Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Роль количественных соотношений во взаимодействии лимфоцитов с аллогенными кроветворными стволовыми клетками

Феномен инактивации нееингенных стволовых клеток", открытый Р.В. Петровым и Л.С. Сеславиной в 1967 году, имеет большое значение для проблемы трансплантации костного мозга, так как исход трансплантации зависит от приживления именно стволовых кро-вотворных клеток. В настоящее время работами Р.В. Петрова и других авторов установлено, что эффекторами исследуемой реакции являются лимфоциты, по свойствам относящиеся к Т^-оубпопуляции. В-лимфоциты оказывают хелперное влияние на способность Т-клеток подавлять колониеобразование чужеродных гемопоэтических цред-шественников. Но закономерности Т-В взаимодействия в данном феномене до сих пор не исследованы.

Получены данные, показывающие, что при одних дозах лимфоцитов лимфатических узлов наблюдается их инактивирующее действие на колониеобразование нееингенных стволовых клеток, а при других, более низких - стимулирующее действие. В связи с этим представляется важным изучение инактивирующей активности различных субпопуляцай лимфоцитов в широком интервале соотношений киллер: мишень.

Понимание цроцессов клеточного взаимодействия на различных этапах исследуемой иммунной реакции, изучение характера влияния отдельных клеточных популяций в зависимости от количества клеток, открывают возможность регулировать сложнейшие иммунологические процессы. Проблемы стимуляции и подавления иммунной реакции особенно актуальны в связи с практикой пересадки органов и тканей. Данные о наличии зависимости иммунного ответа от соотношений взаимодействующих клеток, или от дозы специфических и неспецифических факторов, открывают новые подходы к проблемам иммуностимуляции и имщуноингибиции в клинике при многих иммунных патологиях.

Целью настоящего исследования явилось изучение характера взаимодействия различных субпопуляций Т- и В-лимфоцитов с чужеродными стволовыми клетками в феномене инактивации в зависимости от соотношений взаимодействующих клеток.

Задачи исследования. Согласно цели исследования были поставлены следующие задачи:

1. Выбрать методы фракционирования различных субпопуляций лимфоцитов, дающие достаточный количественный выход функционально активных клеток.

2. Охарактеризовать и сравнить инактивирующую активность различных "очищенных" субпопуляций Т-лимфоцитов в зависимости от их количественных соотношений с аллогенными стволовыми клетками.

3. Изучить характер взаимодействия В-лимфоцитов лимфатических узлов с различными субпопуляциями Т-клеток в реакции инактивации.

4. Исследовать зависимость функции В-лимфоцитов от их количества в исследуемой реакции.

Основные результаты работы позволяют заключить, что в феномене инактивации несингенных стволовых клеток участвуют два типа клеток:

- Т-лимфоциты, инактивирующая активность которых при снижении их количества в исследуемой трансплантируемой смеси, сменяется на стимулирующую колониеобразование. Такой "двухфазный" эффект получен при изучении инактивирующей активности лимфоцитов различных Т-субпопуляций, исследованных в широком интервале доз клеток;

- В-лимфоциты лимфатических узлов оказывают регулирующее влияние при взаимодействии их с Т-лимфоцитами. Они оказывают хелперяое либо суцрессорное действие в зависимости от количественных соотношений. Установлено отсутствие генетических ограничений на взаимодействие Т- и В-лимфоцитов. Показано, что регулирующей активностью обладают также В-лимфоциты от Т-дефицитных доноров.

Научная и практическая значимость

Исследованы закономерности взаимодействия лимфоцитов с ал-логенными стволовыми клетками, зависимость эффектов взаимодействия от количественных соотношений клеток. Полученные в результате работы данные по изучению роли различных субпопуляций лимфоцитов и закономерностях их взаимодействия могут быть использованы для разработки способов нацравленного влияния на пролиферацию чужеродных стволовых клеток. Применение средств избирательной регуляции пролиферации стволовых клеток имеет практическое значение при пересадке костного мозга.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Иммунная система представлена специализированной лимфоид-ной тканью, которая во взаимодействии с другими системами осуществляет специфический аятигеняо-структурный гомеостаз внутренней среды организма. Взаимодействие специализированных субпопуляций лимфоцитов и макрофагальных клеток обеспечивает формирование клеточных и гуморальных реакций иммунитета и их регуляцию. В зависимости от дозы и особенностей антигенов, количества отдельных популяций взаимодействующих клеток и условий их деятельности эти кооперативные процессы либо усиливают, либо ограничивают, либо качественно модифицируют иммунный ответ.

ШВА X. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ЛИМФОЦИТОВ СО СТВОЛОВЫМИ

КЛЕТКАМИ

Известно, что поддержание пула лимфоидных клеток цроисхо-дит за счет функционирования щюветворной клеточной системы, основным элементом которой является полипотентная стволовая кроветворная клетка.

О стволовых кроветворных клетках накоплен большой экспериментальный материал, отражающий их происхождение, расцределение в организме, миграцию, чувствительность к различным биологически активным веществам, наличие различных антигенных маркеров. Эти сведения изложены в фундаментальных обзорах и монографиях (Чертков Й.Л., Фриденштейн А.Я., 1977; Чертков И.Л., 1978; Wolf , Trentiri , 1968; Bekkum vanetal, 1979; Хаитов P.M., 1972a; Curry al, 1967; Cherv, Schooley , 1968; Jenkins ei al , 1972; Botnich etal, 1976). Известно, что гемопоэтические стволовые клетки обладают способностью к самоподдержанию в течение онтогенеза, к диффе-ренцировке в зрелые формы клеток, быстро размножаются, обладают полипотентностью (Чертков ИД., Фриденштейн А.Я.,1977; Чертков ИЛ., 1978; Till et al , 1967; Wu et al , 1968; Nowell et al ,1970; Phillips et al , 1977).

Морфологическая идентификация стволовых кроветворных клеток является весьма трудной задачей, так как концентрация их в различных органах очень низкая. Основным "депо" является костный мозг, где по сведениям одних авторов цриблизительно 0,1% всех ядросодержащих клеток приходится на стволовые гемопоэти-ческие клетки или на 10.000 ядросодержащих клеток приходится 10 стволовых клеток (iahiri , Put+en van. , 1972; Till, McCullocH, 1972), другие же ( Bekkum van etal, I97I;Duplan. »Legrand, 1971; Siegers e\ al f X979) указывают на большее содержание -2,8$ от всех ядросодержащих клеток.

