Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Роль иммуногенетических факторов в контроле иммунного ответа на антигены микобактерий и сопротивляемости к туберкулезу

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УССР

КИЕВСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ им. АКАДЕМИКА Л. Л. БОГОМОЛЬЦА

На правах рукописи

ПОСПЕЛОВ ЛЕВ ЕВГЕНЬЕВИЧ

РОЛЬ ИММУ НО ГЕНЕТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ В КОНТРОЛЕ ИММУННОГО ОТВЕТА НА АНТИГЕНЫ МИКОБАКТЕРИЙ И СОПРОТИВЛЯЕМОСТИ К ТУБЕРКУЛЕЗУ

(14.00.36 — аллергология и иммунология)

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Киев — 1991

Работа выполнена в Центральном НИИ туберкулеза МЗ СССР

Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор В. И. Литвинов

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Е. Ф. Чернушенко, доктор биологических наук, профессор Л. А. Певницкий, доктор медицинских наук А. Т. Тананов

Ведущее учреждение — II Московский медицинский институт

Защита состоится « » 199 г. в « » часов

на заседании специализированного совета Д 0881306 при Киевском ордена Трудового Красного Знамени медицинском институте им. академика А. А. Богомольца по адресу: г. Киев, проспект Победы, 34.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Киевского медицинского института (адрес: Киев, ул. Зоологическая, 1, стоматологический корпус).

Автореферат разослан « » 1991 г.

Ученый секретарь специализированного совета доктор медицинских наук,

профессор В. Г. Бордонос

ÍÍ^CTS'

\ь T!.

i.. •

- .тдэл y;::cc ртаци.

- 3 -

Общая характеристика работы

Актуальность ^облеж^ В настоящее время известны основные генетические системы,имеющие прямое отношение к регуляции иммунитета у человека: генч комплекса HLA и гены, контролирующие аллотипы иммуноглобулинов. Гены комплекса HLA детерминируют белковые молекулы - антигены HLA, относящиеся к классу I (антигены А,В,С-локусов) и классу П (антигены локу-сов I>R, DP.DQ,). Антигены HLA находятся на поверхности им-ыунокомпетентных клеток г играют огромную роль в распознавании инфекционного начал?, в межклеточном взаимодействии, в контроле силы иммунного ответа и других иммунологических феноменах (Алексеев Л.П. ,1985; Зарецкая Ю.М.»Абрамов В.Ю.,1986; Сочнев А.Ы. и соавт.,1987; ул/г. Edén J. ,1985; Bodmet \J. , 1986; &-,JJ¡¿on W. , Shav/ S. ,1989).

Также известно, что в патогенезе практически любых заболеваний чрезвычайно важную роль играют иммунологические механизмы. Цри этом р£^личные реакции иммунитета имеют не одинаковое значение на разных этапах течения болезни. Например, известно, что при самой различной патологии Т- и В-клеточный иммунитет могут находится как бы в конкуретных отношениях и что высокий уровень того или иного типа иммунологической реактивности не всеггч играет положительную роль при болезни. Изучение Т- и В-клеточного иммунитета при экспериментальном туберкулезе (у линейных мышей) продемонстрировало важную и неоднозначную роль этих систем й патогенезе этого заболевания (Авербах М.Ы.,1985). У людей иммунологические факторы также имеют большое значение в восприимчивости и течении туберкуле-

за (Гергерт В.Я.,1984; Авербах М.М.,1980;1986; Авербах М.М., Хоменко И.С.,1989; 3><*.n,neniex£ Л ,1982;Picáa&ná W. ,1989; j

- 4 - : •

Сксг>к Л. Л а£. ,1990).

В последние годы показано, что в восприимчивости к туберкулезу и его течении определенную ¡;оль играют антигены 7'лас-са I ^Хоменко А.Г.,1979; 2. и соавт.,1983). Изуче- ,

ше же роли антигенов класса И при туберкулезе еще только • начиняется :т работы,: посвященные этому всдросу единичны. Вместе с та!, этот аспект требует особого внимания/поскольку .. многочисленными исследованиями показано, что антигены -асса П принимают участие практически во всех видах иммунологических реакций, имеющих значении в патологии человека. ' ..'7 Исходя из современных воззрений на генетический контроль иммунного ответа, можно считать, что гены, детерминирующие . антигены классов I и II являются сами , по себе, генами иммунного о'/вета Ыоп, волЬте-Х М. . ,1984; ТЬсг ^ Е. ,1937). 7 Косвенные подтверждением этому положению служит обнаружение ассоциаций антигенов .системы НЬА с заболеваниями, в патоге- . незе которых играют ведухцую роль иммунологические механизма, . в частности, с аутоиммунной -патологией... Однако, влияние различных аллелей генов НЬА на'активность;'чшунокоыпетентньа клеток и состояние иммунитета при болезнях еще до конца не7 выяснено. '1 ' 7 ■; ;■■' ■

Гекетгшекши маркерами тяжелых'и легких цепей иммуноглобулинов, продуцируемых В-клеткаыи,являются .аллотипы иммуногло- . ■ ,булиноз. Было показано, что при различных болезнях у.человека ' преобладают и различные аллотипы иш^дпглобудиьрв. Причем, отмечается взаимодействие,ыевду некоторыми .антигенами НЬА и '•■ аллотипами иммуноглобулинов { \-Jkiili гуАып 6', и соавт.,1980; 1961; 'ИГгсе-х. М, ,1986; Тл1 ¿ в; и соавт., 1986; икИ-/ Ып^Ллгп , рлорег± 2>. ,1986). Однако, при туберкулезе таггаэ работы не проводились. .■;■■". " : ; :

Цель работ. В связи с вышеизложенны.«, целью настоящей работы было изучение роли генов класса I и П и генов, кодирующих генетические варианты аллотипов иммуноглобулинов в контроле силы иммунного ответа на антигены микобактерий и сопротивляемости к туберкулезу.

Задачи. В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:

1. Изучение ассоциаций HLA-A,-R,-C hDR антигенов и гап-лотипов B/DR с заболеванием туберкулезом в различных популяциях, населяющих СССР.

2. Изучение распределения аллотипов иммуноглобулинов у больных туберкулезом и здоровых лиц в различных популяции, населяющих СССР.

3. Изучение связи HL A-D R антигенов и гаплотипов HLA-ByíDR и аллотипов иммуноглобулинов с течением туберкулеза.

4. Изучение сцепления антигенов класса П и аллотипов иммуноглобулинов с туберкулезом методом семейного анализа.

Изучение уровня клеточного и гуморального иммунного ответа на антигены аикобактерий у больных туберкулезом, носителей различных антигенов HL А класса П и аллотипов го^уно-глобутинов. .

6. Анализ механизмов реализации действия генов HLA и генов,контролирующих аллотиш иммуноглобулинов, в реакциях на микобактерии туберкулеза и в патогенезе туберкулеоной инфекции.

Научная новизна. В результате проведенных исследований впервые было установлено, что в разных популяциях среди населения СССР, заболевание туберкулезом положительно ассоциируется с разными антигенами лонусов НЬА-А,-В,-С и с одним и тенге антигеном локуса HLA-DR С DB2), а таккг. с гаплотипами

НЬА-В/ГЧ, включающих антиген НЬА-СЙ2 (в первую очередь Н1лА-В72ЭР2, НЪА-В'^^Зб 1?К2). Это положение лодтвервдается предпочтительной передачей антигена НЬ/-1>1?2'от больных родителей больны/ детям в семьях больных туберкулезом. Такие впервые установлено, что заболевание туберкулезом ассоциируется в исследованных модуляциях с определеннши аллотитами иммуноглобулинов. Показано,что течение туберкулеза может быть различным при разных фенотипах НЬА СОК) и аллотипах иммуноглобулинов. Впервые обнаружено,что носительство антигена НЬА-Х)Е2 может служить прогнозом неблагоприятного течения туберкулеза. Показано,что генотип НЬА и аллотиш ишуноглобулкнов оказывают влияние на уровень специфического противотуберкулезного клеточного и гуморального иммунитета. Таким образом, впервые получены даыше, обосновывающие гипотезу о том, что имеются генетически обусловленные механизмы восприимчивости к туберкулезу у человена, действующие через иммунную систему.

Практическое ¿начшие^ Результаты исследования являются основой д.*я выявления контингентов наиболее угрожаемых в отношении заболевания туберкулезом в силу особегностей их генотипа. В результате проведенных исследований такяе разработаны новые критерии прогноза течения туберкулеза на основании РВ-тишро-, вания.

П£Л£кения_вшосм.ще_на ¿адату^

1. Уровень клеточного противотуберкулезного иммунитета зависит от генотипа НЬА.

2. Уровень противотуберкулезных антител зависит от генотипа НЬА и от носительства того или иного аллотипа иммуноглобулинов.

3. Заболевание туберкулезом ассоциируется в разных популяциях (среда населения СССР) с разными антигенами локусов

HLА-А,-В и -С и с одним и тем se антигеном локуса HLA-DR (DR2), а также с гаплотипаыи HLA-B/DB, включающими антиген HLA-DF2.

4. В семьях больных туберкулезом показано сцепление заболевания с определенными гаплотипаии HLA и имеет место предпочтительная передача антигена HLA-DR2 от больных родителей больным детям.

5. Заболевание туберкулезом в разных популяциях ассоциируется. с разными аллотитами этшуноглобулккоз.

6. Течение туберкулеза и эффективность его лечения различаются при разных генотипах HLA и аллотипах иммуноглобулинов.

7. Обнаружение антигена HLA -DE2 может слукить прогнозом неблагоприятного течения туберкулеза.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 28 работ.

Апробация_^с£едтащи. Материалы диссертации долояены на Всесоюзной конференции "Иммунология и иммунопатология туберкулеза" (Москва, 198?), на конференции "Актуальные вопросы ишу-нолоп.л* (Краснодар, 1983), Всесоюзной конференции "Методология, организация и итоги массовых иммунологических обследований* ( Ангаре к, 1987 ), на X Всесоюзном съезде фтизиатровЫаку, 1987), 4-ом Всесоюзном симпозиуме "Генетические маркеры в антропогенетике и медицине" (Хмельницкий, 1988), на пленуме правления ВНЫОФ (Иркутск,1988), симпозиуме "Проблемы наслздст-венннсти при туберкулезе и другой легочной и инфекционной пато- • логии" (Винница,1988), Республиканской конференции "Иммунодефицита и НЬА система* (Ташкент, 1989), на I-оы Всесоюзном конгрессе по болезням органов дыхания*(Киев,1990),Всесоюзной конференции "Достижения отечественной фтизиатрии и цульыонологии"(На-бережные Челны,1991),

Внесение. Подучено авторское свидетельство 1470057 на :' изобретение "Способ прогнозирования неблагоприятного течения туберкулеза", нлшла из печати в издительс'тве'Медицина" монография "Проблемы наследственности при болезнях легких™. Материалы диссертации отражены на стендах ВДНХ СССР (Москва,1989), ВДНХ Уз.ССР (Ташкент,1983).

Материалы диссертации вошли в курс лекций для аспирантов и ординаторов ЩИИТ МЗ СССР и внедрены в практику работы ЦКЖГ МЗ СССР, Ашхабадского НИ® и цульмонологии Туркменской ССР, Московской противотуберкулезной больницы Ш "Захарьино".

Содержание. Диссертация включает в себя введение, обзор литературы, главу "Материал и методы", 5 глав собственных исследований, заключение, выводы, список цитируемой литературы (38 отечественных и 319 зарубежных источников) и содержит 228 страниц машинописного текста, иллюстрированного 59 таблицами.

. СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ : Материал и методики

Исследование выполнено:

-на контингенте лиц русской национальности - жителей Москвы и Московской области, не связанных мекду собой родствен. г. Было обследовано 237 больных туберкулезом и 172 донора, служив- .' ших контролем. Среди больных было 126 мужчин и 71 женщина,возраст которых, в основном, колебался от 30 до 50 лет. Аналогич- -кьы образом по возрасту и полу распределялся контингент здоровых дснороз. Среди обследованных больных туберкулеза« легких 190 человек страдали впервые выявленным процессом, 47 - хроническим туберкулезом, у 118 больных был обнаружен инфильтратив-ный туберкулез, у 40- очаговый, у 15 - дкссешнированный, у 60 - фиброзно-кавернозный и у 5 - прочие формы (туберкулоиа,

цирротический туберкулез). Распад определялся у 190 больных,ми-кобактерии в мокроте - у 148 больных.Тгширование проводилось по антигенам локусов HLA-A,B,C и DR у всех больных и здоровых лиц.

В армянской поцуляции (жители г.Еревана и области) обследовано 99 больных туберкулезом (82 мужчин и 17 женщин) и 155 здоровых зиц (68 ыужгон и 87 женщин) в качестве контроля.

Среди больных ф!брозно-навернозным туберкулезом страдало 33 человека,нн^ильтра'дгенш - 60, очапвым - 5 человек. Бактерио-вь-деление было у 49 человек и распад определялся у 50 человек. Ткпирование по антигенам локусов HLA-A,B,C и T>R проводилось у всех больных туберкулезом и здоровых лиц.

В узбекской попуяящи (жители г .Андижана и Андижанского района) обследовано 136 больных туберкулезом и 147 здоровых доноров. Среди больных было 79 мукчин „ и 57 женщин. Среди здоровых было 69 мужчин и 78 женщин. Среди больных, фиброзно-кааер-нозный туберкулез был у 17 человек, ннфильтративный- у 79,очаговый - у 28 че лор «. к. Дис с ем жиро в анннй туберкулез был у 4, гохевр: ? - у 2, туберкуяома - у I и другие формы туберкулеза -у 5 человек. Бакте^.иовыделение определялось у 52 человек,распад - у 64. Все обследованные были типированы по антигенам локупв А,В,С; по антигенам HLA-DR было типирозано 136 больных и 81 здоровый донор.

В туркменской полуляции(жители г.Ашхабада и Ашхабадской области) было обследовано 96 больных туберкулезом (51 мужчина и 45 женщин) и 183 здоровых донора (80 мужчин и 103 женщины). У 25 пациентов определялся фяброзно-кавернозннй туберкулез легких,у 32 человек - инфюьтративный.у 12 -был диссеминированный процесс, очаговый туберкулез бы* у I? человек, плеврит - у ■ 3 и другие формы - у 7 человек, бактериоввдедение определяюсь у 50 человек и у 45 пациентов был распад. У всех обследо-

- ю - ' \

ванных лиц определяли антигены локусов НЬ)А-А,В,С и БИ. |

В казахской популяции (кители г.Алма-Ата и области) было обследовано 92 больных туберкулезом (46 мужчин.и 46 женцлн) и 162 здоровых донора (51 мужчина и III женщин);. Среда больных у 48 человек был фиброзно-казернозкый туберкулез, у 44 че- . лозек был иьфильтративный туберкулез легких. Бактериовыделение определялось у 42 человек, распад - у 83. Типирование по антигенам локусов НЬА-А,В,С проводилось у всех обследовании:: лиц, по антигенам НЬ А- ЬК, у 73 больных туберкулезом и 79 здоровых, лиц.

