиперстимуляции выработки оксида азота должно приводить к подавлению пролиферации опухолевых клеток, так как антипролиферативный эффект N0 хорошо показан в литературе. Однако животные, которым имплантируют клетки этой опухоли к 20-30 суткам, как правило, погибают.

Мы исследовали чувствительность пролиферации клеток карциномы Эрлиха к оксиду азота различного происхождения (экзо- и эндогенного, стимулированного и спонтанного). При изучении влияния на пролиферацию спонтанно вырабатываемого и экзогенного N0 в качестве сравнения были взяты клетки WEHI-3, которые также как и клетки опухоли Эрлиха, вырабатывают N0 спонтанно. В результате проведенных экспериментов было обнаружено, что на фоне полной отмены спонтанной продукции N0 блокатором его синтеза пролиферация клеток карциномы Эрлиха не изменялась, у клеток WEHI-3 блокирование продукции N0 имело тенденцию к повышению пролиферации Добавление 10 мМ аргинина привело к увеличению содержания нитритов в обеих культурах, при этом пролиферация клеток линии WEHI-3 снизилась, а карциномы не изменилась. При изучении влияния на пролиферацию опухолевых клеток экзогенного оксида азота использовали его химический донор - нитропруссид натрия. Внесение в культуру

нитропруссида (70 мМ и 700 мМ) привело к достоверному зависимому от дозы повышению концентрации нитритов в культуре, но при этом пролиферация клеток опухоли Эрлиха не изменялась, а WEHI-З достоверно уменьшалась. Для определения влияния стимуляции аутокринной продукции N0 на пролиферацию клеток карциномы Эрлиха и мастоцитомы Р-815 в качестве стимулятора был использован ИФ-у. Клетки опухоли Эрлиха как в присутствии ИФ-у, так и при отмене его индуцирующего действия антителами к интерферону, практически не меняли уровень своей пролиферации, в то время как пролиферация клеток Р-815 снизилась в 6,4 раза. Добавление антител к ИФ-у восстанавливало (частично) пролиферацию клеток мастоцитомы. Суммируя полученные результаты, можно заключить, что клетки опухоли Эрлиха не чувствительны к антипролиферативному действию N0 вне зависимости от его происхождения (аутокринный спонтанный и стимулированный или экзогенный).

Таким образом, благодаря полученным данным становится ясно, что данная опухоль обладает набором нетипичных свойств. В первую очередь это относится к способности ее клеток секретировать факторы, стимулирующие продукцию лимфоцитами. Причем важно подчеркнуть, что повышенная продукция ИФ-у лимфоцитами наблюдается также in vivo. При этом клетки данной опухоли оказались нечувствительными к антипролиферативному действию N0. Такие особенности клеток опухоли Эрлиха делают её необычной и интересной моделью опухолевого процесса. С этими особенностями, очевидно, связано появление продукции N0 клетками селезёнки и костного мозга, выделенными из организма опухоленосителя, в отсутствии стимуляции in vitro. Кроме того, способность клеток опухоли Эрлиха вырабатывать N0 в ответ на позволяет им подавлять

функцию внутриопухолевых лимфоцитов, секретирующих ИФ-у, т.е. наиболее активную их часть. При этом противоопухолевое действие N0 заблокировано, т.к. сами опухолевые клетки резистентны к его антипролиферативному действию. В свете появляющихся в литературе сообщений о применении в терапии онкологических заболеваний химических доноров N0 [Коновалова Н.П. с соавт., 2003] представляется актуальным изучение чувствительности опухолевых клеток к оксиду азота. Для эффективной терапии особую важность приобретает поиск возможностей преодоления резистентности клеток опухоли к действию N0. Для нас же важным выводом, который необходимо сделать из полученных результатов, является следующий: эта модель опухолевого роста не может считаться стандартной и, соответственно, полученные на ней данные могут отражать, лишь особенности этой модели (как, например, повышение продукции лимфоцитами опухоленосителя).

Естественная супрессорная активность при спонтанном опухолевом росте. При развитии спонтанной Т-лимфомы тимуса у мышей линии AKR наблюдалось увеличение как иммуносупрессорной, так и противоопухолевой активностей в костном мозге. Эти изменения сохраняются и в возрасте 7 месяцев. При этом в селезенке не было обнаружено иммуносупрессорных свойств во все сроки наблюдения. Лимфоциты селезенок мышей AKR продуцировали меньше ИЛ-2, чем спленоциты мышей-гибридов контрольной группы. Продукция ИФ-у Т-клетками во все сроки наблюдения не отличалась от контрольных значений, что, вероятно, связано с нарушениями, происходящими в Т-клеточном звене при развитии Т-лимфомы.

Естественная супрессорная активность при развитии вирусиндуцированного эритролейкоза. Было обнаружено, что клетки костного мозга, полученные от мышей линии Balb/c на 21 сутки после инфицирования вирусом Раушера, проявляли повышенную иммуносупрессорную активность в сравнении со здоровыми животными той же линии. Продукция оксида азота клетками костного мозга мышей с эритролейкозом была в 1,5 раза выше, чем контрольных. Вирусиндуцированный бластомогенез сопровождался повышенной противоопухолевой активностью миелокариоцитов, при этом продукции N0 не наблюдалось. В эти же сроки выявлено снижение почти в 2 раза синтеза ИФ-у лимфоцитами селезенок, а также уменьшение выработки в 1,8 и 1,5 раза ИЛ-2.

Естественная супрессорная активность при росте ДМБА-индуцированной фибросаркомы. Костномозговые клетки, полученные от мышей линии С57В1/6 с ДМБА-фибросаркомой, обладали выраженной иммуносупрессорной активностью, превышающей почти в 2 раза аналогичный показатель клеток костного мозга интактных животных. В присутствии спленоцитов-мишеней клетки костного мозга опухоленосителей синтезировали в 1,8-3,3 раза больше оксида азота, чем клетки интактных мышей. У опухоленосителей отмечено снижение секреции Т-лимфоцитами интерферона-у (в 4,2 раза) и интерлейкина-2 (почти вдвое).

Роль оксида азота как супрессорного фактора естественных супрессорных клеток при опухолевом росте. На всех изученных моделях мы получили сходные изменения активности ЕСК. Опухолевый рост сопровождался усилением естественной супрессорной активности костномозговых клеток и повышением синтеза ими оксида азота. Для выяснения вопроса о том, обусловлен ли прирост иммуносупрессорной активности увеличением продукции N0, какова его роль как супрессорного фактора, были проведены эксперименты с использованием специфического блокатора NO-синтазы NMMA. Оценка роли оксида азота в иммуносупрессорном действии ЕСК костного мозга проводилась на 21 сутки после перевивки опухолевых клеток (Р-815, В-16 и карцинома Эрлиха).

В присутствии ингибитора NO-синтазы миелокариоциты интактных животных полностью утрачивали иммуносупрессорную активность, в то время как у клеток костного мозга мышей с мастоцитомой Р-815 и меланомой В-16 она хотя и достоверно снижалась (примерно в 2 раза), но не отменялась полностью. Иные результаты были получены на модели карциномы Эрлиха: в присутствии блокатора NO-синтазы костномозговые клетки полностью утрачивали иммуносупрессорную активность. При этом продукция оксида азота миелокариоцитами контрольных животных блокировалась полностью, в то время как клетки мышей с карциномой сохраняли незначительную способность синтезировать N0. Иммуносупрессорная активность спленоцитов, полученных от животных с опухолью Эрлиха, так же отменялась в присутствии NMMA, несмотря на неполное блокирование синтеза оксида азота. Следовательно, по мере роста опухоли Эрлиха роль N0 как супрессорного фактора возрастает, и к 21 суткам иммуносупрессорная активность неприлипающих клеток, выделенных как из костного мозга, так и из селезенки, реализуется практически полностью через продукцию N0. Таким образом, в соответствии с данными литературы, при росте опухолей В-16 и Р-815 появляется супрессорный фактор, отличный от оксида азота.

Естественные супрессорные клетки при опухолевом росте: некоторые закономерности. Результаты проведенных исследований обобщены в таблице. Зелёным цветом выделены показатели, подчиняющиеся общей закономерности, а красным - отклоняющиеся от неё. Можно видеть, что повышение иммуносупрессорной активности клеток костного мозга является общей закономерностью, полученной на всех изученных моделях канцерогенеза. Увеличение иммуносупрессорной активности обусловлено, по крайней мере, частично, стимуляцией синтеза N0, так как повышение его продукции всегда сопровождало усиление иммуносупрессорной активности.

Закономерное повышение выработки оксида азота естественными супрессорными клетками на всех моделях вызывает ряд вопросов. Например, хорошо известно, что при опухолевом росте снижена продукция ИФ-у - основного индуктора NO-синтазы [Kharkevitch D.D. et al., 1994; Wang, Q. et al., 1995; Pellegrini P. et al., 1996; Bellone G. et al., 1999; Bukowski R. et al., 1999; Kobayashi M. et al., 1999; Uzzo R.G. et al., 1999]. С другой стороны, также известно, что при канцерогенезе повышается продукции цитокинов, подавляющих активность NO-синтазы, таких, например, как ТФР-Р, ИЛ-10 [Kharkevitch D.D. et al., 1994; Wang, Q. et al., 1995; Asselin-Paturel C. et al., 1998; Kobayashi M et al., 1999]. В связи с этим можно предположить, что обнаруженное нами увеличение выработки оксида азота является отражением не повышения активности NO-синтазы в организме опухоленосителей, а результатом увеличения потенциальных возможностей ЕСК

вырабатывать N0, что проявляется при наличии соответствующего стимула, предоставляемого in vitro клеткой-мишенью. Изучение способности костномозговых и селезеночных клеток опухоленосителей вырабатывать N0 спонтанно, показало, что только миелокариоциты и спленоциты животных с карциномой Эрлиха обладали таким свойством. Следовательно, у животных с Р-815, LLC и РЛ-67, эритролейкозом Раушера, ДМБА-фибросаркомой, а также у мышей линии AKR повышенная продукция супрессорами N0 действительно являлась отражением их возросшей способности отвечать выработкой этой молекулы на адекватный стимул. Иное дело в ситуации с карциномой Эрлиха — повышение активности NO-синтазы действительно имело место организме животного. Более того, оксид азота в этом случае был единственным фактором, который собственно и обеспечивал повышенную иммуносупрессорную активность миелокариоцитов. В описанных другими авторами случаях увеличения естественной супрессорной активности при опухолевом росте было показано, что основными супрессорными факторами в их экспериментальной системе были ТФР-р (рак желудка [Kusmartsev SA et al., 1998], карцинома Льюиса [Young MR. et al., 1992]) или супероксид (О2") (карцинома кишечника [Kusmartsev SA et al., 2000]), но не оксид азота. Это несовпадение с литературными данными становится вполне логичным, если учесть наличие повышенной продукции интерферона-у Т-лимфоцитами мышей с карциномой Эрлиха, что тоже не вписывается в рамки классического патогенеза опухолевого роста. В других исследованных моделях опухолевого роста (Р-815 и В-16) кроме NO появлялся еще один супрессорный фактор, что согласуется с приведенными выше данными других авторов.

Кроме вышеперечисленных общих закономерностей при анализе таблицы можно заметить, что все отклонения свойств ЕСК (красные ячейки) зарегистрированы только на двух моделях опухолевого роста - у мышей с карциномой Эрлиха и линии AKR. Именно в этих моделях отмечена и нетипичная продукция Т-клеточных цитокинов (ИФ-у). На взаимосвязь между статусом Т-лимфоцитов и активностью ЕСК указывает и резкое снижение активности естественных супрессорных клеток у мышей Nude с врождённым отсутствием тимуса. Это может означать, что ЕСК сами находятся под регулирующим влиянием Т-лимфоцитов.

Регуляция активности естественных супрессорных клеток факторами опухоли. Для работы были использованы 2 клеточные линии - карцинома Эрлиха и мастоцитома Р-815. Первая из них обнаружила ряд описанных ранее особенностей, вторая взята в качестве «типичной» опухоли. Неприлипающие клетки костного мозга интактных животных культивировали в течение 1 и 3 суток в присутствии разных концентраций опухолевых супернатантов и замеряли продукцию NO во

Таблица

Естественная супрессорная активность неприлипающих клеток костного мозга и селезенки и функциональное состояние Т-лимфоцитов при разных видах канцерогенеза

Примечания: АПА - антипролиферативиая активность; зелёным цветом отмечены показатели, изменяющиеся однонаправленно, красным -разнонаправлено; увеличение показателя; 4- снижение показателя; = -показатель не менялся; х-показатель не изучался.

время инкубации. После культивирования костномозговые клетки переносили в свежую среду и тестировали их иммуносупрессорную активность, а также продукцию оксида азота.

Во время инкубации миелокариоцитов с супернатантом карциномы Эрлиха (25% от общего объема) продукции оксида азота не наблюдалось, при дальнейшемкультивировании неприлипающие клетки костного мозга начинали продуцировать оксид азота даже без каких-либо стимулов, спонтанно. При культивировании с большим количеством супернатанта (50% от общего объема) в конце срока инкубации в культуре были обнаружены нитриты, при дальнейшем культивировании таких клеток спонтанной продукции оксида азота не наблюдалось. Экспозиция неприлипающих клеток костного мозга интактных животных с факторами карциномы Эрлиха в течение 1 суток приводила к повышению иммуносупрессорной активности, которая в 2-3,6 раза превышала контрольные значения, а также сопровождалась более интенсивным синтезом N0 (концентрация нитритов была в 1,5-3 раза выше, чем в контроле). При увеличении длительности контакта с опухолевыми факторами (при культивировании в течение 3 суток) наблюдалось ингибирование иммуносупрессорной активности (вдвое, вплоть до полной ее отмены) и снижение в 4,8 раза продукции оксида азота.

Во время культивирования неприлипающих клеток костного мозга с супернатантом мастоцитомы Р-815 в течение 1 суток N0 не продуцировался, как и при дальнейшем культивировании этих клеток в свежей среде. Миелокариоциты, подвергшиеся воздействию in vitro факторов мастоцитомы, проявляли повышенную иммуносупрессорную активность (в 1,7-1,8 раза более значительную, чем контрольные клетки) и продуцировали в 1,3-1,4 раза больше оксида азота При культивировании миелокариоцитов с факторами мастоцитомы в течение 3-х суток нитритов не обнаружено. При дальнейшем культивировании эти клетки не продуцировали спонтанно оксид азота, в отсутствии клеток-мишеней. Иммуносупрессорная активность обработанных таким образом клеток была в 1,5 раза выше, чем у клеток, культивированных в отсутствии факторов опухоли Р-815, большей была и продукция ими оксида азота (в 1,2-1,7 раза). Таким образом, факторы клеток мастоцитомы Р-815 стимулировали активность ЕСК и синтез ими оксида азота в присутствии клеток-мишеней, не оказывая прямого стимулирующего действия на синтез N0. При этом, в отличие от опухоли, стимулирующей продукцию оксида азота (карцинома Эрлиха), факторы мастоцитомы повышали иммуносупрессорную активность костномозговых клеток и продукцию ими оксида азота как при короткой (1 сутки), так и при длительной (3 суток) экспозиции.

Влияние факторов Т-лимфоцитов интактных животных. Для изучения влияния факторов Т-клеток на иммуносупрессорную активность костномозговых клеток в качестве источника Т-клеточных факторов использовали супернатант стимулированных Т-клеточным митогеном лимфоцитов селезенок. Неприлипающие костномозговые клетки культивировали 1 и 3 суток с полученым супернатантом. По окончании культивирования клетки собирали и тестировали их иммуносупрессорную активность, а в среде культивирования определяли наличие нитритов Было обнаружено, что факторы Т-лимфоцитов изменяли иммуносупрессорную активность клеток костного мозга, направленность изменений зависела от длительности воздействия: короткая экспозиция (I сутки) приводила к увеличению, а длительная (3 суток) - к ингибированию, вплоть до полной отмены данной активности. Наблюдаемые изменения уровня иммуносупрессорной активности были сопряжены с аналогично направленным изменением синтеза N0 костномозговыми клетками — усиление иммуносупрессии сопровождалось повышением, а ингибирование - снижением количества оксида азота. Стимулирование синтеза N0 наблюдалось еще в период инкубации миелокариоцитов с факторами Т-лимфоцитов, т.е. до внесения в культуру клеток-мишеней, являющихся источником индуктора NO-синтазы. В этом случае длительность экслозиции влияла только на количество произведенного клетками костного мозга оксида азота: при суточной экспозиции его количество невелико, в то время как при 3-суточной - многократно превышало контрольные значения. Синтез оксида азота оставался активированным и после удаления факторов Т-лимфоцитов при дальнейшем культивировании миелокариоцитов в свежей среде без дополнительной стимуляции со стороны клеток-мишеней (спонтанный). Однако в этом случае была получена разница между клетками, обработанными Т-лимфоцитарным фактором 1 сутки и 3 суток: при меньшем сроке культивирования синтез N0 был тем активней, чем больше использованная концентрация факторов Т-лимфоцитов При длительной экспозиции зависимость носила иной характер - при увеличении концентрации факторов количество синтезируемого оксида азота резко падало. Полученные результаты отражают кинетику процессов, влияющих на ЕСК и синтез N0: активирующее действие Т-клеточных факторов при дальнейшей экспозиции сменяется их ингибирующим действием.

Для определения роли оксида азота в иммуносупрессорной активности клеток костного мозга, обработанных предварительно супернатантом Т-лимфоцитов, было проведено тестирование данной активности в присутствии блокатора NO-синтазы. Мы обнаружили, что в отсутствии NMMA иммуносупрессорная активность и синтез N0 полностью отменялись.

Механизм действия факторов Т-лимфоцитов на активность естественных супрессорных клеток. Описанные выше результаты подталкивают к следующему представлению о развитии событий: факторы Т-лимфоцитов, активируя ЕСК, приводят к значительному увеличению синтеза ими оксида азота, который, в свою очередь, оказывает не только иммуносупрессорное действие на клетки-мишени (активированные лимфоциты), подавляя их пролиферацию, но и влияет на сами клетки-продуценты, ишибируя их NO-синтезирующую активность. Для проверки данного предположения были проведены следующие исследования. Неприлипающие клетки костного мозга культивировали в присутствии супернатанта Т-лимфоцитов, добавив блокатор синтеза N0. По истечении 3 суток клетки переносили в свежую среду и тестировали их иммуносупрессорную активность. Присутствие NMMA в среде культивирования полностью подавляло синтез оксида азота, при дальнейшем культивировании миелокариоцитов в свежей среде наблюдалось достоверное повышение продукции ими оксида азота. Ингибирование синтеза N0 во время культивации с Т-клеточными факторами полностью восстанавливало иммуносупрессорную активность клеток костного мозга. Параллельно с этим изменялся и уровень продукции оксида азота обработанными таким способом миелокариоцитами: добавление NMMA во время предварительного культивирования клеток с супернатантом Т*Лймфоцитов не только восстанавливало синтез N0, но даже увеличивало его.

Итак, полученные результаты подтверждают высказанное предположение о причинах, приводящих при длительном культивировании с факторами Т-лимфоцитов к ингибированию активности ЕСК и синтеза ими оксида азота. По данным литературы известно, что N0 вызывает снижение содержания незрелых клеток в популяции миелокариоцитоз, индуцируя апоптоз либо дифференцировку гемопоэтических клеток [Punjabi C.J. et al., 1992; Maciejewski J.P. et al., 1995; Shami P.J. et al., 1996; Lee J.W. et al., 1997; Selleri С et al., 1997]. Иными словами, обнаруженная нами смена активации иммуносупрессорных свойств костномозговых клеток их ингибицией при более длительной обработке происходит за счет аутокринного N0, синтез которого стимулирует присутствующий в супернатанте Т-лимфоцитов интерферон-у.

Для изучения роли интерферона-у в действии Т-лимфоцитарного супернатанта на активность ЕСК был получен ряд супернатантов Т-лимфоцитов, из которых отобраны 2, различающихся на порядок по содержанию ИФ-у и

4min)- Во всех культурах в конце преинкубации (в течение 3-х суток) содержались нитриты, однако в культуре с супернатантом их было в 6 раз больше, чем с

супернатантом После переноса клеток в свежую среду и дальнейшем их

культивировании в культуре клеток, контактировавших с супернатантом №

концентрация нитритов была в 2 раза выше, чем в культуре клеток, обработанных ранее супернатантом № 4„,„,..

Использованные супернатанты противоположно влияли на иммуносупрессорную активность клеток костного мозга: супернатант № Зиш снижал её, а супернатант № А^ - повышал. При этом выработка оксида азота в первом случае снижалась, а во втором - не изменялась. Таким образом, супернатант с более высоким содержанием снижал как иммуносупрессорную активность, так и синтез N0, что повторяет ранее полученные результаты и является следствием стимуляции продукции оксида азота. Влияние супернатанта с меньшим содержанием оказалось несколько неожиданным: он стимулировал

иммуносупрессорную активность клеток, но не влиял на синтез ими N0, т.е. прирост иммуносупрессорной активности обеспечивался не оксидом азота, а был связан с появление второго супрессорного фактора. Мы предположили, что в супернатанте не только было снижено количество интерферона-у, но так же

было повышено содержание какого-то другого вещества, ответственного за стимуляцию второго супрессорного фактора ЕСК. Это могло быть следствием различий в исходном функциональном состоянии Т-лимфоцитов, использованных для получения данных супернатантов. Для проверки этого предположения нам понадобилась такая модель иммунизации, при которой активация Т-лимфоцитов сопровождалась бы снижением продукции ими интерферона-у. В качестве такой модели мы использовали иммунизацию овальбумином (OVA) с развитием анафилактической реакции.

Влияние факторов Т-лимфоцитов животных. иммунизированных овальбумином. Для получения супернатантов Т-клеток были использованы лимфоциты селезенок иммунизированных овальбумиком животных, которые продуцировали сниженное количество как ИФ-у, так и ИЛ-2. Для получения супернатанта спленоциты иммунизированных животных рестимулировали in vitro овальбумином. При культивировании неприлипающих клеток костного мозга интактных сингенных мышей с таким супернатантом в течение 1 суток нитритов не обнаружено. После перенесения обработанных таким образом миелокариоцитов в свежую среду и дальнейшем культивировании без клеток-мишеней продукции N0 не наблюдалось. Иммуносупрессорная активность этих клеток повысилась в 2,5-3 раза, а продукция оксида азота в присутствии клеток-мишеней не только не увеличилась, но даже имела тенденцию к снижению. При длительном (3 суток) культивировании неприлипающих клеток костного мозга с супернатантом OVA-стимулированных спленоцитов нитритов в среде культивирования не обнаружено. При дальнейшем их культивировании в свежей среде без мишеней спонтанной секреции N0 также не было. Иммуносупрессорная активность клеток,

предварительно обработанных супернатантом OVA-стимулированных спленоцитов, повышалась, но при этом продукция оксида азота не только не увеличивалась, но даже имела тенденцию к снижению. Таким образом, супернатант Т-лимфоцитов иммунизированных овальбумином животных не активировал синтез оксида азота, но повышал иммуносупрессорную активность, которая реализовывалась через N0 лишь в некоторой степени, что свидетельствует о появлении какого-то другого супрессорного фактора. Эти результаты подтверждают предположение о том, что количественные и качественные характеристики естественной супрессорной активности (т.е. ее уровень и вид супрессорного фактора/факторов) зависят от функционального состояния Т-лимфоцитов.

