Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Разработка технологии получения и исследование химического состава твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные

Лядова Екатерина Владимировна

Разработка технологии получения и исследование химического состава твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные

14.04.01 - технология получения лекарств 14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

4842709

МОСКВА-2010

4842709

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Первый Московский Государственный Медицинский Университет имени И. М. Сеченова

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук,

доцент Фетисова Анжелика Николаевна

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук,

профессор Белобородов Владимир Леонидович

доктор фармацевтических наук Гузев Константин Сергеевич

Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН

Защита состоится «°<у » 2011 г. в часов на заседании

Диссертационного совета Д.208.040.09 при ГОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М.Сеченова по адресу: 119019, Москва, Никитский бульвар, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова, по адресу: 117998, Москва, Нахимовский проспект, 49.

Автореферат разослан « » С—-2010 г.

Ученый секретарь

Диссертационного Совета Д.208.040.09, доктор фармацевтических наук, профессор

Садчикова Наталья Петровна

Общая характеристика работы Актуальность темы. В последние годы существенно возрос интерес к отечественным лекарственным растениям, как источнику биологически активных веществ (БАВ) для создания новых лекарственных препаратов. Это объясняется общими тенденциями развития российской фармацевтической промышленности, направленными на внедрение ресурсосберегающих технологий в производство лекарственных препаратов.

Плоды растений семейства Сельдерейные содержат жирное масло, включающее комплекс БАВ, обеспечивающий не только его фармакологическую активность, но и обусловливающий возможность получения липофильных фракций, которые могут быть использованы в качестве основ природного происхождения для производства мягких лекарственных форм.

Получение лекарственных препаратов на основе растительного сырья требует объективной оценки их качества, а также унификации методов стандартизации, поскольку в липофильных фракциях одновременно присутствуют БАВ, различающиеся как по физико-химическим свойствам, так и по спектру фармакологической активности.

Суппозитории и мази на современном фармацевтическом рынке являются востребованными лекарственными формами. Они, как правило, состоят из одного или нескольких лекарственных и вспомогательных веществ, составляющих рационально подобранную основу. Основы для мягких лекарственных форм не являются просто наполнителями-носителями лекарственных веществ, а выполняют активную функцию обеспечения необходимого фармакологического эффекта.

Растения семейства Сельдерейные являются широко культивируемыми в умеренном поясе России, поэтому отсутствие необходимости экспорта сырья позволит установить стоимость конечного продукта, которая не будет зависеть от внешних экономических факторов. С учетом современных тенденций развития российского фармацевтического производства, актуальным направлением представляется разработка рациональной технологии извлечения твердых липофильных фракций (ТЛФ) из плодов растений семейства Сельдерейные, исследование их химического состава и стандартизация с целью получения мазевых и/или суппозиторных основ природного происхождения из отечественного лекарственного сырья.

Цель и задачи исследования. Целью исследования является разработка технологии получения твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные и их стандартизация как основ для производства мягких лекарственных форм.

Достижение поставленной цели осуществлялось путем решения следующих основных задач:

1. Разработать и оптимизировать технологию извлечения твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные за счет выбора селективного экстрагента и купажирования сырья.

2. Изучить химический состав и определить критерии подлинности и показатели качества твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные и купажей на их основе.

3. Оценить соответствие показателей качества твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные и купажей на их основе требованиям Государственных стандартов качества лекарственных средств (ГСКЛС), предъявляемым к основам для мягких лекарственных форм.

4. Разработать спецификации для контроля качества полученных твердых липофильных фракций как основ для производства мягких лекарственных форм.

5. Разработать проекты Фармакопейных статей предприятия (ФСП) «Твердая липофильная фракция из плодов фенхеля обыкновенного (суппозиторная основа)» и «Твердая липофильная фракция из купажа плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного».

Научная новизна результатов исследования. Разработана рациональная технология получения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные с использованием циркуляционного экстрагирования и селективного экстрагента - гексана. Технология позволяет получать фракции с оптимальными для производства мягких лекарственных форм структурно-механическими свойствами.

Установлено, что в извлекаемых по предложенной технологии ТЛФ содержатся БАВ с различной фармакологической активностью, а именно триацилглицерины (ТАГ), каротиноиды, фосфолипиды, БАВ эфиромасличной фракции.

Впервые предложено купажирование сырья для получения твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные. Разработан оптимальный состав купажа - плоды фенхеля обыкновенного и плоды кориандра посевного в соотношении 2:1.

Для твердых липофильных фракций из плодов фенхеля обыкновенного, кориандра посевного и купажей на их основе определенны в соответствии с требованиями ГСКЛС показатели качества.

Впервые определен качественный и количественный состав ацилглицеринов жирных кислот, терпеноидов и ароматических соединений ТЛФ, извлекаемых из плодов растений семейства Сельдерейные по предложенной технологии.

Установлено, что преобладающими жирными кислотами в составе ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного и купажа плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного в соотношении 2:1 являются ненасыщенные олеиновая, петрозелиновая и линолсвая кислоты.

Впервые предложены нормы содержания зруковой кислоты, трансизомеров жирных кислот, жирных кислот с длиной углеродной цепи менее С14 в твердых липофильных фракциях растительного сырья, используемых для производства мягких лекарственных форм.

Преобладающими компонентами эфиромасличной фракции ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного являются анетол, метилхавикол, фенхон и анисовый альдегид; ТЛФ из купажа плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного - анетол, линалоол, камфора, метилхавикол, фенхон. Установлено, что анетол, метилхавикол, фенхон - специфические маркеры подлинности для ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного; анетол, линалоол, метилхавикол, фенхон - специфические маркеры подлинности для ТЛФ из купажа плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного.

В результате исследования показателей качества изученных объектов рекомендовано использовать ТЛФ из купажа плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного как мазевой основы или компонента мазевых основ; ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного - как суппозиторную основу.

Новизна исследований подтверждена патентом РФ № 2318867 «Способ получения суппозиторной основы», 2008 г.

Практическая значимость работы. Разработаны спецификации для контроля качества твердых липофильных фракций, полученных предложенным способом из плодов фенхеля обыкновенного и купажа фенхель : кориандр (2:1).

На основании проведенных исследований разработаны проекты Фармакопейных статей предприятия:

• «Твердая липофильная фракция из плодов фенхеля обыкновенного (суппозиторная основа)»;

• «Твердая липофильная фракция из купажа плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного».

Разработанная методика оптимизации технологии извлечения твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные внедрена в учебный процесс на химическом факультете МГУ им. М.В. Ломоносова и используется при изучении технологии получения лекарственных препаратов из лекарственного растительного сырья (ЛРС). Методика нормирования содержания эруковой кислоты, трансизомеров жирных кислот, жирных кислот с длиной углеродной цепи менее С14 в ТЛФ растительного сырья, используемых для производства мягких лекарственных форм, внедрена в ГОУ ВПО РУДН (медицинский факультет, кафедра фармацевтической и токсикологической химии) при изучении модулей, включающих принципы контроля качества и стандартизации лекарственных средств растительного происхождения.

По научному проекту диссертационной работы ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова Росздрава и Независимой лабораторией ИНВИТРО присужден грант (2007 г.).

