Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Реакции мононуклеарных лейкоцитов крови при действии противотуберкулезных препаратов резервного ряда

004618614

Кононова Татьяна Евгеньевна

РЕАКЦИИ МОНОНУКЛЕАРНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ КРОВИ ПРИ ДЕЙСТВИИ ПРОТИВОТУБЕРКУЛЁЗНЫХ ПРЕПАРАТОВ РЕЗЕРВНОГО РЯДА (ИССЛЕДОВАНИЕ IN VITRO)

14.03.03 - патологическая физиология 14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 3 ДЕК 2010

Томск-2010

004618614

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН, заслуженный деятель науки РФ

доктор медицинских наук, профессор

Новицкий

Вячеслав Викторович Уразова

Ольга Ивановна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, Хлусов

профессор Игорь Альбертович

доктор медицинских наук Алиев

Олег Ибрагимович

Ведущая организация: Федеральное государственное учреждение «Новосибирский научно-исследовательский институт туберкулеза)) Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита состоится «ЛУ » 2010 г. в О часов на заседании

диссертационного совета Д 208.096.01 ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава по адресу: 634050 г. Томск, Московский тракт, 2

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава

Автореферат разослан «¿3 » 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета ' И.В. Петрова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Обзор данных литературы указывает, что конец XX века охарактеризовался не только ростом заболеваемости туберкулезом, но и активизацией борьбы с этой инфекцией на глобальном уровне. Однако, несмотря на активные противоэпидемические мероприятия, массовую вакцинацию, существование стандартных схем комбинированной химиотерапии, проблема туберкулеза по-прежнему сохраняет свою актуальность [Дмитриев В.А., 2008; Sutherland J.S. et al., 2010]. Особая роль в этом отводится эволюции лекарственной устойчивости Mycobacterium tuberculosis на основе генетически закрепленных мутаций [Маянский А.Н., 2001; Velayati А.А. et al., 2009].

В настоящее время одной из самых актуальных и сложных проблем фтизиатрии является химиотерапия больных туберкулезом легких, вызванным лекарственно-резистентными штаммами М. tuberculosis. Для этой категории пациентов принципиально важным является включение в схемы химиотерапии противотуберкулезных препаратов резервного ряда [Носова Е.Ю. и соавт., 2007; Мишин В.Ю. и соавт., 2009; Mitnick C.D. et al., 2009]. Однако, несмотря на огромные усилия по совершенствованию методов терапии и применение большого арсенала средств многоаспектной направленности, проблема лечения больных туберкулезом легких далека от окончательного разрешения. В ряду факторов, затрудняющих проведение полноценной химиотерапии, рассматривается наличие у больных туберкулезом нарушений иммунного статуса, а также побочное действие противотуберкулезных препаратов на клетки макроорганизма [Barcelos W. et al., 2006; Платонова И.Л. и соавт., 2008]. Так, многочисленными исследованиями было показано, что течение туберкулеза легких сопряжено с развитием Т-клеточной иммуносупрессии, выраженность которой во многом определяет риск неблагоприятного исхода заболевания. Вместе с тем, в основе формирования Т-клеточного дефицита при туберкулезе следует учитывать не только цитотоксическое действие М. tuberculosis, но и сопровождающее на протяжении всею курса терапии аналогичное влияние некоторых антимикобактериальных препаратов на иммунокомпетентные клетки крови [Мишин В.Ю. и соавт., 2004; Чуканов В.И. и соавт., 2004; Новицкий В.В. и соавт., 2006; Bhatia V., 2006; de Kantor I., Barrera L., 2007].

К сожалению, данные литературы о влиянии противотуберкулезных препаратов на клетки иммунной системы весьма немногочисленны и в основном представлены

информацией, касающейся иммунотропного действия препаратов базисной терапии туберкулеза легких. Между тем, ряд авторов [Мишин В.Ю. и соавт., 2004; Чуканов В.И. и соавт., 2004] указывает на особенно выраженное увеличение частоты побочных реакций у пациентов, страдающих лекарственно-устойчивым туберкулезом легких, на этапе лечения препаратами резервного ряда вследствие их большей токсичности по сравнению с препаратами базовой химиотерапии.

Однако, предполагая иммуномодулирующие действие ПТГ1 в условиях характерного для туберкулезного процесса вторичного иммунодефицита, без наличия соответствующих экспериментальных исследований нельзя с уверенностью сказать об их вкладе в развитие данного рода нарушений. Кроме того, необходимость использования в процессе лечения одновременно нескольких противотуберкулезных лекарственных средств приводит к ситуации, в которой трудно оценить, какой из используемых препаратов индуцирует нежелательный эффект.

В связи с вышеизложенным, изучение проблемы прямого влияния противотуберкулезных препаратов резервного ряда на иммунокомпетентные клетки периферической крови при туберкулезе легких представляет бесспорный научный интерес и имеет значимый практический потенциал.

Цель исследования: выявить особенности реактивности иммунокомпетентпых клеток крови у больных туберкулезом легких при действии in vitro противотуберкулезных препаратов резервного ряда.

Задачи исследования:

1. Определить уровень секреции мононуклеарными лейкоцитами крови цитокинов с провоспалительной (TNF-ct) и противовоспалительной (IL-4, IL-10, TGF-P) активностью при действии in vitro противотуберкулезных препаратов резервного ряда (офлоксацина, парааминосалициловой кислоты, капреомицина) у больных с инфильтративным туберкулезом легких и у здоровых доноров.

2. Исследовать пролиферативную активность и апоптоз лимфоцитов крови у больных с инфильтративным лекарственно-чувствительным и лекарственно-устойчивым туберкулезом легких и у здоровых доноров при прямом (in vitro) действии офлоксацина, парааминосалициловой кислоты и капреомицина.

3. Оценить активность сукцинатдегидрогеназы и кислой фосфатазы в лимфоцитах крови у больных с инфильтративным лекарственно-чувствительным и лекарственно-устойчивым туберкулезом легких и у здоровых доноров при действии in vitro

противотуберкулезных препаратов резервного ряда (офлоксацина, парааминосалициловой кислоты, капреомицина). 4. Провести сравнительную оценку прямого влияния офлоксацина, парааминосалициловой кислоты и капреомицина на мононуклеарные лейкоциты периферической крови у больных с инфильтративным туберкулезом легких в зависимости от вида исследуемых препаратов и лекарственной чувствительности возбудителя.