Естественные супрессорные клетки при различной антигенной стимуляции in vivo. Для проверки in vivo предположения о связи количественных и качественных характеристик естественной супрессорной активности с функциональным состоянием Т-лимфоцитов были использованы различные модели иммунного ответа - реакция «трансплантат против хозяина» (РТПХ), сенсибилизация эритроцитами барана, модель полуаллогенной беременности. Состояние Т-лимфоцитов оценивали по продукции ими интерферона-у и интерлейкина-2.

У мышей с РТПХ иммуносупрессорная активность неприлипающих миелокариоцитов была в 3-5 раз больше, чем у клеток интактных мышей. Секреция оксида азота клетками костного мозга в присутствии лимфоцитов-мишеней также возрастала (в 2-2,4 раза). Даже в отсутствии стимулов со стороны клеток-мишеней эффекторные клетки опытной группы животных спонтанно секретировали оксид азота. У животных с РТПХ имело место почти двукратное увеличение продукции интерферона-у Т-лимфоцитами и усиление синтеза ИЛ-2 в 1,5 раза.

На 7-е сутки после сенсибилизации эритроцитами барана наблюдалось повышение в 2,6-5 раз иммуносупрессорной активности костномозговых клеток, при этом отмечался и более активный синтез ими оксида азота (в 1,6 раза выше, чем в лунках, содержащих клетки контрольных животных). В отсутствии стимулов со стороны клеток-мишеней миелокариоциты опытной группы животных спонтанно секретировали оксид азота Т-лимфоциты иммунизированных мышей секретировали повышенные количества как интерферона-у, так и интерлейкина-2.

В модели полуаллогенной беременности (17-19 сутки гестации) также обнаружено повышение в 1,6 раза иммуносупрессорной активности костномозговых клеток по сравнению с контрольными самками, а также увеличение продукции N0 (концентрация нитритов была в 1,5-2,1 раза выше, чем в контроле). В отсутствии стимулов со стороны клеток-мишеней эффекторные клетки

опытной и контрольной групп животных спонтанно не секретировали N0. Продукция ИФ-у и ИЛ-2 лимфоцитами селезенки беременных самок снижалась.

Исследование активности ЕСК, полученных на всех использованных моделях антигенной стимуляции, показало, что при активации иммунного ответа происходит усиление активности ЕСК, а также повышение уровня синтезируемого ими оксида азота в присутствии клеток-мишеней. При этом возросшая продукция Т-лимфоцитами селезенки интерферона-у сочеталась со свойством ЕСК продуцировать N0 и без клеток-мишеней (спонтанно), как и при росте карциномы Эрлиха. В случае снижения уровня секретируемого Т-лимфоцитами интерферона-у (при полуаллогенной беременности) наблюдалась только повышенная способность ЕСК отвечать выработкой N0 на адекватный стимул, аналогично ситуации, выявленной нами на всех моделях канцерогенеза, в которых наблюдалось снижение выработки Т-лимфоцитами интерферона-у. Результаты, полученные in vivo, также подтверждают наше предположение о наличии регулирующего действия на ЕСК со стороны Т-лимфоцитов.

ВЫВОДЫ

1. Иммуносупрессорная и противоопухолевая активности являются общим свойством гемопоэтических тканей (костного мозга половозрелых животных и печени эмбриона). Вне зависимости от источника получения естественных супрессорных клеток механизмы этих активностей различны: иммуносупрессорная в значительной степени обусловлена оксидом азота, противоопухолевая не связана с ним.

2. Противоопухолевая активность естественных супрессорных клеток инициируется самой опухолевой клеткой-мишенью и опосредуется выработкой растворимых медиаторов. В основе механизма индукции противоопухолевой активности лежит как действие факторов, секретируемых опухолевыми клетками, так и непосредственные клеточные контакты.

3. Механизм антипролиферативной активности естественных супрессорных клеток, индуцированной опухолевой клеткой, не связан с оксидом азота вне зависимости от типа опухолевой клетки-мишени. Клетки некоторых опухолевых линий способны стимулировать продукцию оксида азота естественными супрессорными клетками, но и в этом случае оксид азота не является ведущим медиатором противоопухолевой активности.

4. Иммуносупрессорная активность естественных супрессорных клеток увеличивается при обогащении популяций миелокариоцигов незрелыми

гемопоэтическими клетками, при этом возр ими

БИБЛИОТЕКА |

С.В«т«р*Ург О» SN иг

оксида азота. Противоопухолевая активность естественных супрессорных клеток костного мозга также повышается при увеличении содержания незрелых гемопоэтических клеток, однако оксид азота не играет роли в проявлении этой активности.

5. Патологически измененные недифференцированные клетки — опухолевые клетки, также обладают естественной супрессорной активностью. Механизмы индукции и реализации иммуносупрессорной активности опухолевых и гемопоэтических клеток идентичны: и те и другие в ответ на интерферон-гамма продуцируют оксид азота, который в значительной степени ответственен за иммуносупрессию.

6. Факторы, секретируемые клетками опухолевых линий, повышают иммуносупрессорную активность естественных супрессорных клеток костного мозга при прямом действии. Причиной этого повышения является усиление продукции оксида азота естественными супрессорными клетками.

7. Повышение естественной супрессорной активности является закономерностью опухолевого роста вне зависимости от вида канцерогенеза и гистологического типа опухоли.

8. Усиление иммуносупрессорной активности естественных супрессорных клеток при росте опухолей в значительной степени обусловлено повышением продукции ими оксида азота, который, однако, не является единственным супрессорным фактором. У животных с опухолью Эрлиха оксид азота является единственным иммуносупрессорным фактором естественных супрессорных клеток.

9. Особенности механизма индукции иммуносупрессорной активности естественных супрессорных клеток при росте карциномы Эрлиха обусловлены наличием у данной опухоли ряда уникальных свойств: ее клетки сами вырабатывают оксид азота без дополнительной стимуляции и секретируют индуктор его синтеза, стимулируют продукцию интерферона-у Т-лимфоцитами. Костномозговые клетки, полученные от животных с данной опухолью, спонтанно продуцируют в культуре оксид азота; секретируемые опухолью Эрлиха факторы при прямом действии в течение суток на клетки интактного костного мозга вызывают раннюю активацию естественных супрессорных клеток, связанную с увеличением продукции ими оксида азота.

10. Особенностью патогенеза роста карциномы Эрлиха является нетипичное функциональное состояние Т-лимфоцитов опухоленосителя: в других моделях опухолевого роста наблюдается снижение продукции интерферона-гамма Т-лимфоцитами, в случае карциномы Эрлиха, напротив, его выработка повышается.

И. Механизм индукции активности естественных супрессорных клеток и механизм ее реализации зависят от функционального состояния Т-лимфоцитов: Т-лимфоциты с повышенной продукцией интерферона-гамма активируют естественные супрессорные клетки, механизм реализации иммуносупрессорного действия которых определяется оксидом азота; Т-клетки со сниженной продукцией интерферона-гамма индуцируют естественные супрессорные клетки, продуцирующие иные супрессорные факторы.

ПЕРЕЧЕНЬ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕДИССЕРТАЦИИ

1. The cytostatic effect of immunocompetent cells in dynamic of chemical induced tumor growth. // IXth Europ. Immunol. Meeting.-Roma (Italy), 1988.-W 1117-47.-P.I99 (соавторы V.I. Ogreba, SA Stankevich, SA. Kusmartsev, OA Polushina, I.V. Bogdashin, N.V. Vasilyev).

2. Влияние факторов, вырабатываемых клетками опухоли Эрлиха, на опухолецидную и супрессорную активность клеток костного мозга in vitro. // Ланималогия.-1993.-№ 1.-С.41 (соавтор С.А Кусмарцев).

3. Increasing activity of natural supressor cells and production suppressor factor by bone marrow cells in aging of mice of high-tumor strain. // П Internat. Congress ISNIM, Paestum (Salerno), Italy, 1993.-P.284 (соавторы Н.В. Землянская, СА. Кусмарцев).

4. Уменьшение противоопухолевой и супрессорной активности неприлипающих клеток костного мозга совместным культивированием с супернатантом опухоли Эрлиха. // Бюлл. эксперим. биол. и мед.-1994.-№ 5.-С.514-517 (соавторы И.М. Агранович, С.А Кусмарцев).

5. Естественные супрессорные клетки (обзор). // Успехи соврем, биологии.-1994.-Т. 114, № 6.-С.705-714 (соавторы СА Кусмарцев, И.М. Агранович, Н.В. Землянская).

6. Изучение взаимодействия естественных супрессоров с некоторыми популяциями иммунокомпетентных клеток. // Экспериментальная и клиническая иммунология.-Томск, 1995.-С.25-31 (соавтор СА. Кусмарцев).

7. Дифференциальная индукция естественной супрессорной активности клеток костного мозга in vitro различными типами опухолей. // Бюлл. эксперим. биол. и мед.-1995.-№ 8.-С.184-187 (соавторы Н.В. Землянская, СА Кусмарцев, И.М. Агранович).

8. Супрессорная и противоопухолевая активность клеток костного мозга и селезенки мышей AKR при старении. // Бюлл. эксперим. биол. и мед.-1999.-Т. 127, № 4.-С.452-454 (соавторы Н.В. Вельская, М.Г. Данилец, Е.С. Стальбовская, С. А. Кусмарцев).

9. Characteristics of suppressor factor produced by bone marrow cells after DT treatment. // Immunology.-1995.-V. 86.-Suppl. 1.-P.126 (соавторы S.A. Kusmartsev, N.V. Zemlyanskaya).

10. Структурно-функциональная организация костного мозга в динамике старения мышей линии AKR/J. // Бюлл. эксперим. биол. и мед.-1998.-Т. 125, № 3.-С.266-268 (соавторы Е.Д. Гольдберг, М.Г. Данилец, А.М. Дыгай, Л.А. Коснырева, С.А. Кусмарцев, ИА Хлусов).

11. Экспрессия некоторых рецепторов костномозговых макрофагов в условиях цитостатической миелосупрессии. // Бюлл. эксперим. биол. и мед.-1998.-Т. 126, № 7.-С.25-27 (соавторы Е.Д. Гольдберг, М.Г. Данилец, AM. Дыгай, В.В. Жданов, С.А. Кусмарцев).

12. Адаптивные возможности гранулоцитарного ростка костного мозга у мышей линии AKR/JY в предлейкозный периодУ/ Бюлл. эксперим. биол. и мед.-1999.-№ 2.-С. 151-153 (соавторы Е.Д. Гольдберг, М.Г. Данилец, A.M. Дыгай, Л.А. Коснырева, СА Кусмарцев, И.А. Хлусов).

13. Механизмы предлейкозной гипоплазии эритроидного ростка костного мозга у мышей линии AKR/JY. // Бюлл. эксперим. биол. и мед.-1999.-№ 6.-С.633-635 (соавторы Е.Д. Гольдберг, М.Г. Данилец, А.М. Дыгай, Л. А. Коснырева, С А. Кусмарцев, ИА Хлусов).

14. Регуляция антипролиферативной активности неприлипающих клеток костного мозга. Роль интерферона-гамма. //Бюлл. эксперим. биол. и мед.-1999.-Т. 128, № 12.-С.677-680 (соавторы М.Г. Данилец, Н.В. Вельская, Е.С. Стальбовская, С.А Кусмарцев).

15. Характеристика естественной супрессорной активности при росте опухоли Эрлиха. //Бюлл. эксперим. биол. и мед.-2000.-Т. 129.-Прилож. 1.-С.60-63 (соавторы Н.В. Вельская, М.Г. Данилец, Е.С. Стальбовская, С. А. Кусмарцев, В.И. Агафонов).

16. Механизм усиления иммуносупрессорных свойств клеток костного мозга при росте карциномы Эрлиха. // Бюлл. эксперим. биол. и мед.-2001.-Прилож. 1.-С.75-77 (соавторы Е.С. Трофимова, Н.В. Вельская, В.И. Агафонов).

17. Разнонаправленное действие дексаметазона на противоопухолевую и естественную супрессорную активность клеток костного мозга. // Бюлл. эксперим. биол. и мед.-2000.-Т. 129, № 4.-С.386-388 (соавторы Н.В. Вельская, Е.С. Стальбовская, В.И. Агафонов).

18.Супрессорная активность клеток костного мозга мышей с карциномой легких РЛ-67. // Проблемы экспериментальной и клинической фармакологии. -Томск, 2000.-С.47-48 (соавтор Е.С. Трофимова).

19. Роль Т-лимфоцитов в регуляции активности естественных супрессорных клеток. // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии.-Томск, 2001.-С. 17-19 (соавтор В.И. Агафонов).

20. Иммуносупрессорная и противоопухолевая активность клеток костного мозга и селезенки при росте карциномы Эрлиха. // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии.-Томск, 2001.-С. 15 7-160 (соавтор Е.С. Трофимова).

21. Естественная супрессорная активность и опухолевый рост. // Бюлл. эксперим. биол. и мед.-2003.-Прилож. № 2.-С. 68-75 (соавторы Н.В. Вельская, М.Г. Данилец, Е.С. Трофимова, В.К. Патрушев, В.И. Агафонов).

22. Роль естественных супрессорных клеток во взаимодействии гемопоэтической и иммунной систем. // Експериментальна i юпшчна медицина (Харьков).-2003.-№ 2.-С. 36-43 (соавторы Н.В. Вельская, М.Г. Данилец, В.К. Патрушев, В.И. Агафонов).

23. Изучение активности естественных супрессорных клеток при опухолевом росте. // Актуальные проблемы фармакологии.-Томск, 2004.-С.34-36 (соавторы Н.В. Вельская, М.Г. Данилец, Е.С. Трофимова, В.К. Патрушев, В.И. Агафонов).

24. Роль клеточных взаимодействий в индукции противоопухолевой активности естественных супрессорных клеток. // Сб. статей по материалам 5-го конгресса молодых ученых и специалистов «Науки о человеке», Томск, 2004.-С.314-315 (соавторы В.К. Патрушев, Н.В. Вельская, М.Г. Данилец, Е.С. Трофимова, В.И. Агафонов).

25. Иммуносупрессорная и противоопухолевая активности различных популяций костномозговых клеток. // Сибирский онкологический журнал (Томск).-2004.-№ 2-3 (10-11).-СЛ 18-123 (соавторы М.Г. Данилец, Н.В. Вельская, В.К. Патрушев, Е.С. Трофимова, В.И. Агафонов).

26. Роль оксида азота в иммуносупрессорной активности клеток костного мозга при экспериментальном опухолевом росте. // Материалы Российской научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы развития экспериментальной и клинической онкологии», Томск, 2004.-С.63-64 (соавторы Н.В. Вельская, М.Г. Данилец, Е.С. Трофимова, В.К. Патрушев, В.И. Агафонов).

27. Иммуносупрессорная и противоопухолевая активности клеток костного мозга у животных с разным генотипом. Роль оксида азота. // Материалы Российской научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы развития экспериментальной и клинической онкологии», Томск, 2004.-С.61-62 (соавторы Н.В, Вельская, М.Г. Данилец, Е.С. Трофимова, В.К. Патрушев, В.И. Агафонов).

28. Продукция оксида азота клетками опухолевых линий. // Материалы Российской научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы

развития экспериментальной и клинической онкологии», Томск, 2004.-С. 180-181 (соавторы В.К. Патрушев, Н.В. Вельская, М.Г. Данилец, Е.С. Трофимова, В.И. Агафонов).

29. Иммуносупрессорная активность костномозговых клеток мышей при гиперчувствительности немедленного типа // Иммунология.-2004.-Т. 25, № 4.-С.213-215 (соавторы Н.В. Вельская, В.К. Патрушев, М.Г. Данилец, Е.С. Трофимова, В.И. Агафонов).

1*24022

Тираж 100. Заказ 1232. Томский государственный университет систем управления и радиоэлектроники пр. Ленина, 40

Оглавление диссертации Бельский, Юрий Павлович :: 2005 :: Томск

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. ИММУНОСУПРЕССИЯ ПРИ ОПУХОЛЕВОМ РОСТЕ.

1.1.1. Нарушение функций Т-лимфоцитов.

1.1.2. Нарушения передачи сигнала с рецептора Т-клеток.

1.1.3. Нарушения функционирования натуральных киллеров.

1.1.4. Нарушения иммунного ответа, связанные с мембранными. молекулами, белками экстрацеллюлярного матрикса и хемокинами.

1.1.5. Нарушение функций клеток микроокружения.

1.2. ОКСИД АЗОТА И ЕГО РОЛЬ ПРИ ОПУХОЛЕВОМ РОСТЕ.

1.2.1. Противоопухолевые эффекты оксида азота.

1.2.2. Проопухолевое действие оксида азота.

1.3. ЕСТЕСТВЕННЫЕ СУПРЕССОРНЫЕ КЛЕТКИ.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. - АКТИВНОСТЬ ЕСТЕСТВЕННЫХ СУПРЕССОРНЫХ КЛЕТОК МЫШЕЙ РАЗНЫХ ЛИНИЙ И РАЗНЫХ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ ТКАНЕЙ. РОЛЬ ОКСИДА АЗОТА.

3.1.1 Активность естественных супрессорных клеток костного мозга.

3.1.1.1. Исследование активности естественных супрессорных клеток цельного костного мозга и его неприлипающей фракции.

3.1.1.2. Исследование активности естественных супрессорных клеток костного мозга мышей различных линий.

3.1.2. Исследование активности естественных супрессорных клеток из эмбриональной печени.

3.1.2.1. Исследование активности естественных супрессорных клеток печени 14-дневного эмбриона мыши.

3.1.2.2. Исследование активности естественных супрессорных клеток печени 19-дневного эмбриона мыши.

3.1.3. Исследование иммуносупрессорной и противоопухолевой активностей естественных супрессорных клеток при обогащении их популяции незрелыми гемопоэтическими клетками. Роль оксида азота.

3.1.3.1. Изучение активности естественных супрессорных клеток костного мозга при фракционировании их по плотности.

3.1.3.2. Изучение активности естественных супрессорных клеток костного мозга обогащенных незрелыми гемопоэтическими клетками при длительном культивировании.

3.1.3.3. Изучение активности естественных супрессорных клеток костного мозга на фоне активации гемопоэза после воздействия циклофосфаном.

3.1.4. Иммуносупрессорная активность опухолевых клеток.

3.1.5. Изучение противоопухолевой активности естественных супрессорных клеток костного мозга.

3.1.5.1. Механизмы противоопухолевого действия естественных супрессорных клеток костного мозга.

3.1.5.2. Зависимость механизмов противоопухолевой активности естественных супрессорных клеток от свойств опухолевых клеток

3.1.6. Возможность раздельного регулирования иммуносупрессорной и противоопухолевой активностей естественных супрессорных клеток150 \/

3.2. ЕСТЕСТВЕННЫЕ СУПРЕССОРНЫЕ КЛЕТКИ ПРИ ОПУХОЛЕВОМ РОСТЕ.

3.2.1. Естественные супрессорные клетки при перевивном опухолевом росте.

3.2.1 Л. Естественные супрессорные клетки при росте меланомы В-16.

3.2.1.2. Естественные супрессорные клетки при росте аденокарциномы Эрлиха.

3.2.1.3. Естественные супрессорные клетки при росте карциномы лёгких Льюиса.

3.2.1.4. Естественные супрессорные клетки при росте мастоцитомы Р815195 ^

3.2.1.5. Естественные супрессорные клетки при росте карциномы лёгких РЛ67.

3.2.2. Естественная супрессорная активность при спонтанном опухолевом росте.

3.2.3. Естественная супрессорная активность при развитии вирусиндуцированного эритролейкоза.

3.2.4. Естественная супрессорная активность при росте ДМБА-индуцированной фибросаркомы.

3.2.5. Роль оксида азота как супрессорного фактора естественных супрессорных клеток при опухолевом росте.

3.3. РЕГУЛЯЦИЯ АКТИВНОСТИ ЕСТЕСТВЕННЫХ СУПРЕССОРНЫХ

КЛЕТОК ФАКТОРАМИ ОПУХОЛИ И Т-ЛИМФОЦИТОВ.

3.3.1. Влияние факторов клеток карциномы Эрлиха на активность естественных супрессорных клеток.

3.3.2. Влияние факторов клеток мастоцитомы Р-815 на активность естественных супрессорных клеток.

3.3.3. Влияние факторов Т-лимфоцитов интактных животных на активность естественных супрессорных клеток.

3.3.3.1. Механизм действия факторов Т-лимфоцитов на активность естественных супрессорных клеток.

3.3.4. Влияние факторов Т-лимфоцитов животных, иммунизированных овальбумином, на активность естественных супрессорных клеток.

3.4. ЕСТЕСТВЕННЫЕ СУПРЕССОРНЫЕ КЛЕТКИ ПРИ ПРИ РАЗЛИЧНОЙ АНТИГЕННОЙ СТИМУЛЯЦИИ IN Y1YO.

3.4.1. Естественные супрессорные клетки при реакции «трансплантат против хозяина».

3.4.2. Естественные супрессорные клетки при иммунизации эритроцитами барана.

3.4.3. Естественные супрессорные клетки при полуаллогенной беременности.

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Бельский, Юрий Павлович, автореферат

Как известно, одним из важных патогенетических факторов опухолевого роста является дефектность иммунного ответа, что проявляется в неадекватной его инициации и, как следствие, развитии иммуносупрессии. Показано, что опухолевые клетки экспрессируют так называемые опухоль-ассоциированные антигены [Whiteside T.L^OOO], в ^ случае адекватного распознавания которых иммунная система успешно предотвращает опухолевый рост или вызывает его регрессию [Cheever М.А. et al., 1995; Bocchia M. et al., 1996; Boon T. et al., 1996]. Механизмы ухода опухоли от иммунологического надзора многообразны. Опухолевые клетки, продуцируя иммуносупрессорные цитокины (TGF-ft, \Г простагландины, оксид азота, ИЛ-10, альфа-2-макроглобулин, фактор роста эндотелиальных сосудов -VEGF), воздействуют как непосредственно на Т-лимфоциты, так и на клетки микроокружения [Куртенков О.А. с соавт., 1983; Ключарева Т.Е. с соавт., 1988; Black Р.Н. et al., 1980; Ladisch S. et al., 1983; Miescher S. et al., 1986; Cukrova V. et al., 1987; Miescher S. et al., 1988; Ebert E.C. et al., 1990; Roszman T. et al., 1991; Tada T. et al., 1991; Grégoire M. et al., 1992; Yoshino I. et al., 1992; Alexander J.P. et al., 1993; Lalim H. et al., 1993; Alleva D.G. et al., 1994; Chen Q. et al., 1994; Lieubeau B. et al., 1994; Hersh E.M. et al., 1995; Weller M. et al., 1995; Lagadec P. et al., 1996; Tsushima H. et al., 1996; Wojtowicz-Praga S. et al., 1997; Santin A.D. et al., 1999; Zou J.P. et al., 1999; Sharma S. et al., 1999; Kudo D., 2003; Abrahams V.M. et al., 2003; Andreola G. et al., 2002; Shurin G.V. et al., 2001; Peguet- ^ Navarro J. et al., 2003; Mullins D.W. et al., 2003].

