Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Разработка, создание фармацевтических композиций на основе сиропа шиповника, содержащих адаптогены и изучение их действия на экспериментальных животных молодого и среднего возраста

На правах рукописи

Серёгина Елена Кузьминична

РАЗРАБОТКА, СОЗДАНИЕ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ КОМПОЗИЦИЙ НА ОСНОВЕ СИРОПА ШИПОВНИКА, СОДЕРЖАЩИХ АДАПТОГЕНЫ И ИЗУЧЕНИЕ ИХ ДЕЙСТВИЯ НА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ МОЛОДОГО И СРЕДНЕГО ВОЗРАСТА

14.03.06-Фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

17 АПР 2014

Челябинск-2014

005547115

Работа выполнена на кафедре фармакологии и клинической фармакологии Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор

Ларионов Леонид Петрович

Официальные оппоненты:

Валеева Лилия Анваровна доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра фармакологии №2, заведующая

Суфианова Галина Знновьевна доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра фармакологии, заведующая

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Защита диссертации состоится < » ^¿¿Ь^С— 2014 года в/^асов „а заседании

Диссертационного совета Д 208.117.03 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «ЮжноУральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, по адресу: 454092, г. Челябинск, ул. Воровского,64.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (454092,г. Челябинск, ул. Воровского,64) и на сайте VAVw.chelsma.ru.

Автореферат разослан «_»_2014 года

Ученый секретарь Диссертационного совета, доктор медицинских наук

Ю.С. Шишкова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы исследования и степень её разработанности

Охрана здоровья и обеспечение нормального развития детей глобальная обязанность и высокая ответственность настоящих поколений людей за будущее развитие человеческого общества. Сегодня дети составляют 30% населения планеты, завтра - все 100% нашего будущего. Сегодня здоровые дети - завтра здоровое общество. Современными направлениями педиатрии стало исследование и понимание биологической сущности в аспектах возрастной биологии и экологии растущего детского организма, методов его защиты и обеспечения полноценного развития и здоровья (Федеральный закон Российской Федерации от 21 ноября 2011г.№323-ф3 « Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации»). Доказано, что среди условий жизнедеятельности, влияющих на формирование здоровья, наиболее значимыми являются условия воспитания в семье, условия обучения, учащение стресса в повседневной жизни детей, ухудшение питания, неблагоприятные экологические условия, низкий социально-экономический и культурный уровень в семье. Особенно неблагоприятное влияние может оказать смена условий жизни на соматически ослабленных детей, вызывая дальнейшее ухудшение их здоровья. За период 2000г по 2010 г общая распространенность нарушений здоровья и развития среди детей в возрасте до 14 лет увеличилась на 26,6% при росте первичной заболеваемости на 28,1%. Среди детей в возрасте до 14 лет наиболее возросла частота новообразований, врожденных аномалий, болезней кожи и подкожной клетчатки, нервной системы, болезней костно-мышечной и соединительной ткани, крови (Баранов A.A. Состояние здоровья детей в Российской Федерации // Педиатрия. 2012.Т. 9, № 3. С. 9.).

По мере развития современной фармакологии в широкую медицинскую практику внедряется множество новых лекарственных средств, в том числе растительного происхождения. Биохимическое воздействие веществ растительного происхождения на организм способствует улучшению самочувствия человека, усиливает сопротивляемость к неблагоприятным условиям окружающей среды, улучшает работу сердца, центральной нервной системы и деятельность других органов (Туришев С. Н. Современная фитотерапия. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007.448 е.).

Определенный интерес могут представлять вещества природного происхождения, например адаптогены. Препараты этой группы оказывают мягкое стимулирующее действие на центральную нервную систему, а также активизируют обменные процессы в организме, что приводит к улучшению работы эндокринной и иммунной системы.

Отличительной особенностью адаптогенных веществ является комплексность вызываемого ими эффекта со стороны всех систем организма при различных стрессовых ситуациях в нем, доступность и малотоксичность при длительном применении. В настоящее время много известно о фармакологическом действии таких адаптогенных растений, как женьшень, элеутерококк колючий, родиола розовая (золотой корень), левзея сафлоровидная (маралий корень), заманихи высокой, сапарал. Но на сегодняшний день недостаточно изучены водно-спиртовые жидкие лекарственные формы из коры осины и сирени. В литературе мало сведений об их использовании и действии на организм. Также, недостаточно изучен вопрос о действии адаптогенов на детский организм. Так как настойки и экстракты готовятся на основе этилового спирта, который обладает выраженным токсическим действием на детский организм, особенно на ЦНС, целесообразно использовать подобные

препараты с веществами, смягчающими этот побочный эффект. В качестве такого вещества в нашей работе мы использовали сироп шиповника, который в настоящее время в чистом виде широко используется в педиатрической практике.

Актуальным и перспективным направлением является создание для внутреннего применения детьми различных возрастных групп жидких лекарственных форм не только стерильных, стабильных, но и с улучшением вкуса, запаха, цвета. Наиболее удобны для маленьких детей лекарственные формы в виде сиропов, капель или суспензий.

На основании вышеизложенного были определены цель и задачи нашего исследования.

Цель исследования

Обосновать и разработать рецептуру опытных образцов фармацевтических композиций, содержащих адаптоген (экстракт элеутерококка), настойку коры осины, настойку коры сирени, создать жидкую лекарственную форму на основе сиропа шиповника и изучить их фармакологическое действие в сравнительном аспекте в условиях эксперимента на животных молодого и среднего возраста.

Задачи исследования

1. Обосновать и разработать рецептуру фармацевтических композиций в жидкой лекарственной форме, изготовить опытные образцы, содержащие адаптоген (экстракт элеутерококка), настойку коры осины, коры сирени и кальция фолинат.

2. Изучить в сравнительном аспекте возможную острую, хроническую токсичность. Доказать безопасность применения опытных образцов фармацевтических композиций на четырёх видах экспериментальных животных.

3. Изучить общефармакологическое действие опытных образцов фармацевтических композиций в эксперименте на белых крысах молодого и среднего возраста.

4. Выявить особенности выпитых объёмов опытных фармацевтических композиций в зависимости от содержания в них экстракта элеутерококка и различных видов настоек при свободном подходе особей к поилкам и изучить объёмы выделенной мочи и её составы на фоне различных фармацевтических композиций.

5. Изучить влияние фармацевтических композиций на показатели общего анализа крови и отдельные биохимические показатели крови животных.

Методология и методы исследования

Эксперименты выполнялись на белых мышах - самцах (беспородных и линии СБА) массой 18-22 г, белых беспородных крысах популяции линии Wistar массой 70150 г и 240 - 348 г, на кроликах породы «Шиншилла» массой 2,7-3,5 кг и морских свинках 250-300 г. Животные содержались в условиях вивария ГБОУ ВПО «Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации при естественном световом режиме на стандартной диете лабораторных животных (ГОСТ Р50258-92) с соблюдением Международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых при экспериментальных исследованиях (1997), а также правил лабораторной практики при проведении доклинических исследований в Российской Федерации (ГОСТ 351000.3-96и 51000.4-96).

Созданные опытные экспериментальные образцы фармацевтических композиций вводили животным внутрижелудочно через зонд, внутрибрюшинно и некоторые особи получали композиции при свободном подходе к поилкам.