Научная новнзна. Дана комплексная оценка метаболизма, функциональной активности и апоптоза иммуиокомпетентных клеток периферической крови у больных с впервые выявленным инфильтративным туберкулезом легких при прямом (in vilro) действии противотуберкулезных препаратов резервного ряда (офлоксацина, парааминосалициловой кислоты (ПАСК), капреомицина). При инкубации мононуклеарных лейкоцитов in vitro с резервными противотуберкулезными препаратами показано угнетение антиген-индуцированной секреции TNF-a (у больных лекарственно-резистентным туберкулезом легких при действии офлоксацина) в условиях антиген-опосредованной гиперсекреции цитокинов с противовоспалительной активностью (IL-4 у пациентов с лекарственно-чувствительным туберкулезом легких при действии офлоксацина, IL-10 и TGF-|3 у пациентов лекарственно-устойчивым туберкулезом легких при действии офлоксацина, ПАСК и капреомицина). Наряду с этим, у больных туберкулезом легких установлено препарат-индуцированное подавление пролиферативного ответа лимфоцитарных клеток на антиген (BCG) и угнетение сукцинатдегидрогеназы в лимфоцитах (в условиях перераспределения популяции лимфоцитов периферической крови с увеличением доли низкоактивных клеток). Впервые продемонстрировано, что ири этом повышаются активность кислой фосфатазы и индексы апоптоза лимфоцитов. Получены новые данные, свидетельствующие о том, что мононуклеарные лейкоциты крови у больных инфильтративным туберкулезом легких in vitro более чувствительны к повреждающему действию офлоксацина, чем к ПАСК и капреомицину, что проявляется дисбалансом цитокинопродукции (повышением секреции IL-4 и снижением выработки TNF-a (в сравнении с Г1АСК)), увеличением числа лимфоцитарных клеток с низкой активностью сукцинатдегидрогеназы и активацией апоптоза лимфоцитов крови.

Практическое и теоретическое значение работы. Получены новые данные фундаментального характера об особенностях нарушения антиген-индуцированной

секреции цитокинов мононуклеарными лейкоцитами, пролиферации, апоптоза и метаболизма лимфоцитарных клеток крови у больных с инфильтративным лекарственно-чувствительным и лекарственно-устойчивым туберкулезом легких при прямом действии противотуберкулезных препаратов резервного ряда. Результаты исследования имеют важное пракгическое значение (прежде всего, для пациентов с лекарственно-резистентным туберкулезом легких), а также теоретически обосновывают целесообразность включения в стандартную схему лечения у больных туберкулезом легких иммунокорригирующих средств для профилактики и лечения иммунодефицитных состояний, обусловленных влиянием не только возбудителя, но и противотуберкулезных препаратов.

Основные положения и выводы диссертации используются в учебном процессе в ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава на кафедре патофизиологии в тематических разделах «Патофизиология клетки», «Патофизиология иммунитета» и кафедре фармакологии в лекционных и практических разделах по теме «Побочное действие антимикробных средств».

Положения, выносимые на защту:

1. Изменения реактивности иммунокомпетентных клеток крови у больных с инфильтративным туберкулезом легких и здоровых доноров при действии in vitro офлоксацина, парааминосалициловой кислоты и капреомицина проявляются модуляцией BCG-индунированной секреции цитокинов с провоспалителыюй (TNF-а) и противовоспалительной (IL-4, IL-10, TGF-P) активностью мононуклеарными лейкоцитами, подавлением пролиферации и активацией апоптоза лимфоцитов с повышением в них активности кислой фосфатазы и угнетением активности сукцинатдегидрогепазы.

2. Апоптоз, угнетение пролиферативного ответа антигениндуцированных клеток, изменения активности сукцинатдегидрогепазы и кислой фосфатазы в лимфоцитах при действии in vitro противотуберкулезных препаратов резервного ряда более выражены у больных туберкулезом легких, чем у здоровых доноров.

3. Индуцированный препаратами дисбаланс продукции IL-10 и TNF-a мононуклеарными лейкоцитами крови in vitro у больных с инфильтративным лекарственно-устойчивым туберкулезом легких имеет более выраженный характер, чем при лекарственно-чувствительном варианте заболевания.

4. Мононуклеарные лейкоциты периферической крови у больных с инфильтративным

туберкулезом легких более чувствительны к повреждающему влиянию in vitro офлоксацина в отношении секреции цитокинов, апоптоза и активности сукцинатдегидрогеназы, чем к действию парааминосалициловой кислоты и капреомицина.

Реализация и апробация работы. Основные положения диссертации докладывались и обсуждались на межгородских конференциях молодых учёных «Актуальные проблемы патофизиологии» (Санкт-Петербург, 2009, 2010), X конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2009), Internationaler congress and Fachmesse (Hannover, 2008), Международной конференции «Физиология и патология иммунной системы» (Москва, 2008), II Архангельской международной медицинской конференции молодых ученых и студентов (Архангельск, 2009), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Вопросы патогенеза типовых патологических процессов» (Новосибирск, 2009), VIII Международной Российско-германской научно-практической конференции «Инновации в медицине. Социально значимые инфекции» (Новосибирск, 2009), Научной конференции молодых ученых с международным участием «Актуальные вопросы инфекционной патологии» (Санкт-Петербург, 2009), а также на научно-образовательных семинарах «Патофизиология системы крови и иммунитета» при Центре компетенции по проблеме инфекционных болезней им. И.И. Мечникова и Р. Коха ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава (Томск, 2009).

Работа выполнена при финансовой поддержке ФЦП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2012 годы» (ГК №02.512.11.2040; ГК №02.512.11.2112; ГК №02.512.11.0013) и Совета по грантам при Президенте РФ для поддержки ведущих научных школ РФ (НШ-4153.2006.7; НШ-2334.2008.7).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 14 работ, из них 4 в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.

Объём и структура работы. Диссертация изложена на 150 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырёх глав, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 7 рисунками и 10 таблицами. Библиографический указатель включает 352 источника, из которых 185 отечественных и 167 зарубежных авторов.

Личное участие автора. Анализ литературных данных по теме диссертации,

планирование исследования, постановка цели и задач исследования, пробоподготовка и консервация супернатантов клеточных культур, иммуноферментный анализ, оценка пролиферативной, ферментативной активности и апоптоза лимфоцитов, статистический анализ результатов, написание диссертации выполнены лично автором.