Апробация работы. Материалы исследования были представлены для обсуждения на следующих конференциях, конгрессах: итоговой студенческой конференции с международным участием «Татьянин день», посвященной 250-летию Московской Медицинской Академии им. И.М.Сеченова (Москва, 2007); научно-практической конференции «Интеграция образования, науки и производства в фармации», посвященной

70-летию Ташкентского фармацевтического института (Ташкент, 2007); VIII и X Международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации» (Москва, 2007; Москва, 2009); XV, XVI и XVII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2008; Москва, 2009; Москва, 2010); V Конференции молодых ученых России с между народным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 2008); научно-практической конференции "Актуальные вопросы образования, науки и производства в фармации" (Ташкент, 2008); региональной конференции по фармации и фармакологии ПГФА «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2009).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 13 работ, в том числе статья в журнале, рекомендованном ВАК, и патент на изобретение.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных исследований Первого МГМУ им. И.М. Сеченова и является составной частью комплексной программы НИР кафедры общей химии «Новые знания и подходы в оценке качества и сертификации биологически активных соединений синтетического и природного происхождения, лекарственных препаратов, изделий медицинской техники (технологические аспекты)» (номер Государственной регистрации 01.200.118.796).

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из взедения, обзора литературы (глава I), 4 глав собственных исследований, выводов, списка использованных источников информации и приложений.

Работа представлена на 157 страницах машинописного текста, содержит 37 таблиц и 8 рисунков.

Библиография включает 159 источников, из них 49 иностранных.

В первой главе представлено информационно-аналитическое исследование ассортимента основ для производства мягких лекарственных форм, способов их получения, методов оценки и стандартизации. На основании анализа литературных данных показана актуальность разработки новых основ для производства мягких лекарственных форм из отечественного сырья.

Во второй главе подробно изложены материалы и методы исследования твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные и купажей на их основе.

В третье главе описана разработка технологии извлечения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные, а также оптимизация предложенного способа с помощью подбора селективного экстрагента и купажирования сырья.

В четвертой главе представлены результаты определений показателей качества полученных ТЛФ.

В пятой главе приведены результаты исследований состава биологически активных веществ ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного и из

купажа плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного в соотношении 2:1. Описано получение суппозиториев на основе ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного. Представлена разработка спецификаций для контроля качества изученных ТЛФ.

Основные положения, выносимые на защиту.

• Разработка и оптимизация технологии получения твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные за счет выбора селективного экстрагента и купажирования сырья.

• Результаты изучения химического состава и показателей качества полученных ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные и купажей на их основе.

• Разработка спецификаций для контроля качества исследуемых твердых липофильных фракций.

Содержание работы Объекты и методы исследования Для получения твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные и купажей на их основе использовалось фармакопейное лекарственное растительное сырье плоды фенхеля обыкновенного («Fructus Foeniculi vulgaris») и плоды укропа пахучего («Fructus Anethi graveolentis»), а также плоды кориандра посевного («Fructus Coriandri») (ГОСТ 17081-97).

Вспомогательные вещества, растворители и реактивы отвечали требованиям соответствующей нормативной документации.

ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные получали в соответствии с разработанным нами способом экстракцией органическими растворителями в аппарате Сокслета. Для определения практического выхода липофильных фракций использовали гравиметрический метод.

Анализ липофильных фракций, полученных из плодов растений семейства Сельдерейные и купажей на их основе, осуществлялся в соответствии с требованиями общих фармакопейных статей «Масла жирные» (ГФ X), «Суппозитории» (ГФ XI), «Экстракты» (ГФ XI), «Мази» (ГФ XI) и соответствующих методик ГФ X, ГФ XI, ГФ XII и действующих ГОСТов.

Остаточные количества растворителя (гексана) в полученных ТЛФ определяли в соответствии с требованиями ОФС 42-0057-07 «Остаточные органические растворители» ГФ XII методом газожидкостной хроматографии (ГЖХ). Условия анализа: газовый хроматограф с масс-спектрометрическим детектором (ГЖХ-МС) - DSQ-II Finnigan; хроматографическая колонка - кварцевая капиллярная (30м х 0,25мм х 0,25мкм); газ носитель - гелий; температура инжектора - 270°С; температура детектора - 250'С. Режим инжектирования со сбросом 30 мл/мин и с задержкой сброса 1 мин.

Для количественного определения каротиноидов использовали спектрофотометрический метод. Оптическую плотность измеряли при длине волны 440 нм. Содержание суммы каротиноидов выражали в пересчете на (3-каротин.

Количественное определение фосфолипидов проводили гравиметрически.

Для анализа состава терпеноидов, ароматических соединений и идентификации специфических маркеров подлинности ТЛФ использовали методы ГЖХ-МС и ГЖХ с пламенно-ионизационным детектором (ГЖХ-ПИД). Условия хроматографического анализа: газовые хроматографы DSQ-II Finnigan (ГЖХ-МС) и Peri-2000 (ГЖХ-ПИД), кварцевая капиллярная колонка (30м х 0,25мм х 0,25мкм); температура инжектора - 270°С; температура детектора - 250°С; газ-носитель - гелий. Режим инжектирования со сбросом 30 мл/мин и с задержкой сброса 1 мин. Масс-спектрометрия: квадрупольный анализатор. Режим сканирования по полному ионному току от 39 до 450 а.е.м. Способ ионизации - электронный удар 70 эВ.

Исследование ацилглицеринов жирных кислот проводили методом ГЖХ-ПИД. Условия хроматографического анализа: газовый хроматограф Carlo Erba Strumentazione, HRGC 5300 Mega Series; хроматографическая колонка - Chrorapack Capillary column test Reporp CP 7420 (100 м x 0,25 мм x 0,25 мкм). Температурный режим: термостат колонок -80°С (10 мин), 5°/мин -175°С (15 мин), 47мин - 200°С (5 мин), 3 °/мин - 225°С (60 мин); температура инжектора - 260°С; температура детектора - 240°С. Детектор - пламенно-ионизационный. Газ-носитель - азот.

Исследование на микробиологическую чистоту проводили в соответствии с требованиями ОФС 42-0067-07 «Микробиологическая чистота» ГФ XII.

Срок годности изучаемых объектов устанавливали в соответствии с требованиями ОФС 42-0075-07 «Сроки годности лекарственных средств» ГФ XII.

Статистическая обработка полученных результатов проведена в соответствии с требованиями ОФС «Статистическая обработка результатов химического эксперимента и биологических испытаний» ГФ XI.

Результаты и обсуждение

Разработка и оптимизация технологии извлечения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные

ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные и купажей на их основе получали по разработанному нами способу (патент 2318867 РФ, 2008 г.). Способ заключается в следующем: исходное сырье предварительно высушивали до остаточной влажности 2,5% и измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 0,5 мм. Перед началом экстракции сырье настаивали в аппарате Сокслета с экстрагентом в течение 30 минут. Процесс экстракции проводили в течение 2,5-3 часов при соотношении сырье : экстрагент - 1:3-5. Полученный экстракт сгущали непосредственно в аппарате Сокслета, отгоняя экстрагент из испарителя на сырье в экстрактор, до объема по массе приблизительно равной массе взятого сырья. Затем экстракт количественно переносили во взвешенную колбу и отгоняли экстрагент при температуре на 3-5°С выше его температуры кипения.

