Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Разработка технологии получения субстанции сополимера N-винилпирролидона с 2-метил-5-винилпиридином и разработка лекарственной формы на ее основе

На правах рукописи

КОЧКИНА ЮЛИЯ ВЯЧЕСЛАВОВНА

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ СУБСТАНЦИИ СОПОЛИМЕРА К-ВИНИЛПИРРОЛИДОНА С 2-МЕТИЛ-5-ВИНИЛПИРИДИНОМ И РАЗРАБОТКА ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ НА ЕЕ ОСНОВЕ

14.04.01 - технология получения лекарств

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата фармацевтических наук

1 6 ОКТ 2014

Москва-2014

005553416

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московский государственный университет тонких химических технологий имени М.В. Ломоносова»

Научный руководитель:

доктор технических наук, профессор Кедик Станислав Анатольевич Официальные оппоненты:

Саканян Елена Ивановна, доктор фармацевтических наук, профессор, ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздрава России, Центр фармакопеи и международного сотрудничества, директор

Анурова Мария Николаевна, кандидат фармацевтических наук, доцент, ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» Минздрава России, кафедра фармацевтической технологии, доцент

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Казанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится «24» ноября 2014 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 006.070.01 при Государственном научном учреждении Всероссийском научно-исследовательском институте лекарственных и ароматических растений (117216, г. Москва, ул. Грина, д. 7) по адресу: 123056, г. Москва, ул. Красина, д. 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте ГНУ ВИЛАР Россельхозакадемии wvvw.vilarnii.ru

Автореферат диссертации разослан

Ученый секретарь диссертационного совета

Громакова Алла Ивановна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность

В последнее время доля заболеваний, вызванных ослаблением иммунной системы, постоянно растет. Успешное лечение и профилактика данных заболеваний зависит от разработки новых высокоэффективных лекарственных препаратов. В настоящее время, не учитывая вакцин, используются иммуномодуляторы природного и синтетического происхождения.

В качестве основы для разработки синтетических иммуномодуляторов особый интерес представляют полимеры, обладающие широким спектром собственного физиологического действия. В эту группу входят сополимеры поли-1Ч-винилпирролидона, который, в свою очередь, применяется как самостоятельный препарат дезинтоксикационного действия и пролонгатор действия лекарств, а некоторые его сополимеры отличаются собственной физиологической активностью. Среди них можно выделить сополимеры Ы-винилпирролидона и производных пиридина, у которых был обнаружен широкий спектр физиологического воздействия.

Создание эффективных лекарственных средств на основе этих сополимеров требует разработки технологии их получения, позволяющей обеспечить вещества с заданными характеристиками: определенным соотношением звеньев мономеров, узким молекулярно-массовым распределением с заданными предельными значениями и значением средней молекулярной массы полимеров, а также изучения свойств сополимеров для получения стабильных лекарственных форм.

Целью работы является разработка технологии получения субстанции синтетического сополимера Ы-винилпирролидона с 2-метил-5-винилпиридином и инъекционной формы препарата на ее основе иммуномодулирующего действия.

Для реализации поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

1. Разработать технологию получения субстанции сополимера Ы-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина;

2. Изучить физико-химические свойства субстанции сополимера, разработать методики качественного и количественного анализа для ее стандартизации и изучения стабильности;

3. Разработать состав и технологию получения инъекционной лекарственной формы для внутримышечного введения на основе субстанции сополимера;

4. Провести стандартизацию и изучить стабильность разработанной лекарственной формы сополимера;

5. Разработать и апробировать нормативную документацию на субстанцию сополимера и его инъекционную лекарственную форму.

Научная новизна работы

Впервые методом радикальной сополимеризации М-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина получена оригинальная фармацевтически активная

субстанция сополимера с молекулярной массой от 15,0 до 28,0 кДа и с содержанием звеньев 2-метил-5-винилпиридина от 25 до 31 мол.%.

Установлены химическое строение, молекулярно-массовые характеристики и физико-химические свойства сополимера.

Разработаны методы стандартизации субстанции по следующим параметрам: посторонние примеси, остаточные органические растворители, молекулярно-массовое распределение, содержание мономерных звеньев и количественное определение.

На основании проведенных комплексных физико-химических исследований теоретически и экспериментально обоснованы оптимальный состав и технология получения лекарственной формы на основе субстанции сополимера, обеспечивающей высокие показатели фармацевтической активности.

На базе ФГБУН «Института Токсикологии» ФМБА России изучены и подтверждены безопасность субстанции сополимера по показателям острой, подострой и хронической токсичности и активирующее действие лекарственной формы на неспецифическую резистентность организма, фагоцитоз, гуморальный и клеточный иммунитет.

Практическая значимость

Синтезирован и запатентован оригинальный сополимер М-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина (патент РФ на изобретение № 2430932 от 29.10.2010), создана установка для его получения (патент РФ на полезную модель № 110743 от 08.07.2011).

По результатам исследований разработаны и внедрены:

— Оригинальная субстанция и методы контроля качества субстанции (проект нормативной документации (НД), апробирован ЗАО «ИФТ» 03.12.2012);

— Технология получения субстанции сополимера (лабораторный регламент, апробирован ЗАО «ИФТ» 19.12.2012);

— Состав и методы контроля качества инъекционной лекарственной формы (проект НД, апробирован ЗАО «ИФТ» 29.05.2013);

— Технология получения инъекционной лекарственной формы (лабораторный регламент, апробирован ЗАО «ИФТ» 21.05.2013);

— Основные положения диссертации внедрены в учебном процессе кафедры биомедицинских и фармацевтических технологий МИТХТ имени М.В. Ломоносова (акт внедрения от 30.04.2013).

Основные положения, выносимые на защиту:

— Технология получения оригинальной субстанции М-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина, изучение его структуры и физико-химических свойств;

— Методики качественного и количественного анализа субстанции и инъекционной лекарственной формы на её основе;

— Результаты разработки лекарственной формы в виде раствора для внутримышечного введения, ее стандартизация и технология получения.

Апробация работы

Основные положения диссертации обсуждались на 2-м Международном симпозиуме Вюпапо1ох (Греция, 2011г.); Международной научно-практической конференции «Фармацевтические и медицинские биотехнологии» РХТУ им. Д.И. Менделеева (Москва, 2012г.); XIX Российском национальном конгрессе «Человек и Лекарство» (Москва, 2012г.); I Международной интернет-конференции «На стыке наук. Физико-химическая серия» (Казань, 2013г.).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в рамках НИР кафедры Биомедицинских и фармацевтических технологий ФГБОУ ВПО «Московского государственного университета тонких химических технологий имени М.В. Ломоносова» (МИТХТ) (НИР 2Б-18-357).

Содержание диссертационной работы соответствует . паспорту специальности 14.04.01 - «Технология получения лекарств». Результаты проведённых исследований соответствуют пунктам 3 и 4 паспорта специальности «Технология получения лекарств».