В работе использованы методы доклинических экспериментальных исследований (М.2005г), оценки показателей выпиваемого объема применяемых жидких лекарственных форм, оценки острой, хронической токсичности и безопасность применения, физиологический метод, метод оценки функционального состояния сердечной деятельности и системы внешнего дыхания, биохимический и статистический метод.

Степень достоверности, апробация результатов, личное участие автора Достоверность результатов работы базируется на достаточном объеме исследований с использованием оптимального количества животных и применением современных методов статистической обработки материалов исследования, при консультативном участии специалистов в области математического анализа.

Основные положения диссертации доложены, обсуждены и опубликованы в материалах научно-практической конференции «Фармация и общественное здоровье» (Екатеринбург, 2009), XI международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2010), научно-практической конференции «Фармация и общественное здоровье» (Екатеринбург, 2010), IV научно-практической конференции с международным участием «Фармация и общественное здоровье» (Екатеринбург, 2011), 68-й Всероссийской научно-практической конференции молодых учёных и студентов с международным участием «Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения» (Екатеринбург, 2013).

Апробация работы состоялась на расширенном заседании кафедры фармакологии и клинической фармакологии с участием сотрудников кафедры фармации, фармацевтической химии, управления и экономики фармации, фармакогнозии нормальной и патологической физиологии, медицинской биологии и генетики ГБОУ ВПО УГМУ Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Автор лично теоретически разработал и практически реализовал концепцию исследования на основе научно-информационного поиска, выполнения экспериментального раздела работы на лабораторных животных, проводил интерпретацию результатов исследования, статистическую обработку. Автором лично сформулированы положения, выносимые на защиту, выводы, практические рекомендации, написан текст диссертации.

Положения, выноснмые на защиту

1. Обоснована и разработана рецептура и созданы опытные образцы новых фармацевтических композиций в жидкой лекарственной форме на основе фармакопейного сиропа шиповника, содержащие фармакопейный адаптоген (экстракт элеутерококка) и водно-спиртовые настойки коры осины и коры сирени с дополнительным внесением кальция фолината.

2. Безопасность применения новых фармацевтических композиций в эксперименте на четырёх видах лабораторных животных (белые беспородные мыши, белые крысы популяции линии \Vistar, кролики породы Шиншилла, морские свинки) при различных путях введения. При этом не выявлена острая при 14-дневном наблюдении и хроническая токсичность при тридцатидневном курсовом применении.

3. Закономерности и особенности эффекта действия фармацевтических композиций в зависимости от их составов и возраста белых крыс, на фоне изучаемых составов композиций выявлены особенности ответных ориентировочно-исследовательских реакций этих особей в методике «открытое поле». При оценке влияния

фармацевтических композиций на двигательную активность было установлено, что прием различных лекарственных форм, таких препаратов, как настойки коры осины и сирени и экстракта элеутерококка, эффективно стимулирует двигательную активность и, следовательно, деятельность центральной нервной системы. Фармацевтическая композиция с настойкой коры осины обладает адаптационным эффектом, фармацевтическая композиция с настойкой коры сирени - стимулирующим, а фармацевтические композиции с аналогом фолиевой кислоты обладают тонизирующим действием.

4. Особенность выпитых объёмов фармацевтических композиций крысами и способность выделения мочи ими в зависимости от составов композиций.

5. При проведении гематологических исследований на фоне применения фармацевтической композиции с настойкой коры осины и кальция фолината выявлено повышение количество эритроцитов, уровня гемоглобина. Снижение количества глюкозы при использовании фармацевтической композиции с настойкой коры осины, и этой же фармацевтической композиции, но с добавлением кальция фолината. Выявлено положительное влияние и на липидный обмен, которое подтверждено снижением показателей холестерина и триглицеридов.

Научная новизна

Впервые разработана рецептура новых опытных фармацевтических композиций в жидкой лекарственной форме на основе сиропа шиповника, включающая известный адаптоген (экстракт элеутерококка) и новые водно-спиртовые настойки коры осины и коры сирени. Показана их биологическая совместимость и установлено количественное содержание салидрозидов в двух последних настойках в зависимости от концентрации этилового спирта. При этом выявлена наиболее высокая экстракция гликозидов при использовании 40% этанола. Впервые изучены острая и хроническая токсичность и безопасность применения на четырёх видах животных (белых мышах, крысах, кроликах, морских свинках) в процессе отдельного применения настоек коры осины, коры сирени и фармацевтических композиций при различных методах и путях введения.

В результате проведенных исследований не выявлена острая токсичность, то есть нам не удалось определить ЬЭ50 При изучении хронической токсичности фармацевтических композиций при курсовом свободном доступе белых крыс к питью изучаемых образцов установлена безопасность их использования. При этом впервые выявлена особенность объёмов выпитых жидких фармацевтических композиций в зависимости от их составов (сироп шиповника + водно-спиртовая настойка коры осины, сироп шиповника + водно-спиртовая настойка коры сирени, сироп шиповника + фармакопейный экстракт элеутерококка) и возраста крыс. Более благоприятная по объему выпитой фармацевтической композиции оказалась водно-спиртовая настойка коры осины на сиропе шиповника в соотношении: сиропа шиповника 32,4 мл; настойки коры осины 2,7 мл; дистиллированной воды 64,9 мл.

Установлена особенность влияния различных фармацевтических композиций на поведенческие реакции белых крыс в методике «открытое поле», влияние их на систему внешнего дыхания, сердечную деятельность. При экспериментальном исследовании биохимии показателей крыс последующей оценки крови, выявлено снижение глюкозы при употреблении фармацевтической композиции с настойкой коры осины. Показано положительное влияние фармацевтической композиции из

настойки коры осины и кальция фолината на липидный обмен, повышение показателей эритроцитов и гемоглобина.

Теоретическая и практическая значимость работы Полученные в диссертационном исследовании результаты об отсутствии токсичности и доказанной безопасности применения свидетельствуют о целесообразности включения новых фармацевтических композиций, содержащих фармакопейный адаптоген и вновь полученные водно-спиртовые настойки включить для проведения апробации в условиях медицинского учреждения клиники, что позволит расширить применяемый диапазон сиропа шиповника и действующих начал коры осины и коры сирени в педиатрической практике.

Внедрение результатов исследования в практику Результаты исследования используются в учебном процессе ГБОУ ВПО «Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации на кафедре фармакологии и клинической фармакологии в лекционном материале и практических занятий в разделе «Средства, влияющие на центральную нервную систему» по темам «Лекарственные формы», «Ноотрпоные средства» и на кафедре «Лечебное дело» ГБОУ СПО «Свердловский областной медицинский колледж».

Материалы исследования внедрены в ФГБУН Ботанический сад УрО РАН и в ветеринарную клинику « Доктор Айболит».

Публикации

Соискатель имеет 8 опубликованных работ, из них по теме диссертации опубликовано 8 научных работ общим объёмом 1,45 печатных листов, в том числе 5 статей в научных журналах и изданиях, которые включены в перечень российских рецензируемых научных журналов и изданий для опубликования основных научных результатов диссертаций. Соискателем опубликовано 3 работы в материалах всероссийских и международных конференций.