Инициация и развитие иммунного ответа в значительной степени зависят от микроокружения иммунокомпетентных клеток, а ключевая роль в регуляции этого процесса принадлежит ци+окйнам. Одним из важных источников иммунорегуляторных веществ (NO, ТФР-ß, ИЛ-10 и др.) являются некоторые гемопоэтические клетки - естественные супрессорные клетки (ECK) [Moore S.C. et al. 1992a; Belsky Y.P. et al. 1993; Angulo I. et al. 1995; Kusmartsev S.A. et al. 1995; Sennikov S.V. et al. 1996; DeKoter R.P. et al. 1997; Seledtsova G.V. et al. 1997; Yanagie H. et al. 1997; Mori Т. et al. 1998; Sennikov S.V. et al. 2001], которые представляют собой незрелые клетки различных ростков кроветворения. ECK - крайне неоднородная популяция клеток, обладающих естественной супрессорной активностью, т.е. способностью подавлять пролиферацию иммунокомпетентных клеток неспецифически (без предварительного контакта с мишенями, не требуя рестрикции по антигенам комплекса гистосовместимости) [Michelson J.D. et al. 1988; Noga S.J. et al. 1988; Saffian D.C. et al. 1991; Hoskin D.W. et al. 1992; Sugiura K. etal. 1992].

ECK могут принадлежать к гранулоцито-макрофагальному, эритроидному, лимфоидному ростку [Чеглякова В.В, 1989; Sugiura К., ^ v/ 1992; Brookskaiser J.C.,1993; Кусмарцев С.А., 1994; Kusmartsev S.A. et al., л/ ч/ 20036; Bronte V.^et al., 2003], однако их объединяет, во-первых, то, что они имеют нулевой фенотип^ и? во-вторых, обладают выраженной ^ иммуносупрессорной активностью как in vitro, так и in vivo (подавляют реакцию Т- и B-лимфоцитов на антигены и митогены) [McGarry R.C., 1982]. Кроме того, показано, что ECK обладают и противоопухолевой активностью, ингибируя пролиферацию некоторых опухолевых клеток in vitro [Seledtsov V.l., 1995]. Следует отметить, что если при опухолевом росте иммуносупрессорная роль ECK показана, то данных об их противоопухолевых свойствах в литературе нет. Пока вопрос о значении противоопухолевой активности ECK в развитии злокачественных новообразований остается открытым.

Важное значение ECK в регуляции иммунитета показано в работах in vivo при опухолевом росте [Young М., 1994], РТПХ [Hertel-Wulff В., 1987], иммунизации Salmonella typhimurium [Schleifer K.W., 1993]. При некоторых физиологических состояниях (беременность) [Brookskaiser J.C., 1993], при заболеваниях (опухолевый рост) [Kusmartsev S.A., 1989; Young M.R., 1996], а также определенных экспериментальных моделях (трансплантация клеток костного мозга [Imamura М. Е., 1986], РТПХ [Holda J.H., 1988], введение циклофосфана [Maier Т., 1989]) активность ECK значительно возрастает. В ситуациях стимулированного гемопоэза активность ECK также значительно увеличивается, при этом они мигрируют из костного мозга в очаги эктопического гемопоэза, в частности, в селезенку, где оказывают выраженное иммуносупрессорное действие.

В основе механизма иммуносупрессорного действия ECK лежит секреция ими растворимых медиаторов - супрессорных факторов (СФ), в роли которых могут выступать ТФР-ß, оксид азота, простагландины, некоторые нуклеозиды и другие, в том числе еще не идентифицированные вещества [Moore S.C., 1992; Angulo I., 1995; Kusmartsev S.A., 1995; DeKoter R.P., 1997; Yanagie H., 1997; Mori Т. E., 1998]. Данные литературы относительно иммуносупрессорных факторов ECK при опухолевом росте немногочисленны и противоречивы, в частности, в качестве СФ обнаружен ТФР-ß [Young M.R, 1991] и NO. Однако не ясно, обусловлены ли эти разноречивые данные конкретными особенностями использованной модели опухолевого роста, продуцируют ли ECK только один СФ или в динамике роста опухоли происходит смена факторов. Известно, что иммуносупрессорная активность ECK костного мозга интактных мышей обусловлена продукцией оксида азота [Angulo I., 1995]. Изменяется ли уровень его продукции ECK в процессе опухолевого роста, зависит ли это от вида канцерогенеза или от динамики опухолевой прогрессии, - все эти вопросы остаются открытыми.

Известно, что сама опухоль вырабатывает стимулирующие гемопоэз факторы (ГМ-КСФ, ИЛ-3), активируя ECK [Young M.R., Newby М. et al.,

1987; Young M.R., Wright M.A. et al., 1992; Young M.R. et al., 1996]. Представляется актуальным изучить прямое действие опухолевых факторов на активность ECK и синтез оксида азота, сопоставить свойства ECK опухоленосителей со свойствами ECK, полученных после воздействия факторов, вырабатываемых данной опухолью.

Показано, что важными регуляторами гемопоэза являются Т-лимфоциты [Гольдберг Е.Д. с соавт., 1982; Гольдберг Е.Д. с соавт., 1983; Гольдберг Е.Д., Дыгай А.М., 1985; Гольдберг Е.Д. с соавт., 1988; Дыгай А.М. с соавт., 1989; Бабаева А.Г., 1990], кроме того, индуктором одного из основных супрессорных факторов ECK (NO) является Т-лимфоцитарный цитокин - интерферон-у. Несмотря на это, исследователями уделяется недостаточное внимание вопросам регуляции активности ECK Т-клетками. Представляется актуальным изучить действие Т-клеточных факторов на ECK, а также сопоставить качественные и количественные характеристики ECK с функциональным состоянием Т-лимфоцитов при различных способах иммунизации.

Цельисследования: изучить механизмы регуляции иммуносупрессорной и противоопухолевой активностей естественных супрессорных клеток в норме и при опухолевом росте. Оценить роль оксида азота в реализации антипролиферативной активности естественных супрессорных клеток.

Задачи исследования:

2. Сравнить вклад оксида азота в иммуносупрессорную и противоопухолевую активности естественных супрессорных клеток некоторых популяций миелокариоцитов с различным содержанием незрелых клеток (после удаления зрелых макрофагов, после длительного их культивирования, в период восстановления гемопоэза после введения циклофосфана, а также фракций с низкой плавучей плотностью).

4. Изучить механизмы индукции и реализации противоопухолевой активности в зависимости от свойств опухолевых клеток-мишеней.Й^ль растворимых факторов ECK и контактных межклеточных взаимодействий.

Положения, выносимые на защиту.

2. Иммуносупрессорная активность, индуцируемая лимфоцитами, реализуется через продукцию оксида азота. Противоопухолевая активность естественных супрессорных клеток, индуцируемая опухолевыми клетками, реализуется через продукцию факторов, отличных от оксида азота.

- усиление противоопухолевой активности естественных супрессорных клеток, в основе которой лежит NO-независимый механизм.

4. Рост карциномы Эрлиха является нетипичной моделью канцерогенеза: особенности свойств клеток данной опухолевой линии определяют и особые свойства ECK.

Научная новизна. В работе выявлены механизмы инициации иммуносупрессорной и противоопухолевой активностей естественных супрессорных клеток. Впервые показано, что индукция этих активностей различна и зависит от клеток-мишеней, которые через вырабатываемые факторы определяют механизм реализации естественной супрессорной активности. В работе также показано, что есть возможность селективно регулировать либо иммуносупрессорную, либо противоопухолевую активности естественных супрессорных клеток. Обнаружено, что иммуносупрессорная активность естественных супрессорных клеток в значительной степени обусловлена оксидом азота, синтез которого тем активней, чем больше содержание незрелых гемопоэтических клеток в популяции клеток-эффекторов. Противоопухолевая активность при таком обогащении также возрастает, однако оксид азота в ее формировании участия не принимает.

Впервые показано, что опухолевые клетки обладают иммуносупрессорной активностью, идентичной по механизмам индукции и реализации таковой у ^трансформированных низкодифференцированных кроветворных клеток.

Выявлено, что противоопухолевая активность гемопоэтических клеток проявляется в отношении различных по свойствам опухолевых клеток-мишенеи и, только в некоторой степени^ может реализовывается I/ через оксид азота. Естественные супрессорные клетки оказывают противоопухолевое действие через растворимые медиаторы, секреция которых индуцируется опухолевой клеткой-мишенью, в том числе и в результате контакта клетка-клетка между эффектором и мишенью.

С использованием большого набора моделей опухолевого роста (химически и вирус-индуцированный канцерогенез, перевивной и спонтанный опухолевый рост) впервые показано, что повышение естественной супрессорной активности происходит у животных с опухолью вне зависимости от типа канцерогенеза и гистологического вида опухоли. При этом иммуносупрессорное действие естественных супрессорных клеток в значительной степени обусловлено оксидом азота. В основе механизма наблюдаемого усиления активности естественных супрессорных клеток может лежать и непосредственное стимулирующее действие факторов, продуцируемых клетками опухоли. Впервь1епоказано,\^ что при разных типах канцерогенеза параллельно с повышением иммуносупрессорной активности возрастает и противоопухолевая.

Впервые показано, что солидный рост карциномы Эрлиха ^ представляет собой особую модель канцерогенеза, что обусловлено наличием у данной опухоли ряда свойств: ее клетки сами вырабатывают оксид азота без дополнительной стимуляции, секретируют индуктор его синтеза, стимулируют продукцию интерферона-у Т-лимфоцитами, что, вероятно, и является причиной спонтанной (без дополнительной стимуляции) продукции оксида азота клетками костного мозга животных-опухоленосителей. Нетипичен также и патогенез роста данной опухоли - он сопровождается повышением продукции интерферона-гамма Т-клетками опухоленосителя. Иммуносупрессорная активность естественных супрессорных клеток в данной модели канцерогенеза также повышается, однако оксид азота в этом случае является основным и единственным их супрессорным фактором.

Апробация работы. Материалы, вошедшие в диссертацию, были представлены на IX Европейской конференции по иммунологии (Рим, Италия, 1988); на 1-ом международном симпозиуме РАЛАН «Лабороторные животные в медико-биологических и биотехнологических исследованиях» (Москва, 1992); на 2-ом Международном Когрессе КШМ (Салерно, Италия, 1993); на конференции «Экспериментальная и клиническая иммунология» (Томск, 1995); на конференциях: посвященной 35-летию ДНИЛ, «Медико-биологические аспекты нейро-гуморальной регуляции» (Томск, 1997); посвященной 15-летию НИИ фармакологии, «Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов» (Томск, 1999); «Проблемы экспериментальной и клинической фармакологии» (Томск, 2000); «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии» (Томск, 2001); «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии» (Томск, 2002); «Актуальные проблемы фармакологии» (Томск, 2004); на Российской научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы развития экспериментальной и клинической онкологии» (Томск, 2004).

Публикации результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 30 печатных работ, из них 19 в центральных журналах.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 420 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырех глав, выводов, списка использованной литературы. Работа иллюстрирована 92

Заключение диссертационного исследования на тему "Механизмы регуляции активности естественных супрессорных клеток в норме и при опухолевом росте"

ВЫВОДЫ:

1. Иммуносупрессорная и противоопухолевая активности является общим свойством гемопоэтических тканей (костного мозга половозрелых животных и печени эмбриона). Вне зависимости от источника получения естественных супрессорных клеток механизмы этих активностей различны: иммуносупрессорная в значительной степени обусловлена оксидом азота, противоопухолевая не связана с ним.

2. Противоопухолевая активность естественных супрессорных клеток инициируется самой опухолевой клеткой-мишеныо и опосредуется выработкой растворимых медиаторов. В основе механизма индукции противоопухолевой активности лежит как действие факторов, секретируемых опухолевыми клетками, так и непосредственные клеточные контакты.

3. Вне зависимости от типа опухолевой клетки-мишени ается антипролиферативный механизм, не связанный с оксидом азота. Клетки некоторых опухолевых линий способны индуцировать продукцию оксида азота естественными супрессорными клетками, но и в этом случае оксид азота не является ведущим медиатором противоопухолевой активности.

4. Иммуносупрессорная активность естественных супрессорных клеток увеличивается при обогащении популяций миелокариоцитов незрелыми гемопоэтическими клетками, при этом возрастает и уровень продуцируемого ими оксида азота. Противоопухолевая активность естественных супрессорных клеток костного мозга также повышается при увеличении содержания незрелых гемопоэтических клеток, однако оксид азота не играет роли в проявлении этой активности.

5. Патологически измененные недифференцированные клетки -опухолевые клетки, также обладают естественной супрессорной активностью. Механизмы индукции и реализации иммуносупрессорной активности опухолевых и гемопоэтических клеток идентичны: и те и другие в ответ на интерферон-гамма продуцируют оксид азота, который в значительной степени ответственен за иммуносупрессию.

11. Механизм индукции активности естественных супрессорных клеток и механизм ее реализации зависят от функционального состояния Т-лимфоцитов: Т-лимфоциты с повышенной продукцией интерферона-гамма активируют естественные супрессорные клетки, механизм реализации иммуносупрессорного действия которых определяется оксидом азота; Т-клетки со сниженной продукцией интерферона-гамма индуцируют естественные супрессорные клетки, продуцирующие иные супрессорные факторы.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2005 года, Бельский, Юрий Павлович

1. Абелев Г.И. Противоопухолевый иммунитет. // Руководство по иммунологии. -М: Медицина, 1973 .-С .64-76.

2. Адамян А.Т., Смольянинов Е.С., Васильев Н.В., Удут В.В. Типологический анализ реакций системы иммунитета у больных раком молочной железы и здоровых женщин. // Иммунология.-1989.-№ 5.-С.56-59.

3. Андрианов И.Г., Каташкова Т.Н. Влияние аутоплазмы больных раком молочной железы на функциональную активность естественных киллерных клеток и прилипающих мононуклеаров периферической крови in vitro. // Эксперим. онкология.-1989.-Т. 11, № 5.-С.64-66.

4. Бабаева А.Г. Лимфоциты как регуляторы пролиферации и дифференцировки нелимфоидных органов. // Вестн. АМН СССР.-1990.-№ 2.-С.43-45.

5. Бабакова C.B., Агеенко А.И., Городилова В.В. Нарушение дифференцировки иммунокомпетентных клеток в процессе развития злокачественных новообразований. // Цитология.-1988.-Т. XXX, № 9,-С.1123.

6. Баженов С.М., Доросевич А.Е., Наперстников В.В. Лимфоциты крови, регионарных лимфатических узлов и ткани опухоли при раке молочной железы. //Вопр. онкологии.-1988.-Т. XXXIY, № 9.-С.1040-1048.

7. Бережная Н.М. Лимфоциты, инфильтрирующие опухоль: фенотип, функциональная активность, биологическое значение, роль в терапии. // Эксперим. онкология.-1994.-Т. 16, № 4-6.-С.4-6.

8. Бернет Ф. Клеточная иммунология.-М:Мир, 1971, 542с.

9. Бландова З.К, Душкин В.А, Малашенко А.М, Шмидт Е.Ф. // Линии лабораторных животных для медико-биологических исследований.-М.:Наука, 1983.-С.50-53.

10. Богомолец A.A. Избранные труды.-Киев, 1958.-750с.

11. Брувере Р.Ж, Глинкина Л.С, Муцениеце А .Я. Использование апатогенного вируса для оценки степени нарушения цитодифференцировки Т-лимфоцитов при опухолевом росте. // Цитология.-1988.-Т. XXX, № 9.-С. 1124-1125.

12. Бутенко З.А, Зак К.П, Науменко О.И, Хоменко Б.М, Афанасьева

13. Быковская С.Н, Грунтенко Е.В. Т-лимфоциты в противоопухолевом иммунитете.-Новосибирск:Наука, 1982.-С. 114-125.

14. Володарский В.Л, Маслова М.Г, Турина Л.И, Дыбова Т.В. Содержание лимфоцитов в крови больных раком желудка. // Вестник хирургии им. И.И. Грекова.-1981.-Т. 126, № 1.-С.23-27.

15. Говалло В.И., Григорьева М.П., Космиади Г.А. Регуляция иммунной реакции лимфоцитов крови in vitro лимфоцитами аутологичной опухоли. //Иммунология.-1981.-№ 6.-С.40-43.

16. Гольдберг В.Е., Дыгай A.M., Новицкий В.В. Рак легкого и система крови.-Томск: Изд-во ТГУ, 1992.-236с.

17. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В. Роль гемопоэзиндуцирующего микроокружения в регуляции кроветворения при цитостатических миелосупрессиях.-Томск:Изд-во ТГУ, 1999а.-128с.С/66

18. Гольдберг Е.Д., Вельский Ю.П., Данилец М.Г., Дыгай A.M., Коснырева JI.A., Кусмарцев С.А., Хлусов И.А. Механизмы предлейкозной гипоплазии эритроидного ростка костного мозга у мышей линии AKR/JY. //Бюлл. эксперим. биол. мед.-1999б.-№ 6.-С.633-635.

19. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M. Роль Т-лимфоцитов в регуляции пролиферации и дифференцировки КОЕс, КОЕэ, БОЕэ. // Стволовые клетки и опухолевый рост. Киев:Наукова думка, 1985.-С.221-225.

20. Гольдберг Е.Д., Дыгай А.М., Богдашин И.В. Характеристика субпопуляций Т-лимфоцитов, принимающих участие в регуляции миелопоэза при стресс-реакции. // Пат. физиол. и эксперим. терапия.-1988.-№ 4.-С.29-32.

21. Гольдберг Е.Д., Дыгай А.М., Жданов В.В. Роль гемопоэзиндуцирующего микроокружения в регуляции кроветворения при цитостатических миелосупрессиях.-Томск:Изд-во ТГУ, 1999.-128с.С /66

22. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Карпова Г.В. Об участии лимфоцитов в регуляции кроветворения в условиях локального облучения организма. // Бюлл. эксперим. биол. мед.-1982.-№ 3.-С.97-99.

23. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Карпова Г.В. Роль лимфоцитов в регуляции гемопоэза.-Томск: Изд-во ТГУ, 1983.-160с.

24. Григорьева М.П., Космиади Г.А., Говалло В.И. Иммунологический ответ in vitro лимфоцитов больных на живые клетки аутологической опухоли. //Вопр. онкологии.-1980.-Т. XXYI, № 9.-С.8-11.

25. Гриневич Ю.А., Зайчук А.И. Содержание лимфоцитов и их субпопуляций при комбинированном лечении рака прямой кишки. // Медиц. радиология.-1980.-№ 8.-С. 21-24.

26. Грунтенко Е.В. Иммунитет и возникновение злокачественных опухолей. Новосибирск:Наука, 1977.-С.96-125.

27. Грязнова И.М., Чередеев А.Н., Макаров О.В., Цветков В.В., Моисеева Н.Б. Изменение активности естественных киллеров у больных с доброкачественными и злокачественными опухолями яичников. // Акушерство и гинекология.-1986.-№ 9.-С.39-43.

28. Гусева С.А., Сиваченко Т.П., Федько A.A. Прогностическое значение естественной цитотоксичности лимфоцитов при хронических лейкозах. //Вопр. онкологии.-1991.-Т. 37, № 5.-С.560-563.

29. Дыгай А.М., Гольдберг Е.Д., Попов Г.К., Шахов В.П. О способности Т-лимфоцитов in situ реализовывать свои регуляторные влияния на уровне гемопоэтических клеток предшественников типа БОЕ-Э-ДК и КОЕ-Э-ДК. // Гематол. итрансфузиол.-1985.-№ 11.-C.33-36.

30. Дыгай А.М., Шахов В.П. Роль межклеточных взаимодействий в регуляции гемопоэза.-Томск:Нзд-во ТГУ, 1989.-224с.

31. Зильбер JI.A. Специфические антигены опухолей. // Успехи в изучении рака.-Т. 5.-М:ИЛ, 1960.-С.186-232.

32. Кавецкий P.E. Реактивность организма и опухолевый рост,-Киев:Наукова думка, 1981.-429с.

33. Кадагидзе З.Г. Субпопуляции лимфоцитов при злокачественном росте. //Вопр. онкологии.-1984.-Т. XXX, № 1.-С.90-97.

34. Каменец JI.Я., Гриневич Ю.А. Цитотоксическая активность лимфоидных клеток при раке. // Вопр. онкологии.-1980.-Т. XXYI, № 7.-С.81-86.

35. Карпова Г.В., Фомина Т.И., Абрамова Е.В., Бельская Н.В., Трофимова Е.С., Перельмутер В.М. Состояние кроветворных и лимфоидных органов у мышей линии AKR/JY с лимфомой тимуса. // Бюлл. эксп. биол. и мед.-2002.-№ 7.-С.79-82.

36. Кашлакова Н.В., Лисуков И.А., Цырлова И.Г., Васильев Н.В., Козлов В.А. Супрессивный эффект бластных клеток мышей линии AKR на антителообразование in vivo и пролиферацию in vitro. // Бюлл. эксперим. биол. мед.-1988.-№ 2.-С. 184-186.

37. Кашлакова Н.В. Иммунодепрессивное действие бластных клеток эритроидной природы in vitro. // Автореф. дис.канд.биол.наук,-НовосибирскД 987.-21с.

38. Кашлакова Н.В., Лисуков И.А., Цырлова И.Г., Васильев Н.В., Козлов В.А. Супрессивный эффект бластных клеток мышей линии AKR на антителообразование in vivo и пролиферацию in vitro. // Бюлл. эксперим. биол. медиц.-1988.-№ 2.-С. 184-186.

39. Ключарева Т.Е., Матвеева В.А., Кашкина Л.М., Прилуцкая М.О., Уварова Э.Н. Злокачественные свойства трансформированных (опухолевых) клеток сирийского хомячка и продукция этими клетками простагландина типа Е. // Цитология.-1988.-Т. XXX, № 9.-С.1133-1134.

40. Козлов В.А., Цырлова И.Г., Чеглякова В.В. Иммунорегуляторные клетки нелимфоидной природы (Ег-супрессоры) // Докл. АН СССР.-1984,-Т.273, № 1.-С.67-69.

