Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Изучение промышленных отходов фармацевтического производства как дополнительных источников биологически активных соединений (на примере шрота плодов боярышника и шрота листьев мяты)
- Ученая степень
- кандидата фармацевтических наук
- ВАК РФ
- 15.00.02
Автореферат диссертации по фармакологии на тему Изучение промышленных отходов фармацевтического производства как дополнительных источников биологически активных соединений (на примере шрота плодов боярышника и шрота листьев мяты)
На правах рукописи 0030Б8532
ЗИНЧЕНКО ЛАРИСА АЛЕКСАНДРОВНА
ИЗУЧЕНИЕ ПРОМЫШЛЕННЫХ ОТХОДОВ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОГО
ПРОИЗВОДСТВА КАК ДОПОЛНИТЕЛЬНЫХ ИСТОЧНИКОВ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ'СОЕДИНЕНИЙ (НА ПРИМЕРЕ ШРОТА ПЛОДОВ БОЯРЫШНИКА И ШРОТА ЛИСТЬЕВ МЯТЫ)
15.00.82 — Фармацевтическая химия, фармакогнозия
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук
003068532
На правах рукописи
ЗИНЧЕНКО ЛАРИСА АЛЕКСАНДРОВНА
ИЗУЧЕНИЕ ПРОМЫШЛЕННЫХ ОТХОДОВ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОГО
ПРОИЗВОДСТВА КАК ДОПОЛНИТЕЛЬНЫХ ИСТОЧНИКОВ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ (НА ПРИМЕРЕ ШРОТА ПЛОДОВ БОЯРЫШНИКА И ШРОТА ЛИСТЬЕВ МЯТЫ)
15.00.82 — Фармацевтическая химия, фармакогнозия
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук
Работа выполнена в ГОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»
Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор
Оганесян Эдуард Тоникович Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор,
Компанцев Владислав Алексеевич доктор фармацевтических наук, профессор, Сампиев Абдулмуталип Магаметович
Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».
Защита состоится «/^>> JU&A& 2007 года в 9 часов на заседании диссертационного совета Д.208.069.01 по защитам диссертаций при Пятигорской государственной фармацевтической академии (357532, Пятигорск, пр. Калинина, д. И)
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пятигорской государственной фармацевтической академии.
Автореферат разослан 007 г.
Ученый секретарь диссертационного совета доктор фармацевтических наук, профессор ~ - —
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. В настоящее время на фармацевтическом рынке потребление лекарственных препаратов растительного происхождения имеет явную тенденцию к росту и, соответственно, наблюдается расширение их номенклатуры. Однако, сырьевая база растительных ресурсов ограничена, хотя наша страна импортирует из-за рубежа значительное количество растительного сырья. В то же время заготавливаемое на территории России и импортируемое растительное сырье используются нерационально. В отходах от фармацевтического производства остается от 30 до 50% ценных биологически активных веществ (БАВ). На наш взгляд, изучение отходов фармацевтического производства - шрота является очевидным с точки зрения дополнительных источников получения БАВ и позволяет более успешно решать проблему комплексного использования сырья и снижения себестоимости продукции,
К числу таких растений, широко используемых в фармацевтической технологии для получения настоек, относятся боярышник и мята, однако отходы данного производства остаются невостребованными. Решение проблемы использования подобного сырья для получения биологически активных соединений сдерживается отсутствием исследований по химическому составу. В этой связи, химическое и фармакологическое изучение компонентов шрота плодов боярышника кроваво-красного и шрота листьев мяты перечной является актуальной проблемой для фармацевтической науки, поскольку создаёт предпосылки для рационального использования лекарственного растительного сырья и создания безотходного производства, основанного на более полном использовании природных биологически активных соединений.
Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы является химическое исследование шрота листьев мяты и шрота плодов боярышника, а также фармакологическая оценка возможности использования указанных отходов в качестве дополнительных источников биологически активных соединений.
Для достижения поставленной цели мы сочли целесообразным решение следующих задач:
> провести химическое исследование шрота плодов боярышника и шрота листьев мяты на присутствие основных групп БАВ;
> количественно охарактеризовать содержание полисахаридов, флавоноидов, органических кислот, аминокислот, макро- и микроэлементов, оксикоричных кислот, дубильных веществ;
> исследовать влияние природы экстрагента на выход биологически активных соединений и на основании этого получить отдельные фракции с последующим проведением фармакологического скрининга;
> изучить химический состав фракций, проявивших наибольшую биологическую активность;
> определить некоторые показатели на шроты листьев мяты и плодов боярышника.
Научная новизна. Проведено химическое изучение шрота листьев мяты и шрота плодов боярышника, позволившее качественно и количественно охарактеризовать такие биологически активные соединения, как полисахариды, аминокислоты, макро- и микроэлементы, а также фенолокислоты и флавоноиды.
В липофильной фракции из шрота плодов боярышника доказано наличие урсоловой и олеаноловой кислот, каротиноидов, фосфолипидов, а также алифатических высших жирных кислот.
Предложена схема препаративного получения суммарных липофильной и гидрофильной фракции, что позволяет дифференцировать биологически активные соединения по их растворимости.
Экспериментально установлено, что использование в качестве экстрагента спирта этилового 40% позволяет из обоих видов исходного шрота получать в последующем сухие экстракты с высокой биологической активностью:
- из шрота листьев мяты - антиоксидантной, противовоспалительной и антимикробной;
из шрота плодов боярышника - гипотензивной, седативной, антигипоксической и гепатозащитной.
Практическая значимость и внедрение результатов исследования. Проведенные химические исследования промышленных отходов фармацевтического производства — шрота листьев мяты и шрота плодов боярышника свидетельствуют о том, что они могут быть использованы в качестве дополнительных сырьевых источников получения биологически активных веществ.
Сухой экстракт из шрота плодов боярышника, полученный экстракцией спиртом этиловым 40%, передан на кафедру фармакологии ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава для углублённого экспериментального исследования его влияния на системную и церебральную гемодинамику, а также для оценки влияния на некоторые биохимические показатели мозга (акт внедрения от 25.07.2005).
На кафедре биохимии и микробиологии ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава проводится углублённое доклиническое исследование гепатопротекгорного действия фракции, полученной из шрота плодов боярышника на основе спирта этилового 40% (акт внедрения от 25.09.2005).
Предложенные технологии переработки шрота плодов боярышника и шрота листьев мяты апробированы и внедрены на производственном участке ФГУП «Пятигорская фармацевтическая фабрика» в апреле 2005 г. и на производственном участке ЗАО «Ростовская фармацевтическая фабрика» в апреле 2006 г. (общая загрузка исходного сырья - 100 кг). Технология и оценка качества фракций может реализоваться в производственном цехе ФГУП «Пятигорская фармацевтическая фабрика» и в производственном цехе ЗАО «Ростовская фармацевтическая фабрика» (акт внедрения от 11.04.2005; акт внедрения от 10.04.2006).
Основные положения, выдвигаемые на защиту:
> результаты химических исследований шрота плодов боярышника и шрота листьев мяты на присутствие основных групп БАВ;
> качественная и количественная характеристики различных фракций, полученных из шрота листьев мяты и плодов боярышника экстракцией спиртом этиловым 40%;
> результаты некоторых фармакологических и биохимических исследований фракций, проявивших наибольшую биологическую активность.
Апробация и публикация результатов исследования. Основные фрагменты диссертационной работы доложены и обсуждены на 60-й и 62-й региональных конференциях по фармации, фармакологии и подготовке кадров ПятГФА (Пятигорск, январь 2005 г., январь 2007 г.).
По теме диссертации опубликовано 15 работ.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (№ регистрации 01200411089) и соответствует проблеме «Фармация».
Объём и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, литературного обзора, четырёх глав, общих выводов, списка литературы и приложений. Библиографический указатель включает 163 литературных источника, в том числе 30 - на иностранных языках.
Работа изложена на 166 страницах текста компьютерного набора (без приложений), содержит 50 таблиц и 9 рисунков.
В первой главе (обзоре литературы) представлены сведения, отражающие современное состояние исследований химии и фармакологии боярышника кроваво-красного и мяты перечной. Здесь же приведены данные по их применению в медицинской практике.
Вторая глава посвящена поиску оптимальных условий экстракции БАВ из шрота плодов боярышника, разработке технологии получения суммарных
б
фракций. Приведены результаты фотохимического анализа гидрофильной и липофильной фракций, а также предварительного фармакологического скрининга исследуемых суммарных фракций.
В третьей главе изложены результаты химического исследования шрота листьев мяты и выбора оптимальных условий экстракции БАВ, которые положены в основу технологии получения суммарных фракций.
В четвертой и пятой главах представлены результаты исследований по изучению химического состава и некоторых фармакологических и биохимических свойств наиболее активных фракций (экстрактов), полученных из шрота плодов боярышника и шрота листьев мяты.
Мы выражаем искреннюю благодарность профессору Ивашеву М.Н. и ассистенту Ляховой Н.С. (кафедра фармакологии), канд. биол. наук Постниковой Н.В. и ассистенту Сергеевой Е.О. (кафедра биохимии и микробиологии), канд. мед. наук Огурцову Ю.А. (кафедра физиологии, патологии и биологии) за помощь при проведении фармакологических и биологических исследований.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1. Химическое исследование шрота листьев мяты
Для изучения качественного и количественного состава биологически активных соединений использовали измельченный шрот листьев мяты, предоставленный Пятигорской фармацевтической фабрикой.
Полисахариды выделяли по методике, которая основана на их фракционировании и последующем гравиметрическом определении. Получили полисахаридные фракции водорастворимых полисахаридов (ВРПС), пектиновых веществ (ПВ), гемицеллюлозы А (ГЦ А) и гемицеллюлозы Б (ГЦ Б).
Для установления моносахаридного состава полисахаридного комплекса применяли метод кислотного гидролиза. После нейтрализации гидролизах анализировали хроматографически, используя восходящую БХ и ТСХ в системах этил ацетат - кислота уксусная - кислота муравьиная - вода (18:3:1:4) и БУВ (4:1:5) в присутствии стандартных образцов моносахаридов и уроновых кислот. Для обнаружения моносахаридов часть хроматограмм обрабатывали анилинфталатным реактивом, а галактуроновой кислоты - п-анизидином, что представлено в таблице 1.