Объем и структура диссертации Диссертационная работа изложена на 194 страницах печатного текста, иллюстрирована 46 рисунками, содержит 34 таблиц, состоит из введения, обзора литературы (1 глава), описание материалов и методов исследования (2 глава), результаты собственных исследований и их обсуждения (3 глава), заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Список литературы содержит 150 источников, из которых 134 отечественных и 16 зарубежных.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАЩИЕ РАБОТЫ Материалы н методы исследования

Экспериментальный раздел работы выполнен на 140 белых беспородных мышах массой 18-22 г, на 495 белых беспородных крысах популяции линии Wistar массой 70-150г) на 18 кроликах породы «Шиншилла» массой 2,7-3,5 кг и 20 морских свинках 250-300 г обоего пола. Организация работы соответствовала этическим нормам, регламентирующим эксперименты на животных (Копаладзе P.A. Регламентация экспериментов на животных - этика, законодательства, альтернативы //Успехи физиологических наук.1998.Т.29, №4.С.74-92.), отражённым в международных и российских нормативно-правовых документах (Европейская конвенция о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или, а иных научных целях: EST № 123 от 18 марта 1986г. Страсбург,1986.15с.; Об утверждении правил лабораторной практики: приказ Министерства здравоохранения

российской Федерации №267 от 19 июня 2003г. М., 2003.22с.).

В работе были использованы фармакопейный сироп из плодов шиповника (Sirupus ex fructibus Rosae) густая жидкость коричневого цвета, своеобразного запаха. Продукция изготовлена ООО «Астромар» РФ, 10931 Москва Остапинский пр. д. 12, стр 16. Адрес производителя РФ, 1142380 Московская обл. Чеховский район пос. Любучаны ул. Научная вп.4 Св.гр. №779923 3 у 9997.9.05 от 01.09.2005г. серия 021209. Состав: основные компоненты: плоды шиповника - 5,0 г, экстракт шиповника

- 6,0 г, кислота аскорбиновая - 0,3 г. вспомогательные компоненты: натрия бензонат

- 0,03 г, сироп сахарный - до 100 г. Форма выпуска во флаконах по 50 и 250 г из оранжевого стекла с винтовой горловиной, укупоренные крышками полимерными или крышками навинчиваемыми, или пробками полиэтиленовыми и крышками пластмассовыми навинчиваемыми, или колпачками алюминиевыми.

Лейковорин - ЛЭНС (кальция фолинат) свидетельство №258298 Р N000004/01 ООО «ЛЭНС-Фарм».

Препараты элеутерококка колючего (Eleutherococcus senticocus Maxim, сем. аралиевых (Araliaceae): экстракт элеутерококка жидкий спиртовой (на 40% спирте), содержащий 0,006 г сухого вещества в 15 каплях (ОАО «Дальхимфарм», 680001, г. Хабаровск, ул. Ташкентская, д. 22, регистрационный номер 001518/01 от 18.01.2008). В условиях нашей лаборатории были изготовлены 40%, 70% водно-спиртовые настойки из коры осины и коры сирени методом мацерации.

Созданы следующие составы фармацевтических композиций:

1. Фармацевтическая композиция, состоящая из водно-спиртовой настойки коры осины (в соотношении 1 г сухой коры к 10 мл 40%-го спирта) и дистиллированной воды на сиропе шиповника, получившая аббревиатуру (ФкОс).

2. Фармацевтическая композиция, состоящая из водно-спиртовой настойки коры сирени (в соотношении 1 г сухой коры к 10 мл 40%-го спирта) и дистиллированной воды на сиропе шиповника, получившая аббревиатуру (ФкСс).

3. Фармацевтическая композиция, состоящая из фармакопейного экстракта элеутерококка и дистиллированной воды на сиропе шиповника, получившая аббревиатуру (ФкЭс).

4. Фармацевтическая композиция, состоящая из водно-спиртовой настойки коры осины (в соотношении 1 г сухой коры к 10 мл 40%-го спирта), кальция фолинат и дистиллированной воды на сиропе шиповника, получившая аббревиатуру (ФкОсФ).

5. Фармацевтическая композиция, состоящая из водно-спиртовой настойки коры сирени (в соотношении 1 г сухой коры к 10 мл 40%-го спирта), кальция фолинат и дистиллированной воды на сиропе шиповника, получившая аббревиатуру (ФкСсФ).

Методы получения водно-спиртовых настоек из коры осины, коры сирени и создание опытных экспериментальных образцов фармацевтических композиций

Для внутрижелудочного введения фармацевтических композиций особям, мы добавили в готовый фармакопейный сироп шиповника фармакопейный экстракт элеутерококка, водно-спиртовую настойку из коры осины и водно-спиртовую настойку из коры сирени, каждую по отдельности, в соотношении 9,8 мл сиропа шиповника и 0,2 мл (экстракта элеутерококка, настойки коры осины, настойки коры сирени). В 100 мл этой фармацевтической композиции в процентном соотношение

содержится сиропа шиповника 98%, экстракта элеутерококка, настойки коры осины, настойка коры сирени 2% каждой композиции по отдельности, 0,8% спирта. Соответственно в 1 мл фармацевтической композиции содержится 1,02 капли экстракта элеутерококка, настойки коры осины, настойки коры сирени.

Для проведения исследования выпитых объёмов фармацевтической композиции животными из поилок, были подготовлены составы, несколько отличающиеся от предыдущего состава, что связано с высокой вязкостью сиропа, который не в состоянии проникнут через отверстие поилки с отталкивающим шариком. Поэтому нами было предусмотрено дополнительное разведение дистиллированной водой фармацевтические композиции до менее концентрированных по отношению к сиропу. Соответственно второй состав фармацевтических композиций приготовлен из фармакопейного сиропа шиповника 600 мл, 25 мл экстракта элеутерококка, настойки коры осины, настойки коры сирени (каждого препарата по отдельности) и дистиллированной воды 300 мл. Этот указанный объем, рассчитанный на общее количество животных в клетке. В перерасчете на 100 мл фармацевтической композиции содержится сиропа шиповника 32,4 мл; настойки коры осины, настойки коры сирени, экстракт элеутерококка по 2,7 мл; дистиллированной воды 64,9 мл. Содержание 40% спирта в 100 мл этой композиции составляет 1,08%. При использовании каплемера установлено, что содержание капель настойки коры осины, настойки коры сирени и экстракта элеутерококка в 1 мл фармацевтической композиции содержится 1,37 капли.

Следующий состав для внутрижелудочного введения состоял из сиропа шиповника 9,8 мл, экстракта элеутерококка, настойки коры осины и настойки из коры сирени (по 0,2 мл каждого препарата по отдельности) и 50 мкг кальция фолината. Создание этой фармацевтической композиции обусловлено тем, что нас заинтересовал вопрос профилактики анемий у детей.

Для орального введения другому виду экспериментальных животных (кроликов) была подготовлена несколько отличающаяся фармацевтическая композиция, которая состояла из 48 мл сиропа шиповника, 4 мл (настойки коры осины, настойки коры сирени и экстракта элеутерококка- каждого препарата по отдельности), и дистиллированной воды 48 мл. Содержание спирта в 100 мл этой композиции составило 1,6%. Содержание капель настойки коры осины, настойки коры сирени, экстракта элеутерококка в 1 мл фармацевтической композиции содержится 2,04 капли.