41. Коновалова Н.П., Гончарова С.А., Волкова Л.М., Раевская Т.А., Еременко Л.Т., Королев А.М. Донор оксида азота повышает эффективность цитостатической терапии и задерживает развитие лекарственной резистентности. //Вопр. 0нкол.-2003.-т. 49, № 1.-С.71-75.

42. Космиади Г.А., Григорьева М.П., Говалло В.И. Субпопуляции лимфоцитов в костных злокачественных опухолях и их связь с иммунным ответом на опухоль. // Вопр. онкологии.-1981.-Т. XXYII, № 2.-С.43-47.

43. Кочергина H.H., Ярилин A.A., Балюра A.B. О сниженной активности гормональных факторов тимуса у мышей линии AKR. // Иммунол.-1990.-№ 2.-С. 67-68.

44. Крылова И.В., Шалаев В.А., Макеев О.Г., Кукушкина Т.Е., Ферулева М.Н. Иммунологические особенности стадий В-варианта хронического лимфолейкоза. //Иммунология.-1989.-№ 5.-С.63-65.

45. Куртенков O.A., Смородин Е.П. Иммунодепрессивные свойства альфа-2-макроглобулина сыворотки крови больных раком желудка. // Эксперим. онкология.-1983.-Т. 5, № 2.-С.55-57.

46. Кусмарцев С.А., Огреба В.И. Супрессорная активность клеток костного мозга и селезенки мышей линии С57В1/6 при канцерогенезе, индуцированном 7,12-диметилбенз(а)антраценом. // Эксперим. онкол.-1989.-Т.11, № 5.-С.23-26.

47. Лабунец И.Ф., Гриневич Ю.А., Толстопятов Б.А. Нарушения функций иммунной системы и их коррекция при меланомах с регионарными метастазами. // Вопр. онкологии,-1989.-Т. XXXY.-№ 4.-С.416-423.

48. Лисуков И.А., Цырлова И.Г., Козлов В.А. Влияние андрогенов на развитие лейкоза у мышей линии AKR/J. // Эксперим. онкология.-. 986.-Т. 8, № 1.-С.71-79.

49. Лосева М.И., Фридлянд Д.Ю. Содержание розеткообразующих клеток и функциональная активность Т-лимфоцитов в периферической крови у больных лимфогрануломатозом на разных фазах патологического процесса. //Терапевтический архив.-1981.-Т. L1II, № 9.-С.68-71.

50. Митасов A.B., Черных Е.Р., Цырлова И.Г., Шубинский Г.З., Козлов В.А. Действие Эр-супрессорного фактора (ов) на пролиферацию лимфоцитов человека // Иммунология.-1990.-№ 5.-С.61-63.

51. Пантелеева Е.С., Ярилин A.A., Неприна Г.С., Байсоголов Г.Д. О причинах дефицита Т-лимфоцитов периферической крови у больных лимфогрануломатозом. //Иммунология.-1981.-№ 1.-С.70-74.

52. Погодина О.Н., Филатова H.A., Горюнова Л.Б., Малыгин A.M., Фель В.Я. Естественная киллерная активность спленоцитов мышей СЗНА на ранних сроках химического канцерогенеза и после трансплантации опухолевых клеток. // Цитология.-1988.-Т. XXX, № 9.-С.1141.

53. Рисина Д.Я., Жаков И.Г., Фрадкин С.З., Жаврид Э.А. Иммунологический статус больных со злокачественной меланомой при комбинированной терапии с использованием локальной СВЧ-терапии. // Вопр. онкологии.-1989.-Т. XXXY, № 12.-С.1437-1440.

54. Руденко В.А., Лисяный Н.И., Радзиевский A.A. Субпопуляции лимфоцитов и их функциональная активность у больных с опухолями головного мозга. // Врачебное дело.-1990.-№ 9.-С.91-94.

55. Самарин Д.М., Селедцова Г.В., Селедцов В.И., Тарабан В.А., Козлов В.А. Супрессорный эффект незрелых эритроидных клеток на пролиферацию В клеток. // Бюлл. эксперим. биол. медиц.-1997.-№.1.-С.66-70.

56. Санин A.B., Снегирева А.Е., Николаева Т.Н. // Эксперим.онкология.-1985.-Т. 7, № 4.-С.68-71.

57. Свиридова И.К., Агеенко А.И. Кооперативные и миграционные способности Т- и B-лимфоцитов в иммунном ответе при аденовирусном канцерогенезе. // Эксперим. онкология.-1983.-Т. 5, № 2.-С.44-47.

58. Сенников C.B. Влияние эритробластов на реакции клеточного и гуморального иммунитета. // Автореф. дис.канд.мед.наук.-Новосибирск, 1988.-22С.

59. Сенников C.B., Кашлакова Н.В., Санин A.B., Цырлова И.Г., Козлов В.А. Исследование роли Т-лимфоцитов в иммуносупрессии, осуществляемой клетками эритроидного ряда. // Иммунол.-1987.-№ 3,-С.36-38.

60. Сенников C.B., Козлов В.А. Эритробласты клетки-регуляторы в системе гемопоэза. // Всесоюзн. конфер. с междунар. участием. Под ред. Гольдберга Е.Д., Козлова В.А.-Томск, 1988.-С.21-23.

61. Сенников C.B., Цырлова И.Г., Чеглякова В.В., Козлов В.А. Эр-супрессоры в регуляции клеточных и гуморальных иммунных реакций. II Бюлл. Сиб. Отд. АМН СССР.-1988.-№ 3.-С.27-30.

62. Сенюков B.B. Иммунорегуляторная и противоопухолевая активность клеток эритроидного ряда. // Автореф.дис.канд.биол.наук.-Новосибирск, 2000.-18 с.

63. Соколова И.И., Репина Ф.Ф. Некоторые цитохимические показатели и бласттрансформация лимфоцитов больных солидными злокачественными опухолями. // Лаб. дело.-1982.-№ 6.-С.343-347.

64. Степанова E.H., Айрапетьян Г.П., Майский И.Н. Изучение структурно-функциональных изменений лимфоидных популяций в динамике канцерогенеза. //Бюлл. эксперим. биол. и мед.-1980.-Т. LXXXIX, № 5.-С.586-588.

65. Стражникова Г.А., Сухоруков В.П., Ворончихина Л.Д., Коршунова Т.П., Горностаева Т.Н., Зайцева Г.А. Содержание Т- и В-лимфоцитов и их функциональная активность у больных первичным раком и альвеококкозом. // Вопр. онкологии.-1984.-Т. XXX, № 1.-С.56-59.

66. Уманский Ю.А. Теоретические основы клинической иммунологии опухолей. //Вопросы онкологии.-1975.-Т. XXI, № 9.-С.106-115.

67. Фердат А.К., Брувере Р.Ж., Витолинь Л.А., Петровска Р.Г. Механизм иммуномодуляции в противоопухолевом действии энтеровируса ЕСНО-7. // Эксперим. онкология.-1989.-Т. И, № 5.-С.43-48.

68. Цырлова И.Г. Взаимоотношения между эритропоэзом и иммуногенезом. // Автореф. дис. . д-ра мед.наук.-Москва, 1987.-36с.

69. Цырлова И.Г. Иммуносупрессорные клетки эритроидного ряда Эр-супрессоры и их роль в регуляции иммунитета. // Вестн. АМН СССР.-1991.-№ 12.-С.34-39.

70. Цырлова И.Г., Кашлакова Н.В., Козлов В.А. Влияние клеток "эритропоэтической" селезенки на пролиферацию Т- и В-лимфоцитов. // Иммунол.-1986.-№ 4.-С.27-29.

71. Цырлова И.Г., Чеглякова В.В., Козлов В.А. Иммуносупрессивный эффект клеточной популяции с различной эритропоэтической активностью у эмбрионов и новорожденных мышей. // Онтогенез.-1985.-№ 2.-С.143-148.

72. Чеглякова В.В. Клетки-регуляторы гуморального иммунного ответа эритроидной природы. // Автореф. дис.канд. мед. наук.-Новосибирск, 1984.-25 с.

73. Чеглякова В .В., Цырлова И.Г., Козлов В. А. Эритроидная природа естественных супрессорных клеток костного мозга. // Иммунол.-1989.-№ 3.-С.52-55.

74. Abrahams V.M., Straszewski S.L., Kamsteeg M., Hanczarnk В., Schwartz P.E., Rutherford T.J., Мог G. Epithelial ovarian cancer cells secrete functional Fas ligand. // Cancer Res.-2003.-V. 63.-P.5573-5581.

75. Adler H., Freeh В., Thony M., Pfîster H., Peterhans E., Jungi T.W. Inducible nitric oxide synthase in cattle. Differential cytokine regulation of nitric oxide synthase in bovine and murine macrophages. // J. Immunol.-1995.-V. 154.-P.4710-4718.

76. Aim В., Ohshima H. Suppression of intestinal polyposis in Ape (Min/+) mice by inhibiting nitric oxide production. // Cancer Res.-2001.-V. 61,-P.8357-8360.

77. Alalami O., Martin J.H. ZR-75-1 human breast cancer cells: expression of inducible nitric oxide synthase and effect of tamoxifen and phorbol ester on nitric oxide production. // Cancer Lett.- 1998.-V. 123.-P.99-105.

78. Alleva D.G., Burger C.J., Elgert K.D. Tumor-induced regulation of suppressor macrophage nitric oxide and TNF-a production: role of tumor-derived IL-10, TGF-B and prostaglandin E2. // J. Immunol.-1994.-V. 153,-P.1674-1686.

79. Allison J.P., Hurwitz À.A., Leach D.R. Manipulation of costimulatory signals to enhance antitumor T-cell responses. // Curr. Opin. Immunol.-1995.-V. 7.-P.682-686.

80. Almand B., Resser J.R., Lindman B., Nadaf S., Clark J.I., Kwon E.D., Carbone D.P., Gabrilovich D.I. Clinical significance of defective dendritic cell differentiation in cancer. // Clin. Cancer Res.-2000.-V. 6.-P.1755-1762.

81. Altman J.D., Moss P.A.H., Goulder P.J.R., Barouch D.H., McHeyzer-Williams M.G., Bell J.I., McMichael A.J., Davis M.M. Phenotypic analysis of antigen-specific T lymphocytes. // Science.-1996.-V. 274.-P.94-96.

82. Anderson C., Hehr A., Robbins R., Hasan R., Athar M., Mukhtar H., Elmets C.A. Metabolic requirements for induction of contact hypersensitivity to immunotoxic polyaromatic hydrocarbons. // J. Immunol.-1995.-V. 155, № 7,-P.3530-3537.

83. Anderson S.A., Isakson P.C., Pure E., Muirhead M., Ulir J.W., Vitetta

84. E.S. Immunosuppression in a murine B cell leukemia (BCL1): role of an adherent cell in the suppression of primary in vitro antibody responses. // J. Immunol.-1981 .-V. 126.-P.1603-1607.

85. F., Lugini L., Stringaro A., Molinari A., Arancia G., Gentile M., Parmiani G., Fais S. Induction of lymphocyte apoptosis by tumor cell secretion of FasL-bearing microvesicles. //J. Exp. Med.-2002.-V. 195.-P.1303-1316.

86. Angulo I., Rodriguez R., Garcia B., Medina M., Navarro J., Subiza J.L. Involvement of nitric oxide in bone marrow-derived natural suppressor activity. Its dependence oflFN-g. //J.Immunol.-1995.-V. 155.-P.15-26.

87. Aoe T., Okamoto Y., Saito T. Activated macrophages induce structural abnormalities of the T cell receptor-CD3 complex. // J. Exp. Med.-1995.-V. 181.-P. 1881-1889.

88. Awwad M., North R.J. Cyclophosphamide-induced immunologically mediated regression of a cyclophosphamide-resistant murine tumor: a consequence of eliminating precursor L3T4+ suppressor T-cells. // Cancer Res.-1989.-V. 49.-P.1649-1654.

89. Baggiolini M., Dewald B., Moser B. Human chemokines: an update. // Annu. Rev. Immunol.-1997.-V. 15.-P.675-683.

90. Bakshi A., Nag T.C., Wadhwa S., Mahapatra A.K., Sarkar C. The expression of nitric oxide synthases in human brain tumours and peritumoral areas. //J. Neurol. Sci.-1998.-V. 155, № 2.-P.196-203.

91. Balmain A., Pragnell I.B. Mouse skin carcinomas induced in vivo by chemical carcinogens have a transforming Harvey-ras oncogene. // Nature (Lond.).-1983.-V. 303.-P.72-74.

92. Banchereau J., Steinman R. M. Dendritic cells and the control of immunity. //Nature.-l 998.-V. 392.-P.245-251.

93. Bani D., Masini E., Bello M.G., Bigazzi M., Sacchi T.B. Relaxin activates the L-arginine-nitric oxide pathway in human breast cancer cells. // Cancer Res.-1995.-V. 55.-P.5272-5275.

94. Baskar S., Clements V.IC., Glimcher L.H., Nabavi N., OstrandRosenberg S. Rejection of MHC class II-transfected tumor cells requiresinduction of tumor-encoded B7-1 and/or B7-2 costimulatory molecules. // J. Immunol. -1996. V. 156.-P.3821-3827.

95. Belsky Y.P., Zemlyanskaya N.V., Kusmartsev S.A. Increasing activity of natural suppressor cells and production suppressor factor by bone marrow cells in aging of mice of high-tumor strain. // 2th Int. Congress ISNIM, Salerno, Italy, 1993.-P.284.

96. Bernards R., Dessain S. K., Weinberg R. A. N-myc amplification causes down-modulation of MHC class I antigen expression in neuroblastoma. // Cell.-1986.-V. 47.-P.667-674.

97. Binder C., Schulz M., Hiddemann W., Oellerich M. Induction of inducible nitric oxide synthase is an essential part of tumor necrosis factor-a-induced apoptosis in MCF-7 and other epithelial tumor cells. // Lab. Investig.-1999.-V. 79.-P.1703-1712.

98. Bing R.J., Miyataka M., Rich K.A., Hanson N., Wang X., Slosser H.D., Shi S.R. Nitric oxide, prostanoids, cyclooxygenase and angiogenesis in colon and breast cancer. // Clin. Cancer Res.-200I.-V. 7.-P.3385-3392.

99. Black P.H. Shedding from the cell surface of normal and cancer cells. //Adv. CancerRes.-1980.-V. 32.-P.75-81.

100. Bluestone J.A. New perspectives of CD28-B7-mediated T cell costimulation. //Immunity.-1995.-V. 2.-P.555-559.

101. Bocchia M., Korontsvit T., Xu Q., Mackinnon S., Yang S. Y., Sette A., Scheinberg D. A. Specific human cellular immunity to bcr-abl oncogene-derived peptides. //Blood.-1996.-V. 87.-P.3587-3593.

102. Boon T., Cerottini J.-C., Van den Eynde B., van der Bruggen P., Pel A.V. Tumor antigens recognized by T lymphocytes. // Annu. Rev. Immunol.-1994.-V. 12.-P.337-345.

103. Boon T., Coulie P., Marchand M., Weynants P., Wolfel T., Brichard V. Genes coding for tumor rejection antigens: perspectives for specific immunotherapy. // Important Adv. Oncol.-1994.-V. 130.-P.53-69.

104. Boon T., van der Bruggen P. Human tumor antigens recognized by T lymphocytes. //J. Exp. Med.-1996.-V. 183.-P.725-732.

105. Boyer M.W., Vallera D.A., Taylor P.A. The role of B7 costimulation by murine acute myeloid leukemia in the generation and function of a CD8+ Tcell line with potent in vivo graft-versus-leukemia properties. // Blood.-1997.-V. 89.-P.3477-3485.

106. Braciale V.L., Parish C.R. Inhibition of in vitro antibody synthesis by cyclophosphamide-induced suppressor cells. // Cell Immunol.-1980.-V. 51.-P.1-12.

107. Braun S.E., Chen K., Foster R.G. The CC chemokine CK beta-11/MIP-3 beta/ELC/Exodus 3 mediates tumor rejection of murine breast cancer cells through NK cells. // J. Immunol.-2000.-V. 64.-P.4025-4031.

108. Brittenden J., Heys S.D., Ross J., Eremin O. Natural killer cells and cancer. // Cancer.-1996.-V. 77, № 7.-P.1226-1243.

109. Broder S., WaJdmarm T.A. The suppressor-cell network in cancer (first of two parts). //N. Engl. J. Med.-1978.-V. 299.-P.1281-1284.

110. Bronte V., Apolloni E., Cabrelle A., Ronca R., Serafini P., Zamboni P., Restifo N.P., Zanovello P. Identification of a CDllb/Gr-l/CD31 myeloid progenitor capable of activating or suppressing CD8 T cells. // Blood.-2000.-V. 96.-P.3838-3846.

111. Bronte V., Wang M., Overwijk W.W., Surman D.R., Pericle F., Rosenberg S.A., Restifo N.P. Apoptotic death of CD8+ T lymphocytes after immunization: induction of a suppressive population of Mac-1+/Gr-1+ cells. // J. Immunol.-1998.-V. 161 .-P.5313-5320.

112. Brooks-Kaiser J.C., Bourque L.A., Hoskin D.W. Heterogeneity of splenic natural suppressor cells induced in mice by treatment with cyclophosphamide. //rmmunopharmacoIogy.-1993.-V. 25.-P.117-129.

113. Brooks-Kaiser J.C., Murgita R.A., Hoskin D.W. Pregnancy-associated suppressor cells in mice: functional characteristics of CD3+4-8-45R+ T cells with natural suppressor activity. // J. Reprod. Immunol -1992.-V. 21.-P.103-125.

114. Buggins A.G., Hirst W.J., Pagliuca A., Mufti G.J. Variable expression of CD3-z and associated protein tyrosine kinases in lymphocytes from patients with myeloid malignancies. //Br. J. Haematol.-1998.-V. 100.-P.784-789.

115. Buggins A.G., Lea N., Gaken J., Darling D., Farzaneh F., Mufti G.J., Hirst W.J. Effect of costimulation and the microenvironment on antigen presentation by leukemic cells. //Blood.-1999.-V. 94.-P.3479-3487.

116. Burkly L.C., Lo D., Kanagawa O., Brinster R.L., Flavell R.A. T-cell tolerance by clonal energy in transgenic mice with nonlymphoid expression of MHC class HI-E. // Nature.-1989.-V. 342.-P.564-566.

117. Cabrera T., Collado A., Fernandez M.A., Ferron A., Sancho J., Ruiz-Cabello F., Garrido F. High frequency of altered HLA class I phenotypes in invasive colorectal carcinomas. // Tissue Antigens.-1998.-V. 52.-P.114-117.

118. Cabrera T., Fernandez M.A., Sierra A., Garrido A., Herruzo A., Escobedo A., Fabra A., Garrido F. High frequency of altered HLA class I phenotypes in invasive breast carcinomas. // Hum. Immunol.-1996.-V. 50.-P.127-134.

119. Cantrell D. T cell antigen receptor signal transduction pathways. // Ann. Rev. Immunol.-l996.-V. 14.-P.259-274.

120. Carter L.L., Zhang X., Dubey C., Rogers P., Tsui L., Swain S.L. Regulation of T cell subsets from naive to memory. // J. Immunother.-1998.-V. 21.-P.181-187.

121. Castellani P., Dorcaratto A., Siri A., Zardi L., Viale G.L. Tenascin distribution in human brain tumours. // Acta Neurochir.-l995.-V. 136.-P.44-48.

122. Chai J-G., Vendetti S., Amofah E., Dyson J., Lechler R. CD152 ligation by CD80 on T cells is required for the induction of unresponsiveness by costimulation-deficient antigen presentation. // J. Immunol.-2000.-V. 165.-P.3037-3042.

123. Chai J-G., Vendetti S., Bartok I. Critical role of costimulation in the activation of naive antigen-specific TCR transgenic CD8+ T cells in vitro. // J. Immunol.-l 999.-V. 163 .-P. 1298-1305.

124. Chan V.W., Kothakota S., Rohan M.C., Panganiban-Lustan L., Gardner J.P., Wachowicz M.S., Winter J.A., Williams L.T. Secondary lymphoid-tissue chemokine (SLC) is chemotactic for mature dendritic cells. // Blood.-1999.-V. 93.-P.3610-3617.

125. Chang M.J., Modzelewski R.A., Russell D.M., Johnson C.S. Interleukin 1 alpha and gamma-interferon induction of nitric oxide production from murine tumor-derived endothelial cells. // Cancer Res.-1996.-V. 56, № 4,-P.886-891.

126. Chaux P., Favre N., Martin M., Martin F. Tumor-infiltrating dendritic cells are defective in their antigen-presenting function and inducible B7 expression in rats. //Int. J. Cancer.-1997.-V. 72.-P.619-627.

127. Chaux P., Moutet M., Faivre J., Martin F., Martin M. Inflammatory cells infiltrating human colorectal carcinomas express HLA class II but not B7-1 and B7-2 costimulatory molecules of the T-cell activation. // Lab. Invest.-1996.-V. 74.-P.975-981.

128. Cheever M.A., Disis M.L., Bernhard H., Gralow J.R., Hand S.L., Huseby E.S., Qin H.L., Takahashi M., Chen W. Immunity to oncogenic proteins. // Immunol. Rev.-1995.-V. 145.-P.33-44.

129. Chen L., McGowan P., Ashe S. Tumor immunogenicity determines the effect of B7 costimulation on T cell-mediated tumor immunity. // J. Exp. Med.-1994.-V. 179.-P.523-532.

130. Chen Q., Daniel V., Malier D.W., Hersey P. Production of IL-10 by melanoma cells: examination of its role in immunosuppression mediated by melanoma. //Int. J. Cancer.-1994.-V. 56.-P.755-761.

131. Chen Y.-L., Chen, S.-H., Wang, J.-Y., Yang, B.-C. Fas ligand on tumor cells mediates inactivation of neutrophils. II J. Immunol.-2003.-V. 171.-P. 11831191.

132. Cheng X., Lopez D. M. CD4+, but not CD8+, T cells from mammary tumor-bearing mice have a down-regulated production of IFN-y: role of phosphatidyl serine. // J. Immunol.-1998.-V. 160.-P.2735-2741.

133. Cher D.J, Mosmann T.R. Two types of murine helper T cell clone. II. Delayed-type hypersensitivity is mediated by TH1 clones. // J. Immunol.-1987.-V. 138.-P.3688-3694.

134. Chhatwal V.J, Ngoi S.S., Chan S.T, Chia Y.W, Moochhala S.M. Aberrant expression of nitric oxide synthase in human polyps, neoplastic colonic mucosa and surrounding peritumoral normal mucosa. // Cancinogenesis.-1994.-V. 15.-P.2081-2085.

135. Chin K, Kurashima Y, Ogura T, Tajiri H, Yoshida S, Esumi H. Induction of vascular endothelial growth factor by nitric oxide in human glioblastoma and hepatocellular carcinoma cells. // Oncogene.-1997.-V. 15,-P.437-442.

