Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Стандартизация фитопрепаратов на основе липофильных комплексов плодов черной смородины и семян тыквы

Ргя

0 ОЦ На правах рукописи

ФЕТИСОВА

Анжелика Николаевна

СТАНДАРТИЗАЦИЯ ФИТОПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ЛИПОФИЛЬНЫХ КОМПЛЕКСОВ ПЛОДОВ ЧЕРНОЙ СМОРОДИНЫ И СЕМЯН ТЫКВЫ

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва -1996

Работа выполнена в Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова

Научные руководители:

доктор фармацевтических наук, профессор, член-корреспондент РАО В. А. Попков

доктор фармацевтических наук, профессор И. А. Самылина

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор, член-корреспондент МАИ Д М. Попов

доктор фармацевтических наук, профессор B.C. Бабаскин

Ведущая организация: Государственный научно-исследовательский институт по стандартизации и контролю лекарственных средств.

Защита состоится < > 1996 г. в часов н<

заседании Диссертационного совета Д. 074.05.06. при Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова (Москва, Суворовский бульвар,д. 13).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Академии не адресу: г. Москва, Зубовская площадь, д. 1.

Автореферат разослан > л^3^— 1996 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета

кандидат фармацевтических наук, доцент ЦП. Садчикова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Развитие фармацевтической промыш-генности характеризуется освоением безотходных технологий пе->еработки лекарственного растительного сырья (ЛРС), а также снденцией к использованию в качестве источников липофиль-гых комплексов, содержащих биологически активные вещества БАВ), отходов плодовых и ягодных культур, утилизируемых ппцевыми производствами.

Рациональное использование лекарственных средств раститель-гого происхождения позволяет расширить область их терапевти-[еского применения. В связи с этим возникает необходимость в шработке комплексных методов исследования ЛРС и препара-ов, получаемых на его основе.

Изучение и анализ жома плодов черной смородины, являющееся отходом пищевых производств, и семян тыквы как источни-:ов липидных комплексов с использованием современных мето-ов стандартизации, охватывающих исходное ЛРС, получаемую ¡а его основе субстанцию и конечный лекарственный препарат, редставляется актуальной задачей.

Настоящее исследование позволит расширить ассортимент оте -ественных лекарственных средств растительного происхождения дя лечения воспалительных заболеваний мочеполовой системы.

Цель п задачи исследования. Основная цель настоящей ра-оты - разработка и унификация научно-обоснованных методов гдндартизации жома плодов черной смородины, семян тыквы и олучаемых на их основе лекарственных средств на этапах: ис-одноеЛРС - лекарственная субстанция - лекарственная форма.

Основные задачи исследования:

1. Провести фармакогностический анализ жома плодов чер-0(1 смородины как нового источника липофильных комплексов.

2. Изучить химический состав лштофилыюй фракции жома лодов черной смородины.

3. Разработать методику "сквозной" стандартизации на эта-ах: жом плодов черной смородины - масло жома плодов черной мородины - суппозитории с маслом жома плодов черной смо-одины.

4, Провести стандартизацию суппозиториев с порошком семян тыквы.

5. Обобщить полученные данные и разработать проекты Временных Фармакопейных Статей (ВФС) на жом плодов черной смородины, масло жома плодов черной смородины, суппозитории с маслом жома плодов черной смородины, суппозитории с порошком семян тыквы.

Научная новизна. Впервые проведено фармакогностическое изучение и стандартизация нового источника липофильных комплексов - жома плодов черной смородины: охарактеризованы диагностические признаки ЛРС, определено количественное содержание липофильной фракции в жоме, разработаны показатели качества и методики их определения для жома плодов черной смородины и получаемых на его основе жирного масла и суппозиториев.

В составе липофильной фракции жома плодов черной смородины идентифицированы и количественно определены семь жирных кислот. Предложена методика "сквозной" стандартизации жома плодов черной смородины, масла жома плодов черной смородины и суппозиториев с маслом жома плодов черной смородины по специфичной у-линоленовой кислоте и по суммарному содержанию каротиноидов.

Проведена стандартизация суппозиториев с порошком семян тыквы по липофильной и гидрофильной фракциям.;: Предложены характеристики подлинности суппозиториев, включающие микроскопическое исследование порошка семян тыквы в составе свечей.

Изучена стабильность в процессе хранения жома плодов черной смородины, масла жома плодов черной смородины, суппозиториев с маслом жома плодов черной смородины и порошком семян тыквы.

Исследована микробиологическая чистота жома плодов черной смородины, получаемых на его основе жирного масла и суппозиториев, а также - суппозиториев с порошком семян тыквы.

Изучена острая и хроническая токсичность масла жома плодов черной смородины, суппозиториев с маслом жома плодов черной смородины и с порошком семян тыквы; установлено, что данные объекты безвредны.