ХАРАКТЕРИСТИКА КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В основу данной работы положены результаты обследования 83 впервые выявленных больных (59 мужчин и 24 женщины) с инфильтративным туберкулезом легких (TJI) в возрасте от 18 до 55 лет. Пациенты находились на стационарном лечении в Томской областной клинической туберкулезной больнице (гл. врач - к.м.н. Г.В. Янова) во фтизиотерапевтическом отделении №1 (и.о. зав. отд. - Е.П. Степанова).

Клинический осмотр пациентов, сбор анамнеза, физикальные методы обследования больных и постановку диагноза осуществляли врачи-фтизиатры Томской областной туберкулёзной клинической больницы: к.м.н. Филинюк О.В., к.м.н. Некрасов Е.В., к.м.н. Петрова Л.Е., Степанова Е.П., Мельникова Т.И., Янов А.А., Щегерцов Д.А.

Диагноз устанавливался на основании клинической картины заболевания, данных рентгенологического исследования легких, результатов микроскопического и бактериологического исследования мокроты.

В зависимости от чувствительности возбудителя к основным противотуберкулезным препаратам (ПТП) были сформированы две группы обследованных лиц: первую группу составили 48 пациентов, выделяющих М. tuberculosis, чувствительные к основным ПТП, во вторую группу были включены 35 больных, выделяющих М. tuberculosis, устойчивые к ПТП основного ряда - изониазиду, рифампицину, стрептомицину. Лекарственную чувствительность М. tuberculosis определяли традиционным методом абсолютных концентраций на среде Левенштейна-Йенсена. Исследования проводились в бактериологических лабораториях Томской областной туберкулезной клинической больницы и Томского областного противотуберкулезного диспансера.

В исследование не включались пациенты моложе 18 и старше 55 лет, инфицированные вирусами гепатита и ВИЧ, страдающие иными инфекциями в сгадии обострения, аллергическими и аутоиммунными заболеваниями.

Контрольную группу составили 25 здоровых доноров с сопоставимыми характеристиками по полу и возрасту.

Материалом для исследования служила венозная кровь, взятая из локтевой вены утром натощак в количестве 10 мл.

Исследование иммунологических показателей у пациентов контрольной группы проводили однократно, у больных туберкулезом легких - до начала специфической противотуберкулезной химиотерапии.

Выделение мононуклеарных лейкоцитов периферической крови осуществляли методом градиентного центрифугирования [Гольдберг Е.Д. и соавт., 1992J. Для индукции секреторной функции мононуклеарных лейкоцитов и пролиферации лимфоцитов в пробы вносили вакцинный штамм BCG (Bacillus Calmette-Guerin) (ФГУП «НПО Микроген», Россия) в дозе 50 мкг/мл. Изучение влияния офлоксацина, ПАСК, капреомицина на секрецию цитокинов мононуклеарными лейкоцитами и пролиферацию лимфоцитов проводили на модели индуцированной секреции. Клетки культивировали в трех вариантах: в питательной среде (базальная); в питательной среде при добавлении вакцинного штамма BCG (антигениндуцированная); в питательной среде и присутствии препарата в комплексе с вакцинным штаммом BCG (антигениндуцированная в присутствии ПТП). Конечная концентрация исследуемых ПТП в культуральной среде для офлоксацина составила- 10 мкг/мл, ПАСК - 150 мкг/мл, капреомицина—20 мкг/мл.

Дозы химиопрепаратов рассчитывали, исходя из приемов перерасчета, принятых в токсикологии, принимая суточную дозу препарата на 1 кг массы тела за концентрацию в 1 л инкубационной среды, с учетом их фармакокинетических параметров. Субстанции химиопрепаратов («Sigma», США) были предоставлены бактериологической лабораторией Томского областного противотуберкулезного диспансера. В контрольные пробы вносили полную среду RPMI-1640. Для количественного определения концентраций цитокинов клеточные суспензии инкубировали в течение 24 ч при температуре 37°С и 5% С02. После инкубации пробирки встряхивали, центрифугировали 10 мин при 500 g, супернатант собирали и использовали для количественного определения концентрации цитокинов.

Определение содержания интерлейкина (IL) -4, -10, трансформирующего фактора роста (TGF) ß и фактора некроза опухолей (TNF) а в супернатантах культуралышх суспензий проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа согласно инструкциям, прилагаемым производителями тест-систем (ЗАО «Вектор-Бест», Россия; ООО «Цитокин», Россия; ООО «Протеиновый контур», Россия; «Biosourse», Бельгия).

Пролиферацию лимфоцитов оценивали с помощью МТТ-теста [Carmichael J., 1987]. Результаты теста выражали в единицах оптической плотности.

Для оценки апоптоза лимфоцитов периферической крови проводили отделение моноцитов путем инкубации суспензии отмытых мононуклеарных лейкоцитов в пластиковых чашках Петри при 37°С в течение 1 ч. Затем содержимое чашки переносили в пробирку, центрифугировали 10 мин. при 500 g, к осадку добавляли 1 мл полной питательной среды. Для изучения влияния ПТП резервного ряда на апоптоз лимфоцитов, клетки культивировали в питательной среде в присутствии офлоксацина (10 мкг/мл), ПАСК (150 мкг/мл) и капреомицина (20 мкг/мл) в течение 20 ч. В контрольные пробы вносили полную среду RPMI-1640.

Определение С1)95+-клеток производили лимфоцитотоксическим методом [Петров Н.В. и соавт., 1992] с использованием моноклонального антитела (НПО «Сорбент», Россия) к антигену CD95. Детекцию апоптотических лимфоцитов периферической крови осуществляли с помощью набора ANNEXIN V FITC методом люминесцентной микроскопии [«Beckman Coulter», Франция].

Активность кислой фосфатазы в лимфоцитах определяли цитохимическим методом Ф.Г. Дж. Хэйхоу, Д. Кваглино [1983]. Активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ) в лимфоцитах оценивали по методу, описанному Нахласом в модификации Р.П. Нарциссова [1969]. Результаты выражали в условных единицах с вычислением среднего цитохимического коэффициента (СЦК). Мазки периферической крови готовили после инкубации цельной крови с офлоксацином (10 мкг/мл), ПАСК (150 мкг/мл) и капреомицином (20 мкг/мл) в течение 1 ч и 2 ч. Наряду с вычислением СЦК СДГ анализировали гистограмму распределения лимфоцитов по активности фермента. Было выделено 3 популяции лимфоцитов в зависимости от активности СДГ: клетки с высокой активностью (20 и более гранул диформазана на клетку), средней (10-19) и низкой (до 9 гранул).