В настоящее время существуют данные о получении обогащенных популяций при помощи: разделения в градиенте плотности бычьего сывороточного альбумина, использования метода колоние-образования и обработки мышей in vivo винбластином. Концентрация стволовых клеток возрастала до 5-30$ ( Bekkum van е* al, 1971; Visser et al , 1977). A в случае использования в качестве параметров светорассеяния клеток и интенсивности флуоресценции Thy -I-антигена на поверхности клеток, измеренных с помощью клеточного сортера (TACS), получено обогащение полипотентных кроветворных клеток костного мозга крысы в 320 раз (GoldscK-he'\der e+al, 1980). Получена микрофотография клетки - "кандидата" в гемопоэтические предшественники, сделанная при помощи электронного микроскопа. Эта клетка, имеющая округлую форцу, круглое ядро с расположенными по периферии хромативными агрегациями, тонкий ободок цитоплазмы, похожа на малый лимфоцит (Bekkum van e"tal, 1979).

Стволовая клетка дает начало клеткам предшественникам всех ростков кроветворения. Опыты с радиоактивной меткой показали, что гемопоэтическая и лимфоидная системы имеют общего предшественника ( Wu е+ al , 1968). При дифференцировде стволовая клетка дает одного предшественника, образующего эритроциты, мегака-риоциты и клетки миелоидного ряда и второго - предшественника лимфоидного ростка. Предшественники второго типа, цроходя через стадию предшественников Т- и В-лимфоцитов, дают начало популяции Т- и В-клеток, которые крайне гетерогенны и подразделяются на субпопуляции, отличающиеся друг от друга по ряду признаков, а также и по функциям. Эта схема диффер енцировки стволовой клетки разработана Всемирной Организацией Здравоохранения (ВОЗ) на основе обобщения экспериментальных данных ученых различных стран (Петров Р.В., 1982).

Развитие представлений о пролиферации и диффер енцировке стволовых гемопоэтических цредшественников стало возможно в результате разработки методов культивирования стволовых клеток i in vivo и in vitro и всестороннего их изучения в разработанных моделях.

Till и Me Culloch в 1961 разработали метод клонирования кроветворных клеток в селезенке летально облученных мышей. Этот метод заключается в том, что летально облученным мышам трансплантировали внутривенно клетки кроветворных тканей. Через 7-10 суток после трансплантации в селезенках реципиентов вырастают видимые невооруженным глазом колонии, которые при гистологическом анализе оказались состоящими из дифференцирующихся кроветворных клеток.

Методом цитогенетического анализа с использованием кроветворных тканей мышей, несущих хромосомные маркеры, было показано, что колония образуется из одной стволовой клетки (Becker ei al , 1963). Это подтверждается линейностью отношений между числом вводимых клеток и числом возникающих колоний, а также методом радиационных и хромосомных маркеров (Till , Мс CullocK, 1961; Wu eVal , 1968).

Клетки костного мозга, трансплантированные летально облученным реципиентам, формируют в селезенке последних колонии эритроидного, миелоидного и мегакариоцитарного типов (Till , Мс Culloch , 1961). Кроветворный предшественник во взрослом организме в норме дает соотношение эритроидных и гранулоидных (миелоидных) колоний равное двум (Петров Р.В., 1969; Петров Р.В. и др., 1979). Клетки-родоначальницы клонов в селезенке были названы колониеобразующими единицами (К0Ес). Доказательства, полученные радом авторов и свидетельствующие о том, что колониеобразующими клетками являются стволовые гемопоэтические предшественники (Чертков ИЛ., 1978; Чертков И.Л., Зриденштейн А.Я., 1977), обеспечили экспериментальную основу для изучения свойств стволовых клеток, их характеристики, анализа механизмов, диффе-ренцировки предшественников в зрелые формы, и факторов, влияющих на эти процессы. функционирование кроветворных стволовых клеток в организме находится под контролем различных факторов. До недавнего времени считалось, что основным фактором, определяющим пролиферацию и дифференщфовку полипотентных клеток-предшественников, является гемопоэтическое индуктивное микроовружение СЧертков ИЛ., Фриденштейн, 1966; Tren+in. , 1970; Wol-p ДгепШ ,1968; Чертков ИЛ., Фриденштейн А.Я., 1977; Старостин В.И., Мичурина Т.В., 1977; Чертков И.Л., 1978).

Р.В. Петровым и соавторами установлен новый тип регуляции функциональной активности кроветворных клеток-предшественников. Показано, что пролиферация и дифференцировка стволовых кроветворных клеток находится под контролем Т-системы иммунитета.Данный вывод основан на открытии взаимодействия кроветворных клеток-предшественников с сингенными и аллогенными лимфоцитами (Петров Р.В., Сеславина Л.С., 1967; Петров Р.В., 1969). При трансплантации летально облученным мышам (CBAxC57BI)F-£ костномозговых и лимфоидных клеток мышей GBA наблюдался гранулоци-тарный сдвиг в дифференцировке гемопоэтических клеток-цредшест-венников (Петров Р.В., Швец В.Н., 1973; Манько В.М., 1978; Петров Р»В. и др., 1979). Таким образом Р.В. Петровым и сотрудниками (Петров Р.В., 1969; Головистиков И.Н. и др., 1970) была обнаружена зависимость процесса дифференцировки стволовых кроветворных клеток от взаимодействия с сингенными лимфоцитами. Также было показано, что цри трансплантации реципиенту-гибриду сингенные лимфоциты отменяют аллогенную ингибицию стволовых клеток (Головистиков И.Н. и др., 1972; Головистиков И.Н. и др., 1974; Козлов В.А., и др., 1974; Петров Р.В. и др., 1975а; Колесникова С.М., 1977). Это подтверждается работами Goodman с соавторами, где показано, что сингенные тимощты способствуют выживаемости стволовых клеток, их пролиферации и диффер енцировке по всем росткам кроветворения, при трансплантации реципиенту, снимают аллогенную ингибицию при трансплантации несинген-ному реципиенту, повышают жизнеспособность стволовых клеток облученного костного мозга (Goodman. , Sh'mpock , 1968; Goodman et al , 1972; Bas-ford , Goodman,1974; Goodman et al, 1975; G-oodman etal , 1978; Pritchard , Goodman., 1978; Shares еЦ1978).

При исследовании взаимодействия аллогенных лимфоцитов и кроветворных стволовых клеток наблюдалась инактивация гемопо-этических предшественников. Суть феномена инактивации заключалась в том, что трансплантация интактных клеток лимфоидных и эдоветворных тканей мышей разных генотипов приводила к блокировке стволовых элементов, лишая или резко затормаживая их способность к пролиферации.

Впервые этот феномен был обнаружен (Петров Р.В., Сеслави-на Л.С., 1967) при трансплантации летально облученным мышам (CBAxC57BL)Fj смеси равных количеств по 2ХГ0°) селезеночных клеток мышей родительских линий СБА и C57BL. На 8-е сутки наблюдали инактивацию 50-80$ стволовых клеток трансплантата. В другом эксперименте при введении смеси клеток костного мозга мышей C57BL и лимфоцитов лимфатических узлов мышей СБА регистрировали црактически полную инактивацию колониеобразования. Подобный эффект отмечали и при трансплантации облученным реципиентам (GBAxC57BI)P-j- смеси костномозговых родительских клеток. Феномен был подтвержден работами ряда зарубежных авторов (Barnes et al , I969;lehgerova e1 al , I97I;ijundegarclh e1 a(, 1976; Elomgren., kndersson , 1972).

