Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Экспериментально-теоретическое обоснование создания лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и ф

На правах рукописи

Фетисова Анжелика Николаевна

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ СОЗДАНИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА ОСНОВЕ ЛИПОФИЛЬНЫХ ФРАКЦИЙ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ, СОЧЕТАЮЩИХ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЕ И АНТИОКСИДАНТНОЕ ДЕЙСТВИЕ С БАКТЕРИО- И ФУНГИСТАТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

2 6 НОЯ 2009

Москва - 2009

003484742

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Московская медицинская академия имени И.М. Сеченова Росздрава

Научный консультант:

доктор фармацевтических наук, доктор педагогических наук,

действительный член РАО, профессор Попков Владимир Андреевич

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук,

профессор Белобородое Владимир Леонидович

доктор фармацевтических наук,

профессор Берляид Александр Семенович

доктор фармацевтических наук,

профессор Даргаева Тамара Дарижаповиа

Ведущая организация: Федеральное Государственное Учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения Росздравнадеора» (ФГУ НЦ ЭСМП).

Диссертз _ сковская медицинская

академия имени И.М. Сеченова Росздрава по адресу: 119019, Москва, Никитский бульвар, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО ММА им. И М. Сеченова Росздрава по адресу: 117998, Москва, Нахимовский проспект, 49.

Защита

часов на заседании

Автореферат разослан

Ученый секретарь

Диссертационного совета Д.208.040.09, доктор фармацевтических наук, профессор

Наталья Петровна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Критический анализ медико-социальной проблемы лекарственной полипрогмазии указывает на целесообразность углубления теоретических и эмпирических знаний в области разработки лекарственных средств природного происхождения, обладающих сочетанным фармакологическим действием за счет содержания комплекса биологически активных веществ (БАВ). В контексте проблемы актуальным представляется проведение изысканий по созданию лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью.

Перспективным технологическим способом получения липофильных фракций природного происхождения, обладающих указанным комбинированным фармакологическим действием, является экстракция сверхкритическими флюидами (СКФ), в частности, сверхкритическим диоксидом углерода. Разработки по экстракции липофильных фракций из растительного сырья диоксидом углерода в сверхкритических условиях имеют отечественный приоритет и находят широкое применение в пищевой отрасли промышленности с 60-х гг. XX века. С 90-х гг. XX века по настоящее время отмечается возрастание практического интереса фармацевтической отрасли к созданию лечебно-профилактических средств на основе липофильных фракций, извлекаемых из растительного сырья сверхкритическим диоксидом углерода. Данные изыскания имеют локальный характер и в целом направлены на разработку биологически активных добавок (БАД).

Системный анализ научных информационных источников показывает, что в контексте решения проблемы лекарственной полипрогмазии и ятрогенной патологии актуальным направлением также является изыскание средств и способов получения из отечественных видов лекарственного растительного сырья (ЛРС) и пищевых растительных источников фармакологически активных конституентов для производства мягких лекарственных форм (суппозиториев и мазей).

Однако современная тенденция роста производства, распространения, использования низкокачественных и

фальсифицированных лекарственных препаратов и БАД природного происхождения, в частности изготовленных на основе масличного растительного сырья, определяет несовершенство существующих подходов к процессу их разработки, стандартизации и валидации производства. Увеличение доли фальсифицированных лекарственных средств представляет значимую медико-социальную проблему, связанную с угрозой здоровью населения страны и оборачивающуюся многомиллионными убытками для государственной казны и частных производителей. В соответствии с разработанным ВОЗ «Планом действий по борьбе с фальсифицированными лекарственными средствами» определение показателей состава и качества (ПСК) лекарственных средств

является одной из основных составляющих процесса выявления фальсифицированной и низкокачественной продукции среди препаратов и БАД, изготовленных из масличного ЛРС.

Вышеуказанная проблематика обусловливает необходимость проведения комплексных изысканий, базирующихся на постулатах фармацевтической и медицинской науки и направленных на формирование единообразных подходов к разработке, стандартизации и валидации производства лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, обладающих сочетанным фармакологическим действием. Направление исследований предусматривает сопоставительный априорный и апостериорный анализ особенностей производства, характеристик показателей состава и качества липофильных фракций растительного сырья, извлекаемых с использованием различных по химической природе экстрагентов; формирование экспериментально-теоретической базы и синтез аутентичной системы, позволяющей создавать качественные лечебно-профилактические средства на основе липофильных фракций растительного сырья, обладающих сочетанной фармакологической активностью.

Целью исследования является создание аутентичной системы разработки и спецификации лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью.

Сформулированная цель исследования обусловила постановку следующих задач исследования:

1. Провести сопоставительный анализ показателей состава и качества липофильных фракций, полученных из различных видов растительного сырья экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода и неполярными органическими растворителями, и обосновать критерии спецификаций для контроля качества С02-экстрактов, как новых лекарственных средств растительного происхождения, содержащих комплекс биологически активных веществ, обладающих сочетанной фармакологической активностью.

2. Разработать способ получения фармакологически активных конституентов растительного происхождения для производства мягких лекарственных форм из отечественного сырья.

3. Обосновать концептуальные подходы обнаружения недоброкачественной продукции и потенциальных фальсификаций среди препаратов и биологически активных добавок, изготовленных из масличного растительного сырья.

4. Разработать эмпирическую расчетную методику скрининговой оценки доброкачественности объектов растительного происхождения, характеризующихся неспецифичным составом биологически активных веществ, в частности ацилглицеринов жирных кислот.

5. На основании результатов теоретических и эмпирических изысканий сформировать аутентичную систему разработки и спецификации лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных исследований ММА им. И.М. Сеченова и является составной частью комплексной программы НИР кафедры общей химии «Новые знания и подходы в оценке качества и сертификации биологически активных соединений синтетического и природного происхождения, лекарственных препаратов, изделий медицинской техники (технологические аспекты)» (номер Государственной регистрации 01.200.118.796).

Научная новизна. Впервые проведено теоретическое обобщение и обоснование априорной информации, касающейся процесса получения липофильных фракций из J1PC экстракцией жидким оксидом углерода (IV) и перспектив использования С02-экстрактов JIPC для производства лечебно-профилактических лекарственных средств, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью. Апостериорные сопоставительные экспериментальные исследования липофильных фракций, полученных из 7 родов растительного сырья экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода, позволили, с учетом требований Государственных стандартов качества лекарственных средств (ГСКЛС), разработать аутентичную систему спецификаций для контроля качества С02-экстрактов, как новых лекарственных средств природного происхождения. Впервые доказана бактериостатическая и фунгистатическая активность СОг-экстрактов семян винограда культурного (Vitis vinifera L.), жома плодов смородины черной (Ribes nigrum L.), а также СОг-экетракта шрота семян тыквы в отношении Staphylococcus aureus и Candida albicans. Также впервые выявлена фунгистатическая активность С02-экстрактов плодов кориандра посевного (Coriandrum sativum L.), укропа пахучего (Anethum graveolens L.) и травы полыни горькой (Artemisia absinthium L.) в отношении наиболее распространенных поверхностных дерматофитов, а именно Microsporum canis и Trichophyton rubrum.

Разработан способ получения конституентов растительного происхождения для производства мягких лекарственных форм из отечественных видов растительного сырья. Способ основан на использовании J1PC, произрастающего на территории Российской Федерации, и экстрагента (гексана), широко применяемого в фармацевтическом и пищевом производстве. Оригинальная технологическая схема позволяет упростить процесс извлечения твердой липофильной фракции (ТЛФ) из плодов растений семейства

Сельдерейные, увеличить в ней содержание сбалансированного комплекса БАВ, обладающих антиоксидантным и противовоспалительным действием (каротиноидов, токоферолов, фосфолипидов), обеспечивает получение стабильного целевого продукта. Предложенный способ предусматривает рациональное применение отечественных сырьевых запасов лекарственных растений и позволяет провести замены импортных конституентов для производства мягких лекарственных форм.

Впервые обоснованы принципиальные подходы и разработаны критерии для обнаружения недоброкачественной продукции и потенциальных фальсификаций среди препаратов и биологически активных добавок, изготовленных из масличного растительного сырья, характеризующегося неспецифичным составом биологически активных веществ. Для скрининговой оценки потенциальных фальсификаций и выявления недоброкачественной продукции среди указанной группы лекарственных средств разработана методика расчета состава жирных кислот и глицеринов на основании значений эмпирических показателей состава и качества.

Экспериментально-теоретические исследования формируют основу аутентичной системы создания и стандартизации лекарственных средств растительного происхождения на основе липофильных фракций, обладающих сочетанной фармакологической активностью. Аутентичная система показателей состава и качества включает спецификации и общедоступные сертифицированные методы и позволяет достоверно обнаруживать потенциальные фальсификации или несоответствия требованиям, предъявляемым Государственными стандартами качества к оценке и валидации технологии производства лекарственных средств природного происхождения.

Степень новизны проведенных исследований подтверждена шестью патентами РФ.

Практическая значимость и внедрение результатов исследования.

В результате проведенных изысканий сформирована экспериментально-теоретическая база для создания лечебно-профилактических лекарственных средств природного происхождения, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгисгатической активностью.

Разработанная аутентичная система спецификаций для контроля качества лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью, позволяет объективно установить подлинность изученных объектов и обнаружить потенциальные фальсификации или несоответствия требованиям, предъявляемым Государственными стандартами качества к лекарственным средствам, получаемым из растительного сырья. Предварительные результаты доклинических испытаний являются основой

для достоверного выявления, оценки и доказательства прогнозируемой терапевтической активности в ходе отдаленных клинических исследований лекарственных препаратов на основе ССЬ-экстрактов растительного сырья.

Результаты исследования положены в основу инновационной разработки и инновационного бизнес-предложения: «Лекарственные средства на основе липофильных фракций лекарственного растительного сырья для профилактики и лечения воспалительных заболеваний органов мочеполовой системы: технология создания и перспективы применения». Данный инновационный проект был представлен в финале конкурсной программы инновационных проектов «Фабрика инноваций: прорыв в будущее», проводившейся в рамках V Московского Международного Салона инноваций и инвестиций (15-18 февраля 2005 г.), и награжден Дипломом Федеральной Службы по интеллектуальной собственности, патентам и товарным знакам.

Разработанная автором методика расчета состава жирных кислот и глицеринов объектов природного происхождения внедрена в учебный процесс на химическом факультете МГУ им. М.В. Ломоносова и используется при изучении разделов, связанных с анализом подлинности и доброкачественности объектов липофильной природы. Указанная методика также внедрена в ГОУ ВПО РУДН (медицинский факультет, кафедра общей фармацевтической и биомедицинской технологии) при изучении модулей, включающих принципы валидации технологии производства и качества препаратов, изготовленных на основе липофильных фракций растений.

По результатам исследования в рамках реализации «Программы формирования инновационного образовательного пространства ММА им. И.М. Сеченова» (приоритетный национальный проект «Образование») автором выполнен проект «Разработка учебно-методического пособия курса дистанционного обучения «Технологии получения лекарственных средств на' основе липофильных фракций сырья природного происхождения» (тема № 138, приказ № Р-98 от 27 марта 2007 г.) и создан одноименный учебник, являющийся основой учебно-методического обеспечения курса дистанционного обучения для повышения квалификации и переподготовки специалистов, работающих на фармацевтическом производстве и в аптечной сети, имеющей рецептурно-производственные отделы. Учебник «Технологии получения лекарственных средств на основе липофильных фракций сырья природного происхождения (курс дистанционного обучения)» рекомендован Учебно-методическим объединением по медицинскому и фармацевтическому образованию вузов России для системы послевузовского профессионального образования провизоров (УМО-51-Д 12 февраля 2008 г.). Курс дистанционного обучения «Технологии получения лекарственных средств на основе липофильных фракций сырья природного происхождения» внедрен в ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова Росздрава, факультет послевузовского профессионального

образования провизоров, кафедра фармации с курсом социальной фармации и в ГОУ Институт повышения квалификации Федерального медико-биологического агентства (ИПК ФМБА) России, кафедра фармации.

Апробация работы. Материалы исследования были представлены для обсуждения на следующих конференциях, съездах, конгрессах: ID, IX-XI, XV и XVI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1996; Москва, 2002-2004; Москва, 2008; Москва 2009); 51-ой региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров ПГФА (Пятигорск, 1996); научно-практической конференции, посвященной 50-тилетию Ботанического сада ММА им. И.М. Сеченова (Москва, 1996); юбилейной конференции «Актуальные вопросы фитотерапии» РОО «Фитотерапевтическое общество» (Москва, 2002); I и II научно-практических конференциях Научного центра акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН «Традиционные методы лечения в акушерско-гинекологической практике» (Москва, 2001; Москва, 2003); 59-й региональной конференции по фармации и фармакологии ПГФА «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2004); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Восстановительная медицина и традиционные методы профилактики и лечения в акушерстве, гинекологии и перинатологии» (Волгоград, 2004); III-IX Международных съездах «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» (Санкт-Петербург-Пушкин, 1999; Великий Новгород, 2000; Санкт-Петербург, 2001; Санкт-Петербург, 2002; Санкт-Петербург-Пушкин, 2003; Миккели (Финляндия), 2004; Санкт-Петербург, 2005); Республиканской научно-практической конференции «Новые достижения в получении, изучении и применении лекарственных средств на основе природного сырья», посвященной 100-летию со дня рождения профессора P.JI. Хазанович (Ташкент, 2006); VIII Международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации» (Москва, 2007); научно-практической конференции «Актуальные вопросы образования, науки и производства в фармации» (Ташкент, 2008).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 60 работ, в том числе монография, учебник для системы послевузовского профессионального образования провизоров, созданный в рамках программы формирования инновационного образовательного пространства ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова Росздрава (Приоритетный национальный проект «Образование»), 7 статей в журналах, рекомендованных ВАК РФ для публикации результатов диссертаций на соискание ученой степени доктора наук, 6 патентов на изобретения.

Основные положения, выносимые на защиту.

• Результаты исследования липофильных фракций растительного сырья, полученных экстракцией жидким оксидом углерода (IV). Разработка аутентичной системы спецификаций для контроля качества лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью.

• Технологические основы получения фармакологически активных конституентов растительного происхождения для производства мягких лекарственных форм.

• Концепция обнаружения потенциальных фальсификаций и недоброкачественной продукции среди лекарственных средств, изготовленных из масличного растительного сырья.

• Методика эмпирического расчета состава жирных кислот и глицеринов объектов растительного происхождения и руководство по ее использованию для скрининговой оценки доброкачественности растительного сырья, лекарственных средств, БАД липофильной природы, имеющих неспецифичный состав БАВ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 3 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (глава I), 5 глав собственных исследований, выводов, глоссария, библиографического указателя и приложений. Работа иллюстрирована таблиця«'/ и 3£ рисунйкм^ .Библиографический указатель включает ¿£9 источников, в том числе |о;Гна иностранных языках.'

В обзоре литературы представлен критический анализ традиционных способов и современных технологий получения липофильных фракций из сырья природного происхождения; рассмотрены теоретические основы извлечения БАВ из растительного сырья сжиженными и сжатыми газами; изложены современные подходы к процессу разработки, стандартизации и валидации производства лекарственных средств растительного происхождения. Во второй главе обоснован выбор объектов исследования, представлена их характеристика, описание технологии получения липофильных фракций из растительного сырья экстракцией жидким оксидом углерода (IV) в сверхкритических

условиях. Представлен анализ технологических особенностей извлечения липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные неполярными органическими растворителями по предложенному нами способу (А.Н. Фетисова с соавт., патент РФ 2147890, 2000). Вторая глава также содержит детальное описание методик анализа, использованных в настоящем исследовании, принципов статистической обработки и интерпретации полученных результатов. Третья глава включает исследование липофильных фракций растительного сырья, полученных экстракцией жидким оксидом углерода (IV); разработку аутентичной системы спецификаций для контроля их качества и результаты экспериментального доклинического изучения. Четвертая глава посвящена изысканию средств и способов получения конституентов растительного происхождения для производства мягких лекарственных форм. В пятой главе обоснованы принципиальные подходы к обнаружению потенциальных фальсификаций и недоброкачественной продукции среди лекарственных средств, изготовленных из масличного растительного сырья; изложена методика расчета состава жирных кислот и глицеринов и руководство по ее использованию в оценке качества лекарственных средств растительного происхождения, имеющих неспецифичный состав БАВ. Шестая глава включает патогенетическое обоснование целесообразности применения лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, обладающих сочетанной фармакологической активностью, в комплексе лечебно-профилактических мероприятий при социально значимых заболеваниях человека.

Содержание работы.

Объекты и методы исследования.

В соответствии с целью исследования предварительные этапы разработки лекарственных средств на основе липофильных фракций ЛРС, обладающих сочетанным противовоспалительным и антиоксидантным действием, бактерио- и фунгистатической активностью, включали скрининг источников липофильных фракций, а также выбор экстрагента и, соответственно, способа получения липофильной фракции из ЛРС.

Скрининг видов ЛРС (источников липофильных фракций) проводился по содержанию БАВ, которые должны сочетать противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью. Для получения препарата с низкой себестоимостью необходимо наличие достаточной сырьевой базы, т.е. в качестве источников липофильных фракций целесообразно использовать виды ЛРС, имеющие либо обширный ареал произрастания, либо широко культивируемые или являющиеся отходами пищевых производств.