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 14 работ, в том числе 6 статей в научных изданиях, рекомендованных ВАК, 2 патента РФ, 6 тезисов докладов.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 139 страницах машинописного текста, содержит 13 таблиц и 29 рисунков. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, экспериментальных исследований, выводов, библиографического списка и 10 приложений. Список литературы включает 98 источника, из них 34 работы зарубежных авторов.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении изложены актуальность, цель и задачи исследования, научная новизна и практическая значимость работы.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

В первой главе представлен обзор литературы по теме диссертации, включающий сведения о физиологически активных сополимерах на основе К-винилпирролидона, их химической структуре, физико-химических и биологических свойствах. Проанализированы современные лекарственные препараты иммуномодулирующего действия и их применение в медицинской практике. Обоснован выбор объекта исследования.

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Во второй главе дана характеристика объекта исследования, исходных и вспомогательных веществ, описаны методики, применяемые для стандартизации субстанции сополимера и лекарственной формы.

Объектом исследования являлась оригинальная биологически активная субстанция, представляющая собой сополимер N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина, в котором количество звеньев 2-метил-5-винилпиридина (МВП) составляет п = 25,0 - 31,0 мол.% и среднемассовая молекулярная масса Mw= 15 000-28 ООО Да. примесей проводили на газожидкостном хроматографе методом внешнего стандарта на капиллярной колонке 2B-WAX из плавленого кварца длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм с нанесенной на внутреннюю поверхность пленкой полиэтиленгликоля толщиной 0,25 мкм. Содержание остаточных органических растворителей определяли с помощью газожидкостной хроматографии (ГЖХ) методом внутренней нормализации на капиллярной колонке VF-lms из плавленого кварца длиной 15 ми внутренним диаметром 0,25 мм с нанесенной на внутреннюю поверхность пленкой диметилполисилоксана толщиной 0,25 мкм. Молекулярно-массовое распределение сополимера находили с помощью гельпроникающей хроматографии (ГПХ) с использованием стандартных образцов поливинилпирролидона (ПВП) на колонке TSKG4000PW 600x7.5 мм. Перекисные соединения и количество звеньев МВП определяли титрованием. Значения характеристической вязкости находили по времени истечения в визкозиметре ВПЖ-2м Лабтех. Прозрачность, цветность и рН раствора, сульфатную золу, тяжелые металлы, потерю в массе при высушивании, пирогенность, микробиологическую чистоту, стерильность, вязкость определяли по стандартным методикам, описанным в ГФ XI и ГФ XII ч.1. Оценку безвредности и фармакологической активности субстанции сополимера и лекарственной формы проводили по унифицированным методикам («Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» под ред. Р.Ю. Хабриева, М.: Медицина, 2005, «Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств» под ред. А.Н. Миронов, М.: Гриф и К, 2012).

Экспериментальные данные физико-химических и технологических исследований субстанции сополимера статистически обработаны по стандартным методам ГФ XI с использованием для расчетов программы MS Excel.

ГЛАВА 3. ТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ, ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА СУБСТАНЦИИ

СОПОЛИМЕРА

ЗЛ. Разработка технологии получения субстанции сополимера

В основе разработанной технологической схемы производства лежит реакция радикальной сополимеризации N-винилпирролидона (ВПД) и 2-метил-

.......сн- —< 0.5

о

п

-сн2—сн~

о г-.... / \

100-л

Определение посторонних

5-винилпиридина с использованием динитрил азобисизомасляной кислоты (ДАК) в качестве инициатора и пероксида водорода в качестве регулятора молекулярной массы с последующим выделением сополимера из реакционной массы осадительной смесью бутилацетат:циклогексан и переосаждением из этанола осадительной смесью того же состава

В начале процесса мономеры перегоняли под вакуумом для удаления стабилизаторов. При проведении стадии сополимеризации было известно, что для получения сополимера с молекулярной массой 35 - 50 кДа и содержанием | звеньев МВП 35 - 40 мол.% в качестве реакционной массы используют смесь циклогексана, пероксида водорода, ДАК и мономеры в мольном соотношении ВПД:МВП 1:0,026, которую нагревают и каждые 20 минут разбавляют подпиточной смесью с содержанием мономеров ВПД:МВП 3:2. Для проведения стадии сополимеризации была создана установка (рисунок 1) с использованием современных контролирующих устройств и систем управления. Для получения сополимера с более низкой молекулярной массой и более низким содержанием МВП готовили подпиточную смесь в соотношении 2:1 (вместо 3:2) и большим содержанием 30 % раствора перекиси водорода.

Очищенные мономеры смешивали в реакторе 1 в соотношении ВПД:МВП 97:3. Емкость 2 заполняли смесью МВП и ВПД в соотношении 3:2. Емкость 5 заполняли этанолом для последующего растворения пробы. Программное обеспечение на компьютере 8 по управляющему сигналу 1 (УС1) координировало отбор пробы реакционной массы в узел 6 с управляемого пробоотборника 4. Посредством управляющего сигнала (УС2) начинался хроматографический анализ пробы на определение соотношения непрореагировавших мономеров. Хроматограф с помощью программного обеспечения проводил расчет необходимого количества подпиточной смеси и подавал соответствующий аналитический сигнал (АС) на компьютер. Через управляющий сигнал (УСЗ) дозатором 3 осуществлялась подача подпиточной смеси из емкости 2 в реактор 1.

Рассчитанное количество подпиточной смеси компенсировало убыль

исходных мономеров МВП и ВПД в реакционной массе. Реакцию заканчивали по достижении 20 % конверсии по ВПД. Необходимость контроля соотношения мономеров ВПД и МВП связана с существенным различием их реакционной

способности. Проведение синтеза с постепенным добавлением смеси

реакционноспособных мономеров обеспечивает

Рисунок 1 - Установка для проведения контролируемой сополимеризации

постоянное их соотношение в реакционной массе на протяжении всего процесса, что позволяет получать сополимеры с заданным количеством мономерных звеньев и узким распределением по молекулярной массе.

Для выделения сополимера была разработана технология осаждения/переосаждения, позволившая исключить стадию водной экстракции труднодоступным хладоном 114В2, используемую ранее при получении сополимеров ВПД и МВП.

В качестве осадителей рассматривались бутилацетат, этилацетат, гексан, циклогексан и их сочетания, однако лучше всего для выделения осадка сополимера подошло сочетание бутилацетат и циклогексан, при котором фракция сополимера практически полностью выпадала в осадок, а ВПД переходил в раствор. Результаты выбора соотношения компонентов для осаждения представлены в таблице 1. Лучшим осадителем проявила себя смесь бутилацетата и циклогексана в соотношении 9:1.