Семейные исследования Для анализа было отобрано 27 многодетных семей узбекской . . и туркменской национальности. Критерием для отбора семьи еду- • кило наличие в ней по-крайней .мере двух'заболевших туберкулезом сибсов и не менее двух здоровых сибсов,старше,чем самый" ... молодой из заболевших. В 16 семьях было по 2 больных ребенка, в 7 - по 3 больных ребенка и в 4 семьях- по 4 больных ребенка.

Определение антигенов. КЬА : . ' Для типирования всех обследованных в -этой работе лиц по антигенам локусов НЬА-А,-В,-С и ЬЕ комплекса НЬА был использован разработанный Л.Терасаки и Д.Мак-Клелаядом метод, комике- * мент-зависиого лимфоцитолиза (7ё4,<г'4л// Р, Л, . I 1964), который в модификации, предложенной Национальным инсти- , •¡угол здравоохранения США { Ясу Ж и соавт. ,1974) находит, пи- : рокое применение в качестве воспроизводимого и удобного способа : типирования под названием "двухступенчатый ыикролимфоцитотокси- •' ческий тест*. Для ХЖ-тишрсвакия выделяли В-лиыфзци ты,удаляя Т-лимфоцита, образующие розетки с эритроцитами барана,обработанные нейраыинидазой. : " \ .V Больные туберкулезом и контрольная группа доноров были -'••■/

тонированы по П антигенам локуса HLA-A, 18 антигена!.! локуса HL А-В, 5 антигенам локуса HL A-G и по 9 антигенам локуса HLA-DR.

Для типирования по антигенам искусов HLA-A,-B,-C,-DK использованы антисыворотки производства Ленинградского центра типирования органов и тканей Института гематологии и переливания крови МЗ РСФСР, коммерческие сыворотки производства фирм * Bioteit * (Анг.ля) и "&ekíingv'e.^ke. " (ФРГ) и антисыворотки, любезно предоставленные Банком сывороток Национального института здравоохранения США. Для обеспечения надежности типирования при определении каждого антигена использовали от 3-х до 4-х антисывороток анти-HLA.

Определение аллотипов иммуноглобулинов Для определения генетических маркеров иммуноглобулинов использовали стандартный тест ингибиции гемагглйтинации в микромодификации (Ул/% Loqhem Е. ,1978). Человеческие эритроциты группы крови О (I), Bj3*2 (cDE /сВ£ ) предварительно сен-сибилкаировали панелью человеческих неполных анти-#А(£>) антител, кото-рые включали специ^чности G1m (1,2,4), G3m(I2) и Км(1). Затем, 5 мкл стандартного реагента (антисыворотки) против £.лотипа иммуноглобулинов инкубировали I час при комнатной температуре (во влажной среде) с равным объемом сыворотки пациента в ыикрошейтах "U "-образной формы. После этого в лунки микроплейтов добавляли по 5 мял 0,2$ суспензии предварительно сенсибилизированных эритроцитов группы крови 0(1) и инкубировали в течение I часа при комнатной температуре во влажной среде. После этого проводилась м-вцроскопическая оценка реакции.

- 12 -

Иммунологическую исследования Иммунологическое обследование больных туо'еркулезом и здоровых лкц вклда: ;ло определение числь Т-лимфоцитов метода; спон-таннсге розеткообраэования с эритроцитами барана (Е-РОЮ, В-лш:фоцитов методом спонтанного розеткообраэования с эритроцитами мгтси (B-РОЮ, оценку функции Т-гашфоцитоз по реакции бласттрансформации ^'¿г.она §ГА (PET на ФГА) функции В-лкмфоцитов по уровню иммуноглобулинов в сыворотке крови(1^6, I^A, I<jM) методом радиальной имыунодиффузии, специфического клеточного иммунитета по реакции бласттрансформацш на РР1> (РБТ на FPD ) и специфического гуморального иммунитета по уровню противотуберкулезных антител в реакции пассивной гемаг-глютинация (все методы в модификациях, описанных М.М.Авербахом и соавт.,1984). Дополнительно у части больных изучали специфическую функциональную активность Т- и В-лкмфоцитов по синтезу ДНК лимфоцитами, инкубированными с РРЗ) , и по определению урозкя IgG антител методом ША.

Статистическая обработка данных Статистическая обработка полученных динных проводилась с помощью методов и формул, применяемых в большинстве лабораторий для поиска ассоциаций болезней с антигенами HLA {МL-ui Retai,lJ!Q\ Певницкий Л.А.,1907) 'с использованием критерия Х^ с поправкой на непрерывность для малых выборок .

где: а- число больных с данным антигеном, в -тело здоровых с данным антигеном, с -число больных с другими антигенами, d -число здоровых с другими антигенами

/\/-а+Ь +с

оо - QÁ • гг. CAzJ- . Р • ргЛ-М. ) • F

6-с > th~ ая h > ^-щЩГрур

где F - частота антигена у больных.

Ст^ти тическая обработка для гаплотипоз HLA и аллотипов иммуноглобулинов проводилась теми же методами.

Статистическую обработку иммунологических данных гроводили по стандартному критерию Стьюдект^ (Пяохикский К.А.,1970).

Полученные результаты и их обсуядекие

Антигены HL А.гаплотипы HLA-B/DR и туберкулез в различных популяциях В результате популяционного анализа были обнаружены

статистически достоверные различия в частоте встречаемое "и ряда антигенов НЪА у больных туберкулезом и здоровых лиц в различных популяциях (табл.1). Причем, обнаружены отличия в распределении антигенов локусов HL А-А,-В,-С в различных исследованных популяциях. В то se время, so всех исследованных популяциях у больных туберкулезом была повыпена и понижена частота встречаемости одних и тех же антигенов локуса HL A-J3R( DR2 и DE3 соответственна) хотя и с разной степенью статистической достоверности. Сравнивая величину значений HR,EF,PF для разных антигенов HLA можно сделать вывод о наиболее сильной положительной ассоциации с заболеванием туберкулезом антигена HLA-Х>Р2 и наиболее значительной отрицательной ассоциацией с туберкулезом антигена HLA-DP3 по сравнению с другими ьк^игенами комплекса НЬА.

Эти данные позволяют,во-первых, высказать^-предположение, . что "истинной" является ассоциация заболевания туберкулезом с антигенами DR-локуса, а маркерные антигены других локусов выявляются за счет гаметной ассоциации. Во-вторых, поскольку в локуса HLA-DR предполагается наличие генов иммунного ответа,

Таблица I

Частота встречаемости антигенов НЬА у Зольньос туберкулезом и здоровых; лиц разной национальности

Националь- Анткге- Частота антигенов 0

ноГть ны ,---------* ftR Pf

ность HU больные здоровые

_____ -Q-g^Q- - ~rf~fgg ~5~Q~ ~0~085

BI7 0,1489 0,0640 5,21 2,56 0,091

русские В22 0,0496 0,1047 3,98 0,45 0,057

J>R2 0,4468 0,2384 14,25 2,38 0,27

DK3 0,2128 0,3314 6,04 0,55 0,15

AI Ö,4747~ "oT^65 ~ "l9,Ö6~3747 "оТз4

Cw4 0,2020 0,0129 25,00 19,37 0,19

ашяне BI2 °'2823 °'1226 9,25 Z'82 °'18

^ Bw35 0,3030 0,1355 9,50 2,77 0,19

DSZ 0,3535 0,1742 9,58 2,59 0,22

№3 0,1818 0,4000 14,30 0,33 0,2f

BI2 0,1471 0,0408 8,33 4,05 0,11

узбеки D52 0,3676 0,1875 6,21 2,36 0,21

DR3 0,1029 0,2099 3,91 0,43 0,12

BI2 0,Ш6~ ~0Т0656 ~ ~1~41 ~1~8~ ~0~05

туркмены.-; PR2 0,3750 0,2114 7,60 2,15 0,20

DR3 0,2188 0,37X6 6,08 0,47 0,20

А2 0,5435 0,3827 5,52 1,92 0,26

A3 0,0869 0,2469 8,78 0,29 0,18

казахи 814 °'1739 °'0617 6'86 3'2° °'12

' В35 0,2609 0,1358 5,37 2,25 0,14

-DK2 0,4521 0,1139 20,04 6,4 0,38

DS3 0,2739 0,4684 5,32 0,43 0,27

- 15 -

мояно предположить,что гены комплекса НЬА оказывают влияние на восприимчивость к туберкулезу цутем взаимодействия иымуно-каилетеитных клеток и в конечном итоге регуляции силы иммунного ответа на микобактериальные антигены. Учитывая, что 1Ж-ан-тигены проявляются на В-лимфоцитах, следует иметь в виду, что црактически отсутствуют данные о том, что гуморальный иммунитет оказывает какое-либо защитное действие при туберкулезной инфекции. Более того, вероятно, некоторые виды антител (антипротеиновые) оказывают негативное влияние на взаимодействие микс-бактерий и ыакроорганизма (Авербах М.М. и соавт.,1980). С этих позиций можно предположить, что ген ВН детерминируя высокий уровень противотуберкулезных антител, таким образен меже* оказывать влияние на восприимчивость к заболеванию, В тех случаях, когда речь идет о генетических механизмах, детерминируемых генами ВБ-локуса и оказывающих положительное влияние на резистентность к данной инфекции можно предположить,что гены Ш-локуса действует через систему моноцитов-макрофагов.

Поьмыо изучения ассоциации отдельных антигенов НЬА с заболеванием туберкулезом определенный интерес гредставляет исследование ассопадай этого заболевания с гаплотипами НЬА. Это связано с тем, что некоторые антигены разных локусоз имеют тенденцию к более частой совместной встречаемости по сравнению с теоретически ожидаемой. Иными словами, для антигенов НЬА характерно явление неравновесного сцепления.

Как показали исследования, с туберкулезом положительно ассоциированы гаплотипы в состав которых входит антиген НЬА- Г>К2. Это гаплотипы НЬА-В?ПВ2, НЬА-В12Г>1?2, НЬА-В^35Г>Я2, НЬА-ВхХ>К2 и .некоторые другие. Наиболее значительная ассоциация с туберкулезом,как правило, показана для гаплотипов «включающих

антиген HL A- DK2 и определенный антиген локуса H.LA-B, такие ассоциирующий с заболеванием туберкулезом в данной популяции. При этом происходит как бы суммация влияния каждого отдельного антигена на восприимчивость к туберкулезу: например, это ггтлоткпы HLA-B12DE2 в узбекской популяции, гаплотишы HLA-B12DR2, НЬА-B'w 35т>Р2 в армянской популяции, гапл.тип HI.A-B7DR2 в туркменской популяции,гаплоткп HLA-Bw35l>P2 в казахской популяции.

В то же время, гаплотипы на основе антигенов HLA-DR3, HLА-ВЕ5 и HLA-PR7, возможно, играют определенную "защитную" роль в отношении туберкулезной инфекции, хотя полученные результаты в данном слугае неоднозначны.

Учитывая вышеприведенные данные, для формирования групп риска в отношении заболевания туберкулезом в каждом регионе страны, необходимо установление антигенного профиля как больных туберкулезом, так и здоровых лиц в данной местности по антигенам всех известных локусов системы HLA. Только полная картина фенотипа HLA индивида поможет учесть все возможные совместные влияния антигенов HLA на чувствительность или резистентность к туберкулезной инфекции и будет содействовать правильному формированию групп риска и направленной профилактике в этих группах.

Аллотиш иммуноглобулинов и туберкулез в различных популяция^ В результате тонирования по аллотипам Gm пяти поцуля-ций, населяющих различные регионы Советского Союза и принадлежащих к разным национальностям, можно отметить различие друг от друга в частотах встречаемости аллотипов GIm (1,2,4), G3m (12) и Km(I) в каждой исследованной поцуляции. В то же время частоты встречаемости аллотипов иммуноглобулинов и фенотипов Gт в

таких родственных популяциях как узбекская, туркменская и ка -захаская наиболее близки по своим значениям друг другу. При сравнении частоты встречаемости аллоткпов иммуноглобулинов I! фенотипов у больных туберкулезом и здоровых лиц в большинстве исследованных популяций не было выявлено значительных различий между сравниваемыми группами.

В то не время в результате напих исследований было обнаружено,что во всех исследованных популяциях у больных туберкулезом была повышена частота совместной встречаемости антигена НЬА-х>1?2 и аллотипоэ (4) и 63т (12) (таблица 2). Величина относительного риска для индивидоз, несущих одновременно антиген НЬА-Г)Р2 и аллотипы Б1т (4) С3ш(12) достаточно велика и она выше, чем при носительстве только антигена НЬ А-052 (таблица 3).

Таблица 3

Величина ЕЙ для носителей разных генетических маркеров у представителей разных национальностей

русские армяне узбеки туркмены казахи

Только НЬ А-ЪВ2 2,58 2,59 2,36 2,15 6,40

НЬ А- ВВ2 + 81т(4)

3,61 7,67 16,67 18,00 7,81

Помимо этого, каждая изученная популяция имела свои особенности в частоте совместной встречаемости антигена НЬ А-ЙЙ2 и аллотипов иммуноглобулинов. Так, у больных туберкулезом русской и армянской национальности, носителей антигена НЬА-2>К2, достоверно чаща встречался фенотип С1лп(+1)С1/эт(+4) по сравнение с 1)Р2-позитивньми здоровыми лицами. Кроме того, у

Таблица 2

Частота совместной встречаемости антигена HL A-DR2 и аллотипов и фенотипов Gm у больных туберкулезом и зд.сровых лиц разной национальности х/

Аллотипы и _ Рвение____армяне___

фенотипы Gm больные здоро- больные здоровые вые

узбеки туркмены казахи

больше здоро- больные здоро- больные здоровые вые вые

Gfm«) 0,3103 0,6429

GlmUt) 0,7143 0,4091 0,6846 0,5000 0,9615 0,6000 0,9310 0,4286 0,8627 0,4444

ЬЪМЧ) 0,7143 0,4091 0,8846 0,5000 0,9615 0,6000 0,9310 0,4286 J.8627 0,4444

0,2063 0,5000

ЬЫЧЮтМ 0,5079 0,1818 0,53^5 0,0833

G{m(*l)G1mW 0,0385 0,4000 0,1379 0,5000 0,1379 0,5555

I- '.

со

х/ Разница во всех случаях статистически достоверна.

больных туберкулезом русской национальности, носителей антигена HL A-DP2, была снижена частота встречаемости фенотипа GLt(-I)SI/m(-2) по сравнению со здоровши лицами носителями этого ке антигена. Также было обнаружено, что у больных тубер-кулезоы узбекской, туркменской и казахской национальности была статистически достоверно понижена частота встречаемости фенотипа GIm(+I )GIm(-4) при носительстзе антигена HLA-DK2. Кроме того, у ВЕ2-позитивных лиц туркменской национальности больных туберкулезом бета понижена частота встречаемости аллотипа GlmCD по сравнению со здоровыми 2Ж2-позитивннми лицами.

