Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Изучение взаимодействия фенибута с салициловой кислотой и стандартизация нового биологически активного соединения салифен

ДИССЕРТАЦИЯ
Изучение взаимодействия фенибута с салициловой кислотой и стандартизация нового биологически активного соединения салифен - диссертация, тема по фармакологии
АВТОРЕФЕРАТ
Изучение взаимодействия фенибута с салициловой кислотой и стандартизация нового биологически активного соединения салифен - тема автореферата по фармакологии
Ларский, Михаил Владимирович Пятигорск 2008 г.
Ученая степень
кандидата фармацевтических наук
ВАК РФ
15.00.02
 
 

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Изучение взаимодействия фенибута с салициловой кислотой и стандартизация нового биологически активного соединения салифен

На правах рукописи

ЛАРСКИЙ МИХАИЛ ВЛАДИМИРОВИЧ

ИЗУЧЕНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ФЕНИБУТА С САЛИЦИЛОВОЙ КИСЛОТОЙ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ НОВОГО БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО СОЕДИНЕНИЯ САЛИФЕН

1 i All _AonwoireDTiiun^b"oa vn»*iia ibiimtoi'Arumiia

VIVM upiiiu^vui >• (vviiuji Дшипл) >|<u|jiitu»ui пил¡и>

АВТОРЕФЕРАТ ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК

0Ü345001Т

ПЯТИГОРСК 2008

003450017

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентва по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук,

заслуженный деятель науки РФ, профессор Беликов Владимир Георгиевич

Официальные оппоненты. доктор фармацевтических наук, профессор

Оганесян Эдуард Тоникович

кандидат фармацевтических наук Кичее Дмитрий Геннадъевич

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение

высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет Федерального агетства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится «11» ноября 2008 года в 9-00 часов на заседании диссертационного совета Д 208 069 01 при ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (357532, Ставропольский край, Пятшорск, пр Калинина, И)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава

Автореферат разослан « /0 » октября 2008 :

Ученый секретарь диссертационного совета доктор фармацевтических наук, профессор

Компапцева Е В

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Стандартизация и контроль качества лекарственных средств играют важнейшую роль в обеспечении населения эффективными и безопасными лекарственными препаратами Это в ббльшей степени относится к лекарственным средствам, применяемым для лечения больных с нарушениями мозгового кровообращения Поэтому наряду с поисками новых средств для лечения указанных заболеваний, необходимо решать вопросы разработки методов их анализа

К числу таких лекарственных препаратов относятся производные у-аминомасляной кислоты (ГАМК) Они показали свою эффективность при терапии различных форм ишемии головного мозга ГАМК-ергические лекарственные вещества, к числу которых относится фенибут (-у-амино-Р-фенилмасляной кислоты гидрохлорид), способны сохранять высокие показатели кардио- и гемодинамики в условиях ишемии мота и миокарда Однако имеются возможности повышения эффективности фенибута путем его сочетания с другими биологически активными соединениями С этой целью на кафедре органической химии Российского государственного педагогического университета им А И Герцена (г Санкт-Петербург) был синтезирован ряд биологически активных соединений, одним из которых является салифен - аддукт у-амино-р-фенилмасляной кислоты (АФМК) и кислоты салициловой в молярном соотношении 2 1 Предварительные доклинические исследования салифена, проведенные на базе Волгоградского государственного медицинского университета, показывают перспективность его применения в медицинской практике в качестве нейропротекторного и противоишемического лекарственного средства В то же время для его внедрения в медицинскую практику необходимы объективные и надежные методы контроля качества До настоящего времени разработкой методов анализа салифена не занимались Необходимость их разработки связана также и с тем, что неизвестен характер взаимодействия фенибута и салициловой кислоты в салифене, а, следовательно, не выяснены вопросы взаимного влияния компонентов на результаты определения каждого из них ,

Поэтому разработка методов стандартизации и контроля качества салифена является актуальным вопросом для фармацевтической науки и практики

Цели и задачи исследования. Целью настоящего исследования явилось изучение взаимодействия АФМК с кислотой салициловой и стандартизация нового биологически активно1 о соединения салифен

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи

1 Изучить взаимодействие АФМК и кислоты салициловой с помощью термических и спектральных методов

2 Исследовать возможность использования химических и физико-химических методов анализа для подтверждения подлинности салифена в субстанции

3 Изучить возможность применения хроматографических, оптических и химических методов для количественного определения АФМК и кислоты салициловой в субстанции салифена

4 Обосновать условия применения хроматографического анализа для контроля чистоты субстанции салифена

5 Изучить факторы, обусловливающие стабильность и установить срок годности субстанции салифена

6 Разработать нормы качества и подготовить проект ФСП на субстанцию салифена

Научная новизна. Проведено изучение характера взаимодействия фенибута с салициловой кислотой с помощью ПМР- и ИК-спектрометрии, а также термических методов Показано, что взаимодействие между компонентами происходит за счет аминогруппы фенибута и карбоксильной группы салициловой кислоты Установлено, что в ИК-спектре салифена отсутствует полоса поглощения неионизированной карбоксильной группы, в спектре ПМР также не регистрируется сигнал протона карбоксильной группы В связи с этим высказано предположение об образовании водородной связи между карбоксильной группой фенибута и фенольным гидроксилом салициловой кислоты На основании изучения физико-химических свойств салифена и его составных частей обоснованы методики

4

качественного и количественного определения салифена В результате валидационнои оценки доказана приемлемость методик количественного определения салифена с помощью физико-химических и химических методов Обоснована методика количественного определения фенибута и кислоты салициловой в субстанции салифена, позволяющая проводить анализ в одной навеске без разделения Осуществлен выбор условий конгроля чистоты субстанции салифена с помощью ТСХ и ВЭЖХ Методом ускоренного старения изучена стабильность субстанции салифена и установлен срок годности

Практическая значимость результатов исследования. Разработаны и валидированы методики испытаний на подлинность чистоту и количестренного определения салифена химическими и физико-химическими методами Валидационная оценка предлагаемых методик показала, что они отличаются простотой выполнения, высокой чувствительностью, отсутствием систематической погрешности и позволяют достоверно оценивать качество суостанции салифена Разработанные методики анализа и нормы качества включены в проект ФСП

Внедрение результатов исследования в практику. Разработаны проект фармакопейной статьи предприятия и пояснительная записка на субстанцию салифен Получен акт апробации предлагаемых методик анализа салифена от ОАО «Щелковский витаминный завод», г Щелково Положения, выносимые на защиту:

1 Результаты изучения взаимодействия между фенибутом и кислотой салициловой с помощью термических и спектральных методов

2 Результаты качественного и количественного определения у-амино-р-фенилмасляной кислоты и кислоты салициловой в субстанции салифена, а также сравнительная оценка разработанных методик

3 Результаты использования тонкослойной и высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения потенциальных примесных соединений в субстанции салифена

4 Нормы качества, стабильность и срок годности субстанция салифена

Апробация и публикация результатов исследования. Основные положени диссертационной работы доложены на региональных конференциях (Пятигорск 2007 и 2008 гг, Владикавказ, 2007 г, Воронеж, 2007 г) По теме диссертацш опубликовано 6 научных работ

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтически наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорская государственна фармацевтическая академия Росздрава (номер государственной регистраци 01 2 00101060)

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 170 страница, машинописного текста, выполненного с помощью компьютерного набора, содержи 40 таблиц, 30 рисунков, состоит из «Введения», «Обзора литературы», 4-х гла собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 13 источник, в том числе 33 иностранных, и приложений

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Изучение взаимодействия фенибута с салициловой кислотой Проведенный анализ данных литературы показал, что лекарственные веществ при взаимном влиянии могут существенно изменять стабильность, биодоступност и физико-химические свойства друг друга Поэтому первым этапом наш исследований стало изучение характера взаимного влияния фенибута и кислоть салициловой Определение проводили термическими и спектральными методами Объектами исследования являлись субстанции салифена, фенибута, кислоть салициловой, а также физическая смесь фенибута гидрохлорида с кислото' салициловой 2 1 Субстанции салифена различных серий синтезированы на кафедр органической химии Российского государственного педагогического университе < им А И Герцена (г Санкт-Петербург) и были любезно предоставлены на разработчиками

В результате дифференциального термического анализа (ДТА) в сочетании дифференциальной термогравиметрией (ДТГ) были установлены тепловы эффекты, возникающие при нагревании образцов исследуемых соединений Данны

представлены в таблице 1 Таблица 1 - Результаты ДТА и ДТГ фенибута, кислоты салициловой, салифена и модельной смеси фенибута с кислотой салициловой в молярном соотношении 2 1

Образец Эффекты ДТА, начало -максимум — окончание, °С ДТГ, начало тсрмодесгрукции, "С

в области плавчения вне области плавления

Фенибут (ФБ) 192-200-220, погл >220, т о дестр, выд 196

Кислота салициловая (КС) 154-159-164, погл 190-194-210, погл 158

Физическая смесь ФБ + КС 2 1 195-200-208, погл >260, слабые эффекты, т о дестр, выд «ступенчатые» эффекты потери в массе 105, исп вл, 2UU, плавление, 260 то дестр

Салифен 119-122-1.28, погл 98-102, иш вл, слабый эффект, погл >300, слабые 'иЬгТ\"!П1.Т Ш1Т сстуренчатый» эффект 108, исп вл 120то дестр

Примечания Погл - поглощение тепла, выд - выделение тепла, т о дестр - термоокислительная деструм^йч, разл — разлиженис, иш в а — ИнТарскИс вд<и и