Таблица 1 - Зависимость качества осадка от соотношений компонентов осадительной смеси для осаждения

м» пп Шифр образца Бутилацетат/ циклогексан объемы.ч. Количественные показатели

мелкодисперсный крупно-дисперсн. комки налипание на стенке и мешалке

1. 01/1 1 9,5:0,5 — + — —

9:1 + — — —

8:2 — — + +

7:3 — — + +

2. 02/11 9,5:0,5 — + — —

9:1 + — — —

8:2 — — — +

7:3 — — + +

На стадии осаждения реакционную массу разбавляли частью осадительной смеси, по каплям при перемешивании добавляли в реактор для осаждения и отстаивали. Затем сливали супернатант, суспензию передавали под давлением аргона на друк-фильтр и фильтровали под давлением. Сырой осадок помещали в сушильный шкаф и сушили при температуре 40 °С 2 ч и при 50 - 60 °С 3 - 4 ч.

Для получения более чистой субстанции необходимо проводить переосаждение сополимера. Однако, поскольку после первого осаждения сырец содержал значительно меньше мономера ВПД, было подобрано новое соотношение компонентов осадительной смеси, представленное в таблице 2. В данном случае лучшим осадителем для переосаждения оказалась смесь бутилацетата и циклогексана в соотношении 8:2, т.е. 4:1.

На стадии переосаждения сырец сополимера растворяли в этиловом спирте, проводили переосаждение, фильтровали и сушили под вытяжкой 2 - 3 ч, под вакуумом при температуре 60 - 70 °С в течение 3 - 4 ч и при

температуре 90 - 95 °С до тех пор, пока потеря массы не снизится до 5 %. Полученный сополимер фасовали, маркировали и отправляли на склад. Разработанная технологическая схема представлена на рисунке 2.

Таблица 2 - Зависимость качества осадка от соотношений компонентов осадительной смеси для переосаждения

№№ Шифр Бутилацетат/ Количественные показатели

пп образца циклогексан мелко- крупно- комки налипание на

объемн.ч. дисперсный дисперсн. стенке и мешалке

1. 01/1 1 9:1 — + — —

8:2 + — — —

7:3 — — — +

6:4 — — + +

2. 02/11 9:1 — + — —

8:2 + — — —

7:3 — — — +

6:4 — — + +

ВР.1

Санитарная обработка производства

ТП.2.1 Очистка МВП

ТП.2.2 Очистка ВПД

МВП II ВПД со стадии ТП.2: циклогексан, перекись водорода. ДАК

Циклогексан, бутилацетат

на утилизацию

ТП.2 Подготовка сырья

Сополнмернзацня

I

ТП.4 Осаждение сополимера

Кг

на утилизацию

фильтрат

а утилизацию

ТП.5

Фильтрация и сушка сырца

фильтрат -

а утилизацию

Этанол, бутилацетат. циклогексан ^^^ ТП.6 Кт Растворение и переосажденне

Циклогексан -► ТП.7 Кт Фильтрация и сушка сополимера

фильтрат -

на утилизацию

1 фильтрат "

На склад У МО. 8 Кх Фасовка, упаковка и маркировка продукта

субстанция

Рисунок 2 - Технологическая схема получения субстанции сополимера

Для "стандартизации сополимера в качестве фармацевтической субстанции необходимо было разработать методы анализа по показателям подлинность, посторонние примеси, остаточные органические растворители, количественное определение, а также установить специфические характеристики сополимера: содержание мономерных звеньев МВП, характеристическую вязкость и молекулярно-массовое распределение. Методы контроля разработаны совместно с ЗАО «Институт фармацевтических технологий»

3.2. Специфические методы анализа сополимера

3.2.1. Содержание мономерных звеньев МВП

Для определения содержания мономерных звеньев МВП в сополимере

использовали метод потенциометрического неводного титрования в среде

уксусного ангидрида раствором хлорной кислоты с помощью

комбинированного электрода ЭСр-10101 и электрода ЭС 10601. Точку

эквивалентности определяли графически по максимуму на дифференциальной

зависимости АН/ЛУ от V (рисунок 3). Весовую долю (X) звеньев МВП

К ■ 0.\ ■ (V - Уи) ■ М]

вычисляют по формуле: л =-—---

а ■1000

где К - поправочный коэффициент к нормальности хлорной кислоты; У0 и V - объем хлорной кислоты, израсходованный на титрование в контрольном опыте и на титрование навески субстанции, см3; М, — молекулярная масса МВП, равная 111,15 Да; а- навеска субстанции, г.

Содержание звеньев МВП (п), выраженное в мольных процентах,

вычисляют по формуле: п =

Мг - А" 100

Мг(1-Х) + М2-Х

где М2 — молекулярная масса 1Ч-винилпирролидона. равная 118,16 Да.

По результатам анализа 5 серий были определены границы значений: от 25,0 до 31,0 мол.%

Рисунок 3 - Графики определения эквивалентного объема титранта по 1) зависимости потенциала от объема 2) дифференциальной зависимости разности потенциалов к разности объемов от объема титранта

0,081

0,0808

^ 0,0806

5 0,0804 я

§ 0,0802 m

m 0,08 0,0798 0,0796

0,6552 0,862 1,0659 1,2918 1,5864 Концентрация, r/дл

Рисунок 4 - Расчет характеристической вязкости

3.2.2 Характеристическая вязкость Определяли вискозиметрически по времени истечения раствора сополимера в органическом

растворителе (ОДМ лития бромида в ДМФА) для подавления ассоциации макромолекул. По графику зависимости приведенной вязкости от концентрации (рисунок 4) находили характеристическую вязкость как пересечение линии тренда и оси ординат. По результатам 5 серий были определены границы значений: от 0,07 до 0,12 дл/г.

3.2.3. Молекулярно-массовое распределение (ММР)

Для определения ММР сополимера была разработана методика на основе ГПХ с использованием рефрактометрического детектора на колонке TSKG4000PW 600x7.5 мм. В качестве подвижной фазы использовался элюент следующего состава: метанол - 80 % по объему, вода - 20 %, LiBr -0,02 M. Выбор элюента обеспечивает полную растворимость сополимера и его нормальное эксклюзионно-хроматографическое поведение на колонке.

В качестве стандартов для построения калибровки (рисунок 5) использовали ПВП марок PVPR66K, PVPR22K, PVPR16K, PVPR14K и PVPR5K (American Polymer Standards Corporation). По результатам хроматографирования с помощью калибровки были получены кривые ММР (рисунок 6). После нормировки фракций были определены значения среднемассовой молекулярной массы. Величины молекулярных масс 10 % низко- (НМФ) и 10 % высокомолекулярных (ВМФ) фракций сополимера определены по интегральной кривой ММР.

кривая для определения ММР сополимера

По результатам анализа 5 серий (таблица 3) были определены предельные значения молекулярных масс: среднемассовая от 15 ООО до 28 ООО Да, НМФ -не менее 300 Да, ВМФ - не более 45 ООО Да.