P.B. Петровым и соавторами (Петров Р.В. и др., 1969) экспериментально доказано, что инактивация К0Ес осуществляется лимфоцитами. Это заключение получило подтверждение в работах других авторов (Каулен Д.Р. и др., I980;Boranic , Blaze - PoljaK., 1973; Boranic et al , 1973; .Lengerova al , 1971). При цитологическом исследовании данного феномена с использованием кроветворных и лимфоидных клеток линии мышей, несущих хромосомные маркеры, было показано, что инактивация представляет . собой необратимую блокаду цролиферации К0Ес( Barnes e"tal, 1969). Поэтому лимфоциты, инактивирующие стволовые клетки, называют еще лимфоцитами-киллерами.

Дальнейшие исследования показали, что лимфоциты обеспечивали инактивацию не только экзогенно введенных,но и эндогенных генетически чужеродных стволовых клеток. Введение лимфоцитов родительской линии сублетально облученным мышам (GBAxC57Bb)Fj цриводило к отмене роста эндогенных колоний в селезенке мышей (Манько В.М. и др., 1972; Петров Р.В. и др., 1970; Kitamura ■et al , 1970; Pdrov et al , 1970; Peirov -ei al , 1971). Выраженность процесса инактивации K0Ec, экзогенно введенных или эндогенных, определялась дозой вводимых несингенных лимфоцитов и возрастала с увеличением их числа (Манько В.М., 1978; Манько В.М. и др., 1972; Петров Р.В. и др., 1969; Boranic et al ,1973; Сеславина Л.С., Хаитов P.M., 1971; Pe+rov ^ al , 1971).

При исследовании временной характеристики процесса инактивации стволовых клеток аллогенными лимфоцитами был использован метод ретрансплантации стволовых клеток от одного облученного реципиента другому в комбинации с инъекцией антилимфоцитарной сыворотки вторичным реципиентам (Манько В.М. и др., 1972; Манько В.М. и др., 1977а; Манько В.М., 1978). Показано, что основные события, оцределяющие последующую инактивацию, протекают в течение 3-4 часов после инъекции смеси клеток костного мозга и аллогенных лимфоцитов, когда происходят первичные цроцессы взаимодействия трансплантированных клеток и колонизация ими тканей реципиента. Введение антилимфоцитарной сыворотки позже этого срока не отменяет действия клеток киллеров. Затем, в течение 3-4 суток, цроисходит перераспределение лимфоидных элементов в тканях реципиента с последующим накоплением лимфоцитов в селезенке (к 3-м суткам) и последующая инактивация осевших там ранее стволовых клеток (к 4-м суткам). Аналогичные процессы происходят и в костномозговой полости.

Феномен инактивации проявляется при различных генетических сочетаниях между донорами лимфоцитов-киллеров и стволовых клеток-мишеней (C57BI + СВА; C57BI + СЗН; C57BI + A; C57BI/6 + + (СВАхС57ВЬ)Р-£; СВА + (СВАхС57В1)Рх; А+ СВА). Количественное проявление инактивации зависит от генотипов взаимодействующих стволовых клеток и лимфоцитов. Процент инактивированных КОЕ. индекс инактивации) при этом изменялся от 23,2 до 87,5$ (Мань-ко В.М. и др., 1972). Исследуемый феномен контролируется генами как H-2-комплекса, так и вне Н-2. Максимальная инактивация происходит при одновременном различии по Н-2 и не Н-2 системам, и осуществляется цри любых, даже самых минимальных генетических различиях взаимодействующих клеток. Гены, лежащие вне Н-2 системы, по-видимому, имеют даже большее значение в этом цроявлении феномена тканевой несовместимости (Пантелеев Э.И. и др., 1978). Это принципиально отличает описываемое явление от известных феноменов трансплантационного иммунитета: отторжения кожного трансплантата, реакции трансплантат против хозяина, ци-тотоксического действия лимфоцитов, аллогенной ингибиции, бласт-трансформации лимфоцитов и др., контролируемых генами главного комплекса гист о с овместимо сти.

При исследовании радиочувствительности лимфоцитов, обеспечивающих инактивацию несингенных колониеобразующих элементов (Манько В.М., 1971), клетки лимфатических узлов мышей линии СВА облучали in vitro в диапазоне доз 25,8-154,8 мКл/кг(Ю0-600Р). и совместно с интакт ними спленоцитами генетически чужеродной линии трансплантировали летально облученным реципиентам. Показано, что с увеличением экспозиционной дозы облучения лимфоид-ных клеток - индекс инактивации КОЕ. снижался с 87,4$,при дозе

Кг облучения 25,8 мКл/кг (I0GP), до 33,4$ при дозе облучения 154,8 мКл/кг (6ОС0Р). Параметры, характеризующие радиационную чувствительность инактивирующей функции лимфоцитов, составляют: D0 =138 мКл/кг (636Р), п=1,08 (Манысо В.М., 1983). Для сравнения укажем, что параметры радио-чувствительности пролиферации стволовых клеток составляют: Х>о=0,95 Гр(95 рад),п =1,5 (Till, Me Cul loch , 1964), имцунокомпет ентных клеток: Б0 =27,1 мКл/кг (Х05Р), h =2,3 (Манько В.М., 1967; Манько В.М., Петров Р.В., 1967). По данным других авторов, D0 для кривой радиационного поражения иммунокомпетентных клеток составляет 18,1-32,2 мКл/кг (70-I25P), п =1,02-2,72 ( Kennedy -étal , 1965; MatCmodan étal, 1962; Pe+rov , Cheredeyev, 1968). Сравнение этих данных позволило сделать вывод, что функция инактивации несингенных стволовых кроветворных клеток лимфоцитами намного более радиорезистентна, чем функция размножения кроветворных и лимфоидных элементов. Это свидетельствует в пользу того факта, что инактивация несингенных KGEC не требует активной пролиферации лимфоцитов-киллеров. Вместе с тем киллерный эффект осуществляется функционально активными лимфоцитами, поскольку облученные в высокой дозе радиации лимфоциты теряют способность подавлять процессы пролиферации стволовых клеток (Петров Р.В., и др., 1969).

Важной чертой, отличающей феномен инактивации от известных клеточных реакций иммунитета, является отсутствие необходимости в предварительной сенсибилизации.

Лимфоциты инактивируют не только стволовые, но и цролифе-рирующие клетки других регенерирующих тканей. Эти процессы могут развиваться в любом участке кровеносной системы и, возможно, в друтих участках организма (Петров Р.В. и др., 1970; Швец В.Н., Манько В.М., 1971). Это позволяет считать, что реакция инактивации является одним из главных механизмов иммунологического надзора, которому, по-видимому в первую очередь, подвергаются активно пролиферирующие клетки, потому что именно они могут дать начало процессу размножения чужеродной ткани и поэтому представляют наибольшую опасность для генетического гомео-стаза организма.