Выявлена терапевтическая активность суппозиториев с маслом жома плодов черной смородины и порошком семян тыквы

при лечении ряда воспалительных заболеваний мочеполовой системы (хронических простатитов неспецифической этиологии и :алышнгоофоритов).

Степень новизны проведенных исследований подчеркивается положительными решениями ВНИИГПЭ о выдаче патентов РФ по заявкам № 92001303/14 "Способ получения суппозиториев" и Na 93009601/14 "Способ лечения хронического простатита".

Практическая значимость работы. Разработаны характери-лтаи подлинности и показатели качества жома плодов черной ;мородины, масла жома плодов черной смородины, суппозиториев с маслом жома плодов черной смородины и с порошком се-vtflH тыквы, которые включены в соответствующие проекты ВФС, переданные на рассмотрение в Фармакологический и Фармакопейный Комитеты.

Наработана опытная партия масла жома плодов черной смо-эодины, суппозиториев с маслом жома плодов черной смородины, суппозиториев с порошком семян тыквы на промышленно-экспериментальном заводе АОЗТ "Садко Ц".

Получены заключения о проведении на базе Городской кли-гаческой больницы N 50 апробации суппозиториев с маслом кома плодов черной смородины и с порошком семян тыквы, в которых указывается, что данные лекарственные формы обладает выраженным противовоспалительным эффектом при лечении гаиболее распространенных заболеваний мочеполовой системы и kioiyr использоваться в качестве средств моно- и комплексной те-эапии.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и об-:уждены на III Российском национальном Конгрессе "Человек и íeicapcTBo" (1996), на межкафедралыюй научной конференции VÍMA им. И.М. Сеченова (1995).

Публикации. По материалам исследования опубликовано 6 эабот. Получены положительные решения о выдаче патентов РФ го заявкам № 92001303/14 "Способ получения суппозитори-:в" и № 93009601/14 "Способ лечения хронического простатита". Получены приоритетные справки по заявкам № 95.111.612/ 14 от 05.07.1995 г. "Средство для лечения хронического простатита" и № 95.111.611/14 от 05.07.1995 г. "Средство для лечения фонических воспалительных заболеваний придатков матки".

Связь задач исследования с проблемным планом фарма-»сптичсских наук. Диссертационная работа выполнена в соот-

ветствии с планом научно-исследовательских работ ММА им И.М. Сеченова по теме "Оценка качества и сертификация биоло гически активных соединений синтетического и природного про исхождения, лекарственных препаратов, изделий медицински техники (технологические и экологические аспекты)". Номе] государственной регистрации 05 14003 01930006977.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на страницах машинописного тек ста и состоит из введения, обзора литературы (глава I), 5 глш собственных исследований, выводов, библиографического указа теля и приложений. Работа содержит таблиц и рисун ков. Библиографический указатель включает источников

из них иностранных.

В обзоре литературы проанализированы данные по химиче скому составу семян тыквы и плодов черной смородины. Обоб щены современные методы стандартизации ЛРС, содержащей лнпофильные комплексы,и методы оценки качества сушюзнто' риев с лекарственными средствами растительного происхождс' кия.

Во второй главе приводится подробная характеристика объектов и методов исследования.

Третья глава включает фармакогностическое изучение и вопро сы стандартизации жома плодов черной смородины.

В четвертой главе приводятся данные по получению масл; жома плодов черной смородины в лабораторных условиях I изучению его качественного и количественного состава.

Пятая глава посвящена получению и исследованию ректальных и вагинальных суппозиториев с маслом жома плодов черно!: смородины и порошком семян тыквы.

В шестой главе изложены результаты изучения стабильности в процессе хранения жома плодов черной смородины, масла жома плодов черной смородины, суппозиториев с маслом жома плодов черной смородины и с порошком семян тыквы. Приводятся данные по исследованию микробиологической чистоты, острой и хронической токсичности.

На защиту выносятся результаты стандартизации жома плодов черной смородины, масла жома плодов черной смородины, суппозиториев с маслом жома плодов черной смородины и с

порошком семян тыквы, а также данные по исследованию ост-зой и хронической токсичности.

Объекты н методы исследования. Основные объекты исследования - жом плодов черной смородины и порошок семян гъпсвы. Жом плодов черной смородины наиболее распространенных сортов (Лия'Плодородная, Вишневая, Чемпион) получали з АОЗТ "Садко Ц" (1993, 1994 года сбора), а также смесь промышленных сортов с Липецкого кондитерского комбината (1993 -.). Семена тыквы промышленных серий для приготовления по-эошка поступали с Красногорского завода по переработке ЛРС ;] 993, 1994 г.).

В работе использовались современные физико-химические методы анализа: газожидкостная хроматография, хроматография в гонком слое, спектрофотометрия и другие.