Для индивидуальной оценки выпитой фармацевтической композиции и оценки суточного диуреза создали следующую фармацевтическую композицию, состоящую из 6,5 мл сиропа шиповника, 0,5 мл настойки коры осины, настойки коры сирени, экстракта элеутерококка (каждого препарата по отдельности) и дистиллированной воды 13 мл, полученный состав рассчитан на 20 мл фармацевтической композиции, которую при свободном доступе в индивидуальных садках пили белые крысы популяции линии \Vistar в течение суток.

Методы экспериментальных исследований на лабораторных животных и сравнительная оценка полученных результатов

Методы оценки показателей н сравнительная характеристика выпиваемого объема применяемых жидких лекарственных форм

Из 40 молодых белых крыс популяции линии \Vistar сформировали 4 группы. Каждой группе предоставляли по 1 лекарственной композиции. Перед предоставлением питья животных взвешивали. В течение последующих суток крысы

при свободном подходе пили предоставленные фармацевтические композиции. После чего вновь взвешивали крыс, определяли объемы выпитого, объем диуреза суточного эксперимента животных, в полученном объёме мочи определяли наличие глюкозы, плотность, рЬ, аскорбиновую кислоту и нитраты.

Острую токсичность определяли на беспородных белых мышах (массой 1820 г) и белых крысах (массой 70-150 г) обоего пола по 10 особей в каждой группе. Фармацевтические композиции вводили в желудок через зонд для мышей 1 мл; для крыс молодого возраста по 3 мл/100 г массы особи.

Субхроническую, хроническую токсичность, безопасность в применении и фармакологическую активность фармацевтических композиций изучали в течение 30 суток на белых крысах популяции линии \Vistar массой(70-150 г молодые крысы, 240348 г среднего возраста), кроликах породы «Шиншилла» (2900-3500 г) и морских свинках (250-300г) обоего пола.

Изучение местного раздражающего действия фармацевтических композиций на кожу и слизистые. Эксперимент проводили на 18 кроликах обоего пола (по 3 особи в группе). На подготовленный от шерсти участок кожи (4x6 см) справа, наносили фармацевтические композиции в объеме 1,0 мл на особь, равномерно растирали по всей площади. Параллельно с этой процедурой кролику за веко левого глаза вносили по 1-2 капли фармацевтические композиции. Аппликации осуществляли ежедневно в течение 30 дней.

Коньюнктивальная проба. Данный эксперимент предварительно проводили на 20 крысах массой 70-120 г и 20 морских свинках массой 300-360 г. На участках кожи на спине размером 4x4 см с выстриженной шерстью ежедневно в течение 20 дней наносили фармацевтические композиции. Через 24 часа после 20 аппликации всем животным была проведена коньюнктивальная проба. Для этого под верхнее веко левого глаза вводили по 0,1 мл каждого раствора. Правый глаз служил контролем, под его верхнее веко была внесена одна капля воды для инъекций. Оценку результатов проводили трижды: через 15 мин, 24 и 44 ч после проведения конъюнкгивальной пробы.

Физиологический метод. Для проведения данного исследования нами было сформировано 4 группы крыс (месячного возраста массой 70-120 г) и 4 группы (двух месячного возраста массой 240- 348 г) по 10 особей в каждой групп обоего пола. Перед началом и в ходе самого эксперимента у всех групп животных определяли спонтанную двигательную активность в вечерние часы по методике «открытое поле». Исследование заключалось в следующем: каждого животного помещали на 15 сек под тёмный колпак на центральный круг «открытого поля» с целью определения времени реакции избегания с него после удаления колпака. В дальнейшем в течение 3-х минут подсчитывали количество пересеченных квадратов (горизонтальное передвижение), количество стоек (вертикальное передвижение), количество приемов груминга (процесс «умывания», чистки), количество обследованных «нор» (отверстий). Затем крысам различных возрастов внутрижелудочно вводили фармацевтические композиции. Для молодого возраста (70 г) по 0,29 мл, а крысам среднего возраста (240 г) по 1 мл на особь- то есть V* от объёма желудка. Посадку крыс осуществляли непосредственно перед введением препарата и после введения через 30, 60, 90 и 120 мин.

Исследование с аналогом фолиевой кислоты Лейковорин-ЛЭНС (кальция фолинат) проводили на белых крысах с массой 250 г в количестве 50 особей поделенных на 5 групп по 10 крыс. В созданные ранее фармацевтические

композиции, мы добавили кальция фолинат в суточной дозе на 10 крыс 2,617 мг (на одну особь 0,26174 мг) внутрибрюшинно на 10% сиропе шиповника.

Так как, мы проводили эксперимент на крысах с фармацевтической композицией и аналогом фолиевой кислотой Лейковорин-ЛЭНС внутрибрюшинно, то дальнейшее исследование мы решили провести более длительно. В дальнейших наших исследованиях также были использованы белые крысы массой 180-260 г. Этим животным в течение 30 дней водили фармацевтические композиции с аналогам фолиевой кислоты внутрижелудочно через зонд и определили у них ориентировочно-исследовательские реакции. Животных тестировали в "открытом поле" дважды. Первое тестирование проводили без использования препарата. Месяц спустя было проведено повторное тестирование, но уже с использованием предложенных фармацевтических композиций. Внутрижелудочно через зонд вводили крысам водно-спиртовую настойку коры сирени 0,25 мл, водно-спиртовую настойку коры осины 0,25 мл. Следующие композиции состояли из фармакопейного сиропа шиповника 2,5 мл + настойки коры сирени 1,5 мл + Лейковорин-ЛЭНС 1,3087 мг; сиропа шиповника 2,5 мл +настойки коры сирени 1,5 мл; сиропа шиповника 2,5 мл + настойки коры осины 1,5 мл. Эти фармацевтические композиции вводили из расчета по 0,25 мл на особь. Контрольной группе крыс был введен 50% раствор сиропа шиповника в подобном объёме (0,25 мл). Интактную группу крыс исследовали дважды с месячным временным промежутком.

Метод оценки функционального состояния сердечной деятельности и системы внешнего дыхания

Для того чтобы изучить действие фармацевтических композиций на функциональное состояние сердечной деятельности и системы внешнего дыхания были взяты кролики массой 2,7 ±0,3 кг (6 особей), у которых записали функциональное состояние сердца на электрокардиографе Heart Mirror 3 IKO ЭКГ. Первоначально была проведена исходная запись, после исходных данных ЭКГ были введены фармацевтические композиции per os по 0,5 мл и проведено дальнейшее исследование методом ЭКГ. При этом обращали внимание на правильность чередования зубцов и периодов между ними (сегментов), направленность зубцов (направленные вверх считаются «положительными», вниз - «отрицательными»), высоту зубцов («вольтаж»). Частоту дыхательных движений подсчитывали при контакте ладони с грудной клеткой кролика в течение минуты.