ГЛАВА П. ИНАКГИВЙРУЩАЯ АКТИВНОСТЬ Т-ЛЙМФОЦЙГОВ

Работами В.М. Манько, Т.Е. Рудневой было показано, что феномен инактивации зависит главным образом от Т-лимфоцитов (Манько В.М., Руднева Т.Б., 1975; Руднева Т.Б. и др., 1978). Эффектор ную роль Т-лимфоцитов в феномене инактивации доказывают результаты экспериментов с использованием антисыворотки к специфическому антигену Т-лимфоцитов МТЬА и комплемента (Руднева Т.Б. и др., 1978; Руднева Т.Б., 1979). Летально облученным мышам (СВАхС57ВЬ)р£ трансплантировали смесь клеток костного мозга мышей С57ВЬ и клеток лимфатических узлов мышей СБА, обработанных анти- МТЬА-сывороткой и комплементом. В качестве комплемента использовалась сыворотка морских свинок или кроликов. Анти-ИТЬА' сыворотка элиминировала весь пул Т-лимфоцитов, в результате чего инактивирующая активность суспензии клеток полностью пропадала. Тогда как при трансплантации клеток костного мозга в смеси с аллогенными необработанными лимфоцитами наблюдалась полная инактивация гемопоэтических предшественников (Руднева Т.Б. и др., 1978; Руднева Т.Б., 1979).

По инактивирующей активности субпопуляции Т-лимфоцитов, полученные с помощью различных биологических методов фракционирования клеток, расцределялись следующим образом: наибольшей активностью обладали лимфоциты лимфатических узлов интактных мышей, затем кортизонрезистентные тимоциты, клетки лимфатических узлов "Т мыши", клетки из селезенки ИТ мыши" и наименьшей - ин-тактные тимоциты (Руднева Т.Б., 1979). При сравнении инактивирующей активности интактных и кортизонрезистентных тимощтов показано, что инактивирующей активностью обладают и те, и другие клетки. Но для получения полной инактивации интактных тимоцитов требовалось в 10 раз больше. На основании того, что кортизоярезистентные тимоциты составляют 10-15% всех тимоцитов, авторы предположили, что основной эффект в данном случае оказывают кортизоярезистентные тимоциты. Кортикальные тимоциты не инактивируют несингенные гемопоэтические клетки-предшественники.

Как известно, кортизоярезистентные тимоциты обладают ци-тотоксической активностью (Cantor, IVeissman, 1976; Cantor , Simpson, 1975). Они компетентны в качестве эффекторов в РТПХ ( Ыотдгеа, Anderssoru , 1969; Cohen , 1972), в качестве К-кле-ток ( lamon е1 al , 1978), в качестве хеллеров в гуморальном ответе ( Tatciguchí et al, 1971) не способны к Т-Т синергизму с какими-либо периферическими Т-лимфоцитами (Tigelaar ei al , 1975), локализуются в медуллярной области, устойчивы к анти-Т1 -сыворотке, малочувствительны к анти-Thy-I сыворотке и чувствительны к анти-Н-2-сыворотке (D^nainskjj, Smith , 1974), резистентны к сублетальному облучению.

По совокупности ряда свойств периферические Т-лимфоциты разделяют на две большие группы, которые условно обозначают T-J-- и Т^-лимфоциты.

Tj - субпопуляция характеризуется сильной посттимической зависимостью от тимуса (исчезают через 3-8 недель после тимэк-томии) ( Kappler et al, 1974; Waksal et al , 1974). Их пролифе-ративная и функциональная активность чувствительна к гуморальным факторам тимуса. Tj-клетки-оседлые (Ara neo et al , 1975; Morse, Asofsicy , 1974), в связи с этим мало чувствительны к антилимфоцитарной сыворотке in vivo и дренированию грудного лимфатического протока. Они преимущественно локализуются в селезенке (в красной пульпе) (Goldschneider, 1976; Ruuskanen., 1975). Среди T-j- есть пул клеток» чувствительных к действию ФГА

Moorhead, Claman. , 1974; Moorhectd, 1978). T-¡- - субпопуля-хщя содержит Thy -I антиген в высокой концентрации (Cantor e.t а|> 1975; Waksal eta) , 1974).

Т^-лимфоциты, в отличие от Тр являются долгоживущими после тимэктомии (больше 20-30 недель), активно рециркулируют, поэтому чувствительны к действию антилимфоцитарной сыворотки in vivo и дренажу грудного протока. Локализованы преимущественно в лимфатических узлах и тропны к ним при переносе. Обнаруживаются в большом количестве в периферической крови, грудном лимфатическом протоке. У взрослых животных Tg-клетки присутствуют также в периартериолярных муфтах селезенки (Can+or , IVeissman, 1976; OIsson , Claessoinf 1973).

Предполагают, что T-j--незрелая, Tg- зрелая стадии созревания одной линии клеток, что под влиянием антигена цроисходит созревание Tj-клеток и превращение их в Tg-KaeTKH (Can+orfi972).

Известно, что концентрация Thy i антигена на лимфоцитах Т]--субпопуляции значительно выше, чем на лимфоцитах, Tg-cyönony-ляции (Сап+ог e+al , 1975; Waksal et al , 1974). При обработке клеток лимфатических узлов интактных мышей СБА антисывороткой к антигену Thy -I и комплементом in v'áro инактивирующая активность снижалась по сравнению с необработанными клетками лимфатических узлов (Руднева Т.Б. и др., 1978). Происходило это, по мнению авторов, за счет снижения функционально активных лимфоцитов Т^-субпопуляции.

С использованием методов разделения Т-р и Т^-субпопуляций по преимущественной тропности к периферическим лимфоидным органам (Herzenberg, Henz.enber^, 1974;Lance ,Taub , 1969; Lance, Gooper, 1973; Za+z, Lance , 1970; Blomgren, Ander&soa , 1972; Evans , Davies, 1977), показано, что Тз-лимфоциты обладают более высокой инактивирующей активностью по сравнению с Т-рлимфоцитами, инактивирующая активность которых не усиливалась с увеличением дозы клеток (киллеров).