Сравнительный анализ полученных результатов показывает, что тепловые эффекты салифена как в области плавления, так и вне ее резко отличаются от таковых у физической смеси и индивидуальных веществ Известно, что изменения температур начала или максимума пика плавления веществ могут наблюдаться из-за различных физических и химических эффектов, обусловленных взаимодействием между компонентами

Для более детального изучения природы взаимодействия, возникающего между фенибутом и кислотой салициловой, были изучены спектры протонно-магнитного резонанса (ПМР) салифена, основания фенибута (АФМК), кислоты салициловой и физической смеси фенибута гидрохлорида с кислотой салициловой Определяющее значение при изучении взаимодействия отводилось установлению поведения первичной алифатической аминогруппы фенибута и карбоксильных групп фенибута и кислоты салициловой

Важнейшей характеристикой спектра ПМР является химический сдвиг, зависящий от структуры молекулы Электронная плотность протонов в молекулах

определяется характером химической связи и индукционными эффектам! окружающих групп, вследствие чего экранирование прогонов становтс различным и их сигналы проявляются в разных областях спектра Результать отнесения полос спектров ПМР к водородсодержащим функциональным группал молекул исследуемых соединений представлены в таблице 2

Таблица 2 - Результаты анализа спектров ПМР салифена, АФМК, кисло п

салициловой и модельной смеси фенибута и кислоты салициловой (2 ])

Вещество 8, мл Функциональная группа Примечание

2,4 - 3,6 -СН2-

АФМК (основание фенибута) 7,18-7,22 -с6н5 мультиплет

- -CQQH |!л проявляется

7,5 - NH;

11,23 - соон

Кислота салициловая - -он нс проявляется

6,78-7,8 — СбН| мульпшлет

2,4-3,6 -сн2-

Физическая смесь фенибута гидрохлорида с кислотой салициловои2 1 с о п с \J,U — t ,v/ — г\д

12,2 -соон

7,8-7,9 - NH;

- -он не проявляется

24-3,6 -сн7-

7,05 - 7,3 -Аг

Салифен - -СООН не проявляется

7,6-7,7 - NH;

- -он не проявляется

На спектре ПМР АФМК не регистрируется сигнал протона карбоксильно

группы и обнаруживается характерная полоса протона ионизированно аминогруппы Данный факт можно объяснить тем, что основание фенибут находится в виде цвиттер-иона

Спектр ПМР кислоты салициловой имеет четкую полосу протон неионизированной карбоксильной группы с величиной химического сдвига 11.2 миллионных долей, сигнал протона фенолъного гидроксила из-за экранирующи эффектов на спектре не регистрируется

Спектр ПМР физической смеси фенибута гидрохлорида и кислот салициловой характеризуется наличием полос с величинами химического сдви 12,2 и 7.9 миллионных долей, характерных соответственно для протоно

неионизированной карбоксильной группы и ионизированной первичной алифатической аминогруппы Это свидетельствует о том, что в физической смеси аминогруппа фенибута протонирована кислотой хлороводородной, а не за счет водорода карбоксильной группы кислоты салициловой На спектре ПМР салифена из указанных групп регистрируется только сигнал протона ионизированной первичной алифатической аминогруппы, а протон карбоксильной группы кислоты салициловой в отличие от спектров физической смеси и кислоты салициловой не регистрируется Это может свидетельствовать о юм, что данная группа находится в ионизированном состоянии и именно она участвует в протонировании аминогруппы основания салифена Для проверки этого предположения были исследованы спектры поглощения этих же соединений в ИК-областн

Измерения проводили в дисках калия бромида на спектрометре ИКС-40 в режиме пошагового сканирования в диапазоне от 4000 до 400 см 1 По результатам изучения спектров была составлена таблица отнесения полос поглощения к некоторым структурным фрагментам молекул

Таблица 3 - Отнесение полос поглощения ИК-спектров фенибута гидрохлорада, салифена, кислоты салициловой и физической смеси фенибута гидрохлорида с

кислотой салициловой

Положение полосы см' Отнесение

фенибута гидрохлорид (ФБ) салифен физическая смесь ФБ + КС 2 1 кислота салициловая (КС)

3600-3550, широкая V о-н (фен.) ассоциированная водородной связью

3380-2800, широкая 3050-2800, широкая 3100-2880, широкая VacNH+ j

2147, средняя VNHÍ j

1712, очень сильные 1712, 1656, сильные 1668,сильная VCOOH

1620, очень сильная Vcoo

Примечания V - симметричные валентные колебания, - асимметричные валентные колебания,

В спектрах фенибута гидрохлорида, салифена и физической смеси фенибута гидрохлорида с кислотой салициловой валентные симметричные колебания

первичной алифатической аминогруппы наблюдаются при 3050-2800 см"' Следус особо подчеркнуть, что в этих соединениях она находится в протонированно\ состоянии, что коррелирует с результатами спектроскопии ПМР Валентны колебания карбонильной группы неоинизированного карбоксила в спектре фенибут< гидрохлорида проявляются в виде полосы очень сильной интенсивности пр 1712 см'1 В спектре кислоты салициловой имеется интенсивная полоса пр1 1668 см"', что характерно для валентных колебаний связи С-0 неионизированно) карбоксильной группы, ассоциированной внутримолекулярной водородной связь В спектре физической смеси также наблюдаются обе эти полосы - при 1712 1656 см"', а в салифене полоса поглощения карбонильной группы карбоксил смещена в область 1620 см*1. Из данных литературы известно, что подобно смещение полосы происходит при переходе карбоксильной группы ионизированное состояние

Таким образом использование термических методов анализа дало основанп предположить наличие физико-химического взаимодействия между фенибутом кислотой салициловой в субстанции салифена. С помощью ИК-ПМР-спектроскопии установлено, что наиболее вероятным механизмо взаимодействия является образование ионной связи за счет протонирован первичной алифатической аминогруппы фенибута карбоксильной группой кисло салициловой

Определение подлинности субстанции салифена

В процессе изучения взаимодействия между фенибутом и кислото салициловой в субстанции салифена было установлено, что ИК-спектр поглощени салифена, измеренный в дисках калия бромида, является специфичным Кроме тог на спектре проявляются полосы поглощения с характеристическими частотам позволяющими достоверно обнаруживать основные структурные фрагмент молекулы салифена Это дало основание рекомендовать ИК-спектроскопию дисках калия бромида для идентификации субстанции салифена

Для подтверждения подлинности была изучена возможность использовани УФ-спектрофотометрии В результате установлено, что УФ-спектр поглощени

салифена не является специфичным, так как имеет те же экстремумы, что и УФ-спектр поглощения кислоты салициловой

Для включения в проект ФСП были рекомендованы наиболее чувствительные химические реакции с 1% спиртовым раствором нингидрина (АФМК) и 3% раствором железа (III) хлорида (кислота салициловая)

Определение посторонних примесей в субстанции салифена Для определения посторонних примесей в субстанции салифена изучена возможность использования тонкослойной хроматографии для идентификации и контроля стабильности салифена Исследование выполняли на готовых пластинках Сарбфил УФ-254 Установлено, что детектирование пятен фенибута и кислоты салициловой целесообразно проводить путем последовательного опрыскивания пластинки 1% спиртовым раствор нингидрина и 3% раствором железа (III) хлорида В первую очередь была изучена хроматографическая подвижность АФМК и кислоты салициловой в растворителях различной полярности

Выявлено, что АФМК обладает наибольшей хроматографической подвижностью при использовании полярных растворителей - воды и спирта 95% В малополярных растворителях значения его Rf близки к нулю Кислота салициловая обладает подвижностью в элюентах различной полярности, однако наибольшие значения Rf также достигаются при использовании воды и спирта этилового 95% Следует подчеркнуть, что использование в качестве элюента только спирта ведет к получению размытых зон АФМК и, как следствие, к затруднениям в определении величины Rf Поэтому, с целью устранения указанного недостатка, в подвижную фазу вводили компонент основного характера - 25% раствор аммиака

В ходе предварительных испытаний установлено, что в субстанции салифена вначале деструкции подвергается АФМК Поскольку продукт деструкции - 4-фенилпирролидон имеет сходство с АФМК по физико-химическим свойствам, мы посчитали возможным использовать в качестве вещества-свидетеля раствор АФМК

Путем сравнительного анализа был установлен оптимальный состав подвилчкой фазы спирт 95% - раствор аммиака 25% (18 1) Использование указанной подвижной фазы адекватно отвечало задаче достоверного определения

фенибута и кислоты салициловой в салифене, а также потенциального продукта деструкции - 4-фенидпирродидока-2. Величины АФМК, кислоты салициловой и потенциального примесного соединения составили 0,22±0,03; 0,56±0,03 и 0,65±0,03 соответственно.

Хроматограмма салифена, полученная в указанных условиях, представлена на|

I

рисунке 1. I

о

О О |

0 О 0 ° I

...........!.....^..........I- ......

1 2 3 4 5

Рисунок I - Хроматограмма салифена в системе спирт этиловый 95% - раствор аммиака 25% (18:1)

1 - раствор салифена (100 мкг) |

2 - раствор 1 СОВС у-амино-Р-фенилмасляной кислоты (70 мкг) |

3 - раствор СОВС кислоты салициловой (30 мкг) 1

4 - раствор 2 СОВС у-амино-р-фенилмасляной кислоты (0,35 мкг) |

5 - раствор 2 СОВС у-амино-р-фенилмасляной кислоты (0,1 мкг) } Исходя из допустимого содержания 4-фенилпирролидона-2 в фенибуте.'