Биохимические исследования и показатели периферической крови животных

Согласно (Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - Москва: Ремедиум, 2005. - 398с.) исследование было проведено на белых крысах - самцах массой 70, 120, 150 г, которые были разделены на 4 группы по 10 особей в каждой. Каждой возрастной группе крыс вводили подготовленные фармацевтические композиции, содержащие водно-спиртовые настойки коры осины и коры сирени в сиропе внутрижелудочно, крысам следующих групп вводили фармакопейный элеутерококк в сиропе внутрижелудочно, крысы 4-й группы были контрольной, им вводили дистиллированную воду. Доза, вводимая внутрижелудочно, соответствовала 1/3 от максимально вводимой дозы в желудок 0,2 мл/кг массы животных. Введение проводили ежедневно в течение 10 дней. Забор крови для исследования осуществляли из полостей сердца под эфирным наркозом. Биохимические исследования проводили с помощью автоматического анализатора («Erba-chem» Чехия), а общий анализ крови производили на

полуавтоматическом гематологическом анализаторе «Micros-60» (Германия). Параллельно с указанными исследования периферическими крови исследовали содержание сахара в моче при использовании Клинитек Статус с тест-полосками Мульти стикс.R

Статистическую обработку проводили с помощью пакета статистических программ for Windows (Microsoft Excel), Statsoft Statistica 10.0. Полученные результаты подвергнуты дескриптивной статистике и представлены в виде средней арифметической и ее стандартной ошибки (М±т). О достоверности межгрупповых различий судили с помощью критерия Манна-Уитни и точного критерия Фишера (односторонний вариант). Статистически значимые различия определяли при р<0,05. Для описания количественных показателей использовали выборочную среднюю (средняя арифметическая) и стандартное отклонение (SD). Качественные признаки выражали в виде относительной величины (в процентах).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Исследования острой токсичности фармацевтических композиций показало, что изучаемые фармацевтические композиции не оказывают острого токсического проявления при внутрижелудочном пути введения, что является подтверждением отсутствия токсичности изучаемых жидких фармацевтических композиций и подтверждением их безопасности применения. За период эксперимента ни в одном случае не наблюдали возникновения эритемы или отека. У всех животных при закладывание за веко глаза было отмечено отсутствие раздражающего действия.

Таким образом, изучаемые адаптогены фармакопейный экстракт элеутерококка и настойка из коры осины и сирени на основе сиропа шиповника по степени выраженности раздражающего действия на кожу и слизистые относятся к «0» классу веществ по пятибалльной системе по Алексеевой О.Г., Петкевич А.И, 1972 г. (Алексеева О.Г., Петкевич А.И. К методике определения аллергенных свойств химических веществ. // Гиг. и санит.1972. №3. С.64-67.). Поэтому можно говорить о безопасности их применения с целью проведения клинических испытаний.

Субхроническую, хроническую токсичность, безопасность в применении и фармакологическую активность фармацевтических композиций изучали в течение 30 суток на белых крысах популяции линии Wistar (70-150 г молодого возраста, 240-348 г среднего возраста), кроликах породы «Шиншилла» (2900-3500 г), морских свинках (250-300 г) обоего пола.

Для определения общего объёма выпитых фармацевтических композиций было сформировано 7 групп животных по 5 белых крыс в группе, 3 группы среднего возраста (масса 306,00±9,52 г) и 3 группы молодого возраста (масса 100,86±1,17 г) и 1 группа контрольная (масса 250,3±1,12 г). В течение 10 дней животным при свободном доступе к корму и питью поилки наполняли фармацевтическими композициями. При этом учитывали суточные объёмы выпитых композиций опытными крысами и воды контрольными. Интактная группа находилась также в условиях вивария, но с водным режимом.

Крысы среднего возраста более охотно пили фармацевтическую композицию из настойки коры осины 2040,00±25,20, а молодые фармацевтическую композицию из настойки коры сирени 995,00±12,60 (таблица 1).

Таблица 1 - Выпитый объем применяемых фармацевтических композиций за 10 дней эксперимента по 5 особей в клетке (М ± т, при п=5)__

Группа животных Тип фармацевтической композиции (сироп шиповника + адаптоген) Общий объем выпитого, мл Объем выпитого 1 особью, мл Объём выпитого на кг

1 2 3 4 5

Крысы среднего возраста Настойка коры осины 2040,00±25,20* 408,00±5,04* 1291,13

Крысы среднего возраста Настойка коры сирени 1950,00±27,00* 390,00±5,40* 1234,17

Крысы среднего возраста Экстракт элеутерококка 1750,00±4,50* 350,00±0,90 1107,59

Крысы молодого возраста Настойка коры осины 565,00±16,20* 113,00±3,24 1130,00

Крысы молодого возраста Настойка коры сирени 995,00±12,60* 199,00±3,60* 1990,00

Крысы молодого возраста Экстракт элеутерококка 745,00±9,00* 149,00±1,80* 1490,00

Крысы среднего возраста Дистиллированная вода 1470,00±2,12 294,00±2,13 1176,00

Примечание -* - различия статистически значимы в сравнении с группой контроля, р<0,05.

Для дальнейшего эксперимента мы решили провести суточный объем, так как нами полученные данные были рассчитаны на 5 особей, поэтому мы решили провести исследование на одну особь. В результате проведенного эксперимента по регистрации выпитых объёмов фармацевтических композиций, за сутки нам удалось выявить, что на основе сиропа шиповника водно-спиртовые настойки употреблялись животными в полном объеме 20±0,21 мл, а отвары и настои употребляли они в наименьшем количестве в среднем 1,8±0,12 мл.

Для изучения сахароснижающего действия настоек проводили углеводную нагрузку. Исследуемым крысам с массой (208 ±2,88 г) первоначально создавали нагрузку 40% раствором глюкозы внутрижелудочно по 3 мл, затем под наркозом per os (через зонд) вводим первой группе по 0,5 мл 40% водно-спиртовой настойки коры сирени, а второй группе 0,5 мл 70% водно-спиртовой настойки коры осины. Через 2 часа осуществляли измерение глюкозы в моче автоматическим анализатором Клинитек Статус с тест-полосками Мультистикс* 10SG. После углеводной нагрузки на фоне настоек в моче глюкозы значимо достоверных изменений не выявили. В результате проведенных исследований, нам не удалось выявить каких, либо больших отклонений показателей мочи от стандартных уровней этого вида животных.

После этих представленных экспериментальных результатов по отсутствию токсических проявлений новых фармацевтических композиций и убедившись в том, что они безопасны в применении было решено оценить их действие на функциональное состояние центральной нервной системы.

По результатам проведенных исследований можно сделать вывод о степени адаптации интактных экспериментальных животных к новым условиям (открытое

поле) в сравнении с мерой их реакции после эксперимента. Мы считаем, что степень адаптации удобнее рассматривать в анализе изменения времени ухода крыс из центрального круга в динамике через 30, 60, 90, 120 минут. Данные исследования показали, что интактные крысы хуже приспосабливаются к изменяющимся условиям среды, что видно и из среднего времени нахождения крысы в центральном круге. После' проведения эксперимента крысы меньше времени провели в центральном круге, причем в динамике время также уменьшается, то есть степень адаптации исследуемых крыс в финале эксперимента значительно повысилась. Достоверные показатели времени ухода животных на фоне фармацевтических композиций с центрального круга были зафиксированы при следующих уровнях регистрации. Начиная с 30 и 120 минуты включительно, время ухода крыс с круга после десятидневного употребления значительно уменьшилось по сравнению с интактными (рисунок1)._____________________________________________________________________

700

® Исходный уровень О Через 30 мин п Через 60 мин ■ Через 90 мин □ Через 120 мин

Интактные ФК (с настойкой ФК (с настойкой ФК (с экстрактом коры осины) коры сирени) элеутерококка)