Не было обнаружено разницы между больными "уберкулезом и здоровыми лицами в частоте совместной встречаемости антигена HLA-DR3 и аллотипов и фенотипов Sir?.

Таким образом, в результате изучения распределения аллотипов иммуноглобулинов у больных туберкулезом и здоровых лиц в различных популяциях, обнаружены одинаковые закономерности в частоте совместной встречаемости антигена HL A-DR2 и аллотипов 8м в близких по происхождению популяциях (русской и ар-иянской с одной стороны и узбекской,туркменской и казахской с другой), а также выявлена общая закономерность в распределении г -лотипов GIm(4) и G3m( 12) у больных туберкулезом по сравнению со здоровыми лицами во всех исследованных популяциях.

Антигены HL А, гаплотипы HL A-B/D R, аллотипы иммуноглобулинов и течение туберкулеза На примере больных туберкулезом русской национальности было изучено влияние антигенов HL А.гаплотапов HLA-B/DR и ажлота--пов иммуноглобулинов на течение туберкулеза. Для этого больные (141 человек) были разделены на две-груша о благоприятной (65 человек) а неблагоприятной (76 человек) динамикой туберздг-

лесного процесса. Благоприятной динамикой ми считали те случаи, когда инфильтрагивные явления рассасывались, полость распада закрывалась и микобактерии в мокроте не определялись в ■ срок до I года с момента начала лечения. Неблагоприятным тече-. нием мы считали те случаи, когда процесс переходил з фиброзно-казернозную £ -рыу или когда несмотря на регулярное лечение в течение года бактериовыделение и/или распад и инфильтрация сохранялись.

Не было обнаружено различий в распределении антигенов локусов НЬА-Л,В и -С у больных с благоприятной и неблагоприятной динамикой туберкулезного процесса. В то же время при сравнении распределения антигенов лскуса НЬА-£>В было обнаружено,что у больных с неблагоприятной динамикой туберкулезного процесса значительно повышена частота встречаемости антигена НЬА-3)К2 по сравнению с больными с благоприятной динамикой туберкулезного процесса (57,9$ против 29,2$). Все остальные антигены локуса НЪА-ОК встречались практически с одинаковой частотой в сравниваемых грушах больных туберкулезом.

У этих групп больных было также проведано сравнение частот встречаемости аллотипов и фенотипов иммуноглобулинов. Эти даннне представлены в таблице 4. На основании сравнительного V анализа можно сделать вывод, что частота встречаемости большинства аллотипов и фенотипов б™ у больных с неблагоприятной динамикой туберкулезного цроцесса практически не отличается от таковой у больных с благоприятной динамико;. туберку^-зного процесса. Исключение представляет фенотип 61ги(+1)СХт (+4) частота встречаемости которого достоверно повышена у больных с неблагоприятной динамикой туберкулеза (36,8^ против 20,у лиц с бла-. гоприятнш течением заболевания).

Таблица 4

Частота встречаемости аллотипов и фенотипов Gm у больных туберкулезом с разной динамикой процесса

Аллотилы и фенотипы Gm

Благоприят- Неблаго-ная приятная

3 том числе носители ОЛп

благоприят- неблаго-ная приятная

Glm(I) GIm (2) GIm (4) G3m (12)

0,5077 0,3846 0,6769 0,6769

GIm (+I)GIm(+4) 0,2000х

GIm (+I)GW+2) GU+ii! 0,2000

0,6053 0,4474 0,7V63 0,7763 0,3684х

0,2895

0,6667

0.-38I0

0,5238х

0,5233*

0,2381х

0,0952х

0,8571

0,6190

0,SG95X

0,8095х

0,6429х

0,4286х

^Разница статистически достоверна,

Изучение совместного влияния антигенов локуса НЬ А-ТЖ и аллотипов 5т на течение туберкулеза также выявило различия между сравниваемыми грушами больных с разным течением заболевания (см.таблицу 4).Так, у лиц с неблагоприятной динамикой туберкулеза была статистически достоверно повышена частота совместной встречаемости антигена НЬ А- Ъ Р2 и ряда аллотипов иммуноглобулинов: &1гм(4) и СЗгл(12) (80,95? против 52,4$ у лиц с благоприятной динамикой). Также статистически достоверно чаще встречались совместно с антигеном НЬ А- ПР2 и фенотипы вт : вЫС+ШЬгМ), 5Ьп(+1)СЫ+2)е1ж(+4) (64,2$ цротив 23,8?5 и 42,9!? против 9,96 у лиц с благоприятной динамикой соответственно).

У носителей антигена НЬА-ЕЕЗ с различной динамикой тубер-

нулеза не выявлено резких различий в распределении по группам больных аллотппоз и фенотипов 6т . Хотя,у лиц с благоприятной динамикой процесса несколько чаще встречался антиген НЬА-ХЖЗ совместно с аллотиг.ом КмШ и фенотипом С1т(+1)б1т(-4) (50,0% против 31,2% и 28,6/5 против 6,3^ у больных с неблагоприятной динамикой туберкулезного процесса согтветственно, однако эта разница не была статистически достоверной). .

Также обнаружено, что при совместном носительстве антигена НЬА-В..2 и фенотипа вЬ™ (+1)б1т(+4) относительный риск в отношении развития неблагоприятного течения туберкулеза.резко возрастает (ЕК= 5,76}, тогда как при раздельном носительстве этих маркеров относительный риск ниже (ЕЕ =3,33 - для антигена НЪА-£>Б?2 и №=2,33 - для фенотипа С1т(+1)Ит(+4) ).

Следовательно, можно сделать вывод, что взаимодействие определенных антигенов Н1.А с аллотипами иммуноглобулинов может оказывать влияние на характер течения туберкулезного процес-. са.

Исходя из результатов этих исследований, нами было сделано предположение,что наличие антигена НЬ А-М2 у пациентов являет-* ся неблагоприятный прогностическим признаком,то есть может оказывать отрицательное влияние на течение туберкулезного . ; процесса. ■ ' •*

Для подгвервдения этого предположения НЬА-РР-типированию до начала лечения дополнительно подвергли 96 впервые выявленных больных туберкулезом (все русской национальности), затем у все:) пациентов изучали динамику туберкулеза и в зависимости от втог( все больные были разделены на две группы с благоприятной и не-; благоприятной динамикой процесса (в соответствии с вышеописан-, ными критериями).

Результаты Ю_)А- 1>1?-типирования этих больных представлены

в таблице 5. В результате ретроспективной оценки результатов типирования было подтверждено,что у лиц с неблагоприятной динамикой существенно увеличена частота встречаемости антигена НЬА-1)1?2 (74,2$ против 34,4$ при благоприятной динамике). Цри оценке влияния НЬ Л-М?-генотипа на течение туберкулеза было установлено, что у больных-носителей антигена НЬ>А-1>1?2 бактериовыделение к 6 месяцам прекратилось только в 16,7% случаев, тогда как у остальных пациентов - в 89,7$ случаев(табли-ца 6). В течение первого года лечения полости распада у носителей НъА-1>1?2 закрылись в 46,2$ случаев, а в остальной группе - в 87,7$ случаев. Через 1,5-2 года было констатировано, что процесс перешел в фиброзно-кавернозный в 10,3$ случаев у больных-носителей антигена НЬА-1>Р2 и только в 1,8$ случаев у остальных пациентов.

Поскольку замедленное закрытие полостей распада,прекращение бактериоввделения в более отдаленные сроки и тал более переход процесса в фиброзно-кавернозную форму являются критериями неблагоприятного течения болезни,Т> 5-типирование уже в ранние сроки заболевания может являться прогностическим признаком,указывающим на высокий риск неблагоприятного течения тубер улезного процесса.

Семейный анализ сцепления генов комплекса НЬА и генов контролирующих аллотилы 6м с восприимчивостью к туберкулезу

Следует отметить, что поцуляционные исследования не дают исчерпывающего представления о роли системы НЬ А в восприимчивости к туберкулезу. Дополнительная информация по этому вопросу может быть получена при изучении семей,в которых имеются больные туберкулезом,Так,при наблюдении в течении ряда лет за семьями,в которых уже были случаи заболевания туберкулезом,

Таблица 5

Частота антигенов НЬ А-2?К - яокуса у впервые выявленных больных туберкулезом с различной динамикой процесса

Антигены

Частота антигенов благоприятная динами** неблагоприятная динамика

А =65 п=81

йм 0,2303 0,1290

тх 0,3533х 0,7419х

тъ 0,24Ь2 0,1932

тч 0,1846 0,2258

ЬкБ 0,2462 0,1613

те 0,0462 0,0645

тъ 0,1077 0,0645

0,0462 0

х2»И,16; рж 0,001; Р„-с 0,04; Ш =5,25 С

Таблица 6

Эффективность леченая у лиц с разным фенотипом НЬА

2ЭЕ2+-

16,956 46,255 10,36

2>Е2-

89,7« 87,'!%

1М

Прекращение бактериовыделения к б месяцем

Закрытие полостей распада в течение I года

Переход процесса в фиброзно-казернозный

обнарукено, что риск заболеть у детей из этих семей резко возрастает и ото обусловлено но только эпидемиологическими,но и генетическими факторами ( Кл/пгЛл. К. ¿Ь аС . ,1980,1903). Показано., также,что конкордантность в отношении заболеваемости туберкулезом значительно выше у монозиготных близнецов по сравнению с дизиготними ( СсуплЬск 6. ,1978).

Поэтому были проведены исследования по обнаружению сцепления генов системы НЬА и заболеваемости .•уберкулезом в многодетных семьях. Для анализа было отобрано 27 семей узбекской и туркменской национальности. Сегрегационный анализ проводили по нескольким параметрам (таблица 7).

Таблица 7

Вероятность передачи родительского гаплотита НЬА больньм туберкулезом снбсам

Сегрегационный №№ анализ по: семей

2Р

< ,2

а )ин скицированному 1-16,18,19,

родителю 23,24,26

б)обоим родителям 1-27

в)здоровому родителю

1. оба родителя 17,20-22, здоровы 25,27

2.другой родитель 1,2,3,7,8, болен туберку- 15,16,18,23,24, лезоы 26

64 38 33,5 19,41 0,001

92 65 56,5 12,43 г 0,001

16 14 II 0,21 >0,05

12 13 12 0,02 > 0,05

Установлено, что з семьях, где хотя бы один из родителей болел туберкулезом при проведении сегрегационного анализа по Соггю.чу родители значения 5Т >2f ,что говорит о нерандом-ноа распределении гаплоткпов у больных сибсов (х^=19,41; р.< 0,001). При включении в анализ обоих родителей такте значена г. (x^=I2,43; р<0,01). Это таксе показывает, что больные сибсы имеют идентичный гаплотип с больным родителем более часто,чем ожидается при рандошоы распределении. Когда сегрегационный анализ проводили только по здоровым родителям значения и были равны, что говорит о рандошоы распределение гаплотипов HLA.

Таким образом, семейный сегрегащонный анализ показал, что совместно с генами HLA передается по на-:ледству фактор, ответственный за чувствительность к туберкулезу.' Этот генетический фактор, вероятно находится в системе HLA.

Это предположение подтверждается анализом распределения гена HLA-DR2 в исследованных семьях (таблица 8). Из II семей информативных для 1>В2-сегрегации, в которых хотя бы один из родителей млел HLA-DR2, 4 семьи было с одним инфицированным родителем (из них в 2-х семьях здоровый родитель -DB2+) и 7 семей было с обоими больными родителями. Наследование в этих ■: семьях сильно отличалось между больными сибсами и их здоровыми • братьями и сестрами. Передача DE2 к больным сибсам от больных родителей обнаружилась в 27 случаях из 31 возможного. В то же время этот антиген передавался от больных родителей к здоровым детям только 11 раз из 24 возможных случаев. Таким образом, налицо преимущественная передача гаплотнпа, несущего DR2 от больных туберкулезом родителей больным детям и сцепление чувствительности к заболевании туберкулезом с HL A-DÍ?2.

Таблица 8

DR - генотипы семей больных туберкулезом,информативных для сегрегационного

анализа по DR2

I оеией Отец Мать С. и б с ы

DR- DR- DR - генотип

генотип генотип Здоровые

Больныо

4/6х . 2/8 4/2;6/2; 4/8;4/8 1

2 2/5х 1/7 2/1;5/1 2/1;5-7

4 2/3 4/7 2/7;2/тг;2/7;ЗЛ 2/4;3/4 1

5 2/7 '6/8 2/6; 2/6 2/8; 7/6

ô 2/1 2/5х 1/5;2/5;2/5; 1/2 . 2/2;1/5

9 2/3 5/8 2/5;2/Ь;2/5;2/5 2/Ь;3/5;3/5 '

10 2/6 1/3 2/I;2/I;2/I 2/1;2/3;6/3;6/1

II 2/3 2/5 2/5;2/b;2/5 2/5;3/2

12 2/7 2/5 7/2;7/2;2/2 • 2/5;2/5

13 1/5 2/7 5/2;1/7 5/2;1/7;5/7

16 3/7Х 2/5 7/2;3/5;3/2;7/2 3/2;7/5

х^Здоровые.

Таете у частя исследованных семей (16 семей) были определены аллотиш 61т(1,2,4),встречающиеся с большей частотой У больных туберкулезом. Однако, на основании подученных данных нельзя сделать вывод о наличии связи иезду определенными вт -гапло-типами и восприимчивостью к заболеванию туберкулезом, поскольку, хотя и была отмечена тенденция к нерандоыноыу распределению -гаплотипоз з семьях, где хотя бы один из родителей болел туберкулезом, разница между сегрегационными характеристиками 2 Г и

о

не была статистически достоверной (х =5,20; р>0,05 ;при 2

семейном анализе значения х вычисляются при двух степенях свободы). При включении в анализ обоих родителей также значения

,однако,эта разница также не была статистически достоверной. Эти данные показывают,что больные сибсы имеют идентичный бм-гаплоткп с больными родителями только незначительно чаще, чем при рандомном распределении.

Таким образом, проведенные семейные исследования показали сцепление чувствительности к заболеванию туберкулезом с НЬ А-гаплотипами, несущими,в частности, антиген НЬА-1>К2 и преимущественное наследование больными сибсами (по сравнению со здоровыми) гаплотипов, несущих антиген НЬА-ОК2 от больных туберкулезом родителей. Сцепления чувствительности к заболеванию туберкулезом с исследованнши 6т-гаплотипами показано не было.