Экспериментально-теоретическое обоснование единообразных подходов к процессу создания лекарственных средств на основе липофильных фракций ЛРС, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью,

проведено в настоящей работе на примере видов растительного сырья, относящегося к разным семействам и морфологическим группам. Объектами для создания аутентичной системы разработки и спецификации лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью, явились официнальные виды JIPC и пищевые растительные источники, являющиеся отходами соответствующих производств: плоды кориандра посевного (Coriandrum sativum L.), укропа пахучего (Anethum graveolens L.), облепихи крушиновидной (Hippophae rhamnoides L.), трава полыни горькой (Artemisia absinthium L.), семена винограда культурного (Vitis vinifera L.), жом плодов смородины черной (Ribes nigrum L.), шрот семян тыквы обыкновенной (Cucurbita pepo L.), тыквы большой (Cucurbita maxima Duch.), тыквы мускатной (Cucurbita moschata (Duch.) Poir.) (аптечная смесь).

С02-экстракты из указанных видов растительного сырья были получены на экспериментально-промышленном оборудовании экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода с учетом индивидуальных параметров процесса для конкретной морфологической группы и вида сырья и в соответствии с ТУ 9169-001-51032622-99 и ТУ 9169-001-96932037-99 «Экстракты из растительного сырья». Неполярными органическими растворителями липофильные фракции извлекались с использованием способа ступенчатого орошения растворителем противоточно перемещающегося обрабатываемого материала. Липофильные фракции и С02-экстракты получали из соответствующего сырья одной серии.

БАД масло семян тыквы (ТУ 9141-002-334-44-04-76-97), тыквин (ТУ 9141-001-34683967-2000), витадиойл (ТУ 9141-001-104073978-00) , масло зародышей пшеницы (ТУ 9141-013-180622042-96), препарат тыквеол (ФС 42-3651-98) были выбраны в качестве модельных образцов для разработки критериев и обоснования принципов выявления недоброкачественной продукции и потенциальных фальсификаций среди препаратов и БАД, изготовленных из масличного растительного сырья, жирное масло которого имеет неспецифичный состав ацилглицеринов жирных кислот. Исследование проведено на пяти сериях каждого из объектов.

Так как спецификация является необходимой составляющей сертификации как липофильной фракции, извлекаемой из ЛРС или пищевых растительных источников, так и разрабатываемого в последующем препарата, принцип соответствия ПСК лекарственных средств на основе липофильных фракций ЛРС требованиям ГСКЛС был положен нами в основу создания аутентичной системы спецификаций для контроля качества получаемых липофильных фракций.

В работе использовались следующие физико-химические методы анализа: газожидкостная хроматография (ГЖХ), высокоэффективная

жидкостная хроматография (ВЭЖХ), тонкослойная хроматография (ТСХ), потенциометрия, спектрофотометрия, гравиметрия.

Состав триацилглицеринов (ТАГ) жирных кислот липофильных фракций изучали с использованием метода ГЖХ. Исследование проводили на приборе «Биохром-1» с пламенно-ионизационным детектором. Для анализа применялись стеклянная или кварцевая капиллярные колонки, имеющие длину 54 м или 25 м и внутренний диаметр 0,27 мм или 0,32 мм, соответственно. Неподвижная фаза - OV-101 или SE-30 (полидиметилсилоксан). Условия хроматографирования: газ-носитель -гелий, давление гелия на входе в колонку - 0,15 МПа, скорость потока — 2,4 мл/мин, коэффициент деления потока - 1:20 или 1:100; расход воздуха - 300 мл/мин, водорода - 20 мл/мин; температура испарителя - 360°С, детектора — 310°С. Температура термостата колонки программировалась от 160°С до 260°С, время экспозиции при начальной температуре - 0 мин, при конечной температуре - 5 мин, градиент - 4 градуса/мин, диапазон чувствительности усилителя - 4,8-10"10А, объем вводимой пробы —1,5 мкл. Для идентификации метиловых эфиров жирных кислот изучаемых объектов использовался масс-селективный детектор. Результаты анализа обрабатывались с помощью компьютерных баз данных Wiley и Wist 98.

Методика, позволяющая установить подлинность липофильных фракций, полученных из жома плодов черной смородины, включает идентификацию у-линоленовой кислоты. Методика определения у-линоленовой кислоты, специфичной для растений семейства Saxifragaceae, основанная на ГЖХ, была модифицирована к условиям производства. В анализе использовался газожидкостной хроматограф марки JIXM-8M, укомплектованный пламенно-ионизационным детектором; металлическая колонка длиной 2 м с внутренним диаметром 3 мм, заполненная Chrommosorb W (1% Н3Р04, 18% НДЭГС). Температура испарителя - 250°С, температура детектора - 260°С, температура термостата колонки - 200°С. Скорость газа-носителя (азот) — 30 мл/мин, водорода - 30 мл/мин, воздуха - 300 мл/мин, объем вводимой пробы - 1,5 мкл.

Состав основных групп неомыляемых БАВ - каротиноидов, токоферолов, фосфолипидов, определен с применением известных методик спектрофотометрического, гравиметрического анализа и ТСХ.

Для идентификации и количественного определения добавок синтетических аналогов витаминов (а-токоферола ацетата и ретинола пальмитата) методом ВЭЖХ использовалась система фирмы «Gilson» (Франция): однопоршневой насос (модель 302) с манометрическим модулем (модель 802 С); инжектор для ввода проб («Rheodyne», США); ультрафиолетовый детектор с переменной длиной волны «Holochrom»; персональный компьютер IBM PC с программой «МультиХром» для записи и обработки хроматограмм (Ampersand, Россия); стальные аналитические колонки: Ultrasphere ODS -5ц (4,6 х 250 мм) с предколонкой Ultrasphere ODS -10 ц (4,6 х 50 мм) и Separon SG-C]8-5 ц

(4 х200 мм) с предколонкой Separan SG-C18-10 ц (4 х 50 мм). Скорость потока элюирующей смеси (метанол 100%) - 1 мл/мин. Пробоподготовка проводилась в соответствии с известными методиками. Детектирование а-токоферола ацетата осуществлялось при поглощения в УФ области для данного соединения 292 нм. В качестве стандарта использовался Vitamin Е acetate фирмы ICN (США). Детектирование ретинола пальмитата осуществляли при 1^=326 нм. В качестве стандартного образца использовался ретинола папьмитат (1800000 МЕ/г) фирмы Hoffman La Roche (Швейцария, США).

Для исследования элементного состава липофильных фракций JIPC объекты подвергали поэтапному озолению в соответствии со следующей методикой: точную навеску (около 1 грамма) исследуемого образца помещали в калориметрическую «бомбу» из тефлона, прибавляли 4 мл концентрированной азотной кислоты, «бомбу» плотно завинчивали и выдерживали в СВЧ печи при температуре 30°С. По истечении 24 часов к содержимому «бомбы» прибавляли 2 мл концентрированной азотной кислоты и 2 мл 30% пероксида водорода. После чего калориметрическая «бомба» выдерживалась в СВЧ печи последовательно при температуре 80°С в течение 8 часов и при температуре 96°С - 98°С в течение 1 часа. Элементный состав липофильных фракций JIPC определяли с использованием портативного микропроцессорного спектрофотометра DR/2010 (Mach, США) и портативного сканирующего кристалл-дифракционного рентгеновского спектрометра «Спектрослан». Предел обнаружения элементов составлял 10~б.

Статистическая обработка проведена с учетом указаний Общей статьи ГФ XI «Статистическая обработка результатов химического эксперимента и биологических испытаний», в основу которых положены принципы дескриптивного анализа и аналитической статистики. В исследовании использован программный комплекс SPSS for Windows 11.0.1. Результаты анализов представлены с указанием рассчитанного доверительного интервала (f = 5; Р = 0,95).

Микробиологический контроль объектов исследования осуществлялся в соответствии с Изменением № 2 к Общей статье Государственной Фармакопеи XI издания (ГФ XI) «Методы микробиологического контроля лекарственных средств». Исследование микробиологической активности проведено с использованием стандартных методов микробиологического анализа. Доказательство, а также оценка медико-биологической эффективности и безопасности использования липофильных фракций по декларируемым медицинским показаниям проводилась в соответствии с Федеральным законом № 86-ФЗ «О лекарственных средствах», Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических средств и международными правилами, предъявляемыми к фармакологическим и токсикологическим исследованиям лекарственных средств.

Результаты и обсуждение ИССЛЕДОВАНИЕ ЛИПОФИЛЬНЫХ ФРАКЦИЙ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ, ПОЛУЧЕННЫХ ЭКСТРАКЦИЕЙ ЖИДКИМ ОКСИДОМ УГЛЕРОДА (IV), И РАЗРАБОТКА СПЕЦИФИКАЦИЙ ДЛЯ КОНТРОЛЯ

КАЧЕСТВА

Сравнительный анализ состава биологически активных веществ липофильных фракций растительного происхождения, извлекаемых сверхкритическим диоксидом углерода и неполярными органическими растворителями.

Изучение и обобщение тенденций экспериментально-теоретических исследований в области современных технологий получения липофильных фракций растительного происхождения указывает на целесообразность использования СКФ в качестве экстрагентов БАВ, обладающих широким спектром фармакологической активности. К достоинствам процесса сверхкритического экстрагирования БАВ липофильной природы по сравнению с экстракцией неполярными органическими растворителями относят: энергосберегающий характер процесса; высокие массообменные характеристики и селективность экстрагирования; значительную степень извлечения соответствующих БАВ, сочетающуюся с высоким качеством конечного продукта; легкость процесса регенерации большинства СКФ, их нетоксичность и химическую инертность.

Диоксид углерода является наиболее широко применяемым в сверхкритическом состоянии экстрагентом БАВ липофильной природы, т.к. использование его во флюидном состоянии гарантирует осуществление процесса экстракции в температурном режиме, обеспечивающем отсутствие термической деградации БАВ. Экстракт, получаемый в процессе сверхкритического экстрагирования диоксидом углерода, характеризуется практическим отсутствием остаточного растворителя.

Нами проведено сравнительное изучение качественного и количественного состава основных групп омыляемых и неомыляемых БАВ (ТАГ жирных кислот, токоферолов, каротиноидов и фосфолипидов) фракций, полученных из ряда видов пищевого и лекарственного растительного сырья, экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода и неполярными органическими растворителями - лищевым бензином марки «Нефракс» и гексаном.

Как показано в таблице 1, липофильные фракции, извлекаемые сверхкритическим диоксидом углерода и традиционными неполярными органическими растворителями, имеют идентичный жирнокислотный состав, который также сопоставим по общему содержанию насыщенных и ненасыщенных жирных кислот. Известно, что при использовании сверхкритического диоксида углерода отмечается инактивация пероксидазы, активность которой в указанном случае уменьшается приблизительно в 10 раз. Данный факт подтверждается в проведенном

эксперименте и наглядно иллюстрируется значительно меньшим содержанием пальмитолеиновой (цис-9-гексадеценовой) кислоты в экстрактах, извлекаемых из плодов растений семейства Сельдерейные неполярными органическими растворителями, по сравнению с СОг-экстрактами тех же видов растительного сырья. Содержание пальмитолеиновой кислоты в СОг-экстракте плодов кориандра посевного на 92,3% превышает соответствующий показатель для экстрактов, извлекаемых органическими растворителями. Для С02-экстракта плодов укропа пахучего - на 19%. Содержание пальмитиновой кислоты в С02-экстрактах плодов кориандра посевного и укропа пахучего на 80% и 15%, соответственно, меньше, чем в экстрактах, извлеченных с использованием бензина «Нефракс» и гексана.

Таблица 1.

Состав жирпых кислот липофильных фракций растительного сырья, полученных с использованием различных экстрагентов.

Жирные Содержание жирных кислот о лнпофцльиьи фракциях, %

кислоты Плоды Плоды укропа . Семена Жом плодов Шрот семян

кориандра пахучего винограда черной тыквы

посевного культурного смородины

1 2 3 1 2 3. 1 2 3 1 2 3 1 2 3 С,6:0 1,5 7,5 7,5 5,6 6,5 6,7 6,7 6,2 6,2 7,3 7,0 7,1 13,1 12,6 13,0

ЗСил.'11.;№'J;ЗКSiШ6,11ЗЛЁШШ

C,&, 5,2 0,4 0,4 5,3 4,2 4,4 - - . - - - - . -::ШЩ::р€ 1 1WM 0Wi 'ФШ ВДЖ ::ПЩ; 31,7;,

(':,,,.,„ 53,0 50,0 50,0 25,3 26,2 25,3 - - -: - - - - ; -

ШсШШШШЩ&-W№Щ.4!ШЗШШ'ЖЗ.';ШйtM,Wf ШШW$-

Г,». - . - - - - - - . - - 23,5 25,1 25,0 - -

с 1^-9,12,15

1§&Щ1! КЗЗЗЗ КЗ. ШЗЗ КЗ КЗ. 33& КШ ШЗЯ ШЩ. ЗШ ¡33 ШШ ШШ шк

i tSifiM

C,t:4 . - - - ■.......2.2 2.1 ..." -

^ШЙчШ! ШЩ§Щ| i;.|0Q|: s |:1.001 |lÖ0| lffi:s Я! PPCfl |Ш1

Примечание:

1 - сверхкритический диоксид углерода;

2 — пищевой бензин марки «Нефракс»;

3 - гексаи.

* - изомеры С 18:1 С15-9 и С]81 аэ-б суммарно.

Использование сверхкритического диоксида углерода позволяет получать экстракты из анализируемых видов растительного сырья идентичные по качественному составу БАВ неомыляемой фракции экстрактам, извлекаемым неполярными органическими растворителями по традиционной технологии (таблица 2). Однако суммарное содержание БАВ неомыляемой фракции в полученных С02-экстрактах в целом меньше, чем для соответствующих экстрактов, извлеченных с использованием бензина «Нефракс» и гексана. Это может быть объяснено

Таблица 2.

С'одержаниенеомыляемых БАВ в липофильных фракциях, полученных с использованием различных зкстрагентов. Лднофнльные Суммарное годер'-каяве пеомыляеяых БАВ

фракпап : гъск^ферълсг. г Ccd'ipj^-yjy'^i' xapri'yïb.yob.dot, е и«рсс<^>>ге на Сооврлгач-шг фосфа-жгилдое, %

/3-кярс-тих,

/ } 1 2 3 1 2 шшшш.

Плоды кориандра 10,0640,06 1б,04±0Д0 17,30x0,10 ; 2,:->o.oi ; : 4,90x0,03 : 5,25+0,03 : - : 0,9540,02 : .0,95+0,03

. ïîoo?saôro :

|;î; Щоай ЙфШ*: :1в ¡¿Шам® pspSIII '■ 0,S64$,02

Семена винограда 14S,64+0,SS 24S,10± 1.50' 2Î6,12+1,54 о: 2S,50±0,2Û 27,2240,20 - 1,2б±0,03 1,30+0,03

культурного

Жог и юдг-в ¡рЖоЩ^Щ Щ

Tf^ïU'-Tï rv.^c^iîaï

Шрса семян тыхзы 35,20+0,21 45,7240,27 3,70x0,03 6,63+0,05..... 0,43x6,01

Примечание:

1 - сверхкритнческнй диоксид углерода;

2 - пищевой бензин марки «Нефракс»:

3 - гексан.

с точки зрения того, что в зависимости от технологических параметров процесса экстракции изменяется избирательная способность жидкого диоксида углерода, как экстрагента БАВ липофильной природы.

Оптимальным для обеспечения максимального выхода БАВ считается температурный режим экстракции в пределах 15-20°С; повышение температуры процесса экстракции БАВ из растительного сырья жидким диоксидом углерода до его критической температуры (31,1°С) - фактор, снижающий выход экстрактивных веществ. Снижение выхода экстрактивных веществ при повышении температуры процесса экстракции жидким диоксидом углерода объясняется: агрегативной неустойчивостью жидкофазного состояния экстрагента в зоне его критической температуры; уменьшением градиента химических потенциалов по составу компонентов; снижением величины изотермической молекулярной диффузии извлекаемых компонентов в экстрагенте (несмотря на существование градиента концентрации).

Кроме того, изменяя давление в среде сверхкритического диоксида углерода можно получать вариабельные по составу экстракты. Но при этом ни одно из полученных извлечений не будет идентичным, в частности по количественному составу БАВ неомыляемой фракции, экстрактам, извлекаемым неполярными растворителями.

Также известно, что применение неполярных органических растворителей обычно способствует увеличению содержания БАВ, сопутствующих глицеринам жирных кислот в липофильных фракциях растительного сырья.

Необходимо отметить, что в изученных С02-экстрактах растительного сырья не обнаружены фосфороорганические соединения. Этот факт согласуется с имеющимися данными, указывающими на то, что фосфолипиды в липофильных фракциях, полученных экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода, либо не обнаруживаются, либо присутствуют в следовых количествах. Указанный феномен объясняется малой растворимостью фосфолипидов в сверхкритическом диоксиде углерода.