При проведении исследований руководствовались требова-шями общих статей Государственной Фармакопеи XI изд. (ГФ-<0 "Плоды" и "Семена".

Отработку числовых показателей жома плодов черной сморо-цшы и микроскопические исследования по установлению диаг-юстических признаков жома плодов черной смородины и по->ошка семян тыквы проводили в соответствии с требованиями

Физико-химические показатели масла жома плодов черной :мородины определяли согласно указаниям общей статьи "Масла кирные" Государственной Фармакопеи X изд. (ГФ-Х) и соответ-п вующим методикам ГФ-Х1.

При получении и стандартизации суппозиториев с маслом кома плодов черной смородины и порошком семян тыквы учшы-¡ались требования общей статьи ГФ-Х1 "Суппозитории".

Мшфобполопгческие исследования проводили по методикам >бщсй статьи ГФ-Х1 "Испытание на микробиологическую чисто-у".

Изучение острой и хронической токсичности масла ясома пло-юп черной смородины, суппозиториев с маслом жома плодов [ерной смородины и с порошком семян тыквы проводили со-ласно требованиям Фармакологического Комитета МЗ РФ.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Разработка методов стандартизации жома плодов черно! смородины. Как известно, в медицинской практике плоды чер ной смородины широко применяются в качестве поливитаминно го средства. Исследование жома плодов черной смородины I данном направлении нецелесообразно из-за особенностей получе ния этого вида сырья, являющегося отходом пищевых произ водств. Проведенный нами анализ показал присутствие аскор биновой кислоты в жоме плодов черной смородины в следовы: количествах, поэтому мы изучили возможность использование жома плодов черной смородины как источника липофильны; комплексов. Жом плодов черной смородины характеризуется значительным содержанием липофильной фракции, в составе ко торой имеется специфичная У-линоленовая кислота - унивсрсаль ный предшественник высокоактивных биологических веществ простагландинов, тромбаксанов, лейкотриенов и других эйкоза ноидов. Исходя го вышесказанного, мы сочли необходимым изу чсшсс жома плодоз черной смородины как исходного ЛРС дл создания лекарственных средств, обладающих противовоспали тельной активностью при лечении заболеваний мочеполовой сис темы.

В связи с отсутствием нормативно-технической документа ции (НТД) на жом плодов, являющийся по-существу новым ЛРС при разработке вопросов' стандартизации жома плодов черно: смородины учитывались требования к исходному сухому цельно му сырью - плодам черной смородины, регламентируемы ГОСТ 21450-75, а также особенности технологии получения жо ма.

Для разработки характеристик подлинности сырья нами бы ло проведено макро- и микроскопическое исследование. II внешним признакам жом плодов черной смородины представляе собой порошок коричнево-вишневого цвета, проходящий сквоз сито с отверстиями 3 мм, со своеобразным запахом и кисло-слад ким вкусом.

Раздел микроскопия был выполнен в соответствии с требован) ями ГФ-Х1, предъявляемыми к технике микроскопического исле дования порошков плодов и семян. Анатомическое описание же

ма плодов черной смородины сопровождается фотографиями микропрепаратов. Нами установлено, что диагностическое значение для порошка жома плодов черной смородины имеют обрывки эпидермиса, представленные некрупными полигональными клетками с четковидноутолщенными стенками; простые одноклеточные волоски варьирующих размеров, часто оторванные; единичные щитковидные эфиромасличные железки, при их опадении остается след в виде группы небольших толстостенных клеток; обрывки мелкоклеточной паренхимы мезокарпа с друзами оксалата кальция; обрывки проводящих пучков; группы каменистых клеток, образующие так называемый паркетный зндо-карп; обрывки кристаллоносного слоя семенной кожуры, имеющие коричневую окрасу; обрывки эндосперма, содержащие алейроновые зерна и жирное масло, обнаруживаемое по окраске Суданом III.

Определение числовых показателей проводилось согласно требованиям соответствующих методик ГФ-Х1. Анализу были подвергнуты образцы сырья различных серий. Значения влажности колебались от 6,3 до 7,5 %; содержание частиц, не проходящих через сито с диаметром отверстий 3 мм - от 2,89 до 2,91 %; содержание золы общей - от 2,85 до 2,91 %; золы, нерастворимой в 10 % хлористоводородной кислоте - от 0,87 до 0,93 %; содержание других частей растения - от 0,66 до 0,74 % (Таблица 1) .