Таблица 1 - Характеристика полисахаридов шрота листьев мяты
Фракция полисахаридов Внешвий вид фракции полисахаридов Содержание, % Качественный состав после ПОЛНОГО гидролиза
Водорастворимые полисахариды (ВРПС) Кристаллический серовато-коричневый порошок, без запаха, сладковатого вкуса 1,11±0,023 Арабшмш
Пектиновые вещества (ПВ) Кристаллический порошок сероватого цвета, кислован)! о вкуса, со специфическим запахом 8,51±0,021 Галактоза, ксилоза, кислота галактуроновая
Гемицеллюлоза А (ПДА) Коричневый порошок, соленого вкуса, с характерным запахом 16,32±0,023 Ксилоза
Гемицеллюлоза Б (ГЦ Б) Тёмно-коричневый порошок с кисловатым привкусом и специфическим запахом 5,42±0,015 Глюкоза, ксилоза, рамноза, кислота галактуроновая
Таким образом, при кислотном гидролизе фракции водорастворимых полисахаридов обнаружен только один моносахарид с 1^0,47, соответствующий арабинозе. В гидролизате пектиновых веществ найдены три вещества с Кг 0,33; 0,41, 0,58, соответствующие галактозе, ксилозе и кислоте галактуроновой.
При расщеплении гемицеллюлозы А образуется только одно вещество с 1^0,41, соответствующее ксилозе, а гемицеллюлозы Б - четыре вещества с Яг 0,29; 0,41; 0,50, 0,58, соответствующие глюкозе, ксилозе, рамнозе и кислоте
гапактуроновой. Из данных таблицы 1 следует, что преобладающим полисахаридом является гемицеллюлоза А.
Аминокислоты в исходном шроте определяли качественно и количественно на аминокислотном анализаторе марки ААА-339 (Microtecha, Чехословакия). Установлено, что шрот листьев мяты содержит 15 аминокислот, в том числе 8 незаменимых (аргинин, валин, гистидин, изолейцин, лейцин, лизин, треонин, фенилаланин). Количественно преобладают лейцин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты. Суммарное содержание свободных и связанных аминокислот в шроте листьев мяты составляет 12,76 г/кг.
Методом спектрального анализа на приборе ДФС-8-1 изучен макро- и микроэлементный состав шрота. Обнаружены 29 элементов, среди которых преобладающими по содержанию являются калий (до 20%), кальций (до 20%), магний (до 3%), фосфор (3%), кремний (до 2%), железо (до 1,5%), алюминий (до !%), натрий (до 1%).
Для исследования флавоноидных соединений и других полифенолов использованы качественные реакции (цианидиновая проба), хроматография с последующей обработкой хроматограмм 5% спиртовым раствором алюминия хлорида, 10% спиртовым раствором калия гидроксида, 2% раствором натрия боргидрида с кислотой хлороводородной концентрированной, 1% спиртовым раствором железа (III) хлорида, УФ-спектроскопия, а также метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
В извлечениях, полученных экстракцией шрота водой и спиртом этиловым различной концентрации, флавоноидные соединения качественно доказывали цианидиновой пробой. Наиболее интенсивная специфическая малиновая окраска наблюдается в экстракте, полученном спиртом этиловым 40%. Предварительная качественная характеристика флавоноидов осуществлялась методами восходящей, нисходящей, а также двумерной хроматографией в системах бутанол - кислота уксусная - вода (4:1:5) и (4:1:2) с применением хромогенных реагентов. Такой качественный анализ позволил установить, что в анализируемом шроте преобладающими являются
производные флавоиола и флавона. Из агликонов таким путем идентифицированы кверцетин и лютеолин, а из гликозидов флавонолов -гиперозид, афзелин и рутин.
Для дальнейшей идентификации аглнконов данное извлечение было подвергнуто кислотному гидролизу 10% кислотой серной в течение 3 часов. Агликоны из гидролизата экстрагировали эфиром диэтиловым и после удаления эфира, подвергали хроматографическому анализу в указанных системах растворителей в присутствии достоверных образцов «свидетелей». По значениям Rf, а также на основании качественных реакций, на хроматограммах помимо лютеолина и кверцетнна обнаружен кемпферол.
Для доказательства полученных нами данных, а также для определения других фенольных соединений, далее применяли метод ВЭЖХ.
С этой целью использовали высокоэффективный жидкостный хроматограф фирмы "GILSTON" (Франция). Идентификацию веществ проводили путём сопоставления времён удерживания пиков, полученных на хроматограмме проб, с временами удерживания стандартных растворов (PCO). Оценку количественного соотношения идентифицированных веществ в исследуемом образце проводили по площади пиков, используя метод внутренней нормализации. Результаты анализа извлечения, полученного экстракцией спиртом этиловым 96%, приведены в таблице 2.
Таким образом, в результате проведённых исследований в шроте листьев мяты обнаружены 7 соединений фенольной природы, которые представлены фенолокислотами и флавонаидами. В наибольшем количестве содержатся галловая и кофейная кислоты. Из флавоноидных соединений по количественному содержанию превалирует 5,7,4-тригидрокси-З-рамнозид кемпферола, известный под названием афзелин (0,20%).
Таблица 2 - Идентифицированные компоненты полифенольного комплекса из шрота листьев мяты перечной (метод ВЭЖХ)
Идентифицированные вещества Время удерживания, с Содержание в выделенной смеси, %
в исследуемом экстракте (спирт этиловый 96%) в пересчете иа сырье
Кислота галловая 374 69,36 5,10
Кислота кофейная 541,1 26,19 1,92
Гиперозид 1926 0,42 0,03
Рутин 2125 0,03 0,002
Афзелия 2854 2,69 ОДО
Лютеолин 4255 0,80 0,06
Кверцетин 4499 0,52 0,04
Количественное определение отдельных групп БАВ, содержащихся в сырье, проводили с учетом их физико-химических свойств. Результаты количественного содержания этих групп веществ представлены в таблице 3.
Таблица 3 - Количественное содержание основных групп БАВ в шроте ___ _листьев мяты _ _
БАВ Метод определения Количественное содержание, (х ± Ах), %
Полисахариды Гравиметрический 31,36±0,08
Флавоноиды в пересчете на рутин Дифференциальная УФ-спектрофотометрия 0,95±0,03
Свободные органические кислоты в пересчете на яблочную кислоту Алкалиметрический 0,85±0,031
Оксикоричные кислоты Высокоэффективная жидкостная хроматография 7,02±0,01
Сопоставление данных о содержании биологически активных веществ в нативном сырье (листья мяты) с нашими экспериментальными результатами по химическому составу шрота листьев свидетельствуют о том, что при промышленной переработке сырья практически 30-35% биологически активных соединений остаются не использованными.
и
С помощью качественных реакций в шроте листьев мяты доказано также присутствие дубильных веществ, сапонинов, органических кислот и фитостеринов.
Используя спирт этиловый различной концентрации, из шрота листьев мяты мы получили отдельные фракции, которые далее подвергались фармакологическому скринингу. Установлено, что наиболее активной является фракция, полученная экстракцией шрота спиртом этиловым 40% (ФМ-40): выявлена антиоксидантная активность, а также выраженное и избирательное антимикробное действие по отношению к стафилококкам.
Данные фармакологического скрининга явились основанием для уточнения химического состава именно этой фракции. С этой целью использованы приемы и методы, описанные выше при анализе основных групп БАВ. Это позволило установить, что спирт этиловый 40% извлекает большее число фенольных соединений, о чем свидетельствует обнаружение зпнк&техияа, кислоты салициловой, С-гликозида — ориентина и гесперидина
(таблица 4).
Таблица 4 — Фенольные соединения фракции, полученной на основе
Идентифицированные вещества Время удерживания, с Содержание в выделенной смеси, %
в исследуемом экстракте (спирт этиловый 40%) в пересчете на сырье
Кислота галловая 373 26,51 0,53
Эпикатехин 435 23,36 0,47
Кислота кофейная 530,4 28,46 0,57
Кислота салициловая 821 8,71 0,17
Ориентин 972,7 6,85 0,14
Гиперозид 1942 2,18 0,04
Геспершшн 2014 1,14 0,02
Рутин 2056 1,42 0,03
Афзелин 2888 0,07 0,001
Лютеолия 4291 0,71 0,01
Кверцетин 4453 0,58 0,01
В исследуемой фракции также обнаружены 23 элемента, где калий (30%), кальций (10%), магний (10%), натрий (3%) и фосфор (2%) доминируют количественно. Токсических элементов не обнаружено.
Из аминокислот здесь преобладают кислота аспарагиновая, в алии и аланин.
В данной фракции хроматографически обнаружены винная, лимонная и яблочная кислоты.
На кафедре технологии ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава на основе экстракта получена мазь, которая может быть использована при воспалительных процессах и ожоговых ранах.
2. Химическое исследование биологически активных веществ шрота плодов боярышника
В качестве исходного сырья нами использован шрот плодов боярышника, предоставленный Пятигорской фармацевтической фабрикой.
На начальном этапе исследования мы сочли целесообразным качественно и количественно оценить биологически активные соединения в объекте исследования.
Для определения тритерпеноидов, каротиноидов и полисахаридов отдельные порции сырья обрабатывали хлороформом, гептаном, а также смесью хлороформа и метанола. Во фракции, полученной обработкой сырья гептаном, спектрофотометрически определяли содержание каротиноидов. С этой целью, 10 г (точная масса) измельчённого сырья помещали в коническую колбу с притёртой пробкой вместимостью 100 мл и приливали 50 мл гептана. Экстрагировали при перемешивании в течение 2 часов и фильтровали. 15 мл экстракта помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводили объём до метки гептаном и определяли оптическую плотность раствора.
Во фракции, полученной обработкой сырья смесью хлороформа и метанола, определено содержание фосфолипидов. Для этого, 5 г (точная масса) сырья экстрагировали 25 мл смеси хлороформ - метанол (2:1) в колбе с
притертой пробкой в течение 3 часов. Экстракт фильтровали. Экстракцию остатка повторяли дважды. К объединённым извлечениям добавляли 150 мл ацетона. Полученный осадок отделяли, сушили до постоянной массы и взвешивали.
Известно, что в свежих плодах боярышника содержатся тритерпеновые кислоты - урсоловая и олеаноловая, а также ß-ситостерин. Доказательством присутствия этих соединений являются положительные реакции Либермана-Бурхарда, Сальковского и Чугаева.
Хроматографическое исследование хлороформного экстракта в системе бензол- ацетон (4:1) с последующей обработкой хроматограмм кислотой фосфорно-вольфрамовой позволило в присутствии достоверных образцов «свидетелей» идентифицировать урсоловую (Rr=0,60), олеаноловую (Rf=0,70) кислоты. В системе хлороформ - метанол (9:1) были получены аналогичные результаты. Отличие заключается только в значениях Rf.
Дополнительным доказательством наличия указанных тритерпеновых кислот является характерная полоса поглощения в УФ-спектре с максимумом при 310±5 нм в кислоте серной концентрированной. С этой целью высушенную хлороформную фракцию растворяли в кислоте серной 96%, термостатировали в течение 1 часа и анализировали на спектрофотометре СФ -103.
Для исследования полисахаридов исходное сырье последовательно экстрагировали водой, смесью 0,5% растворов аммония оксалата и кислоты щавелевой (1:1), а затем 7,5% раствором натрия гидроксида. Из всех полученных извлечений осаждением спиртом этиловым выделены водорастворимые полисахариды, пектиновые вещества, гемицеллюлоза А и гемицеллюлоза Б.