установлено его предельно допустимое содержание в салифене, которое составился 0,35%. На основании проведенных исследований была разработана методика Коп I НИС1 Ы иу ОСТаНЦИИ С ¿иI Ср С Н ¡х, К\)Юр3.л ВКЛЮ^ГСпЙ. в проект Ф СП. I

Для контроля чистоты установлена также принципиальная возможности

использования обращенно-фазового варианта высокоэффективной жидкостной хроматографии. В результате подобран оптимальный сорбент - алкилсиликагель хромасорб С8, а также состав и рН подвижной фазы. Детектирование проводили спектрофотометрически при 258 нм. Хроматографирование осуществляли в градиентном режиме. Выбор условий проведен методом пробного градиента (таблица 4).

Таблица 4 - Условия хроматографического определения салифена

Состав буферного раствора Время, мин Режим элюировзния

U,j56 % раствор NaH2PU4 и Н3Р04 до рН 2,7-2,8 Ацетонитрил, % Буферный раствор, %

0 13 87

5 13 87

10 30 70

20 м 70

Хроматограмма салифена, полученная в указанных условиях, представлена на рисунке 2.

-I

--- \

п л

1 2 II

JJJ- -i-1-1 —i— —i— — —i— — — — -1- -1—

С 1 2 3 4 5 É 7 8 9 1С 11 1Î 13 14 15 16 17 п

Рисунок 2 - Хроматограмма раствора салифена

1 - фенибут

2 - потенциальное примесное соединение (4-фенилпирролидон-2)

3 - кислота салициловая

Как СЛёДусТ ИЗ приведем 111010 риСуНКи, дОСТй!'Ну 1 и ДиС 1^)ьёрнОс рио,ДслскИс

пиков фенибута, кислоты салициловой и потенциального продукта деструкции

(4-фенилпирролидона-2)

Количественное определение АФМК и кислоты салициловой в субстанции

салифена

При количественном определении адцуктов последовательно устанавливают содержание каждого из компонентов Для количественного определения АФМК и кислоты салициловой в субстанции салифена использовали титриметрические и фотометрические методы Для определения кислоты салициловой предложены методики обратного броматометрического титрования и фотометрического определения по реакции с железа (III) хлоридом в среде трис-буферного раствора с pH 2.5 Результаты количественного определения салициловой кислоты в 0,1 г субстанции салифена с помощью указанных методик представлены в таблице 5 Таблица 5 - Результаты количественного определения кислоты салициловой в

субстанции салифена

Обратное броматометрическое 1игро»<шие ччпимздрические определение ни реакций С железа (III) хлоридом

Объем титранта, мч Найдено кислоты салициловой,% Метрологические характеристики Оптическая плотность испытуемого раствора Найдено кислоты салициловой, % Метрологически характеристики

12,50 28,75 Хер = 28,77% S = 0,1216 S- = 0,049643 Ах, =±0,31 Ах =±0,13 £,=±1,09% с = ±0,44% 28,75±0,15% 0 652 27,55 Хср = 28,18% S =0,612753 S-, =0,250156 Ах, =±1,57 Ах =±0,64 £,=±5,59% £ = ±2,28% 28,2±0,6%

12,54 28,66 0,664 28,06

12,46 28,84 0,680 28,73

12,50 28,75 0,673 28,44

12,54 28,66 0,649 27,42

12,40 28,98 0,684 28,9

Примечание - VK = 25,0 мл (среднее значение из 6 параллельных определений) Примечание - Оптическая плотность ирод' взаимодействия 0,006% раствора стандартно образца кислоты салициловой с железа (И хлоридом (среднее значение из ше параллельных определений) составляла 0,71

Как следует из представленных результатов, методами обратной

броматометрии и фотометрии на основе реакции с железа (Ш) хлоридом найдено

среднее содержание кислоты салициловой в образцах субстанции салифена, которое составило 28,75*0,15% и 28,2±0,6%, при относительных погрешностях определения ±0,44% и ±2,28% соответственно

Предлагаемые методики были валидированы согласно рекомендациям ICH по показателям линейность, сходимость, правильность Результаты установления указанных валидационных характеристик представлены в таблице 6 Таблица 6 - Основные валидационные характеристики методик количественного определения кислоты салициловой в субстанции салифена

Показатель Методика обратного броматометрического титоооапия Фотометрическая методика по реакции с железа (III) хлоридом

Линейность 0,015-0,04 г у =-447,43 х +25,00 г-0,9999 удовлетворительная 0,001-0,012% у = 118,09 х +0,0026 г = 0,9958 удовлетворительная

Сходимость RSD = 0,454% удовлетворительная RSD - 1,69% удовлетворительная

Правильность К = 99,73-100,18% RSD = 0,23 -0,37% W = l,79-2,13<tnl6„ удовлетворительная R = 98,52- 101,90% RSD = 2,26-4,89% W, = 0,44- 1,60 MTi6lI удов четворительная

Как следует из полученных результатов, методики являются валидными по основным критериям

Химические свойства позволили использовать для количественного определения АФМК в сапифене ацидиметрическое титрование в среде неводного растворителя - кислоты уксусной безводной В разработанной методике титрантом является 0,1 моль/л раствор кислоты хлорной, точку эквивалентности определяли с помощью индикатора - кристаллического фиолетового Определить содержание АФМК можно также фотометрическим методом по реакции с нингидрином С помощью симплексного планирования эксперимента были установлены оптимальные условия проведения реакции - количество и рН фосфатного буферного раствора, время нагревания, количество 0,05% раствора кислоты аскорбиновой, добавляемой для увеличения чувствительность реакции Результаты

ч-г\ ппиалтп дттплппвгтвтто»»ип Л п А 1 г /ч йгтоипиы РОПи^РГЮ Л

1ии1 11IV 1 и ии^^ильшк/! I и и^ 1 1 V» V ни «V ки,и «

указанных методик приведены в таблице 7

Таблица 7 - Результаты количественного определения АФМК в субстанции салифена

Ацидиметричсское титрование в среде неводного растворителя Фотометрическое определение по реакци нингидрином

Объем титранта, мл Найдено АФМК,% Метрологические характеристики Оптическая плотность испытуемого раствора Найдено АФМК,% Метрологические характеристики

12,16 71,68 х™ = 71 82% 8 = 0,176635 =0072111 Ах, =±0,45 Ах =±0,19 е, = ±0,63% £ = ±0,26% 71,80±0,20% 0,800 72,73 Хер =77,3 5% 0,961603 .V, = 0,392573 Ах, = 12,47 Ах =±1,00 с, = ±3,42% — — 1 1 -то/ с. " /о 72,4±1,0%

12,20 7192 Л V, / и / 71,55

12,20 71,92 0,809 73,55

12,14 71,56 0,804 73,09

12,18 71,80 0,794 72,18

12,22 72.04 0,781 71,00

Примечание - V,, = 0,16 мл (среднее значение из 6 параллельных определений) Примечание - Оптическая плотность продук взаимодействия 0,0006% раствора стандартпог образца ЛФМК с нингидрином составляла 0 6 (среднее значите из шести параллельны определений)

Таким образом, с помощью ацидиметрии в среде неводного растворителя и фотометрической методики на основе реакции с нингидрином установлено среднее содержание АФМК в субстанции салифена, которое составило 71,80±0,20% и 72,4±1.0%, при относительных погрешностях определения ±0,26% и ±1,39% соответственно Результаты валидационной оценки методик показали, что они характеризуются удовлетворительными линейностью, сходимостью и правильностью, то есть являются валидными по основным критериям

Недостаток разработанных методик заключался в необходимости определять каждый из двух компонентов разными методами Поэтому была предпринята попытка найти условия определения обоих компонентов гя гтифеиа с помощью единой методики С этой целью использовали потенциометрическое

алкалиметрическое титрование В качестве гитра(гга использовали 0,1 моль/л раствор калия гидроксида, точки эквивалентности фиксировали потенциометрически В результате установлено, что оптимальной средой, позволяющей дифференцировать кислотные свойства АФМК и кислоты салициловой, является смешанная водно-органическая система вода-диметилсульфоксид (ДМСО) в соотношении 1 1 Для повышения кислотных свойств АФМК в реакционную смесь по достижении первого скачка потенциала добавили раствор формалина и после перемешивания в течение 5-6 минут титрование возобновляли Параллельно проводили контрольный опыт Кривые титрования салифена, полученные в таких условиях, представлены на рисунке 3

Рисунок 3 - Кривая титрования салифена в среде вода - ДМСО (11), титрант- 0,1 моль/л раствор калия гидроксида (момент добавления формалина показан стрелкой) Как следует из представленного рисунка, в выбранных условиях проведения титрования ясно различимы кривые титрования раствора формалина (1. контрольный опыт), кислот ы салициловой (2) и АФМК (3) Объемы титранта, израсходованные на титрование кислоты салициловой и АФМК, соответствуют отрезкам АВ и ВС Объем титранта, расходуемый на титрование контрольного опыта, равен отрезку ОА

В выбранных условиях анализа проводили количественное определение АФМК и кислоты салициловой Статистически обработанные результаты

количественного определения АФМК и кислоты салициловой в 0,3 г салифена представлены в таблице 8

Таблица 8 - Результаты количественного определения АФМК и кислоты салициловой в салифене методом потенциометрического алкалиметрического титрования

V], мл Уг, мл Найдено КС, % Найдено АФМК, % Метрологические характеристики

Кислота салициловая АФМК

6,20 18,9 27,97 72,00 Хер = 27,86% 5 = 0,125976 ^ =0,05143 Д*, =±0,32 Ах =±0,13 с, = ±1,16% £ = ±0,47% 27 85±0 15% ХсР =71,91% Б = 0,24 = 0,098 Ах, =±0,62 Ах =±0,25 £| - ±0,86% £=±0,35% 71,9±0 3%