Таблица 3 - Результаты анализа 5 серий сополимера по параметру ММР

№ Серия м» Да М\у10% НМФ, Да М\у10% ВМФ, Да

1 160113 16 612 372 40 743

2 300113 21 424 411 42 316

3 120213 26 758 535 43 665

4 200213 17 816 446 41 857

5 040313 24 647 459 43 871

3.3. Общие методы анализа субстанции

В основу анализа подлинности субстанции легла качественная реакция с пикриновой кислотой на звенья 2-метил-5-винилпиридина, основанная на образовании нерастворимой соли сополимера (осадок желтого цвета), а также реакция на звенья Ы-винилпирролидона, основанная на образовании комплекса с йодом (коричневый осадок).

3.3.1. Посторонние примеси

Согласно разработанной технологии получения сополимера посторонними примесями могут быть: остаточный мономер | 1^-винилпирролидон, побочный продукт полимеризации а-пирролидон и перекисные соединения. 2-метил-5-винилпиридин полностью расходуется в процессе полимеризации из-за его высокой реакционной способности, поэтому его остаточное содержание не нормируется.

Для совместного определения Ы-винилпирролидона и а-пирролидона был разработан метод с использованием ГЖХ, который заключается в разделении компонентов пробы в капиллярной колонке гВ-\¥АХ 30 м х 0,25 мм х 0,25 мкм, детектировании с помощью пламенно-ионизационного детектора и расчете содержания компонентов методом внешнего стандарта. Ориентировочное время удерживания составляет 4,5 мин для ТЧ-винил пиррол идона и 6,5 мин для а-пирролидона (рисунок 7).

По результатам анализа 5 серий заявлены следующие предельные значения посторонних примесей для субстанции сополимера: не более 0,4 % Ы-винилпирролидона и не более 0,6 % а-пирролидона.

Перекисные соединения определяли по методике, применяемой при стандартизации поливинилпирролидона - титрованием по выделяющемуся в результате окислительно-восстановительной реакции йоду. По результатам анализа 5 серий установлены предельные значения для содержания перекисных соединений: не более 0,1 %.

3.3.2. Остаточные органические растворители

На последней стадии очистки сополимера используются органические растворители: циклогексан, бутилацетат и спирт 96 %. По результатам анализа

3-х серий содержание в субстанции этанола составляло менее 0,5 %, а поскольку он относится к 3-му классу органических растворителей (растворители низкой токсичности), его содержание оценивается методом «Потеря в массе при высушивании». Таким образом, для стандартизации субстанции необходимо определять содержание циклогексана и бутилацетата.

Были подобраны условия для определения остаточных органических растворителей методом ГЖХ на газовом хроматографе, оснащенном пламенно ионизационным детектором на колонке УР-1шз 15м х 0,25 мм х 0,25 мкм, с использованием метилциклогексана в качестве внутреннего стандарта.

На хроматограммах идентифицировали пики циклогексана, метилциклогексана, бутилацетата и определяли их площади. Ориентировочное время удерживания составляет 1,4 мин для циклогексана, 1,9 мин для метилциклогексана и 3,5 мин для бутилацетата (рисунок 8).

По результатам анализа 5 серий содержание циклогексана должно быть не более 0,3 %, а бутилацетата - не более 0,2 %.

20 000, 18 000 16 000 14 000 12 000" > 10 000 8 ООО 6 000 4 00 2 00

(¿Мертвый» объем

Г... !...'

»' I .

М-ВИНИЛ пнрролндон

той,'

1 ч

'» I.1

1

I

5

М!П

Рисунок 7 - Хроматограмма испытуемого раствора сополимера по определению М-винилпирролидона и а-пирролидона

100 000

Рисунок 8 - Хроматограмма испытуемого раствора сополимера по определению циклогексана и бутилацетата

3.3.3. Количественное определение

Для определения количественного содержания сополимера применяли рефрактометрический метод, основанный на линейной зависимости разности показателей преломления раствора и растворителя от концентрации вещества в растворе. Для этого была построена калибровочная прямая зависимости я" = А^У) (рисунок 9).

Содержание сополимера в субстанции (У, %) рассчитывали по формуле

100

1,36 пр(25 °С)

1.35

7 =

100-Ж '

показатели

1,34

1.33

0 5 10

Концентрация сополимера, мас.%

Рисунок 9 - Концентрационная зависимость показателя преломления водных растворов сополимера при 25 °С

Р-а где: п2„5 и п)1 преломления раствора субстанции и раствора сравнения при 25 °С, соответственно; V — объем мерной колбы, равный 25 мл; Р — фактор, показывающий прирост показателя преломления раствора субстанции при увеличении концентрации сополимера на 1%, равный 0,00208; а - навеска субстанции, г; Ш — потеря в массе при высушивании, %.

Содержание сополимера в субстанции должно варьироваться в пределах 95 — 105 % в пересчёте на сухое, не содержащее остаточных органических растворителей вещество.

3.4. Разработка нормативной документации на субстанцию

Все разработанные методики прошли проверку по параметрам повторяемости метода по относительному стандартному отклонению и воспроизводимости по критерию Фишера, что позволяет включить их в проект нормативной документации (НД) на субстанцию сополимера, также как и стандартные методы по обязательным критериям качества субстанции: растворимость, сульфатная зола, тяжелые металлы, потеря в массе при высушивании. Т.к. в дальнейшем предполагается использование субстанции в виде инъекционной лекарственной форме, в спецификацию были добавлены следующие критерии: прозрачность раствора, цветность раствора, рН, пирогенность и микробиологическая чистота по категории 1.2.Б для приготовления стерильных лекарственных форм (таблица 4).

Таблица 4 - Спецификация на субстанцию сополимера

Показатели Методы Нормы

Описание Визуальный Аморфный порошок белого или желтоватого цвета, со слабым специфическим запахом, гигроскопичный

Растворимость ГФ XII Легко растворим в воде, спирте 96 %, растворим в хлороформе. Практически не растворим в циклогексане.