Известно, что тимэктомия половозрелых мышей элиминирует преимущественно субпопуляцию короткоживущих Tj-лимфоцитов (Simpson , Can+or, 1975), тогда как обработка антилимфоцитарной сывороткой in vivo элиминирует рециркулирующие долгоживущие Т2-лимфоциты ( Canfor ei alf 1975). Сравнение инактивирующей функции лимфоцитов Т-£- и Т^-субпопуляций, выделенных таким образом, также выявило ведущую роль Т2-субпопуляций в инактивации аллогенных кроветворных стволовых клеток (Руднева Т.Б., 1979; Манько В.М. и др., 1981). Тимэктомия не только не снижала инактивирующую способность лимфоцитов, но клетки таких животных обладали несколько большей активностью, чем интактные лимфоциты лимфатических узлов. Т-р лимфоциты обладали низкой инактивирующей активностью* хотя результаты указывали на наличие киллер-ной активности при увеличении дозы клеток-киллеров. Так, при соотношении киллер:мишень, равном 1:4, Т2~лимфоциты инактивиро-вали 36% К0Ес, Tj-лимфоциты аллогенные стволовые клетки не инак-тивировали. При соотношении 1:1 Tj-лимфоциты проявляли инактивирующую активность - индекс инактивации равнялся 50$, а Т^-лим-фоциты инактивировали полностью. Увеличение киллерной активности Т]--лимфоцитов при соотношении киллер:мишень, равном 1:1 авторы объясняют недостаточно полной элиминацией Т2~лимфоци-тов в трансплантируемой взвеси клеток (доноров, обработанных антилимфоцитарной сывороткой in vivo ).

Был сделан вывод, что клетками-киллерами, обладающими инактивирующей активностью в исследуемом феномене, являются лимфоциты Т2-субпопуляции. Но не исключалась возможность участия и лимфоцитов Tj-субпопуляции.

Исследование Т-Т взаимодействия цредцринято в работе Г.А. Игнатьевой (Игнатьева Г.А., 1980). При изучении инактнвирующей активности лимфоцитов Tj- и Т .¿-субпопуляций, полученных на модели "Т мышей", с использованием различных доз клеток-киллеров, показано, что с увеличением количества исследуемых клеток-киллеров индексы инактивации КОЕ. возрастали, но не достигали 100% с даже при 1СЧфатном увеличении числа лимфоидных клеток количество несингенных клеток костного мозга выбиралось во всех экспериментах постоянным). Более того, при соотношении киллер:мишень, равном 10:1, индекс инактивации снижался. Было сделано предположение, что используемые популяции Т-лимфоцитов не однородны и состоят из двух типов клеток с противоположными функциями. Клетки-киллеры блокируют процессы пролиферации аллогенных кроветворных клеток-цредшественников, активно рециркулируют (чувствительны к антилимфоцитарной сыворотке in vivo ) и локализованы и в лимфатических узлах, и в селезенке "Т мышей". Клетки-суцрессоры сингенных клеток-киллеров (но не аллогенных стволовых элементов) - оседлые (нечувствительны к антилимфоцитарной сыворотке in vivo ) и локализованы преимущественно в селезенке; по-видимому, с увеличением числа лимфоцитов в смеси доля этих клеток возрастает, одновременно увеличивается и их супрессирую-щее влияние на процессы инактивации К0Ес. Это предположение было цроверено следующим образом; летально облученным мышам (CBAxC57BI)Fj- трансплантировали клетки костного мозга мышей C57BL в смеси с лимфоцитами селезенки и лимфатических узлов "Т мышей" СБА, в различных соотношениях клеток. При раздельной трансплантации Т-лимфоцитов селезенки и лимфатических уалов "Т мышей" наблюдалась инактивация 40-60% несингенных К0Ес, а при трансплантации их смеси индекс инактивации был ниже ожидае

- 22 мого суммарного. В этих опытах обнаружены клетки супрессоры, подавляющие киллерную активность сингенных Т-лимфоцитов, но не влияющие на пролиферацию несингенных кроветворных клеток-предшественников. При изучении характеристики этих клеток (Игнатьева Г.А., 1980) показано, что они резистентны к действию анти-Thу-I-сыворотки, но чувствительны к тимэктомии, не циркулируют (резистентны к действию антилимфоцит арной сыворотки in vivo )f не црилипают к стеклу, чувствительны к действию облучения в экспозиционных дозах 219,3-232,2 мКл/кг (850-900Р) (Игнатьева Г.А., 1980).

Синергизм между разноименными субпопуляциями Т-лимфоцитов в инактивации аллогеняых гемопоэтических предшественников не был обнаружен ни в одном варианте постановки опытов. Это отличает феномен инактивации несингенных К0Ес от других реакций,опосредуемых Т-клетками, где взаимодействие функционально различных Т-лимфоцитов является одним из признаков формирования иммунного ответа. Выраженный синергизм наблюдается между Т-лимфоцитами различной анатомической локализации в РТПХ - особенно между ти-моцитами и клетками лимфатических узлов (Cantor, AsofsKij,1970); между Т-лимфоцитами, короткоживущими после тимэктомии, оседлыми и долгоживущими, рециркулирующими: в реакции отторжения ал-лотрансплантата сердца (kelfand ; Ste'mberg , 1974), в реакции смешанной культуры лимфоцитов (Coheh eial, 1978); между Т»лимфоцитами с высокой и низкой концентрацией Thy -I антигена на мембране, в РТПХ и в реакции смешанной культуры лимфоцитов ( CarvVor e-tal, 1975).

Описанные выше результаты по изучению инактивирующей активности различных субпопуляций лимфоцитов и их смесей получены при использовании различных биологических методов их обогащения (по тропности к различным лимфоидным тканям, по чувствительноети к тимэктомии, к специфическим антисывороткам на такие антигены лимфоцитов мышей, как MTLA, МВ1Л ,Thy -I, поверхностные Эти методы обладают определенными достоинствами, поскольку различие клеток по поверхностным характеристикам и способности к рециркуляции отражает их функциональные различия или различия в стадиях зрелости. Но эти методы не дают достаточно высокой степени очистки клеток, которые, кроме того, после разделения не остаются интактными. Поэтому в последние годы находят все большее црименение методы разделения клеток по физическим параметрам. Физические методы разделения позволяют эффективно фракционировать лимфоциты с хорошо известными функциональными свойствами (Дозморов И.М., 1982).

Так, например, с помощью препаративного электрофореза удамся разделить с высокой частотой Т- и В-субпопуляции лимфоцитов из различных источников ( Amdersson eial , 1973; Short man. etа1Д975;Dumoht, Habberse"H~, 1982; Петров P.B. и др.,1980).

Изучение инактивирующей активности лимфоцитов лимфатических узлов, разделенных методом препаративного электрофореза (Петров Р.В. и др., 1980), позволило выделить субпопуляции, различающиеся инактивирующей активностью (Петров Р.В. и др.,1983а). Т-лимфоциты низкой электрофоретической подвижности обладали очень низкой инактивирующей активностью. На основании этого можно предположить, что эти клетки цредставляют незрелую Tj-субпопуляцию, так как известно, что Tj--лимфоциты практически не инактивируют аллогенные гемопоэтические предшественники (Руднева Т.Б., 1979; Манько В.М. и др., X98I). Т-лимфоциты средней электрофоретической подвижности обладали выраженной инактивирующей активностью подобной активности Т2-субпопуляции. В пользу этих предложений свидетельствуют данные работы (Сап+ог,

Weiss man f 1976), где показано, что Т2~лймфоциты обладают большей, чем T-j--лимфоциты, электр офоретической подвижностью. В работе Dumoht и Habberseit (1982) цредставлены данные по исследованию фенотипа клеточной поверхности лимфоцитов лимфатических узлов мыши СВАД различной электрофоретической подвижности с помощью иммуноф&уориметрического анализа. Показано, что Т-лимфоциты низкой электр офоретической подвижности представляют Tj-субпопуляцию, имеют фенотип Ly+- 1+2+; фенотип Т-лимфоцитов высокой электрофоретической подвижности определен как Lyt -1+2~, что характерно для Tg-лимфоцитов ( Cantor , We.¡ssman , 197$).