6,15 18,9 27,74 72,30

6,15 18,85 27,74 72,00

6,20 18,85 27,97 71,71

6,15 18,80 27,74 71,71

с пп и^-и 1 о ос 1*7 Г)1 ^ / 1 11 Т1 1 1, / 1

Примечание - V,«, равен 0,40 мл (средний результат из 5 параллельных определений), поправочный коэффициент раствора титр гита равен 0,98

В результате установлено среднее содержание кислоты салициловой и АФМК в исследуемом образце субстанции салифена, которое составило 27,85±0,15% и 71,9±0,3%, при относительных погрешностях определения ±0,47% и ±0,35% соответственно Проведенная валидационная оценка показала, что предлагаемая методика валидна по критериям линейность, сходимость, правильность

С целью включения в проект ФСП методики количественного определения субстанции салифена провели сравнительную оценку разработанных нами методик При этом учитывали возможность проведения количественного определения АФМК и кислоты салициловой в одной навеске салифена, среднее время анализа, величину относительной погрешности определения, а также требования к наличию стандартного образца Результаты сравнительной оценки разработанных методик по указанным критериям представлены в таблице 9

Таблица 9 - Сравнительная оценка предлагаемых методик количественного

определения АФМК и кислоты салициловой в субстанции салифена

Обратная броматометрия Фотометрия гго реакции с железа (III) хлоридом Ацидиметрия в среде кислоты уксусной ледяной Фотометрия по реакции с нингидрином Потенциомет-рическое алкал им етри-ческое титрование

Определяемый компонент Кислота салициловая Кислота салициловая АФМК АФМК Кислота салициловая и АФМК

Время анализа, мин 20-25 5-10 5-10 25-30 20-25

Наличие стандартного образца не требуется требуется не требуется требуется не требуется

Относительная погрешность определения ±п 44% ±2,28% ±0,26% ±1,39% ±0,47% (кислота салициловая) ±0,35% (АФМК)

Поскольку методика потснциомстричсского алкалиметрического титрования в среде вода-ДМСО (1 1) дает возможность определять оба компонента салифена в одной навеске, а также позволяет сократить продолжительность анализа, выполнять его без стандартного образца и в результате получить приемлемые значения относительной погрешности, она была нами рекомендована для включения в проект ФСП Другие разработанные методики могут быть использованы в качестве альтернативных или для определения салифена в лекарственных препаратах и биологических жидкостях

Нормы качества, стабильность и срок годности субстанции салифена

Нормы качества субстанции салифена, установленные на 6 сериях на основе разработанных методик, представлены в таблице 10

При определении прозрачности, цветности и рН растворов салифена рекомендовано использование воды очищенной, нагретой до кипения Испытания проводят после охлаждения раствора до комнатной температуры

Таблица 10 - Нормы качества субстанции салифена

Показатель Метод Норма

Описание Визуальный Белый микрокристаллический порошок

Растворимость ГФХ1 Практически нерастворим в воде, мало растворим в спирте 95%, ацетоне практически нерастворим в гексанс, растворим в кипящей воде, легко растворим в растворах едких щелочей

Подлинность ИК-спектроскопия Цветные реакции Соответствует ФСП

Температура плавления ГФ XI, метод 1а 118 - 122°С (начало разложения)

Прозрачность раствора ГФ XI 1% раствор должен выдерживать сравнение с эталонным раствором I

Цветность раствора ГФ XI 1% раствор должен выдерживать сравнение с эталоном № 76

рН Потенциометрически ГФХ1 3,4 - 4,6 (0,5% раствор)

Посторонние примеси тех Не более 0,35%

Потеря в массе при высушивании ГФ XI Не более 0,03%

Сульфатная зола ГФ XI Не более 0,1%

Тяжелые металлы ГФ XI Не более 0,001%

Микробиологическая чистота ГФ XI и изм 3 Категория 1 2 Ь

Количественное определение Потенциометрическое титрование - у-амино-В-фенилмасляной кислоты не менее 71,0 и не более 73,0% - кислоты салициловой не менее 27,0 и не более 29,0%

С учетом выявленных нормативов методом «ускоренного старения» изучен

стабильность исследуемого вещества и установлено, что срок годности субстанци салифена составляет 5 лет

Таким образом, на основе исследования взаимодействия между фенибутом кислотой салициловой в салифене и выбора оптимальных методик анализ предложены способы стандартизации субстанции салифена, которые легли в основ проекта ФСП

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1 Изучено взаимодействие у-амино-р-фенилмасляной кислоты и кислоты салициловой в субстанции салифена с помощью термических и спектральны методов Установлено, что наиболее вероятным механизмом взаимодействия является образование ионной связи, возникающей между карбоксильной

1 20

группой кислоты салициловой и первичной алифатической аминогруппой у-амнно-(3-фенилмасляной кислоты

2 Исследована возможность использования химических и физико-химических методов для подтверждения подлинности субстанции салифена Для идентификации салифена предложено использование ИК-спектроскопии, а также химических реакций с нингидрином и железа (III) хлоридом

3 Обосновано применение тонкослойной хроматографии для контроля чистоты субстанции салифена Найдены оптимальные условия для определения потенциального примесного соединения в субстанции салифена, установлено его предельно допустимое содержание, равное 0,35%

4 Показана принципиальная возможность использования метода ВЭЖХ для контроля чистоты субстанции салифена Установлены оптимальные условия определения, позволяющие достоверно разделять пики АФМК, кислоты салициловой, а также потенциального примесного соединения

5 Изучены возможности использования фотометрических и титриметрических методов анализа для количественного определения АФМК и кислоты салициловой в субстанции салифена Для количественного определения кислоты салициловой предложены методики обратного броматометрического титрования и фотометрического определения на основе реакции с железа (III) хлоридом Относительные погрешности определения при использовании указанных методик не превышают ±0,44% и ±2,28% соответственно

6 Предложены методики ацидиметрического титрования в среде кислоты уксусной безводной и фотометрического определения на основе реакции с нингидрином для количественного определения АФМК в субстанции салифена Относительные погрешности определения не превышают ±0,26% и ±1,39% соответственно

7 Разработана методика потенциометрического алкалиметрнческого титрования в смешанной водно-органической среде вода-ДМСО (11), позволяющая проводить количественное определение кислоты салициловой и АФМК в

одной навеске субстанции салифена, с относительной погрешностью определения не более ±0,47% и ±0,35% соответственно

8 Проведена валидационная оценка всех предложенных методик количественного определения АФМК и кислоты салициловой в субстанции салифена В результате установлено, что методики являются валидными по основным критериям линейность, сходимость, правильность

9 В результате сравнительной оценки для включения в проект ФСП рекомендована методика потенциометрического определения салифена в среде смешанного водно-органического растворителя вода-ДМСО (1 1) Указанная методика позволяет проводить количественное определение АФМК и кислоты салициловой в одной навеске субстанции салифена, характеризуется удовлетворительной продолжительностью анализа, приемлемыми величинами относительной погрешности определения, возможностью проводить определение без стандартных образцов

10 Обоснованы нормы качества исследуемого вещества С помощью метода «ускоренного старения» изучена стабильность салифена и установлен срок годности субстанции салифена, который составил 5 лет

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ДИССЕРТАЦИИ

1 Изучение возможности использования ИК-спектроскопии для идентификации нового биологически активного соединения салифен // Научное обозрение -2006 -№5 -С 30-33 (Соавт Беликов В Г )

2 Разработка и валидация фотометрической методики количественного определения кислоты салициловой в субстанции салифена // Разработка, исследование и маркетиш новой фармацевтической продукции сб научн тр Пяшгорской ГФА - Пятигорск, 2007 - Вып 62 - С 250-252 (Соавт Беликов В Г)

3 Разработка методики количественного определения нового биологически активного соединения салифен !! Пути и формы совершенствования фармацевтического образования Создание новых физиологически активных вещее! в материалы 3-й Всеросс науч -метод конф 22-24 марта 2007 г -

uwpwn^yr., ¿uu i — ¿uu-zuz.

4 Разработка методики количественного oí i редел е! км у-амино-р-феншшасляной кислоты в субстанции салифена // Актуальные проблемы фармац сб материалов межрегион науч конф (Владикавказ, 26-27 апреля 2007 г) -Владикавказ, 2007 -С 38-39

5 Использование хроматографии в тонком слое сорбента для контроля чистоты и стабильности салифена // Изв Высш учеб заведений Северо-Кавказ регион Естеств науки Проблемы фармац, фармакол и рациональной терапии Слецвып - 2007 - С 91-92

6 Фотометрическая методика количественного определения у-амино-Р-фенилмасляной кислоты в субстанции салифена // Курский научн-практ весп ник «Человек и его здоровье» - 2008 - №2-С 130-134 (Соавт Беликов В Г)

ЛАРСКИЙ МИХАИЛ ВЛАДИМИРОВИЧ

ИЗУЧЕНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ФЕНИБУТА С САЛИЦИЛОВОЙ КИСЛОТОЙ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ НОВОГО БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО СОЕДИНЕНИЯ САЛИФЕН

АВТОРЕФЕРАТ ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ

V А ТПЛ ТТ А Т* А 'К Л ГШ Л I И.'П'Г'ШН.'П/М V I 1 Л V1Г 111/41* 1:1 ч^/и 111 /11-1,1 .и 1 г 1 1 11/1 > 1V

Подписано к печати 2008 г Формат бумаги 60x84 1/16

Бумага книжно-журнальная Печать ротапринтная Уел печ л 1,0 Тираж 100 экз Заказ №

Государственное образовательное учреждение высшего профессионально

образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академи Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию) (357532, г Пятигорск, пр Калинина, 11)

 
 

Оглавление диссертации Ларский, Михаил Владимирович :: 2008 :: Пятигорск

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ФЕНИБУТ И КИСЛОТА САЛИЦИЛОВАЯ: ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И МЕТОДЫ АНАЛИЗА. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ.