136. Choi K.L, Maier T, Holda J.H, Claman H.N. Suppression of cytotoxic T-ceII generation by natural suppressor cells from mice with GVHD is partially reversed by indomethacin. // Cell. Immunol.-1988.-V. 112.-P.271-278.

137. Chow C.W, Dong C, Flavell R.A, Davis R.J. c-Jun NH2-terminal kinase inhibits targeting of the protein phosphatase calcineurin to NFATcl. // Mol. Cell Biol.-2000.-V. 20.-P5227-5233.

138. Christopherson K, Hromas R. Chemokine regulation of normal and pathologic immune responses. // Stem cells.-2001.-V. 19, № 5.-P.388-396.

139. Cipone G.M., Festuccia C., Cironi L., Cavallo G., Chessa M.A., Pensa V., Tubaro E., Santoni A. Induction of the nitric oxide-synthesizing pathway in fresh and interleukin 2-cultured rat natural killer cells. // Cell. Immunol.-1994.-V. 157.-P.181-194.

140. Clark D.A., Slapsys R., Croy B.A., Kroek J., Rossant J. Local active suppression cells in the decidua. // Am. J. Reprod. Immunol.-1984.-V. 5.-P.78-83.

141. Cobbs C.S., Brenman J.E., Aldape K.D., Bredt D.S. Israel M.A. Expression of nitric oxide synthase in human central nervous system tumors. / Cancer Res.-1995.-V. 55.-P.727-730.

142. Collins C.E., Quaggiotto P., Wood L„ O'Loughlin E.V^ Jienry R.L. Garg M.L. Elevated plasma levels of F2 isoprostane in cystic fibrosis. HI " 1999.-V. 34.-P.551-556.

143. Cooper M.A., Feliniger T.A., Caligiuri M.A. The biology of hur u: natural killer-cell subsets. // Trends Immunol.-2001.-V. 22.-P.633-640.

144. Correa M.R., Ochoa A.C., Ghosh P., Mizoguchi H., Harvey L., Longo D.L. Sequential development of structural and functional alterations in T cells from tumor-bearing mice. //J. Immunol.-1997.-V. 158.-P.5292-5299.

145. Cortesina G., Sacchi M., Galeazzi E., De Stefani A. Immunology of head and neck cancer: perspectives. // Head Neck.-1993.-V. 15.-P.74-77.

146. Coulie P. Human tumour antigens recognized by T cell: new perspectives for anti-cancer vaccines. // Mol. Med. Today.-1997.-V. 3.-P.261-268.

147. Coyle A.J., Gutierrez-Ramos J-C. The expanding B7 superfamily: increasing complexity in costimulatory signals regulating T cell function. //Nat. Immunol.-200l.-V. 2.-P.203-209.

148. Crabtree G.R. Generic signals and specific outcomes: signaling through Ca2+, calcineurin, andNF-AT. // Cell.-1999.-V. 96.-P.611-617.

149. Crossin K.L. Tenascin: a multifunctional extracellular matrix protein„ -zîricted distribution in development and disease. // J. Cell. Biochem.1996.-V. 61 .-P.592-598.

150. Cui S., Reichner J.S., Mateo R.B., Albina J.E. Activated murine macrophages induce apoptosis in tumor cells through nitric oxidedependent or -independent mechanisms. //Cancer Res.-l994.-V. 54.-P.2462-2467

151. Cukrova V., R. Neuwirtova, J. Cermak, V. Malaskova, J. Neuwirt. Leukocyte-derived inhibitory activity in patients with myelodysplastic syndrome. //Blut.-1987.-V. 55.-P. 165-169.

152. Curley S.A., Roh M.S., Feig B., Oyedeji C., Kleinerman E.S., Klostergaard J. Mechanisms of Kupffer cell cytotoxicity in vitro against thesyngeneic murine colon adenocarcinoma line MCA26. // J.Leukoc. Biol.-1993.-V. 53.-P.715-721.

153. Deeths M.J., Kedl R.M., Mescher M.F. CD8+ T cells become nonresponsive (anergic) following activation in the presence of costimulation. // J. Immunol.-1999.-V. 163.-P.102-110.

154. Denissenko M.F., Pao A., Tang M., Pfeifer G. P. Preferential formation of benzoa.pyrene adducts at lung cancer mutational hotspots in P53. // Science (Washington DC).-1996.-V. 274.-P.430-432.

155. Deruysscher D., Sobis H., Vandeputte M., Waer M. A subset of asialo GM1+ cells play a protective role in the occurrence of graft-versus-host disease in mice. // J. Immun.-1991.-V. 146, № 12.-P.4065-4070.

156. Dinapoli M.R., Calderon C.L., Lopez D.M. The altered tumoricidal capacity of macrophages isolated from tumor-bearing mice is related to reduce expression of the inducible nitric oxide synthase gene. // J. Exp. Med.-1996.-V. 183.-P.1323-1329.

157. Dolmetsch R.E., Lewis R.S., Goodnow C.C., Healy J.I. Differential activation of transcription factors induced by Ca2+ response amplitude and duration. // Nature.-1997.-V. 386.-P.855-860.

158. Dolmetsch R.E., Xu K., Lewis R.S. Calcium oscillations increase the efficiency and specificity of gene expression. // Nature.-1998.-V. 392.-P.933-938.

159. Dong Z., Staroselsky A.H., Qi X., Xie K., Fidler I.J. Inverse correlation between expression of inducible nitric oxide synthase activity and production of metastasis in K-1735 murine melanoma cells. // Cancer Res.-1994.-V. 54,-P.789-793.

160. Doyle M.P., Hoekstra J.W. Oxidation of nitrogen oxides by bound dioxygen in hemoproteins. //J. Inorg. Biochem.-1981.-V. 14, № 14.-P.351-358.

161. Dyall R., Bowne W.B., Weber L.W., LeMaoult J., Szabo P., Moroi Y., Piskun G., Lewis J.J., Houghton A.N., Nikolic-Zugic J. Heteroclitic immunization induces tumor immunity. // J. Exp. Med.-1998.-V. 188.-P.1553-1559.

162. Ebert E.C., Roberts A.J., Devereux D., Nagase H. Selective immunosuppressive action of a cofactor produced by colon cancer cells. // Cancer Res.-1990.-V. 50.-P.6158-6161.

163. Elgert K.D., Alleva D.G., Mullins D.W. Tumor-induced immune dysfunction: the macrophage connection. // J. Leukocyte Biol.-1998.-V. 64.-P.275-279.

164. Elliott L.H., Brooks W.H., Roszman T.L. Cytokinetic basis for the impaired activation of lymphocytes from patients with primary intracranial tumors. //J. Immunol.-1984.-V. 132.-P.1208-1215.

165. Esche C., Lokshin A., Shurin G.V., Gastman B.R., Rabinowich TI., Watkins S.C., Lotze M.T., Shurin M.R. Tumor's other immune targets: dendritic cells. // J. Leukocyte Biol.-1999.-V. 66.-P.336-344.

166. Evans R. Macrophages in syngeneic animal tumors. // Transplantation. -1972.-V. 14.-P.468-473.

167. Farace F., Angevin E., Vanderplancke J., Escudier B., Triebel F. The decreased expression of CD3 zeta chains in cancer patients is not reversed by IL-2 administration. //Int. J. Cancer.-1994.-V. 59.-P.752-760.

168. Farias-Eisner R., Sherman M.P., Aeberhard E., Chaudhuri G. Nitric oxide is an important mediator for tumoricidal activity in vivo. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1994.-V. 91.-P.9407-9411.

169. Ferrone S., Marineóla F.M. Loss of HLA class I antigens by melanoma cells: molecular mechanisms, functional significance and clinical relevance. // Immunol. Today.-1995.-V. 16.-P.487-494.

170. Field E.H., Becker G.C. Blocking of mixed lymphocyte-reaction by spleen-cells from total lymphoid-irradiated mice involves interruption of the IL-2 pathway. // J. Immunol.-1992.-V. 148, № 2.-P.354-359.

171. Finke J., Ferrone S., Frey A., Mufson A., Ochoa A. Where have all the T cells gone? Mechanisms of immune evasion by tumors. // Immunol. Today.-1999.-V. 20.-P.158-160.

172. Folkman J. Angiogenesis and angiogenesis inhibition: an overview. // EXS.-1997.-V. 79.-P.1-8.

173. Franchi A., Gallo O., Paglierani M., Sardi I., Magnelli L., Masini E., Santucci M. Inducible nitric oxide synthase expression in laryngeal neoplasia: correlation with angiogenesis. //Head Neck.-2002.-V. 24.-P. 16-23.

174. Fukumura D., Yonei Y., Kurose I., Saito H., Ohishi T., Higuchi H., Miura S., Kato S., Kimura H., Ebinuma H., Ishi H. Role in nitric oxide in Kupffer cell-mediated hepatoma cell cytotoxicity in vitro and ex vivo. // Hepatology.-1996.-V. 24.-P.141-149.

175. Gabrilovich D., Ciernik F., Carbone D.P. Dendritic cells in anti-tumor immune responses. I. Defective antigen presentation in tumor-bearing hosts. // Cell. Immunol.-1 996b.-V. 170.-P.101-109.

176. Gabrilovich D.I., Corak J., Ciernik I. F., Kavanaugh D., Carbone D. P. Decreased antigen presentation by dendritic cells in patients with breast cancer. // Clin. Cancer Res.-1997.-V. 3.-P.483-487.

177. Gabrilovich D.I., Velders M.P., Sotomayor E.M., Kast W.M. Mechanism of immune dysfunction in cancer mediated by immature Gr-1+ myeloid cells. // J. Immunol.-2001.-V. 166, № 9.-P.5398-5406.

178. Gajewski T. B7-1 but not B7-2 efficiently costimulates CD8+ T lymphocytes in the P815 tumor system in vitro. // J Immunol.-1996a.-V. 156,-P.465-472.

179. Gajewski T.F., Fallarino F., Uyttenhove C., Boon T. Tumor rejection requires a CTLA4 ligand provided by the host or expressed on the tumor: superiority of B7-1 over B7-2 for active tumor immunization. // J. Immunol.-19966.-V. 156.-P.2909-2915.

180. Gallo O., Masini E., Morbidelli L., Franchi A., Fini-Storchi I., Vergari W.A., Ziche M. Role of nitric oxide in angiogenesis and tumor progression in head and neck cancer. // J. Natl. Cancer Inst.-1998.-V. 90.-P.587-596.

181. Gallo O., Schiavone N., Papucci L., Sardi I., Magnelli L., Franchi A., Masini E., Capaccioli S. Down-regulation of nitric oxide synthase-2 and cyclooxygenase-2 pathways by p53 in squamous cell carcinoma. // Am. J. Pathol.-2003 .-V. 163 .-P.723-732.

182. Ganss R., Hanahan D. Tumor microenvironment can restrict the effectiveness of activated antitumor lymphocytes. // Cancer Res.-1998.-V. 58,-P.4673-4681.

183. Gardner T.E., Naama H., Daly J.M. Peritoneal and splenic macrophage functions in the tumor-bearing host. // J. Surg. Res.-1995.-V. 59.-P.305-310.

184. Geffrottin C., Horak V., Crechet F., Tricaud Y., Lethias C., Vincent-Naulleau S., Vielh P. Opposite regulation of tenascin-C and tenascin-X in MeLiM swine heritable cutaneous malignant melanoma. // Biochim. Biophys. Acta.-2000.-V. 1524.-P. 196-201.

185. Gerondakis S., Grumont R., Rourke I., Grossmann M. The regulation and roles of Rel/NF-icB transcription factors during lymphocyte activation. // Curr. Opin. Immunol.-1998.-V. 10.-P.353-359.

186. Gilmore T.D., Morin P.J. The I-kappaB proteins: members of a multifunctional family. // Trends Genet.-1993.-V. 9.-P.427-431.

187. Gottke M., Chadee K. Exogenous nitric oxide stimulates mucin secretion from LS174T colonic adenocarcinoma cells. // Inflamm. Res.-1996.-V. 45.-P.209-212.

188. Grakoui A., Bromley S.K., Sumen C., Davis M.M., Shaw A.S., Allen P.M., Dustin M.L. The immunological synapse: a molecular machine controlling T cell activation. // Science.-1999.-V. 285.-P.221-228.

189. Green L.C., Wagner D.A., Glogowski J., Skipper P.L., Wishnok J.S., Tannembaum S.R. Analysis of nitrate, nitrite and I5N. nitrate in biological fluids. //Anal. Biochem.-1982.-V. 126.-P.131-143.

190. Greenfield E.A., Howard E.3 Paradis T. B7-2 expressed by T cells does not induce CD28mediated costimulatory activity but retains CTLA4 binding. // J. Immunol. -1997. V. 158.-P.2025-2034.

191. Grégoire M., Garrigue L., Blottière H.M., Denis M.G., Meflah K. Possible involvement of TGF-B1 in the distinct tumorigenic properties of two rat colon carcinoma clones. // Invasion Metastasis.-1992.-V. 12.-P. 185-196.

192. Gunji Y., Hon S., Aoe T., Asano T., Ochiai T., Isona K., Saito T. High frequency of cancer patients with abnormal assembly of the T cell receptor-CD3 complex in peripheral blood T lymphocytes. // Jpn. J. Cancer Res.-1994.-V. 85.-P.1189-1192.

193. Gunn M.D., Kyuwa S., Tam C., Kakiuchi T., Matsuzawa A., Williams L. T., Nakano H. Mice lacking expression of secondary lymphoid organ chemokine have defects in lymphocyte homing and dendritic cell localization. // J. Exp. Med.-1999.-V. 189.-P.451-459.

194. Guo F.H., De Raeve H.R., Rice T.W., Stuehr D.J., Thunnissen F.B., Erzurum S.C. Continuous nitric oxide synthesis by inducible nitric oxide synthase in normal human airway epithelium in vivo. // Proc. Natl Acad. Sci. USA.-1995.-V. 92.-P.7809-7813.

195. Halak B.K, Maguire H.C., Lattime Jr., Lattime E.C. Tumor-induced interleukin-10 inhibits type 1 immune responses directed at a tumor antigen as well as a non-tumor antigen present at the tumor site. // Cancer Res.-1999.-V. 59.-P.911-917.

196. Halwani F., Guttmann R.D., Saintecroix H., Prudhomme G.J. Identification of natural suppressor cells in long-term renal-allograft recipients. // Transplantat.-l992.-V. 54, № 6.-P.973-977.

197. Hao X.P., Pretlow T.G., Rao J.S., Pretlow T.P. Inducible nitric oxide synthase (iNOS) is expressed similarly in multiple aberrant crypt foci and colorectal tumors from the same patients. // Cancer Res.-2001.-V. 61, № 2-P.419-422.

198. Harding F.A., McArthur J.G., Gross J.A., Raulet D.H., Allison J.P. CD28-mediated signaling co-stimulates murine T cells and prevents induction of anergy in T-cell clones. //Nature.-1992.-V. 356.-P.607-611.

199. Harris S.R., Thorgeirsson U.P. Flavone acetic acid stimulates nitric oxide and peroxynitrite production in subcutaneous mouse tumors. // Biochem. Biophys. Res. Commun.-1997.-V. 235, № 3.-P.509-514.

200. Hashimoto F., Inoue K., Ikehara S. Enhancing effects of cyclosporin A hematopoietic progenitors: possible role of CD8+ T cells as negative regulators. //Exp. Hematol.-1994.-V. 22.-P.947-953.

201. Hausmann E., Hao S.Y., Pace J., Parmely M. Transforming growth factor-Bl and gamma-interferon provide opposing signals to lipopolysaccharide-activated mouse macrophage. // Infect. Immun.-1994.-V. 62.-P.3625-3632.

202. Hedrick J.A., Zlotnik A. Identification and characterization of a novel Cchemokine containing six conserved cysteines. // J. Immunol.-1997.-V. 159,-P.1589-1596.

203. Hemesath T.J., Marton L.S., Stefansson K. Inhibition of T cell activation by the extracellular matrix protein tenascin. // J. Immunol.-1994.-V. 152.-P.5199-5207.

204. Hersh E.M., Oppenheim J.J. Impaired in vitro lymphocyte transformation in Hodgkin's disease. // N. Engl. J. Med.-1965.-V. 273.-P.1006-1012.

205. Hertel-Wulff B., Palathumpat V., Schwadron R., Strober S. Prevention of graft-versus-host disease by natural suppressor cells. // Transplant. Proc.-1987.-V. 19.-536-539.

206. Hibbs J.B., Taintor R.R., Vavrin Z., Rachlin E.M. Nitric oxide: a cytotoxic activated macrophage effector molecule. // Biochem. Biophys. Res. Commun.-1988.-V. 157.-P.87-92.

207. Hibbs J.B., Taintor R.R., Vavrin Z: Macrophage cytotoxicity: role for L-arginine deiminase and iminonitrogen oxidation to nitrite. // Science.-1987.-V. 235.-P.473-476.

208. Hibbs J.B., Vavrin Z., Taintor R.R. L-arginine is required for the expression of the activated macrophage effector mechanism causing selective metabolic inhibition in target cells. // J. Immunol.-1987.-V. 138.-P.550-565.

209. Hibino S., Kato K., Kudoh S., Yagita H., Ukumura K. Tenascin suppresses CD3-mediated T cell activation. // Biochem. Biophys. Res. Commun.-1998.-V. 250.-P.119-125.

210. Hiltbold E.M., Vlad A.M., Ciborowski P., Watkins S.C., Finn O J. The mechanism of unresponsiveness to circulating tumor antigen MUC1 is a block in intracellular sorting and processing by dendritic cells. // J. Immunol.-2000.-V. 165.-P.3730-3741.

211. Holda J.H., Maier T., Claman H.N. Evidence that IFN-gamma is responsible for natural suppressor activity in GVHD spleen and normal bone marrow. // Transplant.-1988.-V. 45.-P.772-777.

212. Holda J.H., Maier T., Claman H.N. IL-3, IL-4 and IL-6 enhance IFN-y-dependent bone marrow natural suppressor activity // Cell. Immunol.-1990.-V. 125,- P.459-468.

213. Holda J.H., Maier T., Claman H.N. Natural suppressor activity in graft-vs-host spleen and normal bone marrow is augmented by IL-2 and interferon-y. //J. Immunol.-1986.-V. 137.-P.3538-3543.

214. Holscher M., Givan A. L., Brooks C.G. The effect of transfected MHC class I genes on sensitivity to natural killer cells. // Immunol.-1991.-V. 73.-P.44-49.

215. Hoskin D.W., Bowser D.A., Brookskaiser J.C. Soybean agglutinin-positive natural suppressor cells in mouse bone-marrow inhibit interleukin-2 production and utilization in mixed lymphocyte reaction // J. Leucyte Biol.-1992a.-V. 51, № 6.-P.649-656.

216. Hoskin D.W., Brooks-Kaiser J.C., Kaiser M., Murgita R.A. Reactivity of monoclonal-antibody 1E5.B5 with a novel phenotypic marker expressed on a murine natural suppressor-cell subset // Hybridoma.-19926.-V. 11, № 2.-P.203-215.

217. Hoskin D.W., Hooper D.C., Brooks-ICaiser J.C., Reilly B.D. Specific maternal anti-fetal lymphoproliferative responses and their regulation by natural immunosuppressive factors. //Exp. Immunol.-1989.-V. 76.-P.262-267.

218. Hromas R., Cripe L., Hangoc G. The Exodus subfamily of cc chemokines inhibits the proliferation of chronic myelogenous leukemia progenitors. //Blood.-2000.-V. 95.-P. 1506-1508.

219. Hsieh C.S., E. Macatonia S., O'Garra A., Murphy K. M. // J. Exp. Med. 1995.-V. 181.-P.713-721.

220. Hu D.-E., Dyke S.O.M., Moore A.M., Thomsen L.L., Brindle K.M. Tumor cell-derived nitric oxide is involved in the immune-rejection of an immunogenic murine lymphoma. // Cancer Res.-2004.-V. 64, № 1.-P.152-161.

221. Hu Z.Q., Yamazaki T., Cai Z. Mast cells display natural suppressor activity partially by releasing transforming growth factor-beta. // Immunol.-1994.-V. 82, № 3.-P.482-486.

222. Huang M., Sharma S,, Mao J.T., Dubinett S.M. Non-small cell lung cancer-derived soluble mediators and prostaglandin E2 enhance peripheral blood lymphocyte IL-10 transcription and protein production. // J. Immunol.-1996,-V. 157.-P.5512-5520.

223. Hubbard N.E., Erickson K.L. Role of 59-lipoxygenase metabolites in the activation of peritoneal macrophages for tumoricidal function. // Cell. Immunol. -1995. V. 160.-P. 115-122.

224. Huchet R., Bruleyrosset M., Mathiot C., Grandjon D., Hallepannenko O. Involvement of IFN-gamma and transforming growth-factor-beta in graft-vs-host reaction-associated immunosuppression. // J. Immunol.-1993.-V. 150, № 6.-P.2517-2524.

225. Iida S., Ohshima H., Oguchi S., Hata T., Suzuki H., Kawasaki H., Esumi H. Identification of inducible calmodulin-dependent nitric oxide synthase in the liver of rats. // J. Biol. Chem.-1992.-V. 267.-P.25385-25388.

226. Inge Т.Н., Hoover S.IC., Susskind B.M., Barrett S.IC., Bear H.D. Inhibition of tumor-specific cytotoxic T-lymphocyte responses by transforming growth factor 61. // Cancer. Res.-1992.-V.52.-P.1386-1392.

227. Imamura M., Myazaki Т., Fujimoto H. The activity of suppressor cells in the spleen of murine bone marrow chimeras. // Transplant.-1986.-V. 42, № 5.-P.548-555.

228. Ishida Т., Oyama Т., Carbone D., Gabrilovich D.I. Defective function of Langerhans cells in tumor-bearing animals is the result of defective maturation from hematopoietic progenitors. // J. Immunol.-1998.-V. 161,-P.4842-4848.

229. Ishigami S., Natsugoe S., Tokuda K., Nakajo A., Che X., Iwashige H., Aridome K., Hokita S., Aikou T. Prognostic value of intratumoral natural killer cells in gastric carcinoma. // Cancer (Phila.).-2000.-V. 88.-P.577-583.

230. Jadus M.R., Parkman R. The selective growth of murine newborn-derived suppressor cells and their probable mode of action. // J. Immunol.-1986,-V. 136.-P.783-792.

231. Jain J., Loh C., Rao A. Transcriptional regulation of the IL-2 gene. // Curr. Opin. Immunol.-1995.-V. 7.-P.333-341.

232. Jaiswal M., LaRusso N.F., Burgart L.J., Gores G.J. Inflammatory Cytokines induce DNA damage and inhibit repair in cholangiocarcinoma cells bya nitric oxide-dependent mechanism. I I Cancer Res.-2000.-V. 60.-P. 184-190.

233. Jansson O.T., Morcos E., Brundin L., Bergerheim U.S., Adolfsson J., Wiklund N.P. Nitric oxide synthase activity in human renal cell carcinoma. // J. Urol.-1998.-V. 160, № 2.-P.556-560.