Сравнительный анализ состава БАВ липофильных фракций растительного происхождения, извлекаемых с использованием сверхкритического диоксида углерода и неполярных органических растворителей, показывает, что полученные экстракты имеют тождественный качественный состав ТАГ жирных кислот. Это объясняется соизмеримыми значениями величины диэлектрической проницаемости для сверхкритического диоксида углерода и неполярных органических растворителей, как экстрагентов БАВ липофильной природы: ТАГ, жирорастворимых витаминов, пигментов и др. Экстракция в среде сверхкритического диоксида углерода за счет отсутствия эффекта аэрации и инактивации пероксидазы обусловливает ингибирование окислительных процессов. В эксперименте данный факт подтверждается статистически достоверно большим выходом ТАГ ненасыщенных жирных

кислот в условиях экстрагирования сверхкритическим диоксидом углерода по сравнению с экстракцией неполярными органическими растворителями. Качественный состав БАВ неомыляемой фракции изученных экстрактов растительного сырья в целом также является идентичным и включает группы БАВ, сопутствующих ТАГ жирных кислот, в частности токоферолы и каротиноиды. Однако экстракция в среде сверхкритического диоксида углерода способствует меньшему выходу указанных групп БАВ по сравнению с извлечениями, полученными с использованием неполярных органических растворителей. Указанный факт объясняется изменением избирательной способности диоксида углерода в зависимости от технологических параметров процесса экстракции, в частности от температуры. Кроме того, в изученных экстрактах растительного сырья, полученных в среде сверхкритического диоксида углерода в отличие от экстрактов, полученных с использованием неполярных органических растворителей, не обнаружена группа фосфороорганических соединений. Этот феномен согласуется с имеющимися данными о малой растворимости фосфолипидов в сверхкритическом диоксиде углерода.

Исследование влияния химической природы экстрагента на элементный состав липофильных фракций растительного сырья.

Анализ научных информационных источников и патентной документации по проблеме извлечения БАВ из растительного сырья СКФ указывает на практическую целесообразность сопоставительного анализа элементного состава липофильных фракций растительного сырья, получаемых с использованием сверхкритического диоксида углерода и органических растворителей.

В представленном исследовании влияния химической природы экстрагента на элементный состав липофильных фракций растительного происхождения в качестве экстрагентов использовались сверхкритический диоксид углерода и пищевой бензин марки «Нефракс».

В результате проведенного сопоставительного анализа элементного состава С02-экстрактов и липофильных фракций, полученных из соответствующего растительного сырья способом ступенчатого орошения растворителем (пищевым бензином марки «Нефракс») противоточно перемещающегося обрабатываемого материала, были выявлены следующие закономерности (таблица 3, 4). Качественный элементный состав изученных липофильных фракций в целом соответствует элементному составу исходного растительного сырья. Содержание техногенных элементов, таких как кадмий, медь и цинк не превышает значений соответствующих предельно допустимых концентраций.

Таблица 3.

Содержание элементов в лппофольных фракциях растительного сырья,

полученных экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода.

Липофтьпая О/держаписъчтептоа, мг/кг

SÄ^Äl'.rt'fe м Si Сг^ Un Fe №. Си Zn Se Mo Cd Pb

'§ШШШШШШ f;po:| lo0i: §§& «оЩ! Spii |Щ| ||||¡ ШШ lili

■' кариаиора г

посевного +

Плоды укропа 0.52 0,80 - - - 12,10 0,37 0,45 0.96 . > -

пахучего

IPS 111! lililí llill ШШ ИШ i ftMi ВШ- fill Bill MI Iii

КрШШКМШднОН ШШ1;

Трава полыни 4,00 0,14 - 0,04 0,28 0,40 0,68 0.90 1.25 ' ,'- 0,80 -горькой

i; ощ ;:Ö,80| дао! ¡|щ ¡gt|¡ Ssei щ§| |¡|fщщ ш Ш ШШ

; культурного

Жом плодов V 0,83 0,65 - - 0,12 40,20 0,21 1,80 1,15 0,25

черной смородины

В,sí);" 'ШШ iö,ö2| I t>,t 'Р хеш'/. Щ2а! ''0Ш "о.4б| Iii?:;

. .... тык/iht : . .

Таблица 4.

Содержание элементов в лппофильных фракциях растительного сырья, полученных экстракцией пищевым бензином марки «Нефракс». Липофи. тюя Содержание хгемешпос, мг/кг

|1Ш?#Ш1§1 Щ • Л <>„«, Ре № Си ¿п 5е Мо СЛ РЬ

о.бо о.бо |Щ| ||1||гШР-<о,16 ШШ■■ ШШШ|1 ¿<».111 Р-нлШШ

{.ШЁШ

Плоды укропа 0,52 0,80 - -: - 14,10 0,47: 0.55 1,06 - 0,90 пахучего

'^ШЩЩЩШШ: Шо| ; УШШ Ш® Р^Ш ШМЯ ЛйР ШШа ||Ш ¡ШЩ о.«1

облепихи -.

крушиношити ШМ:^

Трава полыни 4,02 0,14 - 0,04 0,28 0,50 0,80 1,01 1.40 - 1,15 0,12

горькой ;' ;

1ШС§?<0:ШЯ ¡Ш1; ШЙШ - ВД:1 ('-<Л) ||Ш щдо! ШШ РМ

ШМШ

Жом плодов 0,80 0,65 - : - 0,12 50,10 0,25 2,15 1,40 ; - 0,08 " . -. черной смородины

Шрот семян ¡р;Щ ¡1®:! ШШ |0.?5111Я1 Ш® ШШ Ш Р.

Химическая природа используемых экстрагентов (сверхкритического оксида углерода (IV) и пищевого бензина марки «Нефракс») не влияет на содержание магния, алюминия, кремния, общего хрома и марганца в липофильных фракциях плодов кориандра посевного, укропа пахучего, травы польши горькой, семян винограда культурного. Исключением в данном случае являются липофильные фракции плодов облепихи крушиновидной. В частности, в липофильной фракции плодов облепихи

крушиновидной, полученной экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода, не обнаружены (или содержатся в количествах ниже предела обнаружения) общий хром и марганец. Известно, что плоды кориандра посевного, укропа пахучего, трава полыни горькой, а также семена фармакопейных видов тыкв относятся к селенофилам, то есть характеризуются особенностью концентрировать селен. Однако при анализе липофильных фракций указанного сырья селен не был обнаружен (или концентрация селена была ниже предела обнаружения). Экстракция пищевым бензином марки «Нефракс» способствует, по сравнению с экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода, увеличению содержания в исследуемых липофильных фракциях растительного сырья железа и молибдена в среднем в 1,3 раза; никеля, меди, цинка - в 1,2 раза. Липофильные фракции травы полыни горькой и семян винограда культурного, полученные экстракцией пищевым бензином марки «Нефракс», содержат токсичный элемент свинец в концентрациях значительно превышающих значения содержания тяжелых металлов в экстрактах ЛРС, нормируемые ГСКЛС.

Результаты проведенного сопоставительного анализа элементного состава показывают, что химико-технологические характеристики сверхкритического диоксида углерода, как экстрагента липофильных фракций, позволяют получать экстракты из ЛРС и пищевых растительных источников, соответствующие требованиям ГСКЛС по показателю «содержание тяжелых металлов».

Разработка спецификаций для контроля качества СО^экстрактов растительного сырья и экспериментальное доклиническое изучение

Результаты проведенных нами экспериментально-теоретических изысканий в области создания лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью, указывают на необходимость интенсификации процесса внедрения способа экстракции БАВ растительного происхождения СКФ на предприятиях фармацевтической промышленности. Современные ГСКЛС запрещают или ограничивают использование в экстракционных процессах в фармацевтической отрасли ряда органических растворителей, кроме того, повышаются требования к нормированию допустимого содержания остаточного растворителя в конечном продукте. В указанном аспекте проведенные нами исследования свидетельствуют о целесообразности широкого применения технологии экстракции БАВ липофильной природы сверхкритическим диоксидом углерода в фармацевтическом производстве лекарственных средств на основе растительного сырья.

Спецификации для контроля качества липофильных фракций, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью, были разработаны на примере

С02-экстрактов, полученных из 7 родов растительного сырья с использованием стандартных методов физико-химического анализа.

Растворимость объектов исследования определялась в растворителях различной природы, которые использовались в качестве реагентов при исследовании ПСК С02-экстрактов. Изученные С02-экстракты практически нерастворимы в воде, легко растворимы в диэтиловом и петролейном эфире, хлороформе, гексане, ацетоне, пиридине, мало растворимы в спирте метиловом. Характерной особенностью является растворимость С02-экстрактов растительного сырья в 95% спирте этиловом: С02-экстракт плодов облепихи крушиновидной очень мало растворим, С02-экстракты плодов кориандра посевного и укропа пахучего практически нерастворимы, С02-экстракты полыни горькой, винограда культурного и шрота семян тыквы мало растворимы, С02-экстракт плодов смородины черной легко растворим в 95% спирте этиловом.

Характеристика изученных С02-экстрактов по показателю «Описание» и спецификации для контроля качества, разработанные на основе определенных в ходе исследования ПСК, представлены в таблицах 5 и 6, соответственно.

Таблица 5.

Характеристика СОг-экстрактов по показателю «Описание».

: Плоды кориандра Маслянистая прозрачная жидкость светло-коричневого цвета с приятным посевного запахом эфирного масла плодов кориандра и пряным вкусом.

I!доды укропа пахучею Маслянистая профнчная жидкоеп. че.шновато-м'ричпекого иисю с

Плоды облепихи Маслянистая вязкая жидкость оранжевого цвета со специфическим запахом .

: крушиновидной плодов облепихи й сладковато-горьким вкусом. ,

Грана полыни горькой Вязкая масса темночКрош цвета, имеющая ароматный «полынный» запах и

Семена винограда Маслянистая прозрачная жидкость желтого цвета со слабой зеленой культурного флюоресценцией, имеющая приятный запах и горький вкус.

Ж?:/..;;

Шрот семян тыквы Маслянистая прозрачная жидкость желто-зеленого цвета, имеющая

приятный специфический «тыквенный» запах и горький вкус. В процессе : . : хранения возможно образование осадка светло-желтого цвета. !

Физико-химические свойства сверхкритического диоксида углерода способствуют извлечению из растительного сырья в значительных количествах БАВ, сочетающих противовоспалительную и антиоксидантную активность, в частности, полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК), токоферолов, каротиноидов. Исследованные С02-экстракты растительного сырья содержат биологически активные эссенциальные ПНЖК, такие как линолевая, а-линоленовая, у-линоленовая (таблица 7).

Таблица б.

Основные разделы спецификаций для контроля качества СО;-экстрактов растительного сырья.

Оэъ^кт : СОэ'ЭКСТрЗКТ СОт-экстракт СОг-1КСграст СО? экстракт :: СОг-лкстраю- СОэ-экстракт СОз-лгетраст

плодов алодив укропа плодов «{летая травы яолывя. : семян винограда жома плодов шрота семян

Показателя"; : корваядоа посевного пахучего : кр>шнковвдноЗ горькая культурного смородины тыквы

Илотносг-гь при 2&*С, г**!1 Яе<<азй*»,е,1ъ ¡.¡ияо.'яечия. / 0,954010,0002 : 0,5940+0,0002 0,915010,0002 , 0,922 010,0002 0,917010.0002

ШЭДШШ; ЕШШШШ щщ 1,4854 1,4683 1,47:0

95-53: 97-100. Ш-Ш ■■'■'■;.. ; : 194-200 190-194 220-223

АЬглсъч&б ' ^.шЖШ Не солее 7.0 Не более 7,0 Не солее ? Не Более 42.3 Не ¿глее 32.0 Не "о.-т5е з.О

¿■¡одно? число 71-74 ; $2-£б : 68-70.■ : 50-84 114-11$ 146-150 118-122

Е ШШрШше. (ШекШей,! Сухой о£>}:а»:о\. Не &яее 0,7 1 Ш Не оэлсе 0,3 Не белее 0.3

Не менее 56 Не менее 56 Не менее £4 Не менее 90 Не менее 96 Не менее 95 Не менее 96

Не «еаее 3.2,0 Не незее 10,0

Содержание язяжел&х Не Золгг 0.01 Не солее 0,03 Не более 0,01 Ее Зилм 0,01 Не оелее 0,31 Не более 0,01 Не солее 0,01

металлов, %

Не менее 5,0 Нгма« 18,0 НемеаееЗ.О ;

Сушжрне-г

Немеяее 10,0 ? Не менее С Не менее 50,0 Не менее 60,0 Не менее 140,0 Не менее 20,0 Неяснее 30,0

'"С коферслоз я пересчете

па <х-тйкъферол, '^''А

21 гиа 2 I ода Шл - года 2 ;чиа 2 ГСЛД 2 гола

.-•¿.¿чь н-.ь« су.о.ч

Таблица 7.

Качественный и количественный состав жирных кислот СОг-экстрактов растительного сырья.

Качественный Содержание жирны! !снсло( в COj-ikctрактаи, %

сослав жирны* ' ; ПЛОДЫ Плоды Плоды л Семена Жом плодов Шрот

КИС.НГГ '¡кориандра укропа о&лепихи : винотрада черной семян ты

посевного пахучего круишно-: культурного маюродины ;

видной .

( , ¡SliSiill ¡¡illilll 'IlfflSi II11II11I1SI ШШШШл'Ш sjijiflpl::;;;

С:лэ 1 1,5 : 5,б;:: . 12.6 6,7 13,1

¡ililiBlii 5.1 шмшщ ШМш$Мв> г.,1 5,6

, Cl6:l. . ' -5,2: 5,3 8,4

'1ШШШЯ вшёмш шшшшш iSi:®iii;§ ¡11ШШ

C':s: cis-6 53,0 : 25,3 - - v -

С] S3 19,5 25,0 ШШШМШ шш 42,0 Й11ШШ

Cisj cis-9,12,15 4Д J- 23.5 >

CnjCis-6,9,12 1ВКЩШ1 шшшш lliläll Iffillilll 7,8 iffiliS;

Итого ,100 100 100 \ шо : 100 .100

* - олеиновая (цис-9-октадеценовая) и петрозелиновая (цис-6-октадеценовая) кислоты

суммарно.

Прогнозируемая терапевтическая эффективность изученных С02-экстрактов растительного сырья связана с физиологической активностью содержащихся в них ПНЖК и антиоксидантов. Известно что, линолевая и линоленовая кислоты за счет наращивания углеродной цепи могут превращаться в арахидоновую кислоту. Таким образом, ПНЖК изученных С02-экстрактов можно считать заменителями арахидоновой кислоты, являющейся структурным элементом фосфолипидов плазматических мембран. Особенности строения у-изомера . линоленовой кислоты, содержащейся в С02-экстракте жома плодов черной смородины, позволяют непосредственно включаться в каскад арахидоновой кислоты, обусловливая тем самым ее основной биологический эффект, как универсального предшественника большой группы медиаторов -эйкозаноидов, обладающих широким спектром фармакологической активности. Учитывая функциональный синергизм содержащихся в С02-экстрактах растительного сырья БАВ, которые сочетают противовоспалительную и антиоксидантную активность, можно прогнозировать терапевтический эффект при использовании С02-экстрактов и лекарственных средств на их основе для профилактики и лечения заболеваний, обусловленных, в частности, патологическим метаболизмом кислорода вследствие образования его активных форм.

В результате проведенных микробиологических исследований была впервые выявлена бактериостатическая активность С02-экстрактов семян винограда культурного, жома плодов черной смородины, а также С02-экстракта шрота семян тыквы в отношении Staphylococcus aureus. Кроме того, указанные С02-экстракты обладают фунгистатической активностью в отношении Candida albicans. Также впервые выявлена фунгистатическая

активность СОг-экстрактов плодов кориандра посевного, укропа пахучего и травы полыни горькой в отношении наиболее распространенных возбудителей дерматомикозов человека, а именно Microsporum canis и Trichophyton rubrum (таблица 8).

Таблица 8.

Бактериостатическая и фуигистатическая активность (мкг/мл) СОг-экстракгов растительного сырья.

Тест-микроорганизм

С02-экстракт Escherichia coli Staphylococcus, aureus : Proteus vulgaris Bacillus subtilis Pseudomonas aeruginosa Candida ').'■ . albicans Microsporum canis Trichophyton rubrum

1:250 |§;(:25в 1:250 1:250 1:250 1:500 1:250 1-250

Плоды укропа пахучего - - . - 1:250 - - 1:250 1:250

Плоды облепихи !ЩЯ1 ШЯН IIIIII Glill ilMMJ ¡flllll -

Трава полыни горькой - 1:1000 - - ' - 1:1000 : 1:250 .1:1000

¡iillii ЯП ШёШ'Ш Ж1Й<1 Illl-^l: 1:1000 lieil tlllll

Жом плодов черной: - 1:1000 - 1.1000 ' - ■■:■ -

■смородины

Шрот семян т ыквы illslSII liffltöf ШШШВ lllilfl lillli : lilQÖÖI eis SIS!

Микробиологический контроль показал отсутствие Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и энтеробактерий в 1 г и отсутствие Salmonella в 10 г каждого из исследуемых С02-экстрактов растительного сырья. Общее число аэробных бактерий и общее число грибов для всех изученных СОг-экстрактов равно нулю. Так как в ходе исследования было впервые выявлено или подтверждено антимикробное действие С02-экстрактов растительного сырья, для получения достоверных результатов анализа микробиологической чистоты применялись специальные методы нейтрализации антимикробного действия СОг-экстрактов. Например, вводились неспецифи'ческие инактиваторы в питательные среды или изменялось соотношение количества С02-экстракта и питательной среды.