1.1. Общая характеристика фенибута и кислоты салициловой.

1.2. Общая характеристик салифена.

1.3. Методы анализа фенибута и кислоты салициловой.

1.3.1. Химические методы анализа фенибута, кислоты салициловой и их некоторых производных.

1.3.2. Физико-химические методы анализа фенибута, кислоты салициловой и их некоторых производных.

1.4. Взаимодействие лекарственных веществ.

Выводы по главе 1.

ГЛАВА 2. ИЗУЧЕНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ФЕНИБУТА И КИСЛОТЫ САЛИЦИЛОВОЙ В САЛИФЕНЕ.

2.1. Изучение взаимодействия фенибута и кислоты салициловой в салифене термическими методами.

2.2. Изучение взаимодействия фенибута и кислоты салициловой в салифене спектральными методами.

Выводы по главе 2.

ГЛАВА 3. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ДЛЯ

АНАЛИЗА САЛИФЕНА.

3.1. Обнаружение у-амино-(3-фенилмасляной кислоты, кислоты салициловой и продуктов деструкции в субстанции салифена с помощью хроматографии в тонком слое сорбента.

3.1.1. Выбор оптимальной системы растворителей.

3.1.2. Выбор оптимального проявителя и установление пределов обнаружения.

3.1.3. Разработка методик идентификации и контроля чистоты субстанции салифена.

3.2. Качественное и количественное определение салифена и продуктов его деструкции с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.

3.2.1. Выбор условий анализа субстанции салифена методом ВЭЖХ.

3.2.2. Валидация ВЭЖХ методик контроля подлинности, количественного определения и чистоты субстанции салифена.

Выводы по главе 3.

ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА МЕТОДИК КАЧЕСТВЕННОГО И

КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ САЛИФЕНА.

4.1. Разработка методик качественного анализа салифена.

4.2. Разработка методик количественного определения салифена.

4.2.1. Разработка методик количественного определения кислоты салициловой в субстанции салифена.

4.2.1.1. Выбор условий количественного определения кислоты салициловой в субстанции салифена с помощью обратного броматометрического титрования.

4.2.1.2. Выбор условий количественного определения кислоты салициловой в субстанции салифена фотометрическим методом на основе реакции с железа (III) хлоридом.

4.2.2. Разработка методик количественного определения у-амино-р-фенилмасляной кислоты в субстанции салифена.

4.2.2.1. Выбор условий количественного определения у-амино-р-фенилмасляной кислоты с помощью титрования в среде неводного растворителя.

4.2.2.2. Выбор условий количественного определения у-амино-Р-фенилмасляной кислоты фотометрическим методом на основе реакции с нингидрином.

4.2.3. Разработка методики количественного определения у-амино-р-фенилмасляной кислоты и кислоты салициловой в одной навеске субстанции салифена.

4.3. Сравнительная оценка методик количественного определения у-амино-{3-фенилмасляной кислоты и кислоты салициловой в субстанции салифена.

Выводы по главе 4.

ГЛАВА 5. РАЗРАБОТКА НОРМ КАЧЕСТВА НА СУБСТАНЦИЮ САЛИФЕНА.

5.1. Описание.

5.2. Растворимость.

5.3. Подлинность.

5.4. Температура плавления.

5.5. Прозрачность и цветность.

5.6. Водородный показатель (рН).

5.7. Посторонние примеси.

5.8. Потеря в массе при высушивании.

5.9. Сульфатная зола и тяжелые металлы.

5.10. Микробиологическая чистота.

5.11. Количественное определение.

5.12. Срок годности.

Выводы по главе 5.

 
 

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Ларский, Михаил Владимирович, автореферат

Актуальность темы. Стандартизация и контроль качества лекарственных средств играют важнейшую роль в обеспечении населения эффективными и безопасными лекарственными препаратами. Это в большей степени относится к лекарственным средствам, применяемым для лечения больных с нарушениями мозгового кровообращения. Поэтому наряду с поисками новых средств для лечения указанных заболеваний, необходимо решать вопросы разработки методов их анализа.

К числу таких лекарственных препаратов относятся производные у-аминомасляной кислоты (ГАМК). Они показали свою эффективность при терапии различных форм ишемии головного мозга. ГАМК-ергические лекарственные вещества, к числу которых относится фенибут (у-амино-Р-фенилмасляной кислоты гидрохлорид), способны сохранять высокие показатели кардио- и гемодинамики в условиях ишемии мозга и миокарда. Однако имеются возможности повышения эффективности фенибута путем его сочетания с другими биологически активными соединениями. С этой целью на кафедре органической химии Российского государственного педагогического университета им. А.И. Герцена (г. Санкт-Петербург) был синтезирован ряд биологически активных соединений, одним из которых является салифен - аддукт у-амино-Р-фенилмасляной кислоты (АФМК) и кислоты салициловой в молярном соотношении 2:1. Предварительные доклинические исследования салифена, проведенные на базе Волгоградского государственного медицинского университета, показывают перспективность его применения в медицинской практике в качестве нейропротекторного и противоишемического лекарственного средства. В то же время для его внедрения в медицинскую практику необходимы объективные и надежные методы контроля качества. До настоящего времени разработкой методов анализа салифена не занимались. Необходимость их разработки связана также и с тем, что неизвестен характер взаимодействия фенибута и салициловой кислоты в салифене, а, следовательно, не выяснены вопросы взаимного влияния компонентов на результаты определения каждого из них.

Поэтому разработка методов стандартизации и контроля качества салифена является актуальным вопросом для фармацевтической науки и практики.

Цели и задачи исследования. Целью настоящего исследования явилось изучение взаимодействия АФМК с кислотой салициловой и стандартизация нового биологически активного соединения салифен.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить взаимодействие АФМК и кислоты салициловой с помощью термических и спектральных методов.

2. Исследовать возможность использования химических и физико-химических методов анализа для подтверждения подлинности салифена в субстанции.

3. Изучить возможность применения хроматографических, оптических и химических методов для количественного определения АФМК и кислоты салициловой в субстанции салифена.

4. Обосновать условия применения хроматографического анализа для контроля чистоты субстанции салифена.

5. Изучить факторы, обусловливающие стабильность и установить срок годности субстанции салифена.

6. Разработать нормы качества и подготовить проект ФСП на субстанцию салифена.

Научная новизна. Проведено изучение характера взаимодействия фенибута с салициловой кислотой с помощью ПМР- и ИК-спектрометрии, а также термических методов. Показано, что взаимодействие между компонентами происходит за счет аминогруппы фенибута и карбоксильной группы салициловой кислоты. Установлено, что в ИК-спектре салифена отсутствует полоса поглощения неионизированной карбоксильной группы, в спектре ПМР также не регистрируется сигнал протона карбоксильной группы. В связи с этим высказано предположение об образовании водородной связи между карбоксильной группой фенибута и фенольным гидроксилом салициловой кислоты. На основании изучения физико-химических свойств салифена и его составных частей обоснованы методики качественного и количественного определения салифена. В результате валидационной оценки доказана приемлемость методик количественного определения салифена с помощью физико-химических и химических методов. Обоснована методика количественного определения фенибута и кислоты салициловой в субстанции салифена, позволяющая проводить анализ в одной навеске без разделения. Осуществлен выбор условий контроля чистоты субстанции салифена с помощью ТСХ и ВЭЖХ. Методом ускоренного старения изучена стабильность субстанции салифена и установлен срок годности.

Практическая значимость результатов исследования. Разработаны и валидированы методики испытаний на подлинность, чистоту и количественного определения салифена химическими и физико-химическими методами. Валидационная оценка предлагаемых методик показала, что они отличаются простотой выполнения, высокой чувствительностью, отсутствием систематической погрешности и позволяют достоверно оценивать качество субстанции салифена. Разработанные методики анализа и нормы качества включены в проект ФСП.

Внедрение результатов исследования в практику. Разработаны проект фармакопейной статьи предприятия и пояснительная записка на субстанцию салифен. Получен акт апробации предлагаемых методик анализа салифена от ОАО «Щелковский витаминный завод», г. Щелково.

Положения, выносимые на защиту:

1. Результаты изучения взаимодействия между фенибутом и кислотой салициловой с помощью термических и спектральных методов.

2. Результаты качественного и количественного определения у-амино-[3-фенилмасляной кислоты и кислоты салициловой в субстанции салифена, а также сравнительная оценка разработанных методик.

3. Результаты использования тонкослойной и высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения потенциальных примесных соединений в субстанции салифена.

4. Нормы качества, стабильность и срок годности субстанции салифена.

Апробация и публикация результатов исследования. Основные положения диссертационной работы доложены на региональных конференциях (Пятигорск, 2007 и 2008 гг., Владикавказ, 2007 г., Воронеж, 2007 г.). По теме диссертации опубликовано 6 научных работ.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорская государственная фармацевтическая академия Росздрава (номер государственной регистрации 01.2.00101060).

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 170 страницах машинописного текста, выполненного с помощью компьютерного набора, содержит 40 таблиц, 30 рисунков, состоит из «Введения», «Обзора литературы», 4-х глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 131 источник, в том числе 33 иностранных, и приложений.