Уровень гуморального и клеточного иммунитета у больных туберкулезом в зависимости от распределения у них антигенов класса П и ьллотипов иммуноглобулинов . Среда многообразных функций комплекса НЬА одной из основных является регуляция иммунного ответа. В связи с этим особый ннтерес исследователей вызывает антигены локуса НЬЛ-ЗК,поскольку в этом лолусе находятся гены иммунного ответа на различные,

в частности, бактериальные антигены. Многочисленными исследованиями установлено,что имеется определенная взаимосвязь генотипа HLA и клеточного и гуморального иммунного ответа (Алексеев JI.П.,1985а,б; Сочнев A.M. и соавт.,1987). Однако, при туберкулезе эти вопросы практически не изучались. 3 то se вршя отмечено, что главным защитным феноменом при туберкулезе является клеточный иммунный ответ, а противотуберкулезные антитела (их высокий уровень) могут споссбстзовать-развитию.и прогресси- ■ ров анис тубернулеэногс-:фоцесса (Авербах Ы.Ц. ,1976}. Обнаружено такие, что у туберкулиноотрицательных лиц носителей HLA-B7 иМ2 подавлена реакция б лас ттра не формации на РРЛ (Аннадурды-. ев С.Д. и соавт. ,198§; Поспелов Л.Е. и соавт.., 1986)..-Имеются также данные, указывающие:на влияние аллотипов иммуноглобулинов на уровень гуморального'иммунного ответа на бактериальные анти-TemiWhili/yAayn&eiae. ,1960,1986)..

В связи с этим^помимо определения иммунного.статуса.у больных туберкулезом и сравнения его с гашунологическими- параметра-ыи здоровых лиц, ыы попытались выяснить зависимость иммунного статуса больных туберкулезом от генотипа HLA. Поскольку попу-ляционныыи исследованиями было показано, что антиген HLA-PR2 положительно ассоциируется с заболеванием туберкулезом и неблагоприятно влияет на течение болезни, а антиген HLiA-T>R3,Hao6o-рот,отрицательно ассоциирован с заболеванием туберкулезом, ыы ■ попытались:выяснить связь между носительством каждого из этих антигенов-с иммунологическим отагуссм.пациентов. Для этого было отобрано 18 больных туберкулезом, носителей антигена HLA-DR2 и 18 больных туберкулезои, имевших другой HLA-DR фенотип,среда которых было обнаружено 6 человек имеющих антиген HLA -£>R3.

8 таблице 9 приведены.результаты изучения некоторых иммуно-

Таблица 9

Иьмунный статус больных туберкулезом и НЬА ( Ой) генотип

Б о . льны е Здоровые

М?2+ ТЕ2- скз+ : тез- Всего

л=18 п=18 • п. =6 п=30 гх=36 п.=30

(г/л) 2,49+ 0,17" 2,89+ 0,53е о2;!* 2.69+ 0,11 2,2%0,Ю

¿=3,07; р*0,01

ци 1,69+ 1,6% 1,64* 1,69* 1,27*0,06

(.г/л) 0,11 0,11 0,34 0,07 0,07

* =4,66; ; р* 0,001

14,05* II,49* 13,51* 12,63+ 12,77* 11,86*0,54

(т/л) 0,94 0,76 2,40 0,57 0,50

Ь =2,12; р ¿.0,05

В-РОК 18,39* 15,11* 18,8% 16,3% 16,75* 10,72*0,49

<*) 1,23 1,01 3,38 0,74 0,66

* =2,06; р^0,05 ^ »7,34) ; р<0,001

РБТ на 59,44± 60,61* 68,3% 58,27* 60,0% 74,40*3,36

еГА(^) 3,96 4,04 12,21 2,65 2,37

¿=3,48; р< 0,001

Е-РОК 49,44* 60,17± 63,50* 53,07* 54,81± 63,21*2,87

(%) 3,30 4,01 11,26 2,41 2,15

¿=2,07; р л 0,05 * «2,34; р .с 0,05

РБТ на 1,72* 6,91* 8,5% 3,41* 4,31* 3,2%0,15

РР1> (55) 0,12 0.48 1,51 0,16 0,18

* -10,48 ; р<0,001 ¿»3,37 ; р^О.О! ¿=4,70; р* 0,001

РИГА 5,61* 4,7% 5,50± 5,2% 5,31* 2,41*0,11

ТИТ 0,37 0,32 0,97 0,2* - 0,21

¿ -12,23; р^.0,001

ра)

логических показателей у больных туберкулезом и здоровых лиц. Как видно из таблицы уровень иммуноглобулинов и у больных туберкулезом был статистически достоверно повышен по сравнению со здоровыми лицами, а урсвенй^антител был повышен лишь незначительно. Повышенному уровню иммуноглобулинов -соответствовало и повышенное число В-клеток (оцениваемое по реакции розет-кообразования) по сравнению с контролем. Как доказали исследования, количество Т-лимфоцитов (оцениваемое в тесте Е-РОК) было ниже у больных туберкулезом по сравнению со здоровил контролем. Функциональная активность Т-клеток,оцениваемая по проценту блас-тов в реакции бласттрансформации на поликлональный митоген СГА, у больных туберкулезом была снияена по сравнению со здоровыми лицами. В то же время, специфическая функциональная активность Т-клеток, оцениваемая в РВТ на РРЛ) .наоборот, была статистически достоверно повышена. Уровень специфических антител к РР£> , оцениваемый по титру антител в реакции пассивной гемэгглютина-ции у больных туберкулезом также был повышен по сравнению со здоровыми лицами.

При выяснении влияния НЬА-2>К генотипа на изученные иммунологические показатели обнаружено,что уровень у носителей антигена НЬ А- 1>Р2 был повышен, по сравнению с неносителями этого антигена. У носителей антигена НЬА-ВИЗ уровень и также был несколько повышен по сравнению с неносителяыи данного антигена. Влияния указанных антигенов локуса ИЬА-ВЕ на неспецкф<ческув ^уикциональнуа активность Т-клеток (РБТ на $ГА)не было обнаружено. С другой стороны у носителей НЬА-РК2 была резко понижена специфическая функциональная активность Т-лимфоцитов по сравнению с больнши ке несущими антиген НЬА-Б1?2. В то же время у носителей антигена НЬА-БЕЗ,наоборот, специфическая активность Т-лкмфогдетов была повышена по срявке-

кию с неиосктелями £>ВЗ. Такке у носителей антигена Л32 число Т-клеток было нике ло сравнению с носителями других антигенов локуса Ш_-А-3)й (статистически достоверно),а у носителей антигена ПЙЗ, наоборот,число Т-клеток было повышено по сравнению с №3!-) индивидами (недостоверно). Хотя во всех группах больных число 3-клеток, оцениваемое по реакции розеткообразования было повшено, наибольшее количество 3-клеток было найдено у носителей антигенов НЬА-Х)52 и НЗА -ТНЗ ло сравнению с лицами, не имеющими этих антигенов. На титры специфических антител (РПГА) такие влиял генотип. Так, уровень специфических антител у носителей ситигена НЬА-1)В2 был повышен по сравнению с неносителями этого антигена. У носителей антигена 1>КЗ уровень специфических антител также был вше по сравнении с неноеителя-ыи этого антигена (в 0601а случаях статистически недостоверно).

Для более углубленного анализа мы сопоставляли уровень клеточного и гуморального противотуберхухезного иммунитета у больных с инфильтративной и фиброзно-кавернозной формами туберкулеза с носительством того или иного антигена локуса НЬА-дЖ и аллогита 6т иммуноглобулинов с использованием более четких количественных критериев, которыми являются оценка синтеза ДНК лимфоцитами, инкубированными с РЙ5 , а такке определение антител методе« ЩА.

Для этого было обследовано 73 больных туберкулезом легких и 155 здоровых лип (контрольная группа). В таблице 10 приведены результаты изучения зависимости уровня специфических антител к РР2> от носительства антигена НЬ А- БК2 при разных формах туберкулеза (острой -инфильтративной и хронической -фиброзно-кавернозной). В результате сопоставления подученных данных было установлено, что у больных тубер^лезом повышен уровень специфических Ц 0 антител к РРЛ) по сравнению со здоро-

Таблица 10

Зависимость уровня специфических антител IgG к FPJ) от носительства антигенов HL A- DK2 у больных туберкулезом (уровень антител I^G приведен в единицах оптической плотности)

Инфильтративный туберкулез

Фиброзно-кавернозный туберкулез

Объединенная группа

У всех больных

Здоровые

DR2+ н=16

0,09

DR2-

" "оТ99±~

0,05

DR2+ h =16

' Ï,3?I '

О,II

DR2-n= IV

" 7,(%

0,07

DR2+ h. =31

' Î.30Î 0,06

DR2-п=42

" ~i7oî±"

0,04

п=73

' 1,13+ ' 0,03

П=157

"оТ 0,01

Й

t- 2,4 р^0,05

i =2,5 р^0,05

i =4,0 р^ 0,001

t =Ю,0 р <0,001

пши лицами (р-^ 0,001). При фиброзно-каверкозном туберкулезе легких уровень специфических антител у больных носителей и поносителей антигена DR2 был вине по сравнению с такими ке группами при шфильтративном туберкулезе легких, однако, эта разница не была статистически достоверна. В то se время у больных туберкулезом носителей антигена HLA-D32 в свою очередь уровень исследуемых антител был вше по сравнении с больными, неносителями антигена DK2. Эта закономерность сохраняется как в обцей группе больных, так и у больных инфильтратив-шы и фибрсзно-кавернозкым туберкулезом легких. Разница в уровнях специфических I^G антител к F?D во всех случаях в сопоставляемых группах была статистически, достоверной. Было установлено такке, что у носителей антигена HL A-jjB3 уровень специфических IgG антител был несколько повышен по сравнению с нено-сителяыи данного антигена. Однако, ¡"та разница не была статистически достоверной.

Поскольку в популяционных исследованиях было показано,что некоторые аллотипы иммуноглобулинов ассоциируются с заболеванием туберкулезом и течением туберкулезного процесса мы также изучали влияние аллотипов иммуноглобулинов на Т-клеточный и В-оеточный (гуморальный) иммунитет у больных туберкулезом. Выло показано, что у Сольных туберкулезом носителей всех исследованных аллотипов был повышенный уровень специфических антител I^S по сравнении со здоровыми лицами, носителями соответствующих аллотипов (разница статистически достоверна). Это,вероятно, вполне закономерно, поскольку уровень специфических'антител вообще выше у больных туберкулезом по сравнении со здоровыми лицами. В то же время,у больных туберкулезом носителей аллотипов Glm (4) и G3«n(I2) уровень специфгаеских антител был несколько вше по сравнению с носителями других адиотипов,хотя

эти различия и ке были статистически достоверными. 3 результате наших исследований также било обнаружено взаимное' влияние аллотипов иммуноглобулинов и антигенов локуса HLA-DR (п частности, 2Ж2) на уровень специфического гуморального иммунитета. Так, у больных туберкулезом легких носителей одновременно антигена HLA-DR2 и аллотипа Glm (4) был статистически достоверно повышен уровень специфических 1^5 интител по сравнению с больными туберкулезом Glm (4)-позитивными лицами,неносителями антигена £>К2 (таблица 10). Поскольку аялотипы Glm (4) и G3m(I2) ассоциированы друг с другом и наследуются совместно, то все сказанное для аллотипа SI™(4) справедливо и для аллотипа G3m(I2).To есть,также у носителей аллотипа G3m(I2) и антигена HLA-BR2 больных туберкулезом повышен уровень специфических LjG антител к FED . Проследить взаимосвязь мезду носи-тельстгом антигена Hl> A- DR2 и фенотипами Gmc одной стороны и уровнем специфических антител Ig G к 3FPD с другой стороны не Представлялось возможным из-за малочисленности сравниваемых груш.З то ке время показано, что носительство одновременно антигена HLA-DB3 и аллотипоя G/n и К™ не влияло на уровень

Мы также попытались, оценить долю влияния генетических маркеров НЬ А- БК2 и 61т (4) на уровень специфических антител к РМ) (таблица И).

Как видно из таблицы, наибольший вклад в поддержании определенного уровня антител вносит антиген НЬ А- DRZ, а аллотип (4) влияет на уровень специфических антител в меньшей степени, хотя совместное носительство этих генетических маркеров оказывает наибольшее влитие на уровень специфических антител в к РРЬ . Так, индивиды ЪЖ—Шт^ и 1>К2(-) (Лт(-4) имеют наименьший уровень противотуберкулезных аититед,

специфических

повышающийся у носителей 1>В2(+)В1т(-4) и наибольший уровень специфических антител к РР£ обнаруживается уГЕ2(-; )51>п(+4)-индивВДОя. Влияние антигена НЬ А- Л ИЗ и аллотипов Ст на уровень противотуберкулезных антител при их совместном носитель-стве не изучался,так как в предыдущем исследовании не было обнаружено эффекта.совместного влияния этих генетических маркеров на уровень 1^5 антител.

Таблица IX

Влияние антигена HL.A-.DR2 и аллотипов б1т(4) на уровень специфических антител 1^(3 к РРР (уровень антител приведен в единицах оптической плотности)

3)1?2(+>В1т(+4) 1>Р2(-)С1№(+4)' 1Ж2(+)б1т(-4) ЮБ2(-)61т(-4)

(I)" ~п=19 ~ ~ ~ ТгТ ~ ~п =22 ТзТ "=5 (4)"п=10~ ~

1,27±0,09 0,97^,06 I,06^0,19 0,94^,10 '

^1-2=2'73' Р-«0»01

Таким образом, изучение гуморального противотуберкулезного иммунитета показало зависимость уровня специфических антител от носительства генетических маркеров - аллотипов иммуноглобулинов С1ги(4)', 63/п(12) и антигена НЬ А-1Ж2. Обнаружено также взаимное влияние изученных аллотипов 6/п с антигеном НЬ А-ВВ2, поскольку при их совместном носительстве наблюдается повышенный уровень специфических антител.

Помимо гуморального противотуберкулезного иммунитета мы изучали состояние Т-клетоиного иммунитета у больных тубердуле-эом в зависимости от гекошил А-£Е( таблица 12). Как видно иа таблица, у больных ту<5ерку»езом повышен специфический цроти-

вотуберкулезкый Т-клеточный шиунктет (оцешзаемый по синтезу ДНК лимфоцитами, инкубированными In. vit го с РРD ) по сравнению со здоровыми лицами (разница статистически достовер-ьа). Тоете, как показали исследования, имеется четкая корреляция функциональной активности Т-лимфоцитов в зависимости от-носительства определенного антигена яокуса HLA-X>î?. Так, у больных туберкулезом, носителей антигена HLA-DB2, была резко снияена функциональная активность Т-лимфоцитов по сравнению, с больными туберкулезом неносителями антигена HLA-DR2.