Для оптимизации технологии получения ТЛФ из плодов растений Сельдерейные нами было предложено купажирование сырья, которое заключалось в использовании механической смеси нативного сырья. По вышеуказанной технологии (селективный экстрагент - гексан) нами были получены липофильные фракции из купажей фенхель : кориандр в соотношениях 1:1, 2:1 и 1:2; кориандр : укроп (1:1), а также из плодов фенхеля обыкновенного, кориандра посевного, укропа пахучего.

Результаты определения практического выхода липофильных фракций в пересчете на абсолютно сухое сырье представлены в таблице 1.

Выход ТЛФ составляет не менее 4% в пересчете на абсолютно сухое сырье.

Таблица 1

Выход липофильной фракции из плодов растений семейства Сельдерейные и купажей на их основе по разработанному способу ___(патент 2318867 РФ, 2008 г.)_

№ / Выход липофильной фракции, %

опыта/

/объект фенхель обыкновенный кориандр посевной укроп пахучий фенхель-кориандр 1:1 фенхель-кориандр 2:1 фенхель-кориандр 1:2 кориандр-укроп 1:1

N1 4,87 4,98 4,18 4,36 4,71 4,36 4,15

N2 5,04 4,36 4,36 4,56 5,17 4,38 4,34

N3 4,62 4,78 4,39 4,76 5,21 4,52 4,53

N4 4,70 4,56 3,97 4,80 4,96 4,68 4,13

N5 __ 5,12 4.67 4,00 4,32 4,75 4,66 4,55

Метрологические характеристики (Р=0,95; п=5)

X 4,87 4,67 4,18 4,56 4,96 4,52 4,34

S 0,2138 0,2326 0,1956 0,2209 0,2309 0,1503 0,2003

s- 0,0457 0,0541 0,0382 0,0488 0,0533 0,0226 0,0401

Лх 0,27 0,29 0,24 0,27 0,29 0,19 0,25

Е7% 5,5 6,2 5,7 5,9 5,8 4,2 5,8

Характеристика полученных липофильных фракций по показателю «Описание» представлена в таблице 2.

Исследование показывает, что в результате экстрагирования гексаном по предложенному нами способу из плодов растений семейства Сельдерейные и купажей на их основе извлекаются липофильные фракции твердой, вязкой и густой консистенции со слабым специфическим запахом эфирных масел нативного сырья.

Характеристика липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные и куиажей на их основе по показателю «Описание»

Липофильная фракция Описание

фенхель обыкновенный При температуре 20°С - твердая масса зеленого цвета со специфическим запахом эфирного масла фенхеля. В расплавленном состоянии зеленая прозрачная жидкость без механических примесей.

кориандр посевной При температуре 20°С - густая вязкая масса желтого цвета со специфическим запахом эфирного масла кориандра. В расплавленном состоянии - вязкая желтая жидкость без механических примесей.

укроп пахучий При температуре 20°С - вязкая жидкость темно-зеленого цвета без механических примесей со специфическим запахом эфирного масла укропа.

фенхель-кориандр 1:1 При температуре 20°С - густая масса коричнево-зеленого цвета со слабым специфическим запахом смеси эфирных масел фенхеля и кориандра. В расплавленном состоянии - вязкая коричнево-зеленая жидкость без механических примесей.

фенхель-кориандр 2:1 При температуре 20°С - густая вязкая масса светло-зеленого цвета со слабым специфическим запахом смеси эфирных масел фенхеля и кориандра. В расплавленном состоянии - вязкая светло-зеленая жидкость без механических примесей.

фенхель-кориандр 1:2 При температуре 20°С - вязкая жидкость светло-зеленого цвета без механических примесей со слабым специфическим запахом смеси эфирных масел фенхеля и кориандра.

кориандр-укроп 1:1 При температуре 20°С - вязкая жидкость темно-зеленого цвета с желтой флуоресценцией со слабым специфическим запахом смеси эфирных масел укропа и кориандра.

Для твердой при комнатной температуре фракции плодов фенхеля обыкновенного были определены значения температуры плавления и значения температуры затвердевания в соответствии с Общими фармакопейными статьями «Температура плавления» (ОФС 42-0034-07) и «Температура затвердевания» (ОФС 42-0035-07) ГФ XII.

Температура затвердевания ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного равна 23-24°С; температура плавления - 28-3 ГС, т.е. данная ТЛФ имеет твердую консистенцию при комнатной температуре и температуру плавления меньше 37°С, что соответствует требованиям, предъявляемым ГСКЛС к суппозиторным основам.

Для густых и вязких при комнатной температуре фракций, полученных из плодов кориандра посевного и купажей фенхель : кориандр (1:1 и 2:1), были определены значения условного показателя - температуры загустевания. Температура загустевания фракций из плодов кориандра и купажа фенхель: кориандр (1:1) составляет 18-20°С; для фракции из купажа фенхель: кориандр (2:1) - 22-23°С. Данные липофильные фракции при комнатной температуре обладают мажущей способностью; по своим структурно-механическим свойствам соответствуют требованиям, предъявляемым к мазевым основам.

Таким образом, в соответствии с целью и поставленными задачами для дальнейшего исследования были выбраны ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного, ТЛФ из купажей фенхель-кориандр в соотношении 2:1 и 1:1.

Анализ показателей качества твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные и купажей на их основе

Результаты определения показателей качества ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного, кориандра посевного и купажей фенхель : кориандр представлены в таблице 3.

Таблица 3

Показатели качества ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные ____и купажей на их основе_

Показатели качества ТЛФ

фенхель обыкновенный кориандр посевной купаж фенхель-кориандр 1:1 купаж фенхель-кориандр 2:1

Растворимость • легко растворимы в диэтиловом и петролейном эфире, хлороформе, гексане, пиридине; • мало растворимы в 95% этаноле и метаноле; • практически не растворимы в воде.

Показатель преломления, по20С 1,4776 1,4737 1,4889 1,4721

Плотность при 20*С, г/см' 0,9050±0,0002 0,9174±0,0004 0,8996±0,0010 0,911б±0,0010

Температура плавления, 'С 28-31 - - -

Температура затвердевания, 'С 23-24 - - -

Температура загустевания,'С (условный показатель) 18-20 18-20 22-23

Кислотное число 5,05±0,05 4,78±0,11 4,64±0,09 4,87±0,08

Число омыления 189,3±2,8 199,2±3,5 151,7±1,4 177,5± 2,2

Йодное число 80,0*1,3 73,Ш,6 б8,4±1,0 78,8±0,6

Содержание перекисей,% 0,90±0,01 0,40±0,01 0,55±0,02 0,73±0,03

рН водного извлечения 6,90±0,10 7,02±0,20 7,01±0,20 6,97±0,20

Для извлечения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные селективным экстрагентом является гексан. В соответствии с ОФС 42-005707 «Остаточные органические растворители» ГФ XII гексан относится ко второму классу токсичности - негенотоксичный растворитель. Нормирование растворителей этого класса в лекарственных средствах обусловлено максимально допустимым количеством, принимаемым в составе суточной дозы лекарственного средства. Согласно классификации предельно допустимое содержание гексана в лекарственных средствах - 290 ррш или

0,029%. ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного и купажа фенхель : кориандр (2:1) были исследованы на содержание остаточных количеств гексана.

ПЖХ анализ показал отсутствие остаточных количеств растворителя в исследуемых образцах.