Статистический анализ полученных результатов осуществляли с помощью пакета прикладных программ «Statistica for Windows» (Version 6.0) фирмы «StatSoft Inc.» и «Microsoft Excel» (2003) корпорации «Microsoft». Проверку нормальности распределения количественных показателей проводили с использованием критерия Шапиро-Уилка. Было показано, что все количественные признаки в группах сравнения не имели нормального распределения, в связи с этим результаты представляли в виде медианы (Me), верхнего (75%) и нижнего (25%) квартилей (Me (Q1-Q3)). Для оценки достоверности различий выборок, не подчиняющихся критерию нормального распределения, использовали непараметрический критерий Вилкоксона для зависимых

выборок и непараметричеекий критерий Манна-Уитни для независимых выборок. Для оценки взаимосвязи между изучаемыми параметрами проводили корреляционный анализ путем вычисления коэффициента ранговой корреляции Снирмена (г). Различия считали достоверными при уровне значимости р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Доказано, что клиническая манифестация, характер течения и исход туберкулезной инфекции в значительной мере зависят от уровня иммунологической реактивности организма [Караулов A.B., 2002]. При этом нарушение баланса хелпсрных клонов Т-лимфоцитов (Th) и переключение с Thl- на ТЫ-опосредовазшый иммунный ответ лежит в основе изменения соотношения между клеточными и гуморальными иммунными реакциями, и является одним из основных факторов иммунопатогенеза туберкулеза [Елькин A.B. и соавт., 2002; Воронкова О.В. и соавт., 2007; Наследникова И.О. и соавт., 2009].

Результаты проведенного исследования показали, что течение инфильтративного лекарственно-чувствительного и лекарственно-устойчивого туберкулеза легких (JI4TJI и ЛУТЛ) сопровождалось увеличением спонтанной секреции мононуклеарными клетками IL-10 in vitro, что согласуется с данными литературы [Torres М. et al., 1998; Guyot-Revol V. et al., 2006; Peresi E. et a!., 2008; Сахно Л.В. и соавт., 2010]. Являясь исключительно важным регулятором активности иммуиокомпетентных клеток крови (ИКК), IL-10 ингибирует клеточный иммунный ответ, стимулируя в то же время пролиферацию B-лимфоцитов и развитие гуморальных иммунных реакций, малоэффективных в отношении элиминации М. tuberculosis [Кашкин К.П., 1998; Фрейдлин И.С., 2001; Кетлинский С.А., Симбирцев A.C., 2008].

Обращало на себя внимание, что базальная секреция 1L-4 и TGF-ß in vitro у больных ТЛ обеих групп варьировала в пределах контрольных значений. Поскольку клетки с относительно высокой продукцией IL-4 и TGF-ß выявляются преимущественно в период регрессии острофазных явлений и активации процессов репарации [Черешев В.А., Гусев Е.Ю., 2001; Кетлинский С.А., Симбирцев A.C., 2008], вероятно, факт обследования больных ТЛ в острый период заболевания мог обусловливать отсутствие изменений в секреции указанных цитокинов.

Известно, что инфильтративный ТЛ представляет собой начальный этап воспалительного процесса в легких, характеризующийся наименьшей степенью выраженности нарушений показателей иммунитета и клшшко-рентгенологических

проявлений заболевания по сравнению с другими формами туберкулеза. У таких больных функциональные свойства ИКК страдают в меньшей степени [Новицкий В.В. и соавт., 2005], что подтверждается результатами проведенного цитохимического анализа. Так, в лимфоцитах крови у больных ТЛ средняя фоновая активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ) не отличалась от таковой у здоровых доноров, а средний цитохимический коэффициент (СЦК) кислой фосфатазы (КФ), напротив, превышал контрольные значения. Таким образом, данные цитохимического исследования лимфоцитов позволяют сделать заключение о компенсаторно-приспособительной мобилизации ферментативного резерва клеток, направленной на реализацию их иммунных функций.

Установлено, что полноценность ответной реакции организма га бактериальную инфекцию определяется достаточной продукцией мононуклеарными лейкоцитами одного из ключевых провоспалительных цитокинов - TNF-a. Рассматривая возможные механизмы снижения спонтанной секреции TNF-a, зафиксированного нами у больных ТЛ обеих групп, можно предположить, что нарушение TNF-a-секретирующей активности мононуклеарных лейкоцитов явилось результатом токсического действия М. tuberculosis на процессы биосинтеза ДНК и белка в ИКК [Чуканов В.И., Кузьмина Н.В., 1996; Dlugovitzky D. et al., 2000; Наследпикова И.О. и соавт., 2009]. Кроме того, ограничение продукции TNF-a, являющегося одним из главных индукторов апоптоза, в условиях бактери&чьной инфекции можно расценивать как адаптивную реакцию системы иммунитета против реализации проапоптотического эффекта цитокииа на антигенспецифические клоны ИКК [Пичугин A.B., Апт A.C., 2005; Quesniaux V.F. et al., 2010]. Необходимо также учитывать тот факт, что в цитокиновой сети реализуется как ауто-, так и паракринная внутрисистемная регуляция продукции иммунорегуляторных молекул, и изменение концентрации одного медиатора может негативно сказываться на выработке другого цитокина [Фрейдлин И.С., 2001; Симбирцев A.C., 2004; Кетлинский С.А., Симбирцев A.C., 2008]. В связи с этим, не исключено, что угнетение секреции TNF-а могло быть опосредовано усиленной выработкой мононуклеарными клетками IL-10.

Культивирование мононуклеарных лейкоцитов с вакцинным штаммом BCG показало, что только у здоровых доноров и больных ЛЧТЛ регистрировалось повышение антиген-индуцированной секреции IL-4 in vitro (по сравнению с базальным ее уровнем), что, на наш взгляд, свидетельствует о сохранении функционального резерва основных его продуцентов - ТЬ2-лимфоцитов. Вместе с тем, у пациентов с ТЛ

обеих групп уровень секреции данного цитокина при действии BCG был существенно ниже, чем у здоровых лиц. Кроме того, у больных ЛУТЛ отмечалось снижение BCG-индуцированной секреции моиоиуклеарными лейкоцитами IL-10. У пациентов с ЛЧТЛ ответного повышения секреции указанного цитокина на действие BCG in vitro не обнаруживалось.