234. Jenkins D.C., Charles I.G., Baylis S.A., Lelchuk R., Radomski M.W., Moncada S. Human colon cancer cell lines show a diverse pattern of nitric oxide synthase gene expression and nitric oxide generation. // Br. J. Cancer.-1994.-V. 70.-P.847-849.

235. Jenkins D.C., Charles I.G., Thomsen L.L., Moss D.W., Holmes L.S., Baylis S.A., Rhodes P., Westmore K., Emson P.C., Moncada S. Roles of nitric oxide in tumor growth. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1995.-V. 92.-P.4392-4396.

236. Jenkins M.K. The role of cell division in the induction of clonal anergy. // Immunol. Today.-1992.-V. 13.-P.69-73.

237. Jin Y., Heck D.E., DeGeorge G., Tian Y., Laskin J.D. 5-Fluorouracil suppresses nitric oxide biosynthesis in colon carcinoma cells. //Cancer Res.-1996.-V. 56.-P.1978-1982.

238. Jones P.L. The tenascin family of ECM glycoproteins: structure, function, and regulation during embryonic development and tissue remodeling. // Dev. Dynam.-2000.-V. 218.-P.235-241.

239. Jovasevic V.M., Gorelik L., Bluestone J.A., Mokyr M.B. Importance of IL-10 for CTLA-4-mediated inhibition of tumor-eradicating immunity. // J. Immunol. -2004. -V. 172, № 3.-P. 1449-1454.

240. Jung S., Littman D.R. Chemokine receptors in lymphoid organ homeostasis. // Curr. Opin. Immunol.-1999.-V. 11.-P.319-327.

241. Kamo I., Patel C., Kateley J., Friedman H. Immunosuppression induced in vitro by mastocytoma tumor cells and cell-free extracts. // J. Immunol.-1975.-V. 114.-P.1749-1756.

242. Kawakami Y., Rosenberg S.A. Human tumor antigens recognized by T-cells. // Immunol. Res.-1997.-V. 16.-P.313-339.

243. Kawamori T., Takahashi M., Watanabe K., Ohta T., Nakatsuki S., Sugimura T., Wakabayashi K. Suppression of azoxymethane-induced colonic aberrant crypt foci by a nitric oxide synthase inhibitor. // Cancer Lett.-2000.-V. 148.-P.33-37.

244. Kennedy J.S., Raab M., Rudd C.E. Signaling scaffolds in immune cells. // Cell Calcium.-1999.-V. 26.-P.227-232.

245. Kiertscher S.M., Luo J., Dubinett S.M., Roth M.D. Tumors promote altered maturation and early apoptosis of monocyte-derived dendritic cells. // J. Immunol.-2000.-V. 164 .-P. 1269-1274.

246. Kim P.K., Zamora R., Petrosko P., Billiar T.R. The regulatory role of nitric oxide in apoptosis. // Int. lmmunopharmacol.-2001.-V. 1.-P.1421-1441.

247. Kim Y.M., Bombeck C.A., Billiar T.R. Nitric oxide as a bifunctional regulator of apoptosis. // Circ. Res.-1999.-V. 84.-P.253-256.

248. Kisley L.R., Barrett B.S., Bauer A.K., Dwyer-Nield L.D., Barthel B., Meyer A.M., Thompson D.C., Malkinson A.M. Genetic ablation of inducible nitric oxide synthase decreases mouse lung tumorigenesis. // Cancer Res.-2002,-V. 62, № 23.-P.6850-6856.

249. Kitajima L, Kawahara K., Nakajima T., Soejima Y., Matsuyama T., Maruyama I. Nitric oxide-mediated apoptosis in murine mastocytoma. // Biochem. Biophys. Res. Commun.-1994.-V. 204.-P.244-251.

250. Klimpel G.R., Annable C.R., Cleveland M.G., Jerrells T.R., Patterson J.S. Immunosuppression and lymphoid hypoplasia associated with chronic graft versus host disease is dependent upon IFN-gamma production. // J. Immunol.-1990.-V. 144, № 1.-P.84-93.

251. Kluck R.M., Bossy-Wetzel E., Green D.R., Newmeyer D.D. The release of cytochrome c from mitochondria: a primary site for Bcl-2 regulation of apoptosis. // Science (Wash. DC).-1997.-V. 275.-P.1132-1136.

252. Kobayashi M., Kobayashi H., Richard B., Suzuki P., Suzuki F. Pathogenic role of Th2 cells and their cytokine products on the pulmonary metastasis of murine B16 melanoma. // J. Immunol.-1998.-V. 160.-P.5869-5873.

253. Kojima M., Morisaki T., Tsukahara Y., Uchiyama A., Matsunari Y., Mibu R., Tanaka M. Nitric oxide synthase expression and nitric oxide production in human colon carcinoma tissue. // J. Surg. Oncol.-1999.-V. 70.-P.222-229.

254. Kong L., Dunn G.D., Keefer L.K., Korthuis R.J. Nitric oxide reduces tumor cell adhesion to isolated rat postcapillary venules. // Clin. Exp. Metastasis.-l 996.-V. 14.-R335-343.

255. Koyama Y., Kusubata M., Yoshiki A., Hiraiwa N., Ohashi T., Irie S., Kusakabe M. Effect of tenascin-C deficiency on chemically induced dermatitis in the mouse. // J. Invest. Dermatol.-1998.-V. 111.-P.930-939.

256. Kripkle M.L. Immunologic mechanisms in UV radiation carcinogenesis. //Adv. CancerRes.-l981,-V. 34.-P.69-74.

257. Kurt R.A., Urba W.J., Smith J.W., Schoof D.D. Peripheral T lymphocytes from women with breast cancer exhibit abnormal protein expression of several signaling molecules. // Int. J. Cancer.-1998.-V. 78.-P.16-22.

258. Kusmartsev S., Cheng F., Yu B., Nefedova Y., Sotomayor E., Lush R., Gabrilovich D. AU-trans-retinoic acid eliminates immature myeloid cells from tumor-bearing mice and improves the effect of vaccination. // Cancer Res.-2003a.-V. 63.-P.4441^4449.

259. Kusmartsev S., Gabrilovich D.I. Inhibition of myeloid cell differentiation in cancer: the role of reactive oxygen species. // J. Leukoc. Biol.-20036.-V. 74.-P. 186-196.

260. Kusmartsev S.A., Kusmartseva I.N., Afanasyev S.G., Tcherdyntseva N.B., Vasilyev N.V. Functional characteristics of bone marrow immune-suppressive cells in patients with gastric cancer. // Int. J. Immunopathol. Pharmacol.-1998.-V. 11.-P.171-178.

261. Kusmartsev S.A., Li Y., Chen S. Gr-1+ myeloid cells derived from tumor-bearing mice inhibit primary T cell activation induced through CD3/CD28 costimulation. // J. Immunol.-2000.-V. 165.-P.779-785.

262. Kusmartsev S.A., Zemlyanskaya N.V., Belsky Y.P. Characteristics of suppressor factor produced by bone marrow cells after DT treatment. // Immunol.-1995.-V. 86.-Suppl.-P. 126.

263. Kwon E.D., Hurwitz A.A., Foster B. Manipulation of T cell costimulatory and inhibitory signals for immunotherapy of prostate cancer. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1997.-V. 94.-P.8099-8103.

264. LaBelle J.L., Hanke C.A., Blazar B.R., Truitt R.L. Negative effect of CTLA-4 on induction of T-cell immunity in vivo to B7-1+, but not B7-2+, murine myelogenous leukemia. // Blood.-2002.-V. 99, № 6.-P.2146-2153.

265. Ladisch S., Gillard B., Wong C., Ulsh L. Shedding and immunoregulatory activity of YAC-1 lymphoma cell gangliosides. // Cancer Res.-1983.-V. 43.-P.3808-3815.

266. Lagadec P., Reveneau S., Lejeune P., Pinard D., Borman T., Bauer J., Jeannin J.F. Immunomodulator OM 163-induced reversal of tumor-mediated immunosuppression and down-regulation of TGF-B1 in vivo. // J. Pharmacol. Exp. Ther.-1996.-V. 278.-P.926-933.

267. Lahm H., Odartchenko N. Role of transforming growth factor-13 in colo-rectal cancer. // Growth Factors.-1993.-V. 9.-P.1-9.

268. Lala P.K., Kennedy T.G., Parhar R.S. Suppression of lymphocyte alloreactivity by early gestational human decidua. II. Characterization of the suppressor mechanisms // Cell. Immunol.-1988.-V. 116.-P.411-422.

269. Lambert L.E., Paulnock D.M. Modulation of macrophage function by gamma-irradiation. Acquisition of the primed cell intermediate stage of the macrophage tumoricidal activation pathway. // J. Immunol.-1987.-V. 139.-P.2834-2841.

270. Lau Y.T., Ma W.C. Nitric oxide inhibits migration of cultured endothelial cells. //Biochem. Biophys. Res. Commun.-1996,-V. 221.-P.670-674.

271. Leach D.R., Krummel M.F., Allison J.P. Enhancement of antitumor immunity by CTLA-4 blockade. // Science.-1996.-V. 271.-P.1734-1736.

272. Lee H.M., Timme T.L., Thompson T.C. Resistance to lysis by cytotoxic T cells: a dominant effect in metastatic mouse prostate cancer cells. // Cancer. Res.-2000.-V.60.-P. 1927-1933.

273. Lee J.W., Beckham C., Michel B.R., Rosen H., Deeg H.J. HLA-DR-Mediated Signals for Hematopoiesis and Induction of Apoptosis Involve But Are Not Limited to a Nitric Oxide Pathway. // Blood.-1997.-V.90.-N.l.-P.217-225.

274. Lee S.H., Jang J.J., Lee J.Y., Kim S.Y., Park W.S., Kim C.S., Kim S.H., Yoo N.J. Immunohistochemical analysis of Fas ligand expression in sarcomas. Sarcomas express high level of FasL in vivo. // APMIS.-1998.-V. 106.-P.1035-1040.

275. Lejeune P., Lagade C.P., Onier N., Pinard D., Ohshima H., Jeannin J.F. Nitric oxide involvement in tumor-induced immunosuppression. //J. Immunol.-1994.-V. 152, № 10.-P.5077-5083.

276. Li L.M., Kilbourn R.G., Adams J., Fidler I.J. Role of nitric oxide in lysis of tumor cells by cytokine-activated endothelial cells. // Cancer Res.-1991.-V. 51.-P.2531-2535.

277. Liebermann D.A., Hoffman B., Steinman R.A. Molecular controls of growth arrest and apoptosis: p53-dependent and independent pathways. // Oncogene.-1995.-V. 11 .-P. 199-210.

278. Lieubeau B., Garrigue L., Barbieux I., Meflah K., Grégoire M. The role of transforming growth factor 131 in the fibroblastic reaction associated with rat colorectal tumor development. // Cancer Res.-1994.-V. 54.-P.6526-6532.

279. Liu Q, Chan S.T.F, Mahendran R. Nitric oxide induces cyclooxygenase expression and inhibits cell growth in colon cancer cell lines. // Carcinogenesis.-2003.-V. 24, № 4.-P.637-642.

280. Liu R, Oberley T.D, Oberley L.W. Effects of endothelial nitric oxide synthase gene expression on the tumor biology of human oral carcinoma SCC-25 cells. // Cell Growth. Differ.-1998.-V. 9, № 3.-P.239-246.

281. Ljunggren H.G, Karre K. In search of the "missing self': MHC molecules and NK cell recognition. // Immunol. Today.- 1990.-V. 11 .-P.237-244.

282. Locati M, Murphy P.M. Chemokines and chemokine receptors: biology and clinical relevance in inflammation and AIDS. // Annu. Rev. Med.1999.-V. 50.-P.425-440.

283. Lotze M, Jaffe R. Cancer. Dendritic Cells: Biology and Clinical Application. San Diego: Academic Press, 1999.-P.325.-338.

284. Mackie E.J, Halfter W, Liverani D. Induction of tenascin in healing wounds. //J. Cell Biol.-1988.-V. 107.-P.2757-2764.

285. Maeda H., Noguchi Y., Sato K., Akaike T. Enhanced vascular permeability in solid tumor is mediated by nitric oxide and inhibited by both new nitric oxide scavenger and nitric oxide synthase inhibitor. // Jpn. J. Cancer Res.-1994a.-V. 85.-P.331-334.

286. Maeda H., Shiraishi A. TGF-beta contributes to the shift toward Th2-type responses through direct and lL-10-mediated pathways in tumor-bearing mice. // J. Immunol.-1996.-V. 156, № 1.-P.73-78.

287. Maeda H., Tsuru S., Shiraishi A. Improvement of macrophage dysfunction by administration of anti-transforming growth factor-b antibody in EL4-bearing hosts. // Jpn. J. Cancer Res.-19946.-V. 85.-P.1137-1143.

288. Maier T., Holda J.H. Natural suppressor (NS) activity from murine neonatal spleen is responsive to INF- y. // J. Immunol.-1987.-V. 134, № 12,-P.4075-4084.

289. Maier T., Holda J.H., Claman H.N. Murine natural suppressor cells in the newborn, in bone marrow, and after cyclophosphamide. Genetic variations and dependence on IFN-y. // JImmunol.-1989.-V. 143.-P.491-498.

290. Maier T., Holda J.H., Claman H.N. Synergism between T and non-T cells in in vivo induction and in vitro expression of graft-vs-host desease-induced natural suppressor cells. // J. Exp. Med.-1985.-V. 162.-P.979-992.

291. Manthey C.L., Perera P.-Y., Salkowski C.A., Vogel S.N. Taxol provides a second signal for murine macrophage tumoricidal activity. // J. Immunol. -1994. V. 152.-P.825-831.

292. Mantovani A. Tumor-associated macrophages in neoplastic progression: a paradigm for the in vivo function of chemokines. // Lab. Invest.-1994.-V. 71.-P.5-16.

293. Mantovani A., Bottazzi B., Colotta F., Sozzani S., Ruco L. The origin and function of macrophages. // Immunol. Today.-1992.-V. 13.-P.265-270.

294. Martin J.H., Alalami O., van den Berg H.W. Reduced expression of endothelial and inducible nitric oxide synthase in a human breast cancer cell line which has acquired estrogen independence. // Cancer Lett.-1999.-V. 144, № 1,-P.65-74.

295. Martin-Fontecha A., Cavallo F., Bellone M. Heterogeneous effects of B7-1 and B7-2 in the induction of both protective and therapeutic anti-tumor immunity against different mouse tumors. // Eur. J. Immunol.-1996.-V. 26,-P.1851-1859.

296. Mazzoni A., Bronte V., Visintin A., Spitzer J.H., Apolloni E., Serafini P., Zanovello P., Segal D.M. Myeloid suppressor lines inhibit T cell responses by an NO-dependent mechanism. // J. Immunol.-2002.-V. 168.-P. 689-695.

297. McAdam A.J., Schweitzer A.N., Sharpe A.H. The role of B7 co-stimulation in activation and differentiation of CD4+ and CD8+ T cells. // Immunol. Rev.-1998.-V. 165.-P.231-247.

298. McGany R.C., Singhal S.K. The immunoregulatoiy role of bone marrow, m. Further characterization of the suppressor cell and its mode of action. // Immunology.-1982.-V. 46, № 2.-P.387-394.

299. McKallip R., Li R., Ladisch S. Tumor gangliosides inhibit the tumor-specific immune response. // J. Immunol.-1999.-V. 163.-P.3718-3726.

300. Meeta J., LaRusso N.F., Gores G.J. Nitric oxide in gastrointestinal epithelial cell carcinogenesis: linking inflammation to oncogenesis. //Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol.-2001,-V. 281.-P.626-634.

301. Meltzer M.S., Benjamin W.R., Farrar J.J. Macrophage activation for tumor cytotoxicity: induction of macrophage tumoricidal activity by lymphokines from EL-4, a continuous T cell line. // J. lmmunol.-1982.-V. 129,-P.2802-2807.

302. Menegazzi R., Cramer R., Patriarca P., Scheurich P., Dri P. Evidence that tumor necrosis factor a (TNF)-induced activation of neutrophil respiratory burst on biologic surfaces is mediated by the p55 TNF receptor. // BIood.-1994.-V. 84.-P.287-293.

303. Messmer U. K., Ankarcrona M., Nicotera P., Brune B. p53 expression in nitric oxide-induced apoptosis. FEBS Lett. // 1994.-V.355.-P.23-26

304. Messmer U.K., Brune B. Nitric oxide-induced apoptosis: p53-dependent and p53-independent signalling pathways. //Biochcm. j.-1996.-v. 319.-p.299-305.

305. Meyer G.C., Moebius U., Rudy W. Induction of antigen-specific T cells by allogeneic CD80 transfected human carcinoma cells. // Adv Exp Biol Med.-1998.-V. 451.-P. 195-202.

306. Michelson J.D., Horowitz M.C. The interaction between bone marrow immune suppression and hematopoiesis. // Exp. Hematol.-1988.-V. 16.-P.815-819.

307. Mickel R.A., Kessler D.J., Taylor J.M.G., Lichtenstein A. Natural ldller cell cytotoxicity in the peripheral blood, cervical lymph nodes, and tumor of head and neck cancer patients. // Cancer Res.-1988.-V. 48.-P.5017-5022.

308. Miescher S., Stoeck M., Qiao L., Barras C., Barrelet L., von Fliedner V. Preferential clonogenic deficit of CD8-positive T-lymphocytes infiltrating human solid tumors. // Cancer Res.-1988a.-V. 48.-P.6992-6999.

309. Mills C.D. Molecular basis of «suppressor» macrophages. Arginine metabolism via the nitric oxide synthetase pathway. // J. Immunol.-199l.-V. 146.-P.2719-2723.

310. Mitsiades N., Poulaki V., Kotoula V., Leone A., Tsokos M. Fas ligand is present in tumors of the Ewing's sarcoma family and is cleaved into a soluble form by a metalloproteinase. // Am. J. Pathol.- 1998.-V. 153.-P.1947-1956.

311. Mizoguchi H., O'Shea J.J., Longo D.L., Loeffler C.M., McVicar D.W., Ochoa A.C. Alterations in signal transduction molecules in T lymphocytes from tumor-bearing mice. // Science.-1992.-V. 258.-P.1795-1798.

312. Mokyr M., Kalinichenko T.V., Gorelik L., Blustone J.A. Importance of the B7-2 molecule for low dose melphalan-induced acquisition of tumor-eradicating immunity by mice bearing a large MOPC-315 tumor. // J Immunol.-1998.-V. 160.-P. 1866-1874.

313. Moncada S., Palmer R.M.J., Higgs E.A. Nitric oxide: physiology, pathophysiology, and pharmacology. // Pharmacol. Rev.-1991.-V. 43.-P. 109142.

314. Monks C.R., Freiberg B.A., Kupfer H., Sciaky N., Kupfer A. Three-dimensional segregation of supramolecular activation clusters in T cells. // Nature.-1998.-V. 395.-P.82-86.

315. Moochhala S., Chhatwal V.J., Chan S.T., Ngoi S.S., Chia Y.W., Rauff A. Nitric oxide synthase activity and expression in human colorectal cancer. // Carcinogenesis.-l 996.-V. 17.-P.1171-1174.

316. Moore S.C., Shaw M.A., Soderberg L.S.F. Transforming growth-factor-beta is the major mediator of natural suppressor cells derived from normal bone-marrow. // J. Leuk. Biol.-1992 a.-V. 52.-P.596-601.

317. Moore S.C., Theus S.A., Barnett J.B., Soderberg L.S.F. Bone-marrow natural suppressor cells inhibit the growth of myeloid progenitor cells and the synthesis of colony stimulating factors. // Exp. Hematol-1992 6.-V. 20, № 10.-P.1178-1183.

318. Moore S.C., Theus S.A., Barnett J.B., Soderberg L.S.F. Cytokine regulation of bone marrow natural suppressor cell activity in the suppression of lymphocyte function. // Cell. Immunol.-1992 b.-V. 141.-P.398-408.

319. Morbidelli L., Chang C.H., Douglas J.G., Granger H.J., Ledda F., Ziche M. Nitric oxide mediates mitogenic effect of VEGF on coronary venular endothelium. // Am. J. Physiol.-1996.-V. 270.-P.411-415.

320. Mordan L.J., Burnett T.S., Zhang L.X., Tom J., Cooney R. V. Inhibitors of endogenous nitrogen oxide formation block the promotion of neoplastic transformation in C3H 10T1/2 fibroblasts. // Carcinogenesis.-l993.-V. 14.-P.1555-1559.

321. Moretta L., Ciccone E., Moretta A., Hóglund P., Óhlén C., Karre K. Allorecognition by NK cells: nonself or no self? // Immunol. Today.-1992.-V. 13.-P.300-306.

322. Mori T., Guo M.W., Li X., Xu J.P., Mori E. Isolation and identification of apoptosis inducing nucleosides from CD57(+)HLA-DRbright natural suppressor cell line. //Biochem. Biophys. Res. Commun.-1998.-V. 251.-P.416-4122.

323. Morrow J.D., Roberts L.J. The isoprostanes: unique bioactive products of lipid peroxidation. //Prog. Lipid Res.-l 997.-V. 36.-P.1-21.

324. Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. / J.Immunol.Methods.-1983.-V. 65.-P.55-63.

325. Mosmann T.R., Cherwinski H., Bond M.W., Giedlin M.A., Coffman R.L. Two types of murine helper T cell clone. I. Definition according to profiles of lymphokine activities and secreted proteins. // J. Immunol.-1986.-V. 136, № 7.-P.2348-2357.

326. Moy P.M., Holmes E.C., Golub S.H. Depression of natural killer cytotoxic activity in lymphocytes infiltrating human pulmonary tumors. // Cancer Research.-1985.-V. 45, № 1.-P.57-60.

327. Mueller D.L., Jenkins M.K., Schwartz R.H. Clonal expansion versus functional clonal inactivation: a costimulatory signalling pathway determines the outcome of T cell antigen receptor occupancy. // Ann. Rev. Immunol.-1989.-V. 7.-P.445-448.

328. Mukherji B., Chakraborty N.G. Immunobiology and immunotherapy of melanoma. //Curr. Opin. Oncol.-1995.-V. 7.-P.175-184.

329. Mulder W.M.C., Bloemena E., Stukart M.J., Kummer J.A., Wagstaff J., Scheper R.J. T cell receptor-zeta and granzyme B expression in mononuclear cell infiltrates in colon carcinoma. // Gut.-1997.-V. 40.-P.153-158.

330. Muller A., Homey B., Soto H. Involvement of chemokine receptors in breast cancer metastasis. //Nature.-2001.-V. 410.-P.50-56.

331. Mullins D.W., Burger C.J., Elgert K.D. Paclitaxel enhances macrophage IL-12 production in tumor-bearing hosts through nitric oxide. // J. Immunol.-1999,-V. 162.-P.6811-6818.