Таким образом, разработанная нами технология позволяет извлекать твердые липофильные фракции из плодов растений семейства Сельдерейные, соответствующие требованиям ГСКЛС по показателю «содержание остаточных органических растворителей».

Исследование состава БАВ твердых липофильных фракций и разработка спецификаций для контроля качества

Известно, что жирное масло плодов растений семейства Сельдерейные содержит комплекс БАВ, обеспечивающих широкий спектр его фармакологической активности. Для извлечения твердых липофильных фракций в качестве селективного экстрагента согласно разработанному нами способу используется гексан. Данный органический растворитель имеет низкую температуру кипения (68,7°С), что обусловливает возможность создания щадящего температурного режима при экстракции фракций и на стадии удаления экстрагента, тем самым позволяет извлекать из нативного сырья термолабильные БАВ. Кроме того, гексан обладает высокой экстрагирующей способностью в отношении БАВ липофильной природы.

Как правило, содержание веществ неомыляемой фракции экстрактов, извлекаемых из лекарственного растительного сырья, не превышает 2-3%. Однако в результате исследования было установлено, что показатель содержания неомыляемых веществ в объектах исследования составляет не менее 20%: в ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного - 22,60±1,19%; в ТЛФ из плодов кориандра посевного - 23,82±1,36%; В ТЛФ из купажа фенхель : кориандр (1:1) - 23,20±1,38%; в ТЛФ из купажа фенхель : кориандр (2:1) -22,37±1,25%.

В составе изученных ТЛФ идентифицированы и количественно определены БАВ неомыляемой фракции каротиноиды и фосфолипиды. Установлено, что содержание каротиноидов в пересчете на Р-каротин в объектах исследования составляет не менее 5 мг%; содержание фосфолипидов - не менее 0,8%. Результаты соответствующих исследований представлены в таблицах 4 и 5.

Таким образом, разработанная нами технология позволяет извлекать ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные и купажей на их основе, которые содержат комплекс БАВ, характеризующихся антиоксидантным и противовоспалительным действием.

Содержание каротиноидов в ТЛФ из плодов растений семейства __Сельдерейные и купажей на их основе__

№ опыта/ /тлф Суммарное содержание каротиноидов в пересчете на р-каротин, мг%

фенхель обыкновенный кориандр посевной купаж фенхель-кориандр 1:1 купаж фенхель-кориандр 2:1

1 5,25 7,07 6,49 6,20

2 5.20 7,02 6,59 6,12

3 5,15 6,98 6,61 6,18

4 5,26 7,08 6,54 6,04

5 5,14 6,96 6,47 1 6,06

Метрологические характеристики (Р=0,95; п=5)

X 5,20 7,02 6,54 6,12

Ч 0,0552 0,0531 0,0608 0,0707

Б" 0,0031 0,0028 0,0037 0,0050

Длг 0,07 0,07 0,08 0,09

Е,% 1,3 1,0 1,2 1.5

Таблица 5

Содержание фосфолипидов в ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные и купажей на их основе

№ опытр/ / ТЛФ Содержание фосфолипидов, %

фенхель обыкновенный кориандр посевной купаж фенхель-кориандр 1:1 купаж фенхель-кориандр 2:1

1 0,93 1,43 1,28 1,19

2 0,87 1,57 1,24 1,05

3 0,96 1,52 1,20 1,15

4 0,84 1,47 1,16 1,12

5 0,90 1,61 1,32 1,09

Метрологические характеристики (Р=0,95; п=5)

X 0,90 1,52 1,24 1,12

Б 0,0474 0,0728 0,0633 0,0539

в2 0,0022 0,0053 0,0040 0,0030

ьГх 0,06 0,09 0,08 0,07

£,% 6,7 5,9 6,5 6,3

Исследование состава терпеноидов и ароматических соединений Содержание неомыляемой фракции более 20% в изученных ТЛФ, а также наличие у объектов исследования специфического запаха эфирных масел свидетельствуют о присутствии группы терпеноидов и ароматических соединений. Это было подтверждено экспериментально в ходе ГЖХ-МС и

ГЖХ-ПИД анализов исследованных образцов ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного и ТЛФ из купажа фенхель : кориандр (2:1).

Было установлено, что преобладающим компонентом для полученных ТЛФ является анетол.

Содержание анетола в ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного составляет не менее 88%, в ТЛФ из купажа фенхель : кориандр (2:1) - не менее 77% от суммы терпеноидов и ароматических соединений. В составе ТЛФ из купажа фенхель : кориандр (2:1) также содержится линалоол в количестве не менее 13% от суммы терпеноидов и ароматических соединений, присутствующих в данном объекте.

Общий вид рабочих хроматограмм представлен на рисунках 1 и 2.

Качественный и количественный состав терпеноидов и ароматических соединений ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного и из купажа фенхель : кориандр (2:1) представлен в таблице 6.

&№2№еВ25МРМ

ИТ: 0 33 - 24 02 ........................................ .......... .........................................................

S 3

I ] 2 1

¡(..им j 2.0t>

4.95

8.еэ_ 'RT: 11-37 RT: 13.57

8.49 j\

"7' \ i RT:

8-20.,' \ \ J 12.41 .04 ! 'V ii-sl .

О-

I a.o?

- f^y^t»^.......'It-i._____

Time (min)

Рисунок 1. Хроматограмма БАВ эфиромасличной фракции ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного. Основные компоненты: 11.37-цимен; 11.65-эвкалиптол(цинеол); 12.41 -у-терпинен; 13.57-фенхон; 13.81 -линалоол; 17.03-метилхавикол; 19.03 - анисовый альдегид; 19.76 - анетол; 22.07 - гераниол.

1?Т: 0.41-22.61

N1.:

Рисунок 2. Хроматограмма БАЕ эфиромасличной фракции ТЛФ из купажа фенхель обыкновенный : кориандр посевной (2:1). Основные компоненты: 8.36 - пинен; 13.57 -фенхон; 13.81-линалоол; 15.51 - камфора; 17.03 - метилхавикол; 19.05 - анисовый альдегид; 19.74 - анетол; 22.09 - гераниол.

Таблица 6

Качественный н количественный состав терпеноидов и ароматических соединений ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного и ТЛФ из купажа

№ и/и Название компонента Содержание компонентов (%)

ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного ТЛФ из купажа фенхель:кориандр (2:1)

1 2 3 4

1. Анетол (п-метоксипропенилбензол) 88,54 77,55

2, Линалоол (3,7-диметил-1,6-октадиен-З-ол) 0,55 13,88

3. Метилхавикол (п-аллиланезол) 4,69 4,62

4. Фенхон (1,3,3-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-он) 2,96 0,44

5. Анисовый альдегид (4-метоксибензальдегид) 1,75 0,25

6. Анисовая кислота (4-метоксибензойная кислота) 0,69 -

7. Пинеи I-а-пинен (2,6,6-триметилбищшю [3.1.1]гепт-2-ен) II-Р-пинен (2-метилен-б,6-диметилбицикло [3.1.1]гептаи) Ш-5-пинен (2,6,6-триметилбицикло [3.1.1]гепт-3-ен) 0,26

1 2 3 4

8. у-терпинен (1,4-пара-ментадиен; 4-метил-1 -(1 -метилэтил)-1,4-циклогексадиен) 0,33 0,37

9. Лимонен (1-метил-4-изопропенилциклогексен-1) - 0,35

10. Цимен (4-изопропилтолуол) 0,18 0,20

11. Гераниол I -1 -а-форма: а-(транс-3,7-диметил-2,7-октадиен-1-ол) II - р-форма: р-(транс-3,7-диметил-2,6-октадиен-1-ол) 0,13 0,39

12. Эвкалиптол(цинеол) (1,3,3-триметил-2-оксабицикло[2.2.2]октан) 0,18 0,13

13. Камфора (1,7,7-триметилбицикло[2.2.1 ]гептан-2-он) 1,49

14. Карвон (1-метил^1-изопропенил-6-циклогексен-2-он) - 0,07

Итого 100 100

Результаты исследования терпеноидов и ароматических соединений выявили содержание БАВ эфиромасличной фракции нативного сырья. Это позволяет прогнозировать антимикробное действие, в частности бактериостатический эффект и фунгистатическую активность изучаемых ТЛФ.