 
 

Заключение диссертационного исследования на тему "Изучение взаимодействия фенибута с салициловой кислотой и стандартизация нового биологически активного соединения салифен"

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Изучено взаимодействие у-амино-Р-фенилмасляной кислоты и кислоты салициловой в субстанции салифена с помощью термических и спектральных методов. Установлено, что наиболее вероятным механизмом взаимодействия является образование ионной связи, возникающей между карбоксильной группой кислоты салициловой и первичной алифатической аминогруппой у-амино-Р-фенилмасляной кислоты.

2. Исследована возможность использования химических и физико-химических методов для подтверждения подлинности субстанции салифена. Для идентификации салифена предложено использование ИК-спектроскопии, а также химических реакций с нингидрином и железа (III) хлоридом.

3. Обосновано применение тонкослойной хроматографии для контроля чистоты субстанции салифена. Найдены оптимальные условия для определения потенциального примесного соединения в субстанции салифена, установлено его предельно допустимое содержание, равное 0,35%.

4. Показана принципиальная возможность использования метода ВЭЖХ для контроля чистоты субстанции салифена. Установлены оптимальные условия определения, позволяющие достоверно разделять пики АФМК, кислоты салициловой, а также потенциального примесного соединения.

5. Изучены возможности использования фотометрических и титриметрических методов анализа для количественного определения АФМК и кислоты салициловой в субстанции салифена. Для количественного определения кислоты салициловой предложены методики обратного броматометрического титрования и фотометрического определения на основе реакции с железа (III) хлоридом. Относительные погрешности определения при использовании указанных методик не превышают ±0,44% и ±2,28% соответственно.

6. Предложены методики ацидиметрического титрования в среде кислоты уксусной безводной и фотометрического определения на основе реакции с нингидрином для количественного определения АФМК в субстанции салифена. Относительные погрешности определения не превышают ±0,26% и ±1,39% соответственно.

7. Разработана методика потенциометрического алкалиметрического титрования в смешанной водно-органической среде вода-ДМСО (1:1), позволяющая проводить количественное определение кислоты салициловой и АФМК в одной навеске субстанции салифена, с относительной погрешностью определения не более ±0,47% и ±0,35% соответственно.

8. Проведена валидационная оценка всех предложенных методик количественного определения АФМК и кислоты салициловой в субстанции салифена. В результате установлено, что методики являются валидными по основным критериям: линейность, сходимость, правильность.

9. В результате сравнительной оценки для включения в проект ФСП рекомендована методика потенциометрического определения салифена в среде смешанного водно-органического растворителя вода-ДМСО (1:1). Указанная методика позволяет проводить количественное определение АФМК и кислоты салициловой в одной навеске субстанции салифена, характеризуется удовлетворительной продолжительностью анализа, приемлемыми величинами относительной погрешности определения, возможностью проводить определение без стандартных образцов.

10.Обоснованы нормы качества исследуемого вещества. С помощью метода «ускоренного старения» изучена стабильность салифена и установлен срок годности субстанции салифена, который составил 5 лет.

 
 

Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2008 года, Ларский, Михаил Владимирович

1. Айвазов, Б.В. Введение в хроматографию: учеб. пособие для хим. спец. вузов / Б.В. Айвазов. М.: Высш. шк., 1983. - 240 с.

2. Аналитическая хроматография / К.И. Сакодынский и др.. — М.: Химия, 1993.-464 с.

3. Арзамасцев, А.П. Валидация аналитических методов / А.П. Арзамасцев, Н.П. Садчикова, Ю.Я. Харитонов // Фармация. 2006. - Т. 55, №4. - С. 8-12.

4. Багирова, В.Л. Фармацевтические субстанции / В.Л. Багирова, Е.Л. Ковалева, К.С. Шаназаров // Хим.-фармац. журн. 2007. - Т. 41, №1. - С. 35 - 37.

5. Багметов, М.Н. Церебропротекторное действие композиций фенибута и фенотропила и их солей в условиях экспериментальной ишемии головного мозга: автореф. дис . канд. медиц. наук: 14.00.25 / Багметов Мирослав Николаевич. Волгоград, 2006 - 26 с.

6. Беликов, В.Г. Анализ лекарственных веществ фотометрическими методами. Опыт работы отечественных специалистов / В.Г. Беликов // Рос. хим. журн. — 2002. Т. 46., №4. - С. 52-56.

7. Берикетов, A.C. Межмолекулярные взаимодействия ацетилсалициловой кислоты с пектином / A.C. Берикетов, P.A. Атова, Х.З. Ойтов // Изв. Сев.-Кав. науч. центра высш. шк. Естеств. науки. 2004. - №2. - С. 63-64.

8. Берштейн, И.Я. Спектрофотометрический анализ в органической химии / И.Я. Берштейн, Ю.Л. Каминский. 2-е изд., перераб. и доп. - Л.: Химия, 1986. -198 с.

9. Бородкина, JI.E. Изучение антигипоксического действия новых производных фенибута веществ РГПУ-147 и РГПУ-189 / JI.E. Бородкина // Здоровье и образование в XXI веке: материалы 7 междунар. научно-практ. конф. 23-26 ноября 2006 г. - М., 2006. - С. 84-85.

10. Браун, Д. Спектроскопия органических веществ: пер. с англ. / Д. Браун, А. Флойд, М. Сейнзбери. М.: Мир, 1992. - 302 с.

11. Булатов, М.И. Практическое руководство по фотометрическим методам анализа / М.И. Булатов, И.П Калинкин. 5-е изд., перераб. - JL: Химия, 1986. -432 с.

12. Быстряков, В.П. Использование образования донорно-акцепторных молекулярных комплексов в фармацевтическом анализе / В.П. Быстряков // Фармация. 1991. - Т. 40, №2. - С. 75-78.

13. Веверис, А.Я. Потенциометрическое дифференциальное титрование гидрохлорида ß-фенил-у-аминомасляной кислоты и промежуточных продуктов его синтеза / А.Я. Веверис, И.А. Jlyce // Хим.-фармац. журн. -1990. Т. 24, №9. - С. 77-80.

14. Вилков, Л.Е. Физические методы исследования в химии. Резонансные и электрооптические методы: учеб. для хим. спец. вузов / Л.Е. Вилков, Ю.А. Пентин. М.: Высш. шк, 1989. - 288 с.

15. Влияние нового производного ГАМК соединения РГПУ-189 на выживаемость и мозговой кровоток животных в условиях ишемии головного мозга / Л.Е. Бородкина и др. // Фундаментальные исследования. — 2007. -№4. С. 69.

16. Влияние пирацетама на растворимость и скорость растворения анестезина / Л.Е. Жнякина и др. // Фармация. 2001. - Т. 49, №4. - С. 28-29.

17. Влияние фенибута на задержку дыхания, вызванную серотонином / И.А. Тараканов и др. // Эксперим. и клинич. фармакология. — 2006. Т. 69, №1. — С. 28-32.

18. Влияние физико-химического взаимодействия на растворимость салициламида в твердых гидрофильных дисперсиях на основе трисамина / МЛ. Ткаченко и др. // Хим.-фармац. журн. 2004. - Т. 38, №12. - С. 30-31.

19. Временная инструкция по проведению работ с целью определения сроков годности лекарственных средств на основе метода «ускоренного старения» при повышенной температуре И 42-2-82 / МЗ СССР М., 1983. - 13 с.

20. Гейсс, Ф. Основы тонкослойной хроматографии (планарная хроматография): пер. с англ. / Ф. Гейсс. М.: 1999. - 2 т.

21. Гольдблат, Ю.В. Усиление фенибутом лечебного действия антипаркинсонических средств / Ю.В. Гольдблат, И.П. Лапин // Журн. невропатологии и психиатрии. — 1986. №6. — С. 1146-1148.

22. Государственная Фармакопея СССР: в 2 вып.: вып. 1. Общие методы анализа. 11-е изд. -М.: Медицина, 1987. - 336 с.

23. Дероум, Э. Современные методы ЯМР для химических исследований: пер. с англ. / Э. Дероум М.: Мир, 1992. - 403 с.

24. Дерффель, К. Статистика в аналитической химии: пер. с нем. / К. Дерффель. -М.: Мир, 1994.-268 с.

25. Доклад о состоянии здравоохранения в мире, 2007 г. Женева: Изд-во ВОЗ, 2007. - 73 с.

26. Дорофеев, ВЛ. Проект общей фармакопейной статьи «Высокоэффективная жидкостная хроматография» / В.Л. Дорофеев, А.П. Арзамасцев, Н.П.

27. Садчикова // Вестн. ВГУ. Серия: Химия. Биология. Фармация. 2004. - №1. -С. 166-172.

28. Жнякина, JI.E. Исследования физико-химического взаимодействия лекарственных веществ в твердых дисперсных системах: автореф. дис. . канд. фармац. наук: 15.00.02 / Жнякина Лидия Евгеньевна. — Самара, 2005. -23 с.

29. Изучение влияния нового производного ГАМК РГПУ-189 на изменения поведения у животных, вызванные острым стрессом, в сравнении с пирацетамом / Л.Е. Бородкина и др. // Фундаментальные исследования. — 2007. №4. - С. 68.

30. Изучение инфракрасных спектров производных у-аминомасляной кислоты / Л.М. Шмуйлович и др. // Фармация. 1972. - Т. 21, №2. - С. 32-35.

31. Изучение лекарственных субстанций кислоты салициловой и ее производных методом дифференциальной сканирующей калориметрии и дериватографии / В.А. Попков и др. // Вопросы биологич., мед. и фармац. химии. — 2005. — №3. С. 42-43.

32. Казицына, Л.А. Применение УФ-, ИК- и ЯМР-спектроскопии в органической химии: учеб. пособие для вузов / Л.А. Казицына, Н.Б. Куплетская. — М.: Высш. шк., 1971.-264 с.