Таблица 12

Специфическая функциональная активность Т-лимфоцитов в реакции бдасттрянсформации (синтез ДНК Т-лимфоцитами в присутствии PPD ) в зависимости от генотипа HLA у больных туберкулезоы(индекс стимуляции)

Бол ь н ы е Здоровые

DR2+ п=9 ЭВ2- п=10 DR3+ п=5 ■ m Всего п=19 *v=53

8,05+ 30,67+ 40,664. 12,56+ 19,96+ 2,22+

0,96 3,32 8,73 1,02 1,28 0,06

i=6,54; р-й 0,001 ¿=3,20; р-г.0,01 t=13,86; р^0,001

В то хе время, у больных.'туберкулезом носителей антигена НЬЛ-РИЗ, наоборот, была значительно повышена функциональная активность Т-лимфоцитов в реакции бласттрансформации с РР1) по Сравнении с неносителями этого антигена.

Поскольку груша больных туберкулезом, обследованных этим тестом была относительно немногочисленной« проследить влияние генетических маркеров на состояние Т-клеточного иммунитета цри разных формах туберкулеза не представлялось возлонкым.

Бнла такне изучена специфическая функциональная активность Т-лтфоцитов на фене носительства того или иного аллоти-па иммуноглобулинов. В результате исследований не было обнару-г:ею зависимости специфической функциональной активности Т-лммфоцитов, тестируемой по синтезу ДНК лимфоцитами инкубированными с РРЛЭ от присутствия в генотипе обследованных больных туберкулезом генов, детерминирующих изученные аллотипы иммуноглобулинов.

Таким образом, показано, что специфический Т-клеточннй иммунный ответ на антигены микобактерий находится в зависимости от генотипа индивида. При носитеяьстве антигена НЬ А-СК2 . Т-клеточный иммунный ответ на РКр резко понижен, тогда как при носитеяьстве антигена НЬ А- ЗЖЗ,наоборот, повышен.

Сопоставляя результаты проведенных исследований, показывавших влияние генотипа НЪ А на уровень иммунного ответа цри туберкулезе и данных популяционных исследований, показывающих положительную ассоциацию антигена НЬ А-Х>И2 и отрицательную ассоциацию антигена НЬА- 3 РЗ с заболеванием туберкуле- . зом и течением туберкулезного процесса, мокно заключить,что антиген НЪА-СЕ2 контролируется геном, детерминирующим низкий Т-клеточный ишунный ответ на антигены микобактерий туберкулеза и высокий гуморальный иммунный ответ на эти же антигены. В то же время антиген НЬА-1ЖЗ контролируется геном,детерминирующим высокий Т-клеточный ишунный ответ на антигены микобакте» рий туберкулеза. Многочисленными исследованиями показано определяющее значение в патогенезе туберкулеза состояния Т-клеточ-ной системы иммунитета (Авербах Ы.М.,1976; Гергерт В.Я.,1936; Еремеев В.В.,1987). Также имеются данные о том, что противотуберкулезные антитела могут способствовать' развитию и прогрессировать туберкулезного процесса (Авербах М.М.,1976).

- 39 -

Исходя из вше изложенного можо предположить, что гены, контролирувцие антигены HLA-.DS2 и HLA-DR3 являатся генами иммунного ответа, определяющими (в определенной мере) соогвет-с ^венно чувствительность и резистентность к заболеванию туберку-• лезом. Вероятно, чувствительность к туберкулезу контролируется несколькими генами (по крайней мере двумя), поскольку показана положительная ассоциация туберкулеза с генами, детермикирувдгаи аллотипы иммуноглобулинов и взаимодействие их с.генами комплекса HLA.

ВЫВОДЫ

1. В разных популяциях,населяющих Советский Соаз, установлены положительные и отрицательные ассоциации заболевания туберкулезом с разными антигенами локусов HLA-A,-3,-C. Так, у больных туберкулезом русской национальности обнаружена положи. тельная ассоциация с,'антигенами HLA-Aw32, HLA-3I7, У болып-я

туберкулезом армянской национальности установлена лолокитедьная - ассоциация с антигенами HLA-AI, HLA-BI2, HL A-Qw35, HLA-. -, Cw4. У лиц,узбекской национальности с туберкулезом пояозктель-но 'ассоциирован антиген HL.A-BI2. У лиц туркменской национальности с. туберкулезом положительно ассоциирован также антиген ; HLA-3I2. У больных туберкулезом казахской национальности усыновлена положительная ассоциация заболевания с антигенами ' HLA-А2, HLA-BI4, HLA-Bv-35.

2."Во всех обследованных поцуляцилх установлены ассоциации заболевания туберкулезом с одинаковыми антигенами локуса

. HLA-DR: положительная с антигеном HLA-DE2 и отрицательчая-с антигеном HLA-DR3.

3. Показано, что у больных: туберкулезом увеличена .частота встречаемости некоторых гаплотипов, включающих антиген HLA-DE2 и антигены локуса HLA-B, имеющие, как правило,повышенную

частоту встречаемости в данной популяции: у больных туберкулезом русской национальности это гаплотипи HLA-37/jD®2,Bi2/DR2, 3w35/DI?2; у больных туберкулезом армянской национальности -HLA-35/DR2,3I2/D R2, Bw35/DÏ?2; у больных туберкулезом узбекской национальности - HL A-B5/DÎ?2,BI2/DH2, В «зф?2; у больных туберкулезом туркменской национальности - HL A-B7/D R2, B5/JDR2, Bw35/DR2; у больны., туберкулезом казахской национальности - HLA-B7/DR2, 3 w35/Dï?2.

4. Обнаружено, что во всех исследованных поцуляциях у больных туберкулезом повышена по сравнению со здоровыми лицами частота совместной встречаемости антигена HLA-DR2 и аллотипов 61^(4) и G3m(I2). В каждой исследованной популяции имелись также свои особенности совместного распределения антигена HLA-D52 и аллотипов и фенотипов G/n у больных туберкулезом и здоровых лиц. Так, у больных туберкулезом русской национальности была понижена частота совместной встречаемости антигена HLA-DR2 к фенотипа GI/n(-I)G]»n(-2). Кроме того, у больных туберкулезом русской и армянской национальности была повышена частота совместной встречаемости антигена HLA-DR2 и фенотипа GIm(+I) GI/r?(+4). У больных туберкулезом узбекской,туркменской и казахской национальности была понижена частота совместной встречаемости антигена HLA-DR2 и фенотипа Glm (+I)GIm(-4) по сравнению со здоровыми лицами.

5. Установлено, что у больных туберкулезом легких, носителей антигена HLA-DE2, в значительно меньшем проценте случаев к 12 месяцам прекращается бактериоввделение и происходит закрытие полостей распада. У этого контингента больных значительно чаще процесс переходит в фиброзно-кавернозную форму. Следовательно, носительство антигена HLA-DR2 повышает риск неблагоприятного течения туберкулеза и поэтому является неблагоприятным

прогностическим признаком. Такко, при неблагоприятном течении заболевания совместно с антигеном HL.A-DIÎ2 чаще встречаются аллотипы &Iw(4), G3m(I2) и фенотшл GIm(+I)GIm(+4),GW+1) GIm(+2)SIw(44), чем при благоприятной динамике туберкулезного процесса, что говорит об определенной связи мевду этими генетическими маркерами и неблагоприятны!,! течением туберкулезного процесса.

6. 3 результате семейного анализа показано сцепление чувст- . вительности к заболеванию туберкулезом с определенными гапзоти-таыи HL A, а таюхе установлено преимущественное наследование больными сибсами антигена HL A- DR2 от болышх туберкулезом родителей - носителей этого антигена.

7. Обнаружено, что у больных туберкулезом - носителей антигена HLA-DR2, а также у больных туберкулезсм-носителей одновременно антигена HLA-CR2 и аллотипов GIm(4) и G3m( 12) определяется повышенный уровень специфических антител IjG к PPD »тестируемых методом твердофазного кшуноферментного анализа.

8. У больных туберкулезом носителей антигена HLA-DR2 пониаен специфический клеточный иммунитет, определяемый по синтезу ДНК лимфоцитами, инкубированными Ln, viti~o с PPD .

9. Принимая во внимание факт положительной ассоциации . туберкулеза с HL A-DR2 и отрицательной - с HLA-DR3, а таксе данные семейного анализа и результаты изучения влияния антигенов локуса HLA-DR на состояние специфического противотуберкулезного иммунитета у больных туберкулезом, можно предположить, что гены, контролирующие антигены локуса HLA-DR, осуществляет контроль иммунологических феноменов, играющих важную роль в патогенезе туберкулезной инфекции.

- 42 -

10. Поскольку носительство антигена HLA-DR2 характерно для больных туберкулезом и является неблагоприятным прогностически!" признаком, рскомендуетсяХВ-тишрозание впервые выявленных больных туберкулезом и бликайпих родственников больных туберкулезом с целью выявления наиболее ¿трогаемых групп риска в огнопении восприимчивости к туберкулезу и больных с неблагоприятны;^ прогнозом течения заболевания.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Литвинов В .И., ^какова В.П. ,Маленко А. ф. .Поспелов JI.E., Фондяминская Л.Д.,Гафуров Б.Г..Еакрадзе Г.Д. .Аннадурдыев С.Д. Проблемы иммуногенетики болезней легких//Об.трудов ЦНИИР ЫЗ СССР.-М.-1983.-т.37.4). 17-19.

2. Поспелов Л.Е..Маленко A.S. Антигены тканевой совместимости в трех поцуляциях//Сб."Актуальные вопросы иммунологии* Краснодар,1933, С.144.

3. Литвинов В,К.,Поспелов Л.Е.,Маленко А 55. Система HL А и болезни легких//Пробл.туберкулеза.-1984.-!г9.-С.69-75.

4. Поспелов Л.Е. HLA-D/DR локус:строение,функции и роль при инфекционных болезнях.ЕМЭИ.-1984.-Mi.-С. 14-20.

5. Поспелов Л.Е.,Маленко А.Ф.,Чуханова В.П.,Аннадурдыев С.Д. Литвинов В.И.-Гены комплекса'HL А в туркменской полуляции//Имму-нолигия.-1985.-М.-С.81-82.

6. Хоменко А.Г..Литвинов В.И..Поспелов Л.Е..Маленко А.Ф., Чуканова В.П. Семейный анализ сцепления генов комплекса HLA с восприимчизостьо к туберкулезу//Иммунология.-1986.-№2.-6.74-76.

7. Фондамикскак Л.Д..Поспелов Л.Е.,Маленко А.8.,Чуканова В.П. Сб.трудов "Диагностика и клиника туберкулеза"-М.СУП.-I986.-C.9-I2.

- 43 -

6. Поспелов Л.Е.,Серове Л.Д.,Калинина Н.М.,Лннодурдиев С.Д., Литвинов В.И. HI, A-J>R антигены у больных туберкулезом и здоровых ревякцинированных ЕЩ лтуУ)йму1:ология.-1936.-Ю.-С.82-84.

9. Литвинов З.И.,Чуканова В,П..Поспелов Л.Е..Маленко А. Роль иммунологических факторов зри легочной патологии//Х Зсе-с оюзн.съезд фтизиа тров.-Киев.-1986. -С.71.

10. Поспелов Л.Е..Ыаленко А.ф..Аннядурдыел С.Д. Значение генетических факторов и формирование туберкулиновой чувствительности после ревакцинации БЦК //X Зсесовзн.съезд фтизиатров.-Ки-ез. -1986. X.72.

11. Поспелов Л.Е.,Серова Л.Д..Малепко А.3..Литвинов В.И. . Изучение связи распределения антигенов локуса DR системы HL А и туберкулеза в различных тзпуляцгтх/^обл.туберкулеза.-1937,-№10.-С. 54-56.

12 Чуканоза В.П..Поспелов I.E..Ыаленко А.2. Роль наследственных факторов при туберкулезе//1У съезд фтизиатров Закавказья. Баку.-I987-C.138-141.

13. Поспелов Л.Е.,Маленко А.ф.»Карапетян Э.Т.,Николая! Л.Т. : Антигены гистосовместииосги у больных туберкулезом и здоровых

лиц армянской национальности/Аурнэкспер. и клинич.медицины (Арм.),1937.-№.-£.479-482.

14. Карапетян Э.Т..Николаян Л.Т.,Поспелов Л.Е.,liaленко А.<5., Беляева Е.В. HLA антигены у больных,страдающих различными формами туберкулеза//Здравоохранение(МЗ Арм.ССР),1967.-Ж,-

С.14-16.

15. Литвинов В.И..Поспелов Л.Е..Гильбурд Б.Ш..Черноусова Л.Н. Зависимость уровня противотуберкулезных антител от Hi, А-ЭК

, фенотипа//Пробл.туберкулеза. -1987..-С .47-49.

16. Литвинов В,И..Поспелов Л.Е..Маленхо Л.5. ,Кв?о«а Н.А. Массовое иммуногенетичаское обследование больных легочной

патологией в различных регионах Советского Союза -Конф."Методология, организация и итоги массовых иммунологических обследований". -Ангаре к.-1937. -С.53-54.

17. Садыков А.С..Литвинов В.И..Поспелов Л.Е. Генотипы HLA в прогнозе и течении туберкулеза//Мат.стенда ВДНХ Уз.ССР, Ташкент.-I9S8. -С.1-2.

18. Садыков А.С.,фонда:/''кекая Л.Д.,Поспелов Л.Е..Малекко А.5. Антигены ML А цри различных формах и вариантах течения туберкулеза легких//Пробл.туберкулеза.-1938.-№2.-С .56-58.

19. Маяенко A.S..Литвинов З.И.,Чуканов В.И..Поспелов Л.Е., Сядогков А.С. Способ прогнозирования неблагоприятного течения туберкулеза.А.с. »1470057,1938.

20. Литвинов В.И..Серова Л.Д., Поспелов Л.Е. и др. Определение HbA-DS фенотипа в качестве критерия прогноза течения туберкудеза/ДЫунология.-1988.-№4.-С. 82-83.

21. Садыков А.С. .Поспелов Л.Е. Изучение совместного влияния генетических маркеров (антигенов HLA и вариантов гапто-глобиня) на течение■фиброзно-яавернозного туберкулеза легких// Тер. архив. -1988.-HI. -С.97-100.

22. Поспелов Л.Е..Садыков А.С..Афанасьев К.И. .Калинина Т.В. Сывороточные,эритроцитарные и лейкоцитарные маркеры

у больных туберкулезом. Симп."Генетические маркеры в антрогене-тике и медицине".-Хмельницкий,1988.-С.283.

23. Поспелов Л.Е.,Садыков А.С. Совместное влияние антигенов HL & и гаптогяобина на течение туберкулеза//Ияёнуы цравления ВШЮЗ?. Ирку тс к, 1988, -С. 89-91. -

24. Литвинов В.И.,Вахидова Г.А. .Поспелов Л.Е. и др. Генети- 1 чески обусловленные и связанные с производственными вредностя- *

ми нарушения иммунитета и течение болезней легких.-Ресцубл.конф.).

t

"Иммунодефицита и Н1>А система"-Ташкент.-1989.-С.21-22. -

- 45 -

25. Хоменко А.Г., Авербах U.M..Литвинов В.И., Мороз A.M., и др. Проблемы наследственности при болезнях легких.-У.Медицина.-1990.-240 с.