Рисунок 1 - Показатели ориентировочно-исследовательской реакции «время нахождения в центре круга» на фоне изучаемых фармацевтических композиций: ФкОс, ФкСс, ФкЭс после десятидневного употребления ФК при свободном походе к поилкам

(* _ р<0,05 по сравнению с интактным контролем) представлены в процентах

При изучении всех этих групп крыс в «открытом поле» установлено, что у крыс среднего возраста принимавших фармацевтическую композицию из настойки коры осины, наблюдается достоверное снижение времени нахождения в центре круга, достоверное увеличение количества пересечённых квадратов и обследованных норок. У крыс среднего возраста, принимавших фармацевтическую композицию из настойки коры сирени, наблюдается достоверное снижение времени нахождения в центре круга, достоверное увеличение количества пересечённых квадратов и обследованных норок. У крыс среднего возраста, принимавших фармацевтическую композицию из настойки коры осины и настойку коры сирени время нахождения в центре круга после первого введения и десятидневного приема этих препаратов меньше, чем у контрольной (интактной) группы. А количество пересечённых квадратов у крыс, принимавших фармацевтическую композицию из настойки коры сирени, коры осины и экстракта элеутерококка после десятидневного приема препаратов больше, по сравнению с контрольной группой (рисунок 2). У молодых крыс, принимавших фармацевтическую композицию настойку коры осины, сирени, элеутерококка,

достоверно уменьшается время нахождения в центре круга и увеличивается количество пересечённых квадратов (рисунок 3).

250

200

150

100

50

Интактные ФК (с настойкой ФК (с настойкой ФК (с

коры осины) коры сирени) экстрактом элеутерококка)

^Исходный уровень □ Через 30 мин ВЧерез 60 мин ■ Через 90 мин □Через 120 мин

Рисунок 2 - Горизонтальная двигательная активность «количество пересечённых квадратов» на фоне изучаемых фармацевтических композиций: ФкОс, ФкСс, ФкЭс, после десятидневного употребления ФК при свободном походе к поилкам (* - р<0,05 по сравнению с интактным контролем) представлены в процентах

Интактные ФК (с настойкой ФК (с настойкой ФК (с настойкой коры осины) коры сирени) коры

элеутерококка)

Рисунок 3 - Горизонтальная двигательная активность «средние значения пересечённых квадратов» до и после десятидневного употребления фармацевтических композиций: ФкОс, ФкСс, ФкЭс при свободном походе к поилкам (* - р<0,05 по сравнению с интактным контролем) представлены в процентах

По результатам исследований выявлено, что введения различных фармацевтических композиций, содержащих адаптогены и кальция фолинат, в исследуемых дозах понижал двигательную активность животных. Достоверное уменьшение этой активности произошло после внутрибрюшинного введения фармацевтических композиций ФкОсФ, ФкСС. При этих условиях снижение

произошло горизонтальной активности во всех группах животных. Для наглядности эффективности действия фармацевтических композиций представляем диаграммы результатов (рисунок 4).

■ До применения препарата □ После применения препарата

Группа! Группа 2 Группа 3 Группа 4 ФкОсФ ФкСсФ ФкСс ФкОс

Рисунок 4 - Горизонтальная двигательная активность до и после пятидневного внутрибрюшинного введения фармацевтических композиций ФкОсФ, ФкСсФ, ФкСс, ФкОс в дозе 0,2 мл (* - р<0,05 по сравнению с интактным контролем)

Однако после внутрижелудочного введения фармацевтической композиции, содержащей настойку коры сирени и кальция фолинат установили, что горизонтальная активность крыс значительно снизилась, а вертикальная повысилась. При этих состояниях заметно увеличилось среднее количество обследования норок крысами во время эксперимента. Изменились и эмоциональные реакции: резко сократилось время пребывания в центре, а также сократился груминг, что свидетельствует о снижении эмоциональной реактивности животных (рисунок 5).

160

Рисунок 5 - Горизонтальная двигательная активность «количество пересечённых квадратов» на фоне изучаемых фармацевтических композиций: ФкОс, ФкСс, ФкЭс после 30 дневного внутрижелудочного их введения (* - р<0,05 по сравнению с интактным контролем) представлены в процентах

Достоверное максимальное увеличение физиологической активности произошло в регистрации «открытого поля», когда все группы крыс, принимающие фармацевтические композиции per os, показали увеличение темпов работоспособности и увеличение двигательной активности с повышением ориентировочно-исследовательской реакции. При регистрации горизонтальной двигательной активности у экспериментальных животных, были получены следующие достоверные результаты. Достоверное увеличение физиологической активности произошло после употребления фармацевтической композиции с настойкой коры осины и кальция фолината и фармацевтической композиции с настойкой коры сирени и кальция фолината. У контрольной же группы средние показатели к концу эксперимента, хотя и незначительно, но снизились. При регистрации вертикальной активности у опытных животных так же отмечалось преобладание тонизирующего действия фармацевтической композиции с аналогом фолиевой кислоты (кальция фолинат). При сравнительной оценке показателей ориентировочно-исследовательских реакций установлено, что фармацевтические композиции, по-разному влияют на поведение лабораторных животных.

Анализируя результаты функционального состояния сердечной деятельности и внешнего дыхания, следует отметить, что ЭКГ кроликов как по структуре, амплитуде зубцов, а также по частоте сердечных сокращений на электрокардиограмме различий не было зарегистрировано, что является свидетельством отсутствия отрицательного действия фармацевтических композиций (таблица 2).

После статистической обработки показателей функционального состояния внешнего дыхания кроликов перед началом и после введения фармацевтических композиций установлено, что функция этой системы не изменялась как по частоте дыхательных движений, так и по амплитуде глубины дыхания (таблица 2).

Таблица 2 - Показатели оценки сердечной и дыхательной деятельности при введении кроликам фармацевтических композиций, содержащих настойку коры осины, настойку коры сирени и экстракт элеутерококка. Кролики массой 2,7±0,3 кг

Исходные параметры Введение ФК (настойка коры осины) Введение ФК (экстракт элеутерококка) Введение ФК (настойка коры сирен) Введение 40%-го спирта

ч/з 15 мин ч/з 30 мин ч/з 15 мин ч/з 30 мин ч/з 15 мин ч/з 30 мин ч/з 15 мин ч/з 30 мин

ЧСС УД-мин 121,60 ±0,36 164,20 ±3,96 151,20 ±1,26 143,60 ±0,45 133,00 ±0,99 125,40 ±1,26 141,00 ±0,81 135,00 ±1,35 143,00 ±0,72

ЧДД в мин. 96,60 ±0,27 135,20 ±0,36 114,40 ±0,27 85,00 ±0,18 87,00 ±0,27 85,20 ±0,27 115,60 ±0,63 142,40 ±1,89 125,08 ±0,8

В общем анализе крови обращает на себя внимание снижение количества тромбоцитов после внутрижелудочного введении препаратов: во 2-й группе на фоне фармацевтической композиции с настойкой коры осины - на 4,9%, в 3-й группе на фоне фармацевтической композиции с экстрактом элеутерококка - на 7,31% по сравнению с показателями контрольной группы. Зарегистрировано повышение уровня гемоглобина на 113,9% на фоне фармацевтической композиции с настойкой

коры осины и кальция фолинат, на фоне фармацевтической композиции с настойкой коры осины на сиропе шиповника на 110,6% по сравнению с контрольной группой. Произошло повышение количества эритроцитов, тромбоцитов при внутрижелудочном введении фармацевтической композиции из коры осины и кальция фолинат на 122,5%, а фармацевтическая композиция из настойки коры осины и сиропа шиповника на 119,15% по сравнению с контрольной группой. Остальные показатели достоверно не изменились (таблица 3). По результатам биохимического анализа крови (таблица 4) видно, что произошло снижение количества глюкозы после фармацевтической композиции с настойкой осины, и на фоне этой же фармацевтической композиции, но с добавлением кальция фолинат. При анализе показателей липидного обмена установили снижение показателей холестерина, триглицеридов, отмечено снижение показателей ЛПОНП, ЛПНП.