С целью разработки показателя качества жома плодов черной смородины по содержанию действующих веществ нами предложена методика количественного определения липидного комплекса, включающая экстракцию жирного масла пищевым бен-зшюм марки "Нефракс" (ТУ 80912-79) из сырья в течение 4,5 часов в аппарате типа Сокслет, с последующим отгоном экстра-гента и гравиметрическим определением содержания липидного комплекса в пересчете на абсолютно сухое сырье (соотношение сырьеэксграгент -1:10). Относительная ошибка метода не превышала + 5,1 %. При анализе жома плодов черной смородины различных серий содержание липидного комлекса колебалось от 10,33 до 12,36 %. Результаты количественного определения липидного комплекса в жоме плодов черной смородины различных :ортов представлены в таблице 2.

Результаты исследования числовых показателей жома плодов черной смородины в процессе хранения.

№ и/п Показатель Исходные данные Через 1 год Через 2 года Предлагаемая норма

1. Содержание лнпидного комплекса, % 11,76+ 0,60 11,47+ 0,60 10,93+ 0,60 не менее 10 %

2. Содержание У-линоленовой кислоты, % 0,98+ 0,02 0,76+ 0,02 0,61+ 0,02 не менее 0,5%

3. Содержание суммы каротиноидов, мг*% 0,30+ 0,01 0,28+ 0,01 0,26+ 0,01 не менее 0,25мг*%

4. Влажность, % 6,8+ 0,5 6,8+ 0,5 7,0+ 0,5 не более 8 %

5. Зола общая, % 2,88+ 0,03 2,88+ 0,03 2,88+ 0,03 не более 3 %

6. Зола, нерастворимая в 10 % НС1, % 0,90+ 0,03 0,90+ 0,03 0,90+ 0,03 не более 1 %

7. Других частей растеши (кусочков листьев, стеблей), % 0,70+ 0,04 0,70+ 0,04 0,70+ 0,04 не более 0,8%

8. Частиц, не проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 3 мм, % 2,90+ 0,01 2,90+ 0,01 2,90+ 0,01 не более 3 %

о

Содержание липидного комплекса в жоме плодов черной ехда родины некоторых сортов.

№ Сорт Содержание липидного

п/п комплекса,%

1. Лия Плодородная 11,87

2. Вишневая 12,94

3. Чемпион 10,09

4. Сортовая смссь I 10,23

5. Сортовая смесь II 10,48

6. Сортовая смесь III 11,44

1. Сортовая смесь IV 10,96

Также было проведено изучение жирнокислотного состава ли-[тофильной фракции жома плодов черной смородины.

Масло подвергали гидролизу и этерифицировали по известной методике. Полученные метиловые эфиры жирных кислот шализировали с использованием метода газожидкостной хроматографии (ГЖХ). Анализ проводился на приборе "Биохром -1" с иаменно-ионизационным детектором и стеклянной капиллярной солонкой, заполненной неподвижной жидкой фазой ОV-101. Длина колонки - 54 м, внутренний диаметр - 0,27 мм. Условия шализа: газ-носитель - гелий, давление гелия на входе в колонку • 0,15 МПа, деление потока - 1:20, расход воздуха - 300 мл/мин, юдорода - 20 мл/мин, температура испарителя - 360°С, детекто-)а - 310°С. Температура термостата колонки программировалась >т 160 до 260°С, скорость - 4 гр/мин, диапазон чувствительно-ггн усилителя 4,8*Ю"10А, объем вводимой пробы - 1,5 мкл. 06-ций вид хроматограммы метиловых эфиров жирных кислот мас-и жома плодов черной смородины (МЖПЧС) представлен на шс.1.

И

Рис.1. Газожидкостная хроматограмма смеси метиловых эф! ров жирных кислот МЖПЧС.

1- метиловый эфир пальмитиновой кислоты;

2- метиловый эфир стеариновой кислоты;

3- метиловый эфир олеиновой кислоты;

4- метиловый эфир линолевой кислоты;

5- метиловый эфирТ-линоленовой кислоты;

6- метиловый эфир а-лшюленовой кислоты;

7- метиловый эфир паринаровой кислоты.

Таким образом, в МЖПЧС идентифицировано и количестве! но определено семь жирных кислот (таблица 3).

Состав жирных кислот идентичен для всех изученных нам сортов и промышленной сортовой смеси. В липофильной фра: ции жома плодов черной смородины преобладают лшюлсвая, а-линоленовая и олеиновая кислоты, что позволяет отнеа МЖПЧС к полувысыхающим маслам. В МЖПЧС также прису ствуют Т-линоленовая и пальмитиновая кислоты в сопоставимь количествах.

Качественный и количественный состав жирных кислот липо-фильной фракции жома плодов черной смородины некоторых сортов.