26."Литвинов В.И..Поспелов Л.Е.,Ч/канова В.П..Кетова H.A., Жангиреев A.A. Иимуногенетические исследования при болезнях легких.-1-й Всесоюзн.конгресс по болезням органов дыхания.-Киев.-1990.

27. Поспелов Л.Е. Роль иммуногенетических факторов в восприимчивости к туберкулезу и контроль иммунного ответа к микобектериям туберкулеза.//В сб. трудов ЦНЕТГ МЗ СССР.'-

т. НУ.-М.-1990.-С.77-84.

. 28. КНОМЕНКО A.G., IiITVINOV V.r., CHÜKA5T0VA V.P., POSPELOV Ь.Б. Tuberculosis in patients with various НЬА phenotypes.// Tubercle.- 1990.-T.71.-p.-1S7-192.

Подписано в печать W.tO 199$fr.

ПАЛОЕ ПРЕДПРИЯТИЕ «ПЕТИТ»

Актуальность проблемы. В настоящее время известны две основные генетические системы» имеющие отношение к регуляции иммунитета у человека: гены комплекса HLA и гены, контролирующие аллотиш иммуноглобулинов. Гены комплекса HL А детерминируют белковые молекулы - антигены HL А, относящиеся к классу I (антигены А,В,С-ловуеов), и классу 1 (антигены локу-сов Т>Я $ Dp* t>Gl ). Антигены HLA находятся на поверхности иммунокомпетентных клеток и играют огромную роль в распознавании инфекционного начала, в межклеточном взаимодействии, в контроле силы иммунного ответа и других ишунологичес-ких феноменах (Алексеев Л. П. ,1985$ Зарецкая Ю.М.,Абрамов В.Ю., 1986j Сочнев A.M. и соавт., I987| va*- Е<Лыь w. ,1985; W. ,1986; ZiddLJOn U/., S/ICLW S. ,1989).

Также известно, что в патогенезе практически любых заболеваний чрезвычайно важную роль играют иммунологические механизмы* При этом, различные реакции иммунитета имеют не одинаковое значение на разных этапах течения болезни. Например, известно, что при самой различной патологии Т- и В-клеточный иммунитет могут находится как бы в конкурентных отношениях и, что высокий уровень того или иного типа иммунологической реактивности не всегда играет положительную роль при болезни. Изучение Т- и В-клеточного иммунитета цри экспериментальном туберкулезе (у линейных мышей) продемонстрировало важную и неоднозначную роль этих систем в патогенезе болезни (Авербах М.М., 1985). У людей иммунологические факторы также имеют большое значение в восприимчивости и течении туберкулеза(Гергерт В.Я.,

1984; Авербах M.M.,1980,1986; Авербах М.М.Доменко И.С., 1989; Ъсскпелйеъ^ Д98&; Piemen* w: ,1989; A <d ctl, ,1990).

В последние годы показано, что в восприимчивости к туберкулезу и его течении определенную роль играют антигены HLA класса I (Хоменко А.Г. и соавт. ,1981; Ji^n^Z. et , 1983). Изучение же роли антигенов класса П при туберкулезе еще только начинается и работы, посвященные этому воцросу единичны. Этот аспект требует особого внимания, поскольку многочисленными исследованиями показано, что антигены класса П принимают участие практически во всех видах иммунологических реакций» имеющих значение в патологии человека.

Исходя из современных воззрений на генетический контроль иммунного ответа, можно считать, что гены, детерминирующие антигены классов I и П являются сами по себе генами иммунного ответа (ww Boehmeb И. £, ,1987). Косвенным подтверждением этому положению служит обнаружение ассоциаций антигенов системы HL А с заболеваниями, в патогенезе которых играют ведущую роль иммунологические механизмы, в частности, с аутоиммунной патологией. Однако, влияние различных аллелей генов HL А на активность иммунокомпетентных клеток и состояние иммунитета при болезнях еще до конца не выяснено.

Генетическими маркерами тяжевых и легких цепей иммуноглобулинов, цродуцируемых В-клетками, явдяются аллотипы иммуноглобулинов. Выло показано, что при различных болезнях у человека преобладают и различные аллотипы иммуноглобулинов. Причем, отмечается взаимодействие между некоторыми антигенами HLA и аллотипами иммуноглобулинов при регуляции силы иммунного ответа на разнообразные антигены (WkitH^ ha,?* $ et a£,t

1980,1981; Т>1-г1еь М. ,1986; Ta.lt В е£ оЛ. ,1986; ■ Ь/МШндЬа,»7 X, 1986). Однако, при туберкулезе такие работы не проводились.

Цель работы. В связи с вышеизложенным, целью настоящей работы было изучение роли генов класса I и П и генов,кодирующих генетические варианты аллотипов иммуноглобулинов, в контроле силы иммунного ответа на антигены микобактерий и сопротивляемости к туберкулезу.

Задачи исследования:

1. Изучение ассоциаций НЬА-А,-В,-С и -Ш антигенов и гаплотипов Ъ/Ш с заболеванием туберкулезом в различных популяциях, населяющих СССР.

2. Изучение расцределения аллотипов иммуноглобулинов у больных туберкулезом и здоровых лиц в различных популяциях, населяющих СССР.

3. Изучение связи НЬ А-Х>/? антигенов и гаплотипов НЬ А-Ъ/Ж и аллотипов иммуноглобулинов с течением туберкулеза.

4. Изучение сцепления антигенов класса П и аллотипов иммуноглобулинов с туберкулезом методом семейного анализа.

5. Изучение уровня клеточного и гуморального иммунного ответа на антигены микобактерий у/б#льных туберкулезом, носителей различных антигенов НЬА класса П и аллотипов иммуноглобулинов.

6. Анализ механизмов реализации действия генов НЬ А и генов, контролирующих аллотипы иммуноглобулинов, в реакциях на микобактерии туберкулеза и в патогенезе туберкулезной инфекции.

Научная новизна. В результате проведенных исследований впервые было установлено, что в разных популяциях среди населения СССР заболевание туберкулезом ассоциируется с разными антигенами локусов HL А-А, -В, - С и с одним и тем же антигеном докуса HL к-ЗЯ (2>££), а также с гагоютипами HLA -В/Ш , включающих антиген HL А - DR Л ( в первую очередь HLA-B72>£ £, HLA-Bw35 Dft £). Это положение подтверждается предпочтительной передачей антигена HL A-DR 2 от больных родителей больным детям в семьях больных туберкулезом. Также, впервые установлено,что туберкулез ассоциируется в исследован ных поцуляциях с разными аллотипами иммуноглобулинов» Показано,что течение туберкулеза может быть различным при разных фе нотипах HL A (DR) и аллотипах иммуноглобулинов. Впервые обна ружено,что носительство антигена HL A- DR Z может служить цр<Знозом неблагоприятного течения туберкулеза. Показано,что генотип HLA и аллотипы иммуноглобулинов оказывают влияние на уровень специфического противотуберкулезного клеточного и гу. . л . морального иммунитета. Таким образом, впервые получены данные, обосновывающие гипотезу о том, что имеются Генетически обусловленные механизмы восприимчивости к туберкулезу у человека, действующие через иммунцую систему.

Практическое значение. Результаты исследования являются основой для выявления контингентов наиболее угрожаемых в отно шении заболевания туберкулезом в силу особенностей их генотипа. В результате проведенных исследований также разработаны новые критерии прогнозирования туберкулеза на основании типирования.

Положения«выносимые на защиту.

I. Уровень клеточного противотуберкулезного иммунитета зависит от генотипа HLА. Уровень противотуберкулезных антител зависит от генотипа HL А и от ноеительства того или иного аллотипа иммуноглобулинов*

3. Заболевание туберкулезом ассоциируется в разных популяциях (среди населения СССР) с разными антигенами локусов HL А-А,-В и -С и с одним и тем же антигеном лонуса HL A -Х>£ ( DR%)t а также с гаплотипами НЬ A-B/DR , включающими антиген hla- тг.

4. В семьях больных туберкулезом показано сцепление заболевания с определенными гаплотипами HLA и имеет место предпочтительная передача антигена HLA-DR2 от больных родителей больным детям.

5. Заболевание туберкулезом в разных популяциях ассоциируется с разными аллотипами иммуноглобулинов.

6. Течение туберкулеза и эффективность его лечения различаются при разных генотипах HLA и аллотипах иммуноглобулинов.

7. Обнаружение антигена HL А-Э/?£ может служить прогнозом неблагоприятного течения туберкулеза.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 28 работ.

Апробация диссертации. Материалы диссертации доложены на Всесоюзной конференции "Иммунология и иммунопатология туберкулеза* (Москва, 1983), на конференции "Актуальные вопро сы иммунологии* (Краснодар,1983), Всесоюзной конференции "Методология, организация и итоги массовых иммунологических обследований* (Ангарек,1987), на X Всесоюзном съезде фтизиатров (Баку »1987), на 4-ом Всесоюзном симпозиуме "Генетические маркеры в антропогенетике и медицине*(Хмельницкий, 1988), на пленуме правления BBMQi (Иркутск,1988), на симпозиуме "Проблемы наследственности при туберкулезе и другой легочной и инфекционной патологии* (Винница ,1988), на Республиканской конференции "Иммунодефицита и HL/A система"

ВЫВОДЫ

1. В разных популяциях, населяющих Советский Союз »установлены положительные и отрицательные ассоциации заболевания туберкулезом с разными антигенами локусов НЬА-А,-В,-С. Так» у больных туберкулезом русской национальности обнаружена положительная ассоциация с антигенами HLA-Aw32, НЬА-В17# У больных туберкулезом армянской национальности установлена положительная ассоциация с антигенами HLA-AI, HLA-BI2, НЬ А-Bw35, HL A-Cw4. У лиц узбекской национальности с туберкулезом положительно ассоциирован антиген HLA-BI2. У лиц туркменской национальности с туберкулезом положительно ассоциирован также антиген НЬА~В12. У больных туберкулезом казахской национальности установлена положительная ассоциация заболевания с антигенами НЬА-А2,НЬ А-В14,НЬ A-Bw35.

2. Во всех обследованных популяциях установлены ассоциации заболевания туберкулезом с одинаковыми антигенами локуса НЬД-ЗЫ?; положительная с антигеном HL A- DP2 и отрицательная-с антигеном HLA-DR3.

3. Показано, что у больных туберкулезом увеличена частота встречаемости некоторых гаплотипов,включающих антиген НЬ А-BS2 и антигены локуса HLA-B, имеющие »как правило, повышенную частоту встречаемости в данной популяции: у больных туберкулезом русской национальности это гаплотипы НЬ A-B7/D F2, BI2/DP2, Bw35/DP2; у больных туберкулезом армянской национальности -НЬ A-B5/DP2, BI2/PP2, Bw35/DP2; у больных туберкулезом узбекской национальности - НЬА-В5Д)Р2, BI2/£>P2, Bw35/dP2; у больных туберкулезом туркменской национальности - НЬ А-В7Д>Р2, В5/3>£2, BwSS/kFE; у больных туберкулезом казахской национальности - HL A-B7/D Р2, Bw 35/D R2,

- 187

4. Обнаружено» что во всех исследованных популяциях у больных туберкулезом повшена по сравнению со здоровыми лицами частота совместной встречаемости антигена HLA-ЪШ и ал-лотипов GIm(4) и G3m(I£), В каждой исследованной популяции имелись также свои особенности совместного распределения антигена HLA-ЪШ и аллотипов и фенотипов 6m у больных туберкулезом и здоровых лиц. Так» у больных туберкулезом русской национальности была понижена частота совместной встречаемости антигена HLA-DBI и фенотипа GI™ (-I)Gïrn(-l»), Кроме того, у больных туберкулезом русской и армянской национальности была повышена частота совместной встречаемости антигена HLA-3>ï?2 и фенотипа GIm(+I)GIm (+4). У больных туберкулезом узбекской, туркмене кой и казахской национальности была понижена частота совместной встречаемости антигена НЬ À-DR2 и фенотипа GIm(+I)GIm(-4) по сравнению со здоровыми лицами.

5. Установлено, что у больных туберкулезом легких,носителей антигена HX.A-D12, в значительно меньшем проценте случаев к месяцам прекращается бактериовьщеление и цроисходит закрытие полостей распада. У этого контингента больных значительно чаще процесс переходит в фиброзно-кавернозную форму. Следовательно, носительство антигена HLА-Т>Ш повышает риск неблагоприятного течения туберкулеза и поэтому является неблагоприятным прогностическим признаком. Также, при неблагоприятном течении заболевании совместно с антигеном HL A-DR2 чаще встречаются аллотипы GIm(4), G3w(I2) и фенотипы GIm(+I) GIm(+4) ,GInr) (+I)GIm(+2)GI»on(+4),4eM при благоприятной динамике туберкулезного процесса, что говорит об определенной связи между этими генетическими маркерами и неблагоприятным течением туберкулезного щюцесса.

- 188

6. В результате семейного анализа показано сцепление чувствительности к заболеванию туберкулезом с определенными гаплотипами НЬА,а также установлено преимущественное наследование больными сибсами антигена НЬА-Х>1?2 от больных туберкулезом родителей -носителей этого антигена.

7. Обнаружено, что у больных туберкулезом - носителей антигена НЬА-Х>К&, а также у больных туберкулезом-носителей одновременно антигена Н*ЬА~Х>1?2 и аллотипов (4) и &3т(12) определяется повышенный уровень специфических антител к РРБ »тестируемых методом твердофазного иммуноферментного анализа .

8. У больных туберкулезом носителей антигена НЬА-Р1Ш понижен специфический клеточный иммунитет, определяемый по синтезу ДНК лимфоцитами, инкубированными vltfto с РРР.

9. Принимая во внимание факт положительной ассоциации туберкулеза с Н1.А-ЭР2 и отрицательной - с НЬА-рКЗ, а также данные семейного анализа и результаты изучения влияния антигенов локуса НЬА-РК на состояние специфического противотуберкулезного иммунитета у больных туберкулезом,можно предположить, что гены, контролирующие антигены локуса НЬА-ЗЖ, осуществляют контроль иммунологических феноменов, играющих важную роль в патогенезе туберкулезной инфекции.

10. Поскольку носительство антигена НЬА-РКЕ характерно для больных туберкулезом и является неблагоприятным прогностическим признаком, рекомендуется £>К-типирование впервые выявленных больных туберкулезом и ближайших родственников больных туберкулезом с целью выявления наиболее угрожаемых групп риска в отношении восприимчивости к туберкулезу и больных с неблагоприятным прогнозом течения заболевания.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

То,что генетические факторы оказывают влияние на восприимчивость к болезням и их течение в настоящее время не вызывает сомнений. Среди таких факторов чрезвычайно важную роль играют генетические системы как гены комплекса НЬ А и аллотишв иммуноглобулинов, имеющие отношение к регуляции иммунитета у человека.