Подлинность Качественные

реакции: 1. Образование творожистого осадка

1. С пикриновой желтого цвета (звенья пиридина)

кислотой 2. Образование осадка красно-

2. С йодом коричневого цвета (звенья пирролидона)

Прозрачность ГФ XII 1 % раствор субстанции в воде

раствора должен быть прозрачным

Цветность раствора ГФ XII Окраска 1 % раствора субстанции в воде должна быть не интенсивнее эталона У5

РН ГФ XII От 5,5 до 6,5 (1% раствор)

Посторонние примеси: И-винилпирролидон а-Пирролидон гжх гжх Не более 0,4 % Не более 0,6 %

Перекисные соединения Титриметрия Не более 0,1 %

Сульфатная зола ГФ XII Не более 0,4 %

Тяжелые металлы ГФ XII Не более 0,001 %

Потеря в массе при ГФ XI Не более 5,0 %

высушивании

Остаточные органические

растворители: Циклогексан гжх Не более 0,3 %

Бутилацетат гжх Не более 0,2 %

Пирогенность ГФ XII Должна быть апирогенной

Микробиологическая ГФ XII Категория 1.2.Б

чистота

Количество звеньев 2- Потенциометри- Не менее 25,0 и не более 31,0 мол.%

метил-5-винил пиридина ческое неводное титрование

Характеристическая Вискозиметрия От 0,07 до 0,12 дл/г

вязкость

Среднемассовая ГПХ От 15 000,0 до 28 000,0 Да

молекулярная масса Средняя НМФ(10%) Не менее 300 Да

Средняя ВМФ (10%) Не более 45 000 Да

Количественное определение

Рефрактометрия Не менее 95 % и не более 105 % в пересчёте на сухое, не содержащее остаточных органических

растворителей вещество

3.5. Стабильность субстанции сополимера

Для установления срока годности субстанции образцы 3 серий сополимера в запаянных двойных полиэтиленовых пакетах были исследованы методом «ускоренного старения» при температуре 45 °С и влажности 40 % в течение 180 дней, что в пересчете на срок годности в естественных условиях составит 2 года. Как показали результаты проведенного эксперимента по всем показателям проекта НД (таблица 5), исходные значения характеристик всех серий, заложенных на хранение, не выявляли существенных изменений, а отклонение значений было близко к ошибке измерений. Можно предположить, срок годности субстанции составит 2 года. Для подтверждения полученных данных образцы 3 серий субстанции были заложены на естественное хранение на 2,5 года.

Таблица 5 - Выборочные данные по стабильности субстанции сополимера в __двойных полиэтиленовых пакетах

Характеристика Срок хранения Серия 100611 Серия 160711 Серия 230811

Количественное определение,% в момент изготовления 96,5 97,9 98,5

на 180 день 96,6 97,8 98,5

Среднемассовая молекулярная масса, Да в момент изг. 16612 21 424 26 758

на 180 день 16 653 21 342 26 825

Характеристическая вязкость, дл/г в момент изг. 0,073 0,086 0,111

на 180 день 0,074 0,085 0,112

Количество звеньев МВП, мол.% в момент изгот. 28,2 26,4 30,1

на 180 день 28,2 26,3 30,2

М-винилпирролидон, % в момент изг. 0,32 0,24 0,35

на 180 день 0,30 0,23 0,34

а-пирролидон,% в момент изг. 0,51 0,37 0,46

на 180 день 0,53 0,36 0,45

Циклогексан, % в момент изг. 0,25 0,23 0,19

на 180 день 0,24 0,24 0,18

Бутилацетат, % в момент изг. 0,11 0,08 0,09

на 180 день 0,10 0,08 0,09

3.6. Исследования безопасности субстанции.

На базе ФГБУН «Института Токсикологии» ФМБА России было проведено изучение безопасности субстанции. Изучение общей токсичности показало, что сополимер в условиях острого введения и при длительном применении в течение 3 месяцев является малотоксичным веществом для

грызунов и негрызунов - собак. Величины ЛД50 при внутрижелудочном введении у мышей и крыс разного пола колеблются от 18 до 20 г/кг, при внутрибрюшинном — от 2 до 4 г/кг. Результаты наблюдений за экспериментальными животными в постинтоксикационном периоде острого отравления позволяют отнести сополимер к IV классу малотоксичных -практически нетоксичных лекарственных веществ.

Полученные данные свидетельствуют о безопасности сополимера и являются основанием для создания на его основе лекарственной формы.

ГЛАВА 4. ПОЛУЧЕНИЕ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ 4Л. Разработка состава

4.1.1. Обоснование выбора концентрации

После проведения доклинических исследований по безопасности для разработки лекарственной формы в виде раствора для внутримышечного введения специалистами ФГБУН «Института Токсикологии» ФМБА России была предложена дозировка сополимера 10 мг. Таким образом, был выбран I % раствор сополимера в ампулах на 1 мл.

Можно отметить, что в настоящее время единственным аналогом среди зарегистрированных на российском рынке лекарственных средств иммуномодулирующего действия является препарат «Полиоксидоний» на основе синтетического полимера азоксимера бромида со средней разовой дозировкой 10 мг. Разработанный нами сополимер и азоксимера бромид относятся к одному классу поликатионных синтетических полимеров, можно предположить, что механизм их действия, и, как следствие, иммуномодулирующая активность будут близкими.

4.1.2. Обоснование выбора рН

Сополимер относится к термо- и рН-чувствительным полимерам, которые могут обратимо менять свою конформацию. Поэтому при выборе рН разрабатываемого препарата исходили из следующих ограничений: лекарственная форма должна быть прозрачной, для применения стерилизующей фильтрации сополимер должен находиться в гомогенном состоянии, рН должна находиться в допустимых пределах для растворов внутримышечного введения 4,0-8,0.

Было проведено исследование зависимости температуры помутнения раствора от рН. Температуру помутнения растворов сополимеров определяли спектрофотометрически по перегибу на температурной кривой изменения мутности (длина волны 500 нм) методом касательных. Предварительно было показано, что при этой длине волны какие-либо эффекты, связанные с поглощением функциональных групп сополимера, отсутствуют. Из рисунка 10 видно, что при рН 7,0 и выше снижается температура помутнения раствора сополимера, а при рН 6,0 она составляет 60 °С, что является залогом качества и стабильности лекарственной формы. Таким образом, диапазон рН для лекарственной формы был определен в значениях от 5,0 до 6,0.

гл°с

и

ь

а рн=б,о

♦ рН=6,5 ▲ рН=7,0

♦ рН=7,2 X рН=7,5

♦ рН=8,0

1,0 и 2,0

(сополимер],

Рисунок 10 - Зависимости температуры помутнения водного раствора сополимера от концентрации. Римскими цифрами обозначены области гомогенного (I) и гетерогенного (II) состояния

4.1.3. Выбор стабилизатора

При хранении экспериментальных образцов 1 % раствора сополимера наблюдалось пожелтение раствора, что связано с окислительными процессами.

Для устранения данных изменений в состав необходимо введение стабилизатора. Для этого была проведена серия опытов с использованием натрия сульфита и аскорбиновой кислоты. Контролем служил раствор сополимера без стабилизатора. Полученные растворы запаивали в токе аргона в ампулы и подвергали нагреванию в условиях стерилизации в автоклаве (121 °С в течение 15 минут) (таблица 6).