Качественный со- Содержание жирных кислот (%) в лн-

став жирных кислот пофильиой фракции жома плодов чер-

ной смородины сорта

Лия Вишне- Чем- Смесь сор-

Плодо- вая пи- тов, полу-

родная он ченная с Липецкого кондитерского комбината

Пальмитиновая С16.0 7,0 7,1 7,7 7,3

Стеариновая С^-о 3,5 5,2 5,0 6,1

Олеиновая С^) 14,6 11,2 13,8 13,3

Л тюлевая С^ 42,1 41,0 41,9 42,0

Т-линоленовая УС^з 7,1 8,3 8,9 7,8

а-линоленовая аС|И 23,5 25,1 22,6 21,9

Паринаровая Си;4 2,2 2,1 следы 1,6

Т.к. Т-линоленовая кислота (ГЛК) является специфичной и позволяет отличить МЖПЧС от других растительных масел, ее идентификация и количественное определение методом ГЖХ предлагается в качестве унифицированного метода стандартизации жома плодов черной смородины, масла и суппозиториев с маслом жома плодов черной смородины.

Методика определения содержания ГЛК в исходном сырье, субстанции и лекарственной форме была модифицирована к условиям производства. Использовался метод абсолютной градуировки.

Условия хроматографирования: газожидкостной хроматограф марки ЛХМ-8М, укомплектованный пламенно-ионизационным детектором; металлическая колонка длиной 2 м с внутренним диаметром Змм, заполненная СЬтоттозогЬ \У.

(1 % Н3РО.,, 18 % НДЭГС). Температура испарителя - 250°С, температура детектора - 260°С, температура термостата колонки -200°С. Скорость газа носителя (азот) -30 мл/мин, водорода - 30 мл/мин, воздуха - 300 мл/мин, объем вводимой пробы - 1,5 мкл.

Количественный анализ ГЛК в жоме плодов черной смородины включал предварительное получение липидного комплекса. Содерл<ание ГЛК рассчитывали в пересчете на абсолютно сухое сырье.

Для определения содержания ГЛК в суппозиториях с маслом жома плодов черной смородины 5 суппозиториев расплавляли •при постоянном перемешивании на водяной бане, после чего точную навеску испытуемого образца метилировали. Нерастворимые примеси во всех случаях удаляли центрифугированием в течение 15 минут при скорости 10 000 об/мин. Результаты анализа представлены в таблице 4.

В ходе изучения липофильной фракции было также установлено суммарное содержание каротиноидов в жоме плодов черной смородины - не менее 0,25 мг*% (в пересчете на абсолютно сухое сырье), в МЖПЧС - не менее 21 мг*% и в суппозиториях с маслом жома плодов черной смородины - не менее 7,5 мг*%.

Предложенные методы определения жирных кислот, в частности У-линоленовой кислоты и суммарного содержания каротиноидов были использованы для исследования стабильности в процессе хранения жома плодов черной смородины, МЖПЧС и суппозиториев с МЖПЧС.

Таблица 4.

Результаты количественного определения Т-линоленовой кислоты в жоме плодов черной смородины, масле жома плодов черной смородины и суппозиториях с маслом жома плодов черной смородины, приготовленных, методом выливания (основа масло какао; соотношение маслогоснова -1:6).

Содержание ГЛК, %

№ серии жом № серии масло № серии суппозитории

01093 0,97 01193 7,69 01293 2,98

02093 0,99 02193 7,85 02293 3,01

03093 0,98 03193 7,73 03293 2,99

Э4093 0,96 04193 7,85 04293 3,00

35093 0,99 05193 7,91 05293 2,97

36093 1,01 06193 7,63 06293 2,98

Метрологические характеристики (Р=0,95; п=6)

с=0,98 х=7,78 х=2,99

5=0,0175 8=0,1093 8=0,0147

^х=0,02 Ах =0,12 Ах =0,02

*ц%=1,9 А,%=1.5 А,%=0,5

Качественны» и количественный анализ масла жома пло-ов черной смородины. МЖПЧС анализировали согласно тре-ованиям общей статьи ГФ-Х "Масла жирные" и соответствую-шх методапс ГФ-Х1, перекисное число определяли иодиметриче-ш по ГОСТ 8285-74.

Жирное масло жома плодов черной смородины , получаемое ретракцией пищевым бензином марки "Нефракс", представля-г собой густую жидкость травянисто-зеленого цвета со специфи-гским запахом и приятным вкусом. МЖПЧС практически не-гстворимо в воде, легко растворимо в эфире, хлороформе, абсо-отном спирте.

Значения показателей качества МЖПЧС при анализе различ->1Х серий колебались следующим образом: плотность - от 923 до 0,926; показатель преломления - 1,4681; йодное число -■ 144,1 до 146,5; кислотное число - от 1,41 до 1,48; число омы-:ния от 186 до 190; перекисное число от 0,09 до 0,11 (таблица 5). Получение и разработка показателей качества суппозито-1св с маслом жома плодов черной смородины и порошком ■мин тыквы. Необходимость создания суппозиториев с ЖПЧС и порошком семян тыквы обусловлена, во-первых, уз-1М спектром использования лекарственных средств, получае-

мых из растительного сырья, в терапии хронических воспалительных заболеваний мочеполовой системы. В то же время препараты на основе JIPC обладают как " правило меньшими побочными эффектами и имеют более низкий процент противопоказаний. Во-вторых, непосредственно ЛРС в состав суппозиториев вводится довольно редко; применение измельченного ЛРС в виде свечей может дать мягкий пролонгиррванный эффект.