Антигены НЬ А находятся на поверхности большинства клеток, в том числе иммунокомпетентных, и играют решающую роль в распознавании инфекционного начала, в межклеточном взаимодействии, контроле силы иммунного ответа и других иммунологических феноменах (Алексеев Л.П. ,1985; Зарецкая Ю.М.,Абрамов В.Ю., 1986; Сочнев А.М. и соавт. ,1987; и* л ЕЛе^ ^,1985\Bodr»** ^ 1987).

В последние десятилетия показано, что в восприимчивости к туберкулезу и его течении определенную роль играют антигены класса I (Хоменко А.Г. и соавт. ,1980,1985; М-О^/ а£.% 1979; Лси^ Ж, е£ аЛ. ,1983; X е£ ¿¿,1986). В то же время изучение роли антигенов класса П при туберкулезе начато недавно и работы, посвященные этому вопросу немногочисленны Этот аспект требует особого внимания, поскольку антигены класса П принимают участие практически во всех видах иммунологических реакций и играют наиболее важную роль в иммунном ответе на патогены с внутриклеточным паразитированием(в частности ,микобактерии) ( ^ У- ¿¿¿41983;^* О. ¿¿¿<1983; 2)*.

1985,1988). Однако, влияние различных аллелей генов НЬ А на активность иммунокомпетентных клеток и состояние иммунитета при туберкулезе еще до конца не ясно. Также совершенно не изучался вопрос о влиянии аллотипов иммуноглобулинов на восприимчиеость к туберкулезу и противотуберкулезный иммунитет цри этом заболевании, хотя при других заболеваниях (в основном аутоиммунной природы) подобные исследования проводились (V/UttihfUm ¿1* ,1980; DtziLe-Ь М. ,1986; 7k¿¿ & ,1986).

В связи с вышеизложенным, целью настоящей работы было изучение роли генов HLA I и П класса и генов, кодирующих ал-лельные варианты иммуноглобулинов, в контроле силы иммуного ответа на антигены микобактерий и сопротивляемости к туберкулезу.

Для решения этой проблемы были изучены ассоциации антигенов HLA Ш и П класса и аллотипов иммуноглобулинов с туберкулезом и его течением в разных популяциях СССР. Для этого,было обследовано 660 больных туберкулезом и 819 здоровых лиц (в качестве контроля) русской! армянской, узбекекой,туркменекой и казахской национальности. Для изучения вклада наследственных факторов в передачу предрасположенности к туберкулезу было обследовано 27 многодетных семей, в которых больные туберкулезом были как среди родителей, так и среди сибсов. Также с помощью семейного анализа был изучен вклад антигена НЬА-Л)#2 и аллотипов Gm в контроль противотуберкулезного иммунитета у больных туберкулезом.

В результате цроведенного исследования было показано,что в разных популяциях наблюдаются положительные и отрицательные ассоциации заболевания туберкулезом с разными антигенами ло-кусов HLA-A,-B,-C. Так, у больных туберкулезом русской национальности была повышена частота встречаемости антигена HLA-Aw32 и HLA-BI7 по сравнению со здоровыми лицами. У больных туберкулезом армянской национальности установлена положительная ассоциация заболевания туберкулезом с антигенами HLA-AI,

HL»A-BI2§HIiA-Bw35 и HLAXw4» У лиц узбекской национальности с туберкулезом положительно ассоциирован антиген HLA-BI2. У лиц туркменской национальности обнаружена тенденция к увеличению частоты встречаемости антигена HLA-BI2 у больных туберкулезом» У лиц казахской национальности установлена положительная ассоциация заболевания туберкулезом с антигеном HLA-A2, HLA-BI4, HLA-Bw35, НЬА-Cwï* и отрицательная - с антигеном HL А-A3* Эти данные показывают, что в исследованных родственных популяциях наблюдаются ассоциации туберкулеза с одними:: и теми же антигенами системы HLA (нацример, в узбекской и туркменской - HLA-BI2). В то же время*частота встречаемости некоторых антигенов HLA может одинаково изменяться в разных популяциях, неродственных по происхождению,например, HL A-BI2 в армянской популяции с одной стороны и узбекской и туркменской популяциях с другой, HL A-Bw35 - в армянской и казахской поцуляциях).

Другие исследователи также показали связь различных антигенов HLA с туберкулезом в разных исследованных популяциях» Так, была установлена положительная ассоциация туберкулеза с антигеном HLA-BI5 для американских негров и мексиканцев ObifL e¿ а£. ,1979; M ^ 1982; бак Л et ,1982) антигена HLA-B8 для жителей Ньюфаундленда %

1978), антигена HLA-Bw35 у китайцев (Z. eé %

1983), В то же время X. Yin^peí и соавт.(1986) не подтвердили данных предыдущих авторов, а обнаружили положительную ассоциацию у больных туберкулезом китайской национальности с антигенами HLA-AII и HLA-BI5, Отмечается также отрицательная ассоциация туберкулеза и антигенов HLA-B7 и HLA-BI7 у мексиканцев ( Сах Д ,1976) и антигена HLA-Cw3 у китайцев ( X. а£. ,1986).

В настоящей работе впервые изучено распределение антигенов локуса НЬА-Х>Е среди населения СССР в пяти разных популяциях (русский* армяне, узбеки, туркмены» казахи) и обнаружено,что во всех исследованных популяциях у больных туберкулезом по сравнению со здоровыми лицами увеличена частота встречаемости антигена НЬА-3>Р2 и уменьшена - НЬА-3)13. Эти данные заслуживают особого внимания» так как в каждой из этих популяций заболевание туберкулезом ассоциируется с разными антигенами локусов НЬА-А,-В,-С.

Впервые при туберкулезе была изучена связь заболевания туберкулезом с носительством определенных гаплотипов НЬА В/1) Р. Как показали исследования» в разных популяциях у больных туберкулезом изменены частоты встречаемости разных гаплотипов НЬА. Наиболее часто встречаются гаплотипы с антигенами НЬА» имеющими »как правило, повышенную частоту в данной популяции и в состав которых входит также антиген У больных туберкулезом русской национальности это гаплотипы НЬА-К?/3>Щ»В11/ Х>Ш, В35/1)Щ. У больных туберкулезом армянской национальности - НЬ А-В5/В РЕ» Ыг/Ъ В^35/ОР£, у узбеков больных туберкулезом - НЬ А-ВЬ/ъШ, В\^35/£> у туркмен - НЬА-В7/1> Р2, В^35/РЩ, В5/Д> у больных туберкулезом казахской национальности - НЬ А-В7/г> РЕ, Вул/35/Е>РЕ, В\л/35/РР5. Частота встречаемости гаплотипа НЬА-В7/2>Р2 увеличена в нескольких из исследуемых популяций, очевидно» за счет неравновесного сцепления меящу антигенами В7 и Наличие этих гаплотипов

НЬА увеличивает риск заболевания туберкулезом для их носителей*

Тот факт,что ассоциация туберкулеза с антигенами НЬА существует, подтверждают семейные исследования. Так, при обследовании 27 многодетных семей больных туберкулезом было показано сцепление восцриимчивости к туберкулезу с определенными гаплотипами НЬА преимущественно передаваемыми по наследству от больных родителей больным туберкулезом сибсам по сравнению со здоровыми сибсами. Кроме того, нами была показана цреимущественная передача антигена НЬ А- 1Ж2 от больных РР2-позитивных родителей больным туберкулезом сибсам.

Все эти данные позволяют, во-первых, высказать предположение, что первичной является ассоциация заболевания туберкулезом с антигенами РЕ-лоцуса, а маркерные антигены других л о кусов выявляются за счет гаметной ассоциации. Этот факт подтверждается величиной значений этиологической фракции (И? ) для антигена НЬ А-РР2 в исследованных поцуляциях. Во-вторых, поскольку в локусе НЬА-1>Е предполагается наличие генов иммунного ответа, можно предположить,что гены комплекса НЬА (в частности, локуса^ К) оказывают влияние на восприимчивость к туберкулезу и на течение туберкулезного процесса, регулируя силу иммунного ответа на шкобактериальные антигены.

При изучении возможного влияния антигенов НЬА на течение туберкулеза группа больныхсвпервые выявленным туберкулезом (141 человек - все русской национальности) была

разделена на две подгруппы: с благоприятной (65 человек) и неблагоприятной (76 человек) динамикой туберкулезного процесса. Благоприятной динамикой считали те случаи, когда инфильтратив-ные явления рассасывались,полость распада закрывалась и мико-б&ктерии в мокроте не определялись в срок до I года с момента начала лечения» Неблагоприятным течением считали те случаи, когда процесс переходил в фиброзно-кавернозную форму,не цроисходило рассасывания инфильтрации на фоне лечения или когда, несмотря на регулярное лечение в течение года, распад и инфильтрация сохранялись.

Было установлено, что при неблагоприятной динамике туберкулезного процесса резко увеличивается встречаемость антигена ШиА-РРЕ. Помимо этого показано, что частота встречаемости определенных гагоютипов НЬ А также различается при неодинаковом течении туберкулезного процесса. Например, гаплотип НЬ А-В7/Э встретился только у больных с неблагоприятной динамикой туберкулеза, тогда как гаплотип НЬА-В£2/Р РЗ,наоборот, чаще встречался у больных с благоприятным течением туберкулезного процесса. Следует отметить, что несмотря на разницу в частотах встречаемости гаплотипов НЬД-В/ЪР. у больных с разной динамикой туберкулезного процесса эти различия были статистически недостоверны. Вероятно, на течение туберкулеза оказывает влияние только наличие того или иного антигена НЬА (в частности, антигена РР1), тогда как сочетание ряда антигенов локусав НЬА-В и РЕ в гагоютипах может оказывать влияние только на восприимчивость к заболеванию туберкулезом.

Для подтверждения предположения о неблагоприятном влиянии антигена НЬА-1>Р2 на течение туберкулезного процесса нами было подвергнуто НЬ А-ЗЭР-типированию 96 впервые выявленных больных туберкулезом до начала лечения. В результате исследований по оценке влияния НЬ А- Г>Р2-генотипа на течение туберкулеза было установлено, что у больных - носителей антигена НЬ А-В наблюдалось замедленное закрытие полостей распада и в меньшей проценте случаев прекращалось бактериоввделение по сравнению с больными не несущими данного антигена. Также, у больных носителей антигена НЬА-Х>Р2 в значительно большем проценте случаев процесс перешел в фиброзно-кавернозный по сравнению с 2)К8-отрицательными пациентами. Поскольку все эти цризнаки являются критериями неблагоприятного течения болезни, то £>Е-типирование уже в ранние сроки заболевания может являться прогностическим признаком, указывающим на высокий риск неблагоприятного течения туберкулезного процесса. В то же время» влияние антигена НЬА-РЕЗ на динамику туберкулезногого процесса обнаружено не было. Поскольку 1>Р-антигены эксцрес-сируютея на В-лимфоцитах,секретирующих антитела, следует иметь в виду, что практически отсутствуют данные о том, что гуморальный иммунитет оказывает какое-либо защитное действие при туберкулезной инфекции. Более того, вероятно, что некоторые виды антител (антипротеиновые) оказывают негативное влияние на взаимодействие микобактерий и макроорганизма (Авербах М.М., 1980). С этих позиций можно предположить, что ген Э1?£ может, детерминируя высокий уровень цр о ти@ о туб ер куле зных антител, именно таким образом оказывать влияние на воецриимчивость к заболеванию туберкулезом. На эту возможность указывают наши данные по изучению уровня специфических антител 1^6 против РРЗ) в зависимости от генотипа. Так, у пациентов-носителей антигена ЗЭШ уровень противотуберкулезных антител был выше, чем у неносителей данного антигена.

Сходные данные получены ВШап7^(2. и соавт.(1989) при обследовании больных туберкулезом в Индонезии, которые обнаружили сильную ассоциацию между НЪА-2>!1 и высоким титром специфинеских антитезе эпитопу протеина мол.массой 38 килодаль-тон, полученному из М. ЬяРе^еи^о^/Ъ # Эти исследователи также обнаружили ассоциацию туберкулеза с ШЖ и ЬО. аллелями. В то же время Х> О -и/ 3-аллель ассоциировался с резистентностью к туберкулезу. По мнению авторов 1>Р1, возможно, цредставляет высокоотвечающий генотип в отношении ряда мико-бактериальных антигенов. Кроме того, наличие сходных факторов генетического контроля течения болезни и уровня антител к протеину мол.масс ой 38 килодальтон может указывать на определенную роль антигена DR2 в иммунном ответе хозяина на патоген (в данном случае микобактерии туберкулеза) (Iva/гyt Jet ai. , 1988). Похожие результаты получены и при экспериментальных исследованиях, Так, цри изучении уровня гуморального иммунного ответа ряда конгенных резистентных линий мышей на основе BIO или BAL В/с и их гибридов Fj на различные эпитопы,в частности, протеина мол.массой 19 килодальтон, выделенного из M. éu-teicic foôiï ,было показано,что гуморальный ответ на микобак-териальные антигены может контролироваться,очевидно,различными доминантными It -генами¡высокой и низкой иммунореактив-ности (Ivan^i J, % еЛяъ/э ,1986). Доминантная низкая способность к иммунному ответу была описана также цри изучении гуморального ответа на фенольный гликолипид I из М. ba^e. у линейных мышей, иммунизированных М.

TeccéôA^b С, ,1985) и для цролиферативного Т-клеточного ответа на цельные М. gtougêa*- Jone* Л ,

VJa.-b6.on, J. #I985).

Учитывая,что антиген HLA-ЗЖ ассоциируется с неблаго-цриятным течением туберкулеза, в тех случаях, когда речь идет о генетических механизмах, детерминируемых генами DK-локуса и оказывающих влияние на резистентность к данной инфекции, можно цредположить, что гены РР-локуса могут действовать также через систему моноцитов-макрофагов. Такая ситуация может, нацример, иметь место цри детерминировании антигенами DR-ло-куса ( VRZ) дефекта клеточного иммунитета у больных туберкулезом легких. По нашим данным у обследованного контингента больних туберкулезом, носителей Х>Р2-антигена снижен клеточный противотуберкулезный иммунитет, оцениваемый тестами ¿п. \zlito , по сравнению с больными, не несущими данного, антигена. В то же время, у носителей антигена НЬA-DP3,наоборот, Т-клеточный противотуберкулезный иммунитет был повышен по сравнению е неносителями этого антигена. На основании этих данных следует сделать вывод, что иммуногенетические механизмы играют существенную роль в патогенезе туберкулеза* Как показали наши исследования, у носителей антигена |LА- 1>Ш9 вероятно, в силу наличия генетического дефекта снижена способность к развитию клеточного противотуберкулезного иммунитета, который как известно является главным механизмом защиты от туберкулезной инфекции.