Таблица 6 - Подбор стабилизатора

Состав Концентрация стабилизатора, % Номер эталона по показателю цветности

Исходный раствор После прогревания

Чистый сополимер Образец 1 У5 V,

Образец 2 У5 у2

Сополимер + сульфита натрия 0,05 V, Уз

0,10 У5

0,15

Сополимер + аскорбиновая кислота 0,05 у5 у2

0,10 У5

0,15 у2

Интенсивность окраски исходных растворов соответствовала эталону цветности У5. Растворы сополимера, стабилизированные аскорбиновой кислотой и без стабилизатора (окраска водных растворов соответствовала эталону У5), после прогревания приобретали окраску, соответствующую эталону У2.

Растворы сополимера, стабилизированные натрия сульфитом с концентрацией стабилизатора 0,10 и 0,15 %, приобретали после нагревания окраску, не превыщающую эталон У4. На основании этого, в качестве стабилизатора был выбран натрия сульфит в концентрации 0,15 %.

Для установления рН использовали 0,1 М раствор слабой уксусной кислоты, которую удобно применять в присутствии стабилизатора, в отличие, к примеру, от часто используемой хлороводородной кислоты из-за того, что часть кислоты уксусной взаимодействует с пиридиновыми звеньями с образованием солей, а часть - с натрия сульфитом с возможным образованием диоксида серы. Однако экспериментально не наблюдалось выделение диоксида. Использование сильной хлороводородной кислоты для доведения рН в данном случае способствовало бы смещению равновесия для сернистой кислоты и выделению диоксида серы. Доведение рН лекарственной формы с помощью раствора кислоты уксусной нашло свое применение, к примеру, в препаратах Луцетам (пирацетам), Пабал (карбетоцин), Ребиф (интерферрон бета-1а), Рокурония бромид.

Таким образом, итоговый состав лекарственной формы выглядит следующим образом: Сополимер >1-винилпирролидона

и 2-метил-5-винилпиридина (проект НД) -10 мг

Натрия сульфит безводный (ГОСТ5644-75) - 1,5 мг

Кислоты уксусной раствор 0,1 М (ГФ XII, ч. 1, с. 397) - до рН 5,0 - 6,0

Вода для инъекций (ФС 42-2620-97) - до 1 мл

4.2. Разработка технологии получения лекарственной формы

4.2.1. Выбор условий розлива, ампулирование и стерилизация

В водном растворе сополимера 10 мг/мл сохраняется жизнеспособность и рост микроорганизмов, поэтому разрабатываемое лекарственное средство подлежит обязательной стерилизации. Для получения свободного от механических примесей стерильного прозрачного раствора необходима стерильная фильтрация через фильтр с размером пор 0,22 мкм, розлив и ампулирование в асептических условиях, с последующей термической стерилизацией насыщенным паром в автоклаве (температура 121 °С) в течение 15 минут.

Контроль ампульных растворов проводился по ГФ XII и показал их стерильность. Часть ампул не подвергалась термической стерилизации и контроль через 6 месяцев после приготовления также показал их стерильность. Это позволяет рекомендовать исключение термической стерилизации

ампульных растворов после проведения стерилизующей фильтрации, розлива и ампулирования в асептических условиях.

При подборе условий ампулирования приготовленной лекарственной формы оказалось, что заполнение и запайку ампул нужно вести в токе инертного газа, т.к. без него получается нестабильный раствор, который со временем и при стерилизации изменяет цветность ниже эталона Y2, несмотря на наличие стабилизатора. Для «газовой защиты» обычно используются диоксид углерода, азот или аргон. Диоксид углерода не применялся из-за возможного влияния на рН раствора и взаимодействия с пиридиновыми звеньями. Выбирая между азотом и аргоном, выбрали последний, поскольку он тяжелее воздуха и тем самым изолирует раствор от кислорода, а также обладает лучшими характеристиками.

4.2.2. Технология получения лекарственной формы

Для получения стерильной лекарственной формы была разработана следующая технологическая схема с учетом всех требований, применяемых к производству растворов для инъекций (рисунок 11).

На стадии подготовительных работ необходимо проводить мойку и стерилизацию ампул (BP. 1.6. и BP. 1.7). Для приготовления раствора (ТП.2) используют сополимер, отвечающий всем требованиям проекта НД. Растворяют сополимер в воде для инъекций и перемешивают, затем добавляют стабилизатор, перемешивают до полного его растворения и с помощью 0,1 М уксусной кислоты доводят рН раствора до 5,3 - 5,7. Полученный раствор передают на операцию ТП.2.2.

Фильтрацию раствора осуществляют через фильтр с величиной пор фильтрующей поверхности 0,45 мкм. Отбирают пробу, определяют содержание сополимера и добавляют рассчитанное количество воды для инъекций, чтобы содержание сополимера в 1 мл раствора было 0,0097 - 0,0103 г.

Отбирают пробу для анализа цветности раствора, которая не должна превышать эталон Уд, рН раствора, которое должно быть 5,3 - 5,7, количественного определения. При получении положительного результата раствор разливают в мерные бутыли и передают на стадию ТП.З. Стерильную фильтрация раствора осуществляют с помощью фильтрующей установки производства фирмы «Миллипор» (США).

До и после фильтрации проверяют фильтры на герметичность пропусканием аргона под давлением 0,27 МПа. Падение давления недопустимо, а на конце трубки, погруженной в бутыль с раствором не должен появляться пузырек (проверка по «"точке пузырька"»). Используют мембранные фильтры с величиной пор фильтрующей поверхности 0,22 мкм.

Ампулы емкостью 1 мл заполняют раствором по 1,1 мл и запаивают в токе аргона, который подают через стерильный фильтр (ТП.4). Затем ампулы погружают в холодную воду, подкрашенную 0,01% раствором метиленового синего для проверки герметичности ампул, после проверки промывают. Полученный продукт упаковывают, маркируют и отправляют на склад (УМО.5).

ВР.1.1 Подготовка воды очищенной п для инъекций

ВР.1.2 Подготовка производственных помещений и воздуха

ВР.1.4 Подготовка производственного оборудования и одежды персонала

ВР. 1.5 Подготовка персонала

ВР.1.6 Мойка ампул

ВР. 1.7 Стерилизация ампул

ТП.2.1 Растворение компонентов

ТП.2.2 Фильтрация раствора

На склад

ВР.1 Санитарная

подготовка

производства

Сополимер, натрия сульфит, Еодадля инъекций, 0,Ш раствор уксусной чкпслоты

ТП.2 Приготовление

Кт, К1 раствора и фильтрация

потери

ТП.З Кт Стерилизующая фильтрация

ТП.4 Кг Розлив в ампулы и запайка

брак

гтотерн

Продукт _

УМО.5

Кг, К\

брак

Упаковка н маркировка продукта

потери

Рисунок 11 - Технологическая схема получения лекарственной формы

сополимера

4.3. Стандартизация

Для стандартизации готовой лекарственной формы обязательными являются следующие параметры: описание, подлинность, прозрачность, цветность, рН, механические включения, извлекаемый объем, пирогенность, стерильность, количественное определение. Также был добавлен параметр «вязкость», т.к. является важной характеристикой раствора полимера.