При получении суппозиториев в настоящей работе использовали две основы, разрешенные к медицинскому применению: масло какао и Витепсол Н 15. Дозы МЖПЧС на один суппозиторий (0,6 г - пессарии и 0,5 г - ректальные суппозитории) и дозы порошка семян тыквы (1,0 г пессарии и ректальные суппозитории) были выбраны по рекомендации врачей-специалистов. При выборе дозы порошка семян тыквы также учитывалась возможность получения суппозиториев методом выливания. Порошок семян тыквы получали измельчением семян до размера частиц, проходящих через сито с диаметром отверстий 0,5 мм.

В лабораторных условиях суппозитории готовили методом выливания в пластмассовые формы (масса ректальных суппозиториев - 3,0 г, пессариев - 4,0 г согласно указаниям общей статье "Суппозитории" ГФ-XI). Полученные суппозитории отвечал! всем требованиям качества общей статьи "Суппозитории" ГФ-Х] (таблица 6,7).

Методы оценки качества, используемые для исходной субстан ции - семян тыквы, были унифицированы нами при стандарта зации суппозиториев с порошком семян тыквы.

Отечественной Фармакопеей не предусмотрено определение степени дисперсности твердой фазы в свечах. Нам представляется целесообразным введение в НТД данного показателя качести; суппозиториев, т.к. от степени дисперсности лекарственного вс щесгва в лекарственной форме зависит в конечном итоге терапев тический эффект препарата (таблица 8).

Для определения подлинности суппозиториев с порошком се мян тыквы нами разработаны диагностические признаки порошк в составе свечей при микроскопическом исследовании. Установ лено, чгто суппозиторная основа не влияет на характер диагно стических признаков.

Изучение физико-химических показателей МЖПЧС в процессе хранения

№ п/п Показатель Исходные данные Через 1 год Через 2 года Предлагаемая норма

1. Содержание Т-линоленовой кислоты, % 7,78+ 0,12 7,00+ 0,12 7,00+ 0,12 не менее 6 %

2. Содержание суммы каротиноидов, мг*% 22,0+ 0,1 22,0 +0,1 22,0+0,1 не менее 21мг*%

3. Плотность, г/см3 0,923 - 0,926 0,923 - 0,926

4. Показатель преломления 1,4681 1,4681 1,4681 1,4681

5. Йодное число 144,4+0,3 144,8+0,3 146,2+ 0,3 144-147

6. Кислотное число 1,42+0,01 1,44+0,01 1,47+0,01 1,41-1,48

7. Число омыления мг КОН на 1 г препарата 188,0+2,0 188,0+2,0 188,0+2,0 186-190 \

8. Перекисное число в % йода 0,10+0,01 0,10+0,01 0,10+0,01 0,09-0,11 \

Показатели качества суппозиториев с МЖПЧС.

№ п/п Показатель Суппозиторные основы

масло какао Витспсол Н 15

1. Внешний вид зеленоватого цвета, равномерно окрашенные, без вкраплений

2. . Температура плавления °С 35,0-35,5 35,0-35,5

3. Время полной деформации, мин 6 12

4. рН водного извлечения 6,78-6,80 6,78-6,80

5. Содержание ГЖ, % 1,87 - 3,01'

6. Содержание суммы каротиноидов,мг*% 7,5 -7,8

Проанализировав результаты предыдущих исследований и проведя собственные, мы предложили идентификацию специфичной аминокислоты кукурбитин путем хроматографического разделения депротеинированной водорастворимой фракции из суппозиториев с порошком семян тыквы в тонком слое сорбента в системе метанол:вода:пиридин:хлористоводородная кислота (10 моль/л) (80:17,5: 10:2,5) в качестве метода определения подлинности свечей, а также для проведения "сквозной" стандартизации на этапах семена тыквы - суппозитории с порошком семян тыквы.

Таблица 7.

Показатели качества суппозиториев с порошком семян тыквы.

fs i/n Показатель Суппозиторные основы

масло какао Витепсол Н15

1. Внешний вид зеленовато-бурого цвета, равномерно окрашенные, без вкраплений

2. . Температура плавления °С 34,0-34,5 34,0-34,5

3. Время полной деформации, мин 14 14

4. рНводного извлечения б, 73-6,75 6,73-6,75

5. Содержание а-токоферола, мг*% 10,0 - 12,2

Таблица 8.