Что касается TGF-p, то уровень его продукции при ТЛ r ответ па индукцию мононуклеарных лейкоцитов BCG не претерпевал выраженных изменений. По-видимому, Т-регуляторкые клетки (T-teg) - основные продуценты данного цитокина -являются малочувствительными к действию BCG, что объясняет отсутствие ответной TGF-P-секреторной реакции, индуцированной вакциной, как у здоровых доноров, так и у больных ТЛ.

Обращало на себя внимание, что антигеп-индуцированная секреция моионуклеарными клетками TNF-a у больных ТЛ была сопоставимой с нормой. Вполне закономерно, что в процессе прогрессирования инфекции функции мононуклеарных клеток могут быть не только активированы, но и подавлены, вследствие чего могут страдать синтез и рецепция цитокинов [Маянский А.Н., 2001; Новицкий В.В. и соавт., 2006]. У здоровых доноров повышение BCG-индуцировашюй секреции TNF-a in vitro также не обнаруживалось.

Анализ влияния ПТП резервного ряда на антиген-опосредованную секрецию моионуклеарными лейкоцитами противовоспалительных цитокинов показал, что добавление в культуральную среду офлоксацина приводило к увеличению BCG-индуцировапной секреции IL-4 у больных ЛЧТЛ и TGF-[i у пацие1гтов с ЛУТЛ (табл. 1). У здоровых доноров под действием офлоксацина, напротив, регистрировалось угнетение BCG-опосредованпой секреции TGF-P (табл. 1).

Поскольку TGF-P оказывает выраженное иммуносупрессивное действие, а IL-4 является одним из основных негативных регуляторов развития реакций клеточного иммунного ответа, очевидно, что установленное нами у больных ТЛ стимулирующее влияние офлоксацина на BCG-индуцированную секрецию моионуклеарными клетками IL-4 и TGF-p, может быть рассмотрено в качестве отрицательного иммунотропного эффекта данного препарата

Добавление в культуры клеток ПАСК и капреомицина у пациентов с ЛУТЛ сопровождалось увеличением BCG-иидуцированной секреции моионуклеарными лейкоцитами TGF-p (табл. 1), более значительным при действии ПАСК. Кроме того, у

данной группы больных действие ПАСК приводило к увеличению ВСС-опосредовашюй секреции 1Ь-10 (табл. 1). При этом у пациентов с ЛУТЛ препарат-индуцированная гиперсекреция мононуклеарными лейкоцитами 1Ь-10 была более выраженной, чем при лекарственно-чувствительном варианте заболевания.

Согласно данным литературы, возможен вариант, при котором одно и то же соединение способно оказывать разнонаправленное воздействие на различные звенья иммунной системы, в том числе и популяции ИКК, что в конечном итоге может сопровождаться как стимулирующим, так и супрессорным эффектом [Голиков С.Н. и соавт., 1986; Курляндский Б.А., Филов В.А., 2002; Коваленко Л.П., 2004; Лойт А.О., 2006].

Таблица 1

Направленность действия противотуберкулезных препаратов резервного ряда на BCG-индуцированную секрецию цитокинов мононуклеарными лейкоцитами крови in vitro у здоровых доноров и больных с инфилыративным туберкулезом легких

Цкгокины Здоровые доноры Больные лекарственно-чувствительным туберкулезом легких Больные лекарственно-устойчивым туберкулезом легких

Офлоксацин ПАСК Капрсомицин Офлоксацин ПАСК Калрсомниин Офлоксацин ПАСК Калреомицин

IL-4 - - - Т - - - - -

IL-10 - - - - - - - т -

TGF-P 1 1 - - - Т т Т

TNF-a 1 I 1 - - - 1 - -

Примечание: <ф> - повышение секреции цитокина; <ф> - угнетение секреции цитокина; «-» -отсутствие эффекта препарата.

Так, при оценке влияния ПТП резервного ряда на продукцию мононуклеарными лейкоцитами ключевого провоспалительного цитокина - ЮТ-а (шрающего важную роль в реализации иммунного ответа при туберкулезной инфекции) у больных ЛУТЛ и здоровых доноров при воздействии офлоксацина было установлено снижение ВСС-индуцироваиной его секреции (табл. 1). Внесение в культуральные суспензии ПАСК и капреомицина сопровождалось угнетением ВСО-индуцированной продукции ТОТ-а только в группе здоровых лиц (табл. 1). При этом у пациентов с ЛУТЛ уровень секреции ШР-а при совместном культивировании клеток с вакцинным штаммом ВСО и офлоксацином был ниже, чем аналогичные параметры у больных ЛЧТЛ. Сравнительный

анализ результатов измерений секреции TNF-a мононуклеарными клетками in vitro в зависимости ог вида исследуемого ПТП показал, что наиболее выраженные се изменения отмечались при влиянии офлоксацина.

Известно, что о функциональной активности ИКК можно судить по уровню их пролиферации, которая напрямую определяет способность иммуноцитов к оптимальной реализации специфического иммунного ответа [Царегородцева Т.М., Серова Т.И., 2003]. Поскольку появление и размножение лекарственно-резистентных форм М tuberculosis наиболее часто встречаются у больных со сниженными иммунными реакциями организма [Чуканов В.И., Кузьмина Н.В., 1996; Flynn J.L., Chan J., 2001; Малиев Б.М. и соавт., 2005], то вполне закономерным представляется обнаруженное нами угнетение спонтанной пролиферативной активности лимфоцитов в группе пациентов с ЛУТЛ. У больных ЛУТЛ пролиферативная активность лимфоцитов была ниже, чем при лекарственно-чувствительном варианте заболевания, что могло быть обусловлено биологическими особенностями устойчивых штаммов М. tuberculosis.

Анализ BCG-индуцированной пролиферации лимфоцитов показал, что как при чувствительном, так и при устойчивом ТЛ она варьировала в пределах исходных значений. При этом у пациентов с ТЛ обеих групп показатели пролиферативного ответа лимфоцитов на BCG были ниже, чем в группе контроля, что свидетельствует о пониженной реактивности антигенспецифических лимфоцитов.