То,что антигены класса П вовлечены в иммунный ответ на микобактериальные антигены, подтвервдается экспериментальными данными. Так, показано, что гены класса П системы Н-2 мышей играют определенную роль в контроле величины локальной грану-ломатозной реакции в ответ на инфицирование М. РерЪАеъиъСа/п у мышей ( GJu //. et¿i¿. ,1983; (Жм О, etaü. ,1983). Используя кожные тесты с растворимыми экстрактами из различных видов микобактерий Т. Oéíe^Ao/f и соавт. (1986) показали ассоциацию высокой способности к ответу на экстракты М. с HL А- Х)Р4-гаплотипом. Изучение Тх-клеточного ответа на цротеин М. ínfe-beuf&j/'j. мол.масс ой 65 килодальтов показало, что иммунный ответ рестриктирован по антигенам HL А класса И ( Tho£e I ¿¿ а£. ,1988; efe I/ía'&ó ¿t ¿г/., 1988). Используя Т-клеточные клоны, мутации типа делеций генов, кодирующих эпитопы на протеине мол.массой 65 килодальтон и синтетические пептиды, выявлено к настоящему времени 10 ©пи-топов на эгоом протеине, распознаваемым Т-клеточными клонами этот протеин является основным иммуногеном М. и

М J. et а£. ,1987; TAo€e7, et f

1988). Исследования показали, что распознавание одного из этих эпитопов Т-клеточными клонами ограничено НЬА-3>1?2 {OilenАаff Т. et ,1986; Д etaf.,1988). Распознавание других эпитопов было ограничено другими HL A-D Р-специфичностями.

В этом»вероятно, заключается биологический смысл полиморфизма антигенов класеа I и П системы НЬА, то есть индивиуаль-ные различия по системе НЬА определяют различия в антиген-специфической иммунореактивности индивидов. Т> 9£ien/гofy", R.cfe. (1987) показали существование Т-клеточннх клонов, выделенных из периферической крови больных лепрой, которые специфично супрессировали аутологичные Тх-клетки, реактивные к микобактвриям. Эти Т -клоны также были активированы антигенами М. ¿е/э^&е , предетавляеыыми в контексте антигенов НЬА класса П, вероятнее всего Р Р-антигенами (de VbU^ft.jdaf* If86) .Интересно,что все Т -клоны от больных лепрой могли проли-ферировать после взаимодействия с антигенами М. ¿е/эъае при презентации последних клетками, несущими ЪК-молекулы только от гаплоидентичных членов семей, тогда как Тх- клоны этих же пациентов пролиферировали при презентации подходящими 1Ш-молеку-лами. Эти данные еще раз свидетельствуют о том,что различающиеся мевду собой 1)В-410лекули могут осуществлять контроль, представляя определенные эпитода или хелперным, или супрессорным Т-клет-кам. То-есть, 1>ъ -гены класса П могут контролировать иммунный ответ, влияющий на течение микобактериальных заболеваний.

Участие антител в межклеточном взаимодействии (макрофаг-Т-хелпер) обыло показано при изучении роли It -генов класса П в контроле гуморального иммунного ответа на ряд эпитопов, выделенных мз М. -bui&ieu^o^Cd {IVAngi J. , Скалр к. ,

1986). Также было показано, что существует возможность суцрее£ сии Т-клеточного иммунитета хозяина специфическими антителами, детерминируемыми высокоотвечающими генотипом хозяина е£ ¿¿,1988). Возможная регуляторная роль высокого уровня специфических антител в отношении активности Т-клеточного ответа при митогенной стимуляции с** иИ^о была также показана цри изучении больных разными формами лепры. ( I. е£ а/, $ 1980,1983; М, ,1981). Данные »порченные нами, также говорят о вероятной регуляторной роли высокого уровня специфических антител при иммунном ответе на микобактерии туберкулеза через возможное супрессорное влияние на специфическую функциональную активность Т-лимфоцитов. Тай, сравнение индивидуальных иммунологических показателей больных туберкулезом показало,что у РР2-позитивных лиц больных -туберкулезом высокие уровни специфических антител сопровождались соответствующим одновременным понижением синтеза ДНК Т-клетками, инкубированными ^ \ziito с ¥?Т>.

Исходя из всех вышеприведенных данных, можно предположить что аллель НЬ а- Т>Ш детерминируя с одной стороны высокий уровень противотуберкулезных антител, а с другой низкую специфическую функциональную активность т-:*клеток,может Таким образом оказывать влияние на восприимчивость к заболеванию туберкулезом и его течение. Исходя из данных, полученных нами и данных литературы, вероятно, есть несколько путей реализации контроля иммунного ответа геном НЬА-!>]?£ при туберкулезной инфекции:

I. Детерминирование аллелем высокого гуморального иммунного ответа на М. с одновременным независимым детерминированием низкого Т-клеточного иммунного ответа в результате презентации В-клетками и Т-клеткам разных ©пито

- 180 пов антигена M. ¿«¿е-ъеи&Асд .

2. Детерминирование аллелем £>Р2 высокого уровня специфических антител против М. -6и£et&i(££>4£4, , которые сами (прямо) супрессируют Т-к лет очный иммунный ответ.

3. Детерминирование аллелем ЛШ высокого уровня специфических антител (через активацию ТН2, продуцирующих 1Ъ-Л)против М. iu&eteugojlj и Т^-клеток, подавляющих реактивность ТЖ (Т-ампзшфайеров)» продуцирующих IL -2 и

Все эти рабочие гипотезы,вероятно, имеют прашо на существование и правильность какой-либо из них может быть подтверждена только дальнейшими исследованиями. Тем не менее, некоторые из этих положений являются более, а другие менее предпочтительными.

Так, первое положение предполагает,что аллель ЭР2 являет-сягеном высокой иммунореактивности в отношении гуморального иммунитета и одновременно геном низкой иммунореактивности в отношении Т-клеточного иммунитета. Это положение подкрепляется, например, данными о различной локализации Т- и В-клеточных ©питопов на микобактериальном антигене мол.массой 65 килодаль-тон (YouHfrj), ¿¿а/. ,1987» Яеед Ж ,1988). Также,при изучении иммуногенности некоторых эпитопов, находящихся на искусственно синтезированных димерных пептидах,порченных из антигенов мол.массой 65 килодальтон М. ¿¿c/eteu&dti и М. было показано, что эти эпитопы различны по иммуногенности для Т- и В-клеточных рецепторов ( У» е£ а£в , 1988). С другой стороны, для ©той гипотезы цужно предположить, что представление разных эпитопов неодинаковой иммуногенности Т- и В-клеткам характерно, вероятно, только для молекулы DR2, поскольку только для 2>К2-позитивных лиц характерен разный (соответственно низкий и высокий) уровень Т- и В-клеточного иммунного ответа на микобактерии туберкулеза, а например, у 1)РЗ-позитивных лиц наблюдается одинаково высокий Т- и В-клеточ-ный иммунный ответ.

Две другие гипотезы похожи друг на друга тем, что в них предполагается супрессирование специфического Т-клеточного иммунного ответа на антигены микобактерий хотя и двумя различными путями: или через секретируемые антитела, или Т-клетки суцрессоры. Эти две последние гипотезы на наш взгляд наиболее предпочтительны. Можно также доцустить, что реализация суцрессорного эффекта может осуществляться одновременно: и через суцреесорное влияние высокого уровня специфических антител и через активацию Т-супрес-соров.Возможно, при этом существует вариант, при котором высокий уровень антител подавляет специфический Т-клеточный ответ, но через активацию Т-супрессоров.

Образование Т-супрессоров,по нашему мнению, является наиболее вероятной ситуацией. Так, многочисленными работами показано, чтю при различных инфекционных заболеваниях с внутриклеточным паразитированием (в том числе и микобактериальной природы) происходит активация супрессорных макрофагов и Т-клеток, подавляющих развитие специфических протективных реакций иммунитета организма - хозяина на антигены возбудителя и неспецифического ответа на различные антигены (¡Скак-л/. .1981; Ае^ол. Р„ ,1982). Существенная роль в подобной блокаде иммунитета принадлежит Т-супрессорам, что,по-видимому, относится и к туберкулезу.

Полученные результаты могут иметь также и практическое значение, поскольку обнаружение носительства ряда антигенов локуса НЬА-В (в разных популяциях) и антигена НЬ А- £>Р2 может указывать на повышенный риск развития туберкулеза. Мы далеки от того, чтобы рекомендовать в связи с этим сплошное НЬА-типирование населения. Однако, типирование родственников больных туберку-лезо^вероятно, целесообразно.Кроме того, Н1>А-типирование больных туберкулезом может способствовать выявлению лиц, у которых црогноз заболевания является особенно неблагоприятным ее ли, например, носительство НЬА-ЭЙЗ антигена сочетается у них с дефектом клеточного иммунитета. Такие больные требуют особого внимания и особой врачебной тактики (вероятно, с назначением им иммунокорригирующих средств).

Как показали многочисленные исследования,аллотипы иммуноглобулинов могут влиять на силу иммунного ответа на бактериальные антигены укаг» е£ а/. 1960;^/^ е£ а£, % 1971 I а/&{/0 X а/. ,1975). Носительство определенных аллоти-пов также ассоциируются со многими заболеваниями, в основном, аутоиммунной природы (и о! а/. ,1977; За&еъ 1986). Было также обнаружено,что аллотипы иммуноглобулинов могут взаимодействовать с антигенами НЬА, регулируя силу иммунного ответа на разнообразные антигены (Р-е/е/юя*-*' №. ,

Л ,1971; * а£. ,1971

1979). При туберкулезе подобных исследований не проводилось, хотя туберкулез является мультифакториальным заболеванием,зависящим от многих генетических факторов, одними из которых являются,вероятно, гены,контролирующие аллотипы иммуноглобулинов. В результате наших исследований было обнаружено,что только в одной из исследованных популяций - армянской имело место непосредственное статистически достоверное изменение частоты встречаемости фенотипов у больных туберкулезом по сравнению со здоровыми лицами (это фенотипы ОЬт»(-1) в1ги(+4) и СЬ»?(-1)$!и1(-2) £1п1(+4). Эти данные позволяют предположить определенную роль аллотипов тяжелых цепей в восприимчивости к туберкулезной инфекции. В то же время было обнаружено, что у больных туберкулезом во всех исследованных популяциях чаще встречаются ал-лотипы GW4) и G3m(I2) совместно с антигеном HL»A— DP2 по сравнению со здоровыми лицами. Причем, было показано,что величина относительного риска для индивидов, несущих одновременно антиген HLA- 2>Р£ и аллотипы 01т (4) и G3™ (12), была выше, чем при носительстве только антигена HLA-PF2. Помимо этого, больные туберкулезом каждой исследованной поцуляции имели свои особенности в совместном распределении антигена DP2 и аллотипов &т. Так, у большх туберкулезом русской национальности достоверно реже встречался совместно с антигеном HL.A-DP2 фенотип GIw( -I) GI™(-£) по сравнению со здоровыми Х> Р2-позитивными лицами. Кроме того, у больных туберкулезом русской и армянской национальности была повышена частота встречаемости совместно с антигеном HLA-BP2 фенотипа GIm (+1) GIm (+4). У лиц туркменской национальности больных туберкулезом была понижена частота встречаемости совместно с DP2 ал-лотипа G-Im(I). Также было обнаружено,что у больных туберкулезом узбекской»туркменской и казахской национальности статистически достоверно понижена частота совместной встречаемости антигена HL А-2>Р2 и фенотипа GIm(+I)GI/77(-4). Таким образом, полученные данные позволяют предположить, что повышенный риск развития туберкулеза может зависеть от сочетания в фенотипе антигена HL A-DP2 с определенным аллотипом или фенотипом G*r).

Не было обнаружено разницы между больными туберкулезом и здоровыми лицами в частоте совместной встречаемости антигена HL А-2>РЗ и аллотипов иммуноглобулинов.

Таким образом, в результате изучения распределения аллотипов иммуноглобулинов у больных туберкулезом и здоровых лиц в

- 184 частоте совместной встречаемости антигена HLА-2>К2 и аллотипов Sm в близких^ по происхождению популяциях (русской и армянской с одной стороны и узбекской,туркменской и казахской популяциях с другой), а также выявлена общая закономерность в распределении аллотипов G-Im (4) и G3™(12) у больных туберкулезом по сравнению со здоровыми лицами во всех исследованных v популяциях.

Также было показано, что неблагоприятная динамика туберкулезного процесса чаще наблюдается у носителей одновременно антигена HLA-BP2 и ряда аллотипов и фенотипов G**?. Так, у лиц с неблагоприятной динамикой туберкулеза была статистически достоверно повышена частота совместной встречаемости антигена HIiA-DP2 и аллотипов Glm (4) и G3ro(I2). Также статистически достоверно чаще встречались совместно с антигеном HLA-ЭД2 фенотипы Gm: GIm(+I)GIm(+4) и ei™(+I)GI™(+2)GI™(+4). Фенотип GI m (+1)&1т (+4) чаще встречался и в группе больных с неблагоприятной динамикой туберкулеза по сравнению с больными с благоприятной динамикой туберкулезного процесса. В результате семейного анализа не была обнаружена передача по наследству с определенными гаплотипами G/п восприимчивости к заболеванию туберкулезом от больных родителей больным туберкулезом сибсам.

Негативное влияние некоторых аллотипов G/r> в отношении заболевания туберкулезом, может быть связано с тем, что алло-типы иммуноглобулинов, возможно, могут контролировать совместно с антигенами HLA уровень специфических противотуберкулезных антител. Так, у носителей аллотипов GI*?(4) и G3<^?(12) больных туберкулезом был повышенный уровень специфических противотуберкулезных антител по сравнению с лицами, несущими другие аллотипы Gfn, Помимо этого, было показано взаимное влияние антигена НЬ»А- ВР2 и аляотипов &тна уровень специфгоескях антител. Так, у носителей одновременно 1>К£ и (Яп? (4) уровень антител был выше, чем при носительетве каждого из этих генетических маркеров в отдельности.

Таким образом, установлено,что гены комплекса НЬА и гены аллотипов бт оказывают влияние на восприимчивость к туберкулезу, о чем свидетельствуют данные поцуляционного и семейного исследований. При этом,ведунью роль играют гены РК-локуса, в частности ЭК2, во всех исследованных популяциях ассоциированный с заболеванием туберкулезом. Результаты семейного исследования также свидетельствуют о сцеплении определенных НЬД-специфичностей (в первую очередь Г>Р£) с повышенной восприимчивостью к туберкулезу.

Изученные генетические системы оказывают влияние и на течение туберкулеза, в частности, антиген £>Р£ ассоциируется с неблагоцриятным течением этого заболевания. Определение этих генетических маркеров является важным для выявления групп повышенного риска в отношении заболевания туберкулезом и прогноза течения этого заболевания. Так, обнаружение антигена НЬА-ЗЖ является неблаг оцриятным прогностическим признаком цри впервые выявленном туберкулезе легких. Результаты проведенных исследований также дают представление о механизмах, через которые действуют изученные генетические системы - они оказывают свой эффект цри туберкулезе путем регуляции клеточного и гуморального противотуберкулезного иммунитета.