Компоненты эфиромасличной фракции в исследуемых ТЛФ могут использоваться в качестве специфических маркеров при анализе подлинности: для ТЛФ фенхеля обыкновенного - анетол, метилхавикол и фенхон; для ТЛФ купажа фенхель : кориандр (2:1) - анетол, метилхавикол, фенхон и линалоол. Результаты количественного определения специфических маркеров исследуемых ТЛФ представлены в таблице 7.

Таблица 7

Количественное содержание специфических маркеров подлинности ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного и ТЛФ из купажа _плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного (2:1)_

ТЛФ Количественное содержание специфических маркеров подлинности, %

анетол метилхавикол фенхон линалоол

плодов фенхеля обыкновенного 88,54±0,55 4,69±0,03 2,96±0,03 -

купажа плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного (2:1) 77,55±0,58 4,62±0,02 0,44±0,01 13,88±ОДО

Анализ состава ацилглщеринов жирных кислот. Изучаемые 'ГЛФ содержат комплекс насыщенных и ненасыщенных жирных кислот (таблица 8, 9). Содержание ненасыщенных жирных кислот от общего количества жирных кислот составляет в ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного 93,86%, в ТЛФ из купажа фенхеля обыкновенного и кориандра посевного 92,34%.

Таблица 8

Состав ацилглицеринов насыщенных жирных кислот твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные

Качественный состав Содержание жирных кислот, %

жирных кислот ТЛФ из плодов фенхеля ТЛФ из купажа плодов

обыкновенного фенхеля обыкновенного и

кориандра посевного (2:1)

Каприловая С« о 0,01 0,01

Каприновая С)0о 0,02 0,01

Лауриновая С12 0 0,12 0,11

Миристиновая См.-о 0,21 ОД 8

Пентадекановая С15 о 0,07 0,10

Пальмитиновая С|бо 4,95 6,25

Маргариновая Спо 0,05 0,05

Стеариновая С>8о 0,13 0,22

Арахиновая Сю-о 0,44 0,50

Бегеновая Сц о 0,14 0,13

Итого 6,14 7,66

Таблица 9

Состав ацилглицеринов ненасыщенных жирных кислот твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные

Качественный состав жирных Содержание жирных кислот, %

кислот ТЛФ из плодов ТЛФ из купажа плодов

фенхеля фенхеля обыкновенного и

обыкновенного кориандра посевного (2:1)

Пентадеценовая Ci5:] 0,03 0,03

Гексадеценовая Ciet 0,15 0,19

Пальмитолеиновая Cj« 19-цис 0,38 0,33

Гептадеценовая С п i 0,02 0,02

Элаидиновая Cisi 9-транс 0,95 1,06

Олеиновая Cie i9-цис 47,74 53,33

Петрозелиновая Cm6-цис 27,30 20,40

Ваиденовая Cig 111-транс 0,43 0,31

Язо-окгадекадиеновая Ci82i 0,09 0,07

9,11-транс

ЛинолеваяС|«2 <в-6 15,73 15,10

у-линоленовая Сиз ь>-6 0,09 0,11

а-линоленовая С|8зо-3 0,64 1,09

Гондоиновая Cjoi 0,24 0,21

Эруковая С221 0,07 0,09

Итого 93,86 92,34

Среди ненасыщенных жирных кислот в полученных твердых липофильных фракциях содержатся незаменимые жирные кислоты, а именно линолевая кислота и редко встречающиеся в природных жирах а- и у-линоленовые кислоты. Общее содержание полиненасыщенных жирных кислот составляет в ТЛФ купажа фенхеля обыкновенного и кориандра посевного - 16,30 % и в ТЛФ плодов фенхеля обыкновенного - 16,46%, основное количество приходится на линолевую кислоту.

Содержание петрозелиновой (6-октадеценовой) кислоты в ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного - 27,3%, в ТЛФ из купажа плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного - 20,4%. Петрозелиновая кислота -позиционный изомер олеиновой (9-октадеценовой) кислоты, отличается более высокой температурой плавления (30°С). Данная кислота является специфичной для жирнокислотного состава плодов растений семейства Сельдерейные и обеспечивает твердость полученных ТЛФ и характерные значения температуры плавления и затвердевания (загустевания).

В исследуемых ТЛФ содержатся эруковая кислота (C22:i); трансизомеры жирных кислот (элаидиновая Cis:i 9-транс, вакценовая Ci8 i 11-транс, изо-октадекадиеновая C¡8:2¡ 9,11-транс); жирные кислоты с длиной углеродной цепи менее Сц (каприловая С8:о, каприновая Сю;о, лауриновая Ci2;o). Известно отрицательное воздействие этих кислот на ряд физиологических функций организма, поэтому мы предлагаем нормировать их содержание. В ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного и в ТЛФ из купажа плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного содержание эруковой кислоты должно быть не более 0,2%, трансизомеров жирных кислот - не более 2%, жирных кислот с длиной углеродной цепи менее См - не более 0,2%.

Получение суппозиториев на основе ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного. Полученная из плодов фенхеля обыкновенного ТЛФ обладает оптимальными для суппозиторной основы структурно-механическими свойствами и температурой плавления 28-31°С. С нашей точки зрения ТЛФ плодов фенхеля обыкновенного может использоваться в качестве суппозиторной основы природного происхождения, которая содержит комплекс БАВ, характеризующийся противовоспалительным и антиоксидантным действием, антимикробной активностью.

Для приготовления суппозиториев средней массой 1,50±0,07 г из ТЛФ плодов фенхеля обыкновенного использовался метод выливания. Полученные суппозитории имели светло-зеленый цвет, однородную массу без вкраплений, одинаковую форму, при комнатной температуре были твердыми.

Для полученных суппозиториев согласно методике, указанной в общей статье ГФ XI «Суппозитории», определяли время полной деформации. Исследование показало, что время полной деформации суппозиториев на основе ТЛФ плодов фенхеля составляет 3 минуты.

Изучение микробиологической чистоты ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного и купажа фенхель : кориандр (2:1). Испытания ТЛФ из

плодов фенхеля обыкновенного и купажа фенхель : кориандр (2:1) на микробиологическую чистоту проведены в соответствии с требованиями ОФС 42-0067-07 «Микробиологическая чистота» ГФ XII. По классификации, представленной в ГФ XII, исследуемые объекты были отнесены к категории 3.2 - субстанции природного происхождения (растительного животного или минерального) для производства нестерильных лекарственных препаратов.