Для установления качественного состава фракций полисахаридов использовали кислотный гидролиз с последующим хроматографическим анализом гидролизатов в присутствии образцов уроновых кислот и моносахаридов.
Количественное содержание фракций полисахаридов, а также их мономерные составы приведены в таблице 5.
Таблица 5 - Моносахаридный состав гидролизатов полисахаридов шрота
плодов боярышника
Фракции полисахаридов Содержание, % Качественные состав после полного гидролиза
ВРПС 4,4±0,015 е=0,34% Глюкоза, ксилоза, кислота галактуроновая
пв 1,8±0,018 к=1,0% Рамноза, ксилоза, кислота галактуроновая
ГЦ А 4,1±0,075 Б=1,83% Глюкоза, ксилоза
ГЦБ 1,21 ±0,033 е=2,73% Рамноза, ксилоза, кислота галактуроновая
Определение состава жирных кислот липофильной фракции осуществляли после предварительного метилирования методом 1 азожццкоетной хроматографии на хроматографе «Цвет 500» с пламенно-ионизационным детектором. Компоненты идентифицировали по стандартным образцам (Sigma) метиловых эфиров жирных кислот и относительным временам удерживания. Количественное содержание компонентов определяли методом внутренней нормализации. Полученные результаты (таблица 6) показывают, что липофильная фракция содержит значительное количество моно- и полиненасыщенных жирных кислот с доминированием линолевой (41,3±2,3%) и олеиновой (34,2±1,8%) кислот.
Таблица 6 - Жирно-кислотный состав липофильной фракции шрота плодов боярышника кроваво-красного
Наименование жирной кислоты Количественное содержание, %
Миристиновая 0,2±0,01
Пальмитиновая 14,0±0,5
Пальмитоолеиновая 0,1±0,01
Стеариновая 4,2±0 а
Олеиновая 34,2±1,8
Лшюлевая 413±2,3
Линоленозая 0,1 ±0,01
Методом спектрального анализа на приборе ДФС-8-1 изучен макро- и микроэлементный состав шрота. Идентифицированы 22 элемента, среди которых основными по содержанию являются кальций, калий, магний, фосфор, натрий. Обнаружены также цинк, медь, марганец, железо, никель, титан, ваннадий и все незаменимые микро- и макроэлементы.
Для анализа содержания свободных и связанных аминокислот использовали аминокислотный анализатор марки ААА-339 (МюгсЛесЪа, Чехословакия). Установлено, что количественно преобладают лейцин (0,30 г/кг), аспарагиновая (0,39 г/кг) и глутаминовая (0,84 г/кг) кислоты.
Свободные органические кислоты определены по методике ГФ XI издания. Хроматографически в присутствии достоверных образцов «свидетелей» идентифицированы лимонная, яблочная, малеиновая и аскорбиновая кислоты.
Состав оксикоричных кислот изучали хроматографически на бумаге в системах растворителей I) 15% кислота уксусная; И)БУВ (4:1:2) и в тонком слое сорбента на пластинках «Сорбфил» в системе Ш) бензол — спирт этиловый 96% (8:2), что представлено в таблице 7.
Таблица 7 - Идентификация фенолкарбоновых кислот
Значения Кг в системах растворителей Окраска пятен при обработке Что идентифицировано
1<БХ) II (БХ) III (ТСХ) УФ - свет Аммиака раствор концентрированный Реактив Паули Железа (+3) хлорид
0,39 0,75 0,62 светло-голуб светло-голуб. кори чн серо-зел. Кислота кофейная
0,68 0,62 0,21 голуб. зел.-голуб. желто коричн зел. Кислота хлорогеновая
0,40 0,86 0,77 голубое ато-фиол. ярче фиол. коричн. Кислота феруловая
0,38 0,84 0,75 голуб. — краен. краен Кислота изоферуловая
Для выделения фенольных соединений использовали водно-спиртовые извлечения из шрота плодов боярышника. С этой целью извлечения концентрировали под вакуумом, и далее проводили препаративное хроматографирование на бумаге в 15% кислоте уксусной (I) и смеси бутанол -кислота уксусная - вода (4:1:2) (II). Из хроматограмм, полученных в системе I элюировали кофейную и хлорогеновую кислоты, а в системе П - феруловую и изоферуловую. Элюаты концентрировали и повторно хроматографировали препаративно. Выделенные таким путем соединения анализировали с помощью УФ-спектрофотометрии в присутствии ионизирующих и комплексообразующих добавок (алюминия хлорида, натрия ацетата, смеси натрия ацетата и кислоты борной, натрия этилата). Полученные результаты свидетельствуют о наличии в шроте плодов боярышника четырех производных кислоты коричной - кофейной, хлорогеновой, феруловой и изоферуловой.
Определение флавоноидов проводили в спиртовом и этилацетатном извлечениях хроматографически на бумаге с применением качественных реакций. Двумерная хроматография в системах: I) 15% кислота уксусная и П)БУВ (4:1:2) позволила установить, что в шроте плодов боярышника присутствует 8 соединений, из которых преобладающими являются рутин, виценин, гиперозид, кверцетин и лютеолин. Идентификация этих соединений осуществлена в присутствии достоверных образцов «свидетелей», а также спектрофотометрически с использованием ионизирующих и комплексных добавок. В индивидуальном виде эти соединения были получены методом препаративной бумажной хроматографии, как это описано выше для производных коричной кислоты.
Остальные три соединения флавоноидной природы присутствуют в следовых количествах. В этой связи, для уточнения состава флавоноидов далее был использован метод ВЭЖХ (хроматограф фирмы "С1ЬБТОЫ" - Франция). Идентификацию разделенных веществ проводили путём сопоставления времён удерживания пиков, полученных на хроматограмме пробы, с временами
удерживания стандартных растворов (PCO). Это позволило обнаружить дигидрокверцетин, афзелин и апигенин.
Флавоноиды определяли в спиртовом и этилацетатном извлечениях с помощью качественных реакций и методов хроматографии. Установлено наличие рутина, виценина и гиперозида.
Сведения о количественном составе биологически активных соединений в шроте плодов боярышника приведены в таблице 8.
Таблица 8 - Количественное содержание основных групп БАВ в шроте плодов боярышника
БАВ Метод определения Количественное содержание, (х ± Лх), %
Полисахариды Гравиметрический Н,51±0,09
Флавоноиды в пересчете на гнперозид Дифференциальная УФ-шектпо<Ьотометгот<! вэжх 0,027±0,0013
Оксикоринныс КЙСЯОШ Высокоэффективная жидкостная хроматография 0,16±0,008
Дубильные вещества Перманганатометрический 0,71 ±0,01
Каротиноиды, мг% Спектрофотометрический 1,65±0,0036
Тритерпеноиды Гравиметрический 0,61±0,04
Фосфолипиды Гравиметрический 0,35±0,01
Аминокислоты Аминокислотный анализатор 3,4±0,03
Свободные органические кислоты в пересчете на яблочную кислоту Алкалиметрический 0,91±0,01
Аскорбиновая кислота Титриметрический 0,031±0,01
Плоды различных видов боярышника достаточно подробно изучены качественно и количественно. Сравнивая полученные нами экспериментальные данные (таблица 8) с содержанием этих веществ в свежем сырье, можно сделать вывод о том, что при промышленной переработке плодов боярышника кроваво-красного (экстрагент- спирт этиловый 70%) треть биологически активных
соединений практически остается в сырье. Из этого следует, что шрот плодов боярышника может бьггь использован для получения биологически активных фракций.
Исходя из этого, осуществлена экстракция сырья спиртом этиловым 40%, 70% и 96% концентраций, а также водой. Предварительно, каждая порция образца обрабатывалась хлороформом для удаления липофильных веществ.
После удаления растворителей получены соответствующие сухие экстракты, которые были подвергнуты фармакологическому скринингу. Этот этап исследований позволил установить, что фракция, полученная экстракцией сырья спиртом этиловым 40% (далее по тексту эта фракция условно обозначена ФБ-40), характеризуется устойчивой гипотензивной активностью, о чем свидетельствует достоверное снижение системного артериального давления и частоты сердечных сокращений с 5 по 60 мин регистрации гемодинамических параметров по отношению к контролю. Полученные данные явились основанием для дальнейшего химического изучения именно этой фракции.
Характерно, что качественный состав данной фракции представлен преимущественно теми же группами соединений, которые ранее идентифицированы в исходном шроте, за исключением каропгиноидов, фосфолипидов и тритерпеноидов, поскольку последние переходят в липофильную фракцию.
Полисахариды практически отсутствуют. Хроматографически обнаружены лишь моносахариды - глюкоза, ксилоза, рамноза.
Аминокислотный состав представлен 14 соединениями, в том числе 8 незаменимыми; количественно здесь преобладают глутаминовая и аспарагиновая кислоты.
Качественный микроэлементный состав ФБ-40 практически такой же, что и в исходном шроте, однако в процессе экстракции в большей степени извлекаются калий, кальций, магний, натрий, фосфор. Значительно меньше во фракцию ФБ-40 переходят кремний, цинк, медь, марганец, железо, никель, титан, ванадий и все незаменимые макро- и микроэлементы.
Содержание дубильных веществ составляет - 0,72%±0,01; лимонной, яблочной и аскорбиновой кислот - в сумме 0,58%±0,02.
Качественный состав фенолокислот и флавоноидов в этой фракции практически не изменяется, но в количественном отношении преобладают галловая и кофейная кислоты, дигидрокверцетин, лютеолин и виценин.
Фармакологические исследования проведены на кафедре фармакологии ПятГФА.
Фракция, полученная экстракцией спиртом этиловым 40% в виде сухого экстракта, характеризуется антигипоксической активностью: установлено, что время выживаемости животных в абсолютных значениях составило 115,0±10,5 мин, что достоверно по отношению к контролю. Влияние данной фракции на двигательную активность животных анализировали методом «Открытое поле»: однократное введение вызывает понижение двигательной и поисковой активности у нормотензивных животных. По гепатопротекторной активности ФБ-40 несколько превосходит действие эталонного препарата «Карсил».
Общие выводы
1. Химическими исследованиями отходов фармацевтического производства установлено в шроте листьев мяты содержание флавоноидов -0,95±0,03%, фенолокислот - 7,02±0,01%, полисахаридов - 31,36±0,08%, аминокислот - 12,76±0,02%, макро- и микроэлементов, среди которых преобладают калий, кальций, магний, натрий, железо, фосфор.
2. Изучение качественного и количественного состава отходов показало, что в шроте плодов боярышника содержание флавоноидов составляет 0,027±0,0013%, фенолокислот - 0Д6±0,008%, полисахаридов - 11,51±0,09%, аминокислот - 3,4+0,03%, дубильных веществ - 0,71±0,01%, свободных органических кислот - 0,91±0,01%, макро- и микроэлементов, среди которых преобладают магний, калий, кальций, натрий, фосфор.