Известно, что в этиологии ряда воспалительных заболеваний, например, неспецифических воспалительных заболеваний органов мочеполовой системы, приоритетная роль принадлежит комбинированной инфекции, которая представляет ассоциативное взаимодействие неспорообразующих анаэробных микроорганизмов, неспецифической грамотрицательной и грамположительной микробной флоры. Микстинфскция является серьезной проблемой, так как в ряде случаев потенцирует патогенность каждого из возбудителей. В ходе проведенного исследования была выявлена бактериостатическая и фуигистатическая активность СОг-экстрактов растительного сырья в отношении наиболее

распространенных возбудителей, идентифицирующихся при сочетанных инфекциях половой сферы. С02-экстракты в концентрации 250-1000 мкг/мл обладают бактериостатической активностью в отношении Staphylococcus aureus и проявляют фунгистатичекую активность в отношении дрожжеподобных грибов рода Candida, в частности в отношении наиболее распространенного вида Candida albicans, вызывающего кандидозный кольпит. Для С02-экстракта плодов кориандра посевного характерно также бактериостатическое действие в отношении Escherichia coli (1:250).

Оценка безопасности использования С02-экстрактов проводилась в соответствии с Федеральным законом № 86-ФЗ «О лекарственных средствах», Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических средств и международными правилами, предъявляемыми к фармакологическим и токсикологическим исследованиям лекарственных средств. Исследование токсичности показало отсутствие токсического эффекта СОг-экстрактов при использовании в экспериментальных концентрациях.

Результаты исследования СОг-экстрактов растительного сырья являются экспериментально-теоретической базой для создания лечебно-профилактических лекарственных препаратов природного происхождения, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью. С учетом особенностей ПСК и изученных свойств, С02-экстракты растительного сырья целесообразно использовать в качестве основных компонентов мягких лекарственных форм, в частности, суппозиториев и мазей. Предварительные результаты доклинических испытаний служат основой для достоверного выявления, оценки и доказательства прогнозируемой терапевтической активности в ходе отдаленных клинических исследований лекарственных препаратов на основе СОг-экстрактов растительного сырья, сочетающих

противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью.

Разработанные спецификации для контроля качества С02-экстрактов позволяют достоверно и объективно установить подлинность изученных объектов и выявить потенциальные фальсификации или несоответствия ПСК Государственным стандартам качества лекарственных средств, получаемым из растительного сырья.

ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ПОЛУЧЕНИЯ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ КОНСТИТУЕНТОВ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА МЯГКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ В контексте решения проблемы лекарственной полипрогмазии целесообразным представляется изыскание средств и способов получения из отечественных видов ЛРС и пищевых растительных источников конституентов, содержащих комплекс фармакологически активных

веществ, в частности, для производства мягких лекарственных форм (суппозиториев и мазей).

Известно, что жирное масло плодов растений семейства Сельдерейные содержит комплекс БАВ, обеспечивающих не только широкий спектр его фармакологической активности, но также обусловливающих возможность выделения твердых липофильных фракций (ТЛФ). Данные ТЛФ с нашей точки зрения могут быть использованы в качестве конституентов суппозиторных или мазевых основ растительного происхождения. Кроме того, растения семейства Сельдерейные являются широко культивируемыми в России, что представляет значимый фактор, влияющий на себестоимость конечного продукта. В середине XX века отечественными исследователями были проведены изыскания в области получения суппозиторной основы, представляющей собой твердую часть жирного масла плодов растений семейства Сельдерейные, близкую по консистенции и температуре плавления к маслу какао — классической суппозиторной основе (И.М. Фефер, 1953; E.H. Зарайская, Г.В. Макарова, 1955; М.Н. Бушкова, 1957). Однако длительность и многостадийность процесса получения твердой части из жирного масла плодов растений семейства Сельдерейные являлась причиной потери термолабильных БАВ, таких как каротиноиды, токоферолы, фосфолипиды, и обусловливала в конечном итоге получение твердой фракции, представляющей собой в основном ацилглицерины цис-6-октадеценовой (петрозелиновой) кислоты.

С целью упрощения процесса извлечения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные и увеличения содержания в них комплекса нативных БАВ нами проведены изыскания по выбору селективного экстрагента и разработке оптимального технологического способа.

Для получения ТЛФ использовали фармакопейные виды растений семейства Сельдерейные - плоды фенхеля обыкновенного (Foeniculum vulgare Mill.), укропа пахучего (Anethum graveolens L.) и кориандра посевного (Coriandrum sativum L.). Изыскание селективного экстрагента для извлечения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные проведено на примере малополярных органических растворителей и их смесей, наиболее широко используемых в качестве экстрагентов липофильных фракций из ЛРС и пищевых растительных источников.

ТЛФ получали из плодов растений семейства Сельдерейные с влажностью не более 2,5%, измельченных до размера частиц, проходящих через сито с диаметром, отверстий 0,5 мм, циркуляционной экстракцией малополярными органическими растворителями или их смесями в аппарате Сокслета в течение 2,5-3 часов при соотношении сырье : экстрагент - 1 : 3-5. Указанные значения влажности, степени измельчения сырья, времени экстракции и соотношения сырье : экстрагент обеспечивают оптимальный выход липофильной фракции из плодов растений семейства Сельдерейные (А.Н. Фетисова с соавт., патент РФ 2147890, 2000). Экстрагент из полученной мисцеллы отгоняли на роторно-

вакуумной испарительной установке при значениях величин температуры и давления, характерных для использованных в эксперименте органических растворителей и их смесей. Продукт высушивали в сушильном шкафу до постоянной массы при температуре 40-45°С.

Экстракция липофильных фракций из масличного растительного сырья, как правило, проводится малополярными растворителями или их смесями с последующим удалением экстрагента; в каждом конкретном случае необходимо подобрать селективный экстрагент, обеспечивающий оптимальный выход БАВ. При этом условия удаления экстрагента не должны оказывать деструктивного влияния на выделяемый комплекс БАВ. Кроме того, в соответствии с поставленной исследовательской задачей, экстрагент должен обеспечивать выделение ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные, обладающих необходимыми структурно-механическими свойствами для производства мягких лекарственных форм.

Результаты проведенных исследований по выбору оптимального экстрагента показали, что гексан является селективным экстрагентом для получеши ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные. Экстракция гексаном обеспечивает получение ТЛФ, характеризующихся структурно-механическими свойствами, которыми в соответствии с ГСКЛС должны обладать мазевые или суппозиторные основы. Из таблицы 9 следует, что попытка использования других малополярных органических растворителей (бензин «Нефракс», хлороформ, метанол) и/или их смесей не приводит к достижению исследовательской цели. Только использование гексана в качестве экстрагента для получения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные при соотношении сырье : экстрагент -1:3-5 позволяет упростить технологический процесс и увеличить содержание в целевом продукте нативных БАВ.

Таким образом, поставленная исследовательская задача решалась способом, заключающемся в том, что ТЛФ получают из плодов растений семейства Сельдерейные с влажностью не более 2,5%, измельченных до размера частиц, проходящих через сито с диаметром отверстий 0,5 мм, экстракцией гексаном в аппарате Сокслета в течение 2,5-3 часов при соотношении сырье : экстрагент — 1 : 3-5 (рис. 1).

Предлагаемый технологический способ извлечения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные, по сравнению с прототипом, позволяет исключить стадии кристаллизации и переэтерификации. Кроме того, использование в качестве экстрагента гексана позволяет упростить процесс очистки и, в целом, технологическую схему получения продукта (А.Н. Фетисова с соавт., патент РФ 2318867, 2008).

Таблица 9.

Выбор селективного экстрагеита для получения ТЛФ м плодов растений семейства Сельдерейные (на примере плодов фенхеля обыкновенного).

Экстра тент

метанол: хлороформ (1:1-2)

хлороформ

бедашг «Нефракс»

бензин «Нефракс»: хлороформ (1 :1-2)

- Характеристика лилофильной фракции

При температуре 20-25°С вязкая

эфирного масла фенхеля. При

представляет собой густую мазеобразную массу. При температуре 20-25°С вязкая жидкость светло-зеленого цвета со специфическим запахом эфирного масла фенхеля. При температуре 7±2°С продукт представляет собой / густую мазеобразную массу.

ШвсхЖЩрда

специфическим запахом

температуре 7Л2°С продукт расслаивается с образовавшем ма »образная и жидкой фракций. При температуре 20-25"С жидкость болотного циста со специфическим; запахом

эфирного : масла фенхеля. При температуре .. 7±2°С : продую: представляет . собой вязкую жидкость1

специфическим , запахом.

механических примесей

Температура загусгевании (затвердепаиия") липофильпой фракции, "С

10+1

■Ю±1

К I

10+1,

23+1

т

I

Рис. 1. Технологическая схема получения твердой липофильпой фракции из плодов растений семейства Сельдерейные (А.Н. Фетисова с соавт., патент РФ

2318867, 2008).

Широкое применение гексана пищевыми и фармавцевтическими производствами объясняется его стабильностью, высокой экстрагирующей способностью в отношении БАВ липофильной природы, малой потерей при испарении, более хорошими органолептическими свойствами шрота, остающегося после экстракции и использующегося в качестве кормовой добавки в животноводстве. Кроме того, имеются сведения, что для большинства органических растворителей характерна особенность экстракции афла- и микотоксинов, концентрирующихся в шроте. Исключением в данном контексте является гексан.

Гексан, по сравнению с другими малополярными органическими растворителями, имеет узкий интервал температуры кипения, что обусловливает возможность создания щадящего температурного режима на стадии удаления экстрагента. В представленном исследовании отгон экстрагента из мисцеллы проводился на роторно-вакуумной испарительной установке при давлении 150 мм рт. ст. и температуре 30°С. Известно, что указанные условия обеспечивают оптимальную полноту удаления гексана из экстракта, полученного на основе масличного растительного сырья. ГЖХ анализ показал отсутствие остаточных количеств гексана в экспериментальных образцах ТЛФ плодов растений семейства Сельдерейные. Это позволяет сделать вывод о соответствии ТЛФ плодов растений семейства Сельдерейные, получаемых по предложенной технологии, требованиям отечественных и международных стандартов качества, предъявляемым к экстрактам, извлекаемым из ЛРС экстракцией органическими растворителями, по показателю «содержание остаточных количеств растворителя».

Выход ТЛФ зависит от родовой принадлежности исходного растительного сырья (плоды фенхеля обыкновенного — 4,87±0,22%; плоды укропа пахучего - 4,18±0,19%; плоды кориандра посевного - 4,67±0,21%) и составляет не менее 4% в пересчете на абсолютно сухое сырье. Полученные из плодов растений семейства Сельдерейные предложенным способом ТЛФ имеют показатели состава и качества, соответствующие требованиям ГСКЛС, предъявляемым к мягким лекарственным формам. Показатели состава и качества ТЛФ, полученной из плодов фенхеля обыкновенного предлагаемым способом, представлены в таблице 10 в сравнении с прототипом (И.М. Фефер, 1953). ТЛФ содержат помимо специфичной для растений семейства Сельдерейные петрозелиновой кислоты, которая обусловливает необходимые для конституентов мазевых и суппозиторных основ структурно-механические характеристики, также комплекс БАВ природного происхождения, обладающих антиоксидантной и противовоспалительной активностью. ТЛФ, полученные из плодов растений семейства Сельдерейные циркуляционной экстракцией гексаном в соответствии с разработанной технологической схемой, по показателям состава и качества могут быть рекомендованы в качестве конституентов растительного происхождения при производстве мазей или суппозиториев из отечественного сырья.

Разработанная технологическая схема позволяет упростить процесс получения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные, а также увеличить содержание в продукте нативного сбалансированного комплекса биологически активных веществ, обладающих антиоксидантным и противовоспалительным действием - каротиноидов, токоферолов, фосфолипидов. Предлагаемая технологическая схема получения ТЛФ природного происхождения обеспечивает не только оптимальный выход БАВ, но и способствует получению стабильного целевого продукта, содержащего минимальное количество балластных веществ, способных негативно влиять на качество мягких лекарственных форм, приготовленных с их использованием. Предложенный способ получения ТЛФ из плодов растений семейства Сельдерейные обеспечивает рациональное применение отечественных сырьевых запасов лекарственных растений и позволяет провести замены импортных суппозиторных или мазевых основ растительного происхождения.

Таблица 10.

Сравнительная характеристика показателей состава и качества ТЛФ, полученной из плодов фенжеля обыкновенного предлагаемым способом и способом-прототипом.

Показатели состава и качества

Плотность при 20"(\ 1 *см! Показатель преломления, п20о

. Температура затвердевания, "С

Число омыления

Содержание перекисей,%

Внешний вид изготовленных суппозиториев

:■;■!!Время полной деформации, мин

Содержание неомыляемых веществ, %

Суммарное содержание токоферолов в пересчете на а-

токоферол, мг% I Суммарное содержание :

Содержание ацилглицеринов пегрозелиновой килоты,%

Предлагаемый способ

1,4776

23-24

189,3+2,8

0,90+0,01

. ; Зеленого цвета, равномерно окрашенные, без вкраплений и трещин

ШШВШёШ£ШШ9ШШт

■■;■'- 20-25

10,7+0,2 27,3

Прототип

1,4625

......

21-22

189,5-189,9

Не определялось

Зеленого цвета, равномерно окрашенные, без вкраплений и трещин Не менее 15

97,3

ОБНАРУЖЕНИЕ ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ ФАЛЬСИФИКАЦИЙ И НЕДОБРОКАЧЕСТВЕННОЙ ПРОДУКЦИИ СРЕДИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ, ИМЕЮЩИХ

НЕСПЕЦИФИЧНЫЙ СОСТАВ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ

ВЕЩЕСТВ

Общие аспекты выявления фальсификатов и недоброкачественной продукции среди лекарственных средств, изготовленных из масличного растительного сырья

Актуальной проблемой современного рынка фармацевтической и парафармацевтической продукции в Российской Федерации является рост производства, распространения и использования фальсифицированных лекарственных препаратов и БАД. Значительное количество фальсифицированной и низкокачественной продукции выявляется среди ассортимента лекарственных препаратов и БАД природного происхождения, в частности изготовленных на основе масличного ЛРС. Увеличение доли фальсифицированных лекарственных средств является серьезной медико-социальной проблемой, связанной с угрозой здоровью населения страны и оборачивающейся многомиллионными убытками для государственной казны и частных производителей. В соответствии с разработанным ВОЗ «Планом действий по борьбе с фальсифицированными лекарственными средствами» определение ПСК лекарственных средств является одной из основных составляющих процесса выявления фальсифицированной и низкокачественной продукции среди препаратов и БАД, изготовленных из масличного ЛРС.

В настоящем исследовании на основании собственных эмпирических изысканий обоснованы принципиальные подходы и критерии обнаружения потенциальных фальсификаций и недоброкачественной продукции среди препаратов и БАД, изготовленных из масличного растительного сырья.

В качестве модельных объектов для разработки критериев и обоснования принципов выявления недоброкачественной продукции и потенциальных фальсификаций были выбраны БАД масло семян тыквы, тыквин, витадиойл, масло зародышей пшеницы, препарат тыквеол, имеющие неспецифичный состав БАВ, в частности, ацилглицеринов жирных кислот.

Увеличение доли фальсифицированной и недоброкачественной продукции на отечественном фармацевтическом рынке обусловливает процесс изменения системы контроля качества лекарственных средств, связанный с необходимостью проверки большого количества образцов при сравнительно высокой стоимости фармакопейных анализов. В данном аспекте ВОЗ рекомендует использовать упрощенные тесты, так называемые методы скрининговой оценки.

Одним из простейших методов скрининговой оценки потенциальной фальсификации является визуальный контроль внешнего вида препарата или БАД. Проведенный нами анализ объектов исследования по показателю

«Описание» (таблица 11) показал, что в целом препарат тыквеол, Б АД тыквин, масло семян тыквы, витадиойл и масло зародышей пшеницы соответствуют по данному показателю требованиям ГСКЛС, предъявляемым к лекарственным средствам, изготовленным из семян тыквы и зародышей пшеницы. Однако изученные серии БАД масло семян тыквы имеют характерный запах масла семян подсолнечника, что может являться потенциальной фальсификацией данной БАД, декларируемой производителем как «масло семян тыквы, полученное из семян фармакопейных видов тыкв методом холодного прессования и представляющее собой маслянистую жидкость от зеленовато-коричневого до красно-коричневого цвета с характерным запахом и вкусом».

Таблица 11.

Характеристика исследованных серий препарата тыквеол, БАД масла семян тыквы, витадиойл и БАД масло зародышей пшеницы по показателю «Описание».

Тыквеол Маслянистая жидкость зелено-бурого цвета с характерным запахом и вкусом

. масла семян тыквы.

■ ТЫЙВИНЗШШ Маслянистая жидкость зелснсЯздого песта с зеленой ф^феспеншей^' 1'¿¿§¿11 : Хйр«лГСр}1Ы*1 лиГ.иЧ Н ССМуТЛ

Масло семян тыквы Маслянистая жидкость зеленовато-коричневого цвета с характерным вкусом жирного масла семян тыквы, имеющая запах масла семян подсолнечника.

; Витадиойл ^ 'Маслянистая жидкость зеленовато-бурого цвета с характерным запахом и , :: вкусом масла сечяи тыкны Масло зародышей Маслянистая жидкость желтого цвета с характерным запахом и вкусом пшеницы пшеничного хлеба.