Микробиологические испытания показали отсутствие Escherichia Coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и энтеробактерий в 1 г и отсутствие Salmonella в 10 г каждого из исследованных образцов. Общее число аэробных бактерий и общее число грибов равно нулю.

При исследовании стабильности изучаемых ТЛФ в процессе хранения установлен первоначальный срок годности - 2 года.

Разработка спецификаций для контроля качества ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные. Спецификация является необходимой составляющей сертификации как липофильной фракции, извлекаемой из ЛРС, так и разрабатываемого в последующем препарата. Спецификации для контроля качества разрабатываются согласно указаниям Государственных стандартов качества лекарственных средств. На основании изученных показателей качества разработаны спецификации твердых липофильных фракций, полученных предложенным способом с использованием селективного экстрагента гексана из плодов фенхеля обыкновенного и купажа из плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного (2:1). Данные представлены в таблице 10.

Результаты проведенных исследований по разработке спецификаций для контроля качества положены в основу проектов Фармакопейных статей предприятия «Твердая липофильная фракция из плодов фенхеля обыкновенного (суппозиторная основа)» и «Твердая липофильная фракция из купажа плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного».

СПЕЦИФИКАЦИИ «Твердая липофильная фракция из плодов фенхеля обыкновенного (суппозиторная основа)» «Твердая липофильная фракция из купажа плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного »

Тесты Методы Нормы

ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного (суппозиторная основа) ТЛФ из купажа плодов фенхеля и кориандра (2:1)

1 2 3 4

Описание Органолептический анализ При температуре 20-25°С твердая масса зеленого цвета со специфическим запахом эфирного масла фенхеля. В расплавленном состоянии зеленая прозрачная жидкость без механических примесей. При температуре 20°С -25°С густая вязкая масса светло-зеленого цвета со слабым специфическим запахом смеси эфирных масел фенхеля и кориандра. В расплавленном состоянии - вязкая светло-зеленая жидкость без механических примесей.

Растворимость ГФ XII, ОФС 42-0049-07 «Растворимость» Практически нерастворимы в воде; легко растворимы в диэтиловом эфире и петролейном эфире, хлороформе; мало растворимы в спирте метиловом и 95% спирте этиловом.

Подлинность ПЖХ-МС Идентификация терпеноидов и ароматических . соединений с использованием библиотечных масс-спектров или по табличным данным индексов удерживания Ковача. Последовательность выхода пиков: цимен, эвкалиптол (цинеол), гамма-терпинен, фенхон, линалоол, метилхавикол, анисовый альдегид, анетол, гераниол. Специфические маркеры: анетол, фенхон, метилхавикол. Последовательность выхода пиков: пинен, фенхон, линалоол, камфора, метилхавикол, анисовый альдегид, анетол, гераниол. Специфические меркеры: анетол, линалоол, фенхон, метилхавикол

Плотность ГФ XII, ОФС 42-0037-07 «Плотность» 0,9050±0,0002 г/см5 0,9116±0,0010 г/см3

Показатель преломления ГФ XII, ОФС 42-0040-07 «Рефрактометрия» 1,4776 1,4721

Температура плавления ГФ XII, ОФС 42-0034-07 «Температура плавления» 2 8-31 "С

1 2 3 4

Температура затвердевания ГФ XII, ОФС 42-0035-07 «Температура затвердевания» (метод 1) 23-24°С

Температура загустеванця Образец наливают слоем высотой 3 см в пробирку, имеющую диаметр 15 мм, и выдерживают в холодильной бане. Через час пробирку вынимают и при наклонном ее положении испытывают текучесть образца. Опыт проводят до достижения температуры, при которой наклонение пробирки не вызывает изменения уровня образца. 22-23"С

Число омыления Тигриметрия: ГФХ1, вып. 1, стр.192 186-192 175-180

Кислотное число Титриметрия: ГФ ХТ, вып. 1, стр.191 Не более 5 Не более 5

Йодное число Титриметрия: ГФ XI, вып. 1,стр. 193 Не менее 78 Не менее 78

Содержание перекисей Титриметрия (ГОСТ Р 51487-99) Не более 1% Не более 1%

Содержание неомыляемых веществ Гравиметрия (ГОСТ 5479-64) Не менее 20% Не менее 20%

рН водного извлечения ГФХИ ОФС 42-0048-07 «Ионометрия» п. 3. Потенциометричекое определение рН 6,8-7,0 6,8-7,0

Остаточные органические растворители (гексан) ГЖХ ГФ XII, ОФС 42-0057-07 «Остаточные органические растворители» отсутствие

Количественное определение 1. каротиноиды 2. фосфолипиды 3. ацилглицерины петрозелиноеой кислоты 4. анетол 5. метилхавикол 6. фенхон 7. линалоол Спектро фотометрия Гравиметрия ГЖХ-ПИД ГЖХ-МС И ГЖХ-ПИД Не менее 5 мг% (в пересчете на {3-каротин) Не менее 0,8% Не менее 27% Не менее 88 % Не менее 4% Не менее 2% Не менее 6 мг% (в пересчете на р~ каротин) Не менее 1,0% Не менее 20% Не менее 77% Не менее 4% Не менее 0,4% Не менее 13%

Содержание I. эруковая кислота 2 .трансиюмеры жирных кислот 3. жирные кислоты с длиной углеродной цепи менее Си ГЖХ-ПИД Не более 0,2% Не более 2% Не более 0,2%

Микроби алогическая чистота ГФ XII, ОФС 42-0067-07 «Микробиологическая чистота» Общее число аэробных бактерий-не более 104 в 1 г. Общее число грибов - не более 102 в 1 г. Отсутствие Ecsherichia coh в 1 г. Отсутствие Salmonella в 10 г. Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1 г. Отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г. Энтеробактерий - не более 102 в 1 г.

Хранение В сухом защищенном от света месте при температуре 12-15°С

Срок годности ГФ XII, ОФС 42-0075-07 «Сроки годности лекарственных средств» 2 года 2 года

Выводы

1. Разработана оригинальная технология извлечения твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные с использованием селективного экстрагента - гексана. Выход ТЛФ по предложенной технологии составляет не менее 4% в пересчете на абсолютно сухое сырье.

2. Для оптимизации технологии предложено купажирование сырья и установлен оптимальный состав купажа из механической смеси плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного в соотношении 2:1. Это позволило получить липофильную фракцию, отвечающую по своим структурно-механическим свойствам и показателям качества требованиям, предъявляемым к мазевым основам.

3. Установлено содержание суммы каротиноидов в ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного не менее 5 мг% в пересчете на ß-каротин; в ТЛФ из купажа фенхель : кориандр (2:1) - не менее 6 мг% в пересчете на ß-каротин. Определенно содержание фосфолипидов в ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного не менее 0,8%; в ТЛФ из купажа фенхель : кориандр (2:1) -не менее 1%.

4. Определен качественный и количественный состав терпеноидов и ароматических соединений. Установлены специфические маркеры подлинности для ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного - анетол (88,54±0,55%), метилхавикол (4,69±0,03%), фенхон (2,96±0,03%); для ТЛФ из купажа фенхель : кориандр (2:1) - анетол (77,55±0,58%), линалоол (13,88±0,10%), метилхавикол (4,62±0,02%), фенхон (0,44±0,01%).