3. Методом избирательной экстракции с использованием полярных и неполярных растворителей получены фракции липофильных и гидрофильных
веществ. В хлороформном извлечении установлено наличие тритерпеноидов -0,61±0,04%, представленных урсоловой и олеаноловой кислотами, фосфолипидов - 0,35±0,01%, каротинондов - 1,65±0,003бмг%. Алифатические высшие жирные кислоты представлены восемью соединениями с числом углеродных атомов в радикале С)3, С15 и Сп, среди которых преобладающими являются непредельные кислоты.
4. С помощью химических и физико-химических методов -хроматографии, УФ - спектроскопии, ВЭЖХ установлено, что в шроте листьев мяты и плодов боярышника содержатся лютеолин, апигенин, кверцетин, афзелин, рутин. В шроте листьев мяты, кроме этого, присутствуют диосмин, ориентин и лютеолин-7-глюкозид, а в шроте плодов боярышника - виценин и дигидро кверцетин.
5. В шроте листьев мяты доказано присутствие галловой и кофейной кислот, а плодов боярышника - феруловой, изоферуловой, кофейной и хлорогеновой кислот.
6. Доказано, что при промышленной переработке листьев мяты и плодов боярышника до 30-35% биологически активных соединений остается в шроте.
7. Экстракцией этиловым спиртом 40% получены фармакологически активные фракции из шрота плодов боярышника и листьев мяты, которые охарактеризованы качественно и количественно по содержанию фенолокислот, флавоноидов, аминокислот, макро- и микроэлементов,
8. Фармакологические исследования позволили установить следующие виды действия:
> для фракции из шрота листьев мяты (экстрагент - спирт этиловый 40%) -антиоксндантаое, антибактериальное; для мази, полученной на ее основе -противовоспалительное, ранозаживляющее;
> для фракции из шрота плодов боярышника (экстрагент - спирт этиловый 40%) - гипотензивное, антигипоксическое, седативное, противовоспалительное и гепатопротекторное.
По материалам диссертации опубликованы следующие работы:
1. Влияние различных фракций боярышника на некоторые показатели системной гемодинамики // Человек и лекарство: тез. докл. X Рос. нац. конгр. 7-11 апр. 2003 г. - М., 2003.- С. 632. (Соавт.: Матершов С.В., Ивашев М.Н., Масликова Г.В., Оганесян Э.Т.).
2. Химико-фармакологическое изучение дикорастущей флоры и отходов фармацевтического производства // Человек и лекарство: тез. докл. X Рос. нац. конгр. 7-11 апр. 2003 г. - М., 2003.- С. 645. (Соавт.: Пархоменко А.Ю., Шаренко О.М., Терехов А.Ю., Карпов A.A., Оганесян Э.Т., Андреева O.A., Доркина Е.Г., Ивашев МЛ., Постникова Н.В.).
3. Фармакологические эффекты в условиях гиперкапнической гипоксии под влиянием фракций из плодов боярышника II Структурно-функциональные взаимодействия при компенсации нарушенных функций: сб. науч. трудов, - Ессентуки. 2003.- Вып. 7,- С. 78-83. (Соавт.: Ляхова Н.С., Крикова A.B.).
4. Фитохимические и фармакологические исследования отходов плодов боярышника кроваво-красного // Современные наукоемкие технологии: сб. науч. тр. - М., 2004. - Вып. 6. - С. 111. (Соавт.: Оганесян Э.Т., Андреева OA., Ивашев М.Н., Ляхова Н.С.).
5. Изучение жирно-кислотного состава липофильной фракции из шрота плодов боярышника кроваво-красного // Науч. обозрение. - 2005. - № 4. -С. 13-14. (Соавт.: Оганесян Э.Т., Ушакова Л.С.).
6. Биологически активные вещества шрота листьев мяты перечной // Науч. обозрение. - 2005. - № 6. - С. 32-35.
7. Изучение полисахаридов отходов переработки плодов боярышника кроваво-красного // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2005."- Вып. 60. -С. 343-344. {Соавт.; Оганесян Э.Т., Андреева O.A.).
8. Макро- и микроэлементы в отходах переработки плодов боярышника кроваво-красного // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2005. - Вып. 60. -С. 342-343.
9. Изучение гепатозащитного действия различных фракций шрсгга боярышника на модели острого ССЦ-поражения печени // Гепатологня сегодня: материалы 10 Рос. науч. конф. 28-30 марта 2005 г. - М., 2005. - Т. 15. - Вып. 1. - С. 99. (Соавт.: Доркина Е 1\, Агаджанян З.С., Паукова Е.О.).
10. Химическое и фармакологическое исследование спиртовых и водно-спиртовых извлечений, полученных из шрота плодов боярышника кроваво-красного // Фармация и здоровье: материалы Междунар. науч.-практ. конф. 9-12 ноября 2005 г. - Пермь, 2005.- С. 191-192. (Соавт.: Ляхова Н.С., Оганесян Э.Т., Ивашев М.Н.).
11. Определение полифенольного состава суммарных фракций, полученных из отходов переработки плодов боярышника кроваво-красного и шрота листьев мяты перечной // Науч. обозрение.- 2006.- №2.- С. 36-39. (Соавт.: Оганесян Э.Т.).
12. Биологическая активность растительных источников флавоноидов// Фармация.- 2006.- №3.- С. 36-37. (Соавт.: Крикова A.B., Ляхова Н.С., Давыдов B.C., Мокин ЮЛ., Арльт A.B., Ивашев МЛ.).
13. Исследование биологически активных соединений шрота плодов боярышника И Деп. ВИНИТИ № 999-В2006, 25.07.06. - М., 2006. - 42с. (Соавт.: Андреева O.A.).
14. Исследование биологически активных соединений шрота листьев мяты // Деп. ВИНИТИ № 1006 - В2006, 25.07.06. - М., 2006. - 20с. (Соавт.: Андреева O.A.).
15. Изучение возможности использования шрота листьев мяты перечной для создания лечебно-профилактических средств// Аптечный форум. От производителя до аптеки и потребителя: сб. материалов,- М., 2007 - С. 75-
"Т*- //"<_____ , г\._______ТА А I л__________'J Г» А ________А А -------- о V Ч
/и. KJYурциа rviaicplUVBa joj., пнщкъоа ил., икшшдо j.i.j.
ЗИНЧЕНКО ЛАРИСА АЛЕКСАНДРОВНА
ИЗУЧЕНИЕ ПРОМЫШЛЕННЫХ ОТХОДОВ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОГО
ПРОИЗВОДСТВА КАК ДОПОЛНИТЕЛЬНЫХ ИСТОЧНИКОВ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ (НА ПРИМЕРЕ ШРОТА ПЛОДОВ БОЯРЫШНИКА И ШРОТА ЛИСТЬЕВ МЯТЫ)
15.00.02 - Фармацевтическая химия, фармакогнозия
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук
Подписано к печати 7 ^ ' ^ *Т' 2007 г. Формат бумаги 60x84 1/16 Бумага книжно-журнальная. Печать ротаприятная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № О ЭО
ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «ПЯТИГОРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАЦЕВТИТЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНТСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ
РАЗВИТИЮ» 357532, г Пятигорск, пр. Калинина, И
У
ЗИНЧЕНКО ЛАРИСА АЛЕКСАНДГОВНА
ИЗУЧЕНИЕ ПРОМЫШЛЕННЫХ ОТХОДОВ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОГО
ПРОИЗВОДСТВА КАК ДОПОЛНИТЕЛЬНЫХ ИСТОЧНИКОВ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ (НА ПРИМЕРЕ ШРОТА ПЛОДОВ БОЯРЫШНИКА И ШРОТА ЛИСТЬЕВ МЯТЫ)
15.00.02 - Фармацевтическая химия, фармакогнозия
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук
Подписано к печати /3. о ¿Г, _2007 г. Формат бумаги 60x84 1/16 Бумага книжно-журнальная. Печать ротапринтная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № О 90
ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «ПЯТИГОРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАЦЕВТИТЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНТСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ
РАЗВИТИЮ» 357532, г Пятигорск, пр. Калинина, И
Оглавление диссертации Зинченко, Лариса Александровна :: 0 ::
Ввсдеппс.
Часть I Обзор литературы.
Глава 1 Современное состояние исследовании химии и фармакологии боярышника кроваво-красного (Crataegus sanquinca) и мяты перечной (Mentha piperita).
1.1 Сведения о химическом составе боярышника .:.
1.2 Применение боярышника в медицине.
1.3 Сведения о химическом составе мяты
1.4 Применение мяты перечной в медицине.
Выводы по главе.
Часть II Собственные исследования.
Глава 2 Исследование биологически активных соединении шрота плодов боярышника.
2.1 Предварительные результаты и их обсуждение.
2.1.1 Выбор оптимальных условий для экстракции БАВ.
2.1.2 Изучение компонентов липофильной фракции из шрота плодов боярышника.
2.1.3 Количественное определение фосфолипидов.
2.1.4 Каротиноиды.
2.1.5 Тритерпеновые кислоты.
2.1.6 Качественный и количественный состав гидрофильной фракции из шрота плодов боярышника.
2.1.7 Оксикоричные кислоты.
2.1.8 Кумарины.
2.1.9 Антоцианы.
2.1.10 Углеводы.
2.1.11 Аминокислоты.
2.1.12 Макро- и микроэлементный состав.
2.1.13 Белки.
2.1.14 Дубильные вещества.
2.1.15 Органические кислоты.
2.1.16 Острая токсичность и фармакологический скрининг.
2.2 Экспериментальная часть.
2.2.1 Определение некоторых показателен сырья.
2.2.2 Количественный анализ веществ липофильной фракции шрота ил о до d боярышника
2.2.3 Количественный анализ веществ гидрофильной фракции шрота плодов боярышника.
Выводы по главе.
Глава 3 Биологически активные соединения шрота листьев мяты.^
3.1 Предварительные результаты н их обсуждение
3.1.1 Полифенольные соединения.
3.1.2 Углеводы.
3.1.3 Аминокислоты.
3.1.4 Элементный состав.
3.1.5 Другие группы БАВ в шроте листьев мяты.
3.2 Экспериментальная часть.
3.2.1 Определение некоторых показателей сырья.
3.2.2 Количественный анализ веществ шрота листьев мяты.
Выводы по главе.
Глава 4 Химический состав и фармакологическая активность суммарном фракции, полученной из шрота плодов боярышника.
4.1 Обсуждение результатов.
4.1.1 Влияние суммарных фракций № 1, № 2, № 3 из шрота плодов боярышника на основные показатели сердечно-сосудистой системы.
4.1.2 Влияние суммарных фракций № 1, № 2, № 3 из шрота плодов боярышника на выживаемость животных при гипоксии.