Оценивая влияние ПТП резервного ряда на BCG-индуцированную пролиферацию лимфоцитов у пациентов с ЛЧТЛ, было установлено выраженное её снижение при воздействии всех исследуемых препаратов. У больных ЛУТЛ угнетение BCG-ипдуцированной пролиферации лимфоцитов отмечалось лишь при действии ПАСК, а у здоровых допоров только при добавлении офлоксацина. Следует отметить, что у пациентов с ТЛ параметры BCG-индуцированной пролиферации лимфоцитов при добавлении офлоксацина, ПАСК и капреомицина были ниже, чем у здоровых лиц.

Сравнительный анализ изменений BCG-индуцированного пролиферативного ответа лимфоцитов в зависимости от вида используемых резервных ПТП показал, что в группе здоровых доноров наиболее выраженное снижение пролиферации клеток вызывал офлоксацин.

Хорошо известно, что осуществление лимфоцитом сложных и многообразных функций возможно благодаря структурным особенностям и высокой активности метаболических процессов, обеспечивающих клетку энергией и пластическим

материалом [Хэйхоу Ф.Г. Дж., Кваглино Д., 1983]. Вместе с тем доказано, что действие токсических агентов вызывает в клетках комплекс взаимосвязанных процессов, приводящих к повреждению целостности биологических мембран, цитоскелета, нарушению синтеза и секреции важнейших молекул, изменению ионного гомеостаза и энергетического статуса клеток [Курляндский Б.А., Филов В.А., 2002; Плетнева Т.В., 2005; Киселев О.И., 2006].

Анализ результатов цитохимического исследования активности сукцинатдегидрогеназы (СДГ) в лимфоцитах показал, что наиболее выраженные изменения распределения клеток по ферментативной активносги и снижение СЦК фермента у здоровых доноров и больных ТЛ регистрировались после 2-х часового воздействия ПТП резервного ряда. Обращало 11а себя внимание, что в контрольной группе большая часть популяции клеток была представлена лимфоцитами с низкой и умеренной активностью СДГ, а для больных с ТЛ было характерным преобладание клеток, проявляющих низкую активность фермента.

В настоящее время установлено, что угнетение энергетического обмена в лимфоцигарных клетках влечет за собой агрегацию и лабилизацию лизосом, выход их содержимого (в частности кислой фосфатазы (КФ)) в цитозоль и токсическое повреждение внутриклеточных структур, а также самой клетки, и, как следствие, - ее апоптоз [Мишин В.Ю. и соавт., 2000, 2001, 2004].

Проведенное нами исследование показало, что у больных ТЛ на фоне снижения активности СДГ регистрировалось повышение СЦК КФ, особенно выраженное после 2-часового воздействия ПТП резервного ряда. Поскольку КФ, являясь лизосомальным гидролитическим ферментом, может потенциировать разрушение белков, полипептидов, ДНК и РНК, повышение ее активности можно рассматривать как один из факторов гтрепарат-индуцированного апоптоза ИКК крови.

Подтверждением этому служит положительная взаимосвязь между фоновым СЦК КФ и исходным числом апоптотических лимфоцитов (г-0,815, р=0,026) у здоровых доноров, СЦК КФ и количеством клеток с низкой активностью СДГ (г=0,775, р=0,041) у больных с инфильтративным ТЛ после 2-х часов инкубации крови с офлоксацином, отрицательная корреляция между СЦК КФ и исходным числом лимфоцитов с высокой активностью СДГ (г=-0,971, р=0,001) и СЦК СДГ (г=-0,776, р=0,014) у здоровых доноров.

Сравнительная оценка показателей цитохимического статуса лимфоцитов

периферической крови в зависимости от вида исследуемых ПТП резервного ряда показала, что у больных ТЛ и здоровых доноров наиболее значительное угнетение активности СДГ и перераспределение популяции лимфоцитов в направлении увеличения доли низкоактивных клеток регистрировалось после 2-часового воздействия офлоксацина. Интересно, что изменение активности КФ в лимфоцитах в зависимости от вида используемого препарата отмечалось лишь в ipynnc здоровых лиц. Так, СЦК КФ после 1- и 2-часовой инкубации цельной крови с капреомицином и 2-часового воздействия ПАСК был выше, чем при действии офлоксацина.

В целом, характеризуя препарат-индуцировапиые изменения активности СДГ и КФ в лимфоцитах, следует отметить, что нарушения в цитохимическом статусе лимфоцитарных клеток крови у больных ТЛ были более выраженными, чем у здоровых доноров. Кроме того, основываясь на сходном характере изменений в активности ферментов под влиянием офлоксацина, ПАСК и капреомицина, мы можем предположить универсальный механизм их повреждающего действия на лимфоциты крови.

В результате оценки спонтанного апоптоза лимфоцитов периферической крови было обнаружено повышение количества клеток, экспрессируюших маркер апоптотичсской предуготовленности - антиген CD95, у больных лекарственно-чувствительным ТЛ. При этом у пациентов с ТЛ обеих групп число апоптотических лимфоцитов (annexin V-презентирующих клеток) оставалось в пределах контрольных значений. Аналогичные данные были получены и друтой группой исследователей [Бойчук C.B. и соавт. 2003]. Следует отметить, что у пациентов с ЛЧТЛ содержание CD95"-клеток было выше, чем при лекарственно-устойчивой форме заболевания.

Анализ влияния ПТП резервного ряда на апоптоз лимфоцитов позволил установить, что инкубация клеток с офлоксацином приводила к увеличению числа CD95+- (у здоровых доноров и больных ЛЧТЛ) и annexin V*-лимфоцитов (во всех группах обследуемых). При добавлении ПАСК повышение количества клеток, экспрессирующих антиген CD95, регистрировалось только у здоровых лиц, а увеличение доли апоптотических лимфоцитов — лишь у пациентов с ЛЧТЛ. Действие капреомицина характеризовалось увеличением числа CD95 ^-клеток только у больных ЛУТЛ.

Сравнительная оценка влияния резервных ПТП на апоптоз лимфоцитов крови показала, что наиболее выраженный аноптогенный эффект у больных ТЛ и здоровых

доноров оказывает офлоксацин.