332. Mullins D.W., Burger C.J., Elgert K.D. Tumor growth modulates macrophage nitric oxide production following paclitaxel administration. // Int. J. Immunopharmacol.-1998.-V. 20.-P.537-541.

333. Mullins D.W., Martins R.S., Burger C.J., Elgert K.D. Tumor cell-derived TGF-P and IL-10 dysregulate paclitaxel-induced macrophage activation. // J. Leukoc. Biol.-2001.-V. 69, № 1.-P.129-137.

334. Mullins D.W., Martins R.S., Elgert K.D. Tumor-derived cytokines dysregulate macrophage interferon-y responsiveness and interferon regulatory factor-8 expression. //Exper. Biol. Med.-2003.-V. 228, № 3.-P.270-277.

335. Mullins D.W., Walker T.M., Burger C.J., Elgert K.D. Taxol-mediated changes in fibrosarcoma-induced immune cell function: modulation of antitumor activities. // Cancer Immunol. Immunother.-1997.-V. 5.-P.20-27.

336. Murata J., Corradin S.B., Janzer R.C., Juillerat-Jeanneret L. Tumor cells suppress cytokine-induced nitric-oxide (NO) production in cerebral endothelial cells. //Int. J. Cancer.-1994.-V. 59.-P.699-705.

337. Murillo-Carretero M., Ruano M.J., Matarredona E.R., Villalobo A., Estrada C. Antiproliferative effect of nitric oxide on epidermal growth factor-responsive human neuroblastoma cells. // J. Neurochemistry.-2002.-V. 83, № 1,-P.119-131.

338. Nagler A., Lanier L.L., Phillips J.H. The effects of IL-4 on human natural killer cells: a potent regulator of IL-2 activation and proliferation. // J. Immunol.-1988.-V. 141.-P.2349-2355.

339. Nakano S., Matsukado K., Black K.L. Increased brain tumor microvessel permeability after intracarotid bradykinin infusion is mediated by nitric oxide. // Cancer Res.-l 996.-V. 56.-P.4027-4031.

340. Nakao N., Hiraiwa N., Yoshiki A., Ike F., Kusakabe M. Tenascin-C promotes healing of Habu-snake venom-induced glomerulonephritis: studies in knockout congenic mice and in culture. // Am. J. Pathol.-1998.-V. 152.-P.1237-1341.

341. Nasrallah A.G., Miale T.D. Decreased natural killer cell activity in children with untreated acute leukemia. // Cancer Res.-1983.-V. 43, № 11.-P.5580-5585.

342. Nathan C., Xie Q. Regulation of biosynthesis of nitric oxide. //J. Biol. Chem.-1994.-V. 269.-P. 13725-13728.

343. Nicoletti G., Brambella P., De Govanni C., Nanni P. Colony-stimulating activity from the new metastatic TS/A cell line and its high- and low-metastatic clonal derivatives. //Br. J. Cancer.-1985.-V. 52.-P.215-222.

344. Nicotera P., Bonfoco E., Bru'ne B. Mechanisms for nitric oxideinduced cell death: Involvement of apoptosis. // Adv. Neuroimmunol.-1995.-V. 5.-P.411-420.

345. Nikcevich D.A., Duffie G.P., Young M.R., Ellis N.K., Kaufman G.E., Wepsic H.T. Stimulation of suppressor cells in the bone marrow and spleens of high dose cyclophosphamide-treated C57BL/6 mice. // Cell Immunol.-1987.-V. 109.-P.349-359.

346. Noda S., Nagata-Naramiya T., Kosugi A., Narumiya S., Ra C., Fujiwara H., Hamaoka T. Do structural changes of T cell receptor complex occur in tumor-bearing state? // Jpn. J. Cancer Res.-1995.-V. 86.-P.383-388.

347. Noga S.J., Wagner J.E., Horwitz L.R., Donnenbrg A.D., Santos G.W., Hess A.D. Characterization of the natural suppressor cell population in adult rat bone marrow. // J. Leukoc. Biol.-1988.-V. 43.-P.279-287.

348. Nomura T., Hasegawa H. Chemokines and anti-cancer immunotherapy: anti-tumor effect of EBIl-ligand chernokine (ELC) and secondary lymphoid tissue chernokine (SLC). // Anticancer Res.-2000.-V. 20.-P.4073-4080.

349. North R.J. Cyclophosphamide-facilitated adoptive immunotherapy of an established tumor depends on elimination of tumor-induced suppressor T cells. //J. Exp. Med.-1982.-V. 155.-P.1063-1074.

350. O'Mara L.A., Allen P.M. Pulmonary tumors inefficiently prime tumor-specific T cells. //J. Immunol.-2004.-V. 172.-P.310-317.

351. Ochoa J.B., Udekwu A.O., Billiar T.R., Curran R.D., Cerra F.B., Simmons R.L., Peitzman A.B. Nitrogen oxide levels in patients after trauma and during sepsis. //Ann. Surg.-1991.-V. 214.-P.621-626.

352. Ogreba V.I., Kusmartsev S.A., Vasilyev N. V. Activity of bone marrow and spleen suppressor cells in mice with spontaneus tumour. // Eight Europ. Immunol. Meet.-Zagreb, Yugoslavia, 1987.-№ 10-49.-P.195.

353. Ohashi P.S., Oehen S., Buerki K., Pircher H., Ohashi C.T., Odermatt B., Malissen B., Zinkernagel R.M., Hengartner H. Ablation of tolerance and induction of diabetes by virus infection in viral antigen transgenic mice. // Cell.-1991.-V. 65.-P.305-317.

354. Orend G., Chiquet-Ehrismann R. Adhesion modulation by antiadhesive molecules of the extracellular matrix. // Exp. Cell Res.-2000.-V. 261.-P. 105-111.

355. Oshiba A., Hamelrnann E., Haczku A. // J. Immunol.-1997.-V. 159.-P.4056-4063.

356. Palathumpat V., Holm B., Dejbakhshjones S., Strober S. Treatment of BCL (1) leukemia by transplantation of low-density fractions of allogeneic bone-marrow and spleen-cells. // J. Immunol.-1992.-V. 148, № 10.-P.3319-3326.

357. Pardoll D.M. Cancer vaccines. // Nat. Med.-1998.-V. 4.-P.525-531.

358. Peeler K., Wigzell H., Peck A.B. Isolation and identification of the naturally occuring, newborn spleen-associated suppressor cells. // Scand. J. Immunol.-1983.-V. 17.-P.443-449.

359. Peguet-Navarro J., Sportouch M., Popa I., Berthier O., Schmitt D., Portoukalian J. Gangliosides from human melanoma tumors impair dendritic cell differentiation from monocytes and induce their apoptosis. // J. Immunol.-2003.-V. 170, № 7.-P.3488-3494.

360. Pela'ez B., Campillo J.A., Lo'pez-Asenjo J.A., Subiza J.L. Cyclophosphamide induces the development of early myeloid cells suppressingtumor cell growth by a nitric oxide-dependent mechanism. // J. Immunol.-2001.-V. 166.-P.6608-6615.

361. Pelkonen O., Nebert D.W. Metabolism of polycyclic aromatic hydrocarbons: etiologic role in carcinogenesis. // Pharmacol. Rev.- 1982.-V1. 34.-P. 189-222.

362. Pervin S., Singh R., Chaudhuri G. Nitric oxide-induced cytostasis and cell cycle arrest of a human breast cancer cell line (MDA-MB-231): Potential role of cyclin Dl. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-2001.-V. 98, № 6.-P.3583-3588.

363. Petit J.F., Nicaise M., Lepoivre M., Guissani A., Lemaire G. Protection by glutathione against the antiproliferative effects of nitric oxide. Dependence on kinetics of NO release.// Biochem. Pharmacol.-1996.-V. 52.-P.205-212.

364. Phillips J.H., Gumperz J.E., Parham P., Lanier L.L. Superantigen-dependent, cell-mediated cytotoxicity inhibited by MHC class I receptors on T lymphocytes. // Science (Washington DC).-1995.-V. 268.-P.403-405.

365. Piccioli D., Sbrana S., Melandri E., Valiante N.M. Contact-dependent stimulation and inhibition of dendritic cells by natural killer cells. // J. Exp. Med.-2002.-V. 195, № 3.-P.335-341.

366. Pifuet P.F., Irle C., Vassalli P. Immunosuppressor cells from newborn mouse spleen are macrophages differentiating in vitro from monoblastic precursors. //Eur. J. Immunol.-1981.-V. 11.-P.56-61.

367. Pipili-Synetos E., Sakkoula E., Haralabopoulos G., Andriopoulou P., Peristeris P., Maragoudakis M.E. Evidence that nitric oxide is an endogenous antiangiogenic mediator. //Br. J. Pharmacol.-1994.-V. 111.-P.894-902.

368. Porter C., Havens M.A., Clipstone N.A. Identification of amino acid residues and protein kinases involved in the regulation of NFATc subcellular localization. //J. Biol. Chem.-2000.-V. 275.-P.3534-3539.

369. Prazma J., Petrusz P., Mims W., Ball S.S., Weissler M.C. Immunohistochemical characterization of nitric oxide synthase activity in squamous cell carcinoma of the head and neck. // Otolaryngol. Head Neck Surg.-1995.-V. 113.-P.541-549.

370. Pross H.F., Lotzova E. Role of natural killer cells in cancer. // Nat. Immun.-1993.-V. 12.-P.279-292.

371. Punjabi C.J., Laskin D.L., Heck D.E., Laskin J.D. Production of nitric oxide by murine bone marrow cells: inverse correlation with cellular proliferation. //J. Immunol.-1992.-V.149.-P.2179-2191.

372. Radoja S., Frey A.B. Cancer-induced defective cytotoxic T lymphocyte effector function: another mechanism how antigenic tumors escape immunemediated killing. // Mol. Med.-2000.-V. 6.-P.465-479.

373. Radomski M.W., Jenkins D.C., Holmes L., Moncada S. Human colorectal adenocarcinoma cells: differential nitric oxide synthesis determines their ability to aggregate platelets. // Cancer Res.-1991.-V. 51, № 22.-P.6073-6078.

374. Raes G., Ginderachter J.V., Liu Y.Q. Active antitumor immunotherapy, with or without B7mediated costimulation, increases tumor progression in an immunogenic murine T cell lymphoma model. // Cancer Immunol Immunother.-l 998.-V. 45.-P.257-265.

375. Rao C.V., Kawamori T., Hamid R., Reddy B.S. Chemoprevention of colonic aberrant crypt foci by an inducible nitric oxide synthase-selective inhibitor. // Carcinogenesis.-l 999.-V. 20.-P.641-644.

376. Rauscher F.J. // J. Nat. Cancer Inst.-1962.-V. 29.-P.515.

377. Restifo N.P. Cancer vaccines '98: a reductionistic approach. // Mol. Med. Today.-1998.-V. 4.-P.327-334.

378. Restifo N.P., Esquivel F., Kawakami Y., Yewdell J.W., Mule J.J., Rosenberg S.A., Bennink J.R. Identification of human cancers deficient in antigen processing. // J. Exp. Med.-1993.-V. 177.-P.265-272.

379. Restifo N.P., Surman D.R., Zheng H., Palese P., Rosenberg S.A., Garcia-Sastre A. Transfectant influenza A viruses are effective recombinant immunogens in the treatment of experimental cancer. // Virology.-1998.-V. 249.-P.89-94.

380. Reykdal S., Abboud C., Liesveld J. Effect of nitric oxide production and oxygen tension on progenitor preservation in ex vivo culture. // Exp. Hematol.-1999.-V. 27, № 3.-P.441-450.

381. Rieder J., Marth C., Totzke G., Smolny M., Seibel M., Hoffmann G. Different patterns of inducible nitric oxide synthase gene expression in ovarian carcinoma cell lines. // Anticancer Res.-2000.-V. 20, № 5A.-P.3251-3258.

382. Roberts P.J., Riley G.P., Morgan K., Miller R., Hunter J.O., Middleton S J. The physiological expression of inducible nitric oxide synthase in the human colon. //J. Clin. Pathol.-2001.-V. 54.-P.293-297.

383. Rodrigez G., Andersson G., Wigsell H., Peck A.B. Non T-cell nature of naturally occurring, spleen-associated suppressor cells present in the newborn mouse. //Eur. J. Immunol.-1979.-V. 9.-P.737-746.

384. Rodrigez R., Angulo I., Vinuela J.E., Medina M., Gil J., Subiza J.L. Inhibition of bone marrow-derived natural suppressor activity by glucocorticoids and its reversion by IFN-gamma or IL-2. // Transplant.-1994.-V. 58, № 4.-P.511-517.

385. Rollins B.J. Chemokines. // Blood.-1997.-V. 90.-P.909-928.

386. Romagnoli P., Bron C. Phosphatidylinositol-based glycolipid-anchored proteins enhance proximal TCR signaling events. // J. Immunol.-1997.-V. 158.-P.5757-5763.

387. Roozendaal R., Vellenga E., Postma D.S., De Monchy J.G., Kauffman, H.F. Nitric oxide selectively decreases interferon-g expression by activated human T lymphocytes via a cGMP-independent mechanism. // Immunol.-1999.-V. 98.-P.393-399.

388. Rosenberg S.A. Identification of cancer antigens: impact on development of cancer immunotherapies. // Cancer J. Sci. Am.-2000.-V. 6.-P.200-204.

389. Rosenfeld C.S. Transforming growth factor-beta 1 augments macrophage-colony stimulating factor activity on human marrow. // Stem Cells.-1994.-V. 12, № 5.-P.527-532.

390. Rossi D, Zlotnik A. The biology of chemokines and their receptors. // Annu. Rev. frnmunol.-2000.-V. 8.-P.217-242.

391. Rossi E, Matutes E, Morilla R, Owusu-Ankomah K, Heffernan A.M., Catovsky D. Z-Chain and CD28 are poorly expressed on T lymphocytes from chronic lymphocytic leukemia. //Leukemia.-1996.-V. 10.-P.494-499.

392. Roszman T, Elliott L, Brooks W. Modulation of T-cell function by gliomas. //Immunol. Today.-1991.-V. 12,№ 10.-P.370-374.

393. Rowland R.R, Butz E.A, Plagemami P.G. Nitric oxide production by splenic macrophages is not responsible for T cell suppression during acute infection with lactate dehydrogenase- elevating virus. // J. Immunol.-1994.-V. 152.-P.5785-5795.

394. Ruegg C.R, Chiquet-Ehrismann R, Alkan S.S. Tenascin, an extracellular matrix protein, exerts immunomodulatory activities. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1989.-V. 86.-P.7437-7441.

395. Sadelain M.W.J, Voralia M, Green D.R, Wegmann T.G. The role of natural suppressor and natural killer activities in resistance to hemopoietic transplantation in unirradiated hosts. // J. Immunol.-1989.-V. 142, № 7.-P.2270-2278.

396. Saffran D.C., Parsons M.F., Singhal S.K. Separation of allostimulatory and natural suppressor stem-cell functions of murine bone-marrow implications for bone-marrow transplantation. // Transplant.-1991.-V. 52.-№ 4.-P.680-684.

397. Saffran D.C., Singhal S.K. Further characterization of by murine bone marrow-derived natural suppressor cells. Potential relationships between NS and NK/LAK activites. // Cell. Immunol.-1990.-V. 128, № 1.-P.301-313.

398. Sakata T., Iwagami S., Tsuruta Y, Suzuki S., Suzuki R. Study of natural lipocortin I. A potent mediator for macrophage-mediated immunosuppression in tumor-bearing mice. // J. Immunol.-1993.-V. 151, № 9.-P.4964-4972.

399. Sakata T., Iwagami S., Tsuruta Y., Teraoka H., Hojo K., Suzuki S., Sato K., Suzuki R. The role of lipocortin I in macrophage-mediated immunosuppression in tumor-bearing mice. // J. Immunol.-1990.-V. 145, № 1,-P.387-396.

400. Salvadori C.B., Gansbacher A., Pizzimenti A., Zier K.I. Abnormal signal transduction by T cells of mice with parental tumor is not seen in mice bearing IL-2 secreting tumors. //J. Immunol.-1994.-V. 153.-P.5176-5182.

401. Salvucci O., Mami-Chouaib F., Moreau J.L., Theze J., Chehimi J., Chouaib S. Differential regulation of interleukin-12- and interleukin-15-induced natural killer cell activation by interleukin-4. // Eur. J. lmmunol.-1996.-V. 26,-P.2736-2742.

402. Santin A.D., Hermonat P.L., Ravaggi A., Cannon M.J., Pecorelli S., Parham G.P. Secretion of vascular endothelial growth factor in ovarian cancer. // Eur. J. Gynaecol. Oncol.-1999.-V. 20.-P.177-184.

403. Schantz S.P., Ordonez N.G. Quantitation of natural killer cell function and risk of metastatic poorly differentiated head and neck cancer. // Nat. Immun. Cell Growth Regul.-1991.-V. 10.-P.278-288.

404. Scharton T.M., Scott P. Natural killer cells are a source of interferon-y that derives differentiation of CD41 T cell subsets and induces early resistance to Leishmania major in mice. // J. Exp. Med.-1993.-V. 178.-P.567-571.

405. Schenk S., Chiquet-Ehrismann R., Battegay E.J. The fibrinogen globe of tenascin-C promotes basic fibroblast growth factor-induced endothelial cell elongation. //Mol. Biol. Cell.-1999.-V. 10.-P.2933-2938.

406. Schenk S., Muser J., Vollmer G., Chiquet-Ehrismann R. Tenascin-C in serum: an acute-phase protein or a carcinoma marker? // Int. J. Cancer.-19956.-V. 60.-P.145-152.

407. Schleifer K.W., Mansfield J.M. Suppressor macrophages in African trypanosomiasis inhibit T cell proliferative responses by nitric oxide and prostaglandins. //J. Immunol.-1993.-V. 151,№ 10.-P.5492-5503.

408. Schmielau J., Finn O.J. Activated granulocytes and granulocyte-derived hydrogen peroxide are the underlying mechanism of suppression of T-cell function in advanced cancer patients. // Cancer Res.-2001.-V. 61.-P.4756-4760.

409. Schmielau J., Kalthoff H., Roeder C., Schmiegel W. Cytokines and the biology of pancreatic cancer. Pancreatic Cancer: Molecular and Clinical Advances. Blackwell Science London, 1995.-P.36-50.

410. Schrier P.I., Peltenburg L.T. Relationship between myc oncogene activation and MHC class I expression. // Adv. Cancer Res.-1993.-V. 60.-P.181-246.

411. Schuh K., Twardzik T., Kneitz B., Heyer J., Schimpl A., Serfling E. The interleukin 2 receptor a chain/CD25 promoter is a target for nuclear factor of activated T cells. //J. Exp. Med.-1998.-V. 188.-P. 1369-1375.

412. Schwadron R.B., Gandour D.M., Strober S. Cloned natural suppressor cell lines derived from the spleens of neonatal mice // J. Exp. Med.-1985.-V. 162.-P.297-310.

413. Schwadron R.B., Palathumpat V., Strober S. Natural suppressor cell derived from adult spleens and thymus. // Transplant.-1989.-V. 48.-P. 107-110.

414. Schwartz R.H. Acquisition of immunological self-tolerance. // Cell.-1989.-V. 57.-P.1073-1081.

415. Schwartz R.H. Costimulation of T lymphocytes: the role of CD28, CTLA-4, and B7/BB1 in interleukin-2 production and immunotherapy. // Cell.-1992.-V. 71.-P.1065-1068.

416. Segre M., Tomei E., Segre D. Cyclophosphamide-induced suppressor cells in mice: suppression of the antibody response in vitro and characterization of the effector cells. 11 Cell Immunol.-1985.-V. 91.-P.443-454.

417. Seiffert M., Beck S.C., Scliermuizi F., Müller C.A., Erickson H.P., Klein G. Mitogenic and adhesive effects of tenascin-C on human hematopoietic cells are mediated by various functional domains. // Matrix Biol.-1998.-V. 17,-P.47-52.

418. Seledtsov V.I., Avdeev I.V., Morenkov A.V., Seledtsova G.V., Kozlov V.A. Antiproliferative effect of bone marrow cells on leukemic cells. // Immunobiology.-I995.-V. 192, №> 3-4.-P.205-217.

419. Seledtsov V.I., Seledtsova G.V., Samarin D.M. Characterization of eiythroid cell-derived natural suppressor activity. // ImmunobioI.-1998.-V. 198, № 4.-P.361-374.

420. Seledtsov V.I., Sennikov V. V., Seledtsova G.V. Avdeev I.V., Samarin D.M., Taraban V.Y., Poveschenko O.V., Morenkov A.V., Kozlov V.A. Bone marrow cells is suppressing leukemic cell growth. // Russ. J. ImmunoL-2001.-V.6, № 2.-P.203-206.

421. Seledtsova G.V., Seledtsov V.I., Taraban V.Y. A role for interferon-gamma and transforming growth factor-beta in erythroid cell-mediated regulation of nitric oxide production in macrophages. // Immunology (England).-1997.-V.91.-N.l.-P.109-113.

422. Selleri C., Sato T., Raiola A.M., Rotoli B., Young N.S., Maciejewski J.P. Induction of nitric oxide synthase is involved in the mechanism of Fasmediated apoptosis in haemopoietic cells. // Br. J. Haematol.-1997.-V.99.-P.481-489.

423. Sen J., Kapeller R., Fragoso R., Sen R., Zon L.I., Burakoff S.J. Intrathymic signals in thymocytes are mediated by p38 mitogen-activated protein kinase. //J. Immunol.-1996.-V. 156.-P.4535-4542.

424. Sennikov S.V., Eremina L.V., Samarin D.M., Avdeev I.V., Kozlov V.A. Cytokine gene expression in erythroid cells. II Eur. Cytokine Netw.-1996.-V. 7, № 4.-P.771-774.

425. Sennikov S.V., Krysov S.V., Injelevskaya T.V., Silkov A.N., Kozlov V.A. Production of cytokines by immature erythroid cells derived from human embryonic liver. II Eur. Cytokine Netw. 2001.-V.12.-N.2.-P.274-279.

426. Shami PJ., Weinberg J.B. Differential effects of nitric oxide on erythroid and myeloid colony growth from CD34+ human bone marrow cells. // Blood.-1996.-V. 87.-P. 977-983.

427. Sharma S., Stolina M., Lin Y., Gardner B., Miller P. W., Kronenberg M., Dubinett S. M. T cell-derived IL-10 promotes lung cancer growth by suppressing both T cell and APC function. II J. Immunol.-1999-V. 163.-P.5020-5027.

428. Sharma S., Stolina M., Luo J. Secondary lymphoid tissue chemokine mediates T cell-dependent anti-tumor responses in vivo. // J. Immunol.-2000.-V. 164.-P.4558-4563.

429. Shen Y.H., Wang X.L., Wilcken D.E. Nitric oxide induces and inhibits apoptosis through different pathways. //FEBS Lett.-I998.-V. 433.-P. 125131.