Обнаружение в препарате или БАД, изготовленном из масличного растительного сырья, примеси других жирных масел сходных по составу ТАГ жирных кислот, является трудной задачей, не всегда приводящей к однозначным решениям. Особую сложность представляет обнаружение примеси масла семян подсолнечника в препаратах и БАД масла семян тыквы и масла зародышей пшеницы даже с использованием хроматографических методов идентификации жирных кислот, так как жирнокислотный состав ТАГ указанных масел представлен неспецифичными жирными кислотами: пальмитиновой (С]6о), стеариновой (С]8о) , олеиновой (С18:0 и линолевой (С^г). В данном случае для подтверждения выводов, полученных при первоначальной скрининговой оценке, приходится прибегать к расширенному фотохимическому исследованию в соответствии с утвержденными ГСКЛС методами анализа препаратов и БАД, изготовленных из масличного растительного сырья.

Проведенный фитохимический анализ препарата тыквеол, БАД тыквин, масло семян тыквы, витадиойл и масло зародышей пшеницы свидетельствует о том, что объекты исследования по основным показателям состава и качества идентичны, и в целом соответствуют требованиям, предъявляемым ГСКЛС к качеству лекарственных средств, изготовляемых из семян тыквы и зародышей пшеницы (таблица 12,13).

Таблица 12.

Показатели состава ц качества препарата тыквеол и БАД масла семян тыквы

исследованных серий.

Объект Тыквсол 'Гыквин Масло семян Нормируемое

тыювы значение

Показатель

1 Плотность при 20°С, г/см3 ; 0,924040,0002 0,923040,0002 0,924040,0002 0,880-0,940

; Показать ^еломрШ1111 1111Щ201111 шащщд! 11Иш1111Я

Число омыления 223,043,1 ; 223,043,1 . 214,043,2 ;. -

111ЩЩЩ11

Йодное число .116,0423 ; 126.012.5 124,042,5 : 100-140

¡Ш1ШШМ111 ¡В1ШШШ1В ЩЩЩбрЩШ!

Содержание неомыляемьк ; 0,7740,01 0,6540,01 .0,7540,01: ; ...

веществ, % :

Содержание свободных 11111: ::Ш111Ш

жирных кислот. ШШь

Содержание тяжелых Не обнаружены Не обнаружены '. Не обнаружены: Не более 0,001%

металлов, %

Суммарное со;уржание Г 1е менее

карота ноидов; в ТтёресчетЬ на:

Суммарное содержание : 34,9840,21 : 25,8040,16: .: 25,4340,15 Не менее

токоферолов в пересчете на . 4 мг%

а-токофдюл, мт%

Таблица 13.

Показатели состава и качества БАД витадиойл и масло зародышей пшепицы исследованных серий.

Витадиойл Масло зародышей-

Объект Показатель

Плотность при 20°С, г/см3 Число омыления Йодное число

: Содержание свободных жирных кислот, %

11111:

Содержание тяжелых металлов, %

: 0,4220! 0,0002

1,4766 . 208,613,1 1,1640,02 . 137,142.7 ; 1

Щ^ШШШШШ

0,53040,008 ;

|::1р;бЩй111|

Не обнаружены

0,9190+0,0002 : 210,413.2 .138,442,8 ,1

1ШШШШШМ

1,45040,032 0,5540,01 Не обнаружены:

шШШШМВ

Нормируемое значение

Но более 4 Не более 0,001%

Однако препарат и БАД масла семян тыквы исследованных серий не соответствуют требованиям ГСКЛС по показателю «Индекс окисленности». Индекс окисленности является одним из основных показателей доброкачественности лекарственных средств, изготовленных из масличного растительного сырья. Увеличение индекса окисленности свидетельствует о протекающих в жирных маслах процессах окисления ненасыщенных жирных кислот пероксикислотами с образованием соответствующих эпоксидов. Так, для препарата тыквеол значение индекса окисленности превышает верхний нормируемый предел на 1%, для БАД тыквин — на 5%, для БАД масло семян тыквы - на 10%. Поэтому можно сделать вывод о недоброкачественности препарата и БАД масла семян тыквы исследованных серий. БАД тыквин также не соответствует требованиям ГСКЛС по показателю «суммарное содержание каротиноидов», данный показатель для БАД тыквин меньше нижнего нормируемого предела на 8,8%, что согласуется с высоким значением индекса окисленности данной БАД.

Возросший уровень ятрогенных влияний на организм человека, в том числе при применении лекарственных препаратов и БАД, изготовляемых из ЛРС, связывается с увеличением выпуска фальсифицированной продукции. Производство фальсифицированных лекарственных средств из масличного растительного сырья может включать введение в жирное масло для усиления фармакологического воздействия препарата или БАД веществ синтетического происхождения, в том числе синтетических аналогов витаминов - альфа-токоферола ацетата и ретинола пальмитата. При производстве фальсифицированного препарата или БАД из масличного растительного сырья производителем не указывается в соответствующем стандарте качества содержание в лекарственном средстве добавок синтетических аналогов витаминов.

ВЭЖХ позволяет достоверно идентифицировать введение синтетических аналогов витаминов при производстве лекарственных препаратов и БАД из масличного растительного сырья и выявить фальсифицированную продукцию. Проведенный ВЭЖХ анализ показал отсутствие добавок синтетических аналогов витаминов - альфа-токоферола ацетата и ретинола пальмитата в исследованных сериях объектов (рис. 2).

А В

; ¡Г5Г=- ■

|--

II

Рис. 2. Общий вид хроматограмм, позволяющих идентифицировать ретинола пальм шат (I) и альфа-токоферола ацетат (II) в препаратах и БАД, получаемых из масличного растительного сырья (на примере БАД витадиойл).

А - общий вид хроматограммы стандартного образца ретинола пальмитата (!) или альфа-токоферола ацетата (II);

Б- общий вид хроматограммы образца БАД витадиойл.

Идентификация жирных масел, имеющих неспецифичный состав глицеринов жирных кислот, не всегда приводит к однозначным решениям, в связи с этим, идентификация жирных масел должна основываться главным образом на различии количественного состава их жирных кислот и глицеринов. Для скрининговой оценки лекарственных средств, получаемых из масличного ЛРС, может быть использован расчет количественного состава жирных кислот и их глицеринов на основании значений числа омыления, кислотного числа жирного масла и содержания неомыляемых веществ. Рассчитанный на основании полученных экспериментальных значений числа омыления, кислотного числа и содержания неомыляемой фракции состав жирных кислот и глицеринов объектов исследования в совокупности с результатами их скрининговой оценки позволяет идентифицировать препарат тыквеол и БАД тыквин как жирное масло семян тыквы, а также допустить потенциальную фальсификацию БАД масло семян тыквы, связанную с наличием в ней примеси масла семян подсолнечника. Известно, что средняя относительная молекулярная масса жирных кислот масла семян подсолнечника составляет 283. Как показано в таблице 14, средняя относительная молекулярная масса ацилглицеринов БАД масло семян тыквы превышает соответствующий показатель для препарата тыквеол и БАД тыквин на 4,2%, а средняя относительная молекулярная масса жирных кислот соответственно выше на 4,6%.

Таблица 14.

Теоретический состав жирных кислот и глицеринов лекарственных средств, изготовленных из масличного растительного сырья, имеющего иеспецпфичиый состав ацилглицеринов жирных кислот.

ООы'кт Тыквеу.1 Тмктшн

Покатпинь

Средняя относительная 755 755

молекулярная масса ацилглицеринов

Средняя ошосшельлая 239 239

молекулярная масса жирных кисло г

Содержание 99 99

ацилглицеринов, %

Согласно техническим условиям БАД витадиойл представляет собой смесь масла семян тыквы и масла зародышей пшеницы. При производстве данной БАД регламентируется содержание масла семян тыквы не более 80% и масла зародышей пшеницы не менее 20% по объему. Масло семян тыквы и масло зародышей пшеницы имеют практически идентичный жирнокислотный состав. Кроме того, в указанных маслах отсутствуют какие-либо сопутствующие вещества, типичные только для одного из масел. Органолептические особенности в смесях жирных масел весьма трудно распознаваемы, в особенности, если они неясно выражены, и если одно из жирных масел находится в смеси в небольшом количестве. Однако сопоставление рассчитанного состава жирных кислот и глицеринов БАД витадиойл с препаратом и БАД масла семян тыквы и БАД масло зародышей пшеницы позволяет идентифицировать витадиойл как смесь соответствующих жирных масел (таблица 14).

Выявление фальсифицированной и недоброкачественной продукции среди препаратов и БАД, изготовленных из масличного растительного сырья, является комплексной проблемой, обусловленной в первую очередь сложностью идентификации жирных масел, имеющих неспецифичный состав глицеринов жирных кислот и характеризующихся отсутствием каких-либо специфичных сопутствующих веществ. Кроме того, целесообразность увеличения частоты и масштабов проверок определяет необходимость снижения роста издержек при проведении скрининговой оценки. При этом издержки, связанные с проведением скрининговой оценки, следует соотносить с вероятностью проявления ятрогенной патологии, т.е. с возможностью возникновения более значимых медицинских, социальных и экономических проблем, обусловленных применением фальсифицированных или недоброкачественных препаратов и БАД.

С нашей точки зрения для достоверного выявления фальсифицированной и недоброкачественной продукции среди препаратов и БАД, изготовленных из масличного растительного сырья, имеющего

Масло Витадиойл Масло

семян зародышей

тыквы ншеннцы

787 807 800

99 99 98

неспецифичный состав глицеринов жирных кислот и характеризующихся отсутствием каких-либо специфичных сопутствующих веществ, методы скрининговой оценки должны, во-первых, включать определение основных ПСК, представленных в таблицах 12 и 13. Предложенные методы скрининговой оценки экспериментальных значений основных показателей состава и качества препаратов и БАД, изготовленных из масличного ЛРС, не являются трудоемкими и дорогостоящими, включают в основном фармакопейные методики и являются базой для теоретического расчета состава жирных масел. Во-вторых, скрининговая оценка на основании расчетов состава жирных масел с использованием их основных показателей состава и качества может являться достоверным и объективным методом идентификации и выявления фальсифицированной продукции среди лекарственных средств, получаемых из масличного ЛРС, имеющего неспецифичный жирнокислотный состав и характеризующегося отсутствием специфичных сопутствующих веществ (таблица 14).

Вышеизложенные подходы являются экспериментально-теоретической базой выявления потенциальных фальсификаций и недоброкачественной продукции среди препаратов и БАД, изготовленных из масличного растительного, имеющего неспецифичный состав БАВ. Для достоверного и объективного обнаружения фальсификатов и недоброкачественной продукции среди указанной категории препаратов и БАД оптимальная последовательность процедур должна включать следующие этапы:

1. органолептический анализ;

2. определение основных ПСК (плотность, показатель преломления, число омыления, кислотное число, йодное число, индекс окисленности, содержание неомыляемых веществ, суммарное содержание каротиноидов в пересчете на бета-каротин);

3. расчет состава жирных кислот и глицеринов на основании эмпирических ПСК.

Расчет состава жирных кислот и глицеринов в оценке качества лекарственных средств

В настоящем исследовании на основании эмпирических ПСК препаратов и БАД, изготовленных из масличного ЛРС, разработана методика расчета состава жирных кислот и глицеринов, которая, как было показано выше, может быть использована для скрининговой оценки потенциальных фальсификаций и выявления недоброкачественной продукции среди указанной группы лекарственных средств.

Расчет состава жирных кислот и глицеринов выполняется на основании трех эмпирических ПСК лекарственных средств, изготовленных из масличного растительного сырья, а именно числа омыления, кислотного числа и содержания неомыляемых веществ.

1. Рассчитывают среднюю относительную молекулярную массу ацилглицеринов (ММГ), используя эмпирические значения числа омыления (40) лекарственных средств, изготовленных из масличного ЛРС, по формуле

...„ 3-56110 ММГ =-, где

чо

56110 относительная молекулярная масса гидроксида калия;

3 — коэффициент пересчета на ТАГ;

ЧО - число омыления образца.

2. Рассчитывают среднюю относительную молекулярную массу жирных кислот (ММЖК) по формуле

ММЖК =-, где

3

ММГ - средняя относительная молекулярная масса ацилглицеринов;

3 - коэффициент пересчета на ТАГ;

38 - относительная молекулярная масса углеводородной части глицерина.

3. Рассчитывают содержание свободных жирных кислот (СЖК) в процентах, используя эмпирические значения кислотного числа (КЧ) лекарственных средств, изготовленных из масличного ЛРС, по формуле

сжк^тмжк.кч

56110

ММЖК - средняя относительная молекулярная масса жирных кислот;

56110 — относительная молекулярная масса гидроксида калия;

КЧ - кислотное число образца.

4. Рассчитывают содержание ацилглицеринов (САГ) в процентах, используя эмпирические значения содержания неомыляемых веществ (СНВ) (в процентах) в лекарственных средствах, изготовленных из масличного ЛРС, по формуле

САГ = (100 - СЖК - СНВ), где

СЖК — содержание свободных жирных кислот, %;

СНВ - содержание неомыляемых веществ в образце, %.

На основании эмпирических ПСК был рассчитан состав жирных кислот и глицеринов объектов исследования (таблица 14) в соответствии с описанной выше последовательностью расчета. Известно, что состав жирных кислот в липофильных фракциях масличного ЛРС постоянен. В тоже время количественное содержание отдельных жирных кислот в разных образцах одной и той же липофильной фракции (жирного масла), полученной из конкретного ЛРС, может изменяться, но чаще всего в

незначительных пределах. Различия в составе и количестве жирных кислот липофильных фракций растительного сырья отражаются на удельном расходе реагентов, затрачиваемых на соответствующие реакции. Для доброкачественного лекарственного средства, полученного из масличного ЛРС, удельный расход реагентов, выраженный соответствующими показателями (число омыления, кислотное число, содержание неомыляемых веществ, содержание свободных жирных кислот), изменяется в сравнительно небольших постоянных пределах. Кроме того, значения числа омыления и кислотного числа непосредственно связаны с жирнокислотным составом лекарственных средств, изготовленных из масличного ЛРС. Следовательно, совокупность таких ПСК, как число омыления, кислотное число и содержание неомыляемых веществ, позволяет проводить идентификацию лекарственных средств, изготовленных из масличного ЛРС.

Расчет состава жирных кислот и глицеринов лекарственных средств растительного происхождения, имеющих неспецифичный состав БАВ, производится на основании трех эмпирических ПСК - числа омыления, кислотного числа и содержания неомыляемых веществ, и позволяет достоверно и объективно идентифицировать соответствующий препарат или БАД, выявить потенциальную фальсификацию или недоброкачественную продукцию.

ВЫВОДЫ

1. На основании апостериорных сопоставительных экспериментальных исследований липофильных фракций, полученных из 7 родов растительного сырья экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода и неполярными органическими растворителями, разработана аутентичная система спецификаций для контроля качества С02-экстрактов, как новых лекарственных средств природного происхождения, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью. Предварительные результаты доклинических испытаний, в ходе которых доказано бактериостатическое и фунгистатическое действие, микробиологическая чистота, отсутствие в экспериментальных дозах токсического эффекта С02-экстрактов, являются основой для достоверного выявления, оценки и доказательства прогнозируемой терапевтической активности в ходе отдаленных клинических исследований лекарственных препаратов на основе С02-экстрактов растительного сырья.

2. Разработана технология получения фармакологически активных конституентов растительного происхождения для производства мягких лекарственных форм, основанная на выделении твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные с использованием селективного экстрагента. Эмпирически доказано,

что предложенная технологическая схема обеспечивает выход стабильного целевого продукта, содержащего сбалансированный комплекс биологически активных веществ, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие. Разработанный способ получения твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные способствует рациональному применению отечественных сырьевых запасов лекарственных растений и позволяет провести замены импортных суппозиторных или мазевых основ растительного происхождения.

3. Обоснованы принципиальные подходы и разработаны критерии обнаружения недоброкачественной продукции и потенциальных фальсификаций среди препаратов и биологически активных добавок, изготовленных из масличного растительного сырья. Предложенные методы скрининговой оценки показателей состава и качества препаратов и БАД, изготовленных из масличного ЛРС, базируются на использовании общедоступных сертифицированных методик, соответствующих рекомендациями ВОЗ.

4. Разработана методика эмпирического расчета состава жирных кислот и глицеринов объектов растительного происхождения, предназначенная для скрининговой оценки доброкачественности растительного сырья, лекарственных средств и биологически активных добавок липофильной природы, имеющих неспецифичный состав биологически активных веществ, в частности ацилглицеринов жирных кислот.

5. В результате проведенных изысканий сформирована экспериментально-теоретическая база для создания лечебно-профилактических лекарственных средств природного происхождения, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью. Предложенная аутентичная система разработки и спецификации лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья позволяет достоверно обнаружить потенциальные фальсификации или несоответствия требованиям, предъявляемым Государственными стандартами качества к оценке и валидации технологии производства лекарственных средств природного происхождения.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Фетисова А.Н. Современный подход к исследованию лекарственного растительного сырья и получаемых на его основе лекарственных средств // Сборник трудов «Лекарственные растения Ботанического сада». - М.: ММА им. И.М. Сеченова, 1996.-С. 97.

2. Фетисова А.Н., Нестерова О.В., Попков В.А. Разработка показателей качества жома плодов черной смородины // Мат. 51-й региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров ПГФА. -Пятигорск, 1996.-С. 20.

3. Фетисова А.Н., Нестерова О.В., Попков В.А. Перспективы использования масличного лекарственного растительного сырья в качестве субстанций для изготовления суппозиториев // Научные труды НИИФ «Фармацевтическая наука в решении вопросов лекарственного обеспечения». - М., 1998. - т. 37, ч. 1. - С. 242-246.