Исходя из известных способов индукции алоптоза и полученных нами данных, можно заключить, что изучаемые ПТП резервного ряда способны запускать апоптоз как по внешнему (за счет повышения экспрессии Fas-рецептора), так и по внутреннему пути. Однако, основываясь на результатах собственных исследований, можно предположить, что повышение количества апоптотических лимфоцитов при действии офлоксацина и Г1АСК, вероятнее всего, обусловливалось запуском апоптотической гибели клетки по митохондриалыюму пути (за счет энергодефицита в клетках, активации ПОЛ, повреждений структуры ДНК), что отчасти подтверждалось отсутствием корреляции между числом CD95+- и количеством annexin V-презентирующих лимфоцитов.

Учитывая, что апоптоз является одним из ключевых процессов, определяющих дизрегуляцию антигенспецифического ответа при туберкулезной инфекции, установленное препарат-индуцированное увеличение числа СВ95+-презентирующих и апоптотических лимфоцитов, по-видимому, служит проявлением негативного иммунотропного действия ПТП.

Поскольку сравнительный анализ результатов цитохимического анализа лимфоцитов, их пролиферативной активности и аиоптоза при прямом (in vitro) действии ПТП резервного ряда показал, что изменения исследуемых параметров у пациентов с ТЛ были более выраженными, чем у здоровых доноров, можно сделать вывод о большей чувствительности клеток больных ТЛ к экзогенным воздействиям, что, возможно, является одним из механизмов формирования вторичной иммунной недостаточности, опосредованной лекарственным воздействием.

Сопоставляя результаты собственных исследований и данные литературы о влиянии ПТП на реактивность мононуклеарных лейкоцитов крови, можно заключить, что противотуберкулёзные препараты резервного ряда оказывают модулирующее влияние на клетки иммунной системы с преобладанием негативных эффектов. Резюмируя выше описанное, можно предложить схему (рис. 1), отражающую механизмы влияния ПТП резервного ряда на мононуклеарные лейкоциты крови, согласно которой их иммунотропное действие in vitro реализуется через изменение BCG-индуцированной секреции цитокинов, угнетение пролиферации и активацию апоптоза лимфоцитарных клеток с индукцией в них метаболических нарушений (снижение активности СДГ и повышение активности КФ).

Рис. 8. Механизмы влияния противотуберкулёзных препаратов резервного ряда на реактивность мононуклеарных клеток крови на основании данных литературы и результатов собственного исследования (в выделенных рамках). Примечание: ПАСК - парааминосалициловая кислота, ПОЛ - перекисное окисление липипдов, АОЗ - антиоксидантная защита, СДГ - сукцинатдегидрогеназа, КФ - кислая фосфатаза.

Подводя итог, следует отметить, что установленное под действием ПТП резервного ряда увеличение секреции цитокинов, обладающих выраженной противовоспалительной активностью, имеет важное практическое значение, прежде всего, для больных с ЛУТЛ, поскольку эти препараты используются для лечения больных туберкулезом, устойчивым к препаратам базовой химиотерапии, а вызванные ими иммунопатологические реакции могут служить одним из факторов вторичной иммунной недостаточности, сопровождающей течение туберкулезной инфекции.

Изучение влияния резервных противотуберкулезных препаратов на параметры, характеризующие функциональную активность мононуклеарных лейкоцитов, у пациентов с TJI является важным аспектом в определении оптимальной стратегии контроля над заболеванием и обосновывает целесообразность проведения иммунокорригирующией терапии у данной группы больных.

ВЫВОДЫ

1. Изменения секреции цитокинов мононуклеарными лейкоцитами крови у больных туберкулезом легких при действии in vitro противотуберкулезных препаратов резервного ряда проявляются увеличением BCG-индуцированной секреции противовоспалительных цитокинов: IL-4 при действии офлоксацина (в случае лекарственно-чувствительного варианта заболевания), TGF-p при действии офлоксацина, парааминосалициловой кислоты, капреомицина и IL-10 при действии парааминосалициловой кислоты (в случае лекарственно-резистентного варианта инфекции). У здоровых доноров прямое действие резервных противотуберкулезных препаратов сопровождается угнетением BCG-индуцированной продукции TGF-p.

2. Наряду со стимуляцией секреции цитокинов с противовоспалительной активностью у больных с инфильтративным лекарственно-устойчивы»! туберкулезом легких офлоксацин in vitro подавляет BCG-индуцированную секрецию TNF-a. У здоровых доноров угнетение продукции TNF-a in vitro вызывают офлоксацин, парааминосалициловая кислота и капреомицин.

3. Угнетение пролиферативного ответа лимфоцитов на антигенный стимул (BCG) in vitro у больных с лекарственно-чувствительным туберкулезом легких при действии офлоксацина, парааминосалициловой кислоты и капреомицина, у пациентов с лекарственно-устойчивым туберкулезом легких под влиянием парааминосалициловой кислоты и у здоровых доноров при действии офлоксацина свидетельствует о способности противотуберкулезных препаратов резервного ряда

подавлять клональную экспансию антигенспецифичсских лимфоцитарных клеток.

4. Характерной реакцией лимфоцитов крови при действии in vitro офлоксацина (у больных туберкулезом легких и здоровых доноров) и парааминосалициловой кислоты (у пациентов с лекарственно-чувствительным туберкулезом легких) является активация апоптоза, выражающаяся повышением количества annexin V-позитивных клеток.

5. Дисбаланс активности внутриклеточных ферментов при действии in vitro противотуберкулезных препаратов резервного ряда (офлоксацина, парааминосалициловой кислоты и капреомицина) у здоровых доноров и больных с инфильтративным туберкулезом легких характеризуется активацией кислой фосфатазы и угнетением сукцинатдегидрогеназы в лимфоцитах.

6. Иммуномодулирующие эффекты противотуберкулезных препаратов резервного ряда (офлоксацина, парааминосалициловой кислоты и капреомицина) in vitro более выражены у больных туберкулезом легких, чем у здоровых допоров, а также при лекарственно-устойчивом, чем при лекарственно-чувствительном варианте туберкулезной инфекции.