430. Sheu B-C., Lin R-H., Lien H-C., Ho H-N., Hsu S-M., Huang S-C. Predominant Th2/Tc2 polarity of tumor-infiltrating lymphocytes in human cervical cancer. //J. Immunol.-2001 .-V. 167.-P.2972-2978.

431. Shi Q., Xiong Q., Wang B., Le X., Khan N.A., Xie K. Influence of nitric oxide synthase II gene disruption on tumor growth and metastasis. // Cancer Res.-2000.-V. 60.-P.2579-2583.

432. Shimizu M., Sabolovic D., Ozawa H., Iwaguchi T. Cyclophosphamide-induced suppressor cells in nude mice. // Anticancer Drugs.-1992.-V. 3, № 4.-P.427-433.

433. Shimizu Y., DeMars R. Demonstration by class I gene transfer that reduced susceptibility of human cells to natural killer cell-mediated lysis is inversely correlated with HLA class I antigen expression. // Eur. J. Immunol.-1989.-V. 19.-P.447-451.

434. Shrikant P., Klioruts A., Mescher M.F. CTLA-4 blockade reverses CD8+ T cell tolerance to tumor by a CD4+ T cell-and IL-2-dependent mechanism. //Immunity.-1999.-V. 11.-P.483-493.

435. Shurin G.V., Shurin M.R., Bykovskaia S., Shogan J., Lotze M.T., Barksdale Jr.E.M. Neuroblastoma-derived gangliosides inhibit dendritic cell generation and function. // Cancer Res.-2001.-V. 61, № 1.-P.363-369.

436. Sica A., Donnan L., Viggiano V., Cippitelli M., Ghosh P., Rice N., Young H.A. Interaction of NF-kB and NFAT with the interferon^/ promoter. // J. Biol. Chem.-1997.-V. 272.-P.30412-30415.

437. Sica A., Saccani A., Bottazzi B., Polentarutti N., Vecclii A., Van Damme J., Mantovani A. Autocrine production of IL-IO mediates defective IL-12 production and NF->;B activation in tumor-associated macrophages. // J. Immunol.-2000.-V. 164.-P.762-767.

438. Siegert A., Rosenberg C., Schmitt W.D., Denkert C., Hauptmann S. Nitric oxide of human colorectal adenocarcinoma cell lines promotes tumour cell invasion. // Br. J. Cancer.-2002.-V. 86, № 8.-P.1310-1315.

439. Singal D.P., Ye M., Ni J., Snider D.P. Markedly decreased expression of TAP1 and LMP2 genes in HLA class I-deficient human tumor cell lines. // Immunol. Lett.-1996.-V. 50.-P. 149-154.

440. Skowroncendrzak A., Kubera M. Effect of neonatal spleen and thymus implants on H-Y incompatible skin grails. // Foli. Biol. (Krakow).-1989.-V. 37, № 1-2.-P.101-104.

441. Smith M.E.F., Marsh S.G.E., Bodmer J.G., Gelsthorpe K., Bodmer W.F. Loss of HLA-A, B, C allele products and lymphocyte function-associated antigen 3 in colorectal neoplasia. II Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1989.-V. 86.-P.5557-5561.

442. Smyth M.J., Godfrey D.I., Trapani J.A. A fresh look at tumor immunosurveillance and immunotherapy. II Nat. Immunol.-2001.-V. 2.-P.293-299.

443. Snyder D.S., Lu C.Y., Unanue E.R. Control of macrophage la expression in neonatal mice role of splenic suppressor cells. // J. Immunol. -1982.-V. 128.-P. 1458-1465.

444. Soini Y., Alavaikko M., Lehto V.-V., Virtanen I. Tenascin in reactive lymph nodes and in malignant melanoma, if Pathol. Res. Pract.-1992.-V. 188.-P.1078-1085.

445. Storkus W.J., Alexander J., Payne J.A., Dawson J.R., Cresswell P. Reversal of natural killing susceptibility in target cells expressing transfected class IHLA genes. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1989.-V. 86.-P.2361-2364.

446. Stremmel C., Greenfield E.A., Howard E., Freeman G.J., Kuchroo V.K. B7-2 expressed on EL4 lymphoma suppresses antitumor immunity by an interleukin 4-dependent mechanism. // J. Exp. Med.-1999.-V. 189.-P.919-930.

447. Stuehr D.J., Nathan C.F. A macrophage product responsible for cytostasis and respiratory inhibition in tumor target cells. // J. Exp. Med.-1989.-V. 169.-P. 1543-1555.

448. Su B., Jacinto E., Hibi M., ICallunki T., Karin M., Ben Neriah Y. JNK is involved in signal integration during costimulation of T lymphocytes. // Cell.-1994.-V. 77.-P.727-731.

449. Spring J., Beck K., Chiquet-Elirismann R. Two contrary functions of tenascin: dissection of the active sites by recombinant tenascin fragments. // Cell.-1989.-V. 59.-P.325-333.

450. Sriramarao P., Mendler M., Bourdon M.A. Endothelial cell attachment and spreading on human tenascin is mediated by a^i and av(33 integrins. // J. Cell Sci.-1993.-V. 105.-P.1001-1011.

451. Subiza J.L., Vinuela J.E., Rodrigez R., Gil.J., Figueredo M.A., De La Concha E.G. Development of splenic natural suppressor (NS) cell in Ehrlich tumor-bearing mice. //Int. J. Cancer.-1989,-V. 44.-P.307-314.

452. Sugiura K., Inaba M., Ogata H., Jasumizu R., Sardina E.E., Inaba K., Kuma S., Good R.A., Ikehara S. Inhibition of tumor cell proliferation by natural suppressur cell present in murine bone marow. // Cancer Res.-1990.-V. 50.-P.2582-2586.

453. Sykes M. Suppressive activity in recipients of non-T cell-depleted allogeneic bone marrow transplants: role of T cell-depleted syngeneic marrow. // Bone Marrow Transplant.-1989.-V. 4.-P.30-33.

454. Sykes M., Sachs D.N. Mechanisms of suppression in mixed allogeneic chimeras. // Transplant.-1988,-V. 46.-P.1356-1426.

455. Taheri F., Ochoa J.B., Faghiri Z., Culotta K., Park H.-J., Lan M.S., Zea A.H., Ochoa A.C. L-Arginine regulates the expression of the T cell receptor C, chain (CD3 Q in Jurkat cells. 11 Clin. Cancer Res.-2001.-V. 7.-P.958-965.

456. Takahashi T., Hirano N., Takaliashi T., Chiba S., Yazald Y., Hirai H. Immunogene therapy against mouse leukemia using B7 molecules. // Cancer Gene Ther.-2000.-V. 7.-P.144-150.

457. Tamada K., Harada M., Abe K., Li T., Tada H., Onoe Y., Nomoto K. Immunosuppressive activity of cloned natural killer (NK1.1+) T cells established from murine tumor-infiltrating lymphocytes. //J. Immunol.-1997.-V. 158.-P.4846-4851.

458. Taylor-Robinson A. The sequestration hypothesis: an explanation for the sensitivity of malaria parasites to nitric oxide-mediated immune effector function in vivo. //Med. Hypotheses.-2000.-V. 54, № 4.-P.638-64I.

459. Thomsen L.L., Lawton F.G., Knowles R.G., Beesley J.E., Riveros-Moreno V., Moncada S. Nitric oxide synthase activity in human gynecological cancer. //Cancer Res.-1994.-V. 54.-P.1352-1354.

460. Thomsen L.L., Miles D. W. Role of nitric oxide in tumour progression: lessons from human tumours. // Cancer Metastasis Rev.-1998.-V. 17, № 1,-P.107-118.

461. Thomsen L.L., Miles D.W., Happerfield L., Bobrow L.G., Knowles R.G., Moncada S. Nitric oxide synthase activity in human breast cancer. // Br. J. Cancer.-1995.-V. 72.-P.41-44.

462. Thurnher M., Radmayar C., Ramoner R., Ebner S., Bock G., Klocker H., Romani N., Bartsch G. Human renal-cell carcinoma tissue contains dendritic cells. //Int. J. Cancer.-1996.-V. 67.-P.1-9.

463. Timmerman J.M., Levy R. Dendritic cell vaccines for cancer immunotherapy. // Annu. Rev. Med.-1999.-V. 50.-P.507-529.

464. Tommasi S., Pfeifer G.P. In vivo structure of two divergent promoters at the human PCNA locus: synthesis of antisense RNA and S phase-dependent binding of E2F complexes in intron 1. // J. Biol. Chem.-1999.-V. 274.-P.27829.

465. Townsend S.E., Allison J.P. Tumor rejection after direct costimulation of CD8+ T cells by B7-transfected melanoma cells. // Science.-1993.-V. 259.-P.368-370.

466. Townsend S.E., Su F.W., Atherton J.M., Allison J.P. Specificity and longevity of antitumor immune responses induced by B7-transfected tumors. // Cancer Res.-1994.-V. 54.-P.6477-6483.

467. Trinchieri G. Recognition of major histocompatibility complex class I antigens by natural killer cells. // J. Exp. Med.-1994.-V. 180.-P.417-422.

468. Trushin S.A., Pennington K.N., Algeciras-Schimnich A., Paya C.V. Protein kinase C and calcineurin synergize to activate I-kappaB kinase and NF-kappaB in T lymphocytes. // J. Biol. Chem.-1999.-V. 274.-P.22923-22929.

469. Tsurumi Y., Murohara T., Krasinski K., Chen D., Witzenbichler B., Kearney M., Couffinhal T., Isner J.M. Reciprocal relation between VEGF and NO in the regulation of endothelial integrity. // Natl. Med.-I997.-V. 3.-P.879-886.

470. Uzzo R.G., Clark P.E., Rayman P., Bloom T., Rybicki L., Novick A.C., Bukowski R.M., Finke J.H. Alterations in NF-kappaB activation in T lymphocytes of patients with renal cell carcinoma. II J. Natl. Cancer Inst.-1999a.-V. 91.-P.718-722.

471. Van Vlasselaer P., Strober S. a|3TCR+CD3+CD4-CD8- cloned natural suppressor (NS) cells produce an immunosuppressive factor which is different from INF-y and TGF-J3. // Transplant. Proc.-1991.-V. 23.-P.200-213.

472. Vicari A.P., Ait-Yahia S., Chemin K. Antitumor effects of the mouse chemokine 6Ckine/SLC through angiostatic and immunological mechanisms. // J. Immunol.-2000.-V. 165.-P. 1992-2000.

473. Vilpo J.A., Vilpo L.M., Vuorinen P.A., Moilanen E.A., Metsa-Ketela T.T. Mode of cytostatic action of mesoionic oxatriazole nitric oxide donors in proliferating human hematopoietic cells. // J. Anticancer Drug Des.-1997.-V. 12, № 2.-P.75-89.

474. Vodovotz Y. Control of nitric oxide production by transforming growth factor-pl: mechanistic insight and potential relevance to human disease. //Nitric Oxide: Biol. Chem.-1997a.-V.l.-P.3-17.

475. Vodovotz Y., Bogdan C. Control of nitric oxide synthase expression by transforming growth factor-beta: implications for homeostasis. // Prog. Growth Factor Res.-l994,-V. 5, № 4.-P.34Ï-351.

476. Vodovotz Y., Bogdan C., Paik J. Mechanisms of suppression of macrophage nitric oxide release by transforming growth factor p. // J. Exp. Med.-1993.-V. 178.-P.605-613.

477. Vodovotz Y, Hsing A, Cook J.A, Miller R.W, Wink D, Ritt D.M., Mitchell J.B, Danielpour D. Qualitative and quantitative analysis of DNA fragmentation using digital imaging. // Anal. Biochem.-19976.-V. 250.-P. 147152.

478. Vokes E.E, Weichseîbaum R.R, Lippmann S.M, Hong W.K. Head and neck cancer. //N. Eng. J. Med.-1993.-V. 328.-P. 184-191.

479. Vollmer G, Tan M.I, Wünsche W, Frank K. Expression of tenascin-C by human endometrial adenocarcinoma and stroma cells: heterogeneity of splice variants and induction by TGF-ß. // Biochem. Cell Biol.-l997.-V. 75.-P.759-765.

480. Wall D.A, Sheehan K.C.F. The role of tumor-necrosis-factor and interferon-gamma in grafit-versus-host disease and related immunodeficienty. // Transplant.-1994.-V. 57, № 2.-P.273-279.

481. Walunas T.L, Bakker C.Y, Bluestone J.A. CTLA-4 ligation blocks CD28-dependent T cell activation. // J. Exp. Med.-1996.-V. 183.-P.2541-2550.

482. Wang B, Xiong Q, Shi Q, Le X, Abbruzzese J.L., Xie K. Intact nitric oxide synthase II gene is required for interferon-ß-mediated suppression of growth and metastasis of pancreatic adenocarcinoma. // Cancer Res.-2001.-V. 61, № 1.-P.71-75.

483. Wang M.B, Lichtenstein A, Mickel R.A. Hierarchical immunosuppression of regional lymph nodes in patients with head and neck squamous cell carcinoma. // Otolaryngol. Head Neck Surg.-1991.-V. 105.-P.517-527.

484. Wang Q, Redovan C, Tubbs R, Olencki T, Klein E, Kudoh S, Finke J, Bukowski R.M. Selective cytokine gene expression in renal cell carcinoma tumor cells and tumor-infiltrating lymphocytes. // Int. J. Cancer.-1995a.-V. 61, № 6.-P.780-785.

485. Wei D., Richardson E.L., Zhu K., Wang L., Le X., He Y., Huang S., Xie K. Direct demonstration of negative regulation of tumor growth and metastasis by host-inducible nitric oxide synthase. // Cancer Res.-2003.-V. 63, № 14.-P.3855-3859.

486. Wei X. Q., Charles I.G., Smith A., Ure I, Feng G.J., Huang F.P., Xu D., Muller W., Moncada S., Liew F.Y. Altered immune responses in mice lacking inducible nitric oxide synthase. //Nature.-1995.-V. 375.-P.408-411.

487. Weidner N., Semple J.P., Welch W.R., Folkman J. Tumor angiogenesis and metastasis-correlation in invasive breast carcinoma. // N. Engl. J. Med.-1991.-V. 324.-P.1-8.

488. Weller M,. Fontana A. The failure of current immunotherapy for malignant glioma. Tumor-derived TGF-B, T cell apoptosis, and the immune privilege of the brain. // Brain Res. Rev.-1995.-V. 21.-P.128-151.

489. Whitehurst C.E., Boulton T.G., Cobb M.H., Geppert T.D. Extracellular signal-regulated kinases in T cells: anti-CD3 and 4 P-phorbol 12-myristate 13-acetate-induced phosphorylation and activation. // J. Immunol.-1992.-V. 148,-P.3230-3236.

490. Whiteside T.L. Monitoring of Antigen-Specific Cytolytic T Lymphocytes in Cancer Patients Receiving Immunotherapy. // Clin. Diagnost. Lab. Immunol.-2000.-V.7.-N.3.-P.327-332

491. Wick M., Dubey P., Koeppen H., Siegel C.T., Fields P.E., Chen L., Bluestone J.A., Schreiber H. Antigenic cancer cells grow progressive immunehosts without evidence for T cell exhaustion or systemic anergy. 11 J. Exp. Med.1997.-V. 186.-P.229-238.

492. Williamson E., Garside P., Bradley J.A. IL-I2 is a central mediator of acute graft-versus-host disease in mice. // J. Immunol.-1996.-V. 157, № 2-P.689-699.

493. Wilson K.E., Langdon S.P., Lessells A.M., Miller W.R. Expression of the extracellular matrix protein tenascin in malignant and benign ovarian tumours. //Br. J. Cancer.-1996.-V. 74.-P.999-1007.

494. Wink D.A. Vodovotz Y., Laval J., Laval F., Dewhirst M.W., Mitchell J.B. The multifaceted roles of nitric oxide in cancer. // Carcinogenesis.-1998.-V. 19, №5.-P.711-721.

495. Wojtowicz-Praga S. Reversal of tumor-induced immunosuppression: a new approach to cancer therapy. // J. Immunother.-1997.-V. 20.-P.165-177.

496. Wu C.W., Chi C.W., Hsieh M.C., Chao M.F., Lui W.Y., P'Eng F.K. Serum tumor necrosis factor in patients with gastric cancer. // Anticancer Res.1998.-V. I8.-P.I597-I599.

497. Wu N.Z., Klitzman B., Dodge R., Dewhirst M.W. Diminished leukocyte-endothelium interaction in tumor microvessels. // Cancer Res.-1992.-V. 52.-P.4265-4268.

498. Wu T-C., Huang A., Jaffee E.M., Levitsky H.I., Pardoll D.M. A reassessment of the role of B7-1 expression in tumor rejection. // J. Exp. Med.-1995.-V. 182.-P. 1415-1421.

499. Xiao L., Eneroth P.H.E., Qureshi G.A. Nitric oxide synthase pathway may mediate human natural killer cell cytotoxicty. // Scand. J. Immunol.-1995,-V. 42.-P.505-511.

500. Xie K., Dong Z., Fidler I.J. Activation of nitric oxide gene for inhibition of cancer metastasis. //J. Leukocyte Biol. -1996.-V. 797.-P.797-803.

501. Xie K., Huang S., Dong Z., Juang S.H., Wang Y., Fidler I.J. Destruction of bystander cells by tumor cells transfected with inducible nitric oxide (NO) synthase gene. //J. Natl. Cancer. Inst.-1997.-V. 89.-P.421-427.

502. Xu W., Liu L., Charles I.G. Microencapsulated iNOS-expressing cells cause tumor suppression in mice. // FASEB J.-2002.-V. 16.-P.213-215.

503. Yagihashi N., Kasajima H., Sugai S., Matsumoto K., Ebina Y., Morita T., Murakami T., Yagahashi S. Increased in situ expression of nitric oxide synthase in human colorectal cancer. // Virch. Arch.-2000.-V. 436.-P. 109-114.

504. Yanagie H., Chen Z., Takeda Y. Sugiyama H, Sekiguchi M, Eriguchi M. Regulation of mouse immuno-responses by a natural suppressor cell clone from bone marrow. //Res. Exp. Med.-1997.-V. 197, № 3.-P.165-175.

505. Yang G., Mizuno M.T., Hellstrom K.E., Chen L. B7-negative versus B7-positive P815 tumor: differential requirements for priming of an antitumor immune response in the lymph nodes. // J. Immunol.-1997.-V. 158.-P.851-860.

506. Yang W., Ando J., Korenaga R., Toyo-oka T., Kamiya A. Exogenous nitric oxide inhibits proliferation of cultured vascular endothelial cells. // Biochem. Biophys. Res. Commun.-1994.-V. 203.-P.1160-1167.

507. Yeh K-Y., Pulaski B.A., Woods L. B7-1 enhances natural killer cellmediated cytotoxicity and inhibits tumor growth of a poorly immunogenic murine carcinoma. // Cell Immunol.-1995.-V. 165.-P.217-224.

508. Yim C.-Y., Bastian N.R., Smith J.C., Hibbs J.B., Samlowski W. Macrophage nitric oxide synthesis delays progression of ultraviolet lightinduced murine skin cancers. //Cancer Res.-1993.-V. 53.-P.5507-5511.

509. Yim C.Y., McGregor J.R., ICwon O.D., Bastian N.R., Rees M., Mori M., Hibbs J.B.J., Samlowski W.E. Nitric oxide synthesis contributes to IL-2-induced antitumor responses against intraperitoneal Meth A tumor. // J. Immunol.-1995.-V. 155.-P.4382-4390.

510. Yoshida R., Nagira M., Kitaura M., Imagawa N., Imai T., Yoshie O. Secondary lymphoid-tissue chemokine is a functional ligand for the CC chemokine receptor CCR7. //J. Biol. Chem.-1998.-V. 273.-P.7118-7222.

511. Yoshida T., Norihisa Y., Habu S., Kobayashi N., Takei M., Kanehira N., Shmamura T. Proliferation of natural suppressor cells in long-term cultures of spleen-cells from normal adult mice // J. Immunol.-199l.-V. 147, № 12.-P.4136-4139.

512. Yoshino I., Yano T., Murata M., Ishida T., Sugimachi K., Kimura G., Nomoto K. Tumor-reactive T-cells accumulate in lung cancer tissues but fail to respond due to tumor cell-derived factor. // Cancer Res.-1992.-V. 52.-P.775-781.

513. Young M.R., Ellis N.K., Young M.E., Wepsic H.T. Stimulation of hematopoiesis and borne marrow suppressor cells by the subcutaneous injection of linoleic acid. //Cell. ImmunoI.-1987a.-V. 107.-P.238-359.

514. Young M.R., Newby M., Wepsic H.T. Hematopoiesis and suppressor bone marrow cells in mice bearing large metastatic Lewis lung carcinoma tumors. // Cane. Res.-19876.-V. 47.-P.100-105.

515. Young M.R., Wright M.A., Coogan M., Young M.E., Bagash J. Tumor-derived cytokines induce bone marrow suppressor cells that mediate immunosuppression through transforming growth factor beta. // Cancer Immunol. Immunother.-l992.-V. 35.-P.14-18.

516. Young M.R., Wright M.A., Matthews J.P. Suppression of T cell proliferation by tumor-induced granulocyte-macrophage progenitor cells producing transforming growth factor-beta and nitric oxide. // J. Immunol.-1996.-V. 156, № 5,-P.1916-1922.

517. Young M.R.I., Wright M.A., Young M.E. Antibodies to colony-stimulating factors block Lewis lung carcinoma cell stimulation of immune-suppressive bone-marrow cells. // Cane. Immunol. Immunother.-1991.-V. 33, № 3.-P.146-152.

518. Young M.R.I., Young M.E., Kim K. Regulation of tumor-induced myelopoiesis and the associated immune suppressor cells in mice bearing metastatic Lewis lung carcinoma by prostaglandin E 2■ I I Cane. Res.-1988.-V. 48.-P.6826-6831.

519. Young MILL, Young M.E., Wright M.A. Stimulation of immune-suppressive bone-marrow cells by colony-stimulating factors. // Exp. Hematol.-1990.-V. 18.-P.806-811.

520. Young R.C., Corder M.P., Haynes H.A., DeVita V.T. Delayed hypersensitivity inHodgkin's disease. //Am. J. Med.-1972.-V. 52.-P.63-72.

521. Zeidler R., Csanady M., Gires O., Lang S., Schmitt B., Wollenberg B. Tumor cell-derived prostaglandin E2 inhibits monocyte function by interfering with CCR5 and Mac-1. // FASEB J.-2000.-V. 14, № 5.-P.661-668.

522. Zietz C., Rumpler U., Sturzl M., Lohrs U. Inverse relation of Fas-ligand and tumor-infiltrating lymphocytes in angiosarcoma: indications of apoptotic tumor counterattack. //Am. J. Pathol.-200l.-V. 159.-P.963-970.

523. Zornig M., Evan G.I. Cell cycle: on target with myc. // Curr. Biol.-1996.-V. 6.-P.1553-1564.