4. Фетисова А.Н., Попков В.А., Нестерова О.В. Структурирование проблемы создания фитопрепаратов с точки зрения рационального использования официнальных видов лекарственного растительного сырья и пищевых растительных источников // Мат. III международного съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения». - СПб-Пушкин, 1999. - С. 266268.

5. Фетисова А.Н., Попков В.А., Самылина И.А., Нестерова О.В. Современные методы стандартизации липофильных комплексов лекарственного растительного сырья // Мат. III международного съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения». - СПб-Пушкин, 1999. - С. 171-174.

6. Королева Е.А., Нестерова О.В., Попков В.А., Фетисова А.Н. Разделение и определение фосфолипидов плодов кориандра и укропа методом ТСХ // Мат. III международного съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения». - СПб-Пушкин, 1999. - С. 123-125.

7. Фетисова А.Н., Нестерова О.В.,. Попков В.А и др. Анализ масличности некоторых сортов плодов кориандра посевного // Научные труды НИИФ «Современные проблемы фармацевтической науки и практики». - М., 1999. - т. 38, ч. 2. - С. 302-305.

8. Фетисова А.Н., Попков В.А., Нестерова О.В. Изучение числовых показателей жома плодов фенхеля обыкновенного и жирного масла // Научные труды НИИФ «Фармация на современном этапе - проблемы и достижения». - М„ 2000. - т. 39, ч. 2. - С. 288-290.

9. Королева Е.А., Попков В.А., Нестерова О.В., Решетняк В.Ю., Фетисова А.Н. Стандартизация липидного комплекса и С02-экстракта жома плодов укропа и кориандра // Научные труды НИИФ «Фармация на современном этапе - проблемы и достижения». - М., 2000. - т. 39, ч. 2.-С. 53-57.

10. Фетисова А.Н., Нестерова О.В., Попков В.А. и др. Разработка вагинальной лекарственной формы на основе жирных масел плодов кориандра и укропа // Мат. IV международного съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения». - Великий Новгород, 2000. - С. 109-112.

11. Фетисова А.Н., Самылина И.А., Нестерова О.В. и др. Методы анализа суппозиториев с лекарственным растительным сырьем // Мат. IV международного съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения». - Великий Новгород, 2000. - С. 325-327.

12. Фетисова А.Н. Нестерова О.В. Предварительные результаты применения суппозиториев с маслом семян тыквы в терапии неспецифических воспалительных заболеваний женских половых органов // Мат. научно-практич. конф. «Традиционные методы терапии в акушерско-гинекологической практике». - М.: Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН, 2001. - С. 52-54.

1 З.Фетисова А.Н., Еремина A.B., Нестерова О.В. Сравнительный анализ показателей качества липофильных фракций лекарственного растительного сырья, полученных экстракцией органическими растворителями и жидким диоксидом углерода // Мат. V международного съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения».- СПб., 2001. -С. 139-141.

Н.Попков В.А., Фетисова А.Н., Нестерова О.В., Самылина И.А. Опыт использования фитопрепаратов на основе пищевого растительного сырья для профилактики и коррекции воспалительной патологии мочеполовой системы // Вестник РАМН.-2001 .-№2.-С. 11-13.

15.Фетисова А.Н. Лекарственные растения и хронический простатит: место фитотерапии в решении андрологических проблем // Экономический вестник фармации.-2001.-№3 (37).-С. 23-24.

16. Фетисова А.Н., Шереметьева Е.В. Особенности анализа ряда действующих веществ суппозиториев с С02-экстрактом плодов кориандра посевного // Мат. IX Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - М., 2002. - С. 714.

17. Фетисова А.Н., Шереметьева Е.В. Коррекция нарушений обмена липидов при беременности с помощью витадиойла // Мат. IX Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - М., 2002. - С. 474.

18. Фетисова А.Н., Попков В.А., Нестерова О.В. и др. Исследование химического состава неомыляемой фракции биологически активной добавки «Витадиойл» // Мат. VI международного съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения»,- СПб., 2002. - С. 597-600.

19. Фетисова А.Н., Попков В. А., Нестерова О.В. и др. Анализ соответствия качества препарата «Тыквеол» требованиям Государственных

стандартов // Мат. VI международного съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения»,- СПб., 2002. - С. 315-317.

20. Фетисова А.Н., Попков В.А., Нестерова О.В. и др. Новые фитотерапевтические возможности профилактики и лечения воспалительных заболеваний органов мочеполовой системы // Мат. юбилейной конференции «Актуальные вопросы фитотерапии» РОО «Фитотерапевтическое общество». - М., 2002. - С. 147-152.

21. Фетисова А.Н. Лекарственные средства природного происхождения в терапии хронического простатита в середине XX века // Экономический вестник фармации.-2002.-№ 5 (51). - С. 91-94.

22. Фетисова А.Н. Простатит и ДГПЖ: аспекты заболеваемости и лекарственного обеспечения // Экономический вестник фармации,-2002.-№ 6 (52).-С. 51-56.

23. Фетисова А.Н. Современные средства и методы регулирования рождаемости // Экономический вестник фармации.-2002.-№ 7 (53).-С. 57-61.

24. Фетисова А.Н. Воспалительные заболевания женской половой сферы: современные препараты // Экономический вестник фармации.-2002.-Ла 8 (54).-С. 74-78.

25. Фетисова А.Н. Препараты, применяемые при лечении импотенции // Экономический вестник фармации.-2002.-№ 10 (56).-С. 61-64.

26. Фетисова А.Н. Лекарственная помощь при климактерических расстройствах: состояние и проблемы // Экономический вестник фармации.-2002.-№ 12 (58).-С. 50-54.

27. Фетисова А.Н. Пихоцкий А.Н. Сравнительное изучение антимикробного действия эфиромасличных комплексов травы Artemisia absintium L., полученных различными технологическими методами // Мат. X Российского национального конгресса «Человек и лекарство».-М„ 2003.-С. 677.

28. Фетисова А.Н. Пихоцкий А.Н. Анализ микробиологической чистоты липофильных фракций лекарственного растительного сырья, полученных экстракцией сжиженными газами // Мат. X Российского национального конгресса «Человек и лекарство»,- М., 2003.-С. 676-677.

29. Фетисова А.Н., Пихоцкий А.Н., Нестерова О.В. Состояние проблемы расширения ассортимента лекарственных средств на основе растительного сырья для терапии воспалительных заболеваний органов женской половой сферы // Труды II научно-практич. конф. «Традиционные методы лечения в акушерско-гинекологической практике». - М.: Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН, 2003.-С. 11-13.

30. Фетисова А.Н., Пихоцкий А.Н. Использование комплекса природных антиоксидантов семян тыквы в терапии неспецифических воспалительных заболеваний органов женской мочеполовой системы: клинический опыт // Труды II научно-практич. конф. «Традиционные

методы лечения в акушерско-гинекологической практике». - М.: Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН,

2003.-С. 77-79.

31. Фетисова А.Н., Попков В.А, Пихоцкий А.Н. Особенности современных способов получения жирного масла из лекарственного растительного сырья и перспективные технологии // Мат. VII международного съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения». Фитофарм-2003,- СПб-Пушкин, 2003.-С. 93-98.

32. Фетисова А.Н., Пихоцкий А.Н. Изучение возможности использования липофильных фракций лекарственного растительного сырья, полученных экстракцией жидким диоксидом углерода, в качестве противовоспалительных средств // Мат. XI Российского национального конгресса «Человек и лекарство».- М., 2004.-С. 587.

33. Фетисова А.Н., Пихоцкий А.Н. Липофильные фракции лекарственного растительного сырья, полученные экстракцией жидким диоксидом углерода, как перспективные противогрибковые средства // Мат. XI Российского национального конгресса «Человек и лекарство».- М.,

2004.-С. 587.

34.Фетисова А.Н., Пихоцкий А.Н. Исследование влияния химической природы экстрагента на элементный состав липофильных фракций лекарственного растительного сырья // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сб. науч. тр. — Пятигорск, 2004. - Вып. 59. - С. 223-224.

35. Фетисова А.Н., Пихоцкий А.Н. Идентификация веществ синтетического происхождения в препаратах и биологически активных добавках, получаемых из масличного лекарственного растительного сырья // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сб. науч. тр. — Пятигорск, 2004. - Вып. 59.-С. 224-225.

36. Фетисова А.Н., Попков В.А. Теория и практика создания лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья для профилактики и лечения воспалительных заболеваний органов мочеполовой системы // Вестник РАМН. - 2004. - №. 6 - С. 2831.

37.Фетисова А.Н. Использование средства на основе липофильной фракции плодов черной смородины в комплексе лечебно-профилактических мероприятий при воспалении придатков матки // Восстановительная медицина и традиционные методы профилактики и лечения в акушерстве, гинекологии и перинатологии: Сб. тезисов докладов Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. ВГМУ. - Волгоград: ООО «Принт», 2004. -С. 181-183.

38. Фетисова А.Н. Профилактика осложненного течения беременности с использованием комплекса полиненасыщенных жирных кислот

растительного происхождения // Восстановительная медицина и традиционные методы профилактики и лечения в акушерстве, гинекологии и перинатологии: Сб. тезисов докладов Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. ВГМУ. - Волгоград: ООО «Принт», 2004. - С. 183-185.

39. Fetisova, A.N. Vegetable C02-extracts Qualitative and Quantitative Characteristics. In VIII International congress "Phytopharm — 2004": Mikkeli (Finland), 2004; pp. 716-720.

40.Fetisova, A.N. Modern Methods of Identification of Adulterated Production among Medicines Containing Fatty Oils. In IX International congress "Phytopharm-2005": St. Petersburg (Russia), 2005; pp. 313-317.

41.Фетисова A.H. Доклиническое изучение эффективности применения лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного происхождения, полученных экстракцией жидким оксидом углерода (IV), при микстинфекции органов женской половой сферы // Мат. Республиканской научно-практической конференции «Новые достижения в получении, изучении и применении лекарственных средств на основе природного сырья», посвященной 100-летию со дня рождения профессора РЛ. Хазанович. - Ташкент, 2006.- С. 205.

42. Фетисова А.Н. Теоретическая скрининговая оценка лекарственных средств, получаемых из масличного лекарственного растительного сырья // Мат. Республиканской научно-практической конференции «Новые достижения в получении, изучении и применении лекарственных средств на основе природного сырья», посвященной 100-летию со дня рождения профессора РЛ. Хазанович. - Ташкент, 2006,-С. 10.

43.Фетисова А.Н., Лядова Е.В., Попков В.А. и др. Изыскание средств и способов получения конституентов мазевых и суппозиторных основ природного происхождения // Научные труды VIII международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации». - М.:РУДН, 2007. - С.644-645.

44.Лядова Е.В., Фетисова А.Н., Попков В.А. и др. Разработка спецификаций для контроля качества твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные // Мат. XV Российского национального конгресса «Человек и лекарство».- М., 2008.-С. 548-549.

45.Fetisova, A.N., Lyadova, E.V. Comparative analysis of chemistry of the lipophilic fractions extracted from spingel and coriander fruits as possible sources for the soft dosage forms production // Мат. научно-практической конференции «Актуальные вопросы образования, науки и производства в фармации». - Ташкент, 2008,- С. 239-240.

46.Фетисова А.Н., Маркарян А.А., Глазкова И.Ю., Садоян В.А. Технологии получения лекарственных средств на основе липофильных фракций сырья природного происхождения (курс дистанционного обучения). Учебник. - М.: Изд-во «Серебряные нити», 2008. - 136 с.

47.Фетисова А.Н. Создание лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью: теория и практика / Под ред. В.А. Попкова. - М.: ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова Росздрава, 2008. -55 с.

48.Фетисова А.Н., Попков В.А., Кузьменко А.Н. Эмпирический расчет состава жирных кислот и глицеринов в оценке качества лекарственных средств // Вестник Московского Университета, Серия 2, Химия. - 2008. -т. 49.-№3.-С. 209-212.

49.Фетисова А.Н., Попков В.А. Теоретические и экспериментальные аспекты обнаружения потенциальных фальсификаций и недоброкачественной продукции среди лекарственных средств, изготовленных из жиромасличного растительного сырья // Вестник РАМН. - 2008. - № 2. - С.29-33.

50.Фетисова А.Н. Сравнительный анализ состава биологически активных веществ растительного происхождения, полученных экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода и неполярными органическими растворителями // Химическая технология. - 2008. -т. 9. - № 3. - С. 123127.

51. Фетисова А.Н. Технологические аспекты получения твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные // Химическая технология—2008 - т. 9.- № 9. - С.457-460.

52.Фетисова А.Н. Проблемы использования органических растворителей для извлечения биологически активных веществ липофильной природы из растительного сырья // Химическая технология. — 2008. - т. 9. - № 10. -С.531-534.

53.Фетисова А.Н., Попков В.А., Лядова Е.В. Описание изобретения к патенту 1Ш 2318867 «Способ получения суппозиторной основы» // Инновационные разработки ученых и специалистов Московской медицинской академии имени И.М. Сеченова (Каталог патентов). — М.: Издательский дом «Русский врач», 2008.-С.114-115.

54.Лядова Е.В., Фетисова А.Н. Исследование состава неомыляемых биологически активных веществ твердых липофильных фракций из плодов фенхеля обыкновенного и кориандра посевного // Мат. XVI Российского национального конгресса «Человек и лекарство».- М., 2009.-С. 694.

Патенты:

1. Патент 2057540 РФ, МПК А 61К 35/78, 9/02. Способ получения суппозиториев из лекарственного растительного сырья./И.А. Самылина, В.А. Попков, О.В. Нестерова, А.Н. Фетисова, О.Б. Лоран и др. (РФ); заявл. 01.10.1992; опубл. 10.04.1996, бюл. № 10.

2. Патент 2077889 РФ, МПК А 61К 35/78, 9/02. Способ лечения хронического простатита./И.А. Самылина, В.А. Попков, О.В. Нестерова, А.Н. Фетисова, О.Б. Лоран и др. (РФ); заявл. 24.02.1993; опубл. 27.04.1997, бюл. № 12.

3. Патент 2089211 РФ, МПК А 61К 35/78, 9/02. Средство для лечения хронического простатита./ О.В. Нестерова, А.Н. Фетисова, В.И. Деменко, В.А. Попков, И.А. Самылина, О.Б. Лоран и др. (РФ); заявл. 05.07.1995; опубл. 10.09.1997, бюл. № 25.

4. Патент 2104022 РФ, МПК А 61К 35/78, 9/02. Средство для лечения хронических воспалений придатков матки./ О.В. Нестерова, А.Н. Фетисова, В.И. Деменко, В.А. Попков, И.А. Самылина и др. (РФ); заявл. 05.07.1995; опубл. 10.02.1998, бюл. № 4.

5. Патент 2147890 РФ, МПК А 61К 35/78, С 11В 1/04, 1/10. Способ получения жирного масла из плодов растений семейства Сельдерейные./А.Н. Фетисова, О.В. Нестерова, Е.А. Королева, В.А. Попков, И.А. Самылина (РФ); заявл. 02.06.1999; опубл. 27.04.2000, бюл. № 12.

6. Патент 2318867 РФ, МПК С 11В 1/10. Способ получения суппозиторной основы./А.Н. Фетисова, В.А. Попков, Е.В. Лядова (РФ); заявл. 05.06.2006; опубл. 10.03.2008, бюл. № 7.

Список сокращений

БАВ биологически активные вещества

БАД биологически активная добавка (добавки)

ВЭЖХ высокоэффективная жидкостная хроматография

ГЖХ газожидкостная хроматография

гсклс Государственные стандарты качества лекарственных средств

ЛРС лекарственное растительное сырье

пнжк полиненасыщенные жирные кислоты

пек показатели состава и качества

СКФ сверхкритические флюиды

ТАГ триацилглицерины

ТЛФ твердая липофильная фракция (фракции)

тех тонкослойная хроматография

Подписано к печати 30.06.2009

Формат 68x84/16

Бумага офсетная.

Печать трафаретная.

Усл.-печ. л. 3,25

Тираж 100 экз.

Заказ № 70

Отпечатано в издательском центре ООО «УМЦ «ТРИАДА» 127550, Москва, Лиственничная аллея, 7-2

Актуальность темы.

Критический анализ медико-социальной проблемы лекарственной полипрогмазии указывает на целесообразность углубления теоретических и эмпирических знаний в области разработки лекарственных средств природного происхождения, обладающих сочетанным фармакологическим действием за счет содержания комплекса биологически активных веществ (БАВ). В контексте проблемы актуальным представляется проведение изысканий по созданию лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью.

Перспективным технологическим способом получения липофильных фракций природного происхождения, обладающих указанным комбинированным фармакологическим действием, является экстракция сверхкритическими флюидами (СКФ), в частности, сверхкритическим диоксидом углерода. Разработки по экстракции липофильных фракций из растительного сырья диоксидом углерода в сверхкритических условиях имеют отечественный приоритет и находят широкое применение в пищевой отрасли промышленности с 60-х гг. XX века. С 90-х гг. XX века по настоящее время отмечается возрастание практического интереса фармацевтической отрасли к созданию лечебно-профилактических средств на основе липофильных фракций, извлекаемых из растительного сырья сверхкритическим диоксидом углерода. Данные изыскания имеют локальный характер и в целом направлены на разработку биологически активных добавок (БАД).