Степень дисперсности твердой фазы в суппозиториях с по-зшком семян тыквы.

дисперсность, м"1 процент частиц, %

до 40000 8,3

40000 - 20000 15,0

20000 - 15000 48,3

15000 - 10000 28,3

менее 10000 отсутствуют

Сведения о значительном содержании токоферолов в составе липофильной фракции семян тыквы, обуславливающих ангиок-сидангную активность в комплексе с противовоспалительным действием, позволили предложить показатель содержания си-токоферола в суппозиториях с порошком семян тыквы.

Анализ проводили в эфирных элюатах на хроматографе "Хром-4" с пламенно-ионизационным детектором. Колонка стеклянная, длиной 1,5 ми внутренним диаметром 2-3 мм. Неподвижная фаза \УНР (США), на хроматоне Н-АМЧЭМСБ (Ы-супср). температура термостата колонки - 250°С, блока ввода пробы и детектора -300°С, скорость газа-носителя - 45 мл/мин.

Пробу для хроматографнрования получали экстракцией из и:! мельченных свечей хлороформом в течение 6 часов в аппарате типа Сокслет с последующим удалением растворителя при 59-62°С. Экстракт омыляли спиртовым раствором щелочи, не-омыляемую фракцию извлекали диэтиловым эфиром. Установлено содержание а-токофсрола в суппозиториях с порошком семян тыквы - не менее 10 мг*%.

Изучение стабильности жома плодов черной смородины, МЖПЧС,суппозиториев с МЖПЧС и с порошком семян тыквы. Исследование стабильности жома плодов черной смородины, упакованного по 25 кг в тканевые мешки, при хранении в сухом, защищенном от света месте, при температуре 20+2°С показало, что он сохраняет свою стабильность в течение 2-х лет (время наблюдения). Стабильность жома плодов черной смородины изучали по показателям представленным в таблице 1.

Масло жома плодов черной смородины стабильно в течение 2-х лет (время наблюдения) при хранении в сухом, прохладном месте во флаконах оранжевого стекла с навинчивающимися пластмассовыми пробками по ГОСТ 17768-80. Показатели качества МЖПЧС в процессе хранения соответствуют указанным в таблице 5.

Суппозитории с МЖПЧС и с порошком семян тыквы хранили в контурной упаковке из целлюлозной пленки по ГОСТ 7730-74 в пачках из коробочного картона марки хром-эрзац по ГОСТ 7933-89 в сухом, защищенном от света месте, при температуре 5+3°С в течение 18 месяцев. Суппозитории стабильны в

течение указанного срока наблюдения. Показатели качества соответствуют приведенным в таблицах 6 и 7.

Изучение микробиологической чистоты жома плодов черной смородины, МЖПЧС, суппозиториев с МЖПЧС и с порошком семян тыквы.

Лекарственное растительное сырье и получаемые на его основе лекарственные препараты, как правило не стерилизуемые в процессе производства, наиболее подвержены микробной контаминации и поэтому должны пройти контроль на микробиологическую чистоту. При определении уровня микробных контаминации сырья, субстанции и лекарственных форм учитывали общее число аэробных бактерий и общее число грибов в одном грамме жома плодов черной смородины, МЖПЧС и суппозиториев, а также наличие патогенных и условнопатогенных микроорганизмов (бактерии семейства Enterobacteriaccae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus).

Результаты бактериологического анализа показали наличие аэробных бактерий, не превышающее нормативы общей статьи ГФ-XI "Испытание на микробиологическую чистоту". Грибы и патогенные микроорганизмы не выявлены.

Таким образом, инфицирование больных при лечении суппозиториями с МЖПЧС и с порошком семян тыквы маловероятно.

Изучение безвредности МЖПЧС и суппозиториев с МЖПЧС и порошком семян тыквы. Острую токсичность определяли на 130 белых беспородных мышах-самцах одного возраста (масса 18-20 г) и 130 крысах обоего пола (масса 120170 г). Испытание проводили при ректальном введении. МЖПЧС вводили в виде клизмы и в виде суппозиториев в дозах 5, 10, 15, 20, 25, 50 г/кг. Порошок семян тыквы вводили в суппозиториях в аналогичных дозах. Наблюдение за животными проводили в течение 10 дней - гибели не было.

Хроническую токсичность МЖПЧС и суппозиториев изучали в течение 6 месяцев на крысах опытной и контрольной групп. Животным опытной группы вводили ректально МЖПЧС и порошок :сшян тьгквы в виде суппозиториев в дозе 20 г/кг. Гибели животных в течение срока наблюдения (7 месяцев) не наблюдаюсь.

Проведенные исследования свидетельствуют об отсутствии токсического влияния МЖПЧС, суппозиториев с МЖПЧС и с юрошком семян тыквы на организм.