5. Определен качественный и количественный состав ацилглицеринов жирных кислот в ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного и из купажа

фенхеля обыкновенного и кориандра посевного (2:1). Содержание ненасыщенных жирных кислот от общего количества жирных кислот в объектах составляет не менее 92%. Общее содержание полиненасыщенных жирных кислот - не менее 16%, основное количество приходится на линолевую кислоту. Содержание петрозелиновой кислоты в ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного - не менее 27%, в ТЛФ из купажа плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного - не менее 20%. Содержание эруковой кислоты - не более 0,2%, трансизомеров жирных кислот - не более 2% и жирных кислот с длиной углеродной цепи менее С!4 - не более 0,2%.

6. Разработаны спецификации для контроля качества ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного и купажа фенхель : кориандр (2:1). Разработаны проекты Фармакопейных статей предприятий «Твердая липофильная фракция из плодов фенхеля обыкновенного (суппозиторная основа)» и «Твердая липофильная фракция из купажа плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного».

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Лядова Е.В. Получение и стандартизация суппозиторной основы из плодов растений семейства Сельдерейные (фенхеля обыкновенного и кориандра посевного).//Тезисы итоговой студенческой конференции с международным участием «Татьянин день», посвященной 250-летию Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова.- М.: ФГОУ «ВУНМЦ Росздрава»,2007,-С. 14.

2. Лядова Е.В. Анализ показателей состава и качества твердой липофильной фракции, полученной из плодов кориандра посевного.//Материалы научно-практич. конф. «Интеграция образования, науки и производства в фармации», посвященной 70-летию Ташкентского фармацевтического института. - Ташкент,2007.-С.149-151.

3. Фетисова А.Н., Лядова Е.В., Попков В.А., Бардаков А.И. Изыскание средств и способов получения конституентов мазевых и суппозиторных основ природного происхождения.//Научные труды VIII международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации» .-М.,2007.-С.644-645.

4. Лядова Е.В., Фетисова А.Н., Попков В.А., Матюшина Г.П., Бардаков А.И. Разработка спецификаций для контроля качества твердых липофильных фракций из плодов растений семейства СельдерейныеУ/Сборник материалов конгресса (тезисы докладов) XV Российского национального конгресса «Человек и лекарство».-М.,2008.-С.548-549.

5. Лядова Е.В. Аспекты получения фармакологически активных компонентов из лекарственного растительного сырья для создания мазевых и суппозиторных основ.//Тезисы V Конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медииины».-М.,2008.-С.256.

6. Fetisova A.N., Lyadova E.V. Comparative analysis of the lipophilic fractions extracted from spingel and coriander fruits as possible sources for the soft dosage

forms production. //Сб. Матералы научно-практической конференции "Актуальные вопросы образования, науки и производства в фармации".-Ташкент, 2008.-С. 239-240.

7. Лядова Е.В., Фетисова А.Н. Исследование состава неомыляемых биологически активных веществ твердых липофильных фракций из плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного.// Сборник материалов конгресса (тезисы докладов) XVI Российского национального конгресса «Человек и лекарство».-М.,2009.-С.694.

8. Лядова Е.В., Фетисова А.Н. Выделение и стандартизация твердой липофильной фракции из плодов фенхеля обыкновенного //Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. Под ред. М.В.Гаврилина. - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2009г. -С.77-78

9. Лядова Е.В. Исследование состава твердой липофильной фракции из купажа плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного.// Научные труды X Международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации».-М.,2009.-С. 1068-1069.

10. Лядова Е.В., Фетисова А.Н. Анализ качественного состава терпеноидов и ароматических соединений твердой липофильной фракции из купажа фенхеля обыкновенного и кориандра посевного.//Сборник материалов конгресса (тезисы докладов) XVII Российского национального конгресса «Человек и лекарство».-М.,2010. - С.669-670.

11. Фетисова А.Н., Лядова Е.В. Анализ твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные.//Химическая технология. - 2010. -т. 11.-№6.-С.368-371.

12. Фетисова А.Н., Попков В.А., Лядова Е.В. Описание изобретения к патенту RU 2318867 «Способ получения суппозиторной основы».//Инновационные разработки ученых и специалистов Московской медицинской академии имени И.М. Сеченова (Каталог патентов). - М.: Издательский дом «Русский врач», 2008.-С.114-115.

13. Фетисова А.Н., Попков В.А., Лядова Е.В. Способ получения суппозиторной основы. Патент 2318867 РФ, МПК С 11 В 1/10. // «Изобретения. Полезные модели». Бюллетень Федерального Государственного Учреждения «Федеральный институт промышленной собственности Федеральной службы по интеллектуальной собственности, патентам и товарным знакам». - М., 2008. - №7 (III ч.). - С.704.

Подписано в печать:

17.12.2010

Заказ № 4725 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

I

Актуальность темы

Спектр использования лекарственных растений в медицине существенно возрос в последние годы. Это, в частности, объясняется тем, что резко увеличилось количество осложнений от применения различных синтетических лекарственных средств. На современном фармацевтическом рынке также отмечается тенденция увеличения ассортимента лекарственных препаратов природного происхождения, содержащих в своем составе липофильные фракции из растительного сырья. Широкий спектр терапевтической активности данных лекарственных средств обусловлен разнообразием состава БАВ, входящих в состав липофильных фракций.

Получение лекарственных препаратов из растительного сырья требует объективной оценки их качества, а также унификации методов стандартизации, поскольку в липофильных фракциях одновременно присутствует БАВ, различающихся как по физико-химическим свойствам, так и по спектру фармакологической активности.

Плоды растений семейства Сельдерейные содержат большое количество жирного масла, включающего комплекс БАВ, который обеспечивает не только его фармакологическую активность, но и обусловливает возможность получения ТЛФ, которая может быть использована в качестве суппозиторной и\или мазевой основы природного происхождения.

Суппозитории и мази на современном фармацевтическом рынке являются востребованными лекарственными формами. Они, как правило, состоят из одного или нескольких лекарственных и вспомогательных веществ, составляющих рационально подобранную основу. Суппозиторная и мазевая основы не являются просто наполнителем-носителем лекарственных веществ, а выполняют активную функцию обеспечения необходимого фармакологического эффекта. Рациональным подбором основ удается сократить традиционные лечебные дозы лекарственных веществ часто более чем в два раза, обеспечивая необходимый терапевтический эффект.

Современное фармацевтическое производство требует внедрения ресурсосберегающих технологий в производство лекарственных препаратов. Растения семейства Сельдерейные являются широко культивируемыми в умеренном поясе России, что позволяет снизить себестоимость конечного продукта. Поэтому с учетом современных тенденций развития фармацевтического производства, актуальным направлением представляется разработка рациональной технологии получения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные и исследование их химического состава с целью получения мазевых и/или суппозиторных основ природного происхождения из отечественного сырья.

Цель и задачи исследования

Целью исследования является разработка технологии получения твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные и их стандартизация как основ для производства мягких лекарственных форм.

Достижение поставленной цели осуществлялось путем решения следующих основных задач:

1. Разработать и оптимизировать технологию извлечения твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные за счет выбора селективного экстрагента и купажирования сырья.

2. Изучить химический состав и определить критерии подлинности и показатели качества твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные и купажей на их основе.

3. Оценить соответствие показателей качества твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные и купажей на их основе требованиям Государственных стандартов качества лекарственных средств, предъявляемым к основам для мягких лекарственных форм.