Системный анализ научных информационных источников показывает, что в контексте решения проблемы лекарственной полипрогмазии и ятрогенной патологии актуальным направлением также является изыскание средств и способов получения из отечественных видов лекарственного растительного сырья (ЛРС) и пищевых растительных источников фармакологически активных конституентов для производства мягких лекарственных форм (суппозиториев и мазей).

Однако современная тенденция роста производства, распространения, использования низкокачественных и фальсифицированных лекарственных препаратов и БАД природного происхождения, в частности изготовленных на основе масличного растительного сырья, определяет несовершенство существующих подходов к процессу их разработки, стандартизации и валидации производства. Увеличение доли фальсифицированных л лекарственных средств представляет значимую медико-социальную проблему, связанную с угрозой здоровью населения страны и оборачивающуюся многомиллионными убытками для государственной казны и частных производителей. В соответствии с разработанным ВОЗ «Планом действий по борьбе с фальсифицированными лекарственными средствами» определение показателей состава и качества (ПСК) лекарственных средств является одной из основных составляющих процесса выявления фальсифицированной и низкокачественной продукции среди препаратов и БАД, изготовленных из масличного ЛРС.

Вышеуказанная проблематика обусловливает необходимость проведения комплексных изысканий, базирующихся на постулатах фармацевтической и медицинской науки и направленных на формирование единообразных подходов к разработке, стандартизации и валидации производства лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, обладающих сочетанным фармакологическим действием.

Направление исследований предусматривает сопоставительный априорный и апостериорный анализ особенностей производства, характеристик показателей состава и качества липофильных фракций растительного сырья, извлекаемых с использованием различных по химической природе экстрагентов; формирование экспериментально-теоретической базы и синтез аутентичной системы, позволяющей создавать качественные лечебно-профилактические средства на основе липофильных фракций растительного сырья, обладающих сочетанной фармакологической активностью.

Целью исследования является создание аутентичной системы разработки и спецификации лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью.

Сформулированная цель исследования обусловила постановку следующих задач исследования:

1. Провести сопоставительный анализ показателей состава и качества липофильных фракций, полученных из различных видов растительного сырья экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода и неполярными органическими растворителями, и обосновать критерии спецификаций для контроля качества СОг-экстрактов, как новых лекарственных средств растительного происхождения, содержащих комплекс биологически активных веществ, обладающих сочетанной фармакологической активностью.

2. Разработать способ получения фармакологически активных конституентов растительного происхождения для производства мягких лекарственных форм из отечественного сырья.

3. Обосновать концептуальные подходы обнаружения недоброкачественной продукции и потенциальных фальсификаций среди препаратов и биологически активных добавок, изготовленных из масличного растительного сырья.

4. Разработать эмпирическую расчетную методику скрининговой оценки доброкачественности объектов растительного происхождения, характеризующихся неспецифичным составом биологически активных веществ, в частности ацилглицеринов жирных кислот.

5. На основании результатов теоретических и эмпирических изысканий сформировать аутентичную систему разработки и спецификации лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных исследований ММА им. И.М. Сеченова и является составной частью комплексной программы НИР кафедры общей химии «Новые знания и подходы в оценке качества и сертификации биологически активных соединений синтетического и природного происхождения, лекарственных препаратов, изделий медицинской техники (технологические аспекты)» (номер Государственной регистрации 01.200.118.796). Научная новизна.

Впервые проведено теоретическое обобщение и обоснование априорной информации, касающейся процесса получения липофильных фракций из JIPC экстракцией жидким оксидом углерода (IV) и перспектив использования С02-экстрактов JIPC для производства лечебно-профилактических лекарственных средств, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью. Апостериорные сопоставительные экспериментальные исследования липофильных фракций, полученных из 7 родов растительного сырья экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода, позволили, с учетом требований Государственных стандартов качества лекарственных средств (ГСКЛС), разработать аутентичную систему спецификаций для контроля качества С02-экстрактов, как новых лекарственных средств природного происхождения.

Впервые доказана бактериостатическая и фунгистатическая активность С02-экстрактов семян винограда культурного (Vitis vinifera L.), жома плодов смородины черной (Ribes nigrum L.), а также ССЬ-экстракта шрота семян тыквы в отношении Staphylococcus aureus и Candida albicans. Также впервые I выявлена фунгистатическая активность С02-экстрактов плодов кориандра посевного (Coriandrum sativum L.), укропа огородного (Anethum graveolens L.) и травы полыни горькой (Artemisia absinthium L.) в отношении наиболее распространенных поверхностных дерматофитов, а именно Microsporum canis и Trichophyton mbrum.

Разработан способ получения конституентов растительного происхождения для производства мягких лекарственных форм из отечественных видов растительного сырья. Способ основан на использовании J1PC, произрастающего на территории Российской Федерации, и экстрагента (гексана), широко применяемого в фармацевтическом и пищевом производстве. Оригинальная технологическая схема позволяет упростить процесс извлечения твердой липофильной фракции (ТЛФ) из плодов растений семейства Сельдерейные, увеличить в-ней содержание сбалансированного комплекса БАВ, обладающих антиоксидантным и противовоспалительным действием (каротиноидов, токоферолов, фосфолипидов), обеспечивает получение стабильного целевого продукта. Предложенный способ предусматривает рациональное применение отечественных сырьевых запасов лекарственных растений и позволяет провести замены импортных конституентов для производства мягких лекарственных форм.

Впервые обоснованы принципиальные подходы и разработаны критерии для обнаружения недоброкачественной продукции и потенциальных фальсификаций среди препаратов и биологически активных добавок, изготовленных из масличного растительного сырья, характеризующегося неспецифичным составом биологически активных веществ.

Для скрининговой оценки потенциальных фальсификаций и выявления недоброкачественной продукции среди указанной группы лекарственных средств разработана методика расчета состава жирных кислот и глицеринов на основании значений эмпирических показателей состава и качества.

Экспериментально-теоретические исследования формируют основу аутентичной системы создания и стандартизации лекарственных средств растительного происхождения на основе липофильных фракций, обладающих сочетанной фармакологической активностью. Аутентичная система показателей состава и качества включает спецификации й общедоступные сертифицированные методы и позволяет достоверно обнаруживать потенциальные фальсификации или несоответствия требованиям, предъявляемым Государственными стандартами качества к оценке и валидации технологии производства лекарственных средств природного происхождения.

Степень новизны проведенных исследований подтверждена шестью патентами РФ.

Практическая значимость и внедрение результатов исследования.

В результате проведенных изысканий сформирована экспериментально-теоретическая база для создания лечебно-профилактических лекарственных средств природного происхождения, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио-и фунгистатической активностью.

Разработанная аутентичная система спецификаций для контроля качества лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью, позволяет объективно установить подлинность изученных объектов и обнаружить потенциальные фальсификации или несоответствия требованиям, предъявляемым Государственными стандартами качества к лекарственным средствам, получаемым из растительного сырья. Предварительные результаты доклинических испытаний являются основой для достоверного выявления, оценки и доказательства прогнозируемой терапевтической активности в ходе отдаленных клинических исследований лекарственных препаратов на основе С02-экстрактов растительного сырья.

Результаты исследования положены в основу инновационной разработки и инновационного бизнес-предложения: «Лекарственные средства на основе липофильных фракций лекарственного растительного сырья для профилактики и лечения воспалительных заболеваний органов мочеполовой системы: технология создания и перспективы применения». Данный инновационный проект был представлен в финале конкурсной программы инновационных проектов «Фабрика инноваций: прорыв в будущее», проводившейся в рамках V Московского Международного Салона инноваций и инвестиций (15-18 февраля 2005 г.), и награжден Дипломом Федеральной Службы по интеллектуальной собственности, патентам и товарным знакам.

Разработанная автором методика расчета состава жирных кислот и глицеринов объектов природного происхождения внедрена в учебный процесс на химическом факультете МГУ им. М.В. Ломоносова и используется при изучении разделов, связанных с анализом подлинности и доброкачественности объектов липофильной природы. Указанная методика также внедрена в ГОУ ВПО РУДН (медицинский факультет, кафедра общей фармацевтической и биомедицинской технологии) при изучении модулей, включающих принципы валидации технологии производства и качества препаратов, изготовленных на основе липофильных фракций растений.

По результатам исследования в рамках реализации «Программы формирования инновационного образовательного пространства ММА им. И.М. Сеченова» (приоритетный национальный проект «Образование») автором выполнен проект «Разработка учебно-методического пособия курса дистанционного обучения «Технологии получения лекарственных средств на основе липофильных фракций сырья природного происхождения» (тема № 138, приказ № Р-98 от 27 марта 2007 г.) и создан одноименный учебник, являющийся основой учебно-методического обеспечения курса дистанционного обучения для повышения квалификации и переподготовки специалистов, работающих на фармацевтическом производстве и в аптечной сети, имеющей рецептурно-производственные отделы. Учебник «Технологии получения лекарственных средств на основе липофильных фракций сырья природного происхождения (курс дистанционного обучения)» рекомендован Учебно-методическим объединением по медицинскому и фармацевтическому образованию вузов России для системы послевузовского профессионального образования провизоров (УМО-51-Д 12 февраля 2008 г.). Курс дистанционного обучения «Технологии получения лекарственных средств на основе липофильных фракций сырья природного происхождения» внедрен в ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова Росздрава, факультет послевузовского профессионального образования провизоров, кафедра фармации с курсом социальной фармации и в ГОУ Институт повышения квалификации Федерального медико-биологического агентства (ИГЖ ФМБА) России, кафедра фармации.

Апробация работы. Материалы исследования были представлены для обсуждения на следующих конференциях, съездах, конгрессах: III, IX-XI, XV и XVI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1996; Москва, 2002-2004; Москва, 2008; Москва 2009); 51-ой региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров ПГФА (Пятигорск, 1996); научно-практической конференции, посвященной 50-тилетию Ботанического сада ММА им. И.М. Сеченова (Москва, 1996); юбилейной конференции «Актуальные вопросы фитотерапии» РОО «Фитотерапевтическое общество» (Москва, 2002); I и II научно-практических конференциях Научного центра акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН «Традиционные методы лечения в акушерско-гинекологической практике» (Москва, 2001; Москва, 2003); 59-й региональной конференции по фармации и фармакологии ПГФА «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2004); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Восстановительная медицина и традиционные методы профилактики и лечения в акушерстве, гинекологии и перинатологии» (Волгоград, 2004); III-IX Международных съездах «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» (Санкт-Петербург-Пушкин, 1999; Великий Новгород, 2000; Санкт-Петербург, 2001; Санкт-Петербург, 2002; Санкт-Петербург-Пушкин, 2003; Миккели (Финляндия), 2004; Санкт-Петербург, 2005); Республиканской научно-практической конференции «Новые достижения в получении, изучении и применении лекарственных средств на основе природного сырья», посвященной 100-летию со дня рождения профессора P.JL Хазанович (Ташкент, 2006); VIII Международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации» (Москва, 2007); научно-практической конференции «Актуальные вопросы образования, науки и производства в фармации» (Ташкент, 2008).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 60 работ, в том числе монография, учебник для системы послевузовского профессионального образования провизоров, созданный в рамках программы формирования инновационного образовательного пространства ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова Росздрава (Приоритетный национальный проект «Образование»), 7 статей в журналах, рекомендованных ВАК РФ для публикации результатов диссертаций на соискание ученой степени доктора наук, 6 патентов на изобретения.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. На основании апостериорных сопоставительных экспериментальных исследований липофильных фракций, полученных из 7 родов растительного сырья экстракцией сверхкритическим диоксидом углерода и неполярными органическими растворителями, разработана аутентичная система спецификаций для контроля качества СОг-экстрактов, как новых лекарственных средств природного происхождения, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью. Предварительные результаты доклинических испытаний, в ходе которых доказано бактериостатическое и фунгистатическое действие, микробиологическая чистота, отсутствие в экспериментальных дозах токсического эффекта С02-экстрактов, являются основой для достоверного выявления, оценки и доказательства прогнозируемой терапевтической активности в ходе отдаленных клинических исследований лекарственных препаратов на основе С02-экстрактов растительного сырья.

2. Разработана технология получения фармакологически активных конституентов растительного происхождения для производства мягких лекарственных форм, основанная на выделении твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные с использованием селективного экстрагента. Эмпирически доказано, что предложенная технологическая схема обеспечивает выход стабильного целевого продукта, содержащего сбалансированный комплекс биологически активных веществ, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие. Разработанный способ получения твердых липофильных фракций из плодов растений семейства Сельдерейные способствует рациональному применению отечественных сырьевых запасов лекарственных растений и позволяет провести замены импортных суппозиторных или мазевых основ растительного происхождения.

3. Обоснованы принципиальные подходы и разработаны критерии обнаружения недоброкачественной продукции и потенциальных фальсификаций среди препаратов и биологически активных добавок, изготовленных из масличного растительного сырья. Предложенные методы скрининговой оценки показателей состава и качества препаратов и БАД, изготовленных из масличного ЛРС, базируются на использовании общедоступных сертифицированных методик, соответствующих рекомендациями ВОЗ.

4. Разработана методика эмпирического расчета состава жирных кислот и глицеринов объектов растительного происхождения, предназначенная для скрининговой оценки доброкачественности растительного сырья, лекарственных средств и биологически активных добавок липофильной природы, имеющих неспецифичный состав биологически активных веществ, в частности ацилглицеринов жирных кислот.

5. В результате проведенных изысканий сформирована экспериментально-теоретическая база для создания лечебно-профилактических лекарственных средств природного происхождения, сочетающих противовоспалительное и антиоксидантное действие с бактерио- и фунгистатической активностью. Предложенная аутентичная система разработки и спецификации лекарственных средств на основе липофильных фракций растительного сырья позволяет достоверно обнаружить потенциальные фальсификации или несоответствия требованиям, предъявляемым Государственными стандартами качества к оценке и валидации технологии производства лекарственных средств природного происхождения.

ГЛОССАРИЙ*

Активный эксперимент - эксперимент, при планировании и анализе результатов которого исследователь учитывает рекомендации математической теории эксперимента.

Априорная информация - сведения об объекте, подлежащем изучению, имеющиеся у исследователя до постановки опытов.

Брак (забракованная продукция) - продукт, изготовленный с нарушением требований технологической документации и/или не соответствующий требованиям нормативной документации.

Безопасность - отсутствие недопустимого риска, связанного с возможностью нанесения ущерба.

Безопасность лекарственных средств — характеристика лекарственных средств, основанная на сравнительном анализе их эффективности и оценки риска причинения вреда здоровью.

Биозагрязнение — уровень и вид (например, неприемлемые или недопустимые) микроорганизмов, которые могут присутствовать в сырье, промежуточной продукции или готовых лекарственных средствах. Биозагрязнение не считается контаминацией, если не превышены допустимые пределы содержания или не обнаружены микроорганизмы, определяемые как недопустимые.

Валидация — документированное подтверждение соответствия оборудования, условий производства, технологического процесса, качества полупродукта и готового продукта действующим регламентам и/или требованиям нормативной документации. - глоссарий составлен на основании терминов и определений, представленных в цитируемых источниках (см. библиографический указатель).

Валидированный передел количественного определения — для примесей с уровнем содержания 0,1% валидированный предел количественного определения должен составлять 0,05% или менее. Для примесей с более высокими уровнями могут быть установлены более высокие пределы количественного определения.

Валидация производственного процесса — действия, доказывающие в соответствии с принципами вМР, что какая-либо методика, процесс, оборудование, сырье, деятельность или система действительно приводят к ожидаемым результатам.

Возможная примесь - примесь, которая по теоретическим соображениям может появиться в результате или во время производства. В действительности может присутствовать или не присутствовать в новой субстанции.

Вспомогательные материалы — вещества и материалы, используемые в процессе производства готового продукта, но не предназначенные для отдельного использования как лекарственные средства.

Государственные стандарты качества лекарственных средств нормативные документы, содержащие совокупность требований, обеспечивающих качество, эффективность и безопасность лекарственных средств. Государственными стандартами качества лекарственных средств являются Общие фармакопейные статьи и Фармакопейные статьи. Требования Государственных стандартов качества лекарственных средств обязательны для предприятий и организаций, занятых в сфере обращения лекарственных средств.

Государственный стандартный образец - стандартный образец, параметры качества которого регламентируются фармакопейной статьей, утвержденной в установленном порядке.

Готовый продукт - лекарственное вещество, прошедшее все стадии производственного процесса, включая упаковку и маркировку.

Давление отделения экстракта — параметры давления в сборнике экстракционной установки, при которых происходит выпаривание основного экстрагента. Путем изменения этого параметра возможно регулирование состава получаемого экстракта при постоянных параметрах рабочего давления экстракционной установки.

Доклинические исследования лекарственных средств — получение научными методами оценок и доказательств эффективности и безопасности лекарственных средств.

Докритическая экстракция — метод экстракции, при котором используется диоксид углерода в сжиженном состоянии, т.е. в состоянии до критической точки (температура до 31,1 °С и давление до 7,3 кПа).

Значимость - условие, показывающее, что некоторые характеристики, найденные из двух или более выборок, различаются (одна от другой или от иных величин), в большей степени, чем можно ожидать вследствие случайных колебаний в выборках.

Идентификация - процедура, посредством которой устанавливается соответствие продукции требованиям, предъявляемым к ней в нормативных или информационных документах.

Идентифицируемая примесь - примесь, для которой установлена структурная характеристика.