33. Кардиопротекторные свойства производных ГАМК в условиях острой алкогольной интоксикации / В.Н. Перфилова и др. // Эксперим. и клинич. фармакология. 2006. - Т. 69, №4. - С. 23-27.

34. Карташов, B.C. Идентификация методом ЛМР'Н ароматических, арилалифатических карбоновых кислот и их производных с использованиемперсонального компьютера / B.C. Карташов, C.B. Шоршнев, А.П. Арзамасцев // Фармация. 1996. - Т. 45, №4. - С. 35-37.

35. Кинетические особенности растворения в системе парацетамол мочевина / JI.E. Жнякина и др. // Хим.-фармац. журн. - 2001. - Т. 35, №12. - С. 32-33.

36. Киселев, A.B. Межмолекулярные взаимодействия в адсорбции и хроматографии / A.B. Киселев. М.: Высш. шк., 1986. - 330с.

37. Кислота салициловая субстанция: фармакоп. ст. - ФС 42-2567-00. — М., 2000. - 7 с.

38. Кислота салициловая: фармакоп. ст. // Государственная фармакопея СССР.- 10-е изд. М.: Медицина, 1968. - С. 58-59.

39. Копелевич, В.М. Современный подход к созданию ноотропных средств на основе у-аминомасляной кислоты / В.М. Копелевич, И.А. Сытинский, В.И. Гунар // Хим.-фармац. журн. 1981. - Т. 15, №5. - С. 27

40. Крешков, А.П. Аналитическая химия неводных растворов / А.П. Крешков. -М.: Химия, 1982.-256 с.

41. Лабораторные работы по фармацевтической химии: учеб. пособие / под ред. E.H. Вергейчика, Е.В. Компанцевой. 2-е изд., перераб. и доп. — Пятигорск, 2003.-С. 175.

42. Лапин, И.П. Фармакологические различия между кинурениновыми и коразоловыми судорогами (участие ГАМКБ-рецепторов и дофамина) / И.П. Лапин // Эксперим. и клинич. фармакология. 1998. — Т. 61, №2. — С. 20-22.

43. Лурье, Ю.Ю. Справочник по аналитической химии: крат, справ. / Ю.Ю. Лурье. М.: Химия, 1989. - 446 с.

44. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: в 2 т. / М.Д. Машковский. 14-е изд. перераб . и доп. - М.: Новая волна, 2000. - 2 т.

45. Методы идентификации лекарственных препаратов / Н.П. Максютина и др..- Киев: Здоров'я, 1984. 222 с.

46. Мешковский, А.П. Испытания стабильности и установление сроков годности лекарственных препаратов / А.П. Мешковский // Аптека. 2000. - №15. -С. 15.

47. Мужановский, Э.Б. Обнаружение и определение некоторых производных салициловой кислоты / Э.Б. Мужановский, А.Ф. Фартушный, А.И. Седов // Фармация. 1991. - Т. 40, №2. - С. 40-44.

48. Мынка, А.Ф. Применение ИК-спектроскопии для оценка качества лекарственных препаратов, содержащих в молекулах карбонильные группы: автореф. дис. . канд. фармац. наук: 15.00.02 / Мынка Анатолий Федорович. -Москва, 1980.-27 с.

49. Некоторые физико-химические параметры салицилатов / М.Н. Царевская и др. // Фармация. 1994. - Т. 43, №4. - С. 17-20.

50. Новиков, В.Е. Влияние фенибута на ультраструктуру митохондрий мозга при травматическом отеке-набухании / В.Е. Новиков, В.В. Наперстников // Эксперим. и клинич. фармакология. 1994. - Т. 57, №2. — С. 13-16.

51. О повышении тепловой устойчивости человека при однократном применении беметила и фенибута / В.И. Макаров и др. // Эксперим. и клинич. фармакология. 1997. - Т. 60, №1. - С. 68-71.

52. Органическая химия: учеб. для вузов: в 2 кн. / B.JI. Белобородов и др.; под ред. H.A. Тюкавкиной. 2-е изд., стереотип. - М.: Дрофа, 2003. - Кн. 1. — 640 с.

53. ОСТ 91500.05.001-00. Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения. М., 2000. - 80 с.

54. Перельман, Я.М. Анализ лекарственных форм: практическое руководство / Я.М. Перельман. 3-е изд. перераб. и доп. — JL: Медгиз, 1961. — 616 с.

55. Перфилова, В.Н. Возможные механизмы антиангинального действия производных ГАМК / В.Н. Перфилова, И.Н. Тюренков // Эксперим. и клинич. фармакология.-2005.-Т. 68, №5.-С. 68-71.

56. Применение хроматографических методов для оценки чистоты фенибута / И.Р. Лопаткина и др. // Фармация. 1994. - Т. 43, №6 (доп.). - С. 37-38.

57. Пуца, Г.И. Салициловая кислота / Г.И. Пуца // Химическая энциклопедия: в 5 т. М.: Большая Рос. энциклопедия, 1995. - Т. 4. - С. 288-289.

58. Результаты изучения противоишемических свойств нового производного ГАМК соединения РГПУ-189 и фенибута в сравнительном аспекте / J1.E. Бородкина и др. // Современные наукоемкие технологии. 2007. - №5. -С. 64.

59. Регистр лекарственных средств России: энциклопедия лекарств. — М.: Инфармхим, 2000. 733 с.

60. Руководство ICH «Валидация аналитических методик. Содержание и методология» Q2(R1). Международная конференция по гармонизации технических требований к регистрации медицинских лекарственных средств // Фармация. 2008. - №4. - С. 3-10.

61. Садек, П. Растворители для ВЭЖХ: пер. с англ. / П. Садек. М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2006. - 704 с.

62. Сапрыкин, Л.В. Динамическое модифицирование в практике ВЭЖХ / В.Л. Сапрыкин // Химический анализ. 2005. - №1. — С.20-36. — Режим доступа: http://www.anchem.ru/chemanalysis/2005/020-036.asp. - Загл. с экрана.

63. Сборник методических рекомендаций по стандартизации лекарственных средств / Научный центр экспертизы средств медицинского применения. -М.: Изд. дом Пеликан, 2006. 392 с.

64. Сергеев, П.В. ГАМК-рецепторы и сердечно-сосудистая система / П.В. Сергеев, Л.А. Валиева, Н.Л. Шимановский // Эксперим. и клинич. фармакология,-1998.-Т. 61, №3.- С. 81-85.

65. Смирнов, A.B. Кардиальные эффекты фенибута при формировании экспериментальной хронической почечной недостаточности / A.B. Смирнов, Т.А. Барабанова, H.A. Пенчул // Эксперим. и клинич. фармакология. 2003. -Т. 66, №4.-С. 21-24.

66. Солдатенков, А.Т. Основы органической химии лекарственных веществ / А.Т. Солдатенков, Н.М. Колядина, И.В. Шендрик. М.: Химия, 2001. - 192 с.

67. Спектрофотометрическое определение оротовой и у-амино-р-фенилмасляной кислот в смесях / А.Я. Веверис и др. // Хим.-фармац. журн. 1991. - Т. 25, №6. - С. 72-75.

68. Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии / О.Б. Рудаков и др.. Воронеж: Водолей, 2004. — 528 с.

69. Сравнительная оценка нейропротекторного действия фенибута и пирацетама в условиях экспериментальной ишемии мозга у крыс / И.Н. Тюренков и др. // Эксперим. и клинич. фармакология. 2006. — Т. 69, №3. - С. 19-22.

70. Стандартизация лекарственных форм фенибута / Т.И. Ярыгина и др. // Фармация. 2004. - Т. 53, №5. - С. 14-15.

71. Стыскин, E.JI. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография / E.JI. Стыскин, Л.Б. Ициксон, Е.В. Брауде. М.: Знание, 1986. - 450 с.

72. Тираспольская, С.Г. Применение некоторых видов фотометрии для анализа фармацевтических препаратов производных кислоты салициловой: дис. . канд. фармац. наук: 15.00.02 / Тираспольская Светлана Григорьевна. -Пятигорск, 1972. — 159 с.

73. Ткаченко, M.JI. Взаимное влияние компонентов системы «салициламид -парацетамол» на растворимость / М.Л. Ткаченко, Л.Е. Жнякина, A.C. Космынин // Фармация. 2003. - Т. 51, №1. - С. 23-25.

74. Ткаченко, М.Л. Особенности растворения в системе парацетамол кислота аминокапроновая / М.Л. Ткаченко, Л.Е. Жнякина, A.C. Космынин // Хим.-фармац. журн. - 2002. - Т. 36, №11.- С. 55-56.

75. Ткаченко, М.Л. Физико-химические исследования твердых смесей кофеина и парацетамола / М.Л. Ткаченко, Л.Е. Жнякина, A.C. Космынин // Хим.-фармац. журн. 2003. - Т. 37, №8. - С. 34-36.

76. Тюренков, И.Н. Фармакологическое исследование вазоактивных свойств аналогов гамма-аминомасляной кислоты: дис. . д-ра мед. наук / Тюренков Иван Николаевич. — Казань, 1987. — 461 с.

77. Фенибут субстанция: фармакоп. статья. - ФСП 42-0038-0051-00. - СПб,2000. 6 с.

78. Фенибут субстанция: фармакоп. статья. - ФСП 42-0348-2164-01. - СПб,2001.-8 с.

79. Фенибут таблетки 0,25: фармакоп. статья. - ФСП 42-1768-96. - М., 1996. -5 с.

80. Хабриев, Р.У. Новый порядок установления сроков годности лекарственных средств / Р.У. Хабриев // Ремедиум. 1999. - №12. - С. 3-4.