Таким образом, за последние годы накопилось достаточно данных для конкретной характеристики Т-лимфоцитов, блокирующих процессы пролиферации несингенных КОЕ. Показано, что эти клетки, обладающие низкой чувствительностью к действию антисыворотки к антигену Thy -I (Руднева Т.Б., 1979; Руднева Т.Б. и др., 1978), на их функциональную активность не оказывает влияние тимэктомия (Руднева Т.Б., 1979; Манько В.М. и др., 1981), они не обладают адгезивными свойствами (Манько В.М., 1983), относительно радиорезистентны (Манько В.М., 1971), имеют среднюю электр офоретичеокую подвижность (Дозморов И.М., 1982), рециркулиру-ют, элиминируются при обработке антилимфоцитарной сывороткой in vivo и анти-MTL/l-сывороткой in vitro (Руднева Т.Б., 1979; Манько В.М. и др., 1981).

Сравнение вышеизложенной характеристики с известными данными о свойствах Т - лимфоцитов (Canior, Simpson, 1975; Dymin2 sk.i j .Smi+h, , 1974) подтверждает принадлежность клеток, ответственных за инактивацию пролиферации аллогенных стволовых клеток к Т^-субпопуляции. При сравнении функции кортизонрезист видных тимоцитов и лимфоцитов лимфатических узлов интактных мышей Сруднева т.Б., 1979; Руднева Т.Б. и др., 1978) было обнаружено, что инактивирующая активность лимфоцитов лимфатических узлов интактяых мышей, содержащих в своем составе не только Т-, но и В-лимфоциты, была выше. Эти различия наводят на мысль, что В-лим-фоциты также принимают участие в процессе инактивации несинген-ных стволовых кроветворных клеток.

ГЛАВА Ш. ВЛИЯНИЕ В-ЛИМВДИТОВ НА ИНАКТИВИРУЮЩУЮ

АКТИВНОСТЬ Т-ЛИМФОЦИГСВ

В-лимфоциты не обладают свойством клеток-киллеров по отношению к несингенным гемопоэтическим клеткам-цредшественникам (Манько В .М. и др., 1978; Руднева Т.Б., 1979). Это было показано с использованием экспериментальной модели "В-мышей", тимэк-томироваяных, затем через I месяц после операции облученных и защищенных сингенным костным мозгом. Лимфоциты лимфатических узлов "В-мышей" не инактивировали аллогенные КОЕ,,. Инактивация не проявлялась при увеличении соотношений киллер: мишень от 1:2 до 25:1. Оцнако показано (Манько В.М. и др., 1978;Г^днева Т.Б., 1979), что неспособность В-лимфоцитов инактивировать несинген-нне кроветворные стволовые клетки, не означает, что они не принимают участия в феномене инактивации. Обработка клеток лимфатических узлов интактных мышей СВА ¡n vi tro антисывороткой к антигену MBL.A и комплемент ом и трансплантация их совместно с клетками костного мозга мышей C57BI приводила к снижению индексов инактивации К0Ес на 60$. Те же результаты получены цри обработке антисывороткой к Ig мыши и комплементом. Аналогичные данные получены ранее в другой системе - при отмене эндогенного колониеобразования аллогенными лимфоцитами (Еляхер М.С., 1977). Было сделано предположение, что В-лимфоциты, самостоятельно не инактивируя несингенные К0Ес, взаимодействуют с Т-лимфоцитами, усиливая их функциональную активность (Манько В.М. и др., 1978). Однако цри изучении влияния В-клеток на инактивацию аллогенных гемопоэтических предшественников Т-лимфоцитами с использованием лимфоцитов "Т" и "В-мышей" было показано, что В-клетки лимфатических узлов "В-мышей" не способны усиливать инактивирующую активность Т-клеток из лимфатических узлов "Т-мышей". В отношении кортизонрезистентных тимовдтов получены аналогичные данные (Руднева Т.Б., 1979). Не удалось выявить и зависимости влияния В-клеток от дозы (соотношение Т- и В-клеток изменялось от 1:10 до 100:1). Было сделано предположение, что в лимфатических узлах "В-мыши" отсутствуют клетки, способные взаимодействовать с Т-лимфоцитами от "Т-мышей" и усиливать их киллер ную активность в исследуемом феномене.

Изучение хелперной функции В-лимфоцитов продолжено в работе Петрова Р.В. с соавторами (1983а), где было показано, что для проявления инактивирующей активности Т-лимфоцитам низкой электрофоретической подвижности необходимо взаимодействие с В-клетками. При добавлении клеток лимфатических узлов интактных мышей к смеси Т-лимфоцитов низкой электрофоретической подвижности и аллогенного костного мозга наблюдалось достоверное увеличение их инактивирующей активности на 70%. При обработке добавляемых к указанной смеси клеток анти- МЫ А -сывороткой и комплементом »п У1+го хелперный эффект цропадал. В-лимфоциты,полученные с помощью обработки клеток лимфатических узлов специфической антисывороткой к МТЬД антигену и комплементом, также увеличивали инактивирующую активность Т-лимфоцитов низкой электрофоретической подвижности на 6($ (Петров Р.В. и др., 1983а). При изучении инактивирующей активности смеси Т- и В-лимфоцитов, фракционированных с помощью анти- МВЬА - и анти- МТЬД -сыворотки (смешивали суспензии Т- и В-лимфоцитов в пропорции, соответствующей их содержанию в интактных лимфатических узлах) показано, что их инактивирующая активность восстанавливается до нормы, характерной для клеток интактных лимфатических узлов (Петров Р.В. и др., 1983а).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о регулирутощем влиянии B-лимфоцитов в феномене инактивации.

Регулирующая (суцресеорная) роль B-лимфоцитов впервые описана Р.В. Петровым и соавторами (Петров Р.В. и др., 1977; Петров Р.В. и др., 1978). Костномозговые В-клетки-супрессоры тормозят пролиферацию предшественников антителопр оду центов и других клеток. Это активно делящиеся клетки (чувствительные к облучению в экспозиционных дозах 309,6-516 мКл/кг (I200-200CSP) (Хаитов P.M. и др., 1978; Sing ha! et al t 1972), которые элиминируются антисыворотками к иммуноглобулинам и к антигену МБ LA (Атаул-лаханов Р.И., 1978; Власов A.A., 1980; Петров Р.В. и др.,1978; Okumura, Kern, 1975). Действие костномозговых суцрессоров отменялось циклофосфамидом (Петров Р.В. и др., 19766), митоми-цином С (Хаитов P.M., Петров Р.В., 1978), оксимочевиной (Петров Р.В. и др., 1978). По другим данным (Duwe,Singhai , 1979) костномозговые супрессоры относятся к Fe -положительным нулевым клеткам. Мишенями для В-супрессоров являются клетки лимфоидной и кроветворной систем (Власов A.A., 1980).