4. Разработать спецификации для контроля качества полученных твердых липофильных фракций как основ для производства мягких лекарственных форм.

5. Разработать проекты Фармакопейных статей предприятия «Твердая липофильная фракция из плодов фенхеля обыкновенного (суппозиторная основа)» и «Твердая липофильная фракция из купажа плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного».

Научная новизна результатов исследования

Разработана рациональная технология получения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные с использованием циркуляционного экстрагирования и селективного экстрагента — гексана. Технология позволяет получать фракции с оптимальными для производства мягких лекарственных форм структурно-механическими свойствами.

Установлено, что в извлекаемых по предложенной технологии ТЛФ содержатся БАВ с различной фармакологической активностью, а именно триацилглицерины, каротиноиды, фосфолипиды, БАВ эфиромасличной фракции.

Впервые предложено купажирование сырья для получения твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные. Разработаны оптимальные составы купажей - плоды фенхеля обыкновенного и плоды кориандра посевного в соотношении 2:1.

Для твердых липофильных фракций из плодов фенхеля обыкновенного, кориандра посевного и купажей на Pix основе определенны в соответствии с требованиями ГСКЛС показатели качества.

Впервые определен качественный и количественный состав ацилглицеринов жирных кислот, терпеноидов и ароматических соединений ТЛФ, извлекаемых из плодов растений семейства Сельдерейные по предложенной технологии.

Установлено, что преобладающими жирными кислотами в составе ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного и купажа плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного в соотношении 2:1 являются ненасыщенные олеиновая, петрозелиновая и линолевая кислоты.

Впервые предложены нормы содержания эруковой кислоты, трансизомеров жирных кислот, жирных кислот с длиной углеродной цепи менее С14 в твердых липофильных фракциях растительного сырья, используемых для производства мягких лекарственных форм.

Преобладающими компонентами эфиромасличной фракции ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного являются анетол, метилхавикол, фенхон и анисовый альдегид; ТЛФ из купажей плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного — анетол, линалоол, камфора, метилхавикол, фенхон. Установлено, что анетол, метилхавикол, фенхон - специфические маркеры подлинности для ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного; анетол, линалоол, метилхавикол, фенхон - специфические маркеры подлинности для ТЛФ из купажей плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного.

В результате исследования показателей качества изученных объектов рекомендовано использовать ТЛФ из купажей плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного как мазевые основы или компоненты мазевых основ; ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного - как суппозиторную основу.

Новизна исследований подтверждена патентом РФ № 2318867 «Способ получения суппозиторной основы», 2008 г.

Практическая значимость работы

Разработаны спецификации для контроля качества твердых липофильных фракций, полученных предложенным способом из плодов фенхеля обыкновенного и купажа фенхель : кориандр (2:1).

На основании проведенных исследований разработаны проекты Фармакопейных статей предприятия:

• «Твердая липофильная фракция из плодов фенхеля обыкновенного (суппозиторная основа)»;

• «Твердая липофильная фракция из купажа плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного».

Разработанная автором методика оптимизации технологии извлечения твердых лекарственных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные внедрена в учебный процесс на химическом факультете МГУ им. М.В.Ломоносова и используется при изучении технологии получения лекарственных препаратов из лекарственного растительного сырья. Методика нормирования содержания эруковой кислоты, трансизомеров жирных кислот, жирных кислот с длиной углеродной цепи менее Си в ТЛФ растительного сырья, используемых для производства мягких лекарственных форм, внедрена в ГОУ ВПО РУДН (медицинский факультет, кафедра фармацевтической и токсикологической химии) при изучении модулей, включающих принципы контроля качества и стандартизации лекарственных средств растительного происхождения.

По научному проекту диссертационной работы ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова Росздрава и Независимой лабораторией ИНВИТРО присужден грант (2007 г).

Апробация работы

Материалы исследования были представлены для обсуждения на следующих конференциях, конгрессах: итоговой студенческой конференции с международным участием «Татьянин день», посвященной 250-летию Московской Медицинской Академии им. И.М.Сеченова (Москва, 2007); научно-практической конференции «Интеграция образования, науки и производства в фармации», посвященной 70-летию Ташкентского фармацевтического института (Ташкент, 2007); VIII и X Международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации» (Москва, 2007; Москва, 2009); XV, XVI и XVII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2008; Москва, 2009; Москва, 2010); V Конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 2008); научно-практической конференции "Актуальные вопросы образования, науки и производства в фармации" (Ташкент, 2008); региональной конференции по фармации и фармакологии ПГФА «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2009).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 13 работ, в том числе статья в журнале, рекомендованном ВАК, и патент на изобретение.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных исследований Первого МГМУ им. И.М. Сеченова и является составной частью комплексной программы НИР кафедры общей химии «Новые знания и подходы в оценке качества и сертификации биологически активных соединений синтетического и природного происхождения, лекарственных препаратов, изделий медицинской техники (технологические аспекты)» (номер Государственной регистрации 01.200.118.796).

Общие выводы

1. Разработана оригинальная технология извлечения твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные с использованием селективного экстрагента — гексана. Выход ТЛФ по предложенной технологии составляет не менее 4% в пересчете на абсолютно сухое сырье.

2. Для оптимизации технологии предложено купажирование сырья и установлен оптимальный состав купажа из механической смеси плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного в соотношении 2:1. Это позволило получить липофильную фракцию, отвечающую по своим структурно-механическим свойствам и показателям качества требованиям, предъявляемым к мазевым основам.

3. Установлено содержание суммы каротиноидов в ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного не менее 5 мг% в пересчете на р-каротин; в ТЛФ из купажа фенхель : кориандр (2:1) — не менее 6 мг% в пересчете на |3-каротин. Определенно содержание фосфолипидов в ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного не менее 0,8%; в ТЛФ из купажа фенхель : кориандр (2:1) — не менее 1%.

4. Определен качественный и количественный состав терпеноидов и ароматических соединений. Установлены специфические маркеры подлинности для ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного — анетол (88,54±0,55%), метилхавикол (4,69±0,03%), фенхон (2,96±0,03%); для ТЛФ из купажа фенхель : кориандр (2:1) - анетол (77,55±0,58%), линалоол (13,88±0,10%), метилхавикол (4,62±0,02%), фенхон (0,44±0,01%).

5. Определен качественный и количественный состав ацилглицеринов жирных кислот в ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного и из купажа фенхеля обыкновенного и кориандра посевного (2:1). Содержание ненасыщенных жирных кислот от общего количества жирных кислот в объектах составляет не менее 92%. Общее содержание полиненасыщенных жирных кислот - не менее 16%, основное количество приходится на линолевую кислоту. Содержание петрозелиновой кислоты в ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного - не менее 27%, в ТЛФ из купажа плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного - не менее 20%. Содержание эруковой кислоты - не более 0,2%, трансизомеров жирных кислот - не более 2% и жирных кислот с длиной углеродной цепи менее Си - не более 0,2%.

6. Разработаны спецификации для контроля качества ТЛФ из плодов фенхеля обыкновенного и купажа фенхель : кориандр (2:1). Разработаны проекты Фармакопейных статей предприятий «Твердая липофильная фракция из плодов фенхеля обыкновенного (суппозиторная основа)» и «Твердая липофильная фракция из купажа плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного».

116