4.1.3 Изучение влияния суммарных фракций № 1, № 2, № 3 из шрота плодов боярышника на двигательную активность крыс методом «Открытое поле»
• 4.1.4 Защитное действие суммарных фракций № 1, № 3, № 5 из шрота плодов боярышника при остром токсическом поражении печени тетрахлорметаном.
4.1.5 Изучение противовоспалительного действия фракции № 1, полученной па основе спирта этилового 40%.•••••
4.1.6 Влияние на тонус и перистальтику тонкого кишечника фракции 1, полученной на основе спирта этилового 40%.
4.2 Экспериментальная масть.
4.2.1 Материалы и методы.;.
4.2.2 Определение острой токсичности
4.2.3 Влияние суммарных фракций № 1, № 2, № 3 из шрота плодов боярышника на гемодинамические параметры.
4.2.4 Влияние суммарных фракций № 1, № 2, № 3 из шрота плодов боярышника на выживаемость животных при гипоксии.
4.2.5 Влияние суммарных фракций № 1, № 2, № 3 из шрота плодов боярышника на двигательную активность крыс методом «Открытое поле»
4.2.6 Изучение гепатозашитной активности суммарных фракций №1, 3, № 5 из шрота плодов боярышника.
Выводы по главе.•••
Глава 5 Химический состав п фармакологическая активность жидкого экстракта, полученного из шрота листьев мяты.
5.1 Определение технологических показателен качества сырья.
5.2 Технология получения жидкого экстракта из шрота листьев мяты .•••••••.
5.3 Содержание биологически активных соединений.
5.3.1 Флавоноиды.
5.3.2 Аминокислоты.
5.3.3 Свободные органические кислоты.
5.3.4 Макро- и микроэлемептный состав.
5.4 Фармакологическая активность экстракта и мягкой лекарственной формы на его основе.
5.4.1 Антибактериальная активность экстракта.
5.4.2 Антиоксидантная активность.
5.4.3 Противовоспалительное и противоожоговое действие мази, полученной на основе экстракта.
5.5 Экспериментальная часть.
5.5.1 Определение антимикробной активности.
5.5.2 Определение антиоксидантной активности.
5.5.3 Определение противовоспалительной активности.
Выводы по главе.
Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Зинченко, Лариса Александровна, автореферат
Актуальность проблемы. В настоящее время на фармацевтическом рынке потребление лекарственных препаратов растительного происхождения имеет явную тенденцию к росту и, соответственно, наблюдается расширение их номенклатуры. Однако, сырьевая база растительных ресурсов ограничена, хотя наша страна импортирует из-за рубежа значительное количество растительного сырья. В то же время заготавливаемое на территории России и импортируемое растительное сырье используются нерационально. В отходах от фармацевтического производства остается от 30 до 50% ценных биологически активных веществ (БАВ). На наш взгляд, изучение отходов фармацевтического производства - шрота является очевидным с точки зрения дополнительных источников получения БАВ и позволяет более успешно решать проблему комплексного использования сырья и снижения себестоимости продукции.
К числу таких растений, широко используемых в фармацевтической технологии для получения настоек, относятся боярышник и мята, однако отходы данного производства остаются невостребованными. Решение проблемы использования подобного сырья для получения биологически активных соединений сдерживается отсутствием исследований по химическому составу. В этой связи, химическое и фармакологическое изучение компонентов шрота плодов боярышника кроваво-красного и шрота листьев мяты перечной является актуальной проблемой для фармацевтической науки, поскольку создаёт предпосылки для рационального использования лекарственного растительного сырья и создания безотходного производства, основанного на более полном использовании природных биологически активных соединений.
Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы является химическое исследование шрота листьев мяты и шрота плодов боярышника, а также фармакологическая оценка возможности использования указанных отходов в качестве дополнительных источников биологически активных соединений.
Для достижения поставленной цели мы сочли целесообразным решение следующих задач: . > провести химическое исследование шрота плодов боярышника и шрота листьев мяты на присутствие основных групп БАВ; количественно охарактеризовать содержание полисахаридов, фла-воноидов, органических кислот, аминокислот, макро- и микроэлементов, оксикоричных кислот, дубильных веществ; исследовать влияние природы экстрагента на выход биологически активных соединений и на основании этого получить отдельные фракции с последующим проведением фармакологического скрининга;
У* изучить химический состав фракций, проявивших наибольшую биологическую активность; определить некоторые показатели на шроты листьев мяты и плодов боярышника.
Научная новизна. Проведено химическое изучение шрота листьев мяты и шрота плодов боярышника, позволившее качественно и количественно охарактеризовать такие биологически активные соединения, как полисахариды, аминокислоты, макро- и микроэлементы, а также фенолокис-лоты и флавоноиды.
В липофильной фракции из шрота плодов боярышника доказано наличие урсоловой и олеаноловой кислот, каротиноидов, фосфолипидов, а также алифатических высших жирных кислот.
Предложена схема препаративного получения суммарных липо-филыюй и гидрофильной фракций, что позволяет дифференцировать биологически активные соединения по их растворимости.
Экспериментально установлено, что использование в качестве экст-рагента спирта этилового 40% позволяет из обоих видов исходного шрота получать в последующем сухие экстракты с высокой биологической активностью:
- из шрота листьев мяты - антиоксидантной, противовоспалительной и антимикробной;
- из шрота плодов боярышника - гипотензивной, седативной, антигипок-сической и гепатозащитной.
Практическая значимость н внедрение результатов исследования. Проведенные химические исследования промышленных отходов фармацевтического производства - шрота листьев мяты и шрота плодов боярышника свидетельствуют о том, что они могут быть использованы в качестве дополнительных сырьевых источников получения биологически активных веществ.
Сухой экстракт из шрота плодов боярышника, полученный экстракцией спиртом этиловым 40%, передан на кафедру фармакологии ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава для углублённого экспериментального исследования его влияния на системную и церебральную гемодинамику, а также для оценки влияния на некоторые биохимические показатели мозга (акт внедрения от 25.07.2005).
На кафедре биохимии и микробиологии ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава проводится углублённое доклиническое исследование ге-патопротекторного действия фракции, полученной из шрота плодов боярышника на основе спирта этилового 40% (акт внедрения от 25.09.2005).
Предложенные технологии переработки шрота плодов боярышника и шрота листьев мяты апробированы и внедрены на производственном участке ФГУП «Пятигорская фармацевтическая фабрика» в апреле 2005 г. и на производственном участке ЗАО «Ростовская фармацевтическая фабрика» в апреле 2006 г. (общая загрузка исходного сырья - 100 кг). Технология и оценка качества фракций может реализоваться в производственном цехе ФГУП «Пятигорская фармацевтическая фабрика» и в производственном цехе ЗАО «Ростовская фармацевтическая фабрика» (акт внедрения от 11.04.2005; акт внедрения от 10.04.2006).
Основные положения, выдвигаемые на защиту: результаты химических исследований шрота плодов боярышника и шрота листьев мяты на присутствие основных групп БАВ; качественная и количественная характеристики различных фракций, полученных из шрота листьев мяты и плодов боярышника экстракцией спиртом этиловым 40%; результаты некоторых фармакологических и биохимических исследований фракций, проявивших наибольшую биологическую активность.
Апробация и публикация результатов исследования. Основные фрагменты диссертационной работы доложены и обсуждены на 60-й и 62-й региональных конференциях по фармации, фармакологии и подготовке кадров ПятГФА (Пятигорск, январь 2005 г., январь 2007 г.).
По теме диссертации опубликовано 15 работ.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (№ регистрации 01200411089) и соответствует проблеме «Фармация».
Объём н структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, литературного обзора, четырёх глав, общих выводов, списка
Заключение диссертационного исследования на тему "Изучение промышленных отходов фармацевтического производства как дополнительных источников биологически активных соединений (на примере шрота плодов боярышника и шрота листьев мяты)"
Общие выводы
1. Химическими исследованиями отходов фармацевтического производства установлено в шроте листьев мяты содержание флавоноидов - 0,95+0,03%, фенолокислот - 7,02+0,01%, полисахаридов - 31,36±0,08%, аминокислот - 12,76+0,02%, макро- и микроэлементов, среди которых преобладают калий, кальций, магний, натрий, железо, фосфор.
2. Изучение качественного и количественного состава отходов показало, что в шроте плодов боярышника содержание флавоноидов составляет 0,027+0,0013%, фенолокислот - 0,16±0,008%, полисахаридов -11,51 ±0,09%, аминокислот - 3,4+0,03%, дубильных веществ - 0,71 ±0,01%, свободных органических кислот - 0,91+0,01%, макро- и микроэлементов, среди которых преобладают магний, калий, кальций, натрий, фосфор.
3. Методом избирательной экстракции с использованием полярных и неполярных растворителей получены фракции липофильных и гидрофильных веществ. В хлороформном извлечении установлено наличие тритерпеноидов - 0,61+0,04%, представленных урсоловой и олеаноловой кислотами, фосфолипидов - 0,35±0,01%, каротиноидов -1,65±0,0036мг%. Алифатические высшие жирные кислоты представлены восемью соединениями с числом углеродных атомов в радикале Cn, С15 и Сп, среди которых преобладающими являются непредельные кислоты.
4. С помощью химических и физико-химических методов -хроматографии, УФ - спектроскопии, ВЭЖХ установлено, что в шроте листьев мяты и плодов боярышника содержатся лютеолин, апигенин, кверцетин, афзелин, рутин. В шроте листьев мяты, кроме этого, присутствуют диосмин, ориентин и лютеолин-7-глюкозид, а в шроте плодов боярышника — виценин и дигидрокверцетин.
5. В шроте листьев мяты доказано присутствие галловой и кофейной кислот, а плодов боярышника - феруловой, изоферуловой, кофейной и хлорогеновой кислот.
6. Доказано, что при промышленной переработке листьев мяты и плодов боярышника до 30-35% биологически активных соединений остается в шроте.
7. Экстракцией этиловым спиртом 40% получены фармакологически активные спиртовые фракции из шрота плодов боярышника и листьев мяты, которые охарактеризованы качественно и количественно по содержанию фенолокислот, флавоноидов, аминокислот, макро- и микроэлементов.
8. Фармакологические исследования позволили установить следующие виды действия: для фракции из шрота листьев мяты (экстрагент - спирт этиловый 40%) - антиоксидантное, антибактериальное; для мази, полученной на ее основе - противовоспалительное, ранозаживляющее; для фракции из шрота плодов боярышника (экстрагент — спирт этиловый 40%) - гипотензивное, антигипоксическое, седативное, противовоспалительное и гепатопротекторное.
Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 0 года, Зинченко, Лариса Александровна
1. Наиболее выраженное антимикробное действие проявили фракции № 1 и № 2 (в концентрациях 1250 мкг/мл), наименее выражено антимикробное действие у фракции № 4 (в концентрации 5000 мкг/мл) 122.