Таблица 3 - Показатели результатов общего анализа крови животных после 10 дневного внутрижелудочного введения крысятам (масса 95-120 г) фармацевтических композиций в дозе 1,0 мл (настойка коры осины, настойка коры сирени, экстракт элеутерококка на сиропе шиповника +кальция фолинат) (М±т)

параметры Контрольная (интактные) ФкОс ФкОсФ ФкСсФ ФкЭсФ

1 2 3 4 5 6 7

общий анализ крови WBCmm3 4,30±1,55 4,34±1,77 7,94±2,62* 5,04±2,20 4,98±1,17

RBC mm3 6,17±0,33 7,35±0,60* 7,56±0,26* 6,63±0,53* 6,30±0,36*

HGB q/dl 12,04±0,43 13,32±0,72* 13,72±0,19* 12,6±0,73* 12,06±0,71

HCT L% 35,84±1,14 37,46±2,79* 39,58±0,73* 34,70±2,83* 33,26±2,19*

PLTmm3 902,4±162,68 771,8±73,93* 993,6±73,4* 858,20±144,91 836,40±100,31

эозин.% 0,40±0,78 1,60±1,59 0,60±0,79 1,00±1,5 0,60±0,78

п/я% 1,00±0,61 1,80±1,68 1,80±0,73* 1,40±0,78 1,40±1,32

с/я% 17,60±2,20 25,00±5,18 19,20±4,08 14,00±2,90 19,60±3.85

лимфоц.% 76,80±3,52 65,60±5,83 69,80±5,92 79,20±4,03 73,80±3,79

моноцит% 4,00±2,05 6,00±1,07 6,60±0,99* 4,40±2,74 4,60±1,59

Примечание -* - р<0,05 по сравнению с интактным контролем.

Таблица 4 - Показатели результатов биохимического анализа крови животных после 10 дневного внутрижелудочного введения крысятам (масса 95-120 г) фармацевтических композиций в дозе 1,0 мл (настойка коры осины, настойка коры

параметры Контрольная (интактная) ФкОс ФкОсФ ФкСсФ ФкэсФ

1 2 3 4 5 6 7

Липидный обмен Хс ммоль/л 3,92±3,09 2,16±0,50* 1,93±0,17* 2,03±0,50* 1,35±0,58*

ТГЛ ммоль/л 4,91±6,9 6 2,20±0,34* 0,48±0,18* 1,52±0,72* 1,16±0,17*

а Хс ммоль/л 1,42±0,70 1,20±0,071* 1,38±0,19* 1,22±0,08 1,04±0,18*

Продолжение таблицы 4

1 2 3 4 5 6 7

Липидный обмен ЛпОНП ммоль/л 2,38±2,46 1,62±0,46 0,35±0,14* 1,22±0,58* 1,15±0,24*

ЛпНП ммоль/л 0,77±0,32 0,46±0,062 0,38±0,19 0,45±0,47* 0,18±0,13*

Белок г/л 61,75±2,98 66,50±2,08* 53,20±1,68 64,50±2,31* 64,40±3,19

о Альбумин г/л 35,00±2,14 32,75±2,07* 32,40±2,01 34,25±1,10* 33,40±1,32

ю о « Глобулин г/л 26,75±1,94 33,75±3,60* 20,80±0,73 29,75±3,23* 31,00±2,55

3 О) О ж и Креатинин мкмоль/л 42,00 ±18,67 53,25±4,00* 45,00 ±0,61* 52,50 ±17,24* 40,60±8,99*

о W мочевина ммоль/л 5,67±0,69 7,87±0,91 7,24±0,89 6,20±0,57* 5,20±0,76

а/г коэф 1,315±0,12 0,98±0,16 1,56±0,13 1,165±0,14 1,08±0,08

Углеводный обмен глюкоза ммоль/л 9,12±0,60 7,32±0,31* 7,24±0,38* 8,82±0,46* 9,10±0,47*

ACT у/1 147,75 ±76,26 184,75±7,06 192±20,88 159±18,2 164,2±31,43

н АЛТ у/1 57,25 ±31,64 49,75±11,52 37,80±1,79 33,25±5,27 29,00±6,92

X <L> ГГТуЛ 1,25±1,31 1,50±0,50 2,00±2,14 2,50±1,13 2,20±1,30

о, и ■е- Щ.ф. уЛ 1655,75 ±337,83 309,25 ±69,79* 638,00 ±133,03* 980,01 ±186,57* 712,60 ±98,59*

амилаза уЛ 2654,50 ±182,47 2150,10 ±58,25 2750,00 ±366,38* 2204,01 ±385,66* 2174,45 ±426,82*

bil. dir мкмоль/л 44,77 ±58,35 8,87 ±2,61* 6,04 ±1,37* 11,22 ±3,90* 12,04 ±4,79

bil. tot мкмоль/л 49,30 ±65,66 9,82±3,28 6,76±1,81* 8,55±2,25 10,06±4,53

Примечание - * - р<0,05 по сравнению с интактным контролем.

Таким образом, по результатам исследования выявлено повышение эритроцитов, гемоглобина, при использовании фармацевтической композиции с настойкой коры осины, а на фоне этой же фармацевтической композиции, но с добавлением кальция фолината выявлено снижение количества глюкозы и положительное влияние на липидный обмен изучаемых фармацевтических композиций.

Заключение

В результате проведенного исследования нам не удалось выявить токсического проявления ЬО$о изучаемых фармацевтических композиций, как при однократном, так и длительном применении, что является подтверждением безопасности данных применяемых жидких лекарственных форм на организм животных. При изучении хронической токсичности фармацевтических композиций при курсовом свободном доступе белых крыс к питью изучаемых опытных образцов установлена безопасность

их использования. При этом впервые выявлена особенность объёмов выпитых жидких фармацевтических композиций в зависимости от их составов, животные охотно выпивали фармацевтические композиции это говорит о косвенных вкусовых качествах фармацевтических композиций. В ходе нашей работы мы выяснили, что применение таких препаратов, как настойки коры осины и сирени и экстракта элеутерококка, эффективно стимулирует двигательную активность и, следовательно, деятельность ЦНС. Фармацевтическая композиция с настойкой коры осины обладает адаптационным эффектом, фармацевтическая композиция с настойкой коры сирени -стимулирующим, а фармацевтические композиции с аналогом фолиевой кислоты обладают тонизирующим действием. При проведении гематологических исследований выявлено на фоне фармацевтической композиции с настойкой коры осины и кальция фолината зарегистрировано повышение количество эритроцитов, гемоглобина, тромбоцитов. Снижение концентрации глюкозы при использовании фармацевтической композиции с настойкой коры осины, отмечается положительное влияние на липидный обмен.