Предполагают, что супрессия лимфоцитами B-ряда носит по отношению к антигену неспецифический характер (Хаитов P.M. и др., 1978). Неспецифические В-супрессоры содержатся в костном мозге и не выявляются в тимусе, лимфатических узлах или в селезенке интактных мышей (Власов A.A., 1980; Singhai е* al , 1972). Эти лимфоциты подавляют антителообразование аллогенными и, более того, ксеногенными клетками (Власов A.A., -^980), проявляя супрессивную активность in vivo и In vi+ro (Батырбеков A.A., 1977; Петров Р.В. и др., 19766). В некоторых исследованиях су-прессорная активность клеток B-ряда зарегистрирована в лимфатических узлах и в селезенке (Батырбеков A.A., 1977; Петров Р.В. и др., 19766; Kemp-f , Rubin., 1979; Калинкович А.Г. и др., 1984).

Выявлены также антигенспецифические В-суцрессоры, выделенные от примированных антигеном животных и подавляющие антитело-генез у мышей ( Mayumi ei al, 1979).

Исследование регуляции антителами ( Weigle , 1975) или ан-ти-идиотипическими антителами (Jeme , 1974; Eichmann. t 1978), а также исследование поверхностных маркеров позволило вычленить клеточные элементы контроля обратной связи (Cantor , Boyse , 1975а; Cantor , Boyse , 19756 ; Can+ог al , 1976).

Предполагают, что мишенью для В-супрессии являются Т-хел-перы, которые инициируют "петлю" обратной связи, опосредуемой супрессориндукторной клеткой (Hersenberçeia!,I976; Eardley etat 1978). Описана ( Kennedy, Thomas , 1983) антиген-специфичная суцрессорная система для регуляции вторичных ответов in vivo инициированных при двойном адаптивном переносе клеток памяти, что свидетельствует о центральной роли антигенотвечающих В-кле-ток как супрессоров - индукторов контрольной отрицательной обратной связи. Индукция супрессии осуществлялась между примиро-ванными клеточными популяциями: В-суцрессоры - индукторы ->-Т -суцрессоры.

Индукция суцрессорного механизма B-клеткой и ее потомками продемонстрирована в различных тест-системах. В-супрессоры подавляют развитие реакции гиперчувствительности замедленного типа у морских свинок (Goodman, Weigle , I98I; Shearer et al,1973; V/ilsoh, , 1965), оказывают влияние на контактную чувствительность к пикрилхлориду ( Zembalaelal, 1976), подавляют антителообра-зование in v»+ro ( Cal Kins et al, 1976).

Клетки-суцрессоры, выделенные от примированных антигеном животных, оказались резистентными к облучению в экспозиционной дозе 516 мКл/кг (2000Р) ( Ador i hi ei al , 1979). Антигенспецифические В-суцрессоры обнаружены в селезенке, лимфатических узлах и в периферической крови. Показано (ТЬе.о{»1орои1о£ , 1980), что супрессорное действие В-клеток опосредуется через вырабатываемый ими гуморальный фактор, продукция которого контролируется генами, сцепленными с генами, контролирующими синтез вариабельных областей тяжелых цепей иммуноглобулинов ( Ун -гены), но не генами I- 3" субобласти.

В настоящее время существует ряд экспериментальных данных и о хелперной функции В-лимфоцитов, полученных в других тест-системах. При культивировании т у/+го в однонаправленной или двунаправленной смешанной культуре аллогенных кортизоврезистент-ных лимфоцитов мышей или клеток, выделенных из популяции тимо-цитов в градиенте плотности альбумина, пролиферация клеток отсутствовала (Эут«п5к1, 5т »"Иъ , 1975). Оцнако добавление в кульми туру обработанных митсЩином С лимфоцитов из периферических лим-фоидных тканей обеспечивало пролиферативный ответ лимфоидных клеток. Лимфоциты-хелперы были резистентны к обработке анти-ТЬу-1 сывороткой и комплементом, не прилипали к пластику или стеклу, обладали низкой плотностью, повреждались при обработке антисывороткой к иммуноглобулинам и комплементом. Клетки пери-тонеального экссудата, обогащенные макрофагами, на пролиферацию лимфоцитов не влияли. Авторы сделали предположение, что клетками хелперами являются В-лимфоциты. Показано (йутЩЕк! , Бшти+Ь., 19776), что в реакции между иммунокомпетентными клетками тимуса, В-лимфоциты могут оказывать хелперный эффект, усиливая Т-клеточный ответ.

В аллогенной смешанной культуре периферических лимфоцитов также был обнаружен хелперный эффект В-клеток ( Ттке ,

1976). Эффект был продемонстрирован цри использовании в качестве стимулирующих клеток Т-лимфоцитов селезенки мышей линии СБА, а в качестве отвечающих - Т-лимфоцитов из селезенки и лимфатических узлов или интактных клеток селезенки и лимфатических узлов мышей линии C57BL. Суспензии обрабатывали анти-Ig -сывороткой и комплементом. Усиление пролиферации Т-лимфоцитов под влиянием добавляемых В-линфоцитов в вышеизложенных исследованиях можно объяснить прямой стимулирующей активностью. В работе (Horwifz , Carrelt* f 1977) показано, что все "отвечающие"клет-ки смешанной культуры лимфоцитов относятся к оцределенным ограниченным субпопуляциям Т-лимфоцитов, а B-клетки, несущие на своей поверхности сильные стимулирующие детерминанты, которые кодируются главным комплексом гистосовместимости, обладают стимулирующей активностью. Высказано (Johnsen. , 1981) предположение, что B-клетки специфически активируют предшественников ци-тотоксических лимфоцитов посредством антигенных детерминант, связанных с продуктами генов локуса HL.A-D . Получены данные при постановке однонаправленной реакции смешанной культуры лимфоцитов человека (kottiieb^tal , 1979):зГзМ+-В-клетки, выделенные из периферической крови и из миндалин, проявляли значительную стимуляцию.