2. В целом же все полученные фракции с некоторыми вариациями показали антибактериальное действие по отношению ко всем тест-культурам, особенно выраженное по отношению к стафилококкам.
3. Шрот мяты измельчали и использовали для дальнейшего изучения.
4. Товароведческие показатели определяли по методикам, приведённым в ГФ XI 36. Результаты исследований представлены в табл.33.
5. Алиев, Р.К. Изучение сердечно-сосудистых средств из лекарственной флоры Азербайджана / Р.К. Алиев // Изучение и использование лекарственных растительных ресурсов СССР: тр. Всесоюз. науч. фармац. конф. 30 мая-3 июня 1961 г. - Л., 1964. — С. 301-309.
6. Алиев, Р.К. Лекарственные растения Азербайджана: Справочник/ Р.К. Алиев, Л.И. Прилипко, И.А. Дамиров. Баку: Азербайджанское гос. изд-во, 1972. - 196 с.
7. Алтамышев, А. А. Лекарственные богатства (природного происхождения) / А.А. Алтамышев. Фрунзе: Кыргыстан, 1974. — 292 с.
8. Ангарская, М.А. Влияние флакразида на интенсивность коронарного кровотока и сердечную деятельность / М.А. Ангарская, П.И. Безрук // Фармакология и токсикология. — 1968. № 2. - С. 179181.
9. Бабаев, Р.И. К динамике накопления эфирных масел у разных видов мяты Азербайджана / Р.И. Бабаев, М.А. Рагимов // Изв. АН АзССР. Сер. биол. наук. 1970. - № 4. - С. 40-42.
10. Бабаскина, Л.И. Количественное определение суммы флавоноидов в сырье люцерны посевной / Л.И. Бабаскина, B.C. Бабаскин // Формирование приорететов лекарственной политики: материалы Всерос. конф. -М., 1995.-С. 164-165.
11. Бандюкова, В.А. Фенолокислоты растений, их эфиры и гликозиды/
12. B.А. Бандюкова // Химия природ, соединений.— 1983.— №3.—1. C. 263-272.
13. Батюк, B.C. Выделение суммы флавоноидов из листьев боярышника согнуточашечкового (Crataegus curvisepala Lindm) / B.C. Батюк, А.П. Прокопенко, Д.Г. Колесников // Мед. пром-ть СССР. -1963.-№ 1.-С. 22-25.
14. Батюк, B.C. Кратенацин-новый флавонгликозид из Crataegus curvisepala / B.C. Батюк, Н.В. Чернобровая, А.П. Прокопенко // Химия природ, соединений. 1966. - № 2. - С. 90-93.
15. Батюк, B.C. Применение полиамидного сорбента для выделения флавоноидов из листьев боярышника согнуточашечкового / B.C. Батюк// Мед. пром-ть СССР. 1965. - № 11. - С. 20-22.
16. Батюк, B.C. Структура флавоноидов Crataegus curvisepala / B.C. Батюк // Химия природ, соединений. 1966. — № 4. - С. 28-29.
17. Батюк, B.C. Флавоноиды боярышника: Структура кратенацина /
18. B.C. Батюк, Н.В. Чернобровая, Д.Г. Колесников // Химия природ, соединений. 1969. - № 4. - С. 234-236.
19. Батюк, B.C. Флавоноиды некоторых видов боярышника / B.C. Батюк, А.П. Прокопенко, Д.Г. Колесников // Материалы докл. в секциях (1-й Всесоюз. съезд фармацевтов). М., 1967. - С. 41-42.
20. Безрук, П.И. Некоторые фармакологические данные о флакразиде / П.И. Безрук // Фармакология и токсикология.- 1967.- № 4.1. C. 437-438.
21. Беленький, М.П. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта / М.П. Беленький. 2-е изд., перераб. и доп. - JI.: Медицина, 1963. - 149 с.
22. Беленький, M.J1. Элементы количественной оценки фармакологичекого эффекта / М.Л.Беленький. JL: Гос. изд-во Мед. лит., 1968.- 151 с.
23. Бенькович, Е.И. Биологически активные вещества плодов боярышника и изменения их в процессе созревания / Е.И. Бенькович // Биологически активные вещества плодов и ягод.- М., 1976. — С. 170-173.
24. Блажей, А. Фенольные соединения растительного происхождения /
25. A. Блажей, Л. Шутый. М.: Мир, 1977. - 239 с.
26. Бобореко, Е.З. Боярышник / Е.З. Бобореко. Минск: Наука и техника, 1974.-224 с.
27. Бубенчикова, В.Н. Фитохимическое исследование некоторых представителей рода донник, буквица, копытень / В.Н. Бубенчикова,
28. B.А. Королев, В.И. Кочкаров // Современные аспекты изучения лекарственных растений: научн. тр. НИИФ. М., 1995.- Т. 24.1. C. 147-150.
29. Быков, В.И. Пиннатифидин новый флавоноловый гликозид из Crataegus pinnatifida / В.И. Быков, В.И. Глызин, А.И. Баньковский // Химия природ, соединений. - 1972. -№ 6. - С. 715-718.
30. Венгеровский, А.И. Доклиническое изучение гепатозащитных средств / А.И. Венгеровский, И.В. Маркова, А.С. Саратиков // Ведомости Фармакологического Комитета (методические рекомендации). 1999. - № 2. - С. 9-12.
31. Вересковский, В.В. Флавонолы различных видов рода Amelanchier / В.В. Вересковский, Д.К. Шапиро, Т.И. Нарижная //Химия природ, соединений. 1982. - № 2. - С. 257.У
32. Вересковский, В.В. Хроматографическое исследование антоциановых пигментов плодов некоторых видов барбариса / В.В. Вересковский, Д.К. Шапиро // Химия природ, соединений, 1985.— № 4. - С. 569-570.
33. Ветров, П.П. Определение содержания липофильных веществ и суммы каротиноидов в растительном сырье / П.П. Ветров, С.В. Гарная, Л.Г. Долганенко // Хим.-фармац. журн. 1989.- №3.- С. 320.
34. Вечер, А.С. О флавоноидах некоторых видов рода Crataegus L. / А.С. Вечер, Е.И. Бенькович // Изв. АН БССР. Сер. Биол. наук. -1970.-№6.-С. 107-110.
35. Вигоров, J1.H. Новые и мало изученные биологические вещества плодов / J1.H. Вигоров // Биологически активные вещества плодов и ягод.-М., 1976.-С. 24-29.
36. Вигоров, Л.И. Сад лечебных культур / Л.И. Вигоров. Свердловск: Среднеурал. кн. изд-во, 1976.— 171 с.
37. Влияние различных фракций боярышника на некоторые показатели системной гемодинамики / С.В. Матершов и др. // Человек и лекарство: тез. докл. 10 Рос. нац. конгр. 7-11 апр. 2003 г. -М., 2003.-С. 632.
38. Выделение и анализ природных биологически активных веществ / Е.А. Краснов и др. Томск: Изд-во Том. мед. ин-та, 1987. - 184 с.
39. Гацура, В.В. Фармакологическая коррекция обмена ишемизированного миокарда / В.В. Гацура. М.: Наука, 1993. - 252 с.
40. Гликофлавоноиды Crataegus monogyna и С. pentagyna / Н. Николов и др. // Химия природ соединений. 1973. - № 1. - С. 116-117.
41. Горяев, М.И. Справочник по газожидкостной хроматографии органических кислот / М.И. Горяев, Н.А. Евдокимова. Алма-Ата: Наука, 1977.-551 с.
42. Горяев, М.И. Эфирные масла флоры СССР / М.И. Горяев. Алма-Ата: Ан КазССР, 1952. - 3 80 с.
43. Государственная фармакопея СССР: в 2ч.- 11-е изд.- М.: Медицина, 1987-1990. Вып. 1-2. - 334 е.; 398 с.
44. Губанов, И.А. Поиски флавоноидсодержащих растений во флоре Средней Азии / И.А. Губанов, К.И. Боряев, А.И. Захаров // Фармация. 1969. -№ 3. - С. 44-48.
45. Гусейнов, Д.Я. Влияние боярышника кавказского на сердечнососудистую систему / Д.Я Гусейнов, П.А. Юзбашинская // Сб. тр. Азербайджан, гос. мед. ин-та им. Н. Нариманова. — Баку, I960.— Т. 7.-С. 50-57.
46. Гусейнов, Д.Я. Влияние препаратов боярышника пятипестичного на диурез в эксперименте / Д.Я. Гусейнов // Сб. тр. Азербайджан, гос. мед. ин-та им. Н. Нариманова. Баку, 1960. - Т. 7. - С. 97-99.
47. Гусейнов, Д.Я. К фармакологии суммы сапонинов боярышника пятипестичного / Д.Я. Гусейнов // Фармакология и токсикология. -1965.-№ 2.-С. 172-176.
48. Гусейнов, Д.Я. Сравнительная оценка фармакологических свойств различных видов Азербайджанского боярышника / Д.Я. Гусейнов // Сб. тр. Азербайджан, гос. мед. ин-та им. Нариманова. Баку, 1960. -Т. 7.-С. 333-341.
49. Гусейнов, Д.Я. Химический состав и биологическая ценность сапонинов некоторых растений флоры Азербайджана / Д.Я. Гусейнов, Г.Б. Искандеров // Науч. докл. высшей школы. Сер. биол. наук. 1972. - № 3. - С. 85-88.
50. Гутманис, К.К. Полифенолы в плодах и листьях деревьев и кустарников Латвии / К.К. Гутманис // Биологически активные вещества плодов и ягод. Свердловск, 1968. - С. 235-237.
51. Демина, Т.Г. Изучение флавоноидов и витамина С в плодах некоторых дикорастущих кустарников Горного Алтая / Т.Г. Демина // Труды II Всесоюзного семинара по биологически активным веществам плодов и ягод. Свердловск, 1964. - С. 141-144.
52. Деникеева, М.Ф. Материалы к изучению змееголовника узловатого / М.Ф. Деникеева, П.К. Алимбаева, А.Ф. Гаммерман // Раст. ресурсы. 1967. - Т. 3, вып. 1. - С. 47-52.
53. Дикорастущие и культивируемые в Сибири ягодные и плодовые растения / А.Б. Гарбунов и др. Новосибирск: Наука, 1980. - 264 с.
54. Евдокимова, О.В. Изучение липофильной фракции плодов боярышника / О.В. Евдокимова, И.А. Самылина, О.В. Нестерова // Фармация. 1992. - Т. 41, № 3. - С. 60-61.
55. Евдокимова, О.В. Определение содержания суммы фосфолипидов и каротиноидов в плодах некоторых видов боярышника (Crataegus L.) / О.В. Евдокимова, И.А. Самылина, О.В. Нестерова // Фармация. -1992.-Т. 41, №6.-С. 70-72.
56. Жеребин, IO.JI. Каротиноиды виноградной ягоды / Ю.Л. Жеребин, А.А. Колесник // Химия природ, соединений.- 1984.- №1.-С. 111-113.