Методы определения подлинности сополимера в лекарственной форме аналогичны методам определения подлинности в субстанции, поэтому необходимо было разработать метод количественного определения.

Рефрактометрический способ не применим для определения сополимера в лекарственной форме из-за малой концентрации, в связи с этим было предложено определять сополимер спектрофотометрически.

Были записаны спектры поглощения лекарственной формы (рисунок 12) сополимера в воде инъекционной в единицах оптической плотности в диапазоне длин волн 190 — 320 нм при разведении до концентрации сополимера от 0,01 до 0,075 мг/мл, которая подбиралась так, чтобы оптическая плотность растворов не превышала 0,5, т.е. обеспечивалось выполнение закона Бугера-Ламберта-Бера.

Рассматривалось положение

максимума поглощения 269 нм, т.к. пик на уровне 210 нм находится в коротковолновой ультрафиолетовой области,

которая может нести ошибку за счет поглощения воздуха. Было изучено поглощение растворов при рН от 5,0 до 6,0 при температуре 20 °С.

Значение коэффициента

поглощения линейно зависит от значения рН (рисунок 13). Таким образом, зная рН готовой лекарственной формы, можно находить коэффициент экстинкции через функцию у = -1,307х+ 14,661. Содержание в лекарственной форме сополимера (X), мг/мл, определяют по формуле: ^ Дд = А.

Ехх1 (-1.301х рН +14,661 )х 1' где X - концентрация сополимера, мг/мл, Ех - удельный показатель поглощения вещества на длине волны мл/(мг-см), рН - значение рН лекарственной формы, 1-толщина поглощающего слоя раствора, см.

По результатам 5 серий был определен диапазон значений: от 0,0095 до 0,0105 г в 1 мл.

Результаты анализов двух выборок были статически обработаны и проверены по критериям повторяемости и воспроизводимости, поэтому метод может быть включен проект НД для стандартизации препарата (таблица 7).

Рисунок 12 - Типичный спектр

поглощения разведенной готовой формы

____

¡57,5

у= -1,307х + 14,661 В2 = 0,9985

6,5

4,5

5,5

рН6,5

Рисунок 13 - Зависимость коэффициента поглощения от рН

Таблица 7 - Спецификация на раствор для в/м введения, 10 мг/мл

Показатели Методы Нормы

Описание Визуально Прозрачная желтоватая жидкость

Подлинность Качественные реакции: 1. С пикриновой кислотой 2. С йодом 1. Образование творожистого осадка желтого цвета (звенья пиридина) 2. Образование осадка красно-коричневого цвета (звенья пирролидона)

Прозрачность ГФ XII Препарат должен быть прозрачным

Цветность ГФ XII Окраска должна быть не интенсивнее эталона У4

РН ГФ XII От 5,0 до 6,0

Механические включения РД 42-501-98 Визуальный Препарат должен выдерживать требования

Вязкость ГФ XII От 1,18 до 1,24

Извлекаемый объем ГФ XI Не менее номинального

Пирогенность ГФ XII Должна быть апирогенной

Стерильность ГФ XII Препарат должен быть стерильным

Количественное определение Спектрофото-метрия От 0,0095 до 0,0105 г в 1 мл

4.4. Стабильность готовой лекарственной формы

Для установления срока годности лекарственного препарата образцы 3 серий лекарственной формы в ампулах нейтрального стекла были заложены на ускоренное хранение при температуре 45 °С и влажности 40% на 180 дней. Как показали результаты проведенного эксперимента по всем показателям проекта НД, исходные значения характеристик для всех серий, заложенных на хранение, не выявляли существенных изменений, а отклонение значений близко к ошибке измерений (таблица 8). Можно предположить срок годности препарата составит 2 года. Для подтверждения полученных данных образцы 3 серий препарата в обоих видах упаковки были заложены на естественное хранение на 2,5 года.

Таблица 8 - Выборочные данные по стабильности лекарственной формы сополимера в ампулах нейтрального стекла марки НС

Характеристика Норма Срок хранения Серия 120313 Серия 160313 Серия 200313

Прозрачность Должен быть прозрачным в момент изготовления Соотв. Соотв. Соотв.

на 180 день Соотв. Соотв. Соотв.

Цветность Не интенсивнее эталона Y4 в момент изг. Соотв. Соотв. Соотв.

на 180 день Соотв. Соотв. Соотв.

рН От 5,0 до 6,0 в момент изг. 5,6 5,8 5,2

на 180 день 5,6 5,7 5,2

Механические включения Отсутствуют по РД 42-501-98 в момент изг. Соотв. Соотв. Соотв.

на 180 день Соотв. Соотв. Соотв.

Вязкость От 1,18 до 1,24 в момент изг. 1,21 1,19 1,23

на 180 день 1,22 1,19 1,23

Стерильность Стерильный в момент изг. Соотв. Соотв. Соотв.

на 180 день Соотв. Соотв. Соотв.

Количественное определение От 0,0095 до 0,0105 г в 1 мл в момент изг. 0,0099 0,0098 0,010

на 180 день 0,0099 0,0098 0,010

4.5. Изучение фармакологической активности

Выявлена способность сополимера стимулировать фактор неспецифической резистентности — фагоцитоз. Так, при внутрибрюшинном введении сополимера в дозах 5 и 50 мг/кг он стимулирует завершенность фагоцитоза, а при внутрижелудочном введении в дозе 50 мг/кг увеличивает число фагоцитирующих клеток.

Также сополимер в дозах 5 и 50 мг/кг при внутрибрюшинном введении обладает иммуномодулирующими свойствами: стимулирует развитие гуморального иммунного ответа на Т-зависимый антиген у слабоотвечающих и стрессированных мышей, а также в дозе 50 мг/кг подавляет реакцию ГЗТ (гиперчувствительности замедленного типа) и антителопродукцию у сильноотвечающих животных.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Разработана технология получения оригинальной субстанции сополимера 1Ч-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина с содержанием звеньев 2-метил-5-винилпиридина 28 ± 3 мол.% и значением молекулярной массы от 15 ООО до 28 000 Да методом радикальной сополимеризации с автоматизированным контролем соотношения концентраций мономеров. Установка защищена патентом РФ на полезную модель №110743, сополимер с заданными характеристиками - патентом РФ на изобретение №2430932.

2. Изучено соотношение звеньев мономеров в сополимере методом потенциометрического неводного титрования, характеристическая вязкость с помощью вискозиметрии и молекулярно-массовое распределение методом ГПХ. Разработаны методики качественного анализа на подлинность субстанции сополимера ТЧ-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина, определены параметры посторонних примесей: 1Ч-винилпирролидона и а-пирролидона методом ГЖХ, перекисных соединений титрованием, остаточных органических растворителей: циклогексана и бутилацетата методом ГЖХ и количественного определения сополимера в субстанции методом рефрактометрии для ее стандартизаци и.