Выявлен эффект помощи B-лимфоцитов при митогенной стимуляции Т-клеток ФГА и конканавалином А (3)elespesse et^l, 1976). Это подтверждается исследованием с использованием метода разделения клеток на нейлоновой вате. B-лимфоциты мышей оказывали помощь сингенным Т-лимфоцитам при ответе на конканавалин А ( Möller et al , 1978-1979). Ответ Т-лимфоцитов, полученных из суспензии клеток, неприлипающих к пластиковым чашкам Петри, а затем пропущенных через колонку с нейлоновой ватой, на ФГА, конканавалин А и митоген лаконоса значительно возрастал при добавлении В-лимфоцитов при соотношении В:Т от 4:1 до 1:9 ( Kasahara et al , 1979а). Отмечалось более высокое хелперное воздействие В-лимфоцитов на субпопуляцию Т-клеток, обладающих низкой адгезионной способностью, чем на субпопуляцию с высокой адгезионной способностью (Delespesse et al f 1976). Анализ влияния прилипающих клеток на хелперный эффект, оказываемый В-лимфоцитами при Т-ответе на митогены показал, что при удалении из суспензии прилипающих клеток эффект повышается ( Kasahara et al , 19796). Взаимная хелперная активность В- и Т-лимфоцитов отмечалась и при ответе клеток периферической крови человека на митогенное действие кроличьих антител к -микроглобулину человека ( Rmc)-derv, 1980). Для клеток селезенки кроликов выявлен эффект хел-перного влияния В-клеток при ответе Т-лимфоцитов на ФГА и кон-канавалин А ( Ca/ai)lon <=>f al , 1981; Cavaillon et al , 1982).

Продемонстрирован хелперный эффект, оказываемый В-лимфоцитами костного мозга при взаимодействии с сингенными тимоцитами новорожденных мышей в РТПХ при пересадках клеток родительских линий облученным гибридам (GBAxG57Bb)Fj (Triden+e étal ,1971). Показано, что в присутствии иммунных В-лимфоцитов интактные Т-лимфоциты мышей приобретают суцрессивные свойства. Формируемые Т-суцрессоры способны отменять РТПХ ( L'Age-Stehr et al,

1980), a также угнетать продукцию антител классов Ig M и JgG при вторичном ответе на эритроциты барана in vi+го ( Gai tins étal , 1976). Активированные В-лимфоциты - бласты мышей стимулируют Т-клетки-хелперы при ответе на эритроциты барана ( LiA^e-S+ehr,

1981).

Исследован синергизм Т- и В-лимфоцитов и цри ответе на растворимый белок А стафилококков ( SpA ). Установлено, что SpA не обладает митогенной активностью по отношению к Т- и В-лимфоцитам. Однако показано ( fcomagnam e.+ al , 1978), что высоко-очищенные Т-клетки из миндалин человека отвечают слабой пролиферацией на стимуляцию SpA , а добавление к этим Т-кдеткам ау-тологичных В-лиглфоцгбв, обработанных митомицином С, приводило к значительному возрастанию Т-ответа.

Исследования с использованием культуральной камеры типа КагЬгоок показали, что усиление Т-ответа на SpA опосредуется прямым Т- В-клеточным взаимодействием, а не растворимыми медиаторами. В данной системе В-лимфоциты являются хелперными для Т-клеток, но Т-лимфоциты также проявляют хелперную активность по отношению к В-лимфоцитам (Kasahara fetal , 1980).

Данные, подтверждающие, что В-клетки участвуют в Т-ответе на различные Т-иитогены, имеются в других работах ( Kasahara eï , 1979а; Kin-et al , 1979а; Kasahara «t al , Х979в).

В ряде работ В-лимфоциты, оказывающие хелперное влияние на Т-клетки в различных тест-системах, охарактеризованы как незрелые бластные клетки. Так показано, что В-бласты оказывают помощь при формировании аутореактивных клеток ( L'Age - S+ehr e+al; 1980) стимулирует образование Т-хеллеров (Il Age-S-behr Д981) и Т-супрессоров ( Calkihs Д982; Jemes е.+ а1 , 1982) в гуморальном ищунном ответе. В работе l'Age - S+ehr eial, (1980) показано, что В-бласты, несущие на своей поверхности I9M -рецепторы, стимулируют Xyt Т-клетки-индукторы к рекрутированию и задерживанию лимфоцитов, а также активируют предшественников супрессор-ных клеток для ингибиции задерживания клеток 1у+ { клетками "индукторами". Так как инкубация В-клеток с козьей анти-мышиной-анти- Ig M -сывороткой приводила к удалению с поверхности иммуноглобулинов и исчезновению способности этих клеток стимулировать Т-индукторы, можно предположить, что экспрессия поверхностных иммуноглобулинов на В-бластах необходима для запуска Т-индукторов.

Несмотря на большое количество работ, свидетельствующих о существовании В-лимфоцитов-хелперов, эти клетки пока недостаточно изучены. Но уже сейчас можно предположить, что существует по меньшей мере два типа В-лимфоцитов-хелперов, различающихся своим фенотипом и способами получения: В-бласты, несущие, по-видимооду, 1<}М -рецепторы на своей поверхности, образуются цри иммунизации, митогенной стимуляции, цри восстановлении "выбитого" пула В-лимфоцитов, т.е. являются антигензависимыми клетками; В-лимфоциты, несущие Гд& -рецепторы, зрелые, оказывают помощь Т-лимфоцитам при запуске пролиферации в смешанных культурах лимфоцитов.

Таким образом, приведенные данные демонстрируют, что в определенных условиях В-лимфоциты могут оказывать антигензависи-мые (эффект примированных клеток) либо хелперное, либо суцрессор-ное действие или антигеннезависимые (эффект интактных клеток) либо хелперное, либо супрессорное действие. Следовательно, клетки костномозгового происхождения - В-лимфоциты, так же как и клетки тимусного происхождения, могут жрать роль регуляторов в иммунной системе.

Не исключено, что упомянутые функциональные разновидности В-лимфоцитов могут цредставлять собой либо дискретные субпопуляции, отражающие разные линии дифференвдровки общего или разных цредшественников, либо разные этапы одной и той же дифференци-ровки, либо разные функциональные состояния на одном и том же ее этапе.

ВЫВ ОДЫ

1. Обнаружен "двухфазный" характер дозовой зависимости взаимодействия Т-лимфоцитов и аллогеняых стволовых клеток. Количественные зависимости индексов инактивации для различных субпопуляций Т-лимфоцитов имеют общие закономерности - смену инактивирующего действия на стимулирующее цри снижении количества клеток-киллеров.

2. В-лимфоциты лимфатических узлов являются регуляторами цри взаимодействии лимфоцитов лимфатических узлов или клеток селезенки с аллогенными стволовыми клетками. В зависимости от количества В-клетки оказывают хелперное или супрессирующее действие.

3. Облучение В-клеток в дозах 77,4-232,2 мКл/кг (300-900Р) цриводит к изменению их хелперной активности на суцрессорную в реакции инактивации.

4. Генетическое соответствие между Т- и В-лимфоцитами лимфатических узлов не является необходимым для проявления синергизма их действия в феномене инактивации.

5. Лимфоциты лимфатических узлов "В-мышей? не обладая инактивирутощей способностью, сохраняют свою хелперную активность в отношении интактных Т-лимфоцитов в инактивации чужеродных стволовых клеток.