57. Землинский, С.Е. Лекарственные растения СССР / С.Е. Землинский. -М.: Медгиз, 1958.-420 с.
58. Зинченко, Л.А. Биологически активные вещества шрота листьев мяты перечной / Л.А. Зинченко // Науч. обозрение. 2005. - № 6. -С. 32-35.
59. Зинченко, Л.А. Макро- и микроэлементы в отходах переработки плодов боярышника кроваво-красного / Л.А. Зинченко // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. трудов. Пятигорск, 2005. - Вып. 60. - С. 342-343.
60. Зинченко, Л.А. Определение полифенольного состава суммарных фракций, полученных из отходов переработки плодов боярышника кроваво-красного и шрота листьев мяты перечной // Л.А. Зинченко, Э.Т. Оганесян // Науч. обозрение. 2006. - № 2. - С. 36-39.
61. Изучение гепатозащитного действия различных фракций шрота боярышника на модели острого ССЦ-поражения печени / Е.Г. Доркина и др. // Гепатология сегодня: сб. ст. 10 Рос. конф. 28-30 марта 2005 г. М., 2005. - Т. 15, вып. 1. - С. 99.
62. Искендеров, Г.Б. Стериновый и тритерпеновый гликозиды Crataegus pentagyna / Г.Б. Искендеров, М.И. Исаев // Химия природ, соединений.- 1974.-№ 1.-С. 103-104.
63. Кабиев, O.K. Природные полифенолы— перспективный класс противоопухолевых и радиопотенцирующих соединений / O.K. Кабиев, С.Б. Балмуханов. -М.: Медицина, 1975. 190 с.
64. Касьян, А.Н. К химической и фармакологической характеристике некоторых представителей рода боярышника / А.Н. Касьян // Некоторые вопросы фармации. Киев, 1956. - С. 339-343.
65. Керимова-Мустафаева, Н.М. Лечение гипогалактии экстрактом боярышника: сб. тр. Азербайджан, гос. мед. ин-та им. Н. Нариманова. Баку, 1958. - Вып. 5. - С. 209-211.
66. Киваева, В.Л. Фармакологическое исследование гликозидосодержащего препарата из цветов боярышника / В.Л. Киваева // Фармакология и токсикология. 1951. - № 2. - С. 52-53.
67. Кирхнер, Ю.А. Тонкослойная хроматография: в 2 т. / Ю.А. Кирхнер. М.: Мир, 1981. - Т. 2. - 523 с.
68. Клышев, Л.К. Флавоноиды растений / Л.К. Клышев, В.А. Бандюкова, Л.С. Алюкина. Алма-Ата: Наука, 1978. - 219 с.
69. Колб, В.Г. Справочник по клинической химии/ В.Г. Колб, B.C. Камышников. Минск: Беларусь, 1982. - 336 с.
70. Количественное определение суммы флавоноидов и гидроксикоричных кислот в почках некоторых видов Populus L. / В.Б. Браславский и др. // Растит, ресурсы. 1991.- Т. 37, вып. 3.- С. 130-134.
71. Кочетков, Н.К. Химия биологически активных природных соединений / Н.К. Кочетков. М., 1970. - 486 с.
72. Куркин, В.А. Фармакогнозия: учебник для студентов фармац. вузов / В.А. Куркин. Самара: Офорт; Сам ГМУ, 2004. - 1180 с.
73. Кущинская, И.Н. Идентификация каротиноидов, содержащихся в сухих плодах шиповника вида R. cinnamomea. Сообщение 1 / И.Н. Кущинская, JI.O. Шнайдман // Мед. пром-ть СССР. 1964. - № 4. -С. 34-38.
74. Макарова, Н.В. Статистика в Excell: учеб. пособие / Н.В. Макарова, В.Я. Трофимец. М.: Финансы и статистика, 2002. - 368 с.
75. Малкумиан, И.С. Бактерицидная активность некоторых представителей флоры Армении / И.С. Малкумиан // Изв. АН АССР. Сер. биол. наук. 1963. - № 16. - С. 83-88.
76. Масло облепиховое: фармакоп. ст. Введ. 01.12.95. - М., 1995. -8 с.
77. Масло облепихово-мятное новый лекарственный препарат / Д.В. Семенив и др. // Провизор. - 2000. - № 22. - С. 30.
78. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: в 2 т. / М.Д. Машковский. 14-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: Новая волна,1996.-Т. 1. -736 с.
79. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: в 2т. / М.Д. Машковский. 13-е изд., перераб., испр. и доп. - Харьков: Торсинг,1997.-Т. 2.-592 с.
80. Методические рекомендации по изучению общетоксического действия фармакологических средств. Утв. 25.12.97 // Вестн. фармакоп. комитета.- 1998.-№ 1.-С. 27-32.
81. Методы определения токсичности и опасности химических веществ / под ред. И.В. Саноцкого. — М.: Медицина, 1970. 343 с.
82. Мешкова, Н.П. Практикум по биохимии / Н.П. Мешкова, С.Е. Северина. -М.: Изд-во Московс. ун-та, 1979.-С. 157-158.
83. Минаева, В.Г. Флавоноиды в онтогенезе растений и их практическое использование / В.Г. Минаева. Новосибирск: Наука, 1978.-255 с.
84. Многократные измерения параметров системной и регионарной гемодинамики у бодрствующих крыс / О.С. Медведев и др. // Физиол. журн. СССР. 1986. - Т. 72, № 5. - С. 253-256.
85. Муравьев, И.А. О природе веществ в плодах кроваво-красного боярышника, определяющих их кардиотропную активность / И.А. Муравьев, Н.Д. Бреднева//Фармация. 1987.-№ З.-С. 32-34.
86. Мурашев, А.Н. Руководство по экспериментальной физиологии кровообращения / А.Н. Мурашев, О.С. Медведев, С.А. Давыдова. -Саратов: Изд-во Саратов, ун-та, 1992. 42 с.
87. Николов, Н. Глогозид- новый флавоноид из Crataegus pentagyna / Н. Николов, В.И. Литвиненко, И.Н. Ковалев // Химия природ, соединений. 1973.-№ 2.-С. 148-151.
88. Николов, Н. Кратезид- новый флавонолгликозид из Crataegus monogyna и С. pentagyna / Н. Николов, B.C. Батюк, В. Иванов // Химия природ, соединений. 1973,-№2.-С. 153-156.
89. Николов, Н. Нови флавоноиди от Crataegus monogyna L. и С. pentagyna W. et К. / H. Николов // Фармация (НРБ). 1977. - Т. 27, №6.-С. 18-23.
90. Николов, Н. Проучване флавоноидния състав на Crataegus monogyna L. I. съобщ.: ИзолИране на флавоноидна смес от листата / Н. Николов, В. Иванов // Фармация (НРБ). 1969. -№ 6. - С. 32-37.
91. Николов, Н. Проучване флавоноидния състав на Crataegus monogyna L.: II. Разделяне на флавоноидната смес от листата: Измеране на кверцетин, хиперозид и 7-глюколютеолин / Н. Николов // Фармация (НРБ). 1971. - Т. 21, № 4. - С. 42-47.
92. Нилов, Г.И. Антивирусная активность плодов некоторых представителей семейства розоцветных / Г.И. Нилов, Н.И. Чиркина // Биологически активные вещества плодов и ягод. М., 1976. - С. 4142.
93. Оганесян, Э.Т. Изучение жирно-кислотного состава липофильной фракции из шрота плодов боярышника кроваво-красного / Э.Т. Оганесян, J1.C. Ушакова, JI.A. Зинченко // Науч. обозрение. 2005. -№4.-С. 13-14.
94. ОлПАК. — Россия, 2006 Электронный ресурс. Режим доступа: http://www.olpak.com/proolrus/boyarishnik.htm. - Загл. с экрана.
95. Патология: Учебник / под ред. В.А. Макарова, С.А. Реккандта. -Пятигорск: Невиномыс. гор. типография, 1998. 45 с.
96. Петрова, В.П. Витаминность крупноплодных форм боярышника / В.П. Петрова // Биологически активные вещества плодов и ягод. -Мичуринск, 1972.-С. 149-154.
97. Петрова, В.П. Флавоноидные пигменты плодов некоторых интродуцированных на Украине боярышников / В.П. Петрова // Биологически активные вещества плодов и ягод. — Свердловск, 1968.-С. 173-177.
98. Полуколичественный спектральный метод анализа минерального сырья из кратера угольного электрода (50 элементов). ФГУП Кавказгеологсъемка. Центральная испытательная лаборатория. Методика предприятия МП-4С. Ессентуки, 1998. - 23с.
99. Поляков, Н.Г. К вопросу о биологической оценке активности лекарственных смесей / Н.Г. Поляков // Сб. науч. тр./ ЦАНИИ. — М., 1964.-Т. 5.-С. 196-204.
100. Попов, А.П. Лекарственные растения в народной медицине / А.П. Попов. Киев:Здоров'я, 1968. - 72 с.
101. Практикум по хроматографическому анализу / под ред. К.М. Ольшановой. -М.: Высш. шк., 1970.-312 с.
102. Применение некоторых настоек в профилактике и лечении заболеваний нервной и сердечно-сосудистой систем. Россия, 2006 Электронный ресурс. - Режим доступа: http://www.fabrika.yarbusiness.rularticles/article3/. - Загл. с экрана.
103. Прокопенко, А.П. Флавоноиды некоторых видов боярышника/ А.П. Прокопенко, B.C. Батюк, Д.Г. Колесников // Всесоюз. съезд фармацевтов (1;1970;Пятигорск): сб. статей.- Пятигорск, 1970. — С. 236-238.
104. Роль фенольных антиоксидантов в повышении устойчивости органических систем к свободно-радикальному окислению: аналитический обзор / И.В. Сорокина и др.. Новосибирск, 1997. -Вып. 1.-С. 46-67.
105. Российский, Д.М. Новые препараты из отечественных лекарственных растений и их клиническое применение / Д.М. Российсий // Новости медицины. 1949. - Вып. 12. — С. 29-35.
106. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. В.П. Фисенко. М.: МЗ РФ, 2000. - С. 18-22, 360-364.
107. Сентебова, Н.А. Предложения по унификации методов определения триглицеридов в сыворотке крови / Н.А. Сентебова, Н.В. Салицкая // Унификация лабораторных методов исследования. -М.; 1978. Вып. 8. - С. 67-75.
108. Сернов, J1.H. Элементы экспериментальной фармакологии / Л.Н. Сернов, В.В. Гацура. М.: Всерос. Научн. Центр по безопасности биологич. активных веществ, 2000. - С. 116-117, 318-319.
109. Сидоров, К.К. Методы определения острой токсичности и опасности химических веществ. (Токсикология) / К.К. Сидоров. -М.: Медицина, 1970. 171 с.