Всё вышеизложенное свидетельствует о том, что созданные и изученные в эксперименте новые опытные образцы фармацевтических композиций, содержащие фармакологически активные вещества растительного происхождения, являются перспективными препаратами в жидкой лекарственной форме. Что является основанием для проведения клинических исследований.

Выводы

1. Обоснована рецептура фармацевтических композиций в жидкой лекарственной форме и изготовлены опытные образцы, содержащие экстракт элеутерококка, настойку коры осины и коры сирени и фармацевтические композиции с аналогом фолиевой кислоты (кальция фолинат) на сиропе шиповника.

2. В доклинических исследованиях доказано отсутствие острой и хронической токсичности на четырёх видах животных, в то же время доказана безопасность применения фармацевтических композиций, содержащих экстракт элеутерококка, настойку коры осины и коры сирени и фармацевтические композиции с аналогом фолиевой кислоты (кальция фолинат), на функциональное состояние сердечной деятельности и системы внешнего дыхания.

3. В процессе изучения ориентировочно-исследовательских реакций у крыс молодого и среднего возраста в методике «открытое поле» на фоне применения фармацевтических композиций установлены разнонаправленные эффекты действия на изучаемые реакции особей в зависимости от возраста их и вводимых фармацевтических композиций.

4. Выявлена особенность выпитых объёмов фармацевтических композиций в зависимости от содержания в них различных составов экстрагентов при свободном подходе особей к поилкам. Более благоприятной по объему выпитой фармацевтической композиции для взрослых крыс оказалась водно-спиртовая настойка коры осины на сиропе шиповника, а для молодых - водно-спиртовая настойка коры сирени так же на сиропе шиповника.

5. При общем и биохимическом анализе крови выявлено повышение показателей эритроцитов, гемоглобина, и тромбоцитов на фоне фармацевтической композиции с настойкой коры осины, а на фоне этой же фармацевтической композиции, но с добавлением кальция фолината - снижение глюкозы - и

показано положительное влияние на липидный обмен фармацевтических композиций.

Практические рекомендации

Всё вышеизложенное свидетельствует о том, что созданные и изученные в эксперименте новые опытные образцы фармацевтических композиций, содержащие фармакологически активные вещества растительного происхождения, являются перспективными препаратами в жидкой лекарственной форме для продолжения их изучения фармакологических эффектов действия в условиях детских и взрослых медицинских организациях с целью их внедрения в практику здравоохранения.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Волков, А. А. Современные инновационные транскутанные препараты, обладающие ранозаживляющей активностью, и их возможность применения в педиатрической практике / А. А. Волков, В. В. Алтухов, £. К. Серёгина, JI. П. Ларионов II Вестник Уральской медицинской академической науки.- 2009.-№20.- С. 214- 216.

2. Серёгина, Е.К. Сравнительная оценка влияния адаптогенов на поведенческие реакции лабораторных животных/ Е.К. Серёгина, Л.П. Ларионов // «Здоровье и образование в XXI века: материалы XI международного конгресса - Москва,2010. -С. 323- 324.

3. Серёгина, Е.К. Обоснование создания жидкой лекарственной формы для детей, содержащей адаптогены / Е.К. Серёгина, Л.ПЛарионов, И.М. Фатихов, И.Б.Башкирова, П.А. Ерёмина// Фармация и общественное здоровье: материалы ежегодной конференции,25 февраля 2010г. - Екатеринбург,2010.- С. 261- 263.

4. Башкирова, И.Б. Особенности ответных реакции экспериментальных животных на воздействие углекислотного экстракта плодов ROSA CINNAMOMEA L / И.Б.Башкирова, Л.П.Ларионов, A.A. Щёголев, О.В Коломиец, Е.К.Серёгина // Вестник Уральской медицинской академической науки.-2011. - № 2. - С. 101-103.

5. Серёгина, Е.К. Биологическая безопасность и фармакологическая активность новых адаптогенных фармацевтических композиций / Е.К. Серёгина, И.Б.Башкирова, Л.ПЛарионов // Вестник Уральской медицинской академической науки. 2011.-№3.- С. 97- 98.

6. Серёгина, Е.К. Оценка влияния новых композиций адаптогенов на основе сиропа шиповника на состав периферической крови / Е.К. Серёгнна, С.Б. Васильева// Вестник Уральской медицинской академической науки.- 2011.-№3/1.- С. 45-46.

7. Серёгина, Е.К. Оценка фармакологической активности новых фармацевтических композиций, содержащих адаптогены, в условиях эксперимента / Е.К. Серёгина, И.М. Фатихов, Ю.С. Неволин //Биомедицина.-2011.-№4.- С. 126-128.

8. Серёгина, Е.К.Сравнительная оценка влияния на лабораторных животных фармацевтических композиций, содержащих жидкие экстракты коры осины, коры сирени и аналога фолиевой кислоты, приготовленных на сиропе шиповника при пероралыюм введении / Е.К. Серёгина, Ю.А Масалитина, В.В. Рубцов, К.Е. Юсуповский // Актуальные вопросы современной медицинской науки и здравоохранения: 68-ая Всероссийская конференция. - Екатеринбург,2013. - С. 788790.

Список сокращений

АлТ - аланинаминотрансфераза АсТ - аспартатаминотрансфераза ГГТ - глутамилтранспептидаза

ЫЭ50 - 50 % минимальная доза вещества, вызывающая гибель половины экспериментальных животных

ЛС - лекарственное средство

ЛПОНП - липопротеины очень низкой плотности

ЛПНП - липопротеины низкой плотности

ЦНС - центральная нервная система

ЭКГ - электрокардиограмма

Фк - фармацевтическая композиция

ФкОс - фармацевтическая композиция с водно-спиртовой настойкой коры осины на сиропе шиповника

ФкОсФ - фармацевтическая композиция с водно-спиртовой настойкой коры осины на сиропе шиповника с фолинатом кальция

ФкСс - фармацевтическая композиция с водно-спиртовой настойкой коры сирени на сиропе шиповника

ФкСсФ - фармацевтическая композиция с сводно-спиртовой настойкой коры сирени на сиропе шиповника с фолинатом кальция

ФкЭс - фармацевтическая композиция с жидким экстрактом эллеутероккока на сиропе шиповника

На правах рукописи

Серёгина Елена Кузьминична

РАЗРАБОТКА, СОЗДАНИЕ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ КОМПОЗИЦИЙ НА

ОСНОВЕ СИРОПА ШИПОВНИКА, СОДЕРЖАЩИХ АДАПТОГЕНЫ И ИЗУЧЕНИЕ ИХ ДЕЙСТВИЯ НА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ МОЛОДОГО И СРЕДНЕГО ВОЗРАСТА

14.03.06 - Фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск-2014

Отпечатано в ООО «Издательский дом Ажур» 620075, Екатеринбург, ул. Восточная 54 тел. +7 912-24-969-03 тел./факс: (342) 350-78-28 Подписано к печати 26.03.2014г. Объем 1,05 усл. печатных листов. Формат 60*84 1/16 Гарнитура «Times New Roman», Бумага ВХИ Тираж ЮОэкз.