ВЫВОДЫ:

1. Проведено фармакогностическое изучение, разработаны характеристики подлинности, показатели качества и их нормы для нового источника липофильных комплексов - жома плодов черной смородины.

2. Предложена методика и определено содержание липвдно-го комплекса в жоме плодов черной смородины. Относительная ошибка методики при проведении анализа в трех повторностях с 95 % вероятностью составляет + 5Д %.

3. Разработаны показатели качества масла жома плодов черной смородины. В составе масла идентифицировано и количественно определено семь жирных кислот (пальмитиновая, стеариновая, олеиновая, линолевая, У-линоленовая, а-линоленовая, па-ринаровая).

4. На основе метода ГЖХ разработаны методики определения специфичной Т-линоленовой кислоты в жоме плодов черной смородины, масле жома плодов черной смородины и суппозиториях с маслом жома плодов черной смородины. Установлены нормы содержания У-линоленовой кислоты в жоме плодов черной смородины - не менее 0,5 %, в МЖПЧС - не менее б %,в суппозиториях с МЖПЧС - не менее 1,8 %. Относительная ошибка методик не превышает ±2 %.

5. Предложено спектрофотометрическое определение содержания каротиноадов в жоме плодов черной смородины, масле и суппозиториях с маслом жома плодов черной смородины. Установлены нормы содержания суммы каротиноидов в пересчете на Р-каротин в жоме - не менее 0,25 мг*%, в МЖПЧС - не менее 21 мг*%, в суппозиториях с МЖПЧС - не менее 7,5 мг*%.

6. Разработаны показатели качества суппозиториев с МЖПЧС и с порошком семян тыквы в соответствии с требованиями общей статьи "Суппозитории" ГФ-Х1.

7. Исследована стабильность жома плодов черной смородины, МЖПЧС, суппозиториев с МЖПЧС и с порошком семян тыквы в процессе хранения. Установлены сроки хранения жома плодов черной смородины - 2 года; МЖПЧС - 2 года; суппозиториев с МЖПЧС и с порошком семян тыквы -18 месяцев.

8. На основании изучения острой и хронической токсичности масла жома плодов черной смородины, суппозиториев с МЖПЧС и с порошком семян тыквы установлено, что данные объекты являются практически безвредными.

9. Подготовлены проекты ВФС "Жом плодов черной смородины", "Масло жома плодов черной смородины", "Суппозитории с маслом жома плодов черной смородины", "Суппозитории с порошком семян тыквы".

Основное содержание диссертации изложено в следующих публикациях:

1. Положительное решение о выдаче патента на изобретение >т 10.01.95. по заявке N 92001303/14 "Способ получения суппозиториев"./ И.А. Самылина, В. А. Попков, О.В. Нестерова, А.Н. Фе-исова и др.

2. Положительное решение о выдаче патента на изобретение 1т 18.10.95. по заявке N 93009601/14 "Способ лечения хрониче-кого простатита"./ И. А. Самылина, В.А.Попков, О.В.Нестерова,

Н.Фетисова и др.

3. Фетисова А.Н. Получение суппозиториев на основе семян ыквы и возможности их применения./"Клинические и экспе-имснтальные исследования в медицине".Мат. 90си конф. СНО 1МА и итог. конф. Российского конкурса студенческих на-чных работ: Тез. докл.-Суздаль, 1993.-С. 128.

4. Стандартизация суппозиториев на основе семян тыквы./ |.В. Нестерова, А.Н. Фетисова, В.А. Попков, И.А. Самыли-з//"Актуальные проблемы фармацевтической химии". Сб. эудов НИИФ.-МД996.-Т.35,- С.145-148.

5. Количественное определение У-линоленовой кислоты в ли-эфильной фракции жома плодов черной смородины./ О.В. Не-гсрова,А.Н. Фетисова, В.А. Попков, И.А. Самылина// Актуальные проблемы фармацевтической химии".Сб.трудов ИИФ. -М., 1996. -т. 3 5 .-С.204-206.

6. Стандартизация липофильной фракции жома плодов чер-1й смородины./ О.В.Нестерова, А.Н.Фетисова, В.АЛопков,

.А. Самылина//"Актуальные проблемы фармацевтической хи-ш".Сб. трудов НИИФ.-М.,1996.-т.35.-С.207-210.

7. Спектрофотометрическое определение суммы каротиноидо! в липофильной фракд1ш жома плодов черной смородины./ А.Н. Фетисова, О.В. Нестерова, В.А. Попков, И.А. Самьшша//Мат. III Российского национального конгресса "Человек и ле-карство":Тсз.докл.-С.325.

8. Фетисова А.Н. Изучение аминокислотного состава суппозиториев на основе семян тыквы./Мат. III Российского национального конгресса "Человек и лекарство":Тез.докл.-С.325.