3. Составлен проект НД на субстанцию и изучена стабильность методом «ускоренного старения».

4. Проведены доклинические исследования по острой, подострой и хронической токсичности субстанции сополимера и доказана ее безопасность.

5. Разработана инъекционная лекарственная форма субстанции сополимера: определены концентрация и pH сополимера в лекарственной форме, в качестве стабилизатора выбран сульфит натрия.

6. Разработаны технологические параметры по розливу, ампулированию и стерилизации ампул лекарственной формы и технология получения инъекционной лекарственной формы субстанции сополимера для внутримышечного введения.

7. Разработан метод определения количественного содержания сополимера в лекарственной форме, проведена стандартизация лекарственной формы и составлен проект НД, по которому изучена стабильность препарата разработанной лекарственной формы субстанции сополимера для инъекционного применения методом «ускоренного старения».

8. Изучена фармакологическая активность лекарственной формы, которая показала стимуляцию гуморального иммунного ответа и завершенности фагоцитоза перитонеальных макрофагов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ

1. Кедик, С.А. Влияние Совидона на цитогенетические изменения в клетках эпителия роговицы, поврежденных радиационным воздействием / С.А. Кедик, C.B. Ворожцова, Е.И. Ярцев, И.В. Сакаева, Ю.В. Кочкина (Черта), A.B. Панов. // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. -

2012. -№9. - С.32-35.

2. Кедик, С.А. Синтез и молекулярно-массовые характеристики сополимеров N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина /С.А. Кедик, A.B. Панов, И.В. Сакаева, Ю.В. Кочкина (Черта), Д.В. Еремин, В.В. Суслов. // Химико-фармацевтический журнал. - 2012. - Т.46, №8. - С. 19-22.

3. Кедик, С.А. Фагоцитарная активность сополимеров N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина / С.А. Кедик, A.B. Панов, И.В. Сакаева, Ю.В. Кочкина (Черта), Е.И. Ярцев // Химико-фармацевтический журнал.-2013. -Т.47, №5. - С.55-56

4. Кедик, С.А. Влияние различных факторов на растворимость сополимеров N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина в воде / С.А. Кедик, A.B. Панов, В.В. Суслов, Д.В. Еремин, Т.Е. Иванова, Ю.В. Кочкина, Г.О. Малиновская // Химико-фармацевтический журнал. - 2013. - Т.47, №6. — С.33-34

5. Кедик, С.А. Количественное определение в водных растворах физиологически активных сополимеров N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина / С.А. Кедик, A.B. Панов, И.В. Сакаева, Ю.В. Кочкина (Черта), Д.В. Еремин, В.В. Суслов, М.А. Зайцев // Химико-фармацевтический журнал. -

2013.-Т.47, №10.-С.54-56

6. Кедик, С.А. Количественное определение соотношения мономерных звеньев в сополимерах N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина

методом спектрофотометрии / С.А. Кедик, Д.В. Еремин, Ю.В. Кочкина, Е.С. Жаворонок, В.В. Суслов, А.В. Панов // Вестник МИТХТ. - 2014. - Т.9, №1. -С.64-67.

Тезисы докладов, патенты:

1.Zaitsev, M. Détermination of monomeric composition of the Sovidon Y NMR 13C Spectroscopy method / M. Zaitsev, A. Panov, S. Kedik, J. Cherta, I. Sakaeva // "Biomaterials and bionanomaterials: recent advances and safety -toxicology issues" 2nd Russian - Hellenic Symposium with International Participation and Young Scientist's School, BIONANOTOX, Heraklion, 2011.-p. 61

2. Еремин, Д.В. Растворимость сополимеров N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина в воде / Д.В. Еремин, Т.Е. Иванова, С.А. Кедик, А.В. Панов, В.В. Суслов, Ю.В. Кочкина, И.В. Сакаева // XIX Российский национальный конгресс «Человек и Лекарство». Сборник материалов конгресса. Тезисы докладов. - 2012г. - с. 374

3. Кедик, С.А. Модификация противоопухолевого действия цитостатических препаратов сополимерами N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина / С.А. Кедик, А.В. Панов, Ю.В. Кочкина, Д.В. Еремин // Международная научно-практическая конференция «Фармацевтические и медицинские биотехнологии» М.: ЗАО «Экспо-биохим-технологии», РХТУ им. Д.И. Менделеева, 2012. - с. 75-76

4. Кедик, С.А. Фагоцитарная активность сополимера N-винилпирролидона и 2- метил-5-винилпиридина / С.А. Кедик, А.В. Панов, В.В. Суслов, И.В. Сакаева, Ю.В. Кочкина, Е.И. Ярцев // XIX Российский национальный конгресс «Человек и Лекарство». Сборник материалов конгресса. Тезисы докладов. - 2012г. - с. 385

5. Кедик, С.А. Готовая лекарственная форма на основе сополимера N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина / С.А. Кедик, Ю.В, Кочкина, В.В. Суслов, А.В. Панов, Д.В. Еремин // Химическая технология и биотехнология новых материалов и продуктов. IV Международная конференция Российского химического общества имени Д.И. Менделеева : тезисы докладов : в 2 т. Т.2. - М.: РХТУ им. Д.И. Менделеева : ИФХЭ им. А.Н. Фрумкина РАН, 2012 - с.97-98

6. Кедик, С.А. Раствор для инъекций иммуномодулирующего действия на основе сополимера N-винилпирролидона и 2-метил-5-винилпиридина /С.А. Кедик, Ю.В. Кочкина, А.В. Панов, В.В. Суслов, Д.В. Еремин // На стыке наук. Физико-химическая серия. I Международная Интернет-конференция. Казань: 2013. — с.145-148

7. Патент РФ на изобретение № 2430932-Сополимеры 2-метил-5-винилпиридина и N-винилпирролидона, активирующие продуцирование интерлейкина-1, и их применение в качестве противораковых агентов / С. А. Кедик, А. В. Панов, М. А. Зайцев, Ю. В. Черта //заявка от 29.10.2010, опубл. 10.10.2011,-Бюлл. №28.

8. Патент РФ на полезную модель №110743. Установка для получения сополимеров на основе N-винилпирролидона / С. А. Кедик, А. В. Панов, Ю. В. Черта, Д. В. Еремин, И. В. Сакаева, Ю. А. Котова // заявка от 08.07.2011, опубл. 27.11.2011.-Бюлл.№33.

Кочкина Юлия Вячеславовна Разработка технологии получения субстанции сополимера Ы-винилпирролидона с 2-метил-5-винилпиридином и разработка лекарственной

формы на ее основе Формат 60x90/16 Тираж 120 экз. Подписано в печать 23.09.2014. Заказ № 206 Типография ООО «Генезис» 8 (495) 434-83-55 1 19571, г. Москва, пр-т Вернадского, 86