7. Мононуклеарные лейкоциты периферической крови наиболее чувствительны к действию in vitro офлоксацина, что у больных туберкулезом легких проявляется повышением BCG-индуцированной секреции IL-4 и угнетением продукции TNF-a, активацией апоптоза лимфоцитов, а также более значимым (чем при влиянии парааминосалициловой кислоты и капреомицина) увеличением числа лимфоцитарных клеток с низкой активностью фермента цикла трикарбоновых кислот (сукцинатдегидрогеназы).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Роль цитокинов в модуляции субпопуляционного состава лимфоцитов крови у больных туберкулезом легких [текст] / Р.Р. Хасанова, О.В. Воронкова, О.И. Уразова,

B.В. Новицкий, Т.Е. Будкипа и др. II Проблемы туберкулеза и болезней легких. - 2008. -№ 3. -

C. 31-35.

2. Сравнительная оценка показателей адаптивного иммунитета при лекарственно-чувствительном и лекарсгвенно-устойчивом туберкулезе легких [текст] / О.В. Воронкова, О.И. Уразова, Р.Р. Хасанова, В.В. Новицкий, В.А. Серебрякова, И.О. Наследникова, Т.Е. Будкипа и др. // Аллергология и иммунология. - 2008. - Т. 9, № 3. - С. 288-289.

3. The molecular-genetic bases of management of human adaptable blood system reactivity during infection / V.V. Novitsky, O.I. Urazova, O.V. Voronkova, I.O. Naslednikova, Т.Е. Budkina et al. // Internationaler congress and fachmesse. - Hannover, 2008. - P. 65-66.

4. Реактивность лимфоцитов крови при туберкулезе легких [текст] / Р.Р. Хасанова, О.В. Воронкова, О.И. Уразова, В,В. Новицкий, А.К. Стрелис, В.А. Серебрякова, Т.Е. Будкина и др. //

Медицинская иммунология. - 2009. - T. 11,№ 1. - С. 35-40.

5. Влияние противотуберкулезных химиопрепаратов резервного ряда на цитокинпродунирующую способность мононуклеарных лейкоцитов при туберкулезе легких [текст] / Т.Е. Кононова, О.И. Уразова, В.В. Новицкий и др. // Бюллетень северного государственного медицинского университета. - 2009. - № 1. - С. 178-179.

6. Влияние офлоксацина на цитокинпродуцирующую способность мононуклеарных лейкоцитов при туберкулезе легких [текст] / Т.Е. Кононова, В.А. Серебрякова, O.A. Васильева и др. // Актуальные проблемы патофизиологии: Материалы XV межгородской конференции молодых ученых. - СПб., 2009. - С. 57.

7. Сравнительное исследование продукции противовоспалительных цитокинов у больных туберкулезом легких под воздействием противотуберкулезных препаратов резервного ряда [текст] / Т.Е. Кононова, О.И. Уразова, В.В. Новицкий и др. // Инновации в медицине. Социально значимые инфекции: Материалы VIII Международной Российско-германской научно-практической конференции. - Новосибирск, 2009. - С. 200-202.

8. Препарат-индунированный апоптоз лимфоцитов периферической крови у больных туберкулезом легких [текст] / В.А. Серебрякова, О.И. Уразова, В.В. Новицкий, Т.Е. Кононова и др. // Инновации в медицине. Социально значимые инфекции: Материалы VIII Международной Российско-германской научно-практической конференции. - Новосибирск, 2009. -С. 218-219.

9. TGF-ß как фактор иммуносупрессии у туберкулинотрицательных пациентов с различными клиническими формами туберкулеза легких [текст] / А.Е. Колосова, Е.Г. Чурина, О.И. Уразова, В.А. Серебрякова, Т.Е. Будкина и др. // Инновации в медицине. Социально значимые инфекции: Материалы VIII Международной Российско-германской научно-практической конференции. - Новосибирск, 2009. - С. 198-199.

10. Особенности секреции цитокинов при действии противотуберкулезных препаратов in vitro [текст] / O.A. Васильева, В.А. Серебрякова, О.И. Уразова, В.В. Новицкий, Т.Е. Кононова // Вопросы патогенеза типовых патологических процессов: Труды Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. - Новосибирск, 2009. - С. 60-63.

11. Оценка влияния офлоксацина, парааминосалициловой кислоты и капреомицина на пролиферативную активность лимфоцитов у больных туберкулезом легких [текст] / В.А. Серебрякова, О.И. Уразова, В.В. Новицкий, Т.Е. Кононова и др. // Науки о человеке: Материалы X конгресса молодых ученых и специалистов. - Томск, 2009. - С. 103-105.

12. Особенности пролиферативной и IL-2-продуцирующей активности лимфоцитов крови при лекарственно-устойчивом туберкулезе легких [текст] / P.P. Хасанова, О.В. Воронкова, О.И. Уразова, И.О. Наследникова, Т.Е. Будкина, E.J1. Никулина//Актуальные вопросы инфекционной патологии: Материалы Научной конференции молодых ученых с международным участием. - СПб., 2009. — С. 50-51.

13. Модулирующий эффект офлоксацина на апоптоз лимфоцитов периферической крови у больных туберкулезом легких [текст] / В.А. Серебрякова, Т.Е. Кононова, O.A. Васильева и др, // Актуальные проблемы патофизиологии: Материалы XVI межгородской конференции молодых ученых. - СПб., 2010. - С. 156-158.

14. Влияние противотуберкулезных препаратов резервного ряда на продукцию противовоспалительных цитокинов у больных туберкулезом легких [текст] / Т.Е. Кононова, О.И. Уразова, В.А. Серебрякова, В.В. Новицкий и др. // Бюллетень сибирской медицины. -2010.-Т. 9, №5.-С. 64-71.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ИКК - иммунокомпетентные клетки КФ - кислая фосфатаза

ЛУТЛ - лекарственно-устойчивый туберкулёз лёгких

ЛЧТЛ - лекарственно-чувствительный туберкулёз лёгких

ПАСК - парааминосалициловая кислота

ПТП - противотуберкулёзные препараты

СДГ - сукцинатдегидрогеназа

СЦК - средний цитохимический коэффициент

ТЛ - туберкулез лёгких BCG - Bacillus Calmette-Guirin IL - Interleukin - интерлейкин

M. tuberculosis (Mycobacterium tuberculosis) - микобактерии туберкулеза TGF - Transforming grows factor - трансформирующий фактор роста Th - T-helper- субпопуляция CD4+ Т-лимфоцитов/хелперов TNF - Tumor necrosis factor - фактор некроза опухолей

Подписано в печать 23.11.2010 г. Усл.печ.листов 0,65 Печать на ризографе. Отпечатано в лаборатории оперативной полиграфии СибГМУ 634050, г. Томск, Московский тракт, 2, тел. 53-04-08 Заказ № 295 Тираж 100 экземпляров