Изучаемый препарат — лекарственная форма, содержащая активный препарат или плацебо, которая проходит испытание или используется в качестве препарата сравнения, включая препараты, разрешенные к применению, но используемые и составленные иначе, чем это предусмотрено в разрешении; или применяемые в иных, нежели это разрешено, условиях; или исследуемые на предмет получения дальнейшей информации об уже разрешенном применении.

Интервал варьирования - разность между двумя натуральными значениями фактора, соответствующая единице его кодированного значения.

Информация о безопасности - основная часть информации, устанавливающая биологическую безопасность каждой индивидуальной примеси или данного профиля примесей при установленном уровне (уровнях).

Исследования на стадии химической разработки — исследования, проводимые в целях масштабирования, оптимизации и валидации процесса производства новой субстанции.

Качество - совокупность признаков, определяющих свойства готового продукта, его соответствие предназначенному применению и основным параметрам технологического процесса, включенным в регистрационные материалы.

Качество лекарственных средств — соответствие лекарственных средств Государственному стандарту качества лекарственных средств. Квалификация - процесс получения и оценки данных, на основании которых определяется биологическая безопасность индивидуальной примеси или данного профиля примесей при установленном уровне (уровнях). Клинические исследования лекарственных средств - получение научными методами оценок и доказательств эффективности и безопасности лекарственных средств, данных об ожидаемых побочных эффектах от применения лекарственных средств и эффектах взаимодействия с другими лекарственными средствами.

Компоненты с известной терапевтической активностью - вещества или группа веществ, химическое строение которых установлено, и известна их роль в терапевтической активности растительного сырья или препарата на его основе.

Контаминация — нежелательное внесение примесей химической или микробиологической природы или инородных веществ в исходное сырье, промежуточную продукцию или готовое лекарственное средство во время технологического процесса, отбора проб, упаковки или переупаковки, хранения и транспортирования.

Контроль качества — часть ОМР, посвященная отбору проб, проведению испытаний и выдаче соответствующих документов, гарантирующих, что все необходимые испытания действительно были проведены; что в производстве были использованы сырье, вспомогательные и упаковочные материалы требуемого качества, и что готовый продукт был реализован только в том случае, если его качество отвечало требованиям соответствующей нормативной документации.

Контроль качества не ограничивается лабораторными работами, он должен быть вовлечен в принятие всех решений, касающихся качества продукции. Независимость контроля качества от производства считается основным принципом удовлетворительной работы системы контроля качества). Контроль процесса производства - виды контроля, включая постадийный контроль, обеспечивающие соответствие качества готового продукта требованиям нормативной документации. Контроль выполняется во время производства с целью наблюдения за производственным процессом и при необходимости корректировки технологических параметров. Контроль окружающей среды и чистоты оборудования является также частью контроля процесса производства.

Критерии приемлемости числовые пределы, интервалы или другие подходящие критерии приемлемости результатов испытаний. Критическая точка — сочетание критических значений температуры и давления, при которых исчезает различие в свойствах жидкой и газообразной фаз вещества.

Лекарственные средства - вещества, применяемые для профилактики, диагностики, лечения болезни, предотвращения беременности, полученные из крови, плазмы крови, а также органов, тканей человека или животного, растений, минералов, методами синтеза или с применением биологических технологий. К лекарственным средствам относятся также вещества растительного, животного или синтетического происхождения, обладающие фармакологической активностью и предназначенные для производства и изготовления лекарственных препаратов.

Лекарственные препараты - дозированные лекарственные средства в определенной лекарственной форме.

Лекарственные средства растительного происхождения - лекарственные препараты, содержащие в качестве активных субстанций исключительно сырье растительного происхождения и/или препараты из растительного сырья.

Лекарственная форма - придаваемое лекарственному средству или лекарственному растительному сырью удобное для применения состояние, при котором достигается необходимый лечебный эффект. Лепесток масличного ядра - полупродукт, получаемый при плющении масличного ядра, масличного сырья или форпрессового жмыха, представляющий собой пластинчатые частицы.

Маркеры - компоненты растительного сырья с установленным химическим строением, представляющие интерес в целях контроля. Маркеры могут быть использованы для вычисления количества растительного сырья или препарата на его основе в готовом лекарственном препарате, если маркер был количественно определен в растительном сырье или препарате на его основе при испытании растительного сырья.

Масличное сырье - семена и плоды масличных растений, маслосодержащие отходы эфиромасличного и консервного производства, используемые для промышленного извлечения пищевых и технических растительных масел. Материальный баланс - сравнение теоретически возможного и практически полученного выхода готового продукта. Мисцелла - раствор липофильной фракции в растворителе. Модификатор — сорастворитель, используемый совместно со сверхкритическим экстрагентом и изменяющий его растворяющую способность, например, посредством изменения полярности. Как правило, вносится в количестве до 10%.

Надлежащая клиническая практика (Good Clinical Practice; GCP) — стандарт планирования, организации, проведения, мониторинга, аудита, документирования клинических исследований, а также анализа и представления их результатов, служащий гарантией достоверности и точности полученных данных и представленных результатов, а также обеспечивающий защиту прав, здоровья и конфиденциальности субъектов исследования.

Надлежащая производственная практика лекарственных средств (Good Manufacturing Practices for pharmaceutical products; GMP) - часть обеспечения качества, которая гарантирует, что продукция постоянно производится и контролируется по стандартам качества, соответствующим ее назначению и требованиям спецификации.

Недоброкачественное лекарственное средство — лекарственное средство, пришедшее в негодность, и/или лекарственное средство с истекшим сроком годности.

Незаконные копии лекарственных средств — лекарственные средства, поступившие в обращение с нарушением патентного законодательства РФ. Неидентифицируемая примесь - примесь, которая определена только по качественным аналитическим показателям (например, по времени удерживания на хроматограмме).

Номер серии - цифровое, буквенное или буквенно-цифровое обозначение, которое специфически идентифицирует серию и позволяет определить всю последовательность производственных и контрольных операций, ведущих к получению данной серии.

Нормативный документ - документ, в котором изложены установленные в процессе стандартизации правила, принципы, характеристики, касающиеся различных видов деятельности или их результатов, и которые доступны широкому кругу заинтересованных в них пользователей. Обеспечение качества - система факторов, по отдельности или в целом влияющих на качество продукции. Совокупность организационных мероприятий, выполняемых с целью гарантии соответствия качества лекарственных препаратов их назначению.

Область стандартизации - совокупность взаимосвязанных объектов стандартизации.

Общая фармакопейная статья — Государственный стандарт качества лекарственного средства, содержащий основные требования к лекарственной форме и/или описание стандартных методов контроля лекарственных средств.

Объект (предмет) стандартизации - продукция или процесс, для которых разрабатываются соответствующие требования, характеристики, параметры, правила и т.п.

Ожидаемый выход — количество вещества или процент от теоретического выхода, ожидаемые на любой соответствующей стадии технологического процесса, основанные на данных, полученных ранее в лаборатории, при опытно-промышленном или промышленном производстве. Отклонение - отступление от утвержденной инструкции или установленного стандарта.

Отходы - побочные продукты, получаемые в процессе производства готового продукта.

Оценка соответствия - любая процедура, прямо или косвенно используемая для определения соответствия продукции требованиям технических регламентов или стандартов. В большинстве случаев соответствие подтверждается сертификацией. К процедуре оценке соответствия относятся: отбор проб, испытания, контроль, регистрация, аккредитация, утверждение (принятие), а также их комбинация.

Патентованное лекарственные средства — лекарственные средства, право на производство и продажу которых охраняется патентным законодательством РФ.

Перекрестная контаминация - возможное загрязнение исходного сырья, материалов, полупродукта или готового продукта во время производства другим видом сырья, полупродукта или готового продукта. Побочное действие лекарственного средства — любые вредные и непредусмотренные реакции на лекарственный препарат (т.е. те случаи, когда нельзя исключить взаимосвязь между нежелательной реакцией и препаратом) независимо от его дозировки.

Побочная реакция — любая неблагоприятная с медицинской точки зрения реакция пациента или испытуемого, которому был назначен лекарственный препарат, и не обязательно имеющая причинно-следственную связь с этим препаратом. Под побочной реакцией может, таким образом, пониматься любой неблагоприятный или непредусмотренный признак (включая ненормальный лабораторный показатель), симптом или заболевание, появление которого связано по времени с использованием лекарственного (исследуемого) препарата вне зависимости от того, вызвана реакция назначением лекарственного (исследуемого) препарата или нет. Полипрогмазия - вид терапии, когда для лечения заболевания научно необоснованно используется большое число медикаментов. Полупродукт — частично обработанное сырье или лекарственные вещества, которые должны пройти дальнейшие стадии производственного процесса, прежде чем они станут лекарственным средством.

Посторонняя примесь - примесь, источником которой не является производственный процесс.

Препараты из растительного сырья - измельченное или порошкованное растительное сырье, экстракты, настойки, жирные или эфирные масла, соки и т.д., приготовленные из растительного сырья, и препараты, изготовление которых включало процессы фракционирования, очистки и концентрирования.

Изолированные компоненты с известным химическим строением или их смеси не рассматриваются в качестве препаратов из растительного сырья.

Частью препаратов из растительного сырья могут являться и другие субстанции, такие как растворители, разбавители, консерванты, содержание которых указывается в соответствующей нормативной документации). Производство (производственный процесс) — все операции по производству готовых лекарственных средств. В том числе приобретение сырья, вспомогательных, упаковочных и маркировочных материалов и полупродуктов до изготовления и упаковки; выдача разрешения на реализацию, хранение и транспортирование готовых лекарственных средств и относящиеся к этому виды контроля, включая контроль качества готового продукта.

Производство лекарственных средств - серийное получение лекарственных средств предприятиями-изготовителями, имеющими лицензии на производство лекарственных средств, в соответствии с правилами организации производства и контроля качества лекарственных средств, утвержденными федеральным органом контроля качества лекарственных средств.

Протокол - документ, содержащий предпосылку, обоснование, цель (и) исследования, и описывающий план, методологию и организацию исследования, включая статистические подходы к планированию и анализу исследования.

Протокол валидации - документально оформленный план, указывающий, как должна проводиться валидация, и определяющий критерии приемлемости. В протоколе для валидации производственного процесса должны быть указаны технологическое оборудование, критические параметры процесса и его рабочие режимы, характеристики продукции, отбор проб, данные испытаний, которые необходимо собрать, количество валидационных циклов и приемлемые результаты испытаний. Профиль примесей - описание идентифицируемых и неидентифицируемых примесей, присутствующих в новой субстанции.

Рабочее давление экстракции - параметры давления основного сверхкритического экстрагента при которых поддерживается поток через экстрагируемый материал. При определенных параметрах происходит экстракция различных компонентов сырья, вследствие этого возможно варьирование состава биологически активных веществ экстракта. Рабочий стандартный образец - образец серийной субстанции, отвечающий требованиям соответствующего стандарта качества лекарственных средств.

Разработка новых лекарственных средств — поиск новых фармакологически активных веществ, последующее изучение их лекарственных свойств и доклинические исследования.

Растительное сырье - сырье растительного происхождения, используемое в медицинских целях. Растительное сырье или препараты из него рассматриваются в качестве единой активной субстанции независимо от того, известны или нет компоненты, обладающие терапевтической активностью.

Рандомизация - процесс отнесения испытуемых к группам лечения или контроля с использованием процедуры, при которой только беспристрастный случай определяет, в какую группу попадет испытуемый (случайное распределение).

Рутинные и периодические испытания - рутинные испытания проводят для каждой промышленной серии промежуточной, нерасфасованной или готовой продукции. При необходимости эти испытания дополняют специальными испытаниями, которые называются «периодические испытания»; их проводят с определенной периодичностью, установленной для каждого конкретного случая.

Сверхкритический флюид - любое вещество, находящееся при температуре и давлении выше критической точки, что обеспечивает такое состояние вещества, при котором исчезает различие между жидкой и газовой фазой.

Сверхкритическая флюидная экстракция биологически активных веществ — процесс извлечения биологически активных веществ из сырья природного происхождения с использованием сверхкритических флюидов в качестве экстрагентов.

Серия - определенное количество однородного готового продукта, изготовленного за один производственный цикл при постоянных условиях. Сертификат качества лекарственного средства - документ, подтверждающий соответствие качества лекарственного средства Государственному стандарту качества лекарственных средств Соответствие - соблюдение всех установленных требований к продукции или процессу.

Сорастворитель - экстрагент, используемый совместно со сверхкритическим флюидом для преимущественного выделения определенных групп веществ.

Стандартизация - деятельность, направленная на разработку и установление требований, норм, правил, характеристик как обязательных для выполнения, так и рекомендуемых, обеспечивающая право потребителя на приобретение товаров надлежащего качества за приемлемую цену. Стандарты качества лекарственных средств — нормативные документы, содержащие соответствующие требования к лекарственным средствам, подразделяющиеся на следующие категории: Государственные стандарты качества лекарственных средств; Фармакопейная статья предприятия на лекарственное средство конкретного предприятия.

Спецификация - список детально описанных требований, которым должен удовлетворять продукт или материал, используемый или получаемый в процессе производства лекарственного средства, с указанием методов и методик испытаний и допустимых норм.

Спецификация на готовую продукцию — монография, определяющая качественные и количественные характеристики, которым должна соответствовать готовая продукция на момент ее производства (выпуска), с указанием методик испытаний и допустимых пределов.

Спецификация на готовую продукцию (до окончания срока хранения) — монография, определяющая качественные и количественные характеристики, которым должен соответствовать лекарственный препарат (находящийся в продаже) в течение установленного срока хранения, с указанием методик испытаний и допустимых пределов.

Специфицированная примесь — идентифицируемая или неидентифицируемая примесь, которая выбрана для включения в спецификации на новую субстанцию, индивидуально внесена в перечень и содержание которой ограничено для обеспечения безопасности и качества новой субстанции.

Стандарт качества лекарственного средства - нормативный документ, содержащий перечень нормируемых показателей и методов контроля качества лекарственных средств.

Стандартные образцы, применяемые для контроля качества лекарственных средств - вещества, предназначенные для сравнения испытуемых лекарственных средств при проведении их анализа с использованием физико-химических и биологических методов. Срок годности - период времени, в течение которого гарантируется соответствие качества готового лекарственного средства требованиям соответствующего Государственного стандарта качества лекарственного средства. В соответствии со сроком годности маркировка должна содержать указание об истечении срока годности.

Субстанция - вещество растительного, животного, микробного или синтетического происхождения, обладающее фармакологической активностью и предназначенное для производства лекарственных препаратов.

Сырье — исходные вещества и материалы, используемые для получения готового продукта, за исключением упаковочных и маркировочных материалов.

Теоретический выход — количество, которое должно быть произведено на любой соответствующей стадии технологического процесса, определенное на основании количества используемого вещества, при отсутствии каких-либо потерь или отклонений в условиях реального технологического процесса. Токсичная примесь — примесь, обладающая значительной нежелательной биологической активностью.

Тяжелые побочные реакции - любая неблагоприятная с медицинской точки зрения реакция, независимо от дозы препарата, которая: привела к смерти; создала угрозу жизни; потребовала госпитализации или удлинила пребывание в стационаре; привела к стойкой или значительной утрате трудоспособности или недееспособности; привела к врожденной аномалии/пороку развития.

Упаковка — все технологические стадии и операции по заполнению упаковочных материалов и маркировке, которые должен пройти полупродукт, чтобы стать готовым продуктом.

Уровень значимости - вероятность совершения ошибки первого рода. Фальсификация - действия, направленные на обман покупателя и/или потребителя путем подделки объекта купли-продажи с корыстной целью. Фальсифицированное лекарственное средство - фармацевтический продукт, который преднамеренно и обманным образом снабжен ложной маркировкой в отношении его подлинности и/или источника происхождения. Фальсификация может относиться как к фирменным, так и к воспроизведенным препаратам (генерикам); к фальсифицированным продуктам относятся изделия с надлежащими ингредиентами или с неправильными ингредиентами, не содержащие активных ингредиентов, с несоответствующим количеством активного ингредиента или лекарственного средства в поддельной упаковке.

Фармакопейная статья — Государственный стандарт качества лекарственного средства на лекарственное средство под международным непатентованным названием (если оно имеется), содержащий обязательный перечень показателей и методов контроля качества с учетом его лекарственной формы.

Фармакопейная статья предприятия - стандарт качества лекарственного средства под торговым названием, содержащий перечень показателей и методов контроля качества лекарственного средства производства конкретного предприятия, учитывающий определенную технологию, и прошедший экспертизу и регистрацию в установленном порядке. Экстрагирование - извлечение одного или нескольких компонентов (биологически активных веществ) из твердого тела (растительного или животного сырья) с помощью растворителя, обладающего избирательной способностью растворять только заданные целевые компоненты. Экстракты - концентрированные извлечения из лекарственного растительного сырья, представляющие подвижные, вязкие жидкости или сухие массы.

СОг-экстракт - липофильная фракция, полученная из лекарственного растительного сырья экстракцией жидким оксидом углерода (IV). Эффективность лекарственных средств - характеристика степени положительного влияния лекарственных средств на течение болезни. Ятрогенная патология — любые нежелательные или неблагоприятные последствия профилактических, диагностических и лечебных вмешательств либо процедур, которые приводят к нарушениям функций организма, ограничению привычной деятельности, инвалидизации или смерти; осложнения медицинских мероприятий, развившиеся в результате как ошибочных, так и правильных действий врача.