81. Химические свойства структурных компонентов сополимеров N-винилпирролидона и N-винил-у-аминомасляной кислоты / А.И. Сливкин и др. // Вестн. Воронеж, гос. ун-та. Серия: Химия. Биология. Фармация. -2003. Т. 37, №2. - С. 228-234.

82. Шараф, М.А. Хемометрика: пер. с англ. / М.А. Шараф, Д.Л. Иллмэн, Б.Р. Ковальски. Л.: Химия, 1989. - 272 с.

83. Шмуйлович, Л.М. Гамма-аминомасляная кислота и лекарственные препараты на ее основе / Л.М. Шмуйлович, А.Н. Кудрин // Фармация. 1987. — Т. 36, №4. - С. 76-80.

84. Шмуйлович, Л.М. Изучение инфракрасных спектров производных у-аминомасляной кислоты / Л.М. Шмуйлович, В.М. Копелевич, Ф.М. Шемякин // Фармация. 1971. - Т. 20, №6. - С. 27-31.

85. Эпштейн, H.A. Исследование взаимодействия лекарственных и вспомогательных веществ в твердых формах. 1. Одновременный дифференциальный термический и термогравиметрический анализ / H.A. Эпштейн // Хим.-фармац. журн. 1994. - Т. 28, №5. - С. 52-59.

86. Эпштейн, H.A. Одновременное определение триметоприма, сульфометоксазола, метил- и пропилпарабенов в суспензиях типа «Котримоксазола» методом ВЭЖХ / Н.А. Эпштейн // Хим.-фармац. журн. 2002. -Т. 36, №12.-С. 37-41.

87. Эпштейн, Н.А. Оценка предела количественного определения с учетом требований к воспроизводимости результатов анализа / Н.А. Эпштейн // Хим.-фармац. журн. 2002. - Т. 36, №11. - С. 52-54.

88. Эпштейн, Н.А. Термическая устойчивость аддуктов оротовой кислоты с аминокислотами и аминами / Н.А. Эпштейн, М.Г. Плешаков, В.И. Снегоцкий // Хим.-фармац. журн. 1990. - Т. 24, №1. - С. 75-77.

89. Эпштейн, Н.А. Тест фармацевтической совместимости лекарственных и вспомогательных веществ в разрабатываемых лекарственных формах заданного состава / Н.А. Эпштейн // Хим.-фармац. журн. — 1995. — Т. 29, №3. -С. 51-53.

90. Яворский, М.П. О цветной реакции 4-аминоантипирина с лекарственными препаратами / М.П. Яворский // Фармацевтич. журн. 1961.—№4.-С.31.

91. A fluorescence spot test for salicylate determination / E.M. Linares et al. // Analytical Letters. 2007. - Vol. 40, N 3. - P. 573-583.

92. A novel chemiluminiscent method for the determination of salicylic acid in bactericidal solutions / H. Cui et al. // Analytical and Bioanalytical Chemistry. -2002.-Vol. 372, N4.-P. 601-604.

93. Amick, E.N. Determination of aspirin, salicylic acid, salicyluric acid, and gentistic acid in human plasma and urine by high pressure liquid chromatography /

94. E.N. Amick, W.D. Mason // Analytical Letters. 1979. - Vol. 12, N 6. - P. 629640.

95. Barakat, M. The microdetermination of salicylic acid and certain derivatives / M. Barakat, A. Fayzalla, T. Shaker // Microchemical J. 1970. - Vol. 15, N 1. -P. 10-24.

96. British Pharmacopoeia 2005. London: Renouf Pub Co Ltd, 2005. - 3500 p.

97. Burgoyne, R.F. The simultaneous assay of naproxen and salicylic acid in serum using high pressure liquid chromatography / R.F. Burgoyne, P.R. Brown, S.R. Kaplan // J. of Liquid Chromatography and Related Technologies. 1980. -Vol. 3, N 1. — P. 101-111.

98. Cazes, J. Chromatography theory / J. Cazes, R.P.W. Scott. New York: Marcel Dekker, 2002. - 475 p.

99. De Marco, J.D. Colorimetric determination of salicylic acid / J.D. De Marco, A.D. Marcus // J. of Pharmaceutical Sciences. 1962. - Vol. 51, N 10. - P. 1010.

100. Determination of salicylic acid in aspirin / C.W. Strode et al. // Analytical Chemistry. 1983.-Vol. 55, N l.-P. 1184-1186.

101. Determination of salicylic acid in human serum with capillary zone electrophoresis / Y. Goto et al. // J. of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications. 1998. - Vol. 706, N 2. - P. 329-335.

102. Fu, C.-H. J. Method for determination of aspirin and salicylic acid in rat whole blood by high pressure liquid chromatography / C.-H. J. Fu, S. Melethil, W.D. Mason // Analytical Letters. 1985. - Vol. 18, N 3. - P. 269-277.

103. Ganapathy, K. Bromatometric determination of phenols and phenolic carbonyl compounds / K. Ganapathy, A. Palaniappan, K. Neelakantam // Current Science. 1977. - Vol. 46, N 11. - P. 379.

104. Gui-yun, Z. A rapid fluorometric method for the determination of salicylic acid in serum and urine / Z. Gui-yun, Y. Jing-he // Analytical Letters. 1984. — Vol. 17, N 16.-P. 1827-1830.

105. Hassan, M.M.A. Carbon-13 magnetic resonance spectroscopy of salicylic acid and derivatives / M.M.A. Hassan, M.U. Zubair // Spectroscopy Letters. 1982. -Vol. 15, N7.-P. 533-542.

106. Improved colorimetric determination of salicylic acid and its metabolites in urine / N.A. Farid et al. // Clinical Chemistiy. 1975. - Vol. 21, N 8. - P. 11671168.

107. Lin, S.L. Differentiating nonaqueous titration of salicylic acid and acetylsalicylic acid combination / S.L. Lin // Analyst. 1985. - Vol. 110, N 6. - P. 739-741.

108. Loh, H.C. Application of artificial neural network on optical method for salicylic acid determination by using copper / H.C. Loh, M. Ahmad, M.N. Taib // Analytical Letters.-2005.-Vol. 38, N5.-P. 881-891.

109. Loh, H.C. Usage of artificial neural network (back propagation) in optimising salicylic acid determination with ferric (III) nitrate / H.C. Loh, M. Ahmad, M.N. Taib // Analytical Letters. 2006. - Vol. 39, N 1. - P. 221-229.

110. Mentasti, E. Complex formation between nickel (II) and cobalt (II) with salicylic acids. Equilibriums and reaction mechanisms / E. Mentasti, F. Secco, M. Venturini // Inorg. Chem. 1980. - Vol. 19, N 11.-P. 3528-3531.

111. Molokhia, A.M. Liquid chromatographic assay for salicylic acid in liquid and semisolid formulations / A.M. Molokhia, H.I. Al-shora, S. Al-rahman // J. of Liquid Chromatography and Related Technologies. 1985. - Vol. 8, N 11. - P. 2093-2103.

112. Nordstromt, F.L. Solubility and melting properties of salicylic acid / F.L. Nordstromt, A.C. Rasmuson // J. Phys. Chem. A. 2001. - Vol. 105, N 47. - P. 10673-10680.

113. Perlmutter-hayman, В. The kinetics of the reaction between V (III) ions and salicylic acid. Mechanism and activation parameters / B. Perlmutter-hayman, E. Tapuhi //J. of Coordination Chemistry. 1979. - Vol. 9, N 3. - P. 177-183.

114. Saha, U. Spectrophotometric determination of salicylic acid in pharmaceutical formulations using copper (II) acetate as a color developer / U. Saha, K. Baksi // Int. J. Pharm.-2001.-Vol. 23, N 1-2.-P. 95-104.

115. Salicylic acid Электронный ресурс. Электрон, дан. (1 файл). — Режим доступа: http://www.inchem.org/documents/pims/pharm/pim642.htm. - Загл. с экрана.

116. Shetty, B.V. High pressure liquid chromatographic assay for salicylic acid and its metabolites in rat urine / B.V. Shetty, S. Melethil // Analytical Letters. -1988. Vol. 21, N 3. - P. 395-410.

117. Silva, B.C. Development and validation of an alternative titration method for the determination of sulfate ion in indinavir sulfate / B.C. Silva, L.M.M. de Campos, G.A. Pianetti // Quim Nova. 2005. - Vol. 28, N 1. - P. 54-56.

118. Simultaneous determination of salicylamide, acetylsalicylic acid and salicylic acid by multi-wavelenght spectrophotometric methods / J.M. Garcia et al. // Analytical Letters. 1996. - Vol. 29, N 2. - P. 249-263.

119. Simultaneous determination of salicylic acid and salicyluric acid in plasma and urine by high pressure liquid chromatography /1. Bekersky et al. // Analytical Letters. 1977. - Vol. 10, N 7-8. - P. 539-550.

120. The coulometric titration of weak acids in non-aqueous media / C. Cotman et al.//Talanta. 1965. -Vol. 12, N l.-P. 17-19.

121. Thielemann, H. Bromatometric determination of phenol compounds by uniform research methods / H. Thielemann H. // Pharmazie. 1970. - Bd 25, H. 3. - S. 202.

122. Titrimetric determination of some organic compounds with bromine chloride / K.K. Verma et al. // Talanta. 1978. - Vol. 25, N 8. - P. 469-475.

123. Voltammetric determination of salicylic acid in pharmaceuticals formulations of acetylsalicylic acid / A.A.J. Torriero et al. // Talanta. 2004. - Vol. 62, N 2. -P. 247-254.