110. Слесарев, В.И. Химия. Основы химии живого / В.И. Слесарев. -СПб: Химиздат, 2001. 783 с.
111. Соколов, С.Я. Справочник по лекарственным растениям / С .Я. Соколов, И.П. Замотаев. М.: Медицина, 1984. - 662 с.
112. Справочник биохимика / Р. Досон и др.. М.: Мир, 1991.-С. 379-426.
113. Степаненко, Б.Н. Химия и биохимия углеводов (Полисахариды) / Б.Н. Степаненко. М., 1978. - 256 с.
114. Терпены м кумарины / под общ. ред. Г.В. Пигулевского. М.-Л.: Наука, 1965.-197 с.
115. Титова, А.А. С-гликозиды Crataegus curvisepala / А.А. Титова, B.C. Батюк // Химия природ, соединений. 1986. - № 3. - С. 373.
116. Тринус, Ф.П. Нестероидные противовоспалительные средства / Ф.П. Тринус, Н.А. Мохорт, Б.М. Клебанов. Киев: Здоров'я, 1975. -240 с.
117. Тритерпеноиды родов сем. Lamiaceae флоры России: обзор разнообразия; состав у Dracocephalum Multicolor Кош. / А.Д. Зорина и др. // Раст. ресурсы. 2002. - № 3. - С. 60-63.
118. Турецкова, В.Ф. Изучение биологической активности свежесобранного сырья ландыша в процессе его временного хранения / В.Ф. Турецкова, И.А. Муравьев // Фармация.- 1983. — №6.-С. 24-28.
119. Турова, А.Д. Лекарственные растения СССР и их применение / А.Д. Турова, Э.Н. Сапожникова. М.: Медицина, 1982. - 288 с.
120. Фитохимические и фармакологические исследования отходов плодов боярышника кроваво-красного / Э.Т. Оганесян и др. // Материалы конференции. Современные наукоемкие технологии: сб. науч. тр. М., 2004. - Вып. 6. - С. 111.
121. Хайдов, Ц. Лекарственные растения в Монгольской медицине / Ц. Хайдов, Б. Алтанчимэг, Т.С. Варламова. Улан-Батор: Гостлитиздат, 1985.-346 с.
122. Химико-фармакологическое изучение дикорастущей флоры и отходов фармацевтического производства / А.Ю. Пархоменко и др. // Человек и лекарство: тез. докл. 10 Рос. нац. конгр. 7-11 апр. 2003 г.-М., 2003.-С. 645.
123. Химический анализ лекарственных растений / под ред. Н.И. Гринкевич, Л.Н. Сафронич. М.: Высш. шк., 1983. - 176 с.
124. Химическое изучение некоторых представителей рода наперстянка и рода боярышник / В.М. Гарбузова и др. // Современные методы исследования лекарственных растений / ВНИИ фармации. 1983. — Т. 20.-С. 126-132.
125. Хлонов, Ю.П. Боярышники Сибири и Дальнего Востока-источники биологически активных веществ / Ю.П. Хлонов, Т.А. Волхонская // Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока. Томск, 1986. - С. 161 -162.
126. Чакалнская, I.I. Трытэрпенощы у плодах штродуцыраванных у Белорусп вщоу сем. Rosaceae Yuss / I.I. Чакалнская, В.А. Сырапушчынская // Изв. АН БССР. Сер. биол. наук. 1980. - № 4. -С. 73-76.
127. Чекалинская, И.И. Биологически активные вещества плодов некоторых видов боярышника выращиваемого в Белоруссии / И.И. Чекалинская, Е.И. Бенькович // Биологически активные вещества плодов и ягод. Мичуринск, 1972. - С. 146-148.
128. Чекалинская, И.И. Биологически активные вещества некоторых видов боярышника интродуцированных в Белоруссии / И.И. Чекалинская, Т.В. Довнар // Полезные растения Прибалтийских республик и Белоруссии. Вильнюс, 1973, - С. 273-278.
129. Чирва, В.Я. Выделение и характеристика пектина Mentha piperitae / В.Я. Чирва, Н.К.Черно, С.А. Мазниченко // Химия природ, соединений. 1977. - Вып. 5. - С. 695-696.
130. Шапиро, Д.К. Целебные культуры перспективное направление в садоводстве / Д.К. Шапиро. - Минск: Наука и техника, 1978. - 64 с.
131. Шахова, М.Д. Стерины мяты перечной / М.Ф. Шахова, А.Л. Деднева // Фармация. 1972. -№ 5. - С. 19-21.
132. Щервановский, JI.P. Биологически активные соединения крымских видов боярышника / Л.Р. Щервановский, В.М. Косых // Укр. бот. журн. 1970. - Т. 27, № 6. - С. 763-767.
133. Anttolainen, P.P. Int. Symp. on antioxidants and disease prevention: Biochemical, nutritional and pharmacological aspects / P.P. Anttolainen, L.M. Valsts, L. Rosanen. Stockholm, Sweden, 1993. - P. 87.
134. Baslas, R.K. Phytochemical studies of the species of Mentha genera / R.K. Baslas // Herba hung. 1983. - T. 22, № 2. - P. 85-104.
135. Boser, H. Polycondensed flavonoids/ H. Boser, K. Wolf / Arzneim. Forsch. 1962. - Bd. 16. - S. 199-204.
136. Braasch, W. Wirkung eines Wa rigen Crataegus— Extraktes auf peripheren Kreislauf von Hunden / W. Braasch, W. Bienroth // Arzneim. Forsch. 1960. - Bd. 10. - S. 127-129.
137. Engelking, Dr. Die Wirkung eines Crataegus-Wirkstoffes (Heptahydroxyflavanglykosid) in wa riger Losung auf Herz und Kreislauf von Hunden/ Dr. Engelking, F. Willing // Arzneim. Forsch. - 1958. — Bd. 10. -S. 39-42.
138. Fiedler, U. New inhalsstoffe aus Crataegus oxyacantha / U. Fiedler // Arzneimitt. Forsch. - 1955. - Jg.5.609.
139. Fiesel, V. Flavonoide aus Crataegus / V. Fiesel // Arzneimit. Forsch. -1966.-Jg. 16, № l.-S. 80-82.
140. Fischer, H. Uber die Wirkung reiner Crataegus Sauren / H. Fischer, H. Bayerle // Arch, exptl. Pathol, und Pharmakol. - 1955.- Bd. 3.-S. 246-249.
141. Friedrich, H. Untersuchungen iiber die Isoramnetin Glucoside aus den Bliiten von Calcudula officinalis / H. Friedrich // Arch. Pharm. 1962. -Bd. 395. H. 6.-S. 464-471.
142. Horhammer, L. Unter Mitarbeit con M. Aeitz Neue Methoden im pharmakognostischen, Unterricht. / L. Horhammer, H. Wagner // Deutsche Apotheker-Zeitung. 1963. - Vol. 100, № 40. - S. 1302-1306.
143. Hoskerts, T. Beitron zur Prage einer coronawirkung von Wa rigen Extrakten aus Crataegus Droge / T. Hoskerts, L. Millke / Arzneim.-Forsch. - 1955. - Bd. 12. - S. 755-757.
144. Kovach, A.L. Die Wikung eines Extracten aus Crataegus oxyacantha ouf die Durchstromung der Coronarien von Hunden / A.L. Kovach, M. Boldi, L. Fedine // Arzneimit. Forsch. - 1959. -№ 9. - S. 378-379.
145. Lewak, S. Dimetric leucoanthocyanins of Hawthorn (Cr. ox.) // S. Lewak, A. Rodominsko // Poczniki Chem. 1965.- T. 39 (12) .-S. 1839-1845.
146. Lewak, S. Flavonoids of Hawthorn / S. Lewak // Postepy Biochem. -1969.-Т. 15(3).-S. 425-434.
147. Liibbers, F. Zum Probiem des tierexperimentellen Nachweises einer Herzwirksamkeit von Crataegus / F. Lubbers, H. Kuschke // Arzneimittel. Forsch, - 1955. - Bd. 5(10). - S. 603-604.
148. Montgomery, R. Determination of glycogen / R. Montgomery // Arch. Biochem. Biophys. 1957. - Vol. 67, № 2. - P. 378.
149. Neu, R. Das Fehlen von Digitaloiden in Crataegus oxyacantha / R. Neu //Arzneimit. Forsch. - 1955. - Bd. 10. - S. 604-606.
150. Neu, R. Uber neue Inhaltastoffe von Crataegus oxyacantha / R. Neu, U. Kranen- Fiedler // Die Naturwissenschaften. 1953. - Bd. 40. - S. 226.
151. New, R. Uber neue basische inhaltsestoffe aus Weibdorn/ R. New, U. Fiedler//Naturwissensch.- 1954.-Jg.-41, № 11. S. 259-260.
152. Ohkawa, H. Assay for lipid peroxides in animal tissues by thyobarbituric acid reaction / H. Ohkawa, N. Ochihi, K. Vagi // Anal. Biochem. 1979. - Vol. 95, № 2. - P. 351-538.
153. Pharmacological properties of oligomecic procyanidin Crataegus oxyacantha / W. Rewerksi et al. // Arzneim. Forsch. - 1971. - Bd. 21, № 6. - S. 886-888.
154. Racz-Kotilla, E. Hypotensive ant Beta-Bloching Effect of Procyanidinis of Cr. Monogyna / E. Racz-Kotilla,Y. Jozsa., I. Racz // Planta med. -1980.-Vol.3.-P. 239.
155. Recent investigations of Crataegus flavonoids / N. Nikolov et al. // Flavonoids and Bioflavonoid Symp.: 6 Hyng. Bioflavonoid symp. — Munisch. 6-9 Sept 1981. Budapest, 1982. - S. 325-344.
156. Schwabe W. Inhaltsstoffe des Crataegus. 9 Mitt.: Enol-Lacton / W. Schwabe, R. New // Arzneimitt.- Forsch.- 1959.- Jg. 9, №11.-S. 717-719.
157. Schwabe, W. Pharmakologische Prufung einer aus Crataegus isolierten Substans / W. Schwabe, R. Neu // Arzneim. Forsch. - 1960. - Bd. 10. -S. 60-61.
158. Tschesche, R. Crataegolic acid and two new triterpenecarboxlic acids from Cr. Oxyacantha / R. Tschesche, Z. Poppel // Chem. Ber. 1959. -Vol. 91.-P. 320-328.
159. Ullsperger, R. Recovery of water-insoluble constituents of Crataegus / R. Ullsperger // Pharmazie. 1951. - Bd. 6. - S. 141.
160. Verzar-Petri, K.A. Standardisierung der Flavonoide und monogyna in Crataegus Drogen und Zubereitungen / K.A.Verzar-Petri, J.A. Szarvashari // Planta medica, 1981.-Bd. 2. S. 13-114.
161. Weinger, К. Nhe proanthocyanidines / К. Weinger // Chem Ber. -1961. -Bd. 94